CN116785449A - 苯并吡咯并杂环类化合物及其偶联物、其制备方法及其应用 - Google Patents

苯并吡咯并杂环类化合物及其偶联物、其制备方法及其应用 Download PDF

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CN116785449A CN202310045333.5A CN202310045333A CN116785449A CN 116785449 A CN116785449 A CN 116785449A CN 202310045333 A CN202310045333 A CN 202310045333A CN 116785449 A CN116785449 A CN 116785449A
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Abstract

本披露涉及苯并吡咯并杂环类化合物及其偶联物、其制备方法及其应用。具体而言，本披露涉及一种式(DL)的化合物及其抗体‑药物偶联物，含有其的药物组合物，以及其在制备治疗癌症的药物中的用途。其中通式(DL)中的各取代基如说明书中所定义。

Description

苯并吡咯并杂环类化合物及其偶联物、其制备方法及其应用
技术领域
本披露涉及一类苯并吡咯并杂环类化合物，其抗体-药物偶联物，及其医药用途。
背景技术
PBD是一类序列选择性DNA小沟结合剂，可以阻止DNA与转录因子的结合，引起细胞复制停滞，最终导致细胞死亡。其发挥作用不依赖细胞的复制周期，引起的DNA损伤较难修复，表现出较大的细胞毒性。PBD单体的第一个例子，天然抗肿瘤抗生素蒽霉素(Anthramycin)是在20世纪60年代被发现的。
当PBD形成二聚体结构(PBD二聚体)时可极大提高细胞毒性。它用于抗体药物偶联物中的报道有很多(WO2014057074,WO2014057119,WO2015052321,WO2016166307,WO2017004026,WO2019046859等)。然而，更安全、更有效的PBD ADCs仍然在临床上有着急切的需求。
发明内容
本披露提供了一种苯并吡咯并杂环类化合物及其抗体-药物偶联物，其包含如通式(D)所示的结构：
其中：
R1为芳基、杂芳基、环烷基和杂环基，所述的芳基、杂芳基、环烷基和杂环基任选被一个或多个取代基所取代，其中每个取代基独立地选自卤素、卤代烷基、氨基、羟基、羟烷基、烷基和烷氧基；
R2为H、烷基或环烷基；
A为*-CH(R3)-NH-#，*-C(O)-NH-#或*-C(R3)＝N-#；
R3为H、烷基或环烷基；
R4为H、烷基或环烷基；
R5为H、卤素、烷基或环烷基；
R6为H、烷基或环烷基；
R7为H、烷基或环烷基；
X为键或亚烷基；
n选自1-8。
在一些实施方案中，前述的抗体-药物偶联物或其可药用的盐，其如下式所示：
其中，Pc为抗体，该抗体的糖链是未重构的或重构的糖链；
L为连接子；Pc通过其氨基酸或糖链与L结合，
y为约1至约10；
D为如式(D)所示的药物：
其中：
R1为芳基、杂芳基、环烷基和杂环基，所述的芳基、杂芳基、环烷基和杂环基任选被一个或多个取代基所取代，其中每个取代基独立地选自卤素、卤代烷基、氨基、羟基、羟烷基、烷基和烷氧基；
R2为H、烷基或环烷基；
A为*-CH(R3)-NH-#，*-C(O)-NH-#或*-C(R3)＝N-#；
R3为H、烷基或环烷基；
R4为H、烷基或环烷基；
R5为H、卤素、烷基或环烷基；
R6为H、烷基或环烷基；
R7为H、烷基或环烷基；
X为键或亚烷基；
n选自1-8。
在一些实施方案中，前述的抗体-药物偶联物或其可药用的盐，其中所述R1为苯基、吡啶基、C3-6环烷基、萘基或喹啉基，所述的苯基、吡啶基、C3-6环烷基、萘基或喹啉基任选被一个或多个取代基所取代，其中每个取代基独立地选自卤素、C1-6卤代烷基、氨基、羟基、C1-6羟烷基、C1-6烷基和C1-6烷氧基；
优选地，R1为苯基或吡啶基，所述的苯基或吡啶基任选被一个或多个取代基所取代，其中每个取代基独立地选自卤素、C1-6卤代烷基、氨基、羟基、C1-6羟烷基、C1-6烷基和C1-6烷氧基。
在一些实施方案中，前述的抗体-药物偶联物或其可药用的盐，其中所述R2为H或C1-6烷基；优选地，R2为甲基。
在一些实施方案中，前述的抗体-药物偶联物或其可药用的盐，其中所述A为*-CH2-NH-#，*-C(O)-NH-#或*-CH＝N-#。
在一些实施方案中，前述的抗体-药物偶联物或其可药用的盐，其中所述R4为H，R5为H，R6为C1-6烷基，R7为C1-6烷基。
在一些实施方案中，前述的抗体-药物偶联物或其可药用的盐，其中所述n选自3，4，5和6；优选地，n为5。
在一些实施方案中，前述的抗体-药物偶联物或其可药用的盐，其中所述X为键或C1-6亚烷基；优选地，X为键。
在一些实施方案中，前述的抗体-药物偶联物或其可药用的盐，其中
R1为苯基、吡啶基、C3-6环烷基、萘基或喹啉基，所述的苯基、吡啶基、C3-6环烷基、萘基或喹啉基任选被一个或多个取代基所取代，其中每个取代基独立地选自卤素、C1-6卤代烷基、氨基、羟基、C1-6羟烷基、C1-6烷基和C1-6烷氧基；
R2为H或C1-6烷基；
A为*-CH2-NH-#，*-C(O)-NH-#或*-CH＝N-#；
R4为H，R5为H，R6为C1-6烷基，R7为C1-6烷基；
n选自3，4，5和6；X为键或C1-6烷基。
在一些实施方案中，前述的抗体-药物偶联物或其可药用的盐，其中通式(D)所示的结构为通式(DI)所示的结构：
其中R1为苯基，所述的苯基任选被一个或多个取代基所取代，其中每个取代基独立地选自卤素、C1-6卤代烷基、氨基、羟基、C1-6羟烷基、C1-6烷基和C1-6烷氧基；
R2为H或C1-6烷基；
A为*-CH2-NH-#，*-C(O)-NH-#或*-CH＝N-#；
n选自3，4，5和6。
在一些实施方案中，前述的抗体-药物偶联物或其可药用的盐，其中L为-La-Lb-Lc-Ld-，
La选自
其中星号表示与Lb结合，波浪线表示与Pc的重构的糖链结合；
Lb选自-C(O)-CH2CH2-C(O)-，-C(O)-(CH2CH2)2-C(O)-，-C(O)
-CH2CH2-C(O)-NH-(CH2CH2)2-C(O)-，
-C(O)-CH2CH2-C(O)-NH-(CH2CH2O)2-CH2-C(O)-，-C(O)-CH2CH2-NH-C(O)-(CH2CH2O)4-CH2 CH2-C(O)-，-CH2-OC(O)-和-OC(O)-；
Lc为由2至7个氨基酸残基构成的肽残基，其中所述氨基酸残基是由苯丙氨酸、丙氨酸、脯氨酸、异亮氨酸、甘氨酸、缬氨酸、赖氨酸、瓜氨酸、丝氨酸、谷氨酸或天冬氨酸所形成的残基，所述氨基酸残基是未被取代的或各自独立地被一个或多个取代基所取代，其中每个取代基独立地选自卤素、羟基、氰基、氨基、C1-6烷基、卤代C1-6烷基、C1-6烷氧基和C3-6环烷基；
Ld为-NH-Ra-CH2O-C(O)-、-NH-CH2O-Rb-C(O)-或键；
Ra为苯基或5-6元杂环基，所述苯基和5-6元杂环基是未被取代的或各自独立地被一个或多个取代基所取代，其中每个取代基独立地选自卤素、氧代基、羟基、氰基、氨基、C1-6烷基、卤代C1-6烷基和C1-6烷氧基；
Rb为C1-6烷基或C3-6环烷基，所述C1-6烷基和C3-6环烷基是未被取代的或各自独立地被一个或多个取代基所取代，其中每个取代基独立地选自卤素、氧代基、羟基、氰基、氨基、C1-6烷基、C3-6环烷基、5-6元杂环基、卤代C1-6烷基和C1-6烷氧基。
在一些实施方案中，前述的抗体-药物偶联物或其可药用的盐，其中Lb为
-C(O)-CH2CH2-C(O)-。
在一些实施方案中，前述的抗体-药物偶联物或其可药用的盐，其中Lc为-GGVA-、-VA-、-GGFG-、-GGPI-、-GGVCit-、-GGVK-和-GGPL-；优选为-GGVA-。
在一些实施方案中，前述的抗体-药物偶联物或其可药用的盐，其中
Ld为-NH-Ra-CH2O-C(O)-，Ra为1,4-苯基。
在一些实施方案中，前述的抗体-药物偶联物或其可药用的盐，其中
Lb为-C(O)-CH2CH2-C(O)-；
Lc为-GGVA-、-VA-、-GGFG-、-GGPI-、-GGVK-和-GGPL-；优选为-GGVA-；
Ld为-NH-Ra-CH2O-C(O)-，Ra为1,4-苯基。
在一些实施方案中，前述的抗体-药物偶联物或其可药用的盐，所述抗体Pc为与肿瘤细胞结合且能被吞入肿瘤细胞内的抗体，优选自抗ROR1抗体、抗HER2(ErbB2)抗体、抗EGFR抗体、抗B7H3抗体、抗c-Met抗体、抗HER3(ErbB3)抗体、抗HER4(ErbB4)抗体、抗CD20抗体、抗CD22抗体、抗CD30抗体、抗CD33抗体、抗CD44抗体、抗CD56抗体、抗CD70抗体、抗CD73抗体、抗CD105抗体、抗CEA抗体、抗A33抗体、抗Cripto抗体、抗EphA2抗体、抗G250抗体、抗MUCl抗体、抗Lewis Y抗体、抗VEGFR抗体、抗GPNMB抗体、抗Integrin抗体、抗PSMA抗体、抗Tenascin-C抗体、抗Trop2抗体、抗CD79b抗体、抗SLC44A4抗体或抗Mesothelin抗体。
在一些实施方案中，前述的抗体-药物偶联物或其可药用的盐，其中所述抗体为抗ROR1抗体，其包含重链可变区和轻链可变区，其中：
所述重链可变区包含分别如SEQ ID NO：4，SEQ ID NO：5和SEQ ID NO：6所示的HCDR1，HCDR2和HCDR3；和
所述轻链可变区包含分别如SEQ ID NO：7，SEQ ID NO：8和SEQ ID NO：9所示的LCDR1，LCDR2和LCDR3。
在一些实施方案中，前述的抗体-药物偶联物或其可药用的盐，其中所述抗体为抗ROR1抗体，其包含重链可变区和轻链可变区，其中：
所述重链可变区，其氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示；和
所述轻链可变区，其氨基酸序列如SEQ ID NO：3所示。
在一些实施方案中，前述的抗体-药物偶联物或其可药用的盐，其中所述抗体为抗ROR1抗体，其包含：
如SEQ ID NO：12所示的重链和如SEQ ID NO：13所示的轻链。
在一些实施方案中，前述的抗体-药物偶联物或其可药用的盐，其中所述y为1-8，优选为1-5。
在一些实施方案中，前述的抗体-药物偶联物或其可药用的盐，其中所述y为1-4，优选自约1，约2，约3和约4，更优选为约4。
y(DAR值)值的约为±1，优选约为±0.5。
在一些实施方案中，前述的抗体-药物偶联物或其可药用的盐，所述Pc通过与其重链第297位Asn结合的糖链与L结合，所述糖链为N297糖链。
在一些实施方案中，前述的抗体-药物偶联物或其可药用的盐，所述N297糖链结构选自N297-(Fuc)SG1、N297-(Fuc)SG2、N297-(Fuc)SG3、N297-(Fuc)SG4和N297-(Fuc)SG5：
结构简写如下：
结构简写如下：
结构简写如下：
结构简写如下：
结构简写如下：
式中，波浪线表示与Pc重链第297位的Asn结合，L(PEG)表示-(CH2CH2O)qCH2CH2-NH-，q选自0-20，优选自1-10，星号表示与所述连接子L结合；
Gal代表半乳糖；GlcNAc代表N-乙酰基半乳糖；Man代表甘露糖；Fuc代表岩藻糖；NeuAc代表N-乙酰基神经氨酸。
在一些实施方案中，前述的抗体-药物偶联物或其可药用的盐，其为如下结构：
其中Pc’为除N297糖链以外的Pc的结构，L，D如前所定义，t选自1或2，N297糖链如前所定义。
在一些实施方案中，前述的抗体-药物偶联物或其可药用的盐，其选自：
组1：
组2：
在另一方面，本披露提供一种式(DL)所示的化合物或其可药用的盐：
其中：
R1为芳基、杂芳基、环烷基和杂环基，所述的芳基、杂芳基、环烷基和杂环基任选被一个或多个取代基所取代，其中每个取代基独立地选自卤素、卤代烷基、氨基、羟基、羟烷基、烷基和烷氧基；
R2为H、烷基或环烷基；
A为*-CHR3-NH-#，*-C(O)-NH-#或*-CR3＝N-#；
R3为H、烷基或环烷基；
R4为H、烷基或环烷基；
R5为H、卤素、烷基或环烷基；
R6为H、烷基或环烷基；
R7为H、烷基或环烷基；
X为键或亚烷基；
n选自1-8；
R8为-La’-Lb-Lc-Ld-：
La’为
Lb选自-C(O)-CH2CH2-C(O)-，-C(O)-(CH2CH2)2-C(O)-，-C(O)
-CH2CH2-C(O)-NH-(CH2CH2)2-C(O)-，
-C(O)-CH2CH2-C(O)-NH-(CH2CH2O)2-CH2-C(O)-，-C(O)-CH2CH2-NH-C(O)-(CH2CH2O)4-CH2 CH2-C(O)-，-CH2-OC(O)-和-OC(O)-；
Lc为由2至7个氨基酸残基构成的肽残基，其中所述氨基酸残基是由苯丙氨酸、丙氨酸、脯氨酸、异亮氨酸、甘氨酸、缬氨酸、赖氨酸、瓜氨酸、丝氨酸、谷氨酸或天冬氨酸所形成的残基，所述氨基酸残基是未被取代的或各自独立地被一个或多个取代基所取代，其中每个取代基独立地选自卤素、羟基、氰基、氨基、C1-6烷基、卤代C1-6烷基、C1-6烷氧基和C3-6环烷基；
Ld为-NH-Ra-CH2O-C(O)-、-NH-CH2O-Rb-C(O)-或键；
Ra为1,4-苯基或5-6元杂环基，所述苯基和5-6元杂环基是未被取代的或各自独立地被一个或多个取代基所取代，其中每个取代基独立地选自卤素、氧代基、羟基、氰基、氨基、C1-6烷基、卤代C1-6烷基和C1-6烷氧基；
Rb为C1-6烷基或C3-6环烷基，所述C1-6烷基和C3-6环烷基是未被取代的或各自独立地被一个或多个取代基所取代，其中每个取代基独立地选自卤素、氧代基、羟基、氰基、氨基、C1-6烷基、C3-6环烷基、5-6元杂环基、卤代C1-6烷基和C1-6烷氧基；
R9为H、羟基或烷氧基；
或者R8和R9与相连的原子一起形成亚胺键(N＝C)。
在一些实施方案中，前述的化合物或其可药用的盐，其中R8和R9与相连的原子一起形成亚胺键(N＝C)。
在一些实施方案中，前述的化合物或其可药用的盐，其中
R8为-La’-Lb-Lc-Ld-：
La’为
Lb选自-C(O)-CH2CH2-C(O)-，-C(O)-(CH2CH2)2-C(O)-，-C(O)
-CH2CH2-C(O)-NH-(CH2CH2)2-C(O)-，
-C(O)-CH2CH2-C(O)-NH-(CH2CH2O)2-CH2-C(O)-，-C(O)-CH2CH2-NH-C(O)-(CH2CH2O)4-CH2 CH2-C(O)-，-CH2-OC(O)-和-OC(O)-；
Lc为由2至7个氨基酸残基构成的肽残基，其中所述氨基酸残基是由苯丙氨酸、丙氨酸、脯氨酸、异亮氨酸、甘氨酸、缬氨酸、赖氨酸、瓜氨酸、丝氨酸、谷氨酸或天冬氨酸所形成的残基，所述氨基酸残基是未被取代的或各自独立地被一个或多个取代基所取代，其中每个取代基独立地选自卤素、羟基、氰基、氨基、C1-6烷基、卤代C1-6烷基、C1-6烷氧基和C3-6环烷基；
Ld为-NH-Ra-CH2O-C(O)-、-NH-CH2O-Rb-C(O)-或键；
Ra为1,4-苯基或5-6元杂环基，所述1,4-苯基和5-6元杂环基是未被取代的或各自独立地被一个或多个取代基所取代，其中每个取代基独立地选自卤素、氧代基、羟基、氰基、氨基、C1-6烷基、卤代C1-6烷基和C1-6烷氧基；
Rb为C1-6烷基或C3-6环烷基，所述C1-6烷基和C3-6环烷基是未被取代的或各自独立地被一个或多个取代基所取代，其中每个取代基独立地选自卤素、氧代基、羟基、氰基、氨基、C1-6烷基、C3-6环烷基、5-6元杂环基、卤代C1-6烷基和C1-6烷氧基。
在一些实施方案中，前述的化合物或其可药用的盐，其中R9为H或羟基；优选地，R9为羟基。
在另一方面，本披露提供一种式(DL-1)所示的化合物或其可药用的盐：
其中：
R1为芳基、杂芳基、环烷基和杂环基，所述的芳基、杂芳基、环烷基和杂环基任选被一个或多个取代基所取代，其中每个取代基独立地选自卤素、卤代烷基、氨基、羟基、羟烷基、烷基和烷氧基；
R2为H、烷基或环烷基；
A为*-CHR3-NH-#，*-C(O)-NH-#或*-CR3＝N-#；
R3为H、烷基或环烷基；
R4为H、烷基或环烷基；
R5为H、卤素、烷基或环烷基；
R6为H、烷基或环烷基；
R7为H、烷基或环烷基；
X为键或亚烷基；
n选自1-8。
在一些实施方案中，前述的化合物或其可药用的盐，其中所述R1为苯基、吡啶基、C3-6环烷基、萘基或喹啉基，所述的苯基、吡啶基、C3-6环烷基、萘基或喹啉基任选被一个或多个取代基所取代，其中每个取代基独立地选自卤素、C1-6卤代烷基、氨基、羟基、C1-6羟烷基、C1-6烷基和C1-6烷氧基；
优选地，R1为苯基或吡啶基，所述的苯基或吡啶基任选被一个或多个取代基所取代，其中每个取代基独立地选自卤素、C1-6卤代烷基、氨基、羟基、C1-6羟烷基、C1-6烷基和C1-6烷氧基。
在一些实施方案中，前述的化合物或其可药用的盐，其中所述A为*-CH2-NH-#，*-C(O)-NH-#或*-CH＝N-#。
在一些实施方案中，前述的化合物或其可药用的盐，其中
R1为苯基、吡啶基、C3-6环烷基、萘基或喹啉基，所述的苯基、吡啶基、C3-6环烷基、萘基或喹啉基任选被一个或多个取代基所取代，其中每个取代基独立地选自卤素、C1-6卤代烷基、氨基、羟基、C1-6羟烷基、C1-6烷基和C1-6烷氧基；
R2为H或C1-6烷基；
A为*-CH2-NH-#，*-C(O)-NH-#或*-CH＝N-#；
R4为H，R5为H，R6为C1-6烷基，R7为C1-6烷基；
n选自3，4，5和6；X为键或C1-6烷基；
R8和R9与相连的原子一起形成亚胺键(N＝C)。
在一些实施方案中，前述的化合物或其可药用的盐，其中
R1为苯基，所述的苯基任选被一个或多个取代基所取代，其中每个取代基独立地选自卤素、C1-6卤代烷基、氨基、羟基、C1-6羟烷基、C1-6烷基和C1-6烷氧基；
R2为H或C1-6烷基；
A为*-CH2-NH-#，*-C(O)-NH-#或*-CH＝N-#；
R4为H，R5为H，R6为C1-6烷基，R7为C1-6烷基；
n选自3，4，5和6；X为键；
R8和R9与相连的原子一起形成亚胺键(N＝C)。
本披露公开的典型化合物包括但不限于：
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在一些实施方案中，前述的化合物或其可药用的盐，其选自
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在另一方面，本披露提供一种抗体-药物偶联物或其可药用的盐，其包含如前任一项所述的式(DL)的化合物或其可药用的盐。
在另一方面，本披露提供一种药物组合物，其含有治疗有效量的如前任一项所述的抗体-药物偶联物或其可药用的盐，或如前任一项所述的式(DL)所示化合物或其可药用的盐，以及药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。
在另一方面，本披露提供如前任一项所述的抗体-药物偶联物或其可药用的盐，或如前任一项所述的式(DL)所示化合物或其可药用的盐，或如前所述的药物组合物用作药物。
在另一方面，本披露提供如前任一项所述的抗体-药物偶联物或其可药用的盐，或如前任一项所述的式(DL)所示化合物或其可药用的盐，或如前所述的药物组合物用作药物在制备用于治疗或预防肿瘤的药物中的用途；
优选地，所述肿瘤选自卵巢癌、肺癌、胃癌、子宫内膜癌、睾丸癌、宫颈癌、胎盘绒毛膜癌、肾癌、尿路上皮癌、大肠癌、前列腺癌、多形性神经胶质母细胞瘤、脑肿瘤、胰腺癌、乳腺癌、黑色素瘤、肝癌、膀胱癌和食道癌。
另一方面，本披露进一步涉及一种用于治疗和/或预防肿瘤或癌症的方法，该方法包括向需要其的受试者施用治疗有效剂量的如前任一项所述的抗体-药物偶联物或其可药用的盐，或如前任一项所述的式(DL)所示化合物或其可药用的盐，或如前所述的药物组合物用作药物；
优选地，所述肿瘤或癌症选自卵巢癌、肺癌、胃癌、子宫内膜癌、睾丸癌、宫颈癌、胎盘绒毛膜癌、肾癌、尿路上皮癌、大肠癌、前列腺癌、多形性神经胶质母细胞瘤、脑肿瘤、胰腺癌、乳腺癌、黑色素瘤、肝癌、膀胱癌和食道癌。
可将活性化合物(包括化合物或抗体药物偶联物)制成适合于通过任何适当途径给药的形式，通过常规方法使用一种或多种药学上可接受的载体来配制本披露的组合物。因此，本披露的活性化合物可以配制成用于口服给药、注射(例如静脉内、肌肉内或皮下)给药，吸入或吹入给药的各种剂型。本披露的化合物也可以配制成持续释放剂型，例如片剂、硬或软胶囊、水性或油性混悬液、乳剂、注射液、可分散性粉末或颗粒、栓剂、锭剂或糖浆。
