CN106243127B - 抗体药物偶联物、中间体、制备方法、药物组合物及应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了抗体药物偶联物、中间体、制备方法、药物组合物及应用。本发明设计合成了一系列结构新颖、对酸和肽酶组织蛋白酶稳定的抗体药物偶联物IB，本发明设计合成的抗体药物偶联物使用稳定性好的醚键进行连接，明显提高了水溶性和稳定性。体内和体外活性测试都表明其具有更高的细胞毒性，其中部分偶联物的细胞毒性优于或者接近T‑DM1。此外，从化学合成的角度讲，该系列偶联物合成的步骤简单，收率远高于T‑DM1，也便于进一步结构修饰以改善偶联物的理化性质以及生物活性，有良好的市场应用前景。
Description
技术领域
本发明具体涉及抗体药物偶联物、中间体(带连接体的毒素)、制备方法、药物组合物及应用。
背景技术
典型的抗体药物偶联物(ADC)包含能够与癌细胞表面特异性抗原相结合的单克隆抗体。这些抗体包括免疫系统B细胞和T细胞表面的一些蛋白，比如CD20、CD22以及人表皮生长因子受体2(Her2)和前列腺特异性膜抗原(PSMA)。通过一个可裂解的连接单元将这些特异性抗体与强毒性药物进行连接。设计这样的药物通过诱导不可逆的DNA损伤或者干扰细胞分裂，进而导致癌细胞的死亡。
抗体药物偶联物(ADC)的作用机理是通过抗体识别并与特异性抗原结合，引发一系列反应，进而通过细胞内吞进入细胞质内，溶酶体酶将强毒性药物释放杀死癌细胞。相比传统化疗对正常组织的无差别损伤，通过靶向给药，可以使药物直接作用于癌细胞，减少了其对正常细胞的损害。
FDA批准上市的第一个抗体药物偶联物是美国惠氏2000年研发的用于治疗急性粒细胞性白血病的麦罗塔(吉妥珠单抗/奥佐米星)，但由于一些不良的效果以及处于安全方面的考虑，该药物在上市十年后被撤回。此后，将抗体和药物连接的技术取得了很大的进步。使用具有合适生物半衰期的连接子，研究人员得以确保抗体药物偶联物可以到达目标细胞从而减少其副作用。
2011年，美国FDA批准了Seattle Genetics的Adcetris(brentuximab vedotin)，用于治疗霍奇金氏淋巴瘤和系统性间变性大细胞淋巴瘤。该抗体药物偶联物在2012年第一季度的销售额高达$34，500，000并且收入持续在增加。预计在接下来的十年里面仅肿瘤治疗药品市场，抗体药物偶联物的使用将比过去增长50％左右。目前罗氏(Roche)和基因泰克(Genentech)一起有25个以上的抗体药物偶联物在研发中，其中有9个正在进行临床研究。
2013年2月第一个抗体药物偶联物潜在的重磅炸弹Kadcyla上市，Kadcyla(trastuzumab emtansine,T-DM1)被批准用于转移性乳腺癌的治疗。Kadcyla将治疗乳腺癌的抗体赫赛汀与ImmunoGen许可使用的毒素美坦新组合在一起。该药物的2015年销售额近7亿美元。
抗体药物偶联物很可能将成为下一个带来持续收入源的重磅炸弹级药物领域。生物医药和临床试验相互配合带来了抗体药物偶联物技术平台的持续成功。这些共同的结果表明使用人源化单克隆抗体技术作为靶标导向的治疗性给药的努力。目前为止，研发中的大部分抗体药物偶联物使用Seattle Genetics的auristatins或ImmunoGen的美登素类作为有效毒素。此外，Spirogen等公司也在为下一代抗体药物偶联物开发其他的毒素，比如PBD类。
美登素类生物碱首先是由东非灌木齿叶美登木(US 389611，JP 01006282，JP63233986)中分离得到，作为抗癌试剂，是一类高度细胞毒性的化合物。人们制备得到的很多美登素类衍生物具有很高的抗癌活性，是传统抗癌药物长春碱或紫杉醇的100到1000倍。(J.Med.Chem.,1978,21,31-37,Chem.Pharma.Bull.,1984,3441-3451,J.Med.Chem.2006,49,4392-4408,Chem.Pharm.Bull.2004,52(1)1-26,WO2011039721,WO2012/061590,WO2014/094453).
在专利US 5208020,US,5416064和J.Med.Chem,2006,49,4392-4408中，Chari,R.V.J.等人报道了美登素类似物DM1和DM4。专利WO2004/103272,EP0425235报道了美登素类似物DM1和DM4的偶联物以及他们的抗癌活性。之后的一系列文章和专利中报道了许多美登素类似物的偶联物作为抗癌药物(WO 2011/039721,WO2012/061590,WO2014/134483,WO2014/134457,WO2014/194030,WO2014/134486,WO2014/094355,WO2015/000062,WO2014/145090,WO2013/173391)。
典型的抗体药物偶联物由药物、连接单元和抗体三部分组成。特异性抗体和药物的选择取决于特定疾病，并对偶联物的安全性和有效性有重要影响。而连接单元的稳定性以及偶联到抗体的方法对ADC药物的开发结果具有决定性的作用。决定抗体药物偶联物疗效的因素包括连接单元的稳定性及其断裂敏感性，细胞表面激发内化、转运和细胞毒素的释放。
例如T-DM1，其容易在抗原结合蛋白(Abu)内吞之前过早降解并释放毒素，引起副作用。而且其与抗体偶联得到的药物/抗体比例较低而且分布变化比较大，药效和安全性精确控制的难度较大(WO2012/061590A1，WO201139721)。因此，寻找稳定性高,水溶性好的连接体，进而得到细胞毒素的释放效率高、特异性好、细胞毒性高、抗癌效果好的抗体药物偶联物是目前急需解决的技术问题。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是为了克服现有技术中抗体药物偶联物连接单元的稳定性差、断裂敏感性低，细胞表面激发内化、转运和细胞毒素的释放效率低、胞毒性差，特异性差，副作用大等缺陷，而提供了一种抗体药物偶联物、中间体(带连接体的毒素毒素)、制备方法、药物组合物及应用。本发明的抗体药物偶联物，具有非常高的细胞毒性，抗癌效果好，具有良好的市场应用前景。
本发明提供了一种如式IB所示的抗体药物偶联物，
其中：
Z为氮原子、
或氧原子，当Z为氧原子时，R1不存在；当Z1为
或氮原子时，R1为氢或C1～C4的烷基(所述的C1～C4的烷基例如甲基、乙基、丙基、丁基、异丙基、异丁基或叔丁基，优选甲基)或者R1、Z以及与它们连接的C原子和R6或R7连接成为4-6元环状结构(优选六元环状结构，所述的六元环状结构例如
)；
R2为氢或卤素取代的C1～C4的烷基(所述的卤素取代的C1～C4的烷基中所述的卤素可以为氟、氯或溴，所述的卤素取代的C1～C4的烷基可以为卤素取代的甲基、卤素取代的乙基、卤素取代的丙基、卤素取代的异丙基、卤素取代的丁基、卤素取代的异丁基或卤素取代的叔丁基，优选卤素取代的甲基，所述的卤素取代的甲基优选
)；
p为0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10(优选0、1或2)；
m为0或1；
n为0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10(优选0、1或2)；
Y1为氧原子、化学键(优选单键)或
其中x2为1-24的整数(例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10)；
q为0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10(优选0、1或2)；
R3和R4独立的为氢、氰基或者取代或未取代C1～C4的烷基(所述的未取代的C1～C4的烷基例如甲基、乙基、丙基、丁基、异丙基、异丁基或叔丁基，优选甲基或异丙基；所述的取代的C1～C4的烷基例如取代的甲基、取代的乙基、取代的丙基、取代的丁基、取代的异丙基、取代的异丁基或取代的叔丁基，优选取代的甲基，所述的取代的甲基优选
)，所述的R3或R4中所述的取代或未取代C1～C4的烷基中所述的取代是指被C1～C4的烷氧基(所述的C1～C4的烷氧基例如甲氧基、乙氧基、丙氧基、丁氧基、异丙氧基、异丁氧基或叔丁氧基，优选甲氧基)所取代；
x为0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10(优选0、1或2)；
Q1为
其中，R8为取代或未取代C1～C4的烷基(所述的取代或未取代的C1～C4的烷基例如取代或未取代的甲基、取代或未取代的乙基、取代或未取代的丙基、取代或未取代的异丙基、取代或未取代的丁基、取代或未取代的异丁基或者取代或未取代的叔丁基，优选取代或未取代的丙基，所述的取代的丙基优选
)、
y为1、2、3、4、5、6、7、8、9或10；y1为0或1；所述的R81中所述的取代或未取代C1～C4的烷基中所述的取代是指被
所取代；t为1或2；t1为0、1、2、3、4、5或6；
R6为氢、取代或未取代C1～C12的烷基(所述的取代或未取代C1～C12的烷基优选取代或未取代C1～C4的烷基；所述的取代或未取代C1～C4的烷基优选甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基或叔丁基，进一步优选甲基)或
r为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12；
R7为氢、取代或未取代C1～C12的烷基(所述的取代或未取代C1～C12的烷基优选取代或未取代C1～C4的烷基；所述的取代或未取代C1～C4的烷基优选甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基或叔丁基，进一步优选甲基)、取代或未取代C1～C12的烷氧基(所述的取代或未取代C1～C12的烷氧基优选取代或未取代C1～C4的烷氧基；所述的取代或未取代C1～C4的烷氧基优选甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、丁氧基、异丁氧基或叔丁氧基，进一步优选甲氧基)或
mAb表示单克隆抗体，例如赫赛汀；
k为1-8中的任一数值(优选1-6中的任一数值)，表示中括号内药物与单克隆抗体mAb的摩尔比(或比率，简称DAR)；
所述的如式IB所示的化合物不为下列化合物：
在本发明另一优选实施方式中，Z为氧原子或者Y1为氧原子。
在本发明一优选实施方式中，当Z为氮原子时，p或q不同时为0，R2为卤素取代的C1～C4的烷基；R3和R4独立地为氢、氰基或者取代或未取代C1～C4的烷基，但R3和R4不同时为氢。
所述的如式IB所示的抗体药物偶联物优选如式Ib或Ib1所示的抗体药物偶联物，
如式Ib或Ib1所示的抗体药物偶联物中，Z为氮原子、
或氧原子，当Z为氧原子时，R1不存在；当Z为
或氮原子时，R1为氢或C1～C4的烷基(所述的C1～C4的烷基例如甲基、乙基、丙基、丁基、异丙基、异丁基或叔丁基，优选甲基)或者R1、Z以及与它们连接的C原子和R6或R7连接成为4-6元环状结构(优选六元环状结构，所述的六元环状结构例如
)；R2为氢或卤素取代的C1～C4的烷基(所述的卤素取代的C1～C4的烷基中所述的卤素可以为氟、氯或溴，所述的卤素取代的C1～C4的烷基可以为卤素取代的甲基、卤素取代的乙基、卤素取代的丙基、卤素取代的异丙基、卤素取代的丁基、卤素取代的异丁基或卤素取代的叔丁基，优选卤素取代的甲基，所述的卤素取代的甲基优选
)；p为0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10(优选0、1或2)；R6为氢、取代或未取代C1～C12的烷基(所述的取代或未取代C1～C12的烷基优选取代或未取代C1～C4的烷基；所述的“取代或未取代C1～C4的烷基”优选甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基或叔丁基，进一步优选甲基)或
r为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12；R7为氢、取代或未取代C1～C12的烷基(所述的取代或未取代C1～C12的烷基优选取代或未取代C1～C4的烷基；所述的取代或未取代C1～C4的烷基优选甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基或叔丁基，进一步优选甲基)、取代或未取代C1～C12的烷氧基(所述的取代或未取代C1～C12的烷氧基优选取代或未取代C1～C4的烷氧基；所述的取代或未取代C1～C4的烷氧基优选甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、丁氧基、异丁氧基或叔丁氧基，进一步优选甲氧基)或
mAb表示单克隆抗体，例如赫赛汀；k为1-8任一数值，表示中括号内药物与单克隆抗体mAb的摩尔比；
如式Ib所示的抗体药物偶联物中，m为0或1；n为0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10(优选0、1或2)；Y为氧原子或化学键(优选单键)；q为0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10(优选0、1或2)；R3和R4独立的为氢、氰基或者取代或未取代C1～C4的烷基(所述的未取代的C1～C4的烷基例如甲基、乙基、丙基、丁基、异丙基、异丁基或叔丁基，优选甲基或异丙基；所述的取代的C1～C4的烷基例如取代的甲基、取代的乙基、取代的丙基、取代的丁基、取代的异丙基、取代的异丁基或取代的叔丁基，优选取代的甲基，所述的取代的甲基优选
)，所述的R3或R4中所述的取代或未取代C1～C4的烷基中所述的取代是指被C1～C4的烷氧基(所述的C1～C4的烷氧基例如甲氧基、乙氧基、丙氧基、丁氧基、异丙氧基、异丁氧基或叔丁氧基，优选甲氧基)所取代；x为0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10(优选0、1或2)；R8为取代或未取代C1～C4的烷基(所述的取代或未取代的C1～C4的烷基例如取代或未取代的甲基、取代或未取代的乙基、取代或未取代的丙基、取代或未取代的异丙基、取代或未取代的丁基、取代或未取代的异丁基或者取代或未取代的叔丁基，优选取代或未取代的丙基，所述的取代的丙基优选
)、
y为1、2、3、4、5、6、7、8、9或10；y1为0或1；所述的R8中所述的取代或未取代C1～C4的烷基中所述的取代是指被
所取代；t为1或2；
如式Ib1所示的抗体药物偶联物中，Y2为
其中x2为1-24的整数；Q2为
t1为0、1、2、3、4、5或6。
本发明中，所述的如式IB所示的抗体药物偶联物进一步优选如下任一化合物：
本发明还提供了一种如式IA所示的中间体(带连接体的毒素)：
如式IA所示的化合物中，各字母和基团的定义均同前所述；Q3为
t为1或2；t1为0、1、2、3、4、5或6；
R51为H、C1～C4的烷基(所述的C1～C4的烷基例如甲基、乙基、丙基、丁基、异丙基、异丁基或叔丁基，优选甲基)、
或卤素(所述的卤素优选F、Cl、Br或I)，y为1、2、3、4、5、6、7、8、9或10，R9为H或C1～C4的烷基(所述的C1～C4的烷基例如甲基、乙基、丙基、丁基、异丙基、异丁基或叔丁基)。
所述的如式IA所示的中间体，其优选如式Ia或Ia1所示的中间体(带链接体的毒素)：
如式Ia或Ia1所示的中间体中：Z为氮、
或氧原子，当Z为氧原子时，R1不存在；当Z为
或氮原子时，R1为C1～C4的烷基(所述的C1～C4的烷基例如甲基、乙基、丙基、丁基、异丙基、异丁基或叔丁基，优选甲基)或者R1、Z以及与它们连接的C原子和R6或R7连接成为4-6元环状结构(优选六元环状结构，所述的六元环状结构例如
)；R2为卤素取代的C1～C4的烷基(所述的卤素取代的C1～C4的烷基中所述的卤素可以为氟、氯或溴，所述的“卤素取代的C1～C4的烷基”可以为卤素取代的甲基、卤素取代的乙基、卤素取代的丙基、卤素取代的异丙基、卤素取代的丁基、卤素取代的异丁基或卤素取代的叔丁基，优选卤素取代的甲基，所述的“卤素取代的甲基”优选
)；p为0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10(优选0、1或2)；R6为氢或取代或未取代C1～C12的烷基(所述的“取代或未取代C1～C12的烷基”优选取代或未取代C1～C4的烷基；所述的“取代或未取代C1～C4的烷基”优选甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基或叔丁基，进一步优选甲基)或
r为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12；R7为氢，取代或未取代C1～C12的烷基(所述的“取代或未取代C1～C12的烷基”优选取代或未取代C1～C4的烷基；所述的“取代或未取代C1～C4的烷基”优选甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基或叔丁基，进一步优选甲基)、取代或未取代C1～C12的烷氧基(所述的“取代或未取代C1～C12的烷氧基”优选取代或未取代C1～C4的烷氧基；所述的“取代或未取代C1～C4的烷氧基”甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、丁氧基、异丁氧基或叔丁氧基，进一步优选甲氧基)或者
t为1或2；
如式Ia所示的中间体中：m为0或1；n为0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10(优选0、1或2)；Y为氧原子或化学键；q为0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10(优选0、1或2)；R3和R4独立的为氢、氰基、取代或未取代C1～C4的烷基(所述的“未取代的C1～C4的烷基”例如甲基、乙基、丙基、丁基、异丙基、异丁基或叔丁基，优选甲基或异丙基；所述的“取代的C1～C4的烷基”例如取代的甲基、取代的乙基、取代的丙基、取代的丁基、取代的异丙基、取代的异丁基或取代的叔丁基，优选取代的甲基，所述的“取代的甲基”优选
)，所述的R3或R4中所述的“取代或未取代C1～C4的烷基”中所述的“取代”是指被C1～C4的烷氧基(所述的“C1～C4的烷氧基”例如甲氧基、乙氧基、丙氧基、丁氧基、异丙氧基、异丁氧基或叔丁氧基，优选甲氧基)所取代；R5为H、C1～C4的烷基(所述的“C1～C4的烷基”例如甲基、乙基、丙基、丁基、异丙基、异丁基或叔丁基，优选甲基)、
y为1、2、3、4、5、6、7、8、9或10，y1为0或1；R9为H或C1～C4的烷基(所述的“C1～C4的烷基”例如甲基、乙基、丙基、丁基、异丙基、异丁基或叔丁基)；
如式Ia1所示的中间体中：Y2为
其中x2为1-24的整数；Q2为
t为1或2；t1为0、1、2、3、4、5或6；R52为氢或卤素(优选F、Cl、Br或I)。
本发明中，所述的如式IA所示的中间体(带连接体的毒素)进一步优选如下任一化合物：
本发明中，带*的碳，表示手性碳原子或非手性碳，其构型可以为R、S或者消旋体。
本发明还提供了一种如式IB所示的抗体药物偶联物的制备方法，其包括以下步骤：有机溶剂中，pH为6-8条件下，将中间体(带连接体的毒素)IA与单克隆抗体(例如赫赛汀)进行交联，得到抗体药物偶联物IB即可；
如式IA和如式IB所示的化合物中，各字母和基团的定义均同前所述。
所述的如式IB所示的抗体药物偶联物的制备方法，可以为本领域中该类交联反应的常规方法和条件，具体可参照文献Gail D.Lewis Phillips,et al.,Cancer.Res.,2008,68,9280以及Teemu T.Junttila,et al.,Breast.Cancer.Res.Treat.,2011,128,347，本申请在此引用该文献全文。
本发明中特别优选以下反应方法和条件：
在所述的如式IB所示的抗体药物偶联物的制备方法中，所述的有机溶剂优选酰胺类溶剂、亚砜类溶剂和醚类溶剂中的一种或多种。所述的酰胺类溶剂优选N,N二甲基甲酰胺(DMF)和/或二甲基乙酰胺(DMA)；所述的亚砜类溶剂优选二甲亚砜(DMSO)。所述的醚类溶剂优选四氢呋喃。
在所述的如式IB所示的抗体药物偶联物的制备方法中，所述的中间体(带连接体的毒素)IA与所述的有机溶剂的质量体积比优选0.1mg/mL-100mg/mL。
在所述的如式IB所示的抗体药物偶联物的制备方法中，所述的中间体IA与所述的单克隆抗体(例如赫赛汀)的摩尔比值优选1-10(例如6)，优选1-5。
在所述的如式IB所示的抗体药物偶联物的制备方法中，所述的pH6-8可以通过缓冲液实现；所述的缓冲溶液通常为低盐缓冲液，优选磷酸盐缓冲溶液，例如磷酸钾与磷酸二氢钾形成的缓冲溶液；或者硼酸缓冲溶液，例如硼酸和硼酸钠形成的缓冲溶液。在所述的如式Ib所示的抗体药物偶联物的制备方法中，所述的交联反应的温度优选4℃～37℃(优选室温)。
在所述的如式IB所示的抗体药物偶联物的制备方法中，所述的交联反应的进程可以采用本领域中的常规测试方法(如TLC、HPLC或NMR)进行监控，一般以中间体IA消失时为反应的终点。
所述的如式IB所示的抗体药物偶联物的制备方法优选在保护气体保护下进行，当所述的如式IB所示的抗体药物偶联物的制备方法在保护气体保护下进行时，所述的保护气体优选氮气。
所述的如式IB所示的抗体药物偶联物的制备方法，其优选包括以下步骤：在pH值为6-8(例如7.5)的缓冲溶液中，将单克隆抗体(例如赫赛汀)进行透析，然后加入中间体IA和有机溶剂，进行所述的交联反应，即可。
本发明还提供了所述的如式Ib或Ib1所示的抗体药物偶联物的制备方法，其包括以下步骤：有机溶剂中，pH为6-8条件下，将中间体(带连接体的毒素)Ia或中间体Ia1与单克隆抗体(例如赫赛汀)进行交联，得到抗体药物偶联物Ib或Ib1即可；
如式Ia、Ia1、Ib和Ib1所示的化合物中，各字母和基团的定义均同前所述。
本发明还提供了所述的如式IB所示的抗体药物偶联物和/或如式IA所示的中间体(带连接体的毒素)在制备治疗和/或预防癌症的药物中的应用。本发明还提供了所述的如式Ib、Ib1、Ia和Ia1所示的化合物中的一种或多种在制备治疗和/或预防癌症的药物中的应用。所述的应用中，所述的癌症可以为本领域中常规的癌症，包括但不限于乳腺癌、淋巴癌、肺癌、肝癌、结肠癌、头颈癌、膀胱癌、肾癌、食道癌、胆囊癌、卵巢癌、胰腺癌、胃癌、宫颈癌、甲状腺癌、前列腺癌、皮肤癌包括鳞状细胞癌；白细胞过多症、急性淋巴细胞性白血病、急性成淋巴细胞性白血病、B细胞淋巴瘤、T细胞淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、毛细胞淋巴瘤、伯基特淋巴瘤、急性和慢性髓细胞性白血病、骨髓增生异常综合征、前髓细胞白血病、纤维肉瘤、横纹肌肉瘤、星形细胞瘤、神经目细胞瘤、胶质瘤、神经鞘瘤、黑色素瘤、精原细胞瘤、畸胎癌、骨肉瘤、着色性干皮病、角质黄色瘤、甲状腺滤泡癌和卡波西肉瘤。
所述的应用中，所述的癌症的肿瘤细胞包括但不限于Her2阳性的人BT474乳腺肿瘤细胞、Her2低表达的人MCF-7乳腺肿瘤细胞或在MCF-7外转Her2的人乳腺肿瘤MCF7-Her2稳转细胞株。
本发明还提供了一种药物组合物，其包含如前所述的如式IB所示的抗体药物偶联物和/或中间体IA，以及一种或多种药学上可接受的辅料。
本发明还提供了一种药物组合物，其包含如前所述的如式Ib所示的抗体药物偶联物、如式Ib1所示的抗体药物偶联物、中间体Ia和中间体Ia1中的一种或多种，以及一种或多种药学上可接受的辅料。
本发明中，所述的药学上可接受的辅料是指药学领域常规的药用辅料，是为解决制剂的成型性、有效性、稳定性、安全性加入的除本发明的抗体药物偶联物以外的一切常规药用物料，如稀释剂(如羧甲淀粉钠等)、粘合剂(如聚维酮等)、崩解剂(如微晶纤维素等)、润滑剂(如硬脂酸镁、微粉硅胶等)、以及其它辅助剂。根据需要，可选择上述辅料，按本领域常规方法，将本发明的抗体药物偶联物制成药物制剂；所述的药物制剂为本领域各种常规剂型，如片剂、散剂、丸剂、胶囊剂、颗粒剂、口服液、干混悬剂或滴丸剂等。
本发明中，May是指
本发明中，所述的术语烷基为包括具有指定碳原子数目的支链或直链的饱和脂肪族烃基；如在C1-C4烷基中定义为包括在直链或者支链结构中具有1、2、3或4个碳原子的基团。例如，C1-C4烷基具体包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、叔丁基、异丁基等。
本发明中，所述的术语烷氧基表示烷基与氧原子连接后的生成基团，即RO-，R为烷基。
本发明中，所述的确定了碳数范围的Cx1-y1的烷基(x1和y1为整数)，如C1-C4烷基，均表示未包含取代基的C1-C4烷基。
本发明中，所述的术语卤素表示氟、氯、溴、碘或砹。
本发明中，所述的术语氰基表示
本发明中，TBDPS表示叔丁基二苯基硅基。
在不违背本领域常识的基础上，上述各优选条件，可任意组合，即得本发明各较佳实例。
本发明所用试剂和原料均市售可得本发明中，所述的室温指环境温度，为10℃～35℃。
本发明的积极进步效果在于：本发明设计合成了一系列结构新颖、对酸和肽酶组织蛋白酶稳定的抗体药物偶联物，本发明设计合成的抗体药物偶联物使用稳定性好的醚键进行连接，明显提高了水溶性和稳定性。体内和体外活性测试都表明其具有更高的细胞毒性，其中部分偶联物的细胞毒性优于或者接近T-DM1。此外，从化学合成的角度讲，该系列偶联物合成的步骤简单，收率远高于T-DM1，也便于进一步结构修饰以改善偶联物的理化性质以及生物活性，有良好的市场应用前景。
附图说明
图1为T-CE-040和T-DM1对BT474生长抑制曲线图。
图2为T-CE-040和T-DM1对MCF-7生长抑制曲线图。
图3为T-CE-040和T-DM1对MCF-7-Her2生长抑制曲线图。
图4为T-CE-063和T-DM1对BT474生长抑制曲线图。
图5为T-CE-063和T-DM1对MCF-7生长抑制曲线图。
图6为T-CE-063和T-DM1对MCF-7-Her2生长抑制曲线图。
具体实施方式
下面通过实施例的方式进一步说明本发明，但并不因此将本发明限制在所述的实施例范围之中。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，按照常规方法和条件，或按照商品说明书选择。
实施例1 CE-016/017,CE-023/024,CE-005的合成路线
实验步骤
化合物2的合成:
称取3-氯-2-氯甲基丙烯(25g,0.2mol)溶于200mL无水甲醇中，分批加入甲醇钠(21.6g,0.4mol)。加热反应液回流过夜。将反应液冷却到室温，过滤，往滤液中加入250mL水，醋酸中和，用沸点30～60℃的石油醚萃取三次(150mL×3)，合并有机相，无水硫酸钠干燥，浓缩得到15g粗产品，为无色油状液体，直接用于下一步反应。
化合物3的合成:
将上一步反应粗产物2(15.1g,0.13mol)溶于150mL二氯甲烷中，分批加入间氯过氧苯甲酸(33.54g,0.195mol)。反应液加热回流2小时。TLC点板确认反应完全，将反应液冷却到室温。30mL饱和硫代硫酸钠溶液加入搅拌半小时淬灭反应。使用二氯甲烷萃取3次(100mL×3)。合并有机相，无水硫酸钠干燥，浓缩得到12g粗产物3，为无色油状物，直接用于下一步反应。1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 2.57&2.54(dd,J1＝16.4Hz,J2＝11.2Hz，4H)，3.39(s，6H)，2.78(s，2H).