作为一般性指导，活性化合物优选是以单位剂量的方式，或者是以患者可以以单剂自我给药的方式。本披露化合物或组合物的单位剂量的表达方式可以是片剂、胶囊、扁囊剂、瓶装药水、药粉、颗粒剂、锭剂、栓剂、再生药粉或液体制剂。合适的单位剂量可以是0.1mg～1000mg。
本披露的药物组合物除活性化合物外，可含有一种或多种辅料，所述辅料选自以下成分：填充剂、稀释剂、粘合剂、润湿剂、崩解剂或赋形剂等。根据给药方法的不同，组合物可含有0.1至99重量％的活性化合物。
含活性成分的药物组合物可以是适用于口服的形式，例如片剂、糖锭剂、锭剂、水或油混悬液、可分散粉末或颗粒、乳液、硬或软胶囊，或糖浆剂或酏剂。可按照本领域任何已知制备药用组合物的方法制备口服组合物，此类组合物可含有粘合剂、填充剂、润滑剂、崩解剂或药学上可接受的润湿剂等，此类组合物还可以含有一种或多种选自以下的成分：甜味剂、矫味剂、着色剂和防腐剂，以提供悦目和可口的药用制剂。
水悬浮液含有活性物质和用于混合的适宜制备水悬浮液的赋形剂。水混悬液也可以含有一种或多种防腐剂例、一种或多种着色剂、一种或多种矫味剂和一种或多种甜味剂。
油混悬液可通过使活性成分悬浮于植物油中配制而成。油悬浮液可含有增稠剂。可加入上述的甜味剂和矫味剂，以提供可口的制剂。
药物组合物还可以是用于制备水混悬液的可分散粉末和颗粒提供活性成分，通过加入水混合分散剂、湿润剂、悬浮剂或防腐剂中的一种或多种。也可加入其他赋形剂例如甜味剂、矫味剂和着色剂。通过加入抗氧化剂例如抗坏血酸保存这些组合物。
本披露的药物组合物也可以是水包油乳剂的形式。
药物组合物可以是无菌注射水溶液形式。可以使用的可接受的溶媒或溶剂有水、林格氏液和等渗氯化钠溶液。无菌注射制剂可以是其中活性成分溶于油相的无菌注射水包油微乳。例如将活性成分溶于大豆油和卵磷脂的混合物中。然后将油溶液加入水和甘油的混合物中处理形成微乳。可通过局部大量注射，将注射液或微乳注入受试者的血流中。或者，最好按可保持本披露化合物恒定循环浓度的方式给予溶液和微乳。为保持这种恒定浓度，可使用连续静脉内递药装置。这种装置的实例是Deltec CADD-PLUS.TM.5400型静脉注射泵。
药物组合物可以是用于肌内和皮下给药的无菌注射水或油混悬液的形式。可按已知技术，用上述那些适宜的分散剂或湿润剂和悬浮剂配制该混悬液。无菌注射制剂也可以是在肠胃外可接受的无毒稀释剂或溶剂中制备的无菌注射溶液或混悬液。此外，可方便地用无菌固定油作为溶剂或悬浮介质。
可按用于直肠给药的栓剂形式给予本披露化合物。可通过将药物与在普通温度下为固体但在直肠中为液体，因而在直肠中会溶化而释放药物的适宜的无刺激性赋形剂混合来制备这些药物组合物。此类物质包括可可脂、甘油明胶、氢化植物油、各种分子量的聚乙二醇和聚乙二醇的脂肪酸酯的混合物。
如本领域技术人员所熟知的，药物的给药剂量依赖于多种因素，包括但并非限定于以下因素：所用具体化合物的活性、受试者的年龄、受试者的体重、受试者的健康状况、受试者的行为、受试者的饮食、给药时间、给药方式、排泄的速率、药物的组合、疾病的严重性等；另外，最佳的治疗方式如治疗的模式、化合物的日用量或可药用的盐的种类可以根据传统的治疗方案来验证。
本披露涉及靶向不同癌细胞、传染病生物体的能力改进和/或用于治疗自身免疫性疾病的偶联物，该偶联物包含靶向(结合)部分和属于药物的治疗部分。抗体靶向部分与化合物治疗部分经由增加治疗效力的胞内可裂解的键连接。
具体实施方式
术语
本文所用的术语只是为了描述实施方案的目的，并非旨在进行限制。除非另外定义，本文所用的全部技术术语和科学术语具有与本披露所属领域的普通技术人员通常所理解的相同意义。
除非上下文另外清楚要求，否则在整个说明书和权利要求书中，应将词语“包含”、“具有”、“包括”等理解为具有包含意义，而不是排他性或穷举性意义；也即，“包括但不仅限于”的意义。除非另有说明，“包含”包括了“由……组成”。
本披露所述的“抗体”在本文中以最广意义使用，并且包括不同的抗体结构，包括，但不限于，单克隆抗体，多克隆抗体，鼠源抗体、嵌合抗体、人源化抗体、多特异性抗体(例如，双特异性抗体)和抗原结合片段，只要它们显示所需的抗原结合活性和特异性即可。
术语抗体-药物偶联物(antibody drug conjugate，ADC)，指把单克隆抗体或者抗体片段通过连接单元与具有生物活性的毒性药物相连。本披露所描述的抗体或抗体片段可以通过任何方式偶联至效应分子。举例来说，抗体或抗体片段可以通过化学或重组方式附接至细胞毒性药物。制备融合物或偶联物的化学方式在本领域中是已知的。用于偶联抗体或抗体片段和药物的方法必须能够连接抗体与细胞毒性药物而不会干扰抗体或抗体片段结合至标靶分子的能力。
术语“药物”是指具有生物学活性的物质，例如细胞毒性剂或免疫调节剂。细胞毒性剂是能在肿瘤细胞内具有较强破坏其正常生长的化学分子。本披露的一些实施方案中，药物可以表示为D。
近年来已经报道了通过酶促反应等重构不均匀抗体的糖蛋白质并均匀引入具有官能团的糖链的方法(ACS Chemical Biology2012,7,110，ACS MedicinalChemistryLetters2016,7,1005)。已经尝试通过使用这种糖链重构技术部位特异性地导入药物，合成均匀的ADC(Bioconjugate Chemistry 2015,26,2233，Angew.Chem.Int.Ed.2016,55,2361-2367，US2016361436)。
本披露中的糖链的重构首先使用水解酶切除附加到蛋白质(抗体等)中的不均匀的糖链而仅仅留下末端的GlcNAc，制备添加了GlcNAc的均匀蛋白质部分(以下称为“受体”)。接着，准备另行制备的任意的糖链(以下称为“供体”)，使用糖基转移酶连结该受体和供体。由此可合成具有任意糖链结构的均匀的糖蛋白。
本披露中，“糖链”是指两个以上的单糖通过糖苷键连接的结构单元。具体的单糖或者糖链有时可以缩写形式表示，例如“GlcNAc－”、“MSG－”。结构式中使用这些缩写描述时，除非另有说明，否则还原末端上归属于与其它结构单元的糖苷键的氧原子或氮原子并不包含在表示该糖链的缩写中。
本披露中，除非另有说明，为方便起见，对作为糖链的基本单元的单糖的记载中，将其环结构中与构成环的氧原子结合且与羟基(或归属于糖苷键的氧原子)直接结合的碳原子标记为1位(仅唾液酸中为2位)。实施例化合物的名称以化学结构整体来标记，并不一定适用该规则。
本披露中，以符号(例如GLY、SG、MSG、GlcNAc等)来表示糖链时，除非有特别定义，否则连还原末端的碳都包含在符号中，但归属于N－或O－糖苷键中的N或O不包含在该符号中。
本披露中，如果没有特别说明，氨基酸的侧链与糖链连接时的部分结构用括号表示侧链部分，例如“(SG－)Asn”这样的表示。
抗体或其功能性片段可从其氨基酸残基(例如半胱氨酸、赖氨酸等)的侧链直接与L结合，或者可从抗体的糖链或重构的糖链与L结合，优选从抗体的糖链或重构的糖链与L结合，更优选从抗体的重构的糖链与L结合。
本披露的抗体的糖链为N连接型糖链或O连接型糖链。
N连接型糖链通过N糖苷键与抗体的氨基酸侧链结合，O连接型糖链通过O糖苷键与抗体的氨基酸侧链结合。
已知IgG在其重链的Fc区中的第297号天冬酰胺残基(以下称为“Asn297或N297”)中具有高度保守的N连接型糖链，有助于抗体分子的活性或动态等(Biotechnol.Prog.,2012,28,608-622,Sanglier-Cianferani,S.,Anal.Chem.,2013,85,715-736)。IgG恒定区中的氨基酸序列高度保守，在Edelmanetal.,(Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.,Vol.63,No.1(May15,1969),pp.78-85)中，各氨基酸被Eu编号(Eu INDEX)确定。例如，Fc区中N连接型糖链加成的Asn297相当于Eu编号中的297位，即使由于分子片段化或区域缺损而实际的氨基酸位置发生变化，也可通过Eu编号表示而唯一地确定氨基酸。
本披露的抗体－药物偶联物中，优选抗体或其功能性片段从与其Asn297的侧链结合的糖链(以下称为“N297糖链”)与L结合，更优选抗体或其功能性片段从所述N297糖链与L结合，该N297糖链为重构的糖链。
下式表示本披露的抗体－药物偶联物中抗体或其功能性片段从所述N297糖链与L结合的情况。
本披露的具有该重构的糖链的抗体称为糖链重构抗体。
SGP为Sialyl Glyco Peptide(唾液酸糖肽)的简称，是N连接型复合糖链的代表。可从鸡蛋的蛋黄中根据例如WO2011/0278681所述的方法分离、精制得到SGP。或者从市售所得。
本披露中，将仅在SG(10)的β－Man支链中的任意一方缺失了非还原末端的唾液酸的糖链结构称为MSG(9)，将仅在支链的1－3糖链具有唾液酸的糖链称为MSG1，将仅在支链的1－6糖链具有唾液酸的糖链称为MSG2。
术语“接头单元”、“连接片段”或“连接单元”是指一端与抗体或抗体片段连接而另一端与药物相连的化学结构片段或键，也可以连接其他接头后再与药物相连。接头单元可以包含一种或多种接头构件。示例性的接头构件包括6-马来酰亚氨基己酰基、马来酰亚氨基丙酰基、缬氨酸-瓜氨酸、缬氨酸-丙氨酸、丙氨酸-苯丙氨酸、对氨基苄氧羰基、N-琥珀酰亚氨基4-(2-吡啶基硫代)戊酸酯、N-琥珀酰亚氨基4-(N-马来酰亚氨基甲基)环己烷-1羧酸酯和N-琥珀酰亚氨基(4-碘-乙酰基)氨基苯甲酸酯。接头可以包括延伸物、间隔物和氨基酸单元，可以通过本领域已知方法合成，诸如US20050238649A1中所记载的。接头可以是便于在细胞中释放药物的“可切割接头”。例如，可使用酸不稳定接头(例如腙)、蛋白酶敏感(例如肽酶敏感)接头、光不稳定接头、二甲基接头、或含二硫化物接头(Chari等，CancerResearch 52:127-131(1992)；美国专利NO.5208020)。
术语“肽”是指由2个或2个以上氨基酸分子通过肽键相互连接而成的分子。
术语“载药量”也称为药物抗体比例(Drug-to-Antibody Ratio，DAR)，即抗体-药物偶联物中每个抗体所偶联的药物的平均数量。载药量可在例如每个抗体偶联约1至约10个药物的范围内。在一些实施方式中，载药量在每个抗体偶联约1至约8个药物的范围内，优选在2-8，2-7，2-6，2-5，2-4，3-4，3-5，5-6，5-7，5-8和6-8的范围内。示例性的，载药量可以为1，2，3，4，5，6，7，8，9或10。在本披露的实施方式中，载药量可表示为y。可用常规方法如UV/可见光光谱法，质谱，ELISA试验和RP-HPLC测定载药量。
本披露的实施方式中，细胞毒性药物通过连接单元偶联在抗体的巯基上。
本披露的实施方式中，抗体通过其N297糖链与L结合，所述N297糖链结合于抗体重链第297位的Asn。
载药量可以用以下非限制性的方法控制，包括：
(1)控制药物连接单元和单抗的摩尔比，
(2)控制反应时间和温度，
(3)选择不同的反应试剂。
术语“烷基”指饱和的直链或带有支链的脂肪族烃基，其具有1至20个(例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20个)碳原子(即C1-20烷基)。所述烷基优选具有1至12个碳原子的烷基(即C1-12烷基)，更优选具有1至6个碳原子的烷基(即C1-6烷基)。非限制性的实例包括：甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、仲丁基、正戊基、1,1-二甲基丙基、1,2-二甲基丙基、2,2-二甲基丙基、1-乙基丙基、2-甲基丁基、3-甲基丁基、正己基、1-乙基-2-甲基丙基、1,1,2-三甲基丙基、1,1-二甲基丁基、1,2-二甲基丁基、2,2-二甲基丁基、1,3-二甲基丁基、2-乙基丁基、2-甲基戊基、3-甲基戊基、4-甲基戊基、2,3-二甲基丁基、正庚基、2-甲基己基、3-甲基己基、4-甲基己基、5-甲基己基、2,3-二甲基戊基、2,4-二甲基戊基、2,2-二甲基戊基、3,3-二甲基戊基、2-乙基戊基、3-乙基戊基、正辛基、2,3-二甲基己基、2,4-二甲基己基、2,5-二甲基己基、2,2-二甲基己基、3,3-二甲基己基、4,4-二甲基己基、2-乙基己基、3-乙基己基、4-乙基己基、2-甲基-2-乙基戊基、2-甲基-3-乙基戊基、正壬基、2-甲基-2-乙基己基、2-甲基-3-乙基己基、2,2-二乙基戊基、正癸基、3,3-二乙基己基、2,2-二乙基己基，及其各种支链异构体等。烷基可以是取代的或非取代的，当被取代时，其可以在任何可使用的连接点被取代，取代基优选选自D原子、卤素、烷氧基、卤代烷基、卤代烷氧基、环烷基氧基、杂环基氧基、羟基、羟烷基、氰基、氨基、硝基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基中的一个或多个。
术语“亚烷基”指二价烷基，其中烷基如上所定义，其具有1至20个(例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20个)碳原子(即C1-20亚烷基)。所述亚烷基优选具有1至12个碳原子的亚烷基(即C1-12亚烷基)，更优选具有1至6个碳原子的亚烷基(即C1-6亚烷基)。非限制性的实例包括：-CH2-、-CH(CH3)-、-C(CH3)2-、-CH2CH2-、-CH(CH2CH3)-、-CH2CH(CH3)-、-CH2C(CH3)2-、-CH2CH2CH2-、-CH2CH2CH2CH2-等。亚烷基可以是取代的或非取代的，当被取代时，其可以在任何可使用的连接点被取代，取代基优选选自D原子、卤素、烷氧基、卤代烷基、卤代烷氧基、环烷基氧基、杂环基氧基、羟基、羟烷基、氰基、氨基、硝基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基中的一个或多个。
术语“烯基”指分子中含有至少一个碳碳双键的烷基，其中烷基的定义如上所述，其具有2至12个(例如2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12个)碳原子(即C2-12烯基)。所述烯基优选具有2至6个碳原子的烯基(即C2-6烯基)。非限制性的实例包括：乙烯基、丙烯基、异丙烯基、丁烯基等。烯基可以是取代的或非取代的，当被取代时，其可以在任何可使用的连接点被取代，取代基优选选自D原子、烷氧基、卤素、卤代烷基、卤代烷氧基、环烷基氧基、杂环基氧基、羟基、羟烷基、氰基、氨基、硝基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基中的一个或多个。
术语“炔基”指分子中含有至少一个碳碳三键的烷基，其中烷基的定义如上所述，其具有2至12个(例如2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12个)碳原子(即C2-12炔基)。所述炔基优选具有2至6个碳原子的炔基(即C2-6炔基)。非限制性的实例包括：乙炔基、丙炔基、丁炔基、戊炔基、己炔基等。炔基可以是取代的或非取代的，当被取代时，其可以在任何可使用的连接点被取代，取代基优选选自D原子、烷氧基、卤素、卤代烷基、卤代烷氧基、环烷基氧基、杂环基氧基、羟基、羟烷基、氰基、氨基、硝基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基中的一个或多个。
术语“烷氧基”指-O-(烷基)，其中烷基的定义如上所述。非限制性的实例包括：甲氧基、乙氧基、丙氧基和丁氧基等。烷氧基可以是取代的或非取代的，当被取代时，其可以在任何可使用的连接点被取代，取代基优选选自D原子、卤素、烷氧基、卤代烷基、卤代烷氧基、环烷基氧基、杂环基氧基、羟基、羟烷基、氰基、氨基、硝基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基中的一个或多个。
术语“环烷基”指饱和或部分不饱和的单环全碳环(即单环环烷基)或多环系统(即多环环烷基)，其具有3至20个(例如3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20个)环原子(即3至20元环烷基)。所述环烷基优选具有3至12个环原子的环烷基(即3至12元环烷基)，更优选具有3至8个环原子的环烷基(即3至8元环烷基)，最优选具有3至6个环原子的环烷基(即3至6元环烷基)。
所述的单环环烷基，非限制性的实例包括：环丙基、环丁基、环戊基、环戊烯基、环己基、环己烯基、环己二烯基、环庚基、环庚三烯基和环辛基等。
所述的多环环烷基包括：螺环烷基、稠环烷基和桥环烷基。
环烷基可以是取代的或非取代的，当被取代时，其可以在任何可使用的连接点被取代，取代基优选选自D原子、卤素、烷基、烷氧基、卤代烷基、卤代烷氧基、环烷基氧基、杂环基氧基、羟基、羟烷基、氧代基、氰基、氨基、硝基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基中的一个或多个。
术语“杂环基”指饱和或部分不饱和的单环杂环(即单环杂环基)或多环杂环系统(即多环杂环基)，其环内至少含有一个(例如1、2、3或4个)选自氮、氧和硫的杂原子(所述的氮可任选被氧化，即形成氮氧化物；所述的硫可任选被氧代，即形成亚砜或砜，但不包括-O-O-、-O-S-或-S-S-)，且具有3至20个(例如3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20个)环原子(即3至20元杂环基)。所述杂环基优选具有3至12个环原子的杂环基(即3至12元杂环基)；进一步优选具有3至8个环原子的杂环基(即3至8元杂环基)；更优选具有3至6个环原子的杂环基(即3至6元杂环基)；最优选具有5或6个环原子的杂环基(即5或6元杂环基)。
所述的单环杂环基，非限制性的实例包括：吡咯烷基、四氢吡喃基、1,2,3,6-四氢吡啶基、哌啶基、哌嗪基、吗啉基、硫代吗啉基和高哌嗪基等。
所述的多环杂环基包括螺杂环基、稠杂环基和桥杂环基。
杂环基可以是取代的或非取代的，当被取代时，其可以在任何可使用的连接点被取代，取代基优选选自D原子、卤素、烷基、烷氧基、卤代烷基、卤代烷氧基、环烷基氧基、杂环基氧基、羟基、羟烷基、氧代基、氰基、氨基、硝基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基中的一个或多个。
术语“芳基”指具有共轭的π电子体系的单环全碳芳环(即单环芳基)或多环芳环系统(即多环芳基)，其具有6至14个(例如6、7、8、9、10、11、12、13或14个)环原子(即6至14元芳基)。所述芳基优选具有6至10个环原子的芳基(即6至10元芳基)。所述的单环芳基，例如苯基。所述的多环芳基，非限制性的实例包括：萘基、蒽基、菲基等。所述多环芳基还包括苯基与杂环基或环烷基中的一个或多个稠合，或萘基与杂环基或环烷基中的一个或多个稠合，其中连接点在苯基或萘基上，并且在这种情况下，环原子个数继续表示多环芳环系统中的环原子个数，非限制性的实例包括：
等。
芳基可以是取代的或非取代的，当被取代时，其可以在任何可使用的连接点被取代，取代基优选选自D原子、卤素、烷基、烷氧基、卤代烷基、卤代烷氧基、环烷基氧基、杂环基氧基、羟基、羟烷基、氧代基、氰基、氨基、硝基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基中的一个或多个。
术语“杂芳基”指具有共轭的π电子体系的单环杂芳环(即单环杂芳基)或多环杂芳环系统(即多环杂芳基)，其环内至少含有一个(例如1、2、3或4个)选自氮、氧和硫的杂原子(所述的氮可任选被氧化，即形成氮氧化物；所述的硫可任选被氧代，即形成亚砜或砜，但不包括-O-O-、-O-S-或-S-S-)，其具有5至14个(例如5、6、7、8、9、10、11、12、13或14个)环原子(即5至14元杂芳基)。所述杂芳基优选具有5至10个环原子的杂芳基(即5至10元杂芳基)，更优选具有5或6个环原子的杂芳基(即5或6元杂芳基)。
所述的单环杂芳基，非限制性的实例包括：呋喃基、噻吩基、噻唑基、异噻唑基、噁唑基、异噁唑基、噁二唑基、噻二唑基、咪唑基、吡唑基、三唑基、四唑基、呋咱基、吡咯基、N-烷基吡咯基、吡啶基、嘧啶基、吡啶酮基、N-烷基吡啶酮(如等)、吡嗪基、哒嗪基等。
所述的多环杂芳基，非限制性的实例包括：吲哚基、吲唑基、喹啉基、异喹啉基、喹喔啉基、酞嗪基、苯并咪唑基、苯并噻吩基、喹唑啉基、苯并噻唑基、咔唑基等。所述多环杂芳基还包括单环杂芳基与一个或多个芳基稠合，其中连接点在芳香环上，并且在这种情况下，环原子个数继续表示多环杂芳环系统中的环原子个数。所述多环杂芳基还包括单环杂芳基与环烷基或杂环基中的一个或多个稠合，其中连接点在单环杂芳环上，并且在这种情况下，环原子个数继续表示多环杂芳环系统中的环原子个数。非限制性的实例包括：