化合物4的合成:
将上一步的粗产物3(13.2g,0.1mol)溶于100mL无水甲醇中，加入硫脲(15.2g,0.2mol)。反应液室温搅拌过夜，TLC点板检测原料以完全消耗，减压蒸馏移除甲醇。往剩余物中加入200mL水，使用二氯甲烷萃取3次(100mL×3)。合并有机相，无水硫酸钠干燥，浓缩，粗产品使用硅胶柱层析(石油醚：乙酸乙酯10：1)得到9.3g产物4，为无色油状物，产率63％。1HNMR(400MHz,CDCl3)δppm 2.62&2.60(dd,J1＝16.0Hz,J2＝10.0Hz,4H),3.41(s,6H),2.40(s,2H).
化合物5的合成:
氮气保护下，将正丁基锂(8.8mL,2.5mol/mL,22mmol)加入到冷却至-78℃的40mL干燥四氢呋喃溶液中。将乙腈(1.1mL,21.2mmol)溶于10mL干燥四氢呋喃加入。反应液在-78℃搅拌半小时。将化合物4(2.96g,20mmol)溶于20mL四氢呋喃中，并逐滴加入。加入完毕，反应液逐步升温至室温并搅拌3小时。将反应液冷却至0℃，逐滴缓慢加入稀盐酸(0.5M,10mL)淬灭反应，乙酸乙酯萃取3次(50mL×3)，合并有机相，无水硫酸钠干燥，浓缩。粗产品使用硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝1:1)纯化得到产物2.23g，为浅黄色油状物，产率59％。1HNMR(400MHz,CDCl3)δppm 3.62(d,J＝9.2Hz,2H),3.51(d,J＝9.2Hz,2H),3.39(s,6H),2.81(t,J＝7.2Hz,2H),2.07(t,J＝7.2Hz,2H).
化合物6的合成:
将上一步反应产物5(2.8g,15mmol)溶于10mL乙醇中，置换氩气三次，缓慢加入8M的氢氧化钠溶液(4mL,32mmol)。氩气保护下反应液升温回流过夜。反应液冷却至室温，稀盐酸调PH＝2，二氯甲烷萃取3次(50mL×3)，合并有机相，无水硫酸钠干燥，浓缩。粗产物使用硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝2：1)纯化得2.43g产品6，为浅黄色油状物，产率78％。LCMS(ESI)m/z 209.1(M+H)+.
化合物7的合成:
将上一步反应产物6(2.08g,10mmol)溶于20mL乙醇中和10mL水中，加入甲基硫代磺酸甲酯(1.38g,11mmol)。氩气保护下反应液室温搅拌过夜。加入50mL水，乙酸乙酯萃取3次(50mL×3)，合并有机相，饱和食盐水洗涤3次(50mL×3)，无水硫酸钠干燥，浓缩得粗产物7，直接用于下一步反应。LCMS(ESI)m/z 255.1(M+H)+.
化合物8的合成:
将上一步反应产物7(1g,4mmol)溶于2mL二氯甲烷中，N-羟基琥珀酰亚胺(HOSu)(0.50g,4.4mmol)and 1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐(EDC-HCl)(0.84g,4.4mmol)。反应液室温搅拌4小时。加入50mL水，乙酸乙酯萃取3次(50mL×3)，合并有机相，饱和食盐水洗涤3次(50mL×3)，无水硫酸钠干燥，浓缩。粗产物使用硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝1:3)纯化得1.3g产物8，为黄色油状物，产率76％。LCMS(ESI)m/z 352.1(M+H)+.
化合物9的合成:
N-甲基-L-丙氨酸(618mg,6.0mmol)溶于15mL乙二醇二甲醚和15mL水中。加入三乙胺(1.7mL g,12mmol)，剧烈搅拌。将上一步反应产物8(2.1g,6mmol)溶于15mL乙二醇二甲醚中逐滴加入，约5分钟加完。反应液室温搅拌2小时，减压移除有机溶剂，加入10mL水，使用1M的稀盐酸调PH＝2，乙酸乙酯萃取3次(50mL×3)，合并有机相，饱和食盐水洗涤3次(50mL×3)，无水硫酸钠干燥，浓缩。粗产物使用硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝1:1)纯化得产物920mg，为黄色油状物，产率45％。LCMS(ESI)m/z 340.1(M+H)+.
化合物CE-016和CE-017的合成:
将上一步产物9(122mg,0.36mmol)，二环己基碳二亚胺(DCC)(0.15g,0.72mmol)加入一个干燥的Schlenck管中，置换氩气3次，加入1mL二氯甲烷，搅拌。将美登醇(63mg,0.12mmol)溶于4mL干燥二氯甲烷中加入，然后加入1M的氯化锌乙醚溶液(0.72mL,0.72mmol)。反应液室温搅拌2h，缓慢加入0.3mL淬灭反应，加入15mL乙酸乙酯，过滤，乙酸乙酯洗涤。滤液无水硫酸钠干燥，浓缩。粗产物使用硅胶柱层析(二氯甲烷/甲醇＝40:1)分离纯化，得到两个异构体CE-016(25mg，P1)和CE-017(37mg，P2)，均为白色固体，产率24％+35％.LCMS(ESI)m/z 867.8(M+H)+。
HPLC(15min):CE-016,Rt＝10.680；CE-017,Rt＝10.621(Rt：保留时间)
Mobile Phase(流动相):A:water(水)(0.01％TFA)B:CAN(乙腈)(0.01％TFA)，％均为体积百分比
Gradient(梯度):0min 5％B,3min 5％B,10min 95％B,15min 95％B
Flow Rate(流速):1.2ml/min
Column:Eclipse XDB-C18,4.6*150mm,5um
Oven Temperature(柱温):40℃
CE-016:1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 6.85(s,1H),6.81(s,1H),6.44&6.42(dd,J1＝15.2Hz,J2＝11.2Hz,1H),6.31(d,J＝11.2Hz,1H),6.23(s,1H),5.90&5.87(dd,J1＝15.2Hz,J2＝9.2Hz,1H),5.23(q,J＝7.2Hz,1H),4.91(s,1H),4.86&484(dd,J1＝11.6Hz,J2＝2.8Hz,1H),4.32(t,J＝12.0Hz,1H),3.99(s,3H),3.55-3.40(m,5H),3.37(s,6H),3.34(s,3H),3.19(d,J＝12.8Hz,1H),3.17(s,3H),3.04(s,3H),2.86(d,J＝9.6Hz,1H),2.65&2.62(dd,J1＝14.4Hz,J2＝12.0Hz,1H),2.50(t,J＝8.0Hz,1H),2.40(s,3H),2.24-2.18(m,1H),2.06-1.92(m,2H),1.72(d,J＝13.6Hz,1H),1.68(s,3H),1.48(d,J＝7.6Hz,3H),1.50-1.42(m,1H),1.30(s,3H),1.28(s,3H),0.85(s,3H).
CE-017:1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 6.82(s,1H),6.75(d,J＝11.2Hz,1H),6.64(s,1H),6.44&6.42(dd,J1＝15.2Hz,J2＝11.2Hz,1H),6.21(s,1H),5.70&5.68(dd,J1＝15.6Hz,J2＝8.8Hz,1H),5.41(q,J＝6.8Hz,1H),4.80&4.77(dd,J1＝12.0Hz,J2＝3.2Hz,1H),4.28(t,J＝11.2Hz,1H),3.98(s,3H),3.65(d,J＝12.8Hz,1H),3.50(d,J＝8.8Hz,1H),3.43(t,J＝8.8Hz,2H),3.40-3.30(m,2H),3.35(s,3H),3.26(s,3H),3.23(s,6H),3.10(d,J＝12.0Hz,1H),3.03(d,J＝9.2Hz,1H),2.84(s,3H),2.64-2.51(m,2H),2.64-2.51(m,2H),2.44-2.35(m,1H),2.30(s,3H),2.24-2.16(m,1H),2.10-1.89(m,2H),1.72(d,J＝13.6Hz,1H),1.64(s,3H),1.50-1.42(m,1H),1.30(s,3H),1.28(s,3H),0.85(s,3H).
化合物CE-024的合成:
CE-017(30mg,0.034mmol)溶于0.5mL乙酸乙酯中，将二硫代苏糖醇(DTT)(13mg,0.084mmol)溶于0.9mL甲醇中加入，加入PH＝7.5的磷酸钾缓冲溶液2mL。反应液在氮气保护下搅拌2小时。加入PH＝6的磷酸钾缓冲溶液3.4mL淬灭反应。乙酸乙酯萃取3次(20mL×3)，合并有机相，饱和食盐水洗涤3次(20mL×3)，无水硫酸钠干燥，浓缩。粗产品使用制备HPLC(CH3CN in H2O-0.05％TFA from 5％to 95％)纯化得到22mg产物CE-024，白色固体，产率80％。LCMS(ESI)m/z 840.1(M+H)+.
化合物CE-023的合成:
CE-023的合成步骤和CE-024一致，使用CE-016为原料。
化合物CE-005的合成:
将CE-024(18mg,0.02mmol)溶于2mL N,N-二甲基甲酰胺中，加入SM1(14mg,0.04mmol)。反应液室温搅拌12小时，反应液过滤，滤液直接使用制备HPLC(CH3CN in H2O-0.05％TFA from 5％to 95％)纯化得到13.7mg产物CE-005，为白色固体。产率65％。
LCMS(ESI)m/z 1076.8(M+Na)+.1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 6.85(s,1H),6.74(d,J＝9.4Hz,1H),6.63(s,1H),6.44&6.42(dd,J1＝15.2Hz,J2＝11.2Hz,1H),6.29(s,1H),5.70&5.68(dd,J1＝15.6Hz,J2＝8.8Hz,1H),5.42(q,J＝6.8Hz,1H),4.80&4.77(dd,J1＝12.0Hz,J2＝3.2Hz,1H),4.28(t,J＝11.2Hz,1H),3.98(s,3H),3.65(d,J＝12.8Hz,1H),3.50(d,J＝7.2Hz,1H),3.41(t,J＝8.8Hz,2H),3.40-3.30(m,2H),3.35(s,3H),3.25(s,3H),3.23(s,3H),3.22(s,3H),3.11(d,J＝12.0Hz,1H),3.03(d,J＝9.2Hz,1H),2.84(s,3H),2.64-2.51(m,2H),2.68(q,J＝7.2Hz,4H),2.63-2.50(m,2H),2.44-2.35(m,1H),2.19&2.16(dd,J1＝14.4Hz,J2＝3.2Hz,1H),2.08-1.99(m,3H),1.96-1.89(m,1H),1.72(d,J＝13.6Hz,1H),1.64(s,3H),1.50-1.42(m,2H),1.30(s,3H),1.29(s,3H),1.28(s,3H),0.80(s,3H).
实施例2 CE-011,CE-038,CE-041的合成路线
化合物3-2的合成:
往N-甲基-L-丙氨酸1-2(10g,0.097mol)的500mL乙醇悬浊液中加入氢氧化钾(5.5g,0.098mol)。反应液室温搅拌1小时直至氢氧化钾完全溶解。加入4,4,4-三氟巴豆酸乙酯2-2(20g,0.119mmol)。反应液升温至35℃搅拌7天。反应液冷却至0℃，逐滴加入10mL浓盐酸，室温搅拌1小时，减压浓缩。加入500mL乙酸乙酯，过滤，100mL乙酸乙酯洗涤，滤液浓缩得到12.5g粗产品，收率48％。LCMS(ESI)m/z 272.1(M+H)+.
化合物4-2的合成
上一步产物3-2(12.5g,46.1mmol)溶于150mL四氢呋喃，冷至0℃，分批小量加入硼氢化锂(2.0g,90.9mmol)。反应液室温搅拌3小时，冰水浴冷却，逐滴缓慢加入10mL甲醇直至没有气泡冒出，继续搅拌2小时。加入300mL乙酸乙酯和饱和300mL氯化铵溶液，有机相分离，无水硫酸钠干燥，浓缩得到8.3g粗产品4-2，为浅黄色油状物。LCMS(ESI)m/z 230.0(M+H)+.
化合物5-2的合成
氮气保护下，三苯基磷(12g,45.8mmol)溶于200mL四氢呋喃，冰水浴冷却，搅拌。加入偶氮二甲酸二乙酯(DEAD)(8.0g,45.8mmol)，继续搅拌5分钟。依次加入化合物4-2(8.3g,36.2mmol)的50mL四氢呋喃溶液和硫代乙酸(4.13g,54.3mmol)。反应液升至室温搅拌过夜。往反应液中加入300mL乙酸乙酯和200mL饱和氯化铵溶液。分出有机相，浓缩。粗产物硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯体积比3：1)纯化得3.3g产物5-2，为浅黄色油状物，产率32％。LCMS(ESI)m/z 288.0(M+H)+.
化合物6-2的合成
氮气保护下，将上一步反应产物5-2(3.3g,11.4mmoL)溶于60mL甲醇和30mL水的混合溶液中，加入碳酸钾(4g,28.9mmol)。反应液氮气保护下室温搅拌2小时。加入甲基硫代磺酸甲酯(3.0g,23.8mmol)。氮气保护下反应液室温搅拌2小时。加入200mL水和200mL二氯甲烷，分出有机相，水相用1M的稀盐酸调PH至4到5，乙酸乙酯萃取(150mL×3)，合并有机相，饱和食盐水洗涤(100mL)，无水硫酸镁干燥，浓缩得2.0g粗产物，为浅黄色油状物。手性制备HPLC(AD-H,4.6×250mm,5um,flow rate:CO2+MeOH＝2.7+0.3)分离得到两个异构体6-2-P1和6-2-P2。LCMS(ESI)m/z 292.1(M+H)+。
6-2-P1:Rt＝1.72,70％；900mg,1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 3.65(q,J＝7.2Hz,1H),3.51(q,J＝7.2Hz,1H),2.92-2.74(m,2H),2.51(s,3H),2.42(s,3H),2.11-2.05(m,2H),1.41(d,J＝7.2Hz,3H).
6-2-P2:Rt＝2.38,30％；200mg,1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 3.65(q,J＝7.2Hz,1H),3.43(q,J＝7.2Hz,1H),2.89-2.75(m,2H),2.46(s,3H),2.41(s,3H),2.13-2.08(m,2H),1.43(d,J＝7.2Hz,3H).
化合物CE-011的合成
上一步反应产物6-2(160mg,0.549mmol)溶于5mL干燥的二氯甲烷中，加入二环己基碳二酰亚胺DCC(80mg,0.388mmol)，室温搅拌30分钟，过滤。
氩气保护下，美登醇(41mg,0.0726mmol)溶于3mL干燥DMF中，加入Zn(HDMS)2(0.5mL,0.74mmol)，室温搅拌。将上述滤液加入反应液中，室温搅拌2小时，加入20mL饱和碳酸氢钠溶液和30mL乙酸乙酯。分出有机相20mL饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩。粗产品用制备HPLC纯化得到10mg产物CE-011，为白色固体，产率17％。LCMS(ESI)m/z 838.2(M+H)+。
化合物CE-029的合成
使用化合物6-2-P1为原料，CE-029的合成步骤和CE-011一致。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 6.84(s,2H),6.42&6.38(dd,J1＝15.6Hz,J2＝8.0Hz,1H),6.35(s,1H),6.14(d,J＝11.6Hz,1H),5.49&5.46(dd,J1＝15.6Hz,J2＝6.4Hz,1H),5.35(t,J＝4.8Hz,1H),4.92&4.91(dd,J1＝12.0Hz,J2＝2.8Hz,1H),4.28(t,J＝12.8Hz,1H),3.99(s,3H),3.59(q,J＝6.8Hz,2H),3.50(s,1H),3.49(d,J＝6.4Hz,1H),3.37(s,3H),3.22(d,J＝12.8Hz,1H),3.13(s,3H),2.89-2.84(m,1H),2.81(d,J＝8.8Hz,1H),2.57(t,J＝12.0Hz,1H),2.44-2.42(m,3H),2.36(s,3H),2.29-2.27(m,2H),2.08-1.99(m,3H),1.68(s,3H),1.58-1.65(m,2H),1.45(d,J＝6.8Hz,3H),1.30(d,J＝7.2Hz,3H),0.84(s,3H).
化合物CE-030的合成
使用化合物6-2-P2为原料，CE-030的合成步骤和CE-011一致。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 6.83(s,1H),6.74(s,1H),6.44(d,J＝11.2Hz,1H),6.40(t,J＝6.4Hz,1H),6.15(d,J＝10.4Hz,1H),5.49&5.48(dd,J1＝13.6Hz,J2＝8.8Hz,1H),4.88&4.87(dd,J1＝12.0Hz,J2＝2.8Hz,1H),4.28(t,J＝12.8Hz,1H),3.99(s,3H),3.61(q,J＝6.8Hz,1H),3.51(d,J＝9.2Hz,2H),3.35(s,3H),3.22(d,J＝12.8Hz,1H),3.16(s,3H),2.93-2.84(m,2H),2.77(d,J＝8.8Hz,1H),2.53(t,J＝12.0Hz,1H),2.44(s,3H),2.43(s,3H),2.36-2.10(m,1H),2.29-2.27(m,2H),2.08-1.99(m,3H),1.68(s,3H),1.58-1.65(m,2H),1.45(d,J＝6.8Hz,3H),1.30(d,J＝7.2Hz,3H),0.84(s,3H).
化合物7-2的合成
CE-029(12mg,0.015mmol)溶于1mL乙酸乙酯和1mL甲醇的混合溶剂中，将二硫代苏糖醇DTT(18mg,0.117mmol)溶于0.5mL PH＝7.5的磷酸钾缓冲溶液中加入。反应液在氮气保护下搅拌3小时。加入PH＝6.0的磷酸钾缓冲溶液1mL淬灭反应。乙酸乙酯萃取3次(10mL×3)，合并有机相，饱和食盐水洗涤3次(5mL)，无水硫酸钠干燥，浓缩。粗产品使用制备HPLC(CH3CN in H2O-0.05％TFA from 5％to 95％)纯化得到10mg产物7-2，白色固体，产率85％。LCMS(ESI)m/z792.2(M+H)+。
化合物CE-038的合成
氮气保护下，上一步反应产物7-2(10mg,0.012mmol)溶于1.5mL四氢呋喃中，加入PH＝6.0的磷酸钾缓冲溶液1.5mL和4-(N-马来酰亚胺甲基)环己烷-1-羧酸琥珀酰亚胺酯(20mg,0.06mmol，SMCC)。反应液氮气保护下室温搅拌过夜。过滤，滤液由制备HPLC纯化得11.5mg产品CE-038，为白色固体，产率85％。
LCMS(ESI)m/z1125.9(M+H)+,1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 6.84(s,1H),6.80(s,1H),6.56(d,J＝8.8Hz,1H),6.44&6.42(dd,J1＝11.6Hz,J2＝8.8Hz,1H),6.15(d,J＝8.8Hz,1H),5.52&5.50(dd,J1＝11.2Hz,J2＝6.4Hz,1H),4.88-4.84(m,1H),4.29(t,J＝8.4Hz,1H),3.99(s,3H),3.95&3.94(dd,J1＝7.2Hz,J2＝2.8Hz,1H),3.53-3.48(m,4H),3.41-3.37(m,2H),3.37(s,3H),3.26-3.19(m,2H),3.13(d,J＝4.8Hz,1H),3.13(s,3H),2.85-2.77(m,5H),2.59(t,J＝8.8Hz,2H),2.46(s,3H),2.29-2.15(m,8H),1.83-1.78(m,3H),1.68(s,3H),1.63(d,J＝10.8Hz,1H),1.54(d,J＝10.8Hz,1H),1.45(t,J＝6.8Hz,3H),1.30(t,J＝7.2Hz,3H),1.30(t,J＝7.2Hz,3H),1.10(q,J＝10.4Hz,2H),0.84(s,3H).
化合物CE-041的合成
将化合物7-2(10mg,0.012mmol)溶于2mL N,N-二甲基甲酰胺中，加入CE-L-019 N-琥珀酰亚胺4-(2-二硫代吡啶)丁酰酯(6.8mg,0.018mmol)。反应液氮气保护下室温搅拌过夜，过滤，滤液直接使用制备HPLC(CH3CN in H2O-0.05％TFA from 5％to 95％)纯化得到9.6mg产物CE-041，为白色固体，产率80％。
LCMS(ESI)m/z1007.3(M+H)+,1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 6.84(s,2H),6.80(s,1H),6.43(dd,J1＝12.4Hz,J2＝8.8Hz,1H),6.15(d,J＝8.8Hz,1H),5.52&5.51(dd,J1＝12.8Hz,J2＝6.8Hz,1H),4.90(d,J＝9.6Hz,1H),4.31(t,J＝8.8Hz,1H),3.99(s,3H),3.61(q,J＝5.6Hz,2H),3.50(d,J＝7.2Hz,2H),3.37(s,3H),3.22(d,J＝12.8Hz,1H),3.13(s,3H),2.85-2.77(m,12H),2.59(t,J＝8.8Hz,2H),2.42(s,3H),2.29(d,J＝8.4Hz,1H),2.19-2.16(m,2H),2.00-2.08(m,2H),1.69(s,3H),1.64(d,J＝10.8Hz,1H),1.45(d,J＝6.8Hz,3H),1.30(d,J＝7.2Hz,3H),0.84(s,3H).
实施例3 CE-012,013,014,015,032,004的合成路线
化合物2-3的合成:
2-甲基烯丙醇1-3(10g,139mmol)和咪唑(18.9g,278mmol)依次溶于200mL二氯甲烷中，冰水浴冷至0℃，分批加入叔丁基二苯基氯硅烷(57g,208mmol)。反应液升至室温搅拌2小时。加入100mL水淬灭，二氯甲烷萃取3次(100mL×3)。合并有机相，饱和食盐水洗3次(50mL×3)，无水硫酸钠干燥，浓缩。粗产物由硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝10:1)纯化得35g产物2-3，为浅黄色固体，产率81％。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 7.70-7.68(m,4H),7.42-7.35(m,6H),5.13(s,1H),4.85(d,J＝6.4Hz,1H),4.07(s,2H),1.68(s,3H),1.07(s,9H).
化合物3-3的合成:
将上一步反应粗产物2-3(30g,96mmol)溶于600mL二氯甲烷中，加入碳酸钾(24.9g,144mmol)，室温搅拌1小时。分批加入间氯过氧苯甲酸(26.4g,192mmol)。反应液室温搅拌过夜。150mL饱和硫代硫酸钠溶液加入搅拌半小时淬灭反应。使用二氯甲烷萃取3次(100mL×3)。合并有机相，饱和食盐水洗3次(100mL×3)，无水硫酸钠干燥，浓缩。粗产物经硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝10:1)纯化得22.8g产物3-3，产率72％。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 7.68(d,J＝6.0Hz,4H),7.42-7.36(m,6H),3.66(s,2H),2.71(d,J＝4.8Hz,1H),2.58(d,J＝4.8Hz,1H),1.37(s,3H),1.06(s,9H).
化合物4-3的合成:
将上一步的粗产物3-3(20g,62mmol)溶于200mL无水甲醇中，加入硫脲(48g,124mmol)。反应液回流搅拌1小时，TLC点板检测原料以完全消耗，冷却至室温，减压移除甲醇。往剩余物中加入200mL水，使用乙酸乙酯萃取3次(100mL×3)。合并有机相，饱和食盐水洗涤3次(100mL×3)，无水硫酸钠干燥，浓缩，粗产品使用硅胶柱层析(石油醚：乙酸乙酯10：1)得到14.8g产物，为无色油状物，产率70％。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 7.67-7.64(m,4H),7.43-7.34(m,6H),3.88(d,J＝10.4Hz,1H),3.57(d,J＝10.4Hz,1H),2.30(d,J＝18.4Hz,2H),1.68(s,3H),1.07(s,9H).
化合物5-3的合成:
氮气保护下，将正丁基锂(2.5M,13mL 32.1mmol)加入到冷却至-78℃的100mL干燥四氢呋喃溶液中。将乙腈(1.6mL,30.7mmol)溶于10mL干燥四氢呋喃加入。反应液在-78℃搅拌半小时。将化合物4-3(10g,29.2mmol)溶于20mL四氢呋喃中，并逐滴加入。加入完毕，反应液逐步升温至室温并搅拌3小时。将反应液冷却至0℃，逐滴缓慢加入稀盐酸(0.5M,20mL)淬灭反应，乙酸乙酯萃取3次(100mL×3)，合并有机相，饱和食盐水洗3次(100mL×3)，无水硫酸钠干燥，浓缩。粗产品使用硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝1:1)纯化得到产物9.2g，为浅黄色油状物，产率82％。LCMS(ESI)m/z 384.2(M+H)+
化合物6-3的合成:
将上一步反应产物5-3(3g,7.8mmol)溶于30mL二氯甲烷中，加入甲基硫代磺酸甲酯(1.2mL,11.7mmoL)和三乙胺(1.6mL,11.7mmol)。氮气保护下反应液室温搅拌过夜。加入1M稀盐酸30mL和100mL二氯甲烷，分出有机相，无水硫酸钠干燥，浓缩。粗产物经硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝10:1)纯化得2.93g产品6-3，为浅黄色固体，产率87％。
LCMS(ESI)m/z 451.9(M+H)+,1HNMR(400MHz,CDCl3)δ7.65～7.62(m,4H),7.45～7.38(m,6H),3.57(s,2H),2.43～2.37(m,2H),2.25(s,3H),2.14～2.03(m,2H),1.27(s,3H),1.08(s,9H).
化合物7-3的合成:
上一步反应产物6-3(3.2g,7.45mmoL)溶于30mL四氢呋喃中，加入四丁基氟化铵(22mL,22mmol,1M in THF)。反应液室温搅拌过夜。缓慢加入1N的稀盐酸300mL淬灭反应，加入200mL乙酸乙酯，分出有机相，无水硫酸钠干燥，浓缩。粗产品经硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝2:1)纯化得1.18g产物7-3，为无色油状物，产率83％。
LCMS(ESI)m/z 192.1(M+H)+,1HNMR(400MHz,CDCl3)δ3.57(s,3H),2.59～2.42(m,2H),2.43(s,3H),2.10～1.94(m,2H),1.30(s,3H).
化合物8-3的合成:
上一步反应产物7-3(1.18g,6.17mmoL)溶于100mL二氯甲烷中，加入三甲氧基鎓四氟化硼盐(1.83g,12.35mmoL)和1,8-双甲胺基萘(2.7g,12.35mmol)。反应液室温搅拌过夜。过滤，30mL二氯甲烷洗涤，滤液用1M稀盐酸150mL洗涤，分出有机相，无水硫酸钠干燥，浓缩。粗产品经硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝8:1)纯化得820mg化合物8-3，为黄色油状物，产率65％。
LCMS(ESI)m/z 205.9(M+H)+,1HNMR(400MHz,CDCl3)δ3.37～3.31(m,5H),2.56～2.42(m,2H),2.41(s,3H),2.08-2.03(m,2H),1.30(s,3H).
化合物9-3的合成:
将上一步反应产物8-3(760mg,3.7mmol)溶于8mL乙醇中，置换氩气三次，缓慢加入8M的氢氧化钠溶液(4mL,32mmol)。氩气保护下反应液升温回流过夜。反应液冷却至室温，稀盐酸调PH＝2，二氯甲烷萃取3次(50mL×3)，合并有机相，无水硫酸钠干燥，浓缩得粗产物700mg，为黄色油状物，直接用于下一步反应。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ3.37～3.31(m,5H),2.61～2.13(m,2H),2.03～1.91(m,2H),1.30(s,3H).
化合物10-3的合成:
将上一步反应产物9-3(700mg,3.9mmol)溶于10mL二氯甲烷中，加入甲基硫代磺酸甲酯(0.5mL,14mmoL)和三乙胺(0.6mL,4.3mmol)。氮气保护下反应液室温搅拌过夜。加入1M稀盐酸15mL和50mL二氯甲烷，分出有机相，无水硫酸钠干燥，浓缩得1.2g粗产物10-3，为黄色油状物，直接用于下一步反应。LCMS(ESI)m/z 225.1(M+H)+.
化合物11-3的合成:
将上一步反应产物10-3(1.2g,5.35mmol)和HOSu(700mg,6.08mmoL)溶于20mL二氯甲烷中，加入EDC-HCl(1.2g,6.28mmol)。反应液室温搅拌2小时。加入30mL水，乙酸乙酯萃取3次(50mL×3)，合并有机相，饱和食盐水洗(50mL)，无水硫酸钠干燥，浓缩。粗产物使用硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝1:3)得产物1.7g，为黄色油状物，直接用于下一步反应。LCMS(ESI)m/z 339.0(M+H)+.
化合物12-3的合成:
N-甲基-L-丙氨酸(560mg,5.28mmol)溶于20mL乙二醇二甲醚和20mL水中。加入三乙胺(1.5mL,10.56mmol)，剧烈搅拌。将上一步反应产物12-3(1.7g,5.29mmol)溶于20mL乙二醇二甲醚中逐滴加入，约5分钟加完。反应液室温搅拌3小时，减压移除有机溶剂，加入10mL水，使用1M的稀盐酸调PH＝3，乙酸乙酯萃取3次(50mL×3)，合并有机相，饱和食盐水洗涤3次(50mL×3)，无水硫酸钠干燥，浓缩。粗产物使用硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯/醋酸＝50:50:0.5)得产物460mg，为黄色油状物，产率25％。LCMS(ESI)m/z310.0(M+H)+.
化合物13-3-P1,13-3-P2的合成:
上一步反应产物12-3(360mg,1.165mmol)溶于10mL甲醇，逐滴缓慢滴入0.5mL二氯亚砜，。反应液室温搅拌2小时，减压浓缩。加入50mL乙酸乙酯，缓慢加入20mL饱和碳酸氢钠溶液，分离有机相，无水硫酸钠干燥，浓缩。粗产品经手性制备(AD-H,4.6×250mm,CO2+MeOH＝2.55+0.45,P1:Rt＝2.19；P2:Rt＝2.77)HPLC纯化得119mg产物13-3-P1和130mg产物13-3-P2。LCMS(ESI)m/z 324.1(M+H)+.
化合物14-3-P2的合成:
上一步反应产物13-3-P2(119mg,0.0368mmoL)溶于5mL甲醇和5mL水的混合溶液中加入氢氧化锂(50mg,2.08mmol)。反应液室温搅拌1.5小时。加入1M稀盐酸酸化调PH到3。乙酸乙酯萃取3次(50mL×3)，合并有机相，饱和食盐水(30mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩得106mg产物14-3-P2，为无色油状物，产率94％，LCMS(ESI)m/z 310.0(M+H)+。
化合物14-3-P1的合成:
14-3-P1的合成步骤和14-3-P2相同，使用13-3-P1为原料.
化合物CE-012,013的合成:
将上一步产物14-3-P1(106mg,0.343mmol)，DCC(290mg,1.40mmol)加入一个干燥的Schlenck管中，置换氩气3次，加入2mL二氯甲烷，搅拌。将美登醇(96.5mg,0.171mmol)溶于8mL干燥二氯甲烷中加入，然后加入1M的氯化锌乙醚溶液(1mL,1mmol)。反应液室温搅拌2h，缓慢加入饱和碳酸氢钠溶液1mL淬灭反应，加入30mL乙酸乙酯，过滤，乙酸乙酯洗涤。滤液无水硫酸钠干燥，浓缩。粗产物使用硅胶柱层析(二氯甲烷/甲醇＝50:1至40:1)分离得到两个异构体CE-012(45mg，P1)和CE-013(40mg，P2)，均为白色固体，产率31％+28％.LCMS(ESI)m/z 838.3(M+H)+.
HPLC(15min):CE-012,Rt＝8.063；CE-013,Rt＝8.142
Mobile Phase:A:Water(0.01％TFA)B:CAN(0.01％TFA)
Gradient:0min 5％B,7min 95％B,15min 95％B
Flow Rate:1.0ml/min
Column:Xbridge C18,4.6*150mm,3.5um
Oven Temperature:40℃
CE-012:1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 6.85(s,1H),6.79(s,1H),6.44&6.41(dd,J1＝15.2Hz,J2＝10.8Hz,1H),6.26(d,J＝10.8Hz,1H),6.25(s,1H),5.86&5.83(dd,J1＝15.2Hz,J2＝9.2Hz,1H),5.17(q,J＝7.2Hz,1H),5.00(s,1H),4.94&4.91(dd,J1＝12.0Hz,J2＝3.2Hz,1H),4.33(t,J＝10.4Hz,1H),3.99(s,3H),3.52(d,J＝13.2Hz,1H),3.43(d,J＝8.8Hz,1H),3.38(s,3H),3.35(s,3H),3.20(d,J＝12.8Hz,1H),3.17(s,3H),3.04(s,3H),2.82(d,J＝9.2Hz,1H),2.66&2.63(dd,J1＝14.8Hz,J2＝12.0Hz,1H),2.51-2.46(m,2H),2.41(s,3H),2.24-2.18(m,1H),2.04-1.88(m,2H),1.76(d,J＝13.6Hz,1H),1.69(s,3H),1.55(s,2H),1.49(d,J＝7.2Hz,3H),1.30-1.35(m,1H),1.30(s,3H),1.28(s,3H),0.86(s,3H).
CE-013:1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 6.82(s,1H),6.74(d,J＝10.8Hz,1H),6.63(s,1H),6.44&6.41(dd,J1＝15.2Hz,J2＝10.8Hz,1H),6.21(s,1H),5.70&5.66(dd,J1＝15.2Hz,J2＝9.2Hz,1H),5.40(q,J＝7.2Hz,1H),4.79&4.78(dd,J1＝12.0Hz,J2＝3.2Hz,1H),4.28(t,J＝12.0Hz,1H),3.98(s,3H),3.65(d,J＝12.4Hz,1H),3.50(d,J＝8.8Hz,1H),3.35(s,3H),3.29(d,J＝2.8Hz,2H),3.26(s,3H),3.23(s,3H),3.11(d,J＝12.8Hz,1H),3.03(d,J＝10.0Hz,1H),2.85(s,3H),2.62&2.59(dd,J1＝14.8Hz,J2＝12.0Hz,1H),2.52-2.38(m,2H),2.30(s,3H),2.19&2.16(dd,J1＝14.4Hz,J2＝3.5Hz,1H),2.06-1.88(m,2H),1.64(s,3H),1.55(s,2H),1.50-1.42(m,1H),1.20-1.30(m,1H),1.30(d,J＝2.8Hz,3H),1.28(d,J＝2.8Hz,3H),1.22(s,3H),0.80(s,3H).
化合物CE-014,015的合成:
CE-014，CE-015的合成步骤和CE-012，CE-013相同，使用14-P2为原料.
CE-014:1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 6.85(s,1H),6.81(s,1H),6.43&6.40(dd,J1＝15.2Hz,J2＝11.2Hz,1H),6.28(d,J＝10.8Hz,1H),6.24(s,1H),5.88&5.85(dd,J1＝15.2Hz,J2＝9.6Hz,1H),5.19(q,J＝7.6Hz,1H),4.99(s,1H),4.91&4.88(dd,J1＝12.0Hz,J2＝3.2Hz,1H),4.32(t,J＝10.4Hz,1H),4.00(s,3H),3.52(d,J＝13.2Hz,1H),3.43(d,J＝9.2Hz,1H),3.39(s,3H),3.38(s,3H),3.35(s,3H),3.20(d,J＝12.8Hz,1H),3.17(s,3H),3.04(s,3H),2.84(d,J＝9.2Hz,1H),2.66&2.63(dd,J1＝14.8Hz,J2＝12.0Hz,1H),2.57-2.45(m,2H),2.41(s,3H),2.24-2.18(m,1H),2.04-1.88(m,2H),1.74(d,J＝13.6Hz,1H),1.69(s,3H),1.49(d,J＝7.2Hz,3H),1.38-1.30(m,1H),1.30(s,3H),1.28(s,3H),0.86(s,3H).
CE-015:1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 6.82(s,1H),6.74(d,J＝10.8Hz,1H),6.64(s,1H),6.44&6.41(dd,J1＝15.2Hz,J2＝10.8Hz,1H),6.23(s,1H),5.71&5.67(dd,J1＝15.2Hz,J2＝9.2Hz,1H),5.41(q,J＝7.2Hz,1H),4.80&4.77(dd,J1＝12.0Hz,J2＝3.2Hz,1H),4.28(t,J＝12.0Hz,1H),3.98(s,3H),3.65(d,J＝12.4Hz,1H),3.50(d,J＝8.8Hz,1H),3.35(s,3H),3.30(d,J＝2.8Hz,2H),3.26(s,3H),3.22(s,3H),3.11(d,J＝12.8Hz,1H),3.03(d,J＝10.0Hz,1H),2.85(s,3H),2.64-2.50(m,2H),2.36-2.28(m,1H),2.33(s,3H),2.19&2.16(dd,J1＝14.4Hz,J2＝3.5Hz,1H),2.06-1.88(m,2H),1.64(s,3H),1.55(s,2H),1.50-1.42(m,1H),1.35-1.25(m,1H),1.30(d,J＝2.8Hz,3H),1.28(d,J＝2.8Hz,3H),1.19(s,3H),0.80(s,3H).
化合物CE-032的合成:
CE-015(40mg,0.047mmol)溶于0.6mL乙酸乙酯中，将二硫代苏糖醇DTT(18mg,0.12mmol)溶于1.2mL甲醇中加入，加入PH＝7.5的磷酸钾缓冲溶液2.7mL。反应液在氮气保护下搅拌2小时。加入PH＝6.0的磷酸钾缓冲溶液10.2mL淬灭反应。乙酸乙酯萃取3次(20mL×3)，合并有机相，饱和食盐水洗涤3次(20mL×3)，无水硫酸钠干燥，浓缩。粗产品使用制备HPLC(CH3CN in H2O-0.05％TFA from 5％to 95％)纯化得到22mg产物CE-032，白色固体，产率80％。LCMS(ESI)m/z 808.2(M+H)+.
化合物CE-004的合成：
将CE-032(30mg,0.037mmol)溶于4mLN,N-二甲基甲酰胺中，加入SM1(24mg,0.074mmol)。反应液室温搅拌过夜，过滤，滤液直接使用制备HPLC(CH3CN in H2O-0.05％TFAfrom 5％to 95％)纯化得到20.4mg产物CE-004，为白色固体。产率54％。LCMS(ESI)m/z1024.2(M+H)+.
1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 6.84(s,1H),6.73(d,J＝11.2Hz,1H),6.63(s,1H),6.44&6.42(dd,J1＝15.2Hz,J2＝11.2Hz,1H),6.29(s,1H),5.70&5.68(dd,J1＝15.2Hz,J2＝9.2Hz,1H),5.41(q,J＝6.8Hz,1H),4.78&4.78(dd,J1＝11.6Hz,J2＝2.8Hz,1H),4.28(q,J＝10.4Hz,1H),3.98(s,3H),3.65(d,J＝13.2Hz,1H),3.50(d,J＝8.8Hz,1H),3.36(s,3H),3.28(d,J＝3.2Hz,2H),3.25(s,3H),3.22(s,3H),3.12(d,J＝8.4Hz,1H),3.03(d,J＝10.0Hz,1H),2.84(s,6H),2.70(q,J＝7.6Hz,4H),2.64-2.49(m,2H),2.36-2.28(m,1H),2.18&2.17(dd,J1＝14.4Hz,J2＝2.8Hz,1H),2.10-1.98(m,4H),1.94-1.86(m,1H),1.64(s,3H),1.58(d,J＝13.2Hz,1H),1.50-1.42(m,1H),1.30(s,3H),1.28(s,3H),1.30-1.24(m,1H),1.19(s,3H),0.80(s,3H).
实施例4 CE-018和CE-019的合成路线
实验步骤
化合物3-4的合成:
化合物1-4(2.0g,7.2mmol)溶于80mL水和20mL甲醇的混合溶液中，调PH到8，加入苄胺(1.53g,14mmol)。反应液氮气保护下室温搅拌1小时。加入甲基硫代磺酸甲酯(1.18g,9.4mmol)，反应液氮气保护下室温搅拌过夜。减压移除甲醇，加入二氯甲烷萃取(80mL)，分出水相，使用2N的稀盐酸调PH＝2，使用乙酸乙酯萃取三次(50mL×3)，合并有机相，水洗(50mL)，饱和食盐水洗(50mL)，无水硫酸钠干燥，浓缩得粗产物1.1g，为黄色油状物，直接用于下一步反应。
LCMS(ESI)m/z 206(M+H)+.1H NMR(400MHz,CD3OD)δppm 2.51(s,3H),2.46-2.42(m,2H),2.19-2.05(m,2H),1.56(s,3H).
化合物4-4的合成:
将上一步反应产物3-4(1.8g,8.78mmol)和HOSu(1.51g,13mmoL)溶于20mL二氯甲烷中，加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC)(2.51g,13mmol)。反应液室温搅拌2小时。加入50mL水，乙酸乙酯萃取3次(50mL×3)，合并有机相，饱和食盐水洗涤3次(50mL×3)，无水硫酸钠干燥，浓缩得2.2g为黄色油状物，直接用于下一步反应。LCMS(ESI)m/z 303.1(M+H)+.
化合物5-4的合成:
N-甲基-L-丙氨酸(900mg,8.74mmol)溶于20mL N,N-二甲基甲酰胺中。加入三乙胺(0.5mL,3.5mmol)，剧烈搅拌。将上一步反应产物4-4(2.2g,7.28mmol)溶于5mL N,N-二甲基甲酰胺中逐滴加入，约5分钟加完。反应液室温搅拌过夜。加入1M的稀盐酸调PH＝3，乙酸乙酯萃取3次(50mL×3)，合并有机相，饱和食盐水洗涤3次(50mL×3)，无水硫酸钠干燥，浓缩。粗产物使用硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯/乙酸＝50:50:0.5)得产物1.2g，为黄色油状物，产率57％。
LCMS(ESI)m/z 291.1(M+H)+.1H NMR(400MHz,CD3OD)δppm 5.03(q,J＝7.2Hz,1H),3.05(s,3H),2.72-2.68(m,2H),2.63(s,3H),2.36-2.15(m,2H),1.71(s,3H),1.43(d,J＝7.2Hz,3H).
化合物6-4的合成:
将上一步产物5-4(130mg,0.45mmol)，DCC(130mg,0.45mmol))加入一个干燥的Schlenck管中，置换氩气3次，加入1mL二氯甲烷，搅拌。将美登醇(84.0mg,0.15mmol)溶于5mL干燥二氯甲烷中加入，然后逐滴加入1M的氯化锌乙醚溶液(1mL,1mmol)。反应液室温搅拌2h，缓慢加入5mL饱和碳酸氢钠溶液淬灭反应，加入30mL乙酸乙酯，分出有机相，无水硫酸钠干燥，浓缩。粗产物使用制备硅胶板(二氯甲烷/甲醇＝20:1)分离得到两个异构体CE-018(15mg，P1)和CE-019(15mg，P2)，均为白色固体，产率12％+12％.LCMS(ESI)m/z 837.2(M+H)+.
HPLC(15min):CE-018,Rt＝7.812；CE-019,Rt＝7.656
Mobile Phase:A:Water(0.01％TFA)B:ACN(0.01％TFA)
Gradient:0min 5％B,7min 95％B,15min 95％B
Flow Rate:1.0ml/min
Column:Xbridge C18,4.6*150mm,3.5um
Oven Temperature:40℃
CE-018:1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 6.85(s,1H),6.79(s,1H),6.45&6.43(dd,J1＝15.2Hz,J2＝10.8Hz,1H),6.37(s,1H),6.24(d,J＝10.8Hz,1H),5.83&5.81(dd,J1＝15.2Hz,J2＝9.2Hz,1H),5.23-5.18(m,1H),4.95(d,J＝10.0Hz,1H),4.29(t,J＝10.4Hz,1H),3.99(s,3H),3.52(d,J＝12.8Hz,1H),3.45(d,J＝9.2Hz,1H),3.35(s,3H),3.20(d,J＝12.8Hz,1H),3.18(s,3H),3.05(d,J＝5.6Hz,3H),2.81(d,J＝10.0Hz,1H),2.69-2.58(m,2H),2.63(s,3H),2.36-2.15(m,2H),2.09-2.02(m,2H),1.74(d,J＝14.4Hz,3H),1.76-1.69(m,1H),1.69(s,3H),1.52(d,J＝7.2Hz,3H),1.49-1.40(m,1H),1.35-1.30(m,1H),1.28(d,J＝6.4Hz,3H),0.86(s,3H).
CE-019:1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 6.83(s,1H),6.72&6.69(dd,J1＝15.6Hz,J2＝2.8Hz,1H),6.61(s,1H),6.45&6.42(dd,J1＝15.6Hz,J2＝10.8Hz,1H),6.27(s,1H),5.69-5.62(m,1H),5.45-5.36(m,1H),4.78(d,J＝10.8Hz,1H),4.28(t,J＝10.8Hz,1H),3.99(s,3H),3.63&3.61(dd,J1＝12.4Hz,J2＝9.2Hz,1H),3.51(d,J＝9.2Hz,1H),3.36(s,3H),3.23(d,J＝9.2Hz,3H),3.15(t,J＝11.6Hz,3H),3.03(d,J＝5.6Hz,3H),2.88(s,3H),2.69-2.58(m,2H),2.55(d,J＝22.0Hz,3H),2.40-2.05(m,2H),1.76-1.69(m,1H),1.64(s,3H),1.58(d,J＝8.0Hz,1H),1.60-1.40(m,1H),1.32-1.28(m,7H),0.80(s,3H).
实施例5 CE-021和CE-022的合成路线
化合物2-5的合成:
将原料1-5(10g,116mmol)溶于50mL无水甲醇中，加入硫脲(18g,232mmol)。反应液加热至50℃搅拌24小时，TLC点板检测原料已完全消耗。反应液冷却至室温，加入100m水，使用沸点为30℃～60℃的石油醚萃取3次(50mL×3)。合并有机相，饱和食盐水洗3次(50mL×3)，无水硫酸钠干燥，浓缩，粗产品使用硅胶柱层析(沸点为30℃～60℃石油醚)得到4.7g产物2-5，为无色油状物，产率40％。1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 2.71(m,J＝10.0Hz,1H),2.47(d,J＝6.4Hz,1H),2.18(d,J＝6.0Hz,1H),1.38-1.24(m,1H),1.09(t,J＝10.0Hz,6H).
化合物3-5的合成:
氮气保护下，将正丁基锂(2.5M,17.6mL,43.2mmol)加入到冷却至-78℃的150mL干燥四氢呋喃溶液中。将乙腈(1.8g,44.8mmol)溶于10mL干燥四氢呋喃加入。反应液在-78℃搅拌半小时。将化合物2-5(4g,39.2mmol)溶于20mL四氢呋喃中，并逐滴加入。加入完毕，反应液逐步升温至室温并搅拌3小时。将反应液冷却至0℃，逐滴缓慢加入稀盐酸(0.5M,20mL)淬灭反应，乙酸乙酯萃取3次(100mL×3)，合并有机相，饱和食盐水洗3次(100mL×3)，无水硫酸钠干燥，浓缩得3.8g粗产品，为浅黄色油状物，直接用于下一步反应，产率68％。LCMS(ESI)m/z144.1(M+H)+.
化合物4-5的合成:
将上一步反应产物3-5(2.86g,20mmol)溶于20mL乙醇中，置换氩气三次，缓慢加入8M的氢氧化钠溶液(10mL,80mmol)。氩气保护下反应液升温回流过夜。反应液冷却至室温，稀盐酸调PH＝2，二氯甲烷萃取3次(50mL×3)，合并有机相，无水硫酸钠干燥，浓缩。粗产物使用硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝2:1)纯化得2.4g产品4-5，为浅黄色油状物，产率75％。LCMS(ESI)m/z163.1(M+H)+。1H NMR(400MHz,d6-DMSO)δppm 12.07(br,1H),3.35(br,1H),2.73-2.66(m,1H),2.49-2.28(m,2H),2.04-2.00(m,1H),1.93-1.77(m,1H),1.60-1.50(m,1H),0.92(d,J＝6.8Hz,3H),0.86(d,J＝6.8Hz,3H).
化合物5-5的合成:
氩气保护下将上一步反应产物4-5(810mg,5mmol)溶于15mL二氯甲烷中，加入甲基硫代磺酸甲酯(0.65mL,18mmoL)和三乙胺(0.8mL)。氩气保护下反应液室温搅拌过夜。加入1M的稀盐酸40mL，乙酸乙酯萃取3次(50mL×3)，合并有机相，饱和食盐水洗涤(50mL)，无水硫酸钠干燥，浓缩得780mg粗产物5-5，直接用于下一步反应。LCMS(ESI)m/z 209.1(M+H)+.
化合物6-5的合成:
将上一步反应产物5-5(730mg,3.5mmol)和HOSu(445mg,3.85mmoL)溶于20mL二氯甲烷中，加入EDC(800mg,4.2mmol)。反应液室温搅拌2小时。加入30mL水和50mL乙酸乙酯，分出有机相，饱和食盐水洗涤3次(50mL×3)，无水硫酸钠干燥，浓缩得578mg粗产物6-5，为黄色油状物，直接用于下一步反应。LCMS(ESI)m/z 306.1(M+H)+.
化合物7-5的合成:
N-甲基-L-丙氨酸(190mg,1.8mmol)溶于10mL乙二醇二甲醚和10mL水中。加入三乙胺(0.5mL,3.6mmol)，剧烈搅拌。将上一步反应产物6-5(550mg,1.8mmol)溶于5mL乙二醇二甲醚中逐滴加入，约5分钟加完。反应液室温搅拌3小时，减压移除有机溶剂，加入10mL水，使用1M的稀盐酸调PH＝3，乙酸乙酯萃取3次(3×50mL)，合并有机相，饱和食盐水洗涤3次(50mL×3)，无水硫酸钠干燥，浓缩。粗产物使用硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯/乙酸＝50:50:0.5)得260mg产物7-5，为黄色油状物，产率50％。LCMS(ESI)m/z293.1(M+H)+。
化合物CE-021和CE-022的合成
将上一步产物7-5(40mg,0.138mmol)，DCC(76mg,0.368mmol)加入一个干燥的Schlenck管中，置换氩气3次，加入1mL二氯甲烷，搅拌。将美登醇(26mg,0.046mmol)溶于4mL干燥二氯甲烷中加入，然后加入1M的氯化锌乙醚溶液(0.3mL,0.3mmol)。反应液室温搅拌2h，缓慢加入0.5mL淬灭反应，加入20mL乙酸乙酯，过滤，乙酸乙酯洗涤。滤液无水硫酸钠干燥，浓缩。粗产物使用硅胶柱层析(二氯甲烷/甲醇＝50:1至40:1)分离得到两个异构体CE-021(6mg，P1)和CE-022(12mg，P2)，均为白色固体，产率18.5％+36.7％。LCMS(ESI)m/z 840.9(M+H)+。
HPLC(15min):CE-021,Rt＝11.197；CE-022,Rt＝11.292&11.345
Mobile Phase:A:water(0.01％TFA)B:CAN(0.01％TFA)
Gradient:0min 5％B,3min 5％B,10min 95％B,15min 95％B
Flow Rate:1.2ml/min
Column:Eclipse XDB-C18,4.6×150mm,5um
Oven Temperature:40℃
CE-021:1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 6.85(s,1H),6.79(s,1H),6.44(t,J＝12.8Hz,1H),6.29(d,J＝6.8Hz,1H),6.24(t,d,J＝6.8Hz,1H),5.88-5.80(m,1H),5.18-5.08(m,1H),4.98-4.90(m,1H),4.32(t,J＝10.4Hz,1H),3.99(s,3H),3.51(d,J＝12.8Hz,1H),3.44(d,J＝8.8Hz,1H),3.34(s,3H),3.20(d,J＝12.8Hz,1H),3.17(s,3H),3.05(d,J＝5.6Hz,3H),2.82(t,J＝10.0Hz,1H),2.69-2.57(m,4H),2.41(s,3H),2.23-2.20(m,1H),2.09-2.02(m,2H),1.76-1.69(m,1H),1.69(s,3H),1.50(d,J＝7.2Hz,3H),1.49-1.40(m,1H),1.30(s,3H),1.28(s,3H),1.03(d,J＝6.0Hz,6H),0.86(s,3H).