等。
杂芳基可以是取代的或非取代的，当被取代时，其可以在任何可使用的连接点被取代，取代基优选选自D原子、卤素、烷基、烷氧基、卤代烷基、卤代烷氧基、环烷基氧基、杂环基氧基、羟基、羟烷基、氰基、氨基、硝基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基中的一个或多个。
术语“氨基保护基”是指为了使分子其它部位进行反应时氨基保持不变，在氨基上引入的易于脱去的基团。非限制性的实例包括：(三甲基硅)乙氧基甲基、四氢吡喃基、叔丁氧羰基(Boc)、苄氧羰基(Cbz)、笏甲氧羰基(Fmoc)、烯丙氧羰基(Alloc)、三甲基硅乙氧羰基(Teoc)、甲氧羰基、乙氧羰基、邻苯二甲酰基(Pht)、对甲苯磺酰基(Tos)、三氟乙酰基(Tfa)、三苯甲基(Trt)、2,4-二甲氧基苄基(DMB)、乙酰基、苄基、烯丙基、对甲氧苄基等。
术语“羟基保护基”是指在羟基上引入的易于脱去的基团，用于阻断或保护羟基而在化合物的其它官能团上进行反应。非限制性的实例包括：三甲基硅基(TMS)、三乙基硅基(TES)、三异丙基硅基(TIPS)、叔丁基二甲基硅基(TBS)、叔丁基二苯基硅基(TBDPS)、甲基、叔丁基、烯丙基、苄基、甲氧基甲基(MOM)、乙氧基乙基、2-四氢吡喃基(THP)、甲酰基、乙酰基、苯甲酰基、对硝基苯甲酰基等。
术语“环烷基氧基”指环烷基-O-，其中环烷基如上所定义。
术语“杂环基氧基”指杂环基-O-，其中杂环基如上所定义。
术语“芳基氧基”指芳基-O-，其中芳基如上所定义。
术语“杂芳基氧基”指杂芳基-O-，其中杂芳基如上所定义。
术语“烷硫基”指烷基-S-，其中烷基如上所定义。
术语“卤代烷基”指烷基被一个或多个卤素取代，其中烷基如上所定义。
术语“卤代烷氧基”指烷氧基被一个或多个卤素取代，其中烷氧基如上所定义。
术语“氘代烷基”指烷基被一个或多个氘原子取代，其中烷基如上所定义。
术语“羟烷基”指烷基被一个或多个羟基取代，其中烷基如上所定义。
术语“甲叉基”指＝CH2。
术语“卤素”指氟、氯、溴或碘。
术语“羟基”指-OH。
术语“巯基”指-SH。
术语“氨基”指-NH2。
术语“氰基”指-CN。
术语“硝基”指-NO2。
术语“氧代”或“氧代基”指“＝O”。
术语“羰基”指C＝O。
术语“羧基”指-C(O)OH。
术语“羧酸酯基”指-C(O)O(烷基)、-C(O)O(环烷基)、(烷基)C(O)O-或(环烷基)C(O)O-，其中烷基和环烷基如上所定义。
本披露化合物可以存在特定的立体异构体形式。术语“立体异构体”是指结构相同但原子在空间中的排列不同的异构体。其包括顺式和反式(或Z和E)异构体、(-)-和(+)-异构体、(R)-和(S)-对映异构体、非对映异构体、(D)-和(L)-异构体、互变异构体、阻转异构体、构象异构体及其混合物(如外消旋体、非对映异构体的混合物)。本披露化合物中的取代基可以存在另外的不对称原子。所有这些立体异构体以及它们的混合物，均包括在本披露的范围内。可以通过手性合成、手性试剂或者其他常规技术制备光学活性的(-)-和(+)-异构体、(R)-和(S)-对映异构体以及(D)-和(L)-异构体。本披露某化合物的一种异构体，可以通过不对称合成或者手性助剂来制备，或者，当分子中含有碱性官能团(如氨基)或酸性官能团(如羧基)时，与适当的光学活性的酸或碱形成非对映异构体的盐，然后通过本领域所公知的常规方法进行非对映异构体拆分，得到纯的异构体。此外，对映异构体和非对映异构体的分离通常是通过色谱法完成。
本披露所述化合物的化学结构中，键“”表示未指定构型，即如果化学结构中存在手性异构体，键“/>”可以为“/>”或“/>”，或者同时包含“/>”和“/>”两种构型。对于所有的碳-碳双键，即使仅命名了一个构型，Z型和E型均包括在内。
本披露的化合物可以以不同的互变异构体形式存在，并且所有这样的形式包含在本披露的范围内。术语“互变异构体”或“互变异构体形式”是指平衡存在并且容易从一种异构形式转化为另一种异构形式的结构异构体。其包括所有可能的互变异构体，即以单一异构体的形式或以所述互变异构体的任意比例的混合物的形式存在。非限制性的实例包括：酮-烯醇、亚胺-烯胺、内酰胺-内酰亚胺等。内酰胺-内酰亚胺平衡实例是在如下所示的A和B之间：
如当提及吡唑基时，应理解为包括如下两种结构中的任何一种或两种互变异构体的混合物：
所有的互变异构形式在本披露的范围内，且化合物的命名不排除任何互变异构体。
本披露的化合物包括其化合物的所有合适的同位素衍生物。术语“同位素衍生物”是指至少一个原子被具有相同原子序数但原子质量不同的原子替代的化合物。可引入到本披露化合物中的同位素的实例包括氢、碳、氮、氧、磷、硫、氟、氯、溴和碘等的稳定和放射性的同位素，例如分别为2H(氘，D)、3H(氚，T)、11C、13C、14C、15N、17O、18O、32p、33p、33S、34S、35S、36S、18F、36Cl、82Br、123I、124I、125I、129I和131I等，优选氘。
相比于未氘代药物，氘代药物有降低毒副作用、增加药物稳定性、增强疗效、延长药物生物半衰期等优势。本披露的化合物的所有同位素组成的变换，无论放射性与否，都包括在本披露的范围之内。与碳原子连接的各个可用的氢原子可独立地被氘原子替换，其中氘的替换可以是部分或完全的，部分氘的替换是指至少一个氢被至少一个氘替换。
当一个位置被特别地指定为氘D时，该位置应理解为具有大于氘的天然丰度(其为0.015％)至少1000倍的丰度的氘(即至少15％的氘掺入)。示例中化合物的具有大于氘的天然丰度可以是至少1000倍的丰度的氘(即至少15％的氘掺入)、至少2000倍的丰度的氘(即至少30％的氘掺入)、至少3000倍的丰度的氘(即至少45％的氘掺入)、至少3340倍的丰度的氘(即至少50.1％的氘掺入)、至少3500倍的丰度的氘(即至少52.5％的氘掺入)、至少4000倍的丰度的氘(即至少60％的氘掺入)、至少4500倍的丰度的氘(即至少67.5％的氘掺入)、至少5000倍的丰度的氘(即至少75％的氘掺入)、至少5500倍的丰度的氘(即至少82.5％的氘掺入)、至少6000倍的丰度的氘(即至少90％的氘掺入)、至少6333.3倍的丰度的氘(即至少95％的氘掺入)、至少6466.7倍的丰度的氘(即至少97％的氘掺入)、至少6600倍的丰度的氘(即至少99％的氘掺入)、至少6633.3倍的丰度的氘(即至少99.5％的氘掺入)或更高丰度的氘。
“任选的”或“任选”是指随后所描述的事件或环境可以但不必然发生，其包括该事件或环境发生或不发生两种情形。例如“任选被卤素或者氰基取代的C1-6烷基”包括烷基被卤素或者氰基取代的情形和烷基不被卤素和氰基取代的情形。
“取代”或“取代的”指基团中的一个或多个氢原子，优选1～6个，更优选1～3个氢原子彼此独立地被相应数目的取代基取代。本领域技术人员能够在不付出过多努力的情况下(通过实验或理论)确定可能或不可能的取代。例如，具有游离氢的氨基或羟基与具有不饱和键的碳原子(如烯)结合时可能是不稳定的。
“药物组合物”表示含有一种或多种本文所述化合物或其生理学上可药用的盐与其他化学组分的混合物，以及其他组分例如生理学可药用的载体和赋形剂。药物组合物的目的是促进对生物体的给药，利于活性成分的吸收进而发挥生物活性。
“可药用的盐”是指本披露化合物的盐，可选自无机盐或有机盐。这类盐用于哺乳动物体内时具有安全性和有效性，且具有应有的生物活性。可以在化合物的最终分离和纯化过程中，或通过使合适的基团与合适的碱或酸反应来单独制备。通常用于形成药学上可接受的盐的碱包括无机碱，例如氢氧化钠和氢氧化钾，以及有机碱，例如氨。通常用于形成药学上可接受的盐的酸包括无机酸以及有机酸。
针对药物或药理学活性剂而言，术语“治疗有效量”或“抑制有效量”是指无毒的但能达到预期效果的药物或药剂的足够用量。有效量的确定因人而异，取决于受体的年龄和一般情况，也取决于具体的活性物质，个案中合适的有效量可以由本领域技术人员根据常规试验确定。
本文所用的术语“药学上可接受的”是指这些化合物、材料、组合物和/或剂型，在合理的医学判断范围内，适用于与患者组织接触而没有过度毒性、刺激性、过敏反应或其他问题或并发症，具有合理的获益/风险比，并且对预期的用途是有效。
本文所使用的，单数形式的“一个”、“一种”和“该”包括复数引用，反之亦然，除非上下文另外明确指出。
当将术语“约”应用于诸如pH、浓度、温度等的参数时，表明该参数可以变化±10％，并且有时更优选地在±5％之内。如本领域技术人员将理解的，当参数不是关键时，通常仅出于说明目的给出数字，而不是限制。
实施例与测试例
以下结合实施例进一步描述本披露，但这些实施例并非限制本披露的范围。
本披露实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，或按照原料或商品制造厂商所建议的条件。未注明具体来源的试剂，为市场购买的常规试剂。
一、抗体实施例
实施例1：ROR1高表达细胞株构建
将PBABE-ROR1慢病毒表达载体质粒与pVSV-G、pGag-pol慢病毒系统包装载体用Lipofectamine 3000(ThermoFisher,L3000001)转染试剂转染至病毒包装细胞293T(中国科学院细胞库，SCSP-502)中，收集含有病毒的培养基上清，过滤并进行超高速离心，使用浓缩后的病毒感染中国仓鼠卵巢细胞CHO-K1(中国科学院细胞库，SCSP-507)，经嘌呤霉素筛选两至三周，再进行FACS单细胞分选。
通过FACS检测慢病毒感染的CHO-K1细胞表面的ROR1表达，挑选出ROR1表达量高的单克隆细胞株并命名为ROR1-CHO-K1。将挑选出的单克隆细胞株扩大培养，冻存备库以便后续实验。
人ROR1氨基酸序列(UniProtKB-Q01973)
MHRPRRRGTRPPLLALLAALLLAARGAAAQETELSVSAELVPTSSWNISSELNKDSYLTLDEPMNNITTSLGQTAELHCKVSGNPPPTIRWFKNDAPVVQEPRRLSFRSTIYGSRLRIRNLDTTDTGYFQCVATNGKEVVSSTGVLFVKFGPPPTASPGYSDEYEEDGFCQPYRGIACARFIGNRTVYMESLHMQGEIENQITAAFTMIGTSSHLSDKCSQFAIPSLCHYAFPYCDETSSVPKPRDLCRDECEILENVLCQTEYIFARSNPMILMRLKLPNCEDLPQPESPEAANCIRIGIPMADPINKNHKCYNSTGVDYRGTVSVTKSGRQCQPWNSQYPHTHTFTALRFPELNGGHSYCRNPGNQKEAPWCFTLDENFKSDLCDIPACDSKDSKEKNKMEILYILVPSVAIPLAIALLFFFICVCRNNQKSSSAPVQRQPKHVRGQNVEMSMLNAYKPKSKAKELPLSAVRFMEELGECAFGKIYKGHLYLPGMDHAQLVAIKTLKDYNNPQQWTEFQQEASLMAELHHPNIVCLLGAVTQEQPVCMLFEYINQGDLHEFLIMRSPHSDVGCSSDEDGTVKSSLDHGDFLHIAIQIAAGMEYLSSHFFVHKDLAARNILIGEQLHVKISDLGLSREIYSADYYRVQSKSLLPIRWMPPEAIMYGKFSSDSDIWSFGVVLWEIFSFGLQPYYGFSNQEVIEMVRKRQLLPCSEDCPPRMYSLMTECWNEIPSRRPRFKDIHVRLRSWEGLSSHTSSTTPSGGNATTQTTSLSASPVSNLSNPRYPNYMFPSQGITPQGQIAGFIGPPIPQNQRFIPINGYPIPPGYAAFPAAHYQPTGPPRVIQHCPPPKSRSPSSASGSTSTGHVTSLPSSGSNQEANIPLLPHMSIPNHPGGMGITVFGNKSQKPYKIDSKQASLLGDANIHGHTESMISAELSEQ ID NO：1。
实施例2：抗人ROR1单克隆抗体的筛选
用全人源半合成噬菌体抗体库和抗原生物素化的人ROR1(恺佧生物科技有限公司，货号：ROR-HM401B)，经过三轮淘选后，采用ELISA方法进行噬菌体检测，获得阳性克隆。将阳性克隆测序，获得序列后，将阳性克隆序列插入蛋白表达载体pHR-IgG中，并在HEK293和Expi-CHO-S上进行表达。纯化后进行FACS和内吞活性验证实验，获得ROR1全人源抗体分子347。
全人源ROR1抗体分子347重链可变区：
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYTFTDYYISWVRQGPGQGLEWMGGINAGNGNTNYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCASPGWDVFDIWGQGTMVTVSS
SEQ ID NO：2
全人源ROR1抗体分子347轻链可变区：
DIQMTQSPSPLSASVGDRVTITCQASQDISNYLNWYQQKPGKAPKLLIYDASNLETGVPSRFSGSGSGTDFTFTISSLQPEDIATYYCQQHEDLPITFGQGTRLEIK
SEQ ID NO：3。
以下为本披露抗ROR1抗体347按Kabat编号规则确定的CDR区：
表2-1.抗ROR1抗体347的Kabat编号CDR区
抗体347 序列 序号
HCDR1 DYYIS SEQ ID NO：4
HCDR2 GINAGNGNTNYAQKFQG SEQ ID NO：5
HCDR3 PGWDVFDI SEQ ID NO：6
LCDR1 QASQDISNYLN SEQ ID NO：7
LCDR2 DASNLET SEQ ID NO：8
LCDR3 QQHEDLPIT SEQ ID NO：9
上述抗ROR1抗体，可以进一步包含抗体重链恒定区和轻链恒定区；所述重链恒定区可以选自人IgG1、IgG2、IgG3和IgG4恒定区，所述轻链恒定区可选自人抗体κ和λ链恒定区。本披露中，所述抗体包含序列如SEQ ID NO：10所示的重链恒定区，和序列如SEQ ID NO：11所示的轻链恒定区：
人IgG1的重链恒定区：
ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHN
HYTQKSLSLSPGK
SEQ ID NO：10
人κ轻链恒定区：
RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNS
QESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRG
EC
SEQ ID NO：11。
本披露抗ROR1抗体347序列：
全人源ROR1抗体347重链：
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYTFTDYYISWVRQGPGQGLEWMGGI
NAGNGNTNYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCASPGWDV
FDIWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTV
SWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTK
VDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVV
DVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWL
NGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCL
VKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQG
NVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
SEQ ID NO：12
全人源ROR1抗体347轻链：
DIQMTQSPSPLSASVGDRVTITCQASQDISNYLNWYQQKPGKAPKLLIYDASN
LETGVPSRFSGSGSGTDFTFTISSLQPEDIATYYCQQHEDLPITFGQGTRLEIKRT
VAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQES
VTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
SEQ ID NO：13。
本披露中使用WO2018237335中的抗ROR1抗体Ab1作为阳性对照，其序列分别如下所示：
Ab1重链：
QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGYAFTAYNIHWVRQAPGQGLEWMGSFD
PYDGGSSYNQKFKDRLTISKDTSKNQVVLTMTNMDPVDTATYYCARGWYYF
DYWGHGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVS
WNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTK
VDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVV
DVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWL
NGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCL
VKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQG
NVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
SEQ ID NO：14
Ab1轻链：
DIVMTQTPLSLPVTPGEPASISCRASKSISKYLAWYQQKPGQAPRLLIYSGSTL
QSGIPPRFSGSGYGTDFTLTINNIESEDAAYYFCQQHDESPYTFGEGTKVEIKRT
VAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQES
VTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
SEQ ID NO：15。
二、化合物实施例
化合物的结构是通过核磁共振(NMR)或/和质谱(MS)来确定的。NMR位移(δ)以10-6(ppm)的单位给出。NMR的测定是用Bruker AVANCE-400核磁仪，测定溶剂为氘代二甲基亚砜(DMSO-d6)、氘代氯仿(CDCl3)、氘代甲醇(CD3OD)，内标为四甲基硅烷(TMS)。
MS的测定用Agilent 1200/1290DAD-6110/6120Quadrupole MS液质联用仪(生产商：Agilent，MS型号：6110/6120Quadrupole MS)、waters ACQuity UPLC-QD/SQD(生产商：waters，MS型号：waters ACQuity Qda Detector/waters SQ Detector)、THERMO Ultimate3000-Q Exactive(生产商：THERMO，MS型号：THERMO Q Exactive)。
高效液相色谱法(HPLC)分析使用Agilent HPLC 1200DAD、Agilent HPLC1200VWD和Waters HPLC e2695-2489高压液相色谱仪。
手性HPLC分析测定使用Agilent 1260DAD高效液相色谱仪。
高效液相制备使用Waters 2545-2767、Waters 2767-SQ Detecor2、Shimadzu LC-20AP和Gilson GX-281制备型色谱仪。
手性制备使用Shimadzu LC-20AP制备型色谱仪。
CombiFlash快速制备仪使用Combiflash Rf200(TELEDYNE ISCO)。
薄层层析硅胶板使用烟台黄海HSGF254或青岛GF254硅胶板，薄层色谱法(TLC)使用的硅胶板采用的规格是0.15mm～0.2mm，薄层层析分离纯化产品采用的规格是0.4mm～0.5mm。
硅胶柱色谱法一般使用烟台黄海硅胶200～300目硅胶为载体。
激酶平均抑制率及IC50值的测定用NovoStar酶标仪(德国BMG公司)。
本发明的已知的起始原料可以采用或按照本领域已知的方法来合成，或可购买自ABCR GmbH&Co.KG，Acros Organics，Aldrich Chemical Company，韶远化学科技(AccelaChemBio Inc)、达瑞化学品等公司。
实施例中无特殊说明，反应能够均在氩气氛或氮气氛下进行。
氩气氛或氮气氛是指反应瓶连接一个约1L容积的氩气或氮气气球。
氢气氛是指反应瓶连接一个约1L容积的氢气气球。
加压氢化反应使用Parr 3916EKX型氢化仪和清蓝QL-500型氢气发生器或HC2-SS型氢化仪。
氢化反应通常抽真空，充入氢气，反复操作3次。
微波反应使用CEM Discover-S 908860型微波反应器。
实施例中无特殊说明，溶液是指水溶液。
实施例中无特殊说明，反应的温度为室温，为20℃～30℃。
实施例中的反应进程的监测采用薄层色谱法(TLC)，反应所使用的展开剂，纯化化合物采用的柱层析的洗脱剂的体系和薄层色谱法的展开剂体系包括：A：二氯甲烷/甲醇体系，B：正己烷/乙酸乙酯体系，溶剂的体积比根据化合物的极性不同而进行调节，也可以加入少量的三乙胺和醋酸等碱性或酸性试剂进行调节。
实施例2-1 1
(S)-7-甲氧基-8-((5-((7-甲氧基-5-氧代-4-苯基-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂庚环-8-基)氧基)戊基)氧基)-1,11a-二氢-3H,5H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-2,1'-环丙]-5-酮1
/>
第一步
N-(4-(苄氧基)-5-甲氧基-2-硝基苯甲酰基)-N-苯基甘氨酸甲酯1c
将4-苄氧基-5-甲氧基-2-硝基苯甲酸1a(800mg，2.64mmol，毕得)溶于二氯甲烷(8mL)中，反应体系用氮气置换三次，依次滴加草酰氯(368mg，2.90mmol)和N,N-二甲基甲酰胺(30μL)，搅拌反应5小时。将苯甘氨酸甲酯1b(480mg，2.90mmol，采用公知的方法“European Journal of Organic Chemistry,2021,44,5914-5921”制备而得)溶于二氯甲烷(5mL)中，氮气置换三次，冰浴下加入三乙胺(801mg，7.91mmol)，随后滴加上述1a的二氯甲烷反应液，加完后撤去冰浴，升至室温搅拌反应16小时。反应液依次用1M盐酸(15mL)，水(20mL)，饱和碳酸氢钠溶液(20mL)和饱和氯化钠溶液(30mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤后减压浓缩，所得残余物用CombiFlash快速制备仪以洗脱剂体系B纯化，得到标题产物1c(926mg，产率：77.9％)。
MS m/z(ESI):451.1[M+1]。
第二步
8-(苄氧基)-7-甲氧基-4-苯基-3,4-二氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂庚环-2,5-二酮1d
将1c(612mg，1.36mmol)溶于乙醇(20mL)中，加入铁粉(609mg，10.91mmol)和氯化铵(1.09g，20.38mmol)，加完后氮气置换三次，升温至80℃反应24小时，反应混合物用硅藻土过滤，滤饼用甲醇淋洗，滤液减压浓缩，所得残余物用CombiFlash快速制备仪以洗脱剂体系B纯化，得到标题产物1d(253mg，产率：47.9％)。
MS m/z(ESI):389.1[M+1]。
第三步
8-羟基-7-甲氧基-4-苯基-3,4-二氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂庚环-2,5-二酮1e
将1d(240mg，0.62mmol)溶于4mL四氢呋喃和乙醇(V/V＝1:1)的混合溶剂中，加入钯碳(48mg，含量10％，干型)，氢气置换三次，搅拌反应16小时。反应液用硅藻土过滤，滤饼用无水四氢呋喃(15mL)淋洗，滤液减压浓缩，真空干燥，得到粗品标题产物1e(184mg，产率：99.8％)。产物不经纯化直接用于下一步反应。
MS m/z(ESI):299.0[M+1]。
第四步
8-((5-溴戊基)氧基)-7-甲氧基-4-苯基-3,4-二氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂庚环-2,5-二酮1f
将1e(184mg，0.62mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(2mL)中，加入1,5-二溴戊烷(568mg，2.47mmol)和无水碳酸钾(102mg，0.74mmol)，搅拌反应3小时。向反应液中加入水(20mL)，用乙酸乙酯萃取(10mL×3)，合并有机相，依次用水(50mL×2)和饱和氯化钠溶液(50mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液经减压浓缩，所得残余物用CombiFlash快速制备仪以洗脱剂体系B纯化，得到标题产物1f(207mg，产率：75.0％)。
MS m/z(ESI):447.1[M+1]。
第五步
8-((5-溴戊基)氧基)-7-甲氧基-4-苯基-1,2,3,4-四氢-5H-苯并[e][1,4]二氮杂庚环-5-
酮1g
将1f(162mg，0.36mmol)溶于无水四氢呋喃(5mL)中，氮气置换三次，冰水浴冷却至0～5℃，剧烈搅拌下滴加硼烷四氢呋喃络合物(1M，3.62mL，3.62mmol)，加毕，撤去冰水浴，升至室温搅拌1小时。冰水浴冷却至0～5℃，搅拌下缓慢滴加无水甲醇(10mL)淬灭反应，加毕，撤去冰水浴，升至室温继续搅拌2小时。反应液经减压浓缩除去有机溶剂，残余物中加入水(20mL)，用二氯甲烷萃取(10mL×3)，合并有机相，用饱和氯化钠溶液(30mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液经减压浓缩，真空干燥，得到粗品标题产物1g(157mg，产率：100％)。产物不经纯化直接用于下一步反应。
MS m/z(ESI):433.0[M+1]。
第六步
8-((5-溴戊基)氧基)-7-甲氧基-5-氧代-4-苯基-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂庚环-1-羧酸烯丙酯1h
将1g(157mg，0.36mmol)溶于无水二氯甲烷(5mL)中，冰水浴冷却，依次加入吡啶(57mg，0.72mmol)和氯甲酸烯丙酯(175mg，1.45mmol)，冰浴下搅拌30分钟。向反应液中加入二氯甲烷(10mL)稀释，再加入10％柠檬酸水溶液(10mL)，搅拌两分钟后静置分层，保留有机相。有机相用饱和氯化钠溶液(15mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤后滤液减压浓缩，所得残余物用CombiFlash快速制备仪以洗脱剂体系B纯化，得到标题产物1h(148mg，产率：78.9％)。
MS m/z(ESI):517.1[M+1]。
第七步(11aS)-8-((5-((1-((烯丙基氧基)羰基)-7-甲氧基-5-氧代-4-苯基-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂庚环-8-基)氧基)戊基)氧基)-11-((叔丁基二甲基硅基)氧基)-7-甲氧基-5-氧代-11,11a-二氢-1H,3H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-2,1'-环丙烷]-10(5H)-羧酸烯丙酯1j
将1h(48mg，0.09mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(1.5mL)中，加入(11aS)-11-((叔丁基二甲基硅基)氧基)-8-羟基-7-甲氧基-5-氧代-11,11a-二氢-1H,3H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-2,1'-环丙烷]-10(5H)-羧酸烯丙酯1i(47mg，0.10mmol，采用专利申请“CN 111164208 A中说明书第223页的实施例45”公开的方法制备而得)，再加入无水碳酸钾(38mg，0.28mmol)，搅拌反应16小时。向反应液中加水(20mL)，用乙酸乙酯萃取(10mL×3)，合并有机相，依次用水(20mL×2)和饱和氯化钠溶液(20mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液经减压浓缩，所得残余物用薄层色谱法以展开剂体系A纯化，得到标题产物1j(85mg，产率：99.0％)。
MS m/z(ESI):925.3[M+1]。
第八步(11aS)-8-((5-((1-((烯丙基氧基)羰基)-7-甲氧基-5-氧代-4-苯基-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂庚环-8-基)氧基)戊基)氧基)-11-羟基-7-甲氧基-5-氧代-11,11a-二氢-1H,3H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-2,1'-环丙烷]-10(5H)-羧酸烯丙酯1k
将1j(85mg，0.09mmol)溶于四氢呋喃(3mL)中，依次加入冰乙酸(33mg，0.55mmol)和四丁基氟化铵的四氢呋喃溶液(1M，0.46mL，0.46mmol)，搅拌反应3小时。反应液中加入乙酸乙酯(5mL)稀释，依次用饱和碳酸氢钠溶液(8mL)和饱和氯化钠溶液(10mL)洗涤。有机相用无水硫酸钠干燥，过滤后减压浓缩，所得残余物用薄层色谱法以展开剂体系A纯化，得到标题产物1k(62mg，产率：83.2％)。
MS m/z(ESI):809.2[M-1]。
第九步(S)-7-甲氧基-8-((5-((7-甲氧基-5-氧代-4-苯基-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂庚环-8-基)氧基)戊基)氧基)-1,11a-二氢-3H,5H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-2,1'-环丙]-5-酮1
将1k(23mg，0.028mmol)溶于二氯甲烷(2mL)中，氮气置换三次，依次加入吡咯烷(14mg，0.20mmol)和四(三苯基膦)钯(3.3mg，0.003mmol)，氮气置换三次，搅拌反应30分钟。反应液减压浓缩，所得残余物用薄层色谱法以展开剂体系A纯化，得到标题产物1(12mg，产率：67.7％)。
MS m/z(ESI):625.6[M+1]。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ7.97(d,1H),7.49-7.42(m,2H),7.41-7.28(m,3H),7.25(s,1H),7.15-7.08(m,1H),6.43(s,1H),6.16(s,1H),4.89(t,1H),4.02(s,3H),3.89(s,3H),3.82-3.64(m,6H),3.62-3.50(m,3H),3.32-3.28(m,1H),3.20(d,1H),2.43-2.32(m,1H),2.30-2.21(m,1H),2.15-2.01(m,2H),1.71-1.59(m,2H),1.43-1.32(m,2H),0.77-0.59(m,4H)。
实施例2-2 2
(S)-7-甲氧基-8-((5-((7-甲氧基-5-氧代-5,11a-二氢-1H,3H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-2,1'-环丙]-8-基)氧基)戊基)氧基)-4-苯基-3,4-二氢-1H-苯并
[e][1,4]二氮杂庚环-2,5-二酮2
第一步(11aS)-11-((叔丁基二甲基硅基)氧基)-7-甲氧基-8-((5-((7-甲氧基-2,5-二氧代-4-苯基-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂庚环-8-基)氧基)戊基)氧基)-5-氧代-11,11a-二氢-1H,3H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-2,1'-环丙烷]-10(5H)-羧酸烯丙酯2a
将1f(43mg，0.10mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(1.5mL)中，加入1i(49mg，0.10mmol)，再加入无水碳酸钾(40mg，0.29mmol)，搅拌反应16小时。向反应液中加水(20mL)，用乙酸乙酯萃取(10mL×3)，合并有机相，依次用水(20mL×2)和饱和氯化钠溶液(20mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液经减压浓缩，所得残余物用薄层色谱法以展开剂体系A纯化，得到标题产物2a(60mg，产率：73.0％)。
MS m/z(ESI):855.3[M+1]。
第二步(11aS)-11-羟基-7-甲氧基-8-((5-((7-甲氧基-2,5-二氧代-4-苯基-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂庚环-8-基)氧基)戊基)氧基)-5-氧代-11,11a-二氢-1H,3H-螺[苯并[e]
吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-2,1'-环丙烷]-10(5H)-羧酸烯丙酯2b
将2a(41mg，0.05mmol)溶于四氢呋喃(2mL)中，依次加入冰乙酸(17mg，0.29mmol)和四丁基氟化铵的四氢呋喃溶液(1M，0.24mL，0.24mmol)，搅拌反应2小时。向反应液中加入乙酸乙酯(5mL)稀释，依次用饱和碳酸氢钠溶液(8mL)和饱和氯化钠溶液(10mL)洗涤。有机相用无水硫酸钠干燥，过滤后减压浓缩，所得残余物用薄层色谱法以展开剂体系A纯化，得到标题产物2b(20mg，产率：56.3％)。
MS m/z(ESI):741.2[M+1]。
第三步
(S)-7-甲氧基-8-((5-((7-甲氧基-5-氧代-5,11a-二氢-1H,3H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-2,1'-环丙]-8-基)氧基)戊基)氧基)-4-苯基-3,4-二氢-1H-苯并
[e][1,4]二氮杂庚环-2,5-二酮2
将2b(20mg，0.027mmol)溶于二氯甲烷(2mL)中，氮气置换三次，依次加入吡咯烷(14mg，0.20mmol)和四(三苯基膦)钯(3.1mg，0.003mmol)，氮气置换三次，搅拌反应30分钟。反应液减压浓缩，所得残余物用薄层色谱法以展开剂体系A纯化，得到标题产物2(13mg，产率：75.4％)。
MS m/z(ESI):639.4[M+1]。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ10.4(s,1H),7.97(d,1H),7.53-7.49(m,2H),7.47-7.43(m,2H),7.40-7.33(m,3H),6.91(s,1H),6.81(s,1H),4.25(s,2H),4.10(t,4H),3.88(s,3H),3.85(s,3H),3.71-3.64(m,1H),3.58-3.52(m,1H),3.20(d,1H),2.44-2.33(m,2H),2.14-2.04(m,2H),1.70-1.59(m,3H),1.42-1.38(m,1H),0.77-0.61(m,4H)。
实施例2-3 3
(S)-7-甲氧基-8-((5-(((S)-7-甲氧基-3-甲基-5-氧代-4-苯基-2,3,4,5-四氢-1H-苯并
[e][1,4]二氮杂庚环-8-基)氧基)戊基)氧基)-1,11a-二氢-3H,5H-螺[苯并[e]吡咯并
[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-2,1'-环丙]-5-酮3
第一步
苯基-L-丙氨酸3b
将L-丙氨酸3a(2.6g，29.2mmol，阿达玛斯)置于反应瓶中，加入碘苯(3g，33.7mmol，阿达玛斯)，加入N-甲基吡咯烷酮(30mL)，再依次加入氧化亚铜(200mg，1.41mmol)，磷酸钾(6.2g，29.2mmol)，加完后氮气置换三次，升温至100℃搅拌反应16小时。反应液冷却至室温，加入饱和柠檬酸溶液至水相pH小于7，用乙酸乙酯萃取(40mL×4)，合并有机相，依次用水(40mL)和饱和氯化钠溶液(40mL)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤后减压浓缩，所得残余物用CombiFlash快速制备仪以洗脱剂体系A纯化，得到标题产物3b(1.5g，产率：62.5％)。
MS m/z(ESI):166.3[M+1]。
第二步
苯基-L-丙氨酸甲酯3c
将3b(1.5g，9.09mmol)置于反应瓶中，加入甲醇(20mL)，氮气置换三次，降温至0℃，滴入氯化亚砜(2.16g，18.1mmol)，保持内温低于10℃，滴完后升至室温搅拌反应4小时。反应液减压浓缩，所得残余物用二氯甲烷(30mL)溶解，依次用碳酸氢钠溶液(30mL)，水(30mL)，饱和氯化钠溶液(30mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤后减压浓缩，所得残余物用薄层色谱法以展开剂体系B纯化，得到标题产物3c(1.1g，产率：67.9％)。
MS m/z(ESI):180.1[M+1]。
第三步
N-(4-(苄氧基)-5-甲氧基-2-硝基苯甲酰基)-N-苯基-L-丙氨酸甲酯3d
将1a(846mg，2.79mmol)溶于二氯甲烷(8mL)中，氮气置换三次，依次滴加草酰氯(386mg，3.01mmol)和N,N-二甲基甲酰胺(30μL)，搅拌反应5小时。将3c(500mg，2.79mmol)溶于二氯甲烷(10mL)中，氮气置换三次，加入三乙胺(846mg，8.38mmol)，降温至0℃，滴入上述1a所得的二氯甲烷溶液，加完后升至室温搅拌18小时。反应液中加入饱和氯化铵溶液(20mL)，分液，有机相依次用饱和碳酸氢钠溶液(20mL)，饱和氯化钠溶液(20mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤后减压浓缩，所得残余物用薄层色谱法以洗脱剂体系B纯化，得到标题产物3d(750mg，产率：57.8％)。
MS m/z(ESI):465.5[M+1]。
第四步(S)-8-(苄氧基)-7-甲氧基-3-甲基-4-苯基-3,4-二氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂庚环-2,5-
二酮3e
将3d(650mg，1.4mmol)溶于乙醇(15mL)中，依次加入还原铁粉(392mg，7mmol)和氯化铵(799mg，14mmol)，加完后氮气置换三次，升至75℃搅拌16小时，反应液通过硅藻土热过滤，滤饼用甲醇(15mL)淋洗，合并滤液，减压浓缩，所得残余物用四氢呋喃(25mL)溶解，加入浓硫酸(200μL)，氮气置换三次，升至75℃搅拌反应16小时。反应液减压浓缩，所得残余物用二氯甲烷(35mL)溶解，再依次用饱和碳酸氢钠溶液(15mL)，饱和氯化钠溶液(20mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤后减压浓缩，所得残余物用薄层色谱法以洗脱剂体系B纯化，得到标题产物3e(420mg，产率：74.6％)。
MS m/z(ESI):403.7[M+1]。
第五步(S)-8-羟基-7-甲氧基-3-甲基-4-苯基-3,4-二氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂庚环-2,5-二酮3f
将3e(300mg，0.74mmol)溶于8mL乙醇和四氢呋喃(V/V＝3:1)的混合溶剂中，加入钯碳(60mg，含量10％，干型)，氢气置换三次，室温搅拌反应2小时。反应液通过硅藻土过滤，滤液经减压浓缩，所得残余物用薄层色谱法以洗脱剂体系A纯化，得到粗品标题产物3f(250mg)。
MS m/z(ESI):313.5[M+1]。