CE-022:1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 6.82(s,1H),6.76&6.75(dd,J1＝11.2Hz,J2＝6.4Hz,1H),6.64(d,J＝4.0Hz,1H),6.44&6.41(dd,J1＝14.8Hz,J2＝11.2Hz,1H),6.22(s,1H),5.72-5.63(m,1H),5.43-5.37(m,1H),4.81-4.76(m,1H),4.28(t,J＝11.2Hz,1H),3.99(s,3H),3.67&3.65(dd,J1＝12.4Hz,J2＝8.0Hz,1H),3.50(d,J＝10.4Hz,1H),3.35(s,3H),3.30(d,J＝7.2Hz,1H),3.23(s,3H),3.11(d,J＝13.2Hz,1H),3.04(d,J＝10.0Hz,1H),2.85(s,3H),2.70-2.33(m,4H),2.30(d,J＝6.4Hz,3H),2.23-2.16(m,1H),2.04-1.89(m,2H),1.71-1.65(m,1H),1.64(s,3H),1.60-1.55(m,2H),1.51-1.43(m,1H),1.30(d,J＝6.8Hz,3H),1.27(s,3H),0.99-0.88(m,6H),0.80(s,3H).
按照实施例1化合物CE-005的制备方法，将中间体CE-017替换为CE-022，进行后续反应，即可得到化合物CE-002。
实施例6 CE-033的合成路线
实验步骤
化合物2-6的合成:
将化合物1-6(2.0g,9.4mmol)溶于20mL N,N-二甲基甲酰胺中，加入三乙胺(1.9g,18.8mmol)和马来酸酐(1.8g,18.8mmol)。反应液室温搅拌过夜。加入50mL水，乙酸乙酯萃取3次(50mL×3)，合并有机相，饱和食盐水洗3次(50mL×3)，无水硫酸钠干燥，浓缩。粗产品经制备HPLC(CH3CN in H2O-0.05％TFA from 5％to 95％)纯化得1g产物2-6，为黄色油状物，产率76％。LCMS(ESI)m/z 312.2(M+H)+。
化合物3-6的合成:
将N-羟基丁二酰亚胺(1.5g,12.8mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺15mL中，冷却至0℃，加入三氟乙酸酐(1.8mL,12.8mmol)，搅拌10分钟。
上一步反应产物2-6(1.0g,3.2mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺15mL中，冷至0℃，搅拌，加入2,4,6-三甲基吡啶(774.4mg,6.4mmol)，加入上述反应液。升至室温搅拌过夜。加入1N的稀盐酸20mL淬灭反应，二氯甲烷萃取3次(30mL×3)，合并有机相，1N稀盐酸洗涤3次(20mL×3)，无水硫酸钠干燥，浓缩。粗产品经制备HPLC(CH3CN in H2O-0.05％TFA from 5％to 95％)纯化得752mg产物3-6，为白色固体，产率80％。LCMS(ESI)m/z 295.1(M+H)+。
化合物4-6的合成:
上一步反应产物3-6(700mg,2.4mmol)溶于10mL二氯甲烷中加入3mL三氟乙酸。反应液室温搅拌4小时，浓缩得442mg粗产品，为黄色油状物，产率95％，直接用于下一步反应。LCMS(ESI)m/z 195.2(M+H)+。
化合物5-6的合成:
上一步反应产物4-6(300mg,1.6mmol)溶于40mL乙腈中，加入三乙胺(315mg,3.2mmol)和N,N'-二琥珀酰亚胺基碳酸酯(798mg,3.2mmol)。反应液室温搅拌过夜。浓缩，粗产品经制备HPLC(CH3CN in H2O-0.05％TFA from 5％to 95％)纯化得188mg产物5-6，为白色固体，产率35％。LCMS(ESI)m/z 336.2(M+H)+.
化合物CE-033的合成:
氩气保护下，将DM1(N2'-去乙酰基-N2'-(3-巯基-1-氧代丙基)美登素)(37mg,0.05mmol)溶于2mL四氢呋喃中，加入PH＝6.0的磷酸钾缓冲溶液2mL和上一步反应产物5-6(20mg,0.06mmol)。反应液氩气保护下室温搅拌过夜。过滤，滤液直接进行制备纯化得28mg产品CE-033，为白色固体，产率51％。LCMS(ESI)m/z 1094.8(M+Na)+.
1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 12.30(br,1H),6.84(s,1H),6.68(t,J＝7.2Hz,1H),6.64(d,J＝7.2Hz,1H),6.42(t,J＝12.8Hz,1H),6.24(s,1H),5.70-5.61(m,1H),5.37(q,J＝6.8Hz,1H),4.79(d,J＝12.0Hz,1H),4.28(t,J＝10.4Hz,1H),4.21-4.05(m,2H),3.99(s,3H),3.76-3.64(m,3H),3.49(d,J＝8.8Hz,1H),3.42(d,J＝7.2Hz,1H),3.35(d,J＝2.4Hz,3H),3.32(d,J＝6.4Hz,1H),3.20(d,J＝2.8Hz,3H),3.19-3.08(m,6H),3.02(d,J＝9.6Hz,1H),3.01-2.93(m,2H),2.85(d,J＝2.8Hz,3H),2.82(s,3H),2.68-2.56(m,2H),2.43-2.33(m,1H),2.18(d,J＝14.4Hz,1H),1.95-1.85(m,1H),1.70(s,3H),1.59-1.55(m,1H),1.50-1.43(m,1H),1.35-1.23(m,10H),0.80(s,3H).
实施例7 CE-028,034的合成路线
实验步骤
化合物2-7的合成:
250mL茄形瓶中加入化合物1-7(64g,0.6mol)，搅拌下加入氢氧化钾(11.2g,0.2mol)。将该悬浊液加热至90℃，搅拌至氢氧化钾完全溶解。苄溴(34g,23.6mL,0.2mol)逐滴缓慢加入。反应液升温至110℃，搅拌过夜。反应液冷却至室温，加入800mL水，乙酸乙酯萃取3次(150mL×3)，合并有机相，水洗3次(150mL×3)，饱和食盐水洗(150mL)，无水硫酸钠干燥，浓缩。粗产品经硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯10:1至3:1)纯化得30g产品2-7，为无色油状物，产率76％。LCMS(ESI)m/z 197.1(M+H)+
化合物3-7的合成:
上一步反应产物2-7(19.6g,0.1mol)和三乙胺(16.6mL,0.12mol)溶于150mL二氯甲烷中，冷却至0℃，逐滴加入甲烷磺酰氯(8.5mL,0.11mol)。反应液升至室温搅拌2小时。加入50mL水淬灭反应，分出有机相，饱和食盐水洗3次(50mL×3)，无水硫酸钠干燥，浓缩得27g粗产品3-7，为黄色油状物，直接用于下一步反应。
化合物4-7的合成:
将上一步反应产物3-7(27.4g,0.1mol)和L-乳酸乙酯(23.6g,0.2mol)溶于N,N-二甲基甲酰胺150mL中，冷却至0℃，分批缓慢加入钠氢(8g,60％含量,悬浮于矿物油中,0.2mol)。反应液升至室温搅拌过夜。将反应液冷至0℃，逐滴缓慢加入20mL饱和氯化铵溶液淬灭反应，加入150mL水，乙酸乙酯萃取3次(100mL×3)，合并有机相，水洗3次(100mL×3)，饱和食盐水洗(100mL)，无水硫酸钠干燥，浓缩。粗产品硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝10:1至2:1)纯化得12g产品4-7，为浅黄色油状物，产率40％。LCMS(ESI)m/z 297.1(M+H)+,
化合物5-7的合成:
上一步反应产物4-7(12g,40mmol)溶于50mL甲醇中，置换氮气3次，加入200mg10％的钯碳干粉。反应液置换氢气3次，氢气氛中室温搅拌过夜。置换氮气3次，加入50mL二氯甲烷，过滤，二氯甲烷洗涤，滤液浓缩，得粗产品8.0g，为浅黄色油状物，直接用于下一步反应。LCMS(ESI)m/z 207.1(M+H)+,230.1(M+Na)+.
化合物6-7的合成:
上一步反应产物5-7(10.3g,50mmol)和三乙胺(8.3mL,60mmol)溶于80mL二氯甲烷中，冷却至0℃，逐滴缓慢加入甲烷磺酰氯(4.4mL,55mmol)。反应液升至室温搅拌2小时。加入50mL水淬灭反应，分出有机相，饱和食盐水洗涤3次(50mL×3)，无水硫酸钠干燥，浓缩得粗产品，为浅黄色油状物，直接用于下一步反应。
化合物7-7的合成:
上一步反应粗产物6-7(2g,7.0mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺20mL中，加入硫代乙酸钾(1.6g,14mmol)。反应液室温搅拌过夜，加入30mL水，乙酸乙酯萃取3次(50mL×3)，合并有机相，水洗3次(30mL×3)，饱和食盐水洗(50mL)，无水硫酸钠干燥，浓缩。粗产品经硅胶柱层析纯化得1.66g产品7-7，为棕色油状物，产率90％。LCMS(ESI)m/z 265.1(M+H)+,
化合物8-7的合成:
氮气保护下，将上一步反应产物7-7(1.66g,6.3mmol)溶于20mL甲醇和10mL水的混合溶剂中，加入氢氧化锂(0.76g,31.5mmol)。反应液在氮气保护下室温搅拌2小时，加入甲基硫代磺酸甲酯(0.95g,7.6mmol)。反应液继续在室温下搅拌过夜。加入50mL水，乙酸乙酯萃取3次(50mL×3)，合并有机相，饱和食盐水洗3次(50mL×3)，无水硫酸钠干燥，浓缩。粗产品经硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝1:2)纯化得0.91g产物8-7，为浅黄色油状物，产率60％。LCMS(ESI)m/z 241.0(M+H)+,263.0(M+Na)+,
化合物CE-028的合成:
将上一步产物8-7(80mg,0.34mmol)，DCC(148mg,0.72mmol)和DMAP(29mg,0.24mmol)加入一个干燥的Schlenck管中，置换氩气3次，加入1mL二氯甲烷，搅拌。将美登醇(63mg,0.12mmol)溶于4mL干燥二氯甲烷中加入。反应液室温搅拌2h，缓慢加入0.3mL水淬灭反应，加入15mL乙酸乙酯，过滤，乙酸乙酯洗涤。滤液无水硫酸钠干燥，浓缩。粗产物使用制备HPLC分离得到28mg产物CE-028，为白色固体，产率30％。LCMS(ESI)m/z 787.2(M+H)+.
1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 6.83(d,J＝10.8Hz,2H),6.44&6.42(dd,J1＝15.2Hz,J2＝10.8Hz,1H),6.22(s,1H),6.19(d,J＝11.2Hz,1H),5.57&5.55(dd,J1＝14.8Hz,J2＝8.4Hz,1H),4.93(d,J＝12.0Hz,1H),4.27(t,J＝10.8Hz,1H),4.18(q,J＝6.8Hz,1H),3.99(s,3H),3.78(t,J＝6.4Hz,3H),3.69-3.64(m,1H),3.67(s,3H),3.51(t,J＝9.2Hz,2H),3.36(s,3H),3.20(d,J＝12.8Hz,1H),3.15(s,3H),2.92(d,J＝6.4Hz,3H),2.58(t,J＝14.0Hz,1H),2.43(s,3H),2.30-2.25(m,1H),2.01(q,J＝6.8Hz,1H),1.69(s,3H),1.52(d,J＝7.2Hz,3H),1.53-1.50(m,1H),1.29(d,J＝7.2Hz,3H),0.83(s,3H).
化合物9-7的合成:
CE-028(12mg,0.015mmol)溶于0.5mL乙酸乙酯和0.5mL甲醇的混合溶剂中，将二硫代苏糖醇DTT(18mg,0.117mmol)溶于0.5mL PH＝7.5的磷酸钾缓冲溶液中加入。反应液在氮气保护下搅拌3小时。加入PH＝6的磷酸钾缓冲溶液1mL淬灭反应。乙酸乙酯萃取3次(5mL×3)，合并有机相，饱和食盐水洗涤(5mL)，无水硫酸钠干燥，浓缩。粗产品使用制备HPLC(CH3CN in H2O-0.05％TFA from 5％to 95％)纯化得到8.9mg产物9-7，为白色固体，产率80％。LCMS(ESI)m/z 741.3(M+H)+
化合物CE-034的合成:
上一步反应产物9-7(8.9mg,0.012mmol)溶于1.5mL四氢呋喃中，加入PH＝6的磷酸钾缓冲溶液1.5mL和4-(N-马来酰亚胺甲基)环己烷-1-羧酸琥珀酰亚胺酯(20mg,0.06mmol)，氮气保护下室温搅拌过夜。反应液过滤，直接由制备HPLC纯化得11mg产品CE-034，为白色固体，产率85％。LCMS(ESI)m/z 1075.4(M+H)+.
1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 6.82(d,J＝17.2Hz,2H),6.42(d,,J＝15.2Hz,2H),6.19(d,J＝14.4Hz,1H),5.56&5.54(dd,J1＝14.8Hz,J2＝8.4Hz,1H),4.91(d,J＝14.4Hz,1H),4.27(t,J＝10.8Hz,1H),4.15(q,J＝6.8Hz,1H),3.99(s,3H),3.83-3.76(m,3H),3.66(s,3H),3.50(t,J＝9.2Hz,2H),3.40(d,J＝12.0Hz,2H),3.35(s,3H),3.21-3.15(m,3H),3.15(s,3H),2.91-2.83(m,3H),2.83(s,3H),2.62-2.50(m,3H),2.25-2.14(m,3H),1.81-1.70(m,4H),1.68(s,3H),1.58-1.45(m,6H),1.29(d,J＝7.2Hz,6H),1.08(d,J＝12.0Hz,2H),0.83(s,3H).
实施例8 CE-027,035的合成路线
实验步骤
化合物2-8的合成:
化合物1-8(9.7mL,84mmol)和烯丙基溴(9.3mL,108mmol)溶于200mL乙醚中，加入氧化银(21g,92.4mmol)。将该悬浊液加热回流过夜。反应液冷却至室温，过滤，乙酸乙酯洗涤，滤液浓缩。粗产品经硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯10:1)纯化得3.9g产品2-8，为无色油状物，产率30％。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 5.97-5.87(m,1H),5.29(d,J＝16.8Hz,1H),5.20(d,J＝10.0Hz,1H),4.25-4.12(m,3H),4.04-3.92(m,2H),1.42(d,J＝6.8Hz,3H),1.29(t,J＝7.2Hz,3H).
化合物3-8的合成:
上一步反应产物2-8(3.9g,24.7mmol)溶于40mL四氢呋喃中，冷至0℃，搅拌下逐滴加入1M硼烷四氢呋喃溶液(29mL,29mmol)。反应液升至室温搅拌2小时。反应液冷却至0℃，逐滴加入3N的氢氧化钠溶液(10mL,30mmol)，缓慢加入15mL30％含量的双氧水，反应液升至室温搅拌过夜。加入200mL乙醚，分出有机相，饱和食盐水洗(50mL×3)，无水硫酸钠干燥，浓缩得1.6g粗产品3-8，为浅黄色油状物，直接用于下一步反应。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 4.27-4.17(m,2H),3.96(q,J＝7.2Hz,1H),3.89-3.71(m,2H),3.68-3.61(m,2H),2.82(s,1H),1.93-1.75(m,2H),1.40(d,J＝7.2Hz,3H),1.27(t,J＝6.8Hz,3H).
化合物4-8的合成:
上一步反应产物3-8(7.04g,40mmol)和三乙胺(6.6mL,48mmol)溶于50mL二氯甲烷中，冷却至0℃，逐滴缓慢加入甲烷磺酰氯(3.5mL,44mmol)。反应液升至室温搅拌2小时。加入50mL水淬灭反应，分出有机相，饱和食盐水洗涤3次(50mL×3)，无水硫酸钠干燥，浓缩得粗产品，为浅黄色油状物，直接用于下一步反应。LCMS(ESI)m/z 255.1(M+H)+。
化合物5-8的合成:
上一步反应粗产物4-8(2.54g,10.0mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺20mL中，加入硫代乙酸钾(2.3g,20mmol)。反应液室温搅拌过夜，加入30mL水，乙酸乙酯萃取3次(50mL×3)，合并有机相，水洗3次(30mL×3)，饱和食盐水洗(50mL)，无水硫酸钠干燥，浓缩。粗产品经硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝1:1)纯化得2.0g产品5-8，为棕色油状物，产率86％。LCMS(ESI)m/z 235.2(M+H)+,
化合物7-8的合成:
氮气保护下，将上一步反应产物5-8(1.87g,8mmol)溶于20mL甲醇和10mL水的混合溶剂中，加入氢氧化锂(0.78g,32mmol)。反应液在氮气保护下室温搅拌2小时，加入甲基硫代磺酸甲酯(1.2g,9.6mmol)。反应液继续在室温下搅拌过夜。加入50mL水，乙酸乙酯萃取3次(50mL×3)，合并有机相，饱和食盐水洗3次(50mL×3)，无水硫酸钠干燥，浓缩。粗产品经硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝1:2)纯化得1.18g产物7-8，为浅黄色油状物，产率70％。
LCMS(ESI)m/z197.0(M+H)+,211.1(M+Na)+,1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 4.02(q,J＝7.2Hz,1H),3.70-3.60(m,2H),2.82(t,J＝7.2Hz,2H),2.41(s,3H),2.05-2.01(m,2H),1.47(d,J＝6.8Hz,3H).
化合物CE-027的合成:
将上一步产物7-8(63mg,0.30mmol)，DCC(124mg,0.6mmol)和DMAP(24mg,0.2mmol)加入一个干燥的Schlenck管中，置换氩气3次，加入1mL二氯甲烷，搅拌。将美登醇(56mg,0.10mmol)溶于4mL干燥二氯甲烷中加入。反应液室温搅拌2h，缓慢加入0.3mL水淬灭反应，加入15mL乙酸乙酯，过滤，乙酸乙酯洗涤。滤液无水硫酸钠干燥，浓缩。粗产物使用制备HPLC分离得到23mg产物CE-027，为白色固体，产率30％。
LCMS(ESI)m/z 757.3(M+H)+.1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 6.96(s,1H),6.84(s,1H),6.48&6.44(dd,J1＝21.2Hz,J2＝6.8Hz,1H),6.23(s,1H),6.18(d,J＝6.8Hz,1H),5.48&5.45(dd,J1＝14.8Hz,J2＝8.4Hz,1H),4.92(d,J＝12.0Hz,1H),4.25(t,J＝13.2Hz,1H),4.13(q,J＝6.8Hz,1H),3.99(s,3H),3.65(q,J＝6.8Hz,1H),3.56-3.43(m,3H),3.36(s,3H),3.21(d,J＝12.8Hz,1H),3.17(s,3H),3.06(s,1H),2.87(d,J＝8.4Hz,1H),2.80(t,J＝7.2Hz,1H),2.58&2.55(dd,J1＝19.2Hz,J2＝8.4Hz,1H),2.37(s,3H),2.36-2.20(m,2H),2.03-1.96(m,3H),1.68(s,3H),1.47(d,J＝6.8Hz,3H),1.38-1.30(m,1H),1.30(d,J＝7.2Hz,3H),0.84(s,3H).
化合物8-8的合成:
CE-027(15mg,0.02mmol)溶于0.5mL乙酸乙酯和0.5mL甲醇的混合溶剂中，将二硫代苏糖醇DTT(18mg,0.117mmol)溶于0.5mL PH＝7.5的磷酸钾缓冲溶液中加入。反应液在氮气保护下搅拌3小时。加入PH＝6的磷酸钾缓冲溶液1mL淬灭反应。乙酸乙酯萃取3次(5mL×3)，合并有机相，饱和食盐水洗涤(5mL)，无水硫酸钠干燥，浓缩。粗产品使用制备HPLC(CH3CN in H2O-0.05％TFA from 5％to 95％)纯化得到11mg产物8-8，为白色固体，产率77％。LCMS(ESI)m/z711.3(M+H)+.
化合物CE-035的合成:
上一步反应产物8-8(9mg,0.013mmol)溶于1.5mL四氢呋喃中，加入PH＝6的磷酸钾缓冲溶液1.5mL和4-(N-马来酰亚胺甲基)环己烷-1-羧酸琥珀酰亚胺酯(22mg,0.065mmol)，氮气保护下室温搅拌过夜。反应液过滤，直接由制备HPLC纯化得9mg产品CE-035，为白色固体，产率66％。LCMS(ESI)m/z 1045.4(M+H)+.1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 6.93(d,J＝7.6Hz,1H),6.84(s,1H),6.43&6.41(dd,J1＝21.2Hz,J2＝7.2Hz,1H),6.30(s,1H),6.20&6.18(dd,J1＝13.2Hz,J2＝6.8Hz,1H),5.47&5.45(dd,J1＝13.2Hz,J2＝7.2Hz,1H),4.92-4.88(m,1H),4.26(q,J＝7.2Hz,1H),4.12(q,J＝6.8Hz,1H),3.99(s,3H),3.75(q,J＝6.8Hz,1H),3.66(q,J＝7.2Hz,1H),3.55-3.43(m,3H),3.38(d,J＝6.4Hz,3H),3.36(s,3H),3.23-3.16(m,2H),3.18(s,3H),3.10-2.94(m,1H),2.90-2.83(m,3H),2.83(s,3H),2.57-2.53(m,3H),2.27(d,J＝14.4Hz,1H),2.16(d,J＝13.6Hz,2H),1.98-1.90(m,1H),1.80-1.78(m,2H),1.68(s,3H),1.56-1.51(m,4H),1.47-1.42(m,4H),1.28(d,J＝8.4Hz,3H),1.07(q,J＝8.4Hz,3H),0.83(s,3H).
实施例9 CE-036的合成路线
实验步骤
化合物2-9的合成:
化合物1-9(9.30g,50mmol)溶于50mL四氢呋喃中，冷至0℃，搅拌下逐滴加入1M硼烷二甲硫醚复合物的四氢呋喃溶液(75mL,75mmol)。反应液升至室温搅拌过夜。反应液冷却至0℃，逐滴加入50mL甲醇淬灭反应，室温搅拌1小时，减压浓缩，剩余物经硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝1:1)纯化得4.3g产品2-9，为无色油状物，产率50％。LCMS(ESI)m/z173.1(M+H)+
化合物3-9的合成:
上一步反应产物2-9(8.6g,50mmol)和三乙胺(8.3mL,60mmol)溶于80mL二氯甲烷中，冷却至0℃，逐滴缓慢加入甲烷磺酰氯MsCl(4.3mL,55mmol)。反应液升至室温搅拌2小时。加入50mL水淬灭反应，分出有机相，饱和食盐水洗涤3次(50mL×3)，无水硫酸钠干燥，浓缩得粗产品3-9，为浅黄色油状物，直接用于下一步反应。LCMS(ESI)m/z 251.1(M+H)+,
化合物4-9的合成:
上一步反应粗产物3-9(4g,16.0mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺50mL中，加入硫代乙酸钾(3.45g,30mmol)。反应液室温搅拌过夜，加入30mL水，乙酸乙酯萃取3次(50mL×3)，合并有机相，水洗3次(30mL×3)，饱和食盐水洗(50mL)，无水硫酸钠干燥，浓缩。粗产品经硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝1:1)纯化得2.9g产品4-9，为棕色油状物，产率85％。LCMS(ESI)m/z 231.1(M+H)+,
化合物6-9的合成:
氮气保护下，将上一步反应产物4-9(2.3g,10mmol)溶于25mL甲醇和10mL水的混合溶剂中，加入氢氧化锂(0.98g,40mmol)。反应液在氮气保护下室温搅拌2小时，加入甲基硫代磺酸甲酯(1.5g,12mmol)。反应液继续在室温下搅拌过夜。加入50mL水，乙酸乙酯萃取3次(50mL×3)，合并有机相，饱和食盐水洗3次(50mL×3)，无水硫酸钠干燥，浓缩。粗产品经硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝1:2)纯化得1.43g产物6-9，为浅黄色油状物，产率65％。LCMS(ESI)m/z 221.0(M+H)+,243.1(M+Na)+.
化合物CE-031的合成:
将上一步产物6-9(53mg,0.24mmol)，DCC(99mg,0.48mmol)和DMAP(19mg,0.16mmol)加入一个干燥的Schlenck管中，置换氩气3次，加入1mL二氯甲烷，搅拌。将美登醇(45mg,0.08mmol)溶于4mL干燥二氯甲烷中加入。反应液室温搅拌过夜，缓慢加入0.5mL水淬灭反应，加入20mL乙酸乙酯，过滤，乙酸乙酯洗涤。滤液无水硫酸钠干燥，浓缩。粗产物使用制备HPLC分离得到18mg产物CE-031，为白色固体，产率30％.
LCMS(ESI)m/z 767.3.0(M+H)+,1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 6.83(d,J＝6.8Hz,2H),6.46&6.44(dd,J1＝15.6Hz,J2＝10.8Hz,1H),6.35(s,1H),6.14(d,J＝10.8Hz,1H),5.44&5.42(dd,J1＝16.0Hz,J2＝8.4Hz,1H),4.86&4.85(dd,J1＝12.0Hz,J2＝3.2Hz,1H),4.26(t,J＝10.4Hz,1H),3.99(s,3H),3.51(s,1H),3.48(d,J＝3.6Hz,1H),3.37(s,3H),3.23(d,J＝12.8Hz,1H),3.15(s,3H),2.90(d,J＝10.8Hz,1H),2.75-2.63(m,2H),2.55(t,J＝13.6Hz,1H),2.42(s,3H),2.34-2.02(m,5H),1.84-1.65(m,4H),1.70(s,3H),1.54-1.44(m,3H),1.47(d,J＝6.8Hz,3H),1.29-1.09(m,3H),0.84(s,3H).