第六步(S)-8-((5-溴戊基)氧基)-7-甲氧基-3-甲基-4-苯基-3,4-二氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂庚环-2,5-二酮3g
将3f(232mg，0.74mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(8mL)中，加入1,5-二溴戊烷(921mg，4mmol)和无水碳酸钾(132.7mg，0.96mmol)，室温下搅拌反应5小时。向反应液中加入水(15mL)，用乙酸乙酯萃取(15mL×3)，合并有机相，依次用水(10mL×3)和饱和氯化钠溶液(10mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤后减压浓缩，所得残余物用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系B纯化，得到标题产物3g(270mg，产率：78.9％)。
MS m/z(ESI):461.3[M+1]。
第七步(S)-8-((5-溴戊基)氧基)-7-甲氧基-3-甲基-4-苯基-1,2,3,4-四氢-5H-苯并[e][1,4]二氮杂庚环-5-酮3h
将3g(250mg，0.54mmol)溶于四氢呋喃(2mL)中，氮气置换三次，冰浴下加入硼烷四氢呋喃溶液(1M，5.4mL，5.4mmol)，室温搅拌反应5小时。降温至0℃，向反应体系中缓慢滴入甲醇(5mL)，滴完后减压浓缩反应液，所得残余物用乙酸乙酯(20mL)溶解，依次用水(15mL)，饱和氯化钠溶液(15mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤后减压浓缩，所得残余物不经纯化直接用于下一步反应。MS m/z(ESI):447.4[M+1]。
第八步
(S)-8-((5-溴戊基)氧基)-7-甲氧基-3-甲基-5-氧代-4-苯基-2,3,4,5-四氢-1H-苯并
[e][1,4]二氮杂庚环-1-羧酸烯丙酯3i
将3h(242mg，0.54mmol)溶于无水二氯甲烷(10mL)中，冰水浴冷却下，依次加入吡啶(85.8mg，1.08mmol)和氯甲酸烯丙酯(262mg，2.17mmol，阿达玛斯)，冰浴下搅拌20分钟。向反应液中加入二氯甲烷(10mL)稀释，再加入10％柠檬酸水溶液(10mL)，搅拌两分钟后静置分层，保留有机相。有机相用饱和氯化钠溶液(10mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤后，滤液减压浓缩，所得残余物用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系B纯化，得到标题产物3i(140mg，产率：48.7％)。MS m/z(ESI):531.4[M+1]。
第九步(11aS)-8-((5-(((S)-1-((烯丙基氧基)羰基)-7-甲氧基-3-甲基-5-氧代-4-苯基-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂庚环-8-基)氧基)戊基)氧基)-11-((叔丁基二甲基硅基)氧基)-7-甲氧基-5-氧代-11,11a-二氢-1H,3H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-2,1'-环丙烷]-10(5H)-羧酸烯丙酯3j
将3i(50mg，0.09mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(3mL)中，加入1i(46mg，0.09mmol)，再加入无水碳酸钾(39mg，0.28mmol)，室温搅拌12小时。向反应液中加水(10mL)，用乙酸乙酯萃取(15mL×3)，合并有机相，依次用水(15mL×3)和饱和氯化钠溶液(20mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤后减压浓缩，所得残余物用薄层色谱法以展开剂体系A纯化，得到标题产物3j(70mg，产率：79.5％)。MS m/z(ESI):939.9[M+1]。
第十步(11aS)-8-((5-(((S)-1-((烯丙基氧基)羰基)-7-甲氧基-3-甲基-5-氧代-4-苯基-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂庚环-8-基)氧基)戊基)氧基)-11-羟基-7-甲氧基-5-氧代-11,11a-二氢-1H,3H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-2,1'-环丙烷]-10(5H)-羧酸烯丙酯3k
将3j(70mg，0.074mmol)溶于无水四氢呋喃(3mL)中，依次加入冰乙酸(26.8mg，0.446mmol)和四丁基氟化铵的四氢呋喃溶液(1M，0.37mL，0.37mmol)，加毕，室温搅拌2小时。向反应液中加入乙酸乙酯(15mL)稀释，依次用饱和碳酸氢钠溶液(10mL×2)和饱和氯化钠溶液(10mL×2)洗涤。有机相用无水硫酸钠干燥，过滤后减压浓缩，所得残余物用薄层色谱法以展开剂体系A纯化，得到标题产物3k(47mg，产率：77.0％)。
MS m/z(ESI):825.6[M+1]。
第十一步
(S)-7-甲氧基-8-((5-(((S)-7-甲氧基-3-甲基-5-氧代-4-苯基-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂庚环-8-基)氧基)戊基)氧基)-1,11a-二氢-3H,5H-螺[苯并[e]吡咯并
[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-2,1'-环丙]-5-酮3
将3k(20mg，0.024mmol)溶于无水二氯甲烷(2mL)，依次加入吡咯烷(17.2mg，0.24mmol)和四(三苯基膦)钯(2.8mg，0.0024mmol)，氮气置换三次，搅拌反应30分钟。反应液减压浓缩除去有机溶剂，所得残余物用薄层色谱法以展开剂体系A纯化，得到标题产物3(14mg，产率：90.9％)。
MS m/z(ESI):639.5[M+1]。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ7.92(d,1H),7.42-7.38(m,2H),7.35-7.32(m,1H),7.30-7.25(m,1H),7.22-7.17(m,2H),6.87-6.84(m,1H),6.16-6.57(m,1H),6.36(s,1H),4.17-4.09(m,1H),4.07-4.00(m,1H),3.99-3.91(m,3H),3.83(s,3H),3.64(s,3H),3.53-3.42(m,4H),2.47-2.39(m,1H),2.09-1.95(m,2H),1.87-1.78(m,3H),1.63-1.55(m,2H),1.37-1.32(m,1H),1.14(d,3H),0.89-0.75(m,2H),0.72-0.61(m,2H)。
实施例2-5 5
(S)-4-苄基-7-甲氧基-8-((5-(((S)-7-甲氧基-5-氧代-5,11a-二氢-1H,3H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-2,1'-环丙]-8-基)氧基)戊基)氧基)-3-甲基-3,4-二氢-1H-
苯并[e][1,4]二氮杂庚环-2,5-二酮5
第一步
N-苄基-N-(4-(苄氧基)-5-甲氧基-2-硝基苯甲酰基)-L-丙氨酸甲酯5b
将实施例2-3 3第三步原料3c替换为苄基-L-丙氨酸甲酯5a(135mg，0.7mmol，采用公知的方法“Journal of Organic Chemistry,2013,78(6),2311-2326”制备而得)采用相同的反应条件，得到标题产物5b(300mg，产率：90％)。
MS m/z(ESI):479.2[M+1]。
第二步(S)-4-苄基-8-(苄氧基)-7-甲氧基-3-甲基-3,4-二氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂庚环-2,5-
二酮5c
将实施例2-3 3第四步原料3d替换为5b(300mg，0.628mmol)采用相同的反应条件，得到标题产物5c(236mg，产率：90％)。
MS m/z(ESI):417.2[M+1]。
第三步(S)-4-苄基-8-羟基-7-甲氧基-3-甲基-3,4-二氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂庚环-2,5-二酮5d
将实施例2-3 3第五步原料3e替换为5c(128mg，0.307mmol)采用相同的反应条件，得到标题产物5d(100mg，产率：99％)。
MS m/z(ESI):327.1[M+1]。
第四步(S)-4-苄基-8-((5-溴戊基)氧基)-7-甲氧基-3-甲基-3,4-二氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂庚环-2,5-二酮5e
将实施例2-3 3第六步原料3f替换为5d(100mg，0.307mmol)采用相同的反应条件，得到标题产物5e(131mg，产率：90％)。
MS m/z(ESI):475.1[M+1]。
第五步(11aS)-8-((5-(((S)-4-苄基-7-甲氧基-3-甲基-2,5-二氧代-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂庚环-8-基)氧基)戊基)氧基)-11-((叔丁基二甲基硅基)氧基)-7-甲氧基-5-氧代-11,11a-二氢-1H,3H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-2,1'-环丙烷]-10(5H)-羧酸烯丙酯5f
将实施例2-2 2第一步原料1f替换为5e(28mg，0.059mmol)采用相同的反应条件，得到标题产物5f(40mg，产率：76％)。
MS m/z(ESI):883.4[M+1]。
第六步(11aS)-8-((5-(((S)-4-苄基-7-甲氧基-3-甲基-2,5-二氧代-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂庚环-8-基)氧基)戊基)氧基)-11-羟基-7-甲氧基-5-氧代-11,11a-二氢-1H,3H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-2,1'-环丙烷]-10(5H)-羧酸烯丙酯5g
将实施例2-2 2第二步原料2a替换为5f(40mg，0.045mmol)采用相同的反应条件，得到标题产物5g(30mg，产率：87％)。
MS m/z(ESI):769.3[M+1]。
第七步(S)-4-苄基-7-甲氧基-8-((5-(((S)-7-甲氧基-5-氧代-5,11a-二氢-1H,3H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-2,1'-环丙]-8-基)氧基)戊基)氧基)-3-甲基-3,4-二氢-1H-
苯并[e][1,4]二氮杂庚环-2,5-二酮5
将实施例2-2 2第三步原料2b替换为5g(30mg，0.039mmol)采用相同的反应条件，得到标题产物5(15mg，产率：58％)。
MS m/z(ESI):667.3[M+1]。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ10.22(s,1H),7.91(d,1H),7.37-7.16(m,8H),6.85(s,1H),4.90-4.56(m,3H),4.19-4.00(m,4H),3.82(s,3H),3.80(s,3H),3.52-3.36(m,3H),2.06-1.97(m,2H),1.89-1.72(m,4H),1.64-1.47(m,2H),1.24(d,3H),0.82-0.63(m,4H)。
实施例2-6 6
(S)-7-甲氧基-8-((5-(((S)-7-甲氧基-5-氧代-5,11a-二氢-1H,3H-螺[苯并[e]吡咯并
[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-2,1'-环丙]-8-基)氧基)戊基)氧基)-4-(4-甲氧基苯基)-3-甲基
-3,4-二氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂庚环-2,5-二酮6
第一步
(4-甲氧基苯基)-L-丙氨酸6a
将3a(3.8g，42.6mmol)置于反应瓶中，加入4-碘苯甲醚(5g，21.2mmol，毕得)和N-甲基吡咯烷酮(50mL)，再依次加入氧化亚铜(300mg，2.11mmol)，磷酸钾(9g，42.4mmol)，加完后氮气氮气置换三次，升至100℃搅拌反应16小时。反应液冷却，加入饱和柠檬酸溶液至水相pH小于7，用乙酸乙酯萃取(40mL×4)，合并有机相，依次用水(40mL)和饱和氯化钠溶液(40mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤后减压浓缩，所得残余物用CombiFlash快速制备仪以洗脱剂体系A纯化，得到标题产物6a(2.1g，产率：51.2％)。
MS m/z(ESI):196.4[M+1]。
第二步
(4-甲氧基苯基)-L-丙氨酸甲酯6b
将6b(2.1g，10.7mmol)置于反应瓶中，加入甲醇(20mL)，氮气置换三次，降至0℃，滴入氯化亚砜(2.56g，21.5mmol)，保持内温低于10℃，滴完后升至室温搅拌反应4小时，减压浓缩反应液，所得残余物用二氯甲烷(30mL)溶解，依次用碳酸氢钠溶液(30mL)，水(30mL)和饱和氯化钠溶液(30mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤后减压浓缩，所得残余物用薄层色谱法以展开剂体系B纯化，得到标题产物6b(1g，产率：44.4％)。
MS m/z(ESI):210.5[M+1]。
第三步
N-(4-(苄氧基)-5-甲氧基-2-硝基苯甲酰基)-N-(4-甲氧基苯基)-L-丙氨酸甲酯6c
将1a(1.45g，4.78mmol)溶于二氯甲烷(15mL)中，氮气置换三次，依次滴加草酰氯(660mg，5.26mmol)和N,N-二甲基甲酰胺(30μL)，搅拌反应5小时。将6b(1g，4.78mmol)溶于二氯甲烷(20mL)中，氮气置换三次，加入三乙胺(4.83g，47.8mmol)，降温至0℃，滴入上述1a所得的二氯甲烷溶液，加完后升至室温搅拌18小时。反应液中加入饱和氯化铵溶液(20mL)，分液，有机相依次用饱和碳酸氢钠溶液(20mL)，饱和氯化钠溶液(20mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤后减压浓缩，所得残余物用薄层色谱法以洗脱剂体系B纯化，得到标题产物6c(2.1g，产率：88.9％)。
MS m/z(ESI):495.6[M+1]。
第四步(S)-8-(苄氧基)-7-甲氧基-4-(4-甲氧基苯基)-3-甲基-3,4-二氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂庚环-2,5-二酮6d
将6c(2g，4.04mmol)溶于乙醇(25mL)中，依次加入还原铁粉(1.13g，20.1mmol)和氯化铵(2.6g，48.6mmol)，加完后氮气置换三次，升至75℃搅拌16小时，反应液通过硅藻土热过滤，滤饼用甲醇(15mL)淋洗，合并滤液，滤液经减压浓缩，所得残余物用四氢呋喃(35mL)溶解，加入浓硫酸(200μL)，氮气置换三次，升至75℃搅拌反应16小时，减压浓缩，所得残余物用二氯甲烷(35mL)溶解，再依次用饱和碳酸氢钠溶液(15mL)，饱和氯化钠溶液(20mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤后减压浓缩，所得残余物用薄层色谱法以洗脱剂体系B纯化，得到标题产物6d(1.45g，产率：83.3％)。
MS m/z(ESI):433.6[M+1]。
第五步(S)-8-羟基-7-甲氧基-4-(4-甲氧基苯基)-3-甲基-3,4-二氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂庚环-2,5-二酮6e
将6d(1.25g，2.89mmol)溶于16mL乙醇和四氢呋喃(V/V＝3:1)的混合溶剂中，加入钯碳(200mg，含量10％，干型)，氢气置换三次，室温搅拌反应4小时。反应液通过硅藻土过滤，滤液经减压浓缩，所得残余物用薄层色谱法以洗脱剂体系A纯化，得到标题产物6e(989mg，产率：100％)。
MS m/z(ESI):343.5[M+1]。
第六步
(S)-8-((5-溴戊基)氧基)-7-甲氧基-4-(4-甲氧基苯基)-3-甲基-3,4-二氢-1H-苯并
[e][1,4]二氮杂庚环-2,5-二酮6f
将6e(1g，2.92mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(10mL)中，加入1,5-二溴戊烷(3.3g，14.3mmol)和无水碳酸钾(403mg，2.92mmol)，室温下搅拌16小时。向反应液中加入水(15mL)，用乙酸乙酯萃取(15mL×3)，合并有机相，依次用水(10mL×3)和饱和氯化钠溶液(10mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤后减压浓缩，所得残余物用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系B纯化，得到标题产物6f(830mg，产率：58％)。
MS m/z(ESI):491.1[M+1]。
第七步(11aS)-11-((叔丁基二甲基硅基)氧基)-7-甲氧基-8-((5-(((S)-7-甲氧基-4-(4-甲氧基苯基)-3-甲基-2,5-二氧代-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂庚环-8-基)氧基)戊基)氧基)-5-氧代-11,11a-二氢-1H,3H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-2,1'-环丙烷]-10(5H)-羧酸烯丙酯6g
将6f(50mg，0.10mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(3mL)中，加入1i(49.7mg，0.10mmol)，再加入无水碳酸钾(56.3mg，0.41mmol)，室温搅拌12小时。向反应液中加水(10mL)，用乙酸乙酯萃取(15mL×3)，合并有机相，依次用水(15mL×3)和饱和氯化钠溶液(20mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤后减压浓缩，所得残余物用薄层色谱法以展开剂体系A纯化，得到标题产物6g(60mg，产率：65.5％)。
MS m/z(ESI):899.3[M+1]。
第八步(11aS)-11-羟基-7-甲氧基-8-((5-(((S)-7-甲氧基-4-(4-甲氧基苯基)-3-甲基-2,5-二氧代-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂庚环-8-基)氧基)戊基)氧基)-5-氧代-11,11a-二氢-1H,3H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-2,1'-环丙烷]-10(5H)-羧酸烯丙酯6h
将6g(60mg，0.067mmol)溶于无水四氢呋喃(3mL)中，依次加入冰乙酸(24mg，0.303mmol)和四丁基氟化铵的四氢呋喃溶液(1M，0.334mL，0.334mmol)，加毕，室温搅拌2小时。加入乙酸乙酯(15mL)稀释，依次用饱和碳酸氢钠溶液(10mL×2)和饱和氯化钠溶液(10mL×2)洗涤。有机相用无水硫酸钠干燥，过滤后减压浓缩，所得残余物用薄层色谱法以展开剂体系A纯化，得到标题产物6h(37mg，产率：70.7％)。
MS m/z(ESI):785.9[M+1]。
第九步
(S)-7-甲氧基-8-((5-(((S)-7-甲氧基-5-氧代-5,11a-二氢-1H,3H-螺[苯并[e]吡咯并