化合物8-9的合成:
CE-031(15mg,0.02mmol)溶于0.5mL乙酸乙酯和0.5mL甲醇的混合溶剂中，将二硫代苏糖醇DTT(18mg,0.117mmol)溶于0.5mL PH＝7.5的磷酸钾缓冲溶液中加入。反应液在氮气保护下搅拌3小时。加入PH＝6的磷酸钾缓冲溶液1mL淬灭反应。乙酸乙酯萃取3次(5mL×3)，合并有机相，饱和食盐水洗涤(5mL)，无水硫酸钠干燥，浓缩。粗产品使用制备HPLC(CH3CN in H2O-0.05％TFA from 5％to 95％)纯化得到11mg产物8-9，为白色固体，产率78％。LCMS(ESI)m/z 721.3(M+H)+.
化合物CE-036的合成:
上一步反应产物8-9(9.0mg,0.013mmol)溶于1.5mL四氢呋喃中，加入PH＝6的磷酸钾缓冲溶液1.5mL和4-(N-马来酰亚胺甲基)环己烷-1-羧酸琥珀酰亚胺酯(22mg,0.065mmol)，氮气保护下室温搅拌过夜。反应液过滤，直接由制备HPLC纯化得9.0mg产品CE-036，为白色固体，产率64％。
LCMS(ESI)m/z 1055.4(M+H)+.1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 6.83(d,J＝16.0Hz,2H),6.47-6.39(m,2H),6.15&6.13(dd,J1＝10.0Hz,J2＝4.8Hz,1H),5.43&5.41(dd,J1＝15.2Hz,J2＝8.8Hz,1H),4.86(t,J＝9.2Hz,1H),4.26(t,J＝11.2Hz,1H),3.99(s,3H),3.69(d,J＝8.4Hz,1H),3.50-3.36(m,4H),3.37(s,3H),3.23(d,J＝12.8Hz,1H),3.14(s,3H),2.90-2.77(m,6H),2.58-2.51(m,3H),2.29(q,J＝11.2Hz,1H),2.22-1.90(m,10H),1.85(s,3H),1.70-1.50(m,8H),1.27(d,J＝6.8Hz,3H),1.20-1.00(m,5H),0.83(s,3H).
实施例10 CE-026,037的合成路线
实验步骤
化合物2-10的合成:
250mL茄形瓶中加入化合物1-10(37.2g,0.6mol)，搅拌下加入氢氧化钾KOH(11.2g,0.2mol)。将该悬浊液加热至90℃，搅拌至氢氧化钾完全溶解。苄溴(34g,23.6mL,0.2mol)逐滴缓慢加入。反应液升温至110℃，搅拌过夜。反应液冷却至室温，加入800mL水，乙酸乙酯萃取3次(150mL×3)，合并有机相，水洗3次(150mL×3)，饱和食盐水洗(150mL)，无水硫酸钠干燥，浓缩。粗产品经硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯10:1至3:1)纯化得22g产品2-10，为无色油状物，产率72％。LCMS(ESI)m/z153.1(M+H)+,化合物3-10的合成:
上一步反应产物2-10(15.2g,0.1mol)和三乙胺(16.6mL,0.12mol)溶于150mL二氯甲烷中，冷却至0℃，逐滴加入甲烷磺酰氯(8.5mL,0.11mol)。反应液升至室温搅拌2小时。加入50mL水淬灭反应，分出有机相，饱和食盐水洗3次(50mL×3)，无水硫酸钠干燥，浓缩得23g粗产品3-10，为黄色油状物，直接用于下一步反应。
化合物4-10的合成:
将上一步反应产物3-10(23g,0.1mol)和L-乳酸乙酯(23.6g,0.2mol)溶于N,N-二甲基甲酰胺150mL中，冷却至0℃，分批缓慢加入钠氢(8g,60％含量,悬浮于矿物油中,0.2mol)。反应液升至室温搅拌过夜。将反应液冷至0℃，逐滴缓慢加入20mL饱和氯化铵溶液淬灭反应，加入150mL水，乙酸乙酯萃取3次(100mL×3)，合并有机相，水洗3次(100mL×3)，饱和食盐水洗(100mL)，无水硫酸钠干燥，浓缩。粗产品硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝10:1至2:1)纯化得11.3g产品4-10，为浅黄色油状物，产率45％。LCMS(ESI)m/z 253.1(M+H)+。
化合物5-10的合成:
上一步反应产物4-10(11.3g,45mmol)溶于50mL甲醇中，置换氮气3次，加入200mg10％的钯碳干粉。反应液置换氢气3次，氢气氛中室温搅拌过夜。置换氮气3次，加入50mL二氯甲烷，过滤，二氯甲烷洗涤，滤液浓缩，得粗产品7.2g，为浅黄色油状物，直接用于下一步反应。LCMS(ESI)m/z164.1(M+H)+,186.1(M+Na)+.
化合物6-10的合成:
上一步反应产物5-10(6.5g,40mmol)和三乙胺(6.6mL,48mmol)溶于50mL二氯甲烷中，冷却至0℃，逐滴缓慢加入甲烷磺酰氯(3.5mL,44mmol)。反应液升至室温搅拌2小时。加入50mL水淬灭反应，分出有机相，饱和食盐水洗涤3次(50mL×3)，无水硫酸钠干燥，浓缩得粗产品，为浅黄色油状物，直接用于下一步反应。
化合物7-10的合成:
上一步反应粗产物6-10(2g,7.0mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺20mL中，加入硫代乙酸钾(1.6g,14mmol)。反应液室温搅拌过夜，加入30mL水，乙酸乙酯萃取3次(50mL×3)，合并有机相，水洗3次(30mL×3)，饱和食盐水洗(50mL)，无水硫酸钠干燥，浓缩。粗产品经硅胶柱层析纯化得2.0g产品7-10，为棕色油状物，产率90％。LCMS(ESI)m/z 221.1(M+H)+。
化合物9-10的合成:
氮气保护下，将上一步反应产物7-10(1.76g,8mmol)溶于20mL甲醇和10mL水的混合溶剂中，加入氢氧化锂(0.78g,32mmol)。反应液在氮气保护下室温搅拌2小时，加入甲基硫代磺酸甲酯(1.2g,9.6mmol)。反应液继续在室温下搅拌过夜。加入50mL水，乙酸乙酯萃取3次(50mL×3)，合并有机相，饱和食盐水洗3次(50mL×3)，无水硫酸钠干燥，浓缩。粗产品经硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝1:2)纯化得1.01g产物9-10，为浅黄色油状物，产率65％。LCMS(ESI)m/z197.0(M+H)+，219.0(M+Na)+.
化合物CE-026的合成:
将上一步产物9-10(65mg,0.33mmol)，DCC(136mg,0.66mmol)和DMAP(27mg,0.22mmol)加入一个干燥的Schlenck管中，置换氩气3次，加入1mL二氯甲烷，搅拌。将美登醇(62mg,0.11mmol)溶于4mL干燥二氯甲烷中加入。反应液室温搅拌2h，缓慢加入0.3mL水淬灭反应，加入15mL乙酸乙酯，过滤，乙酸乙酯洗涤。滤液无水硫酸钠干燥，浓缩。粗产物使用制备HPLC分离得到29mg产物CE-026，为白色固体，产率35％。
LCMS(ESI)m/z 744.3(M+H)+.1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 6.83(d,J＝8.0Hz,2H),6.46&6.44(dd,J1＝15.2Hz,J2＝10.8Hz,1H),6.21(s,1H),6.18(d,J＝11.6Hz,1H),5.55&5.53(dd,J1＝15.2Hz,J2＝9.2Hz,1H),4.93&4.92(dd,J1＝12.0Hz,J2＝2.8Hz,1H),4.28(t,J＝10.4Hz,1H),4.10(q,J＝9.2Hz,1H),3.99(s,3H),3.96-3.92(m,1H),3.74-3.67(m,1H),3.53(d,J＝4.8Hz,1H),3.50(s,1H),3.36(s,3H),3.29(s,1H),3.19(d,J＝13.6Hz,1H),3.16(s,3H),3.04(s,1H),2.94-2.89(m,3H),2.59(t,J＝12.0Hz,1H),2.44(s,3H),2.25-2.21(m,1H),2.05-2.00(m,1H),1.70(s,3H),1.54-1.44(m,1H),1.52(d,J＝7.2Hz,3H),1.40(d,J＝6.8Hz,1H),1.30(d,J＝7.2Hz,3H),1.29-1.09(m,2H),0.83(s,3H).
化合物10-10的合成:
CE-026(15mg,0.02mmol)溶于0.5mL乙酸乙酯和0.5mL甲醇的混合溶剂中，将二硫代苏糖醇DTT(18mg,0.117mmol)溶于0.5mL PH＝7.5的磷酸钾缓冲溶液中加入。反应液在氮气保护下搅拌3小时。加入PH＝6.0的磷酸钾缓冲溶液1mL淬灭反应。乙酸乙酯萃取3次(5mL×3)，合并有机相，饱和食盐水洗涤(5mL)，无水硫酸钠干燥，浓缩。粗产品使用制备HPLC(CH3CN in H2O-0.05％TFA from 5％to 95％)纯化得到12mg产物10-10，为白色固体，产率86％。LCMS(ESI)m/z697.3(M+H)+.
化合物CE-037的合成:
上一步反应产物10-10(9mg,0.013mmol)溶于1.5mL四氢呋喃中，加入PH＝6的磷酸钾缓冲溶液1.5mL和4-(N-马来酰亚胺甲基)环己烷-1-羧酸琥珀酰亚胺酯(22mg,0.065mmol)，氮气保护下室温搅拌过夜。反应液过滤，直接由制备HPLC纯化得12mg产品CE-037，为白色固体，产率78％。
LCMS(ESI)m/z 1031.4(M+H)+.1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 6.81(d,J＝8.0Hz,2H),6.46&6.44(dd,J1＝15.2Hz,J2＝10.8Hz,1H),6.44(s,1H),6.18(d,J＝7.6Hz,1H),5.59-5.51(m,1H),4.97(d,J＝12.4Hz,1H),4.26(q,J＝10.4Hz,1H),4.13(t,J＝6.4Hz,1H),3.99(s,3H),3.99-3.96(m,2H),3.53-3.47(m,2H),3.40-3.37(m,2H),3.35(d,J＝13.6Hz,3H),3.35-3.30(m,2H),3.21-3.15(m,2H),3.13(s,3H),2.92-2.82(m,2H),2.82(s,3H),2.60-2.58(m,3H),2.25-2.15(m,3H),1.70(s,3H),1.70-1.60(m,2H),1.54-1.44(m,3H),1.52(d,J＝7.2Hz,3H),1.30-1.26(m,6H),1.19-1.09(m,2H),0.83(s,3H).
实施例11 CE-039,040,043的合成路线
实验步骤
化合物2-11的合成
马来酸酐(5g,51mmol,1eq)和β-氨基丙酸(4.54g,51mmol,1eq)溶于80mL乙酸中。氮气保护下反应液加热回流搅拌过夜。反应液冷却到室温，减压移除乙酸，剩余物经硅胶柱层析(二氯甲烷)纯化得3.6g产品2-11，为白色粉末，产率42％。LCMS(ESI)m/z170.1(M+H)+.
化合物CE-L-055的合成
将上一步反应产物2-11(3.6g,21.4mmol)和EDC-HCl(4.93g,25.7mmol)溶于50mL二氯甲烷中，加入HOSu(2.96g,25.7mol)。反应液室温搅拌2小时。加入50mL水，乙酸乙酯萃取3次(50mL×3)，合并有机相，饱和食盐水洗涤3次(50mL×3)，无水硫酸钠干燥，浓缩。粗产物使用硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝1:3)得产物4.55g，为黄色油状物，产率80％。LCMS(ESI)m/z267.1(M+H)+.
化合物4-11的合成
化合物3-11(4.55g,18.7mmol)溶于10mL水中，加入碳酸氢钠(1.71g,20.4mmol)，搅拌。将CE-L-055(4.55g,17mmol)溶于30mL乙二醇二甲醚中逐滴缓慢加入。反应液室温搅拌2小时。加入50mL水，用1M稀盐酸调PH3～4。乙酸乙酯萃取10次(50mL×10)，合并有机相，无水硫酸钠干燥，浓缩得粗产品，直接用于下一步反应。LCMS(ESI)m/z417.2(M+H)+.
化合物CE-L-075的合成
将上一步反应产物4-11(1.0g,2.4mmol)和EDC-HCl(0.55g,2.88mmol)溶于25mL二氯甲烷中，加入HOSu(0.33g,2.88mmol)。反应液室温搅拌2小时。加入50mL水，乙酸乙酯萃取3次(50mL×3)，合并有机相，饱和食盐水洗涤3次(50mL×3)，无水硫酸钠干燥，浓缩。粗产物使用制备HPLC纯化得产物330mg，为无色油状物，产率27％。LCMS(ESI)m/z514.2(M+H)+.
化合物CE-039的合成
化合物10-10(20mg,0.03mmol)溶于2mL N,N-二甲基甲酰胺中，加入PH＝6的磷酸钾缓冲溶液0.1mL和CE-L-075(77mg,0.15mmol)，氮气保护下室温搅拌过夜。反应液过滤，直接由制备HPLC纯化得18mg产品CE-040，为白色固体，产率50％。
LCMS(ESI)m/z1232.3(M+H)+,627.8(M/2+H)+.1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm7.13(br,1H),6.77(s,1H),6.72(s,1H),6.70(s,1H),6.38&6.36(dd,J1＝12.4Hz,J2＝8.8Hz,1H),6.12(d,J＝9.2Hz,1H),5.55-5.48(m,1H),4.92(t,J＝8.4Hz,1H),4.25(q,J＝7.2Hz,1H),4.07(t,J＝6.8Hz,1H),3.92(s,3H),3.88-3.76(m,4H),3.65(s,14H),3.58-3.42(m,7H),3.35(s,3H),3.22-3.18(m,4H),3.15(s,3H),3.00-2.88(m,4H),2.85(s,3H),2.56(t,J＝7.6Hz,1H),2.50(t,J＝7.2Hz,2H),2.16(d,J＝12.8Hz,1H),1.63(s,3H),1.44(d,J＝8.4Hz,3H),1.29(d,J＝8.4Hz,3H),1.23-1.18(m,6H),0.77(s,3H).
化合物CE-040的合成
化合物9-7(20mg,0.027mmol)溶于2mL N,N-二甲基甲酰胺中，加入PH＝6的磷酸钾缓冲溶液0.1mL和CE-L-075(70mg,0.14mmol)，氮气保护下室温搅拌过夜。反应液过滤，直接由制备HPLC纯化得15mg产品CE-040，为白色固体，产率44％。
LCMS(ESI)m/z627.8(M/2+H)+.1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 6.85(s,1H),6.79(s,1H),6.44(t,J＝12.8Hz,1H),6.19(t,J＝9.2Hz,1H),5.60-5.55(m,1H),4.92(t,J＝8.4Hz,1H),4.29(q,J＝7.6Hz,1H),4.14(t,J＝6.8Hz,1H),3.99(s,3H),3.87-3.76(m,6H),3.66(s,16H),3.55-3.42(m,9H),3.35(s,3H),3.20(t,J＝10.8Hz,2H),3.15(s,3H),2.92(t,J＝6.8Hz,2H),2.90-2.85(m,6H),2.60-2.50(m,4H),2.30-2.20(m,2H),1.69(s,3H),1.50(d,J＝8.4Hz,3H),1.28(d,J＝8.4Hz,6H),0.83(s,3H).
化合物CE-043的合成
化合物8-8(21mg,0.03mmol)溶于2mL N,N-二甲基甲酰胺中，加入PH＝6的磷酸钾缓冲溶液0.1mL和CE-L-075(77mg,0.15mmol)，氮气保护下室温搅拌过夜。反应液过滤，直接由制备HPLC纯化得18mg产品CE-043，为白色固体，产率49％。
LCMS(ESI)m/z 1246.4(M+Na)+,612.8(M/2+Na)+,.1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm6.84(s,1H),6.79(s,1H),6.44(t,J＝8.8Hz,1H),6.18(d,J＝8.8Hz,1H),5.59-5.56(m,1H),4.95(t,J＝9.2Hz,1H),4.32(q,J＝7.6Hz,1H),4.05(q,J＝6.8Hz,1H),3.99(s,3H),3.88-3.76(m,6H),3.65(s,16H),3.58-3.42(m,8H),3.35(s,3H),3.22-3.18(m,2H),3.15(s,3H),3.00-2.88(m,6H),2.85(s,3H),2.56(t,J＝7.6Hz,2H),2.50(t,J＝7.2Hz,2H),2.16(d,J＝12.8Hz,1H),1.98-1.90(m,2H),1.69(s,3H),1.48(d,J＝8.4Hz,3H),1.29(d,J＝8.4Hz,3H),0.83(s,3H).
实施例12 XDCE-M-001、XDCE-M-002的合成路线
实验步骤
化合物2-12的合成
化合物1-12(1.77g,10mmol)溶于5mL水中，加入碳酸氢钠(0.92g,11mmol)，搅拌。将CE-L-055(2.51g,9.5mmol)溶于15mL乙二醇二甲醚中逐滴缓慢加入。反应液室温搅拌2小时。LCMS显示反应完全后直接用反相柱纯化(TFA0.05％水溶液)得产物1.0g，为无色油状物，产率48％。LCMS(ESI)m/z 329.1(M+H)+.
化合物CE-L-071的合成
将上一步反应产物2-12(1.0g,3.0mmol)和EDC-HCl(0.69g,3.6mmol)溶于25mL二氯甲烷中，加入HOSu(0.41g,3.6mmol)。反应液室温搅拌2小时。LCMS显示反应完全后，浓缩，粗产物用反相柱纯化(TFA0.05％水溶液)得产物0.32g。为无色油状物，产率25％。LCMS(ESI)m/z 426.3(M+H)+.
化合物4-12的合成
化合物3-12(2.21g,10mmol)溶于5mL水中，加入碳酸氢钠(0.94g,11mmol)，搅拌。将CE-L-055(2.52g,9.5mmol)溶于15mL乙二醇二甲醚中逐滴缓慢加入。反应液室温搅拌2小时。LCMS显示反应完全后直接用反相柱纯化(TFA0.05％水溶液)得产物1.5g，为无色油状物，产率42％。LCMS(ESI)m/z 373.2(M+H)+.
化合物CE-L-073的合成
将上一步反应产物4-12(1.0g,2.7mmol)和EDC-HCl(0.62g,3.24mmol)溶于25mL二氯甲烷中，加入HOSu(0.37g,3.24mmol)。反应液室温搅拌2小时。LCMS显示反应完全后，浓缩，粗产物用反相柱纯化(TFA0.05％水溶液)得产物0.31g。为无色油状物，产率25％。LCMS(ESI)m/z 470.2(M+H)+.
化合物XDCE-M-001的合成
化合物9-7(40mg,0.054mmol)溶于4mL N,N-二甲基甲酰胺中，加入PH＝6的磷酸钾缓冲溶液0.2mL和CE-L-071(115mg,0.27mmol)，氮气保护下室温搅拌过夜。反应液过滤，直接由制备HPLC纯化得37mg产品XDCE-M-001，为白色固体，产率59％。
LCMS(ESI)m/z627.8(M/2+H)+.1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 6.87(br,1H),6.85(s,1H),6.78(s,1H),6.74(br,1H),6.41(t,J＝13.2Hz,1H),6.19(d,J＝10.8Hz,1H),5.61-5.53(m,1H),4.92(d,J＝11.2Hz,1H),4.30(q,J＝10.4Hz,1H),4.15(q,J＝7.6Hz,1H),3.99(s,3H),4.04-3.96(m,1H),3.87-3.76(m,6H),3.70-3.60(m,6H),3.56-3.42(m,9H),3.36(s,3H),3.20(d,J＝10.8Hz,2H),3.15(s,3H),2.92-2.85(m,8H),2.62-2.50(m,4H),2.23(d,J＝14.4Hz,1H),1.69(s,3H),1.51-1.48(m,3H),1.30-1.25(m,6H),0.83(s,3H).
化合物XDCE-M-002的合成
化合物9-7(40mg,0.054mmol)溶于4mL N,N-二甲基甲酰胺中，加入PH＝6的磷酸钾缓冲溶液0.2mL和CE-L-073(127mg,0.27mmol)，氮气保护下室温搅拌过夜。直接由制备HPLC纯化得34mg产品XDCE-M-002，为白色固体，产率52％。
LCMS(ESI)m/z627.8(M/2+H)+.1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 7.08(br,1H),6.86-6.81(m,1H),6.84(s,1H),6.79(s,1H),6.44(dd,J1＝15.2Hz,J2＝10.8Hz,1H),6.19(d,J＝10.8Hz,1H),5.60-5.55(m,1H),4.92(t,J＝10.8Hz,1H),4.29(q,J＝7.6Hz,1H),4.13(t,J＝6.8Hz,1H),4.05-3.95(m,1H),3.99(s,3H),3.87-3.76(m,6H),3.70-3.60(m,10H),3.56-3.42(m,10H),3.36(s,3H),3.20(d,J＝10.8Hz,2H),3.15(s,3H),2.92-2.85(m,8H),2.62-2.50(m,4H),2.23(d,J＝14.4Hz,1H),1.69(s,3H),1.51-1.48(m,3H),1.30-1.25(m,6H),0.83(s,3H).
实施例13 CE-045的合成路线
实验步骤
化合物2-13的合成
500mL茄形瓶中加入化合物1-13(135g,0.9mol)，搅拌下加入氢氧化钾(16.8g,0.3mol)。将该悬浊液加热至90℃，搅拌至氢氧化钾完全溶解。苄溴(35.6mL,0.3mol)逐滴缓慢加入。反应液升温至110℃，搅拌过夜。反应液冷却至室温，加入1000mL水，乙酸乙酯萃取3次(200mL×3)，合并有机相，水洗3次(150mL×3)，饱和食盐水洗(150mL)，无水硫酸钠干燥，浓缩。粗产品经硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯10:1至1:1)纯化得50g产品2-13，为浅黄色油状物，产率69％。LCMS(ESI)m/z 240.3(M+H)+.
化合物3-13的合成
上一步反应产物2-13(24g,0.1mol)和三乙胺(16.6mL,0.12mol)溶于150mL二氯甲烷中，冷却至0℃，逐滴加入甲烷磺酰氯(8.5mL,0.11mol)。反应液升至室温搅拌2小时。加入50mL水淬灭反应，分出有机相，饱和食盐水洗3次(50mL×3)，无水硫酸钠干燥，浓缩得30g粗产品3-13，为黄色油状物，直接用于下一步反应。
化合物4-13的合成
将上一步反应产物3-13(15.9g,0.05mol)和L-乳酸乙酯(11.8g,0.1mol)溶于N,N-二甲基甲酰胺80mL中，冷却至0℃，分批缓慢加入钠氢(4g,60％含量,悬浮于矿物油中,0.1mol)。反应液升至室温搅拌过夜。将反应液冷至0℃，逐滴缓慢加入20mL饱和氯化铵溶液淬灭反应，加入150mL水，乙酸乙酯萃取3次(100mL×3)，合并有机相，水洗3次(50mL×3)，饱和食盐水洗(50mL)，无水硫酸钠干燥，浓缩。粗产品硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝10:1至2:1)纯化得6.5g产品4-13，为浅黄色油状物，产率38％。LCMS(ESI)m/z 341.7(M+H)+,
化合物5-13的合成
上一步反应产物4-13(13.6g,40mmol)溶于50mL甲醇中，置换氮气3次，加入200mg10％的钯碳干粉。反应液置换氢气3次，氢气氛中室温搅拌过夜。置换氮气3次，加入50mL二氯甲烷，过滤，二氯甲烷洗涤，滤液浓缩，得粗产品10.0g，为浅黄色油状物，直接用于下一步反应。LCMS(ESI)m/z 251.1(M+H)+。
化合物6-13的合成
上一步反应产物5-13(2.5g,10mmol)溶于30mL丙酮中，冰水浴冷却至0℃，逐滴缓慢加入Jones试剂(3g,30mmol),约10分钟滴加完毕。反应液升至室温搅拌过夜，加入2mL异丙醇淬灭反应，减压移除丙酮，剩余物二氯甲烷萃取3次(50mL×3)，合并有机相，无水硫酸钠干燥，浓缩得粗产品，为浅黄色油状物，直接用于下一步反应。LCMS(ESI)m/z 265.7(M+H)+。
化合物8-13的合成
氮气保护下，将上一步反应产物6-13(264mg,1mmol)溶于10mL甲苯中，升温至回流，逐滴缓慢加入7(264mg,1mmol)，反应液回流过夜。将反应液冷却至室温，减压浓缩，粗产品硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝2:1)纯化得240mg产品8-13，为无色油状物，产率75％。LCMS(ESI)m/z 321.7(M+H)+,1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 4.21(q,J＝6.8Hz,2H),4.03(s,2H),3.76-3.67(m,8H),3.61-3.58(m,1H),1.48(s,9H),1.41(d,J＝5.6Hz,3H),1.29(t,J＝6.0Hz,3H).
化合物9-13的合成
上一步反应产物8-13(1.83g,5.7mmol)溶于50mL甲醇和20mL水中，加入K2CO3(4g,28.7mmol)。反应液室温搅拌3h。待原料反应完全后减压移除甲醇，加入50mL水，缓慢滴加1NHCl调节PH值至4-5，乙酸乙酯萃取3次(50mL×3)，合并有机相，饱和食盐水洗(50mL)，无水硫酸钠干燥，浓缩，粗产品硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝1：1)纯化得1.0g产品9-13，为浅黄色油状物，产率60％。LCMS(ESI)m/z 293.1(M+H)+。
化合物10-13的合成
将上一步产物9-13(105mg,0.36mmol)，DCC(148mg,0.72mmol)和DMAP(29mg,0.24mmol)加入一个干燥的Schlenck管中，置换氩气3次，加入1mL二氯甲烷，搅拌。将美登醇(63mg,0.12mmol)溶于2mL干燥二氯甲烷中加入。反应液室温搅拌2h，缓慢加入0.3mL水淬灭反应，加入15mL乙酸乙酯，过滤，乙酸乙酯洗涤。滤液无水硫酸钠干燥，浓缩。粗产物使用制备HPLC分离得到28mg产物10-13，为白色固体，产率30％。LCMS(ESI)m/z 838.2(M+H)+.
化合物11-13的合成
将上一步反应产物10-13(28mg,0.03mmol)溶于28mL二氯甲烷中，缓慢加入三氟醋酸(4.2ml)。反应室温搅拌2h。待原料反应完后减压浓缩得粗产品11-13 18.3mg，为浅黄色油状物，直接用于下一步反应。
化合物CE-045的合成
将上一步反应产物11-13(18.3mg,0.023mmol)溶于2mL DMF中，加入HOSu(13.2mg,0.11mmol)和EDCI(21mg,0.11mmol)。反应室温搅拌2h。直接由制备HPLC纯化得2mg产品CE-045，为白色固体，产率10％。LCMS(ESI)m/z 880.3(M+H)+.
实施例14 CE-047、CE-050的合成路线
实验步骤
化合物1-14的合成
5-13(2.5g,10mmol)和三乙胺(1.7mL,12mmol)溶于30mL二氯甲烷中，冷却至0℃，逐滴加入甲烷磺酰氯(0.85mL,11mmol)。反应液升至室温搅拌2小时。加入30mL水淬灭反应，分出有机相，饱和食盐水洗3次(30mL×3)，无水硫酸钠干燥，浓缩得3.2g粗产品1-14，为浅黄色油状物，直接用于下一步反应。
化合物2-14的合成
上一步反应产物1-14(3.2g,10mmol)溶于20mL N,N-二甲基甲酰胺中，加入叠氮化钠(715mg,11mmol)。反应液升至50℃搅拌过夜。将反应液冷却至室温，加入50mL水淬灭反应，乙酸乙酯萃取3次(30mL×3)，合并有机相，饱和食盐水洗3次(30mL×3)，无水硫酸钠干燥，浓缩得粗产品，硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝2:1)纯化得2.2g产品2-14，为浅黄色油状物，产率80％。
化合物3-14的合成
上一步反应产物2-14(2.2g,8mmol)溶于40mL四氢呋喃和5mL水中，加入三苯基磷(2.62g,10mmol)。反应液室温搅拌过夜。减压移除四氢呋喃，加入1N稀盐酸20mL，乙酸乙酯洗涤3次(20mL×3)，水相冻干得1.6g粗产品3-14，为浅黄色油状物。LCMS(ESI)m/z 250.7(M+H)+.
化合物5-14的合成
上一步反应产物3-14(1.25g,5mmol)溶于20mL甲醇和5mL水中，加入一水合氢氧化锂(840mg,20mmol)。反应液室温搅拌3h。待原料反应完全后减压移除甲醇，加入饱和碳酸氢钠溶液5mL和30mL冰水浴冷却至0℃，加入Boc2O(1.3g,6mmol)，升至室温搅拌2h。反应液水洗两次(20mL×2)，合并水相加入0.5M KHSO4溶液淬灭反应调节PH＝3-4，二氯甲烷萃取3次(20mL×3)，合并有机相，无水硫酸钠干燥，浓缩，剩余物硅胶柱层析(二氯甲烷/甲醇＝30:1)纯化得950mg产品5-14，为浅黄色油状物，产率59％。LCMS(ESI)m/z 322.3(M+H)+.
化合物6-14的合成
将上一步产物5-14(77mg,0.24mmol)，DCC(132mg,0.64mmol)和DMAP(20mg,0.16mmol)加入一个干燥的Schlenck管中，置换氩气3次，加入1mL二氯甲烷，搅拌。将美登醇(45mg,0.08mmol)溶于3mL干燥二氯甲烷中加入。反应液室温搅拌过夜，缓慢加入0.3mL水淬灭反应并搅拌15分钟，加入15mL乙酸乙酯，过滤，乙酸乙酯洗涤。滤液无水硫酸钠干燥，浓缩。粗产物使用制备HPLC分离得到32mg产物6-14，为浅黄色固体，产率46％。LCMS(ESI)m/z868.7(M+H)+.
化合物7-14的合成
上一步反应产物6-14(17mg,0.02mmol)溶于4mL干燥的二氯甲烷中，冰水浴冷却至0℃，逐滴缓慢加入0.4mL三氟乙酸，逐步升至室温搅拌1小时，LCMS检测原料已完全转化，常温减压移除二氯甲烷和三氟乙酸得15mg粗产品7-14，为黄色固体，直接用于下一步反应。LCMS(ESI)m/z 768.7(M+H)+.
化合物CE-047的合成
上一步反应粗产物7-14(15mg,0.02mmol)悬浮于2mL饱和碳酸氢钠溶液中，加入化合物8(15.5mg,0.1mmol)，反应液室温搅拌过夜。二氯甲烷萃取3次(20mL×3)，合并有机相，饱和食盐水洗3次(20mL×3)，无水硫酸钠干燥，浓缩得粗产品，制备HPLC纯化得2.7mg产品CE-047，为浅黄色固体，产率16％。
LCMS(ESI)m/z 848.7(M+H)+.
1H NMR(400MHz,MeOD)δppm 7.06(s,1H),6.81(s,1H),6.55&6.53(dd,J1＝12.4Hz,J2＝8.8Hz,1H),6.38(d,J＝8.8Hz,1H),6.21-6.15(m,2H),5.51&5.49(dd,J1＝12.4Hz,J2＝7.2Hz,1H),4.73(d,J＝8.0Hz,1H),4.15-4.18(m,2H),3.88(s,3H),3.72-3.64(m,1H),3.62-3.53(m,10H),3.49-3.46(m,2H),3.41(t,J＝4.8Hz,2H),3.26(s,3H),3.04(s,3H),2.69(d,J＝8.0Hz,1H),2.56(t,J＝10.0Hz,1H),2.11(d,J＝10.0Hz,1H),1.64(s,3H),1.50-1.42(m,2H),1.40(d,J＝5.6Hz,3H),1.14(d,J＝5.6Hz,3H),0.78(s,3H).
化合物CE-050的合成
上一步反应粗产品7-14(15mg,0.02mmol)和化合物9(14mg,0.06mmol)溶于2mL乙二醇二甲醚和2mL水的混合溶剂中，加入0.2mL饱和碳酸氢钠溶液。反应液室温搅拌过夜，二氯甲烷萃取(20mL×3)，合并有机相，无水硫酸钠干燥，浓缩，粗产品由制备HPLC纯化得6mg产品CE-050，为浅黄色固体，产率34％。LCMS(ESI)m/z 910.2(M+Na)+.
1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 7.24(br,1H),6.84(s,1H),6.78(s,1H),6.44(s,1H),6.44&6.42(dd,J1＝12.0Hz,J2＝8.0Hz,1H),6.17(d,J＝8.8Hz,1H),5.58&5.56(dd,J1＝12.4Hz,J2＝7.2Hz,1H),4.93(d,J＝8.0Hz,1H),4.30(t,J＝8.8Hz,1H),4.19-4.11(m,1H),4.09(s,2H),3.99(s,3H),3.80-3.74(m,1H),3.70-3.60(m,10H),3.52-3.46(m,4H),3.35(s,3H),3.20(d,J＝10.4Hz,1H),3.16(s,3H),2.89(d,J＝8.0Hz,1H),2.59(t,J＝10.0Hz,1H),2.23(d,J＝10.0Hz,1H),1.68(s,3H),1.66(d,J＝10.4Hz,1H),1.51(d,J＝5.6Hz,3H),1.29(d,J＝5.6Hz,3H),0.83(s,3H).
实施例15 CE-046、CE-052a的合成路线
实验步骤
化合物2-15的合成
250mL茄形瓶中加入化合物1-15(70.5g,0.25mol)，搅拌下加入氢氧化钾(5.6g,0.1mol)。将该悬浊液加热至90℃，搅拌至氢氧化钾完全溶解。苄溴(17g,11.8mL,0.1mol)逐滴缓慢加入。反应液升温至110℃，搅拌过夜。反应液冷却至室温，加入800mL水，乙酸乙酯萃取3次(150mL×3)，合并有机相，水洗3次(150mL×3)，饱和食盐水洗(150mL)，无水硫酸钠干燥，浓缩。粗产品经硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯10:1至1:1)纯化得21g产品2-15，为无色油状物，产率57％。LCMS(ESI)m/z 373.3(M+H)+.
化合物3-15的合成
上一步反应产物2-15(14.9g,0.04mol)和三乙胺(6.64mL,0.048mol)溶于80mL二氯甲烷中，冷却至0℃，逐滴加入甲烷磺酰氯(3.4mL,0.044mol)。反应液升至室温搅拌2小时。加入50mL水淬灭反应，分出有机相，饱和食盐水洗3次(50mL×3)，无水硫酸钠干燥，浓缩得18g粗产品3-15，为黄色油状物，直接用于下一步反应。
化合物4-15的合成
将上一步反应产物3-15(18g,0.04mol)和L-乳酸乙酯(9.44g,0.08mol)溶于N,N-二甲基甲酰胺100mL中，冷却至0℃，分批缓慢加入钠氢(3.2g,60％含量,悬浮于矿物油中,0.08mol)。反应液升至室温搅拌4h。将反应液冷至0℃，逐滴缓慢加入10mL饱和氯化铵溶液淬灭反应，加入100mL水，乙酸乙酯萃取3次(100mL×3)，合并有机相，水洗3次(100mL×3)，饱和食盐水洗(100mL)，无水硫酸钠干燥，浓缩。粗产品硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝10:1至1:1)纯化得5g产品4-15，为浅黄色油状物，产率26％。LCMS(ESI)m/z 473.1(M+H)+,
化合物5-15的合成
上一步反应产物4-15(4.7g,10mmol)溶于50mL甲醇中，置换氮气3次，加入200mg10％的钯碳干粉。反应液置换氢气3次，氢气氛中室温搅拌过夜。置换氮气3次，加入50mL二氯甲烷，过滤，二氯甲烷洗涤，滤液浓缩，得粗产品3.8g，为浅黄色油状物，直接用于下一步反应。LCMS(ESI)m/z 383.1(M+H)+.
化合物6-15的合成
上一步反应产物5-15(3.8g,10mmol)和三乙胺(1.7mL,12mmol)溶于30mL二氯甲烷中，冷却至0℃，逐滴缓慢加入甲烷磺酰氯(0.9mL,11mmol)。反应液升至室温搅拌2小时。加入50mL水淬灭反应，分出有机相，饱和食盐水洗涤3次(50mL×3)，无水硫酸钠干燥，浓缩得粗产品，为浅黄色油状物，直接用于下一步反应。
化合物7-15的合成
上一步反应产物6-15(4.6g,10mmol)溶于20mL N,N-二甲基甲酰胺中，加入叠氮化钠(715mg,11mmol)。反应液升至50℃搅拌过夜。将反应液冷却至室温，加入50mL水淬灭反应，乙酸乙酯萃取3次(30mL×3)，合并有机相，饱和食盐水洗3次(30mL×3)，无水硫酸钠干燥，浓缩得粗产品，硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝1:1)纯化得3.2g产品7-15，为浅黄色油状物，产率80％。
化合物8-15的合成
上一步反应产物7-15(2.0g,5mmol)溶于30mL四氢呋喃和5mL水中，加入三苯基磷(1.57g,6mmol)。反应液室温搅拌过夜。减压移除四氢呋喃，加入1N稀盐酸20mL，乙酸乙酯洗涤3次(20mL×3)，水相冻干得820mg粗产品8-15，为浅黄色油状物。LCMS(ESI)m/z 382.3(M+H)+.
化合物9-15的合成
上一步反应产物8-15(1.14g,3mmol)溶于20mL甲醇和5mL水中，加入一水合氢氧化锂(630mg,15mmol)。反应液室温搅拌3h。待原料反应完全后减压移除甲醇，加入饱和碳酸氢钠溶液3mL和30mL冰水浴冷却至0℃，加入Boc2O(785mg,3.6mmol)，升至室温搅拌2h。反应液水洗两次(20mL×2)，合并水相加入0.5M KHSO4溶液淬灭反应调节PH＝3-4，二氯甲烷萃取3次(20mL×3)，合并有机相，无水硫酸钠干燥，浓缩，剩余物硅胶柱层析(二氯甲烷/甲醇＝20:1)纯化得650mg产品10-15，为浅黄色油状物，产率48％。LCMS(ESI)m/z 453.9(M+H)+,475.9(M+Na)+.
化合物11-15的合成:12786-191
将上一步产物10-15(136mg,0.3mmol)，DCC(165mg,0.8mmol)和DMAP(24mg,0.2mmol)加入一个干燥的Schlenck管中，置换氩气3次，加入1mL二氯甲烷，搅拌。将美登醇(57mg,0.1mmol)溶于4mL干燥二氯甲烷中加入。反应液室温搅拌2h，缓慢加入0.3mL水淬灭反应，加入15mL乙酸乙酯，过滤，乙酸乙酯洗涤。滤液无水硫酸钠干燥，浓缩。粗产物使用制备HPLC分离得到26mg产物11-15，为浅黄色固体，产率26％。LCMS(ESI)m/z 1000.7(M+H)+.
化合物12-15的合成
上一步反应产物11-15(20mg,0.02mmol)溶于4mL干燥的二氯甲烷中，冰水浴冷却至0℃，逐滴缓慢加入0.4mL三氟乙酸，逐步升至室温搅拌1小时，LCMS检测原料已完全转化，常温减压移除二氯甲烷和三氟乙酸得14mg粗产品12-15，为浅黄色固体，直接用于下一步反应。LCMS(ESI)m/z 900.7(M+H)+.
化合物CE-046的合成
上一步反应粗产物12-15(12mg,0.015mmol)悬浮于2mL饱和碳酸氢钠溶液中，加入化合物8(15.5mg,0.1mmol)，反应液室温搅拌过夜。二氯甲烷萃取3次(20mL×3)，合并有机相，饱和食盐水洗3次(20mL×3)，无水硫酸钠干燥，浓缩得粗产品，制备HPLC纯化得4mg产品CE-046，为浅黄色固体，产率26％。
LCMS(ESI)m/z 980.4(M+H)+.
1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 6.78(s,1H),6.66(s,1H),6.36&6.33(dd,J1＝12.4Hz,J2＝8.8Hz,2H),6.16(d,J＝10.8Hz,1H),6.11(d,J＝10.2Hz,1H),5.60&5.58(dd,J1＝12.0Hz,J2＝6.8Hz,1H),5.01(d,J＝8.0Hz,1H),4.40-4.30(m,2H),3.93(s,3H),3.77-3.68(m,2H),3.62-3.53(m,24H),3.43(d,J＝10.8Hz,2H),3.27(s,3H),3.12(d,J＝10.4Hz,1H),3.09(s,3H),2.64(d,J＝5.6Hz,1H),2.55(t,J＝10.0Hz,1H),2.15-2.10(m,1H),1.93(t,J＝8.0Hz,1H),1.62(s,3H),1.46(d,J＝5.6Hz,3H),1.18(s,3H),0.79(s,3H).
化合物CE-052a的合成
上一步反应粗产品12-15(9mg,0.01mmol)和化合物9(7mg,0.03mmol)溶于1mL乙二醇二甲醚和1mL水的混合溶剂中，加入0.2mL饱和碳酸氢钠溶液。反应液室温搅拌过夜，二氯甲烷萃取(20mL×3)，合并有机相，无水硫酸钠干燥，浓缩，粗产品由制备HPLC纯化得4.8mg产品CE-052，为浅黄色固体，LCMS(ESI)m/z 1000.4(M–H2O)+.
1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 7.37(br,1H),6.85(s,1H),6.78(s,1H),6.68(s,1H),6.44&6.42(dd,J1＝12.0Hz,J2＝9.6Hz,1H),6.18(d,J＝8.4Hz,1H),5.60&5.58(dd,J1＝12.0Hz,J2＝6.8Hz,1H),4.95(d,J＝8.8Hz,1H),4.32(t,J＝8.0Hz,1H),4.19-4.11(m,1H),4.08(s,2H),3.99(s,3H),3.85-3.74(m,1H),3.70-3.60(m,25H),3.51(d,J＝9.2Hz,2H),3.46(d,J＝6.8Hz,1H),3.35(s,3H),3.20(d,J＝10.0Hz,1H),3.15(s,3H),2.86(d,J＝5.6Hz,1H),2.60(t,J＝10.0Hz,1H),2.22(d,J＝11.2Hz,1H),1.68(s,3H),1.67(d,J＝10.4Hz,1H),1.51(d,J＝5.6Hz,3H),1.28(d,J＝5.6Hz,3H),0.84(s,3H).
实施例16 CE-048的合成路线
实验步骤
化合物2-16的合成
250mL茄形瓶中加入化合物1-16(30g,0.39mol)，搅拌下加入氢氧化钾(8.1g,0.14mol)。将该悬浊液加热至90℃，搅拌至氢氧化钾完全溶解。苄溴(22g,0.13mol)逐滴缓慢加入。反应液升温至110℃，搅拌过夜。反应液冷却至室温，加入200mL水，乙酸乙酯萃取3次(100mL×3)，合并有机相，水洗3次(150mL×3)，饱和食盐水洗(100mL)，无水硫酸钠干燥，浓缩。粗产品经硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯10:1至3:1)纯化得17g产品2-10，为无色油状物，产率80％。LCMS(ESI)m/z167.1(M+H)+.
化合物3-16的合成
上一步反应产物2-16(17g,0.1mol)和三乙胺(16.6mL,0.12mol)溶于150mL二氯甲烷中，冷却至0℃，逐滴加入甲烷磺酰氯(8.5mL,0.11mol)。反应液升至室温搅拌2小时。加入50mL水淬灭反应，分出有机相，饱和食盐水洗3次(50mL×3)，无水硫酸钠干燥，浓缩得24.4g粗产品3-16，为黄色油状物，直接用于下一步反应。
化合物4-16的合成
将上一步反应产物3-16(24.4g,0.1mol)和L-乳酸乙酯(20.8g,0.2mol)溶于N,N-二甲基甲酰胺150mL中，冷却至0℃，分批缓慢加入钠氢(8g,60％含量,悬浮于矿物油中,0.2mol)。反应液升至室温搅拌过夜。将反应液冷至0℃，逐滴缓慢加入20mL饱和氯化铵溶液淬灭反应，加入150mL水，乙酸乙酯萃取3次(100mL×3)，合并有机相，水洗3次(100mL×3)，饱和食盐水洗(100mL)，无水硫酸钠干燥，浓缩。粗产品硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝10:1至2:1)纯化得7.1g产品4-16，为浅黄色油状物，产率30％。LCMS(ESI)m/z 253.1(M+H)+。
化合物5-16的合成
上一步反应产物4-16(7.6g,30mmol)溶于50mL甲醇中，置换氮气3次，加入200mg10％的钯碳干粉。反应液置换氢气3次，氢气氛中室温搅拌过夜。置换氮气3次，加入50mL二氯甲烷，过滤，二氯甲烷洗涤，滤液浓缩，得粗产品4.8g，为浅黄色油状物，直接用于下一步反应。LCMS(ESI)m/z163.1(M+H)+,185.1(M+Na)+.
化合物6-16的合成
上一步反应产物5-16(4.8g,30mmol)和三乙胺(5.0mL,36mmol)溶于50mL二氯甲烷中，冷却至0℃，逐滴缓慢加入甲烷磺酰氯(2.64mL,33mmol)。反应液升至室温搅拌2小时。加入50mL水淬灭反应，分出有机相，饱和食盐水洗涤3次(50mL×3)，无水硫酸钠干燥，浓缩得粗产品，为浅黄色油状物，直接用于下一步反应。
化合物7-16的合成
上一步反应粗产物6-16(2g,8.3mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺20mL中，加入硫代乙酸钾(1.89g,16.6mmol)。反应液室温搅拌过夜，加入30mL水，乙酸乙酯萃取3次(50mL×3)，合并有机相，水洗3次(30mL×3)，饱和食盐水洗(50mL)，无水硫酸钠干燥，浓缩。粗产品经硅胶柱层析纯化得1.58g产品7-16，为棕色油状物，产率86％。LCMS(ESI)m/z 221.1(M+H)+。
化合物9-16的合成
氮气保护下，将上一步反应产物7-16(1.58g,7.2mmol)溶于20mL甲醇和10mL水的混合溶剂中，加入氢氧化锂(0.87g,36mmol)。反应液在氮气保护下室温搅拌2小时，加入甲基硫代磺酸甲酯(1.1g,8.7mmol)。反应液继续在室温下搅拌过夜。加入50mL水，乙酸乙酯萃取3次(50mL×3)，合并有机相，饱和食盐水洗3次(50mL×3)，无水硫酸钠干燥，浓缩。粗产品经硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝1:2)纯化得0.98g产物9-16，为浅黄色油状物，产率70％。LCMS(ESI)m/z 197.0(M+H)+，219.0(M+Na)+.
化合物10-16的合成
将上一步产物9-10(66.6mg,0.34mmol)，DCC(148mg,0.72mmol)和DMAP(29mg,0.24mmol)加入一个干燥的Schlenck管中，置换氩气3次，加入1mL二氯甲烷，搅拌。将美登醇(65mg,0.12mmol)溶于2mL干燥二氯甲烷中加入。反应液室温搅拌2h，缓慢加入0.3mL水淬灭反应，加入15mL乙酸乙酯，过滤，乙酸乙酯洗涤。滤液无水硫酸钠干燥，浓缩。粗产物使用制备HPLC分离得到25.6mg产物10-16，为白色固体，产率30％。LCMS(ESI)m/z 743.3(M+H)+.
化合物11-16的合成
10-16(15mg,0.02mmol)溶于0.5mL乙酸乙酯和0.5mL甲醇的混合溶剂中，将二硫代苏糖醇DTT(25mg,0.16mmol)溶于0.5mL PH＝7.5的磷酸钾缓冲溶液中加入。反应液在氮气保护下搅拌3小时。加入PH＝6.0的磷酸钾缓冲溶液1mL淬灭反应。乙酸乙酯萃取3次(5mL×3)，合并有机相，饱和食盐水洗涤(5mL)，无水硫酸钠干燥，浓缩。粗产品使用制备HPLC(CH3CN in H2O-0.05％TFA from 5％to 95％)纯化得到12mg产物11-16，为白色固体，产率85％。LCMS(ESI)m/z 697.2(M+H)+.
化合物CE-048的合成
上一步反应产物11-16(12mg,0.017mmol)溶于1.5mL四氢呋喃中，加入PH＝6的磷酸钾缓冲溶液1.5mL和4-(N-马来酰亚胺甲基)环己烷-1-羧酸琥珀酰亚胺酯(28mg,0.085mmol)，氮气保护下室温搅拌过夜。反应液过滤，直接由制备HPLC纯化得12mg产品CE-048，为白色固体，产率70％。
LCMS(ESI)m/z 1031.3(M+H)+.
1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 6.85(s,1H),6.80(d,J＝5.6Hz,1H),6.55(s,1H),6.45&6.43(dd,J1＝12.4Hz,J2＝8.8Hz,1H),6.20(d,J＝7.2Hz,1H),5.59-5.53(m,1H),4.92(d,J＝9.6Hz,1H),4.28(q,J＝8.4Hz,1H),4.19(s,2H),3.99(s,3H),3.80-3.74(m,1H),3.72-3.68(m,2H),3.52(d,J＝13.2Hz,1H),3.50(d,J＝10.0Hz,1H),3.39(d,J＝5.6Hz,2H),3.37(s,3H),3.21(d,J＝10.8Hz,1H),3.17(s,3H),3.18-3.13(m,1H),3.06-3.00(m,1H),2.93-2.86(m,3H),2.82(s,3H),2.61-2.52(m,3H),2.25-2.15(m,3H),2.01-1.93(m,2H),1.82-1.73(m,3H),1.68(s,3H),1.61-1.46(m,4H),1.30-1.26(m,4H),1.08(q,J＝10.4Hz,2H),0.83(s,3H).
实施例17 CE-049的合成路
实验步骤
化合物2-17的合成
将1-17(4.5g,38mmol)和烯丙基溴(6.6mL,76mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺50mL中，冷却至0℃，分批缓慢加入钠氢(3.04g,60％含量,悬浮于矿物油中,76mmol)。反应液升至室温搅拌过夜。将反应液冷至0℃，逐滴缓慢加入20mL饱和氯化铵溶液淬灭反应，加入50mL水，乙酸乙酯萃取3次(50mL×3)，合并有机相，水洗3次(50mL×3)，饱和食盐水洗(50mL)，无水硫酸钠干燥，浓缩。粗产品硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝10:1至2:1)纯化得1.95g产品2-17，为浅黄色油状物，产率30％。LCMS(ESI)m/z 159.2(M+H)+。
化合物3-17的合成
上一步反应产物2-17(1.95g,8.7mmol)溶于15mL四氢呋喃中，冷至0℃，搅拌下逐滴加入1N硼烷四氢呋喃溶液(10mL,10mmol)。反应液升至室温搅拌2小时。反应液冷却至0℃，逐滴加入3N的氢氧化钠溶液(3.4mL,10mmol)，缓慢加入5mL30％含量的双氧水，反应液升至室温搅拌过夜。加入50mL乙醚，分出有机相，饱和食盐水洗(30mL×3)，无水硫酸钠干燥，浓缩得1.94g粗产品3-17，为浅黄色油状物，直接用于下一步反应。
化合物4-17的合成
上一步反应产物3-17(1.94g,10mmol)和三乙胺(1.7mL,12mmol)溶于20mL二氯甲烷中，冷却至0℃，逐滴缓慢加入甲烷磺酰氯(0.9mL,11mmol)。反应液升至室温搅拌2小时。加入50mL水淬灭反应，分出有机相，饱和食盐水洗涤3次(50mL×3)，无水硫酸钠干燥，浓缩得粗产品，为浅黄色油状物2.46g，直接用于下一步反应。LCMS(ESI)m/z 255.3(M+H)+。
化合物5-17的合成
上一步反应粗产物4-17(2.16g,9mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺20mL中，加入硫代乙酸钾(2.0g,18mmol)。反应液室温搅拌过夜，加入30mL水，乙酸乙酯萃取3次(50mL×3)，合并有机相，水洗3次(30mL×3)，饱和食盐水洗(50mL)，无水硫酸钠干燥，浓缩。粗产品经硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝1:1)纯化得1.7g产品5-17，为棕色油状物，产率84％。LCMS(ESI)m/z 235.3(M+H)+。
化合物7-17的合成
氮气保护下，将上一步反应产物5-17(1.87g,8mmol)溶于20mL甲醇和10mL水的混合溶剂中，加入氢氧化锂(0.78g,32mmol)。反应液在氮气保护下室温搅拌2小时，加入甲基硫代磺酸甲酯(1.2g,9.6mmol)。反应液继续在室温下搅拌过夜。加入50mL水，乙酸乙酯萃取3次(50mL×3)，合并有机相，饱和食盐水洗3次(50mL×3)，无水硫酸钠干燥，浓缩。粗产品经硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝1:2)纯化得1.17g产物7-17，为浅黄色油状物，产率65％。
LCMS(ESI)m/z 225.3(M+H)+,247.3(M+Na)+,
化合物8-17的合成
将上一步产物7-17(74mg,0.33mmol)，DCC(136mg,0.66mmol)和DMAP(27mg,0.22mmol)加入一个干燥的Schlenck管中，置换氩气3次，加入1mL二氯甲烷，搅拌。将美登醇(62mg,0.11mmol)溶于2mL干燥二氯甲烷中加入。反应液室温搅拌2h，缓慢加入0.3mL水淬灭反应，加入15mL乙酸乙酯，过滤，乙酸乙酯洗涤。滤液无水硫酸钠干燥，浓缩。粗产物使用制备HPLC分离得到30mg产物8-17，为白色固体，产率35％。
LCMS(ESI)m/z 771.3(M+H)+.