[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-2,1'-环丙]-8-基)氧基)戊基)氧基)-4-(4-甲氧基苯基)-3-甲基
-3,4-二氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂庚环-2,5-二酮6
将6h(37mg，0.047mmol)溶于无水二氯甲烷(2mL)，依次加入吡咯烷(16.8mg，0.236mmol)和四(三苯基膦)钯(5.5mg，0.0047mmol)，氮气置换三次，搅拌反应30分钟。反应液经减压浓缩除去有机溶剂，所得残余物用薄层色谱法以展开剂体系A纯化，得到标题产物6(21mg，产率：65.5％)。
MS m/z(ESI):683.9[M+1]。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ10.33(s,1H),7.92(d,1H),7.34-7.32(m,1H),7.26-7.22(m,1H),7.07-7.04(m,1H),6.99-6.95(m,2H),6.86-6.83(m,1H),6.74(s,1H),6.60-6.56(m,1H),4.15-4.09(m,1H),4.07-3.93(m,4H),3.83-3.74(m,7H),3.71-3.67(m,1H),3.67-3.58(m,2H),3.52-3.44(m,2H),3.16-3.10(m,1H),2.44-2.40(m,1H),2.08-1.96(m,2H),1.87-1.79(m,3H),1.63-1.55(m,2H),1.48-1.42(m,1H),0.88-0.82(m,1H),0.70-0.56(m,3H)。
实施例2-7 7
(S)-7-甲氧基-8-((5-(((S)-7-甲氧基-4-(4-甲氧基苯基)-3-甲基-5-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂庚环-8-基)氧基)戊基)氧基)-1,11a-二氢-3H,5H-螺[苯并[e]
吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-2,1'-环丙]-5-酮7
第一步(S)-8-((5-溴戊基)氧基)-7-甲氧基-4-(4-甲氧基苯基)-3-甲基-1,2,3,4-四氢-5H-苯并
[e][1,4]二氮杂庚环-5-酮7a
将6g(117mg，0.238mmol)溶于四氢呋喃(2mL)中，氮气置换三次，冰浴下加入硼烷四氢呋喃溶液(1M，3.58mL，3.58mmol)，室温搅拌反应5小时，降温至0℃，向反应体系中缓慢滴入甲醇(5mL)，滴完后减压浓缩反应液，所得残余物用乙酸乙酯(20mL)溶解，依次用水(15mL)，饱和氯化钠溶液(15mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤后减压浓缩，所得残余物不经纯化直接用于下一步反应。
MS m/z(ESI):477.1[M+1]。
第二步
(S)-8-((5-溴戊基)氧基)-7-甲氧基-4-(4-甲氧基苯基)-3-甲基-5-氧代-2,3,4,5-四氢
-1H-苯并[e][1,4]二氮杂庚环-1-羧酸烯丙酯7b
将7a(55mg，0.116mmol)溶于无水二氯甲烷(10mL)中，冰水浴冷却，依次加入吡啶(18.3mg，0.231mmol)和氯甲酸烯丙酯(55.7mg，0.462mmol，阿达玛斯)，冰浴下搅拌20分钟。向反应液中加入二氯甲烷(10mL)稀释，再加入10％柠檬酸水溶液(10mL)，搅拌两分钟后静置分层，保留有机相。有机相用饱和氯化钠溶液(10mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤后，滤液减压浓缩，所得残余物用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系B纯化，得到标题产物7b(55mg，产率：64.7％)。
MS m/z(ESI):561.2[M+1]。
第三步(11aS)-8-((5-(((S)-1-((烯丙基氧基)羰基)-7-甲氧基-4-(4-甲氧基苯基)-3-甲基-5-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂庚环-8-基)氧基)戊基)氧基)-11-((叔丁基二甲基硅基)氧基)-7-甲氧基-5-氧代-11,11a-二氢-1H,3H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]
二氮杂庚环-2,1'-环丙烷]-10(5H)-羧酸烯丙酯7c
将7b(55mg，0.098mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(3mL)中，加入1i(48mg，0.098mmol)，再加入无水碳酸钾(54.2mg，0.392mmol)，室温搅拌12小时。向反应液中加水(10mL)，用乙酸乙酯萃取(15mL×3)，合并有机相，依次用水(15mL×3)和饱和氯化钠溶液(20mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤后减压浓缩，所得残余物用薄层色谱法以展开剂体系A纯化，得到标题产物7c(80mg，产率：84.2％)。MS m/z(ESI):969.8[M+1]。
第四步(11aS)-8-((5-(((S)-1-((烯丙基氧基)羰基)-7-甲氧基-4-(4-甲氧基苯基)-3-甲基-5-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂庚环-8-基)氧基)戊基)氧基)-11-羟基-7-甲氧基-5-氧代-11,11a-二氢-1H,3H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-2,1'-环丙烷]-10(5H)-羧酸烯丙酯7d
将7c(80mg，0.082mmol)溶于无水四氢呋喃(3mL)中，依次加入冰乙酸(29.8mg，0.496mmol)和四丁基氟化铵的四氢呋喃溶液(1M，0.41mL，0.41mmol)，加毕，室温搅拌2小时。加入乙酸乙酯(15mL)稀释，依次用饱和碳酸氢钠溶液(10mL×2)和饱和氯化钠溶液(10mL×2)洗涤。有机相用无水硫酸钠干燥，过滤后减压浓缩，所得残余物用薄层色谱法以展开剂体系A纯化，得到标题产物7d(60mg，产率：85.1％)。
MS m/z(ESI):855.6[M+1]。
第五步(S)-7-甲氧基-8-((5-(((S)-7-甲氧基-4-(4-甲氧基苯基)-3-甲基-5-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂庚环-8-基)氧基)戊基)氧基)-1,11a-二氢-3H,5H-螺[苯并[e]
吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-2,1'-环丙]-5-酮7
将7d(60mg，0.07mmol)溶于无水二氯甲烷(2mL)，依次加入吡咯烷(50mg，0.703mmol)和四(三苯基膦)钯(4mg，0.0034mmol)，氮气置换三次，搅拌反应30分钟。反应液经减压浓缩除去有机溶剂，所得残余物用薄层色谱法以展开剂体系A纯化，得到标题产物7(28mg，产率：59.7％)。
MS m/z(ESI):669.9[M+1]。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ7.92(d,1H),7.40-7.38(m,1H),7.33(s,1H),7.25(s,1H),7.06(s,1H),6.5-6.92(m,2H),6.86-6.83(m,1H),6.58(s,1H),4.16-4.10(m,1H),4.06-4.00(m,1H),3.83-3.81(m,3H),3.78-3.75(m,6H),3.71-3.68(m,2H),3.67-3.65(m,1H),3.48-3.40(m,6H),2.46-2.41(m,1H),2.06-1.98(m,2H),1.85-1.79(m,3H),1.61-1.56(m,2H),1.10(d,3H),0.87-0.82(m,1H),0.70-0.58(m,3H)。
实施例2-9 9
(S)-7-甲氧基-8-((5-(((S)-7-甲氧基-5-氧代-5,11a-二氢-1H,3H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-2,1'-环丙]-8-基)氧基)戊基)氧基)-3-甲基-4-苯基-3,4-二氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂庚环-2,5-二酮9
第一步
(11aS)-11-((叔丁基二甲基硅基)氧基)-7-甲氧基8-((5-(((S)-7-甲氧基-3-甲基-2,5-二氧代-4-苯基-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂庚环-8-基)氧基)戊基)氧基)-5-氧代-11,11a-二氢-1H,3H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-2,1'-环丙烷]-10(5H)-羧酸烯丙酯9a
将实施例2-6 6第七步原料6f替换为3f(33mg，0.071mmol)采用相同的反应条件，得到标题产物9a(40mg，产率：65％)。
MS m/z(ESI):869.4[M+1]。
第二步
(11aS)-11-羟基-7-甲氧基-8-((5-(((S)-7-甲氧基-3-甲基-2,5-二氧代-4-苯基-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂庚环-8-基)氧基)戊基)氧基)-5-氧代-11,11a-二氢-1H,3H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-2,1'-环丙烷]-10(5H)-羧酸烯丙酯
9b
将实施例2-6 6第八步原料6g替换为9a(40mg，0.042mmol)采用相同的反应条件，得到标题产物9b(26mg，产率：75％)。
MS m/z(ESI):755.3[M+1]。
第三步
(S)-7-甲氧基-8-((5-(((S)-7-甲氧基-5-氧代-5,11a-二氢-1H,3H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-2,1'-环丙]-8-基)氧基)戊基)氧基)-3-甲基-4-苯基-3,4-二氢
-1H-苯并[e][1,4]二氮杂庚环-2,5-二酮9
将实施例2-6 6第九步原料6h替换为9b(26mg，0.031mmol)采用相同的反应条件，得到标题产物9(15mg，产率：74％)。
MS m/z(ESI):653.3[M+1]。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ10.36(s,1H),7.91(d,1H),7.47-7.35(m,5H),7.33(s,1H),7.26(s,1H),7.26(s,1H),6.85(s,1H),4.51-4.42(m,1H),4.14-3.96(m,4H),3.82(s,3H),3.79(s,3H),3.62-3.39(m,3H),2.06-1.95(m,2H),1.89-1.76(m,4H),1.65-1.58(m,2H),1.28-1.23(m,3H),0.83-0.62(m,4H)。
实施例2-10 10
(S)-7-甲氧基-8-((5-((7-甲氧基-5-氧代-5,11a-二氢-1H,3H-螺[苯并[e]吡咯并
[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-2,1'-环丙]-8-基)氧基)戊基)氧基)-4-(4-甲氧基苯基)-3,4-二氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂庚环-2,5-二酮10
第一步
N-(4-(苄氧基)-5-甲氧基-2-硝基苯甲酰基)-N-(4-甲氧基苯基)甘氨酸甲酯10b
methyl N-(4-(benzyloxy)-5-methoxy-2-nitrobenzoyl)-N-(4-methoxyphenyl)glycinate
将实施例2-1 1第一步原料1b替换为10a(0.51g，2.61mmol，采用公知的方法“Chemical and Pharmaceutical Bulletin,2017,65(6),573-581”制备而得)采用相同的反应条件，得到标题产物10b(1.13g，产率：90.0％)。
MS m/z(ESI):481.1[M+1]。
第二步
8-(苄氧基)-7-甲氧基-4-(4-甲氧基苯基)-3,4-二氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂庚环-2,5-
二酮10c
将实施例2-1 1第二步原料1c替换为10b(0.41g，0.86mmol)采用相同的反应条件，得到标题产物10c(0.27g，产率：74.7％)。
MS m/z(ESI):419.1[M+1]。
第三步
8-羟基-7-甲氧基-4-(4-甲氧基苯基)-3,4-二氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂庚环-2,5-二酮10d
将10c(270mg，0.65mmol)置于单口瓶中，加入无水四氢呋喃(3mL)，无水甲醇(3mL)和二氯甲烷(1mL)，加入钯碳(50mg，含量10％，干型)，氢气置换三次，加热至50℃，搅拌反应5小时。反应液冷却至室温，用油滤纸过滤，滤饼用甲醇(20mL)淋洗，滤液减压浓缩，所得残余物用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系A纯化，得到标题产物10d(183mg，产率：86.4％)。
MS m/z(ESI):329.4[M+1]。
第四步
8-((5-溴戊基)氧基)-7-甲氧基-4-(4-甲氧基苯基)-3,4-二氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂庚环-2,5-二酮10e
将10d(183mg，0.56mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(4mL)中，加入1,5-二溴戊烷(513mg，2.23mmol)和无水碳酸钾(92mg，0.67mmol)，室温下搅拌16小时。向反应液中加入水(20mL)，用乙酸乙酯萃取(20mL×3)，合并有机相，依次用水(20mL×3)和饱和氯化钠溶液(20mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤后减压浓缩，所得残余物用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系B纯化，得到标题产物10e(95mg，产率：35.7％)。
MS m/z(ESI):477.2[M+1]。
第五步
(11aS)-11-((叔丁基二甲基硅基)氧基)-7-甲氧基-8-((5-((7-甲氧基-4-(4-甲氧基苯基)-2,5-二氧代-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂庚环-8-基)氧基)戊基)氧基)-5-氧代-11,11a-二氢-1H,3H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-2,1'-环丙烷]-10(5H)-羧酸烯丙酯10f
将10e(47mg，0.098mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(3mL)中，加入1i(63mg，0.13mmol)，再加入无水碳酸钾(41mg，0.30mmol)，室温搅拌16小时。向反应液中加水(20mL)，用乙酸乙酯萃取(20mL×3)，合并有机相，依次用水(20mL×3)和饱和氯化钠溶液(20mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤后减压浓缩，所得残余物用薄层色谱法以展开剂体系A纯化，得到粗品标题产物10f(95mg)。
MS m/z(ESI):885.7[M+1]。
第六步(11aS)-11-羟基-7-甲氧基-8-((5-((7-甲氧基-4-(4-甲氧基苯基)-2,5-二氧代-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂庚环-8-基)氧基)戊基)氧基)-5-氧代-11,11a-二氢-1H,3H-
螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-2,1'-环丙烷]-10(5H)-羧酸烯丙酯10g
将10f(95mg，0.11mmol)溶于无水四氢呋喃(3mL)中，依次加入冰乙酸(39mg，0.65mmol)和四丁基氟化铵的四氢呋喃溶液(1M，0.54mL，0.54mmol)，加毕，室温搅拌4小时。加入乙酸乙酯(30mL)稀释，依次用饱和碳酸氢钠溶液(20mL×2)和饱和氯化钠溶液(20mL×2)洗涤。有机相用无水硫酸钠干燥，过滤后减压浓缩，所得残余物用薄层色谱法以展开剂体系A纯化，得到标题产物10g(52mg，产率：62.9％)。
MS m/z(ESI):771.6[M+1]。
第七步
(S)-7-甲氧基-8-((5-((7-甲氧基-5-氧代-5,11a-二氢-1H,3H-螺[苯并[e]吡咯并
[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-2,1'-环丙]-8-基)氧基)戊基)氧基)-4-(4-甲氧基苯基)-3,4-二氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂庚环-2,5-二酮10
将10g(52mg，0.067mmol)溶于无水二氯甲烷(3mL)，依次加入吡咯烷(48mg，0.67mmol)和四(三苯基膦)钯(7.8mg，0.0067mmol)，氮气置换三次，搅拌反应30分钟。反应液经减压浓缩除去有机溶剂，所得残余物用薄层色谱法以展开剂体系A纯化，得到标题产物10(35mg，产率：77.6％)。
MS m/z(ESI):669.7[M+1]。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ10.33(s,1H),7.91(d,1H),7.33(s,1H),7.29(s,1H),7.26(s,2H),6.99(s,1H),6.97(s,1H),6.85(s,1H),6.74(s,1H),4.14-4.10(m,3H),4.05-4.00(m,3H),3.82(s,3H),3.79-3.76(m,6H),3.51-3.48(m,2H),3.35-3.31(m,1H),1.90-1.78(m,5H),1.63-1.55(m,3H),0.73-0.61(m,4H)。
实施例2-11 11
(S)-7-甲氧基-8-((5-(((S)-7-甲氧基-3-甲基-5-氧代-4-(4-(三氟甲基)苯基)-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂庚环-8-基)氧基)戊基)氧基)-1,11a-二氢-3H,5H-螺[苯并
[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-2,1'-环丙]-5-酮11
实施例2-12 12
(S)-8-((5-(((S)-4-(4-氟苯基)-7-甲氧基-3-甲基-5-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂庚环-8-基)氧基)戊基)氧基)-7-甲氧基-1,11a-二氢-3H,5H-螺[苯并[e]吡咯并
[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-2,1'-环丙]-5-酮12
实施例2-13 13
(S)-7-甲氧基-8-((5-(((S)-7-甲氧基-3-甲基-5-氧代-4-(吡啶-2-基)-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂庚环-8-基)氧基)戊基)氧基)-1,11a-二氢-3H,5H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-2,1'-环丙]-5-酮13