化合物9-17的合成
8-17(16mg,0.02mmol)溶于0.5mL乙酸乙酯和0.5mL甲醇的混合溶剂中，将二硫代苏糖醇DTT(18mg,0.117mmol)溶于0.5mL PH＝7.5的磷酸钾缓冲溶液中加入。反应液在氮气保护下搅拌3小时。加入PH＝6的磷酸钾缓冲溶液1mL淬灭反应。乙酸乙酯萃取3次(5mL×3)，合并有机相，饱和食盐水洗涤(5mL)，无水硫酸钠干燥，浓缩。粗产品使用制备HPLC(CH3CNin H2O-0.05％TFA from 5％to 95％)纯化得到12mg产物8-8，为白色固体，产率80％。LCMS(ESI)m/z725.3(M+H)+.
化合物CE-049的合成
上一步反应产物9-17(10mg,0.014mmol)溶于1.5mL四氢呋喃中，加入PH＝6的磷酸钾缓冲溶液1.5mL和4-(N-马来酰亚胺甲基)环己烷-1-羧酸琥珀酰亚胺酯(23.4mg,0.07mmol)，氮气保护下室温搅拌过夜。反应液过滤，直接由制备HPLC纯化得11.4mg产品CE-049，为白色固体，产率78％。
LCMS(ESI)m/z 1059.3(M+H)+.
1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 6.85(s,1H),6.82(d,J＝5.6Hz,1H),6.59(s,1H),6.42&6.40(dd,J1＝12.4Hz,J2＝8.8Hz,1H),6.15(d,J＝8.4Hz,1H),5.55&5.53(dd,J1＝12.4Hz,J2＝3.6Hz,1H),4.88-4.80(m,1H),4.32(q,J＝8.4Hz,1H),3.99(s,3H),3.83-3.76(m,1H),3.56-3.47(m,4H),3.39(d,J＝5.6Hz,2H),3.37(s,3H),3.23-3.17(m,2H),3.15(s,3H),3.07-2.94(m,1H),2.93-2.84(m,3H),2.83(s,3H),2.63-2.56(m,4H),2.32-2.26(m,2H),2.17(d,J＝9.6Hz,2H),2.01-1.93(m,2H),1.82-1.73(m,4H),1.68(s,3H),1.60-1.40(m,2H),1.55(d,J＝4.0Hz,3H),1.44(s,3H),1.30(d,J＝4.8Hz,3H),1.08(q,J＝10.0Hz,2H),0.81(s,3H).
实施例18 CE-051的合成路线
使用D-乳酸乙酯为原料，CE-051合成步骤和CE-035一致。
LCMS(ESI)m/z 1045.4(M+H)+.
1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 6.84(s,1H),6.80(s,1H),6.56(s,1H),6.46&6.42(dd,J1＝12.4Hz,J2＝8.8Hz,1H),6.18(d,J＝8.0Hz,1H),5.55&5.54(dd,J1＝12.8Hz,J2＝7.2Hz,1H),4.92(t,J＝6.4Hz,1H),4.28(t,J＝8.4Hz,1H),4.07-4.01(m,1H),3.99(s,3H),3.80-3.69(m,2H),3.60-3.54(m,1H),3.53-3.46(m,2H),3.39(d,J＝5.6Hz,2H),3.36(s,3H),3.21(d,J＝11.6Hz,2H),3.15(s,3H),3.06-2.98(m,1H),2.92-2.86(m,2H),2.82(s,3H),2.61-2.52(m,3H),2.28-2.21(m,1H),2.16(d,J＝9.6Hz,2H),2.01-1.93(m,1H),1.82-1.73(m,3H),1.68(s,3H),1.60-1.40(m,2H),1.55(q,J＝8.8Hz,2H),1.49(d,J＝6.0Hz,3H),1.30(s,3H),1.26(s,3H),1.08(q,J＝10.0Hz,2H),0.84(s,3H).
实施例19 CE-053的合成路线
实验步骤
化合物2-19的合成
将化合物1-19(5g,44mmol)溶于80mL二氯甲烷中，依次加入三乙胺(7.4mL,52.8mol)和醋酸酐(4.95mL,52.8mol)，室温搅拌过夜，待反应完全后，加入100mL水，分液，水相再用二氯甲烷萃取2次(50mL×2)，合并有机相，饱和食盐水洗涤(5mL)，无水硫酸钠干燥，浓缩。粗产品经硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝5:1)纯化得6.5g产物2-19，为无色油状物，产率95％。LCMS(ESI)m/z 157.1(M+H)+.
化合物3-19的合成
在25mL烧瓶中加入三氯氧磷(7.7mL,83.4mol)和DMF(39ml)，常温搅拌30min后，冰水浴冷却至0℃，将化合物2-19(6.5g,41.7mmol)溶于39mL DMF中缓慢滴加至烧瓶中，反应液升至室温搅拌过夜。加入100mL饱和碳酸氢钠溶液，持续搅拌10小时，乙酸乙酯萃取(50mL×3)，合并有机相，饱和食盐水洗涤(50mL)，无水硫酸钠干燥，浓缩。粗产品经硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝1:1)纯化得6.5g产物3-19，为无色油状物，产率85％。LCMS(ESI)m/z185.1(M+H)+.
化合物4-19的合成
取上一步产物3-19(2g,11mmol)溶于乙腈：叔丁醇：水＝2：2：1的混合溶剂55ml中，加入磷酸二氢钠(3.96g,33ml)和浓度为30％的过氧化氢溶液(1.8mL,55mmol)，混合液室温搅拌30分钟后，加入次氯酸钠(6g,66mmol)，反应常温搅拌2小时，加入50mL水，并用10％的盐酸溶液调节PH至5-6，二氯甲烷萃取(50mL×3)，饱和食盐水洗涤(30mL)，无水硫酸钠干燥，浓缩得粗产品，为浅黄色油状物1.5g，直接用于下一步反应。LCMS(ESI)m/z 201.1(M+H)+。
化合物5-19的合成
将上一步反应产物4-19(1.5g,7.5mmol)溶于甲醇(20mL)和水(5mL)的混合溶剂中，加入氢氧化锂(0.36g,15mmol)，反应常温搅拌2小时后，加入20mL水，并用1N盐酸溶液调节PH至5-6，二氯甲烷萃取(50mL×3)，饱和食盐水洗涤(30mL)，无水硫酸钠干燥，浓缩得粗产品，为浅黄色油状物1.2g，直接用于下一步反应。LCMS(ESI)m/z 161.1(M+H)+。
化合物6-19的合成
将上一步反应产物5-19(1.2g,7.5mmol)溶于甲醇(20ml)中，冰水浴条件下缓慢滴加氯化亚砜(1.1mL,15mmol)，反应升至常温搅拌过夜，加入50mL水淬灭反应，乙酸乙酯萃取(50mL×3)，饱和食盐水洗涤(5mL)，无水硫酸钠干燥，浓缩。粗产品经硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝3:1)纯化得1.2g产物6-19，为无色油状物，产率63％。LCMS(ESI)m/z 175.1(M+H)+.
化合物7-19的合成
将上一步反应产物6-19(1.2g,6.9mmol)和三乙胺(1.2mL,8.3mmol)溶于20mL二氯甲烷中，冷却至0℃，逐滴缓慢加入甲烷磺酰氯(0.68mL,8.3mmol)。反应液升至室温搅拌2小时。加入50mL水淬灭反应，分出有机相，饱和食盐水洗涤3次(50mL×3)，无水硫酸钠干燥，浓缩得1.5g粗产品，为浅黄色油状物，直接用于下一步反应。LCMS(ESI)m/z 253.1(M+H)+。
化合物8-19的合成
上一步反应粗产物7-19(1.5g,6.3mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺20mL中，加入硫代乙酸钾(1.12g,9.5mmol)。反应液室温搅拌过夜，加入30mL水，乙酸乙酯萃取3次(50mL×3)，合并有机相，水洗3次(30mL×3)，饱和食盐水洗(50mL)，无水硫酸钠干燥，浓缩。粗产品经硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝3:1)纯化得700mg产品8-19，为棕色油状物，产率51％。LCMS(ESI)m/z 233.1(M+H)+.
化合物9-19的合成
氮气保护下，将上一步反应产物8-19(0.7g,3mmol)溶于20mL甲醇和5mL水的混合溶剂中，加入氢氧化锂(0.36g,15mmol)。反应液在氮气保护下室温搅拌2小时，加入甲基硫代磺酸甲酯(0.57g,4.5mmol)。反应液继续在室温下搅拌过夜。加入50mL水，乙酸乙酯萃取3次(50mL×3)，合并有机相，饱和食盐水洗3次(50mL×3)，无水硫酸钠干燥，浓缩。粗产品经硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝1:1)纯化得0.45g产物10-19，为浅黄色油状物，产率67％。LCMS(ESI)m/z 223.1(M+H)+.
化合物CE-053的合成
将上一步产物10-19(70mg,0.315mmol)，DCC(130mg,0.63mmol)和DMAP(25mg,0.21mmol)加入一个干燥的Schlenck管中，置换氩气3次，加入1mL二氯甲烷，搅拌。将美登醇(60mg,0.105mmol)溶于2mL干燥二氯甲烷中加入。反应液室温搅拌2h，缓慢加入0.3mL水淬灭反应，加入15mL乙酸乙酯，过滤，乙酸乙酯洗涤。滤液无水硫酸钠干燥，浓缩。粗产物使用制备HPLC分离得到40mg产物CE-053，为白色固体，产率48％。
LCMS(ESI)m/z 768.7(M+H)+.
1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 6.84(s,1H),6.79(t,J＝11.6Hz,1H),6.49-6.41(m,1H),6.36(d,J＝8.8Hz,1H),6.24-6.13(m,1H),5.59-5.38(m,1H),4.91&4.85(d,J＝7.6Hz,1H),4.31-4.16(m,2H),3.99(s,3H),3.65-3.45(m,5H),3.37(d,J＝8.4Hz,2H),3.23-3.18(m,2H),3.17(s,3H),3.00-2.54(m,6H),2.43(s,3H),2.23-2.15(m,2H),1.80-1.60(m,2H),1.69(s,3H),1.50-1.42(m,2H),1.40-1.33(m,1H),1.30(d,J＝4.8Hz,3H),0.81(s,3H).
实施例20 CE-054、055的合成路线
实验步骤
化合物2-20的合成
原料1-20(6g,50mmol)和咪唑(4.08g,60mmol)溶于80mL四氢呋喃中，冰水浴冷却至0℃，分批缓慢加入TBDPSCl(14g,51mmol)，升至室温搅拌过夜。加入20mL饱和氯化铵溶液，二氯甲烷萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，浓缩得18g粗产品2-20，直接用于下一步反应。LCMS(ESI)m/z 358.1(M+H)+.
化合物2-20的合成
上一步反应产物2-20(18g,50mmol)溶于60mL乙腈中，加入氧化银(9.3g,75mmol)，搅拌下加入碘甲烷(9.3mL,150mmol)。反应液室温搅拌过夜，硅藻土过滤，二氯甲烷洗涤，滤液浓缩，剩余物硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝5:1)，得12g产品3-20，为浅黄色油状物,产率65％。LCMS(ESI)m/z 372.1(M+H)+.
化合物2-20的合成
上一步反应产物3-20(5.6g,15mmol)溶于20mL四氢呋喃中，加入四丁基氟化铵(30mL,1N,30mmol)。反应液室温搅拌过夜，浓缩，剩余物硅胶柱层析(二氯甲烷/甲醇＝20:1)，得2g产品4-20，为浅黄色油状物，产率80％。LCMS(ESI)m/z 134.7(M+H)+.1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 3.93-3.87(m,2H),3.83-3.79(m,1H),3.79(s,1H),3.50(s,1H).
化合物2-20的合成
上一步反应产物4-20(402mg,3mmol)和DMAP(440mg,3.6mmol)溶于15mL二氯甲烷中，冰水浴冷却至0℃，加入氯甲酸烯丙酯(0.38mL,36mmol)。反应液室温搅拌2小时，浓缩，剩余物硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝5:1)，得500mg产品5-20，为浅黄色油状物，产率76％。LCMS(ESI)m/z 219.7(M+H)+.
化合物2-20的合成
上一步反应产物5-20(436mg,2mmol)和Pd(PPh3)4(12mg,0.01mmol)于干燥Schlenk管中，置换氩气三次，加入15mL1,4-二氧六环，升温至100℃搅拌1小时。反应液冷却至室温，浓缩，剩余物硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝3:1)，得160mg产品6-20，为浅黄色油状物，产率46％。LCMS(ESI)m/z 175.7(M+H)+.
化合物2-20的合成
上一步反应产物6-20(1.74g,10mmol)溶于20mL四氢呋喃中，冷至0℃，拌下逐滴加入1M硼烷四氢呋喃溶液(12mL,12mmol)。反应液升至室温搅拌2小时。反应液冷却至0℃，逐滴加入3N的氢氧化钠溶液(4mL,12mmol)，缓慢加入6mL 30％含量的双氧水，反应液升至室温搅拌过夜。加入80mL乙醚，分出有机相，饱和食盐水洗(30mL×3)，无水硫酸钠干燥，浓缩得1.2g粗产品7-20，为浅黄色油状物，直接用于下一步反应。
化合物2-20的合成
上一步反应产物7-20(960mg,5mmol)和三乙胺(0.83mL,6mmol)溶于50mL二氯甲烷中，冷却至0℃，逐滴缓慢加入甲烷磺酰氯(0.44mL,5.5mmol)。反应液升至室温搅拌2小时。加入50mL水淬灭反应，分出有机相，饱和食盐水洗涤3次(30mL×3)，无水硫酸钠干燥，浓缩得1.3g粗产品8-20，为浅黄色油状物，直接用于下一步反应。LCMS(ESI)m/z 271.7(M+H)+。
化合物2-20的合成
上一步反应粗产物8-20(270mg,1mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺5mL中，加入硫代乙酸钾(228mg,2mmol)。反应液室温搅拌过夜，加入20mL水，乙酸乙酯萃取3次(20mL×3)，合并有机相，水洗3次(20mL×3)，饱和食盐水洗(20mL)，无水硫酸钠干燥，浓缩。粗产品经硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝5:1)纯化得170mg产品9-20，为棕色油状物，产率68％。LCMS(ESI)m/z 251.7(M+H)+,1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 3.97(t,J＝3.6Hz,1H),3.79(s,3H),3.75-3.68(m,2H),3.58-3.49(m,2H),3.47(s,3H),2.92(t,J＝5.6Hz,2H),2.32(s,3H),1.87-1.81(m,2H).
化合物2-20的合成
氮气保护下，将上一步反应产物9-20(125mg,0.5mmol)溶于3mL甲醇和2mL水的混合溶剂中，加入一水合氢氧化锂(210g,5mmol)。反应液在氮气保护下室温搅拌2小时，加入甲基硫代磺酸甲酯(126mg,1mmol)。反应液继续在室温下搅拌过夜。加入5mL水，乙酸乙酯萃取3次(20mL×3)，合并有机相，饱和食盐水洗3次(20mL×3)，无水硫酸钠干燥，浓缩。粗产品经硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝1:2)纯化得80mg产物11-20，为浅黄色油状物，产率67％。LCMS(ESI)m/z 241.7(M+H)+.
化合物CE-054的合成
将上一步产物11-20(58mg,0.24mmol)，DCC(132mg,0.64mmol)和DMAP(20mg,0.16mmol)加入一个干燥的Schlenck管中，置换氩气3次，加入1mL二氯甲烷，搅拌。将美登醇(46mg,0.08mmol)溶于4mL干燥二氯甲烷中加入。反应液室温搅拌2h，缓慢加入0.3mL水淬灭反应，加入15mL乙酸乙酯，过滤，乙酸乙酯洗涤。滤液无水硫酸钠干燥，浓缩。粗产物使用制备HPLC分离纯化得到2个异构体：CE-054(P1)，25mg为白色固体；CE-055(P2)，13mg，为浅黄色固体。LCMS(ESI)m/z 787.7(M+H)+。
HPLC(15min):CE-054,Rt＝10.58min；CE-055,Rt＝10.75min
Mobile Phase:A:water(0.01％TFA)B:ACN(0.01％TFA)
Gradient:0min 5％B,3min 5％B,10min 95％B,15min 95％B
Flow Rate:1.2ml/min
Column:Eclipse XDB-C18,4.6×150mm,5um
Oven Temperature:40℃
CE-054:1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 6.89(s,1H),6.86(s,1H),6.46&6.44(dd,J1＝12.0Hz,J2＝9.2Hz,1H),6.27(s,1H),6.23(d,J＝8.4Hz,1H),5.59&5.57(dd,J1＝12.4Hz,J2＝7.2Hz,1H),4.92(d,J＝7.6Hz,1H),4.27(t,J＝9.2Hz,1H),4.14-4.12(m,1H),3.99(s,3H),3.78-3.76(m,1H),3.65(t,J＝7.2Hz,2H),3.52(t,J＝10.0Hz,1H),3.52(s,3H),3.44-3.40(m,1H),3.37(s,3H),3.20(d,J＝14.0Hz,1H),3.19(s,3H),2.89(d,J＝7.6Hz,1H),2.81(t,J＝6.0Hz,2H),2.60(t,J＝10.0Hz,1H),2.39(s,3H),2.25&2.23(dd,J1＝8.8Hz,J2＝3.2Hz,1H),1.94(d,J＝9.2Hz,2H),1.69(s,3H),1.62(d,J＝10.4Hz,2H),1.30(d,J＝4.8Hz,3H),1.20-1.12(m,2H),0.83(s,3H).
CE-055:1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 7.13(s,1H),6.84(s,1H),6.45&6.43(dd,J1＝12.4Hz,J2＝9.2Hz,1H),6.29(s,1H),6.26(d,J＝9.2Hz,1H),5.57&5.55(dd,J1＝11.2Hz,J2＝7.2Hz,1H),4.90(d,J＝7.6Hz,1H),4.37&4.36(dd,J1＝7.2Hz,J2＝3.2Hz,1H),4.24(t,J＝8.8Hz,1H),3.99(s,3H),3.78-3.76(m,1H),3.71-3.60(m,2H),3.59(d,J＝11.2Hz,1H),3.50(d,J＝9.2Hz,1H),3.50-3.40(m,2H),3.37(s,6H),3.18(d,J＝14.0Hz,1H),3.16(s,3H),2.88(d,J＝7.6Hz,1H),2.83(t,J＝5.6Hz,2H),2.59(t,J＝10.0Hz,1H),2.42(s,3H),2.25&2.23(dd,J1＝8.8Hz,J2＝3.2Hz,1H),1.94(d,J＝9.2Hz,2H),1.68(s,3H),1.62(d,J＝10.4Hz,1H),1.29(d,J＝4.8Hz,3H),1.20-1.12(m,2H),0.84(s,3H).
实施例21 CE-056的合成路线
实验步骤
化合物2-21的合成
将化合物1-21(3g,14.3mmol)溶于50mL二氯甲烷中，加入TBDPSCl(4.32g,15.7mmol)和咪唑(1.07g,15.7mmol)，反应液常温搅拌2小时，加入50mL水，二氯甲烷萃取(50mL×3)，合并有机相，饱和食盐水洗3次(50mL×3)，无水硫酸钠干燥，浓缩。粗产品经硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝5:1)纯化得5g产物2-21，为无色油状物，产率78％。LCMS(ESI)m/z 449.2(M+H)+.
化合物3-21的合成
上一步反应产物2-21(5g,11mmol)溶于50mL甲醇和5mL水的混合溶剂中，加入氢氧化锂(1.32g,55mmol)。反应液置于常温下搅拌2小时，减压移除甲醇，加入50mL水，二氯甲烷萃取(50mL×3)，合并有机相，饱和食盐水洗3次(50mL×3)，无水硫酸钠干燥，浓缩。粗产品经硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝3:1)纯化得3.2g产物3-21，为无色油状物，产率83％。LCMS(ESI)m/z 345.2(M+H)+.
化合物4-21的合成
将上一步反应产物3-21(3.2g,9.3mmol)和化合物M1(3.2g,14mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺100mL中，冷却至0℃，分批缓慢加入钠氢(0.75g,60％含量,悬浮于矿物油中,18.6mmol)。反应液升至室温搅拌3h。将反应液冷至0℃，逐滴缓慢加入20mL饱和氯化铵溶液淬灭反应，加入50mL水，二氯甲烷萃取3次(50mL×3)，合并有机相，水洗3次(100mL×3)，饱和食盐水洗(100mL)，无水硫酸钠干燥，浓缩。粗产品硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝5:1)纯化得1.4g产品4-21，为浅黄色油状物，产率31.5％。LCMS(ESI)m/z 479.2(M+H)+。
化合物5-21的合成
上一步反应产物4-21(1.4g,3mmol)溶于20ml四氢呋喃中，加入1N的TBAF四氢呋喃溶液(4.5ml,4.5mmol)。反应液置于常温下搅拌5小时，加入50mL水，乙酸乙酯萃取(50mL×3)，合并有机相，饱和食盐水洗3次(50mL×3)，无水硫酸钠干燥，浓缩。粗产品经硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝3:1)纯化得0.55g产物5-21，为无色油状物，产率73％。LCMS(ESI)m/z241.1(M+H)+.
化合物6-21的合成
上一步反应产物5-21(0.55g,2.3mmol)溶于20mL丙酮中，冰水浴冷却至0℃，逐滴缓慢加入新制的Jones试剂(0.46g,4.6mmol),约2分钟滴加完毕。反应液升至室温搅拌过夜，加入1mL异丙醇淬灭反应，减压移除丙酮，加入50ml水，二氯甲烷萃取3次(50mL×3)，合并有机相，饱和食盐水洗3次(50mL×3)，无水硫酸钠干燥，浓缩得粗产品，为无色油状物，直接用于下一步反应。LCMS(ESI)m/z 255.1(M+H)+。
化合物7-21的合成
将上一步反应产物6-21(0.5g,2mmol)溶于甲醇(20ml)中，冰水浴条件下缓慢滴加氯化亚砜(0.48g,4mmol)，反应升至常温搅拌过夜，加入50ml水淬灭反应，乙酸乙酯萃取(50mL×3)，饱和食盐水洗涤(50mL)，无水硫酸钠干燥，浓缩。粗产品经硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝3:1)纯化得0.5g产物7-21，为无色油状物，产率81％。LCMS(ESI)m/z 269.1(M+H)+.
化合物8-21的合成
上一步反应产物7-21(0.5g,1.9mmol)溶于20mL甲醇中，置换氮气3次，加入30mg10％的钯碳干粉。反应液置换氢气3次，氢气氛中室温搅拌过夜。置换氮气3次，加入20mL二氯甲烷，过滤，二氯甲烷洗涤，滤液浓缩，得粗产品0.32g，为浅黄色油状物，直接用于下一步反应。LCMS(ESI)m/z 179.1(M+H)+.
化合物9-21的合成
将上一步反应产物8-21(0.32g,1.8mmol)和三乙胺(0.3mL,2.1mmol)溶于20mL二氯甲烷中，冷却至0℃，逐滴缓慢加入甲烷磺酰氯(0.17mL,2.1mmol)。反应液升至室温搅拌2小时。加入20mL水淬灭反应，分出有机相，饱和食盐水洗涤3次(50mL×3)，无水硫酸钠干燥，浓缩。粗产品经硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝3:1)纯化得250mg产物9-21，为无色油状物，产率52％。LCMS(ESI)m/z 257.1(M+H)+。
化合物10-21的合成
上一步反应粗产物9-21(250mg,1mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺5mL中，加入硫代乙酸钾(120mg,1.5mmol)。反应液室温搅拌过夜，加入20mL水，乙酸乙酯萃取3次(20mL×3)，合并有机相，水洗3次(20mL×3)，饱和食盐水洗(20mL)，无水硫酸钠干燥，浓缩。粗产品经硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝3:1)纯化得170mg产品10-21，为棕色油状物，产率74％。LCMS(ESI)m/z 237.1(M+H)+。
化合物12-21的合成
氮气保护下，将上一步反应产物10-21(170mg,0.72mmol)溶于10mL甲醇和5mL水的混合溶剂中，加入氢氧化锂(86mg,3.6mmol)。反应液在氮气保护下室温搅拌2小时，加入甲基硫代磺酸甲酯(140mg,1.1mmol)。反应液继续在室温下搅拌过夜。加入20mL水，乙酸乙酯萃取3次(30mL×3)，合并有机相，饱和食盐水洗3次(20mL×3)，无水硫酸钠干燥，浓缩。粗产品经硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝1:1)纯化得100mg产物12-21，为浅黄色油状物，产率61％。LCMS(ESI)m/z 227.1(M+H)+.