实施例2-14 14
(S)-7-甲氧基-8-((5-((7-甲氧基-5-氧代-5,11a-二氢-1H,3H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-2,1'-环丙]-8-基)氧基)戊基)氧基)-4-(萘-2-基)-3,4-二氢-1H-
苯并[e][1,4]二氮杂庚环-2,5-二酮14
实施例2-15 15
(S)-7-甲氧基-8-((5-((7-甲氧基-5-氧代-5,11a-二氢-1H,3H-螺[苯并[e]吡咯并
[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-2,1'-环丙]-8-基)氧基)戊基)氧基)-4-(喹啉-4-基)-3,4-二氢
-1H-苯并[e][1,4]二氮杂庚环-2,5-二酮15
实施例2-16 16
(S)-7-甲氧基-8-((5-((7-甲氧基-5-氧代-5,11a-二氢-1H,3H-螺[苯并[e]吡咯并
[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-2,1'-环丙]-8-基)氧基)戊基)氧基)-4-(喹啉-6-基)-3,4-二氢
-1H-苯并[e][1,4]二氮杂庚环-2,5-二酮16
实施例2-17 17
(S)-7-甲氧基-8-((5-(((S)-7-甲氧基-3-甲基-4-(萘-2-基)-5-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂庚环-8-基)氧基)戊基)氧基)-1,11a-二氢-3H,5H-螺[苯并[e]吡咯并
[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-2,1'-环丙]-5-酮17
实施例2-18 18
(S)-7-甲氧基-8-((5-(((S)-7-甲氧基-3-甲基-5-氧代-4-(喹啉-4-基)-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂庚环-8-基)氧基)戊基)氧基)-1,11a-二氢-3H,5H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-2,1'-环丙]-5-酮18
实施例2-19 19
(S)-7-甲氧基-8-((5-(((S)-7-甲氧基-3-甲基-5-氧代-4-(喹啉-6-基)-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂庚环-8-基)氧基)戊基)氧基)-1,11a-二氢-3H,5H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-2,1'-环丙]-5-酮19
实施例2-20 20
(S)-7-甲氧基-8-((5-(((S)-7-甲氧基-5-氧代-5,11a-二氢-1H,3H-螺[苯并[e]吡咯并
[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-2,1'-环丙]-8-基)氧基)戊基)氧基)-3-甲基-4-(4-(三氟甲基)
苯基)-3,4-二氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂庚环-2,5-二酮20
实施例2-21 21
(S)-4-(4-氟苯基)-7-甲氧基-8-((5-(((S)-7-甲氧基-5-氧代-5,11a-二氢-1H,3H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-2,1'-环丙]-8-基)氧基)戊基)氧基)-3-甲基-3,4-二氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂庚环-2,5-二酮21
/>
实施例2-22 22
(S)-7-甲氧基-8-((5-(((S)-7-甲氧基-5-氧代-5,11a-二氢-1H,3H-螺[苯并[e]吡咯并
[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-2,1'-环丙]-8-基)氧基)戊基)氧基)-3-甲基-4-(吡啶-2-
基)-3,4-二氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂庚环-2,5-二酮22
实施例2-23 23
(S)-7-甲氧基-8-((5-(((S)-7-甲氧基-3-甲基-5-氧代-4-苯基-4,5-二氢-3H-苯并[e][1,4]二氮杂庚环-8-基)氧基)戊基)氧基)-1,11a-二氢-3H,5H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]
二氮杂庚环-2,1'-环丙]-5-酮23
三、药物连接子实施例
实施例3-1LD-1
{4-[(2S)-2-[(2S)-2-{2-[2-(4-{2-氮杂三环[10.4.0.04,9]十六-1(12),4(9),5,7,13,15-六烯-10-炔-2-基}-4-氧代丁酰氨基)乙酰氨基]乙酰氨基}-3-甲基丁酰氨基]丙酰氨基]苯基}甲基(7'S)-8'-羟基-13'-甲氧基-12'-[(5-{[(3S)-7-甲氧基-3-甲基-5-氧代-4-苯基-2,3,4,5-四氢-1H-1,4-苯并二氮杂庚环-8-基]氧基}戊基)氧基]-2'-氧代-3',9'-二氮杂螺[环丙烷-1,5'-三环[8.4.0.03,7]十四烷]-1'(14'),10',12'-三烯-9'-羧酸酯
LD-1
第一步
4-((S)-2-((S)-2-(((烯丙基氧基)羰基)氨基)-3-甲基丁酰氨基)丙酰氨基)苄基(11aS)-8-((5-(((S)-1-((烯丙基氧基)羰基)-7-甲氧基-3-甲基-5-氧代-4-苯基-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂庚环-8-基)氧基)戊基)氧基)-11-((叔丁基二甲基硅基)氧基)-7-甲氧基-5-氧代-11,11a-二氢-1H,3H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-2,1'-环丙烷]-10(5H)-羧酸酯3-1b
将7b(50mg，0.094mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(3mL)中，加入4-((S)-2-((S)-2-(((烯丙基氧基)羰基)氨基)-3-甲基丁酰氨基)丙酰氨基)苄基(11aS)-11-((叔丁基二甲基硅基)氧基)-8-羟基-7-甲氧基-5-氧代-11,11a-二氢-1H,3H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-2,1'-环丙烷]-10(5H)-羧酸酯3-1a(76mg，0.094mmol，采用专利申请“CN111164208 A中说明书第123页的实施例1”公开的方法制备而得)，再加入无水碳酸钾(39mg，0.282mmol)，室温搅拌12小时。向反应液中加水(10mL)，用乙酸乙酯萃取(15mL×3)，合并有机相，依次用水(15mL×3)和饱和氯化钠溶液(20mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤后减压浓缩，所得残余物用薄层色谱法以展开剂体系A纯化，得到粗品标题产物3-1b(144mg)。
MS m/z(ESI):1258.5[M+1]。
第二步
4-((S)-2-((S)-2-(((烯丙基氧基)羰基)氨基)-3-甲基丁酰氨基)丙酰氨基)苄基(11aS)-8-((5-(((S)-1-((烯丙基氧基)羰基)-7-甲氧基-3-甲基-5-氧代-4-苯基-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂庚环-8-基)氧基)戊基)氧基)-11-羟基-7-甲氧基-5-氧代-11,11a-二氢-1H,3H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-2,1'-环丙烷]-10(5H)-羧酸酯3-1c
将3-1b(144mg，0.114mmol)溶于无水四氢呋喃(3mL)中，依次加入冰乙酸(41.2mg，0.687mmol)和四丁基氟化铵的四氢呋喃溶液(1M，572mL，0.572mmol)，加毕，室温搅拌7小时。加入乙酸乙酯(15mL)稀释，依次用饱和碳酸氢钠溶液(10mL×2)和饱和氯化钠溶液(10mL×2)洗涤。有机相用无水硫酸钠干燥，过滤后减压浓缩，所得残余物用薄层色谱法以展开剂体系A纯化，得到标题产物3-1c(84mg，产率：64.1％)。
MS m/z(ESI):1144.9[M+1]。
第三步
4-((S)-2-((S)-2-氨基-3-甲基丁酰氨基)丙酰氨基)苄基(11aS)-11-羟基-7-甲氧基-8-((5-(((S)-7-甲氧基-3-甲基-5-氧代-4-苯基-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂庚环-8-基)氧基)戊基)氧基)-5-氧代-11,11a-二氢-1H,3H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]
二氮杂庚环-2,1'-环丙烷]-10(5H)-羧酸酯3-1d
将3-1c(84mg，0.073mmol)溶于无水二氯甲烷(2mL)，依次加入吡咯烷(52mg，0.731mmol)和四(三苯基膦)钯(8mg，0.0069mmol)，氮气置换三次，搅拌反应30分钟。反应液经减压浓缩除去有机溶剂，所得残余物用薄层色谱法以展开剂体系A纯化，得到标题产物3-1d(53mg，产率：74％)。
MS m/z(ESI):976.9[M+1]。
第四步
{4-[(2S)-2-[(2S)-2-{2-[2-(4-{2-氮杂三环[10.4.0.04,9]十六-1(12),4(9),5,7,13,15-六烯-10-炔-2-基}-4-氧代丁酰氨基)乙酰氨基]乙酰氨基}-3-甲基丁酰氨基]丙酰氨基]苯基}甲基(7'S)-8'-羟基-13'-甲氧基-12'-[(5-{[(3S)-7-甲氧基-3-甲基-5-氧代-4-苯基-2,3,4,5-四氢-1H-1,4-苯并二氮杂庚环-8-基]氧基}戊基)氧基]-2'-氧代-3',9'-二氮杂螺[环丙烷-1,5'-三环[8.4.0.03,7]十四烷]-1'(14'),10',12'-三烯-9'-羧酸酯
LD-1
将3-1d(15mg，0.015mmol)溶于2.2mL无水二氯甲烷和甲醇(V/V＝10:1)的混合溶剂，依次加入2-[2-(4-{2-氮杂三环[10.4.0.04,9]十六-1(12),4(9),5,7,13,15-六烯-10-炔-2-基}-4-氧代丁酰氨基)乙酰氨基]乙酸3-1f(8.4mg，0.02mmol，采用专利申请“CN111164208 A中说明书第127页的实施例2”公开的方法制备而得)和4-(4,6-二甲氧基三嗪-2-基)-4-甲基吗啉盐酸盐(8.5mg，0.03mmol，韶远)，氮气置换三次，室温搅拌反应1.5小时。反应液经减压浓缩除去有机溶剂，所得残余物用薄层色谱法以展开剂体系A纯化，得到标题产物LD-1(20mg，产率：94.3％)。
MS m/z(ESI):689.5[M/2+1]。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ12.43(s,1H),9.89(s,1H),8.24-8.09(m,3H),8.08-8.00(m,1H),7.78-7.73(m,1H),7.72-7.64(m,2H),7.64-7.58(m,1H),7.56-7.52(m,1H),7.51-7.24(m,7H),7.22-7.17(m,2H),7.07-7.01(m,1H),6.74-6.70(m,1H),6.67-6.62(m,1H),4.39-4.32(m,1H),4.23-4.18(m,1H),3.98-3.72(m,11H),3.65-3.57(m,4H),3.56-3.38(m,7H),3.19-3.09(m,2H),2.69-2.61(m,6H),2.38-2.34(m,1H),2.31-2.23(m,2H),2.09-1.94(m,4H),1.85-1.71(m,4H),1.61-1.49(m,3H),1.47-1.43(m,1H),1.38-1.31(m,2H),1.17-1.08(m,2H),0.89-0.83(m,3H),0.83-0.76(m,2H),0.73-0.67(m,1H),0.65-0.53(m,3H)。
实施例3-2LD-2
{4-[(2S)-2-[(2S)-2-{2-[2-(4-{2-氮杂三环[10.4.0.04,9]十六-1(12),4(9),5,7,13,15-六烯-10-炔-2-基}-4-氧代丁酰氨基)乙酰氨基]乙酰氨基}-3-甲基丁酰氨基]丙酰氨基]苯基}甲基(7'S)-8'-羟基-13'-甲氧基-12'-({5-[(7-甲氧基-2,5-二氧代-4-苯基-2,3,4,5-四氢-1H-1,4-苯并二氮杂庚环-8-基)氧基]戊基}氧基)-2'-氧代-3',9'-二氮杂螺[环丙烷-
1,5'-三环[8.4.0.03,7]十四烷]-1'(14'),10',12'-三烯-9'-羧酸酯LD-2
第一步
4-((S)-2-((S)-2-(((烯丙基氧基)羰基)氨基)-3-甲基丁酰氨基)丙酰氨基)苄基(11aS)-11-((叔丁基二甲基硅基)氧基)-7-甲氧基-8-((5-((7-甲氧基-2,5-二氧代-4-苯基-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂庚环-8-基)氧基)戊基)氧基)-5-氧代-11,11a-二氢-1H,3H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-2,1'-环丙烷]-10(5H)-羧酸酯3-2a
将3-1a(65mg，0.080mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(4mL)中，加入1f(40mg，0.089mmol)，再加入无水碳酸钾(45mg，0.33mmol)，室温搅拌16小时。向反应液中加水(20mL)，用乙酸乙酯萃取(20mL×3)，合并有机相，依次用水(20mL×3)和饱和氯化钠溶液(20mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤后减压浓缩，所得残余物用薄层色谱法以展开剂体系A纯化，得到标题产物3-2a(89mg，产率：94.2％)。
MS m/z(ESI):1174.8[M+1]。
第二步
4-((S)-2-((S)-2-(((烯丙基氧基)羰基)氨基)-3-甲基丁酰氨基)丙酰氨基)苄基(11aS)-11-羟基-7-甲氧基-8-((5-((7-甲氧基-2,5-二氧代-4-苯基-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂庚环-8-基)氧基)戊基)氧基)-5-氧代-11,11a-二氢-1H,3H-螺[苯并[e]
吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-2,1'-环丙烷]-10(5H)-羧酸酯3-2b
将3-2a(89mg，0.076mmol)溶于无水四氢呋喃(3mL)中，依次加入冰乙酸(27mg，0.45mmol)和四丁基氟化铵的四氢呋喃溶液(1M，0.38mL，0.38mmol)，加毕，室温搅拌3小时。加入乙酸乙酯(30mL)稀释，依次用饱和碳酸氢钠溶液(20mL×2)和饱和氯化钠溶液(20mL×2)洗涤。有机相用无水硫酸钠干燥，过滤后减压浓缩，所得残余物用薄层色谱法以展开剂体系A纯化，得到标题产物3-2b(60mg，产率：74.7％)。
MS m/z(ESI):1060.8[M+1]。
第三步
4-((S)-2-((S)-2-氨基-3-甲基丁酰氨基)丙酰氨基)苄基(11aS)-11-羟基-7-甲氧基-8-((5-((7-甲氧基-2,5-二氧代-4-苯基-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂庚环-8-基)氧基)戊基)氧基)-5-氧代-11,11a-二氢-1H,3H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-2,1'-环丙烷]-10(5H)-羧酸酯3-2c
将3-2b(60mg，0.057mmol)溶于无水二氯甲烷(2mL)，依次加入吡咯烷(41mg，0.58mmol)和四(三苯基膦)钯(6.5mg，0.0056mmol)，氮气置换三次，搅拌反应40分钟。反应液经减压浓缩除去有机溶剂，所得残余物用薄层色谱法以展开剂体系A纯化，得到标题产物3-2c(33mg，产率：59.7％)。
MS m/z(ESI):976.8[M+1]。
第四步
{4-[(2S)-2-[(2S)-2-{2-[2-(4-{2-氮杂三环[10.4.0.04,9]十六-1(12),4(9),5,7,13,15-六烯-10-炔-2-基}-4-氧代丁酰氨基)乙酰氨基]乙酰氨基}-3-甲基丁酰氨基]丙酰氨基]苯基}甲基(7'S)-8'-羟基-13'-甲氧基-12'-({5-[(7-甲氧基-2,5-二氧代-4-苯基-2,3,4,5-四氢-1H-1,4-苯并二氮杂庚环-8-基)氧基]戊基}氧基)-2'-氧代-3',9'-二氮杂螺[环丙烷-
1,5'-三环[8.4.0.03,7]十四烷]-1'(14'),10',12'-三烯-9'-羧酸酯LD-2
将3-2c(11mg，0.011mmol)和3-1f(6.2mg，0.015mmol)溶于1.65mL无水二氯甲烷和无水甲醇(V/V＝10:1)的混合溶剂中，加入4-(4,6-二甲氧基-1,3,5-三嗪-2-基)-4-甲基氯化吗啉盐(6.3mg，0.023mmol)，室温下搅拌30分钟。减压浓缩除去有机溶剂，所得残余物用薄层色谱法以展开剂体系A纯化，得到标题产物LD-2(13mg，产率：83.7％)。
MS m/z(ESI):1377.5[M+1]。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ12.42(br,1H),10.37(s,1H),9.89(s,1H),8.24-8.19(m,1H),8.18-8.10(m,1H),8.10-7.98(m,2H),7.78-7.62(m,3H),7.62-7.57(m,1H),7.57-7.52(m,1H),7.52-7.42(m,3H),7.42-7.26(m,5H),7.20(s,1H),7.04(s,1H),6.76-6.71(m,1H),6.69-6.62(m,1H),6.55(s,1H),5.76(t,1H),5.35-5.30(m,1H),5.19(d,1H),5.02(d,1H),4.84-4.78(m,1H),4.39-4.32(m,1H),4.22-4.15(m,2H),4.03(t,2H),3.95-3.92(m,1H),3.86(s,3H),3.79(s,3H),3.76-3.71(m,1H),3.65-3.57(m,3H),3.53(t,1H),3.40(t,1H),3.15(d,1H),2.64(s,1H),2.36(s,1H),2.33-2.22(m,2H),2.11-1.95(m,4H),1.87-1.72(m,4H),1.62-1.51(m,3H),1.48-1.42(m,1H),1.34(d,1H),1.32-1.24(m,6H),0.89-0.83(m,3H),0.82-0.77(m,2H),0.72-0.68(m,1H),0.65-0.57(m,2H)。
实施例3-3LD-3
{4-[(2S)-2-[(2S)-2-{2-[2-(4-{2-氮杂三环[10.4.0.04,9]十六-1(12),4(9),5,7,13,15-六烯-10-炔-2-基}-4-氧代丁酰氨基)乙酰氨基]乙酰氨基}-3-甲基丁酰氨基]丙酰氨基]苯基}甲基(7'S)-8'-羟基-13'-甲氧基-12'-[(5-{[(3S)-7-甲氧基-3-甲基-5-氧代-4-[4-(三氟甲基)苯基]-2,3,4,5-四氢-1H-1,4-苯并二氮杂庚环-8-基]氧基}戊基)氧基]-2'-氧代-3',9'-二氮杂螺[环丙烷-1,5'-三环[8.4.0.03,7]十四烷]-1'(14'),10',12'-三烯-9'-羧酸酯LD-3