实化合物CE-056的合成
将上一步产物12-21(100mg,0.44mmol)，DCC(173mg,0.84mmol)和DMAP(34mg,0.28mmol)加入一个干燥的Schlenck管中，置换氩气3次，加入1mL二氯甲烷，搅拌。将美登醇(79mg,0.14mmol)溶于2mL干燥二氯甲烷中加入。反应液室温搅拌2h，缓慢加入0.3mL水淬灭反应，加入15mL乙酸乙酯，过滤，乙酸乙酯洗涤。滤液无水硫酸钠干燥，浓缩。粗产物使用制备HPLC分离得到3mg产物CE-056，为白色固体，产率3％。
LCMS(ESI)m/z 773.3(M+H)+。
实施例22 CE-057的合成路线
实验步骤
化合物2-22的合成
乙二醇(7.6mL,0.15mol)溶于100mL干燥四氢呋喃中，加入100mg金属钠，室温搅拌至钠块完全反应，加入丙烯酸叔丁酯(14.5mL,0.1mol)，室温搅拌过夜。减压移除四氢呋喃，往剩余物中加入100mL乙酸乙酯，水洗3次(50mL×3)，无水硫酸钠干燥，浓缩，粗产品硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝1:1)纯化得14g产品2-22，为无色油状物，产率73％。LCMS(ESI)m/z 191.1(M+H)+。
化合物3-22的合成
上一步反应产物2-22(7.6g,40mmol)和三乙胺(6.6mL,48mmol)溶于50mL二氯甲烷中，冷却至0℃，逐滴缓慢加入甲烷磺酰氯(3.5mL,44mmol)。反应液升至室温搅拌2小时。加入50mL水淬灭反应，分出有机相，饱和食盐水洗涤3次(50mL×3)，无水硫酸钠干燥，浓缩得粗产品，为浅黄色油状物，直接用于下一步反应。LCMS(ESI)m/z 269.1(M+H)+。
化合物4-22的合成
上一步反应粗产物3-22(2.7g,10.0mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺20mL中，加入硫代乙酸钾(2.3g,20mmol)。反应液室温搅拌过夜，加入30mL水，乙酸乙酯萃取3次(50mL×3)，合并有机相，水洗3次(30mL×3)，饱和食盐水洗(50mL)，无水硫酸钠干燥，浓缩。粗产品经硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝2:1)纯化得2.0g产品4-22，为棕色油状物，产率86％。LCMS(ESI)m/z 248.2(M+H)+.
化合物6-22的合成
氮气保护下，将上一步反应产物4-22(2g,8mmol)溶于20mL甲醇和10mL水的混合溶剂中，加入氢氧化锂(0.78g,32mmol)。反应液在氮气保护下室温搅拌2小时，加入甲基硫代磺酸甲酯(1.2g,9.6mmol)。反应液继续在室温下搅拌过夜。加入50mL水，乙酸乙酯萃取3次(50mL×3)，合并有机相，饱和食盐水洗3次(50mL×3)，无水硫酸钠干燥，浓缩。粗产品经硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝1:2)纯化得1.2g产物6-22，为浅黄色油状物，产率75％。
LCMS(ESI)m/z197.0(M+H)+
化合物7-22的合成
将上一步产物6-22(47mg,0.24mmol)，DCC(132mg,0.64mmol)和DMAP(20mg,0.16mmol)加入一个干燥的Schlenck管中，置换氩气3次，加入1mL二氯甲烷，搅拌。将美登醇(45mg,0.08mmol)溶于4mL干燥二氯甲烷中加入。反应液室温搅拌2h，缓慢加入0.3mL水淬灭反应，加入15mL乙酸乙酯，过滤，乙酸乙酯洗涤。滤液无水硫酸钠干燥，浓缩。粗产物使用制备HPLC分离得到30mg产物7-22，为白色固体，产率50％。
化合物8-22的合成
上一步反应产物7-22(15mg,0.02mmol)溶于0.5mL乙酸乙酯和0.5mL甲醇的混合溶剂中，将二硫代苏糖醇DTT(15mg,0.10mmol)溶于0.5mL PH＝7.5的磷酸钾缓冲溶液中加入。反应液在氮气保护下搅拌3小时。加入PH＝6的磷酸钾缓冲溶液1mL淬灭反应。乙酸乙酯萃取3次(5mL×3)，合并有机相，饱和食盐水洗涤(5mL)，无水硫酸钠干燥，浓缩。粗产品使用制备HPLC(CH3CN in H2O-0.05％TFA from 5％to 95％)纯化得到11mg产物8-22，为白色固体，产率77％。LCMS(ESI)m/z 697.3(M+H)+.
化合物CE-057的合成
上一步反应产物8-22(10mg,0.014mmol)溶于1.5mL四氢呋喃中，加入PH＝6的磷酸钾缓冲溶液1.5mL和4-(N-马来酰亚胺甲基)环己烷-1-羧酸琥珀酰亚胺酯(23mg,0.07mmol)，氮气保护下室温搅拌过夜。反应液过滤，直接由制备HPLC纯化得9.5mg产品CE-057，为白色固体，产率66％。
LCMS(ESI)m/z 1030.6(M+H)+.
1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 6.84(s,1H),6.78(d,J＝10.8Hz,1H),6.47&6.43(dd,J1＝15.2Hz,J2＝11.2Hz,1H),6.39(s,1H),6.19(d,J＝10.8Hz,1H),5.57&5.54(dd,J1＝15.2Hz,J2＝8.8Hz,1H),4.93-4.88(m,1H),4.29-4.21(m,1H),3.99(s,3H),3.92-3.85(m,1H),3.84-3.68(m,4H),3.55-3.47(m,2H),3.39(t,J＝6.8Hz,2H),3.35(s,3H),3.30-3.18(m,2H),3.15(d,J＝17.2Hz,3H),3.10-2.94(m,1H),2.94-2.67(m,4H),2.83(s,3H),2.61-2.47(m,3H),2.16(d,J＝11.2Hz,2H),1.98-1.90(m,1H),1.80-1.78(m,2H),1.68(s,3H),1.64-1.45(m,4H),1.32-1.25(m,4H),1.08(q,J＝8.4Hz,3H),0.84(s,3H).
实施例23化合物CE-063的合成路线
实验步骤
化合物2-23的合成
五缩六乙二醇(11.3mL,45mmol)溶于80mL干燥四氢呋喃中，加入50mg金属钠，室温搅拌至钠块完全反应，加入丙烯酸叔丁酯(4.35mL,30mmol)，室温搅拌过夜。减压移除四氢呋喃，往剩余物中加入80mL乙酸乙酯，水洗3次(50mL×3)，无水硫酸钠干燥，浓缩，粗产品硅胶柱层析(二氯甲烷/甲醇＝20:1)纯化得8g产品2-23，为无色油状物，产率65％。LCMS(ESI)m/z 432.9(M+Na)+。
化合物3-23的合成
上一步反应产物2-23(2.05g,5mmol)和三乙胺(0.85mL,6mmol)溶于30mL二氯甲烷中，冷却至0℃，逐滴缓慢加入甲烷磺酰氯(0.45mL,5.5mmol)。反应液升至室温搅拌2小时。加入30mL水淬灭反应，分出有机相，饱和食盐水洗涤3次(30mL×3)，无水硫酸钠干燥，浓缩得粗产品，为浅黄色油状物，直接用于下一步反应。
化合物4-23的合成
上一步反应产物3-23(2.5g,5mmol)溶于20mL N,N-二甲基甲酰胺中，加入叠氮化钠(390mg,6mmol)。反应液升至50℃搅拌4小时。将反应液冷却至室温，加入30mL水淬灭反应，乙酸乙酯萃取3次(30mL×3)，合并有机相，饱和食盐水洗3次(30mL×3)，无水硫酸钠干燥，浓缩得粗产品，硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝1:1)纯化得1.8g产品4-23，为浅黄色油状物，两步反应产率84％。LCMS(ESI)m/z 436.3(M+H)+.
化合物5-23的合成
上一步反应产物4-23(1.74g,4mmol)溶于30mL四氢呋喃和5mL水中，加入三苯基磷(1.31g,5mmol)。反应液室温搅拌过夜。减压移除四氢呋喃，加入1N稀盐酸10mL，乙酸乙酯洗涤3次(20mL×3)，水相冻干得1.5g粗产品5-23，为浅黄色油状物。LCMS(ESI)m/z 410.3(M+H)+.
化合物6-23的合成
上一步反应粗产物5-23(818mg,2mmol)溶于4mL干燥的二氯甲烷中，冰水浴冷却至0℃，逐滴缓慢加入0.8mL三氟乙酸，逐步升至室温搅拌1小时，LCMS检测原料已完全转化，常温减压移除二氯甲烷和三氟乙酸得700mg粗产品6-23，为浅黄色固体，直接用于下一步反应。LCMS(ESI)m/z 354.2(M+H)+.
化合物7-23的合成
上一步反应粗产物6-23(530mg,1.5mmol)加入饱和碳酸氢钠溶液3mL和30mL二氯甲烷，冰水浴冷却至0℃，加入Boc2O(436mg,2mmol)，升至室温搅拌2h。反应液水洗两次(20mL×2)，合并水相加入0.5M KHSO4溶液淬灭反应调节PH＝3-4，二氯甲烷萃取3次(20mL×3)，合并有机相，无水硫酸钠干燥，浓缩，剩余物硅胶柱层析(二氯甲烷/甲醇＝20:1)纯化得380mg产品7-23，为浅黄色油状物，产率56％。LCMS(ESI)m/z 453.9(M+H)+,475.9(M+Na)+.
化合物8-23的合成
将上一步产物7-23(136mg,0.3mmol)，DCC(165mg,0.8mmol)和DMAP(24mg,0.2mmol)加入一个干燥的Schlenck管中，置换氩气3次，加入1mL二氯甲烷，搅拌。将美登醇(57mg,0.1mmol)溶于4mL干燥二氯甲烷中加入。反应液室温搅拌2h，缓慢加入0.3mL水淬灭反应，加入15mL乙酸乙酯，过滤，乙酸乙酯洗涤。滤液无水硫酸钠干燥，浓缩。粗产物使用制备HPLC分离得到26mg产物8-23，为浅黄色固体，产率26％。LCMS(ESI)m/z 1000.7(M+H)+.
1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 6.84(s,1H),6.78(s,1H),6.44&6.42(dd,J1＝12.4Hz,J2＝8.4Hz,1H),6.40(s,1H),6.21(d,J＝8.8Hz,1H),5.63&5.61(dd,J1＝12.4Hz,J2＝6.8Hz,1H),5.16(br,1H),4.92(d,J＝9.2Hz,1H),4.26(t,J＝8.8Hz,1H),3.99(s,3H),3.84-3.72(m,2H),3.71-3.60(m,20H),3.55-3.51(m,2H),3.47(d,J＝6.8Hz,1H),3.35(s,3H),3.20(d,J＝10.4Hz,1H),3.16(s,3H),2.83-2.78(m,2H),2.72-2.66(m,1H),2.64(t,J＝10.0Hz,1H),2.54-2.49(m,1H),2.18(t,J＝11.2Hz,1H),1.93(d,J＝7.6Hz,2H),1.74-1.69(m,2H),1.68(s,3H),1.64(d,J＝11.2Hz,1H),1.44(s,9H),1.27(d,J＝7.6Hz,3H),0.85(s,3H).
化合物9-23的合成
上一步反应产物8-23(30mg,0.03mmol)溶于4mL干燥的二氯甲烷中，冰水浴冷却至0℃，逐滴缓慢加入0.4mL三氟乙酸，逐步升至室温搅拌1小时，LCMS检测原料已完全转化，常温减压移除二氯甲烷和三氟乙酸得20mg粗产品9-23，为浅黄色固体，直接用于下一步反应。LCMS(ESI)m/z 900.7(M+H)+.
化合物CE-063的合成
化合物9-23(20mg,0.022mmol)和CE-L-055(12mg,0.044mmol)悬浮于5mL水中，加入饱和碳酸氢钠溶液0.2mL，反应液室温搅拌2小时。粗产品直接由制备HPLC纯化得5mg产品CE-063，为白色固体，产率21％。LCMS(ESI)m/z 1073.3(M+Na)+.
1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 7.01(br,1H),6.84(s,1H),6.77(s,1H),6.69(s,2H),6.51(s,1H),6.44&6.42(dd,J1＝12.4Hz,J2＝8.4Hz,1H),6.21(d,J＝8.4Hz,1H),5.63&5.61(dd,J1＝12.4Hz,J2＝7.2Hz,1H),4.92(d,J＝9.2Hz,1H),4.26(t,J＝8.8Hz,1H),3.99(s,3H),3.84(t,J＝5.6Hz,2H),3.81-3.74(m,2H),3.70-3.60(m,22H),3.56-3.52(m,3H),3.47(d,J＝7.2Hz,1H),3.44-3.39(m,2H),3.35(s,3H),3.20(d,J＝10.4Hz,1H),3.16(s,3H),2.85-2.78(m,2H),2.72-2.66(m,1H),2.53(d,J＝6.0Hz,3H),2.24-2.15(m,2H),1.68(s,3H),1.64(d,J＝11.2Hz,1H),1.50-1.43(m,1H),1.27(s,3H),0.85(s,3H).
实施例24 T-CE-040的制备
参考Gail D.Lewis Phillips,et al.,Cancer.Res.,2008,68,9280以及TeemuT.Junttila,et al.,Breast.Cancer.Res.Treat.,2011,128,347等文献，实施例中制备的抗HER2抗体(抗人类表皮生长因子受体2抗体，Herceptin)用溶液A(100mM磷酸盐缓冲液，pH＝7.5)透析过夜，用溶液A稀释透析液至10mg/mL。加入CE-040，使CE-040与抗体的比率为6:1(摩尔当量)。然后加入DMF至DMF占总体积的30％，25℃反应35小时并不断搅拌使反应物混匀。过量的试剂和小分子药物通过装有Sephadex G-25(GE货号：17-0031-01)的凝胶过滤层析柱除去，用pH＝5.0的琥珀酸溶液预先平衡层析柱，经纯化获得T-CE-040。然后将抗体药物偶联物用pH＝5.0的琥珀酸溶液透析过夜，之后用0.22微米的过滤器过滤，4℃保存。每个Herceptin抗体最终共轭CE-040的数目通过共轭物在252nm和280nm处的吸光值和LC-MS检测来确定，再通过SEC检测偶联物是否含有多聚体。通过LC-MS确定CE-040与赫赛汀Herceptin的药物抗体比率(DAR)为3.46:1。
实施例25 T-CE-063的制备
实施例中制备的抗HER2抗体(抗人类表皮生长因子受体2抗体，Herceptin)用溶液A(25mM硼酸钠缓冲液，25mM氯化钠，1m MDTPA，PH＝7.0)透析过夜，并稀释至5mg/mL。加入5mM TCEP，使TCEP与抗体的比率为2.5:1(摩尔当量)，25℃反应2小时并不断搅拌使反应物混匀。然后加入CE-063，使CE-063与抗体的比率为10:1(摩尔当量)，并加入DMSO至DMSO占总体积的10％，25℃反应2小时并不断搅拌使反应物混匀。过量的试剂和小分子药物通过装有Sephadex G-25(GE货号：17-0031-01)的凝胶过滤层析柱除去，用pH＝7.4的磷酸缓冲盐溶液预先平衡层析柱，经纯化获得T-CE-063。然后将偶联物用PH为7.4的磷酸缓冲盐溶液透析过夜，之后用0.22微米的过滤器过滤，4℃保存。每个赫赛汀(Herceptin)抗体最终共轭CE-063的数目通过HIC检测来确定，再通过SEC检测偶联物是否含有多聚体。通过HIC测定的CE-063与Herceptin的比率(DAR)为3.52:1。
参照实施例24-25，可制备得到本发明其他抗体偶联药物。
生物活性测试
T-CE-040和T-CE-063抗体药物偶联物生物活性测试
使用Her2阳性的人BT474乳腺肿瘤细胞(简称BT474)，Her2低表达的人MCF-7乳腺肿瘤细胞(简称MCF-7)，以及在MCF-7外转Her2的人乳腺肿瘤MCF7-Her2稳转细胞株(简称MCF-7-Her2)(参照文献：Teemu T.Junttila,et al.,Breast.Cancer.Res.Treat.,2011,128,347和Jeffrey J.Wallin et al.,Clin.Cancer.Res.,2012,18,3901公开的制备重组细胞方法进行制备，本申请在此引用该文献全文)。评价了T-CE-040和T-CE-063抗体药物偶联物对肿瘤细胞的生长抑制。BT474，MCF7-Her2和MCF-7用0.25％(体积/体积)的胰蛋白酶消化，使细胞剥离，然后悬浮于100ul完全培养基，2,000个细胞接种于96孔板进行培养。37℃过夜贴壁生长，然后加入100ul含有不同浓度梯度的T-CE-040和T-CE-063抗体药物偶联物以及完全培养基。120小时后加入50ul
萤光细胞活性检测试剂(
Luminescent，Promega)进行相对细胞增殖分析。T-CE-040、T-CE-063与T-DM1对肿瘤细胞生长抑制曲线图具体见图1-图6，其中，横坐标表示药物浓度(即ADC浓度)；纵坐标表示细胞存活率(％)。由图1-图6可知，T-CE-040能有效的抑制上述三种肿瘤细胞的增殖，其效果与T-DM1相当或更优。
按照上述相同操作，测试其他化合物的生物活性，结果如下表所示：
Claims (16)
1.一种抗体药物偶联物，所述抗体药物偶联物如式IB所示：
其中：
Z为
或氧原子，当Z为氧原子时，R1不存在；Y1为氧原子、化学键或
其中x2为1-6的整数；当Z为
时，R1为氢或C1～C4的烷基，Y1为氧原子或
其中x2为1-6的整数；
R2为氢或卤素取代的C1～C4的烷基；
p为0、1或2；
m为0或1；
n为0、1或2；
q为0、1或2；
R3和R4独立的为氢、氰基或者取代或未取代C1～C4的烷基，所述的R3或R4中所述的取代或未取代C1～C4的烷基中所述的取代是指被C1～C4的烷氧基所取代；
x为0、1或2；
Q1为
其中，R8为取代或未取代C1～C4的亚烷基、
y为1、2、3或4；y1为0或1；所述的R8中所述的“取代或未取代C1～C4的亚烷基”中所述的取代是指被
所取代；t为1或2；t1为0、1或2；
R6为氢、C1～C12的烷基或
r为1或2；
R7为氢、C1～C12的烷基、C1～C12的烷氧基或
mAb表示单克隆抗体；
k为1-8中的任一数值。
2.根据权利要求1所述的抗体药物偶联物，其特征在于，
当所述的R1为C1～C4的烷基时，所述的C1～C4的烷基为甲基、乙基、丙基、丁基、异丙基、异丁基或叔丁基；
和/或，
当所述的R2为卤素取代的C1～C4的烷基时，所述的卤素取代的C1～C4的烷基中所述的卤素为氟、氯或溴；
和/或，
当所述的R2为卤素取代的C1～C4的烷基时，所述的卤素取代的C1～C4的烷基为卤素取代的甲基、卤素取代的乙基、卤素取代的丙基、卤素取代的异丙基、卤素取代的丁基、卤素取代的异丁基或卤素取代的叔丁基；
和/或，当Y1为化学键时，所述的化学键为单键；
和/或，
当所述的R3和R4独立的为取代或未取代C1～C4的烷基时，所述的未取代的C1～C4的烷基为甲基、乙基、丙基、丁基、异丙基、异丁基或叔丁基；
和/或，
当所述的R3和R4独立的为取代或未取代C1～C4的烷基时，所述的取代的C1～C4的烷基为取代的甲基、取代的乙基、取代的丙基、取代的丁基、取代的异丙基、取代的异丁基或取代的叔丁基；
和/或，
当所述的R3和R4中所述的取代或未取代C1～C4的烷基中所述的取代是指被C1～C4的烷氧基所取代时，所述的C1～C4的烷氧基为甲氧基、乙氧基、丙氧基、丁氧基、异丙氧基、异丁氧基或叔丁氧基；
和/或，
当Q1为
时，所述的
中R8为取代或未取代C1～C4的亚烷基时，所述的取代或未取代的C1～C4的亚烷基为取代或未取代的亚甲基、取代或未取代的亚乙基、取代或未取代的亚丙基、取代或未取代的亚异丙基、取代或未取代的亚丁基或取代或未取代的亚异丁基；
和/或，
当所述的R6为C1～C12的烷基时，所述的C1～C12的烷基为C1～C4的烷基；
和/或，
当所述的R7为C1～C12的烷基时，所述的C1～C12的烷基为C1～C4的烷基；
和/或，
当所述的R7为C1～C12的烷氧基时，所述的C1～C12的烷氧基为C1～C4的烷氧基；
和/或，mAb为赫赛汀。
3.根据权利要求2所述的抗体药物偶联物，其特征在于，
当所述的R2为卤素取代的甲基时，所述的卤素取代的甲基为
和/或，
当所述的R3和R4独立地为取代的甲基时，所述的取代的甲基为
和/或，
当Q1为
时，所述的
中所述的R8为取代的亚丙基时，所述的取代的亚丙基为
和/或，
当所述的R6为未取代C1～C4的烷基时，所述的未取代C1～C4的烷基为甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基或叔丁基；
和/或，
当所述的R7为未取代C1～C4的烷基时，所述的未取代C1～C4的烷基为甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基或叔丁基；
和/或，
当所述的R7为未取代C1～C4的烷氧基时，所述的未取代C1～C4的烷氧基为甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、丁氧基、异丁氧基或叔丁氧基。
4.根据权利要求1所述的抗体药物偶联物，其特征在于，其为如式Ib或Ib1所示的抗体药物偶联物，
如式Ib或Ib1所示的抗体药物偶联物中，各字母和基团的定义均同权利要求1-3任一项所述；Y为氧原子或化学键；Y2为
其中x2为1-6的整数；Q2为
t1为0、1或2。
5.一种抗体药物偶联物，其特征在于，其为下列任一化合物：
6.一种中间体，所述中间体如式IA所示：
如式IA所示的化合物中，Z为-O-；其他各字母和基团的定义均同权利要求1-3任一项所述；Q3为
t为1或2；t1为0、1或2；
R51为H、C1～C4的烷基、
或卤素，y为1、2、3或4，R9为H或C1～C4的烷基。
7.根据权利要求6所述的中间体，其特征在于，
当所述的R51为C1～C4的烷基时，所述的C1～C4的烷基为甲基、乙基、丙基、丁基、异丙基、异丁基或叔丁基；
和/或，
当R51为卤素时，所述的卤素为F、Cl、Br或I；
和/或，
当所述的R9为C1～C4的烷基时，所述的C1～C4的烷基为甲基、乙基、丙基、丁基、异丙基、异丁基或叔丁基。
8.根据权利要求6所述的中间体，其特征在于，其为如式Ia或Ia1所示的中间体：
其中，如式Ia和如式Ia1所示的中间体中各字母和基团的定义均同权利要求6或7所述；
如式Ia所示的中间体中，R5为H、C1～C4的烷基、
y为1、2、3或4；Y为氧原子或化学键；R9为H或C1～C4的烷基，其中当R9为C1～C4的烷基时，所述的C1～C4的烷基为甲基、乙基、丙基、丁基、异丙基、异丁基或叔丁基；
如式Ia1所示的中间体中，Y2为
其中x2为1-6的整数；Q2为
t1为0、1或2；R52为氢或卤素，其中当R52为卤素时，所述的卤素为F、Cl、Br或I。
9.根据权利要求8所述的中间体，其特征在于，如式Ia所示的中间体中，当R5为C1～C4的烷基时，所述的C1～C4的烷基为甲基、乙基、丙基、丁基、异丙基、异丁基或叔丁基。
10.一种中间体，其特征在于，其为下列任一化合物：
11.一种如权利要求1-5任一项所述的抗体药物偶联物的制备方法，其特征在于，其包括以下步骤：有机溶剂中，pH为6-8条件下，将中间体IA与单克隆抗体进行交联，得到抗体药物偶联物IB即可；
如式IA和如式IB所示的化合物中，R51的定义如权利要求6或7所述，其余各字母和基团的定义均同权利要求1-10任一项所述。
12.根据权利要求1-5任一项所述的抗体药物偶联物和/或根据权利要求6-10任一项所述的中间体在制备治疗和/或预防癌症的药物中的应用。
13.根据权利要求12所述的应用，其特征在于，所述的癌症为乳腺癌、淋巴癌、肺癌、肝癌、结肠癌、头颈癌、膀胱癌、肾癌、食道癌、胆囊癌、卵巢癌、胰腺癌、胃癌、宫颈癌、甲状腺癌、前列腺癌、皮肤癌；白细胞过多症、急性淋巴细胞性白血病、急性成淋巴细胞性白血病、B细胞淋巴瘤、T细胞淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、毛细胞淋巴瘤、伯基特淋巴瘤、急性和慢性髓细胞性白血病、骨髓增生异常综合征、前髓细胞白血病、纤维肉瘤、横纹肌肉瘤、星形细胞瘤、神经目细胞瘤、胶质瘤、神经鞘瘤、黑色素瘤、精原细胞瘤、畸胎癌、骨肉瘤、着色性干皮病、角质黄色瘤、甲状腺滤泡癌或卡波西肉瘤。
14.根据权利要求13所述的应用，其特征在于，所述的皮肤癌为鳞状细胞癌。
15.根据权利要求12所述的应用，其特征在于，所述的癌症的肿瘤细胞为Her2阳性的人BT474乳腺肿瘤细胞、Her2低表达的人MCF-7乳腺肿瘤细胞或在MCF-7外转Her2的人乳腺肿瘤MCF7-Her2稳转细胞株。
16.一种药物组合物，其包含根据权利要求1-5任一项所述的抗体药物偶联物和/或根据权利要求6-10任一项所述的中间体，以及一种或多种药学上可接受的辅料。
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Legal Events
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|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| CB03 | Change of inventor or designer information | ||
| CB03 | Change of inventor or designer information |
Inventor after: Xiang Shaoyun Inventor after: Liu Shifeng Inventor after: Yang Hongyu Inventor after: Ma Xingquan Inventor before: Xiang Shaoyun Inventor before: Liu Shifeng Inventor before: Yang Hongyu |
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| REG | Reference to a national code |
Ref country code: HK Ref legal event code: DE Ref document number: 1232526 Country of ref document: HK |
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| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
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| GR01 | Patent grant | ||
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