实施例3-4LD-4
{4-[(2S)-2-[(2S)-2-{2-[2-(4-{2-氮杂三环[10.4.0.04,9]十六-1(12),4(9),5,7,13,15-六烯-10-炔-2-基}-4-氧代丁酰氨基)乙酰氨基]乙酰氨基}-3-甲基丁酰氨基]丙酰氨基]苯基}甲基(7'S)-12'-[(5-{[(3S)-4-(4-氟苯基)-7-甲氧基-3-甲基-5-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-1,4-苯并二氮杂庚环-8-基]氧基}戊基)氧基]-8'-羟基-13'-甲氧基-2'-氧代-3',9'-二氮杂螺[环丙烷-1,5'-三环[8.4.0.03,7]十四烷]-1'(14'),10',12'-三烯-9'-羧酸酯LD-4
实施例3-5LD-5
{4-[(2S)-2-[(2S)-2-{2-[2-(4-{2-氮杂三环[10.4.0.04,9]十六-1(12),4(9),5,7,13,15-六烯-10-炔-2-基}-4-氧代丁酰氨基)乙酰氨基]乙酰氨基}-3-甲基丁酰氨基]丙酰氨基]苯基}甲基(7'S)-8'-羟基-13'-甲氧基-12'-[(5-{[(3S)-7-甲氧基-3-甲基-5-氧代-4-(吡啶-2-基)-2,3,4,5-四氢-1H-1,4-苯并二氮杂庚环-8-基]氧基}戊基)氧基]-2'-氧代-3',9'-二氮杂螺[环丙烷-1,5'-三环[8.4.0.03,7]十四烷]-1'(14'),10',12'-三烯-9'-羧酸酯LD-5
实施例3-6LD-6
{4-[(2S)-2-[(2S)-2-{2-[2-(4-{2-氮杂三环[10.4.0.04,9]十六-1(12),4(9),5,7,13,15-六烯-10-炔-2-基}-4-氧代丁酰氨基)乙酰氨基]乙酰氨基}-3-甲基丁酰氨基]丙酰氨基]苯基}甲基(7'S)-8'-羟基-13'-甲氧基-12'-[(5-{[7-甲氧基-4-(萘-2-基)-2,5-二氧代-2,3,4,5-四氢-1H-1,4-苯并二氮杂庚环-8-基]氧基}戊基)氧基]-2'-氧代-3',9'-二氮杂螺[环丙烷-1,5'-三环[8.4.0.03,7]十四烷]-1'(14'),10',12'-三烯-9'--羧酸酯LD-6
实施例3-7LD-7
{4-[(2S)-2-[(2S)-2-{2-[2-(4-{2-氮杂三环[10.4.0.04,9]十六-1(12),4(9),5,7,13,15-六烯-10-炔-2-基}-4-氧代丁酰氨基)乙酰氨基]乙酰氨基}-3-甲基丁酰氨基]丙酰氨基]苯基}甲基(7'S)-8'-羟基-13'-甲氧基-12'-[(5-{[7-甲氧基-2,5-二氧代-4-(喹啉-4-基)-2,3,4,5-四氢-1H-1,4-苯并二氮杂庚环-8-基]氧基}戊基)氧基]-2'-氧代-3',9'-二氮杂螺[环丙烷-1,5'-三环[8.4.0.03,7]十四烷]-1'(14'),10',12'-三烯-9'-羧酸酯LD-7
实施例3-8LD-8
{4-[(2S)-2-[(2S)-2-{2-[2-(4-{2-氮杂三环[10.4.0.04,9]十六-1(12),4(9),5,7,13,15-六烯-10-炔-2-基}-4-氧代丁酰氨基)乙酰氨基]乙酰氨基}-3-甲基丁酰氨基]丙酰氨基]苯基}甲基(7'S)-8'-羟基-13'-甲氧基-12'-[(5-{[7-甲氧基-2,5-二氧代-4-(喹啉-6-基)-2,3,4,5-四氢-1H-1,4-苯并二氮杂庚环-8-基]氧基}戊基)氧基]-2'-氧代-3',9'-二氮杂螺[环丙烷-1,5'-三环[8.4.0.03,7]十四烷]-1'(14'),10',12'-三烯-9'-羧酸酯LD-8
实施例3-9LD-9
{4-[(2S)-2-[(2S)-2-{2-[2-(4-{2-氮杂三环[10.4.0.04,9]十六-1(12),4(9),5,7,13,15-六烯-10-炔-2-基}-4-氧代丁酰氨基)乙酰氨基]乙酰氨基}-3-甲基丁酰氨基]丙酰氨基]苯基}甲基(7'S)-8'-羟基-13'-甲氧基-12'-[(5-{[(3S)-7-甲氧基-3-甲基-4-(萘-2-基)-5-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-1,4-苯并二氮杂庚环-8-基]氧基}戊基)氧基]-2'-氧代-3',9'-二氮杂螺[环丙烷-1,5'-三环[8.4.0.03,7]十四烷]-1'(14'),10',12'-三烯-9'-羧酸酯LD-9
实施例3-10LD-10
{4-[(2S)-2-[(2S)-2-{2-[2-(4-{2-氮杂三环[10.4.0.04,9]十六-1(12),4(9),5,7,13,15-六烯-10-炔-2-基}-4-氧代丁酰氨基)乙酰氨基]乙酰氨基}-3-甲基丁酰氨基]丙酰氨基]苯基}甲基(7'S)-8'-羟基-13'-甲氧基-12'-[(5-{[(3S)-7-甲氧基-3-甲基-5-氧代-4-(喹啉-4-基)-2,3,4,5-四氢-1H-1,4-苯并二氮杂庚环-8-基]氧基}戊基)氧基]-2'-氧代-3',9'-二氮杂螺[环丙烷-1,5'-三环[8.4.0.03,7]十四烷]-1'(14'),10',12'-三烯-9'-羧酸酯LD-10
实施例3-11LD-11
{4-[(2S)-2-[(2S)-2-{2-[2-(4-{2-氮杂三环[10.4.0.04,9]十六-1(12),4(9),5,7,13,15-六烯-10-炔-2-基}-4-氧代丁酰氨基)乙酰氨基]乙酰氨基}-3-甲基丁酰氨基]丙酰氨基]苯基}甲基(7'S)-8'-羟基-13'-甲氧基-12'-[(5-{[(3S)-7-甲氧基-3-甲基-5-氧代-4-(喹啉-6-基)-2,3,4,5-四氢-1H-1,4-苯并二氮杂庚环-8-基]氧基}戊基)氧基]-2'-氧代-3',9'-二氮杂螺[环丙烷-1,5'-三环[8.4.0.03,7]十四烷]-1'(14'),10',12'-三烯-9'-羧酸酯LD-11
实施例3-12LD-12
{4-[(2S)-2-[(2S)-2-{2-[2-(4-{2-氮杂三环[10.4.0.04,9]十六-1(12),4(9),5,7,13,15-六烯-10-炔-2-基}-4-氧代丁酰氨基)乙酰氨基]乙酰氨基}-3-甲基丁酰氨基]丙酰氨基]苯基}甲基(7'S)-8'-羟基-13'-甲氧基-12'-[(5-{[(3S)-7-甲氧基-3-甲基-2,5-二氧代-4-[4-(三氟甲基)苯基]-2,3,4,5-四氢-1H-1,4-苯并二氮杂庚环-8-基]氧基}戊基)氧基]-2'-氧代-3',9'-二氮杂螺[环丙烷-1,5'-三环[8.4.0.03,7]十四烷]-1'(14'),10',12'-三烯-9'-羧酸酯LD-12
实施例3-13LD-13
{4-[(2S)-2-[(2S)-2-{2-[2-(4-{2-氮杂三环[10.4.0.04,9]十六-1(12),4(9),5,7,13,15-六烯-10-炔-2-基}-4-氧代丁酰氨基)乙酰氨基]乙酰氨基}-3-甲基丁酰氨基]丙酰氨基]苯基}甲基(7'S)-12'-[(5-{[(3S)-4-(4-氟苯基)-7-甲氧基-3-甲基-2,5-二氧代-2,3,4,5-四氢-1H-1,4-苯并二氮杂庚环-8-基]氧基}戊基)氧基]-8'-羟基-13'-甲氧基-2'-氧代-3',9'-二氮杂螺[环丙烷-1,5'-三环[8.4.0.03,7]十四烷]-1'(14'),10',12'-三烯-9'-羧酸酯LD-13
实施例3-14LD-14
{4-[(2S)-2-[(2S)-2-{2-[2-(4-{2-氮杂三环[10.4.0.04,9]十六-1(12),4(9),5,7,13,15-六烯-10-炔-2-基}-4-氧代丁酰氨基)乙酰氨基]乙酰氨基}-3-甲基丁酰氨基]丙酰氨基]苯基}甲基(7'S)-8'-羟基-13'-甲氧基-12'-[(5-{[(3S)-7-甲氧基-3-甲基-2,5-二氧代-4-(吡啶-2-基)-2,3,4,5-四氢-1H-1,4-苯并二氮杂庚环-8-基]氧基}戊基)氧基]-2'-氧代-3',9'-二氮杂螺[环丙烷-1,5'-三环[8.4.0.03,7]十四烷]-1'(14'),10',12'-三烯-9'-羧酸酯LD-14
实施例3-15LD-15
{4-[(2S)-2-[(2S)-2-{2-[2-(4-{2-氮杂三环[10.4.0.04,9]十六-1(12),4(9),5,7,13,15-六烯-10-炔-2-基}-4-氧代丁酰氨基)乙酰氨基]乙酰氨基}-3-甲基丁酰氨基]丙酰氨基]苯基}甲基(7'S)-8'-羟基-13'-甲氧基-12'-[(5-{[(3S)-7-甲氧基-3-甲基-5-氧代-4-苯基-4,5二氢-3H-1,4-苯并二氮杂庚环-8-基]氧基}戊基)氧基]-2'-氧代-3',9'-二氮杂螺[环丙烷-1,5'-三环[8.4.0.03,7]十四烷]-1'(14'),10',12'-三烯-9'-羧酸酯LD-15
四、ADC实施例
以下步骤适合ADC-1、ADC-2的制备：
第一步抗体糖链mAb-(OLS-1)的重构
在37℃条件下，向抗ROR1抗体347的PBS缓冲水溶液(pH＝7.4的PBS缓冲水溶液；10.0mg/mL，0.6mL)加入Endo F3(D126A)酶(采用专利申请US10851174B2第21页公开的方法制备而得)(18mg/mL，3.3μL)和OLS-1(构型为N297-(Fuc)SG3)(3.02mg)，置于水浴振荡器，于30℃振荡反应20分钟，停止反应。将反应液用Hitrap Protein A HP蛋白纯化柱纯化(洗脱相：pH为3.0的醋酸缓冲水溶液)，得到mAb-(OLS-1)的亲和洗脱液，于4℃冷藏储存。
mAb-(OLS-1)结构如下所示：
第二步ADC的合成
实施例ADC-1、ADC-2的制备，通过mAb-OLS-1与不同的药物连接子偶联，得到mAb-(OLS-1)-R。
其中mAb-(OLS-1)-R结构如下所示：
ADC-1、ADC-2结构式如mAb-(OLS-1)-R所示，其中R基根据各实施例使用的药物连接子而不同，同时R基的三唑环具有两种结构。具有相似结构及分子量的抗体如Ab2、Ab3或Ab4等可采用类似制备1-a类似的步骤进行去糖基化，并通过与制备mAb-(OLS-1)类似的重构糖链，然后通过类似制备mAb-(OLS-1)-R的步骤与药物连接子(LD)进行偶联。
实施例4-1ADC-1
R选自：
在25℃条件下，向mAb-(OLS-1)的PBS缓冲水溶液(pH＝7.4的PBS缓冲水溶液；6.1mg/mL，0.245mL)加入1,2-丙二醇(0.150mL)。将化合物LD-1(1.01mg)溶解于25μL二甲基亚砜，后与70μL1,2-丙二醇混合均匀，加入到上述反应液中，置于水浴振荡器，于25℃振荡反应12小时，停止反应。将反应液用Sephadex G25凝胶柱脱盐纯化(洗脱相：pH为7.4的PBS缓冲水溶液)，得到标题产物ADC-1的PBS缓冲液，于4℃冷藏储存。
MS计算每一分子抗体的平均药物结合数(DAR)：y＝3.88。
实施例4-2ADC-2
R选自：
在25℃条件下，向mAb-(OLS-1)的PBS缓冲水溶液(pH＝7.4的PBS缓冲水溶液；6.1mg/mL，0.245mL)加入1,2-丙二醇(0.150mL)。将化合物LD-2(1.0mg)溶解于25μL二甲基亚砜，后与70μL1,2-丙二醇混合均匀，加入到上述反应液中，置于水浴振荡器，于25℃振荡反应12小时，停止反应。将反应液用Sephadex G25凝胶柱脱盐纯化(洗脱相：pH为7.4的PBS缓冲水溶液)，得到标题产物ADC-2的PBS缓冲液，于4℃冷藏储存。
MS计算每一分子抗体的平均药物结合数(DAR)：y＝3.89。
以下步骤适合ADC-3、ADC-4的制备：
第一步 抗体糖链mAb-(OLS-1)的重构
在37℃条件下，向抗ROR1抗体347的PBS缓冲水溶液(pH＝7.4的PBS缓冲水溶液；20.0mg/mL，0.1mL)加入Endo F3(D126A)酶(采用专利申请US10851174B2第21页公开的方法制备而得)(20mg/mL，0.05mL)、PBS缓冲水溶液(pH＝7.4，0.05mL)和OLS-1(1.19mg)，置于水浴振荡器，于37℃振荡反应5分钟，停止反应。将反应液用Hitrap Protein A HP蛋白纯化柱纯化(洗脱相：pH为3.0的醋酸缓冲水溶液)，得到mAb-(OLS-1)的亲和洗脱液，于4℃冷藏储存。
mAb-(OLS-1)包含如下所示的mAb-(OLS-1)a1、mAb-(OLS-1)a2、mAb-(OLS-1)a3和mAb-(OLS-1)a4四种结构：
/>
/>
第二步ADC的合成
实施例ADC-3、ADC-4的制备，通过mAb-OLS-1与不同的药物连接子偶联，得到mAb-(OLS-1)-R。
其中mAb-(OLS-1)-R包含如下所示的mAb-(OLS-1)-Ra、mAb-(OLS-1)-Rb、mAb-(OLS-1)-Rc和mAb-(OLS-1)-Rd四种结构：
/>
ADC-3、ADC-4结构式如mAb-(OLS-1)-R所示，其中R基根据各实施例使用的药物连接子而不同，同时R基的三唑环具有两种结构。具有相似结构及分子量的抗体如Ab2、Ab3或Ab4等可采用类似制备1-a类似的步骤进行去糖基化，并通过与制备mAb-(OLS-1)类似的重构糖链，然后通过类似制备mAb-(OLS-1)-R的步骤与药物连接子(LD)进行偶联。
实施例4-3ADC-3
R选自：
在25℃条件下，向mAb-(OLS-1)的PBS缓冲水溶液(pH＝7.4的PBS缓冲水溶液；7.11mg/mL，0.141mL)加入1,2-丙二醇(0.127mL)。将化合物LD-1(0.6mg)溶解于14μL二甲基亚砜，加入到上述反应液中，置于水浴振荡器，于25℃振荡反应12小时，停止反应。将反应液用Sephadex G25凝胶柱脱盐纯化(洗脱相：pH为7.4的PBS缓冲水溶液)，得到标题产物ADC-3的PBS缓冲液，于4℃冷藏储存。
MS计算每一分子抗体的平均药物结合数(DAR)：y＝1.59。
实施例4-4ADC-4
R选自：
在25℃条件下，向mAb-(OLS-1)的PBS缓冲水溶液(pH＝7.4的PBS缓冲水溶液；7.11mg/mL，0.141mL)加入1,2-丙二醇(0.127mL)。将化合物LD-2(0.6mg)溶解于14μL二甲基亚砜，加入到上述反应液中，置于水浴振荡器，于25℃振荡反应12小时，停止反应。将反应液用Sephadex G25凝胶柱脱盐纯化(洗脱相：pH为7.4的PBS缓冲水溶液)，得到标题产物ADC-4的PBS缓冲液，于4℃冷藏储存。
MS计算每一分子抗体的平均药物结合数(DAR)：y＝1.59。
生物学评价
测试例1、PBD类化合物对肿瘤细胞体外增殖抑制测试
一、实验目的
本实验的目的是为了检测本披露中的化合物，对不同肿瘤细胞系SK-BR-3肿瘤细胞(人乳腺癌细胞，ATCC，货号HTB-30)、NCI-H23(人非小细胞肺癌细胞，南京科佰，货号CBP60132)和MKN45(人胃癌细胞，南京科佰，货号CBP60488)的增殖抑制活性，以不同浓度的化合物体外处理细胞，经6天培养后，采用CTG(CellTiter-Luminescent CellViability Assay，Promega，货号：G7573)试剂对细胞的增殖进行检测，根据IC50值来评价该化合物的体外活性。
二、实验方法
1.细胞培养：SK-BR-3，NCI-H23和MKN45细胞分别用含10％FBS(Gibco,10099-141)的McCoy's 5A培养基(ThermoFisher，货号16600108)、RPMI 1640Medium(ThermoFisher，货号11875119)进行培养。
2.细胞铺板：分别将SKBR3、NCI-H23和MKN45用胰酶(0.25％Trypsin-EDTA(1x)，Life Technologies，货号25200-072)消化后，使用各自培养基进行重悬计数，使密度为1.48×104个/mL，每孔135μL铺至96孔板(corning，货号3903)，使每孔细胞数为2000，于37℃，培养24小时。
3.药物配制：在圆底96孔板中配制PBD类药物。配药板1第一列为0.05mM，此后从第二列到第四列3倍梯度稀释于DMSO中，第五列到第六列5倍梯度稀释于DMSO中，第七列到第九列10倍梯度稀释于DMSO中，第十列为DMSO。配药板2中第一列至第十列每孔加入相应培养基196μL，从配药板1的第一列至第十列吸取4μL溶液至配药板2，混匀后，吸取15μL加入昨天铺好的细胞中，继续37℃，培养6天。
4.CTG检测：取出细胞培养板，平衡至室温。每孔加入75μL CTG，避光室温反应10分钟，酶标仪(BMG labtech，PHERAstar FS)读取发光值。
三、数据分析
用Graphpad Prism 5对数据进行处理分析。实施例结果参见下表
表1.本披露化合物对三株肿瘤细胞系增殖抑制的IC50(nM)。
实施例编号 SK-BR-3 NCI-H23 MKN45
2-1 0.40 0.54 0.72
2-2 0.41 1.36 0.97
2-3 0.67 0.83 1.22
2-5 6.58 12.56 8.03
2-6 1.39 1.57 2.10
2-7 1.31 1.36 2.85
2-9 1.44 1.81 3.50
2-10 0.85 1.32 2.32
测试例2、抗体蛋白水平亲和力和动力学实验
通过Biacore T200(Cytiva)分析抗ROR1抗体表征亲和力及结合动力学。用Protein A生物传感芯片(Cat.#29127556，Cytiva)亲和捕获IgG抗体，然后于芯片表面流经稀释在HBS-EP缓冲液(pH 7.4，Cat.#BR-1006-69，Cytiva)中的一系列浓度梯度的人ROR1His(Cat.#19771-H08H，义翘神州)抗原。追踪抗原-抗体结合动力学3分钟并追踪解离动力学10分钟，用Biacore T200仪器实时检测反应信号获得结合和解离曲线。在每个实验循环解离完成后，用10mM Gly-HCl pH 1.5(Cat.#BR-1003-54,Cytiva)将生物传感芯片洗净再生。使用Cytiva的BIAevaluation软件以1:1(Langmuir)结合模型分析所得数据，以此法测定的ka(kon)、kd(koff)和KD值显示于下表。
表2.亲和力
抗体 Immo水平/RU ka(1/Ms) kd(1/s) KD(M)
Ab1 175 6.00E+05 5.46E-02 9.10E-08
347 175 2.31E+06 2.73E-03 1.18E-09
测试例3、DT3C抗体内吞实验
本实验的目的是根据DT3C蛋白进入细胞后，活化的白喉毒素(DT)对细胞进行杀伤，间接反映了ROR1抗体的内吞情况。根据IC50和最大杀伤值来评价抗ROR1抗体的体外内吞活性。
DT3C是重组表达的融合蛋白，由白喉毒素的Fragment A(仅毒素部分)和G群链球菌的3C片段(IgG结合部分)融合而成，该蛋白能够与抗体的IgG部分高度亲和，在抗体发生内吞时一同进入细胞，在胞内弗林蛋白酶的作用下，释放出具有毒性的DT，DT能够抑制EF2-ADP核糖基化的活性，阻断蛋白翻译过程，最终导致细胞死亡。而未进入细胞的DT3C则不具有杀伤细胞的活性。根据细胞杀伤情况来评价抗体的内吞活性。
用含20％low IgG FBS的新鲜细胞培养基配制ROR1-CHOK1细胞悬液，细胞密度为2×104细胞/mL，以50μL/孔加入细胞培养板中，5％二氧化碳37℃ 16小时培养。用无血清培养基将DT3C稀释成1.6μM,用无血清培养基将抗ROR1抗体稀释成266.4nM，将80μL DT3C和80μL抗ROR1抗体按照1:1的体积混匀，室温下静置孵育30分钟。DT3C摩尔浓度为抗ROR1抗体摩尔浓度的6倍。
用无血清培养基4倍梯度稀释DT3C和抗ROR1抗体混合物，共8个梯度，第9和10个点为纯培养基。取50μL稀释好的混合物加入50μL的细胞中，培养箱中孵育三天。每孔加入50μLCTG，室温下避光孵育10分钟，将白色底膜贴在细胞培养板底部，置于酶标仪Victor 3上读取化学发光值。
表3.在ROR1-CHOK1上DT3C内吞杀伤实验结果
测试例4、与大鼠/小鼠ROR1抗原的交叉结合能力
通过Biacore T200(Cytiva)分析抗ROR1抗体表征亲和力及结合动力学。用Protein A生物传感芯片(Cat.#29127556,Cytiva)亲和捕获IgG抗体，然后于芯片表面流经稀释在HBS-EP缓冲液(pH 7.4,Cat.#BR-1006-69,Cytiva)中的一系列浓度梯度的小鼠ROR1-His(Cat.#RO1-M522，Acro)抗原和大鼠ROR1-His(Cat.#RO1-R5221,Acro)抗原。追踪抗原-抗体结合动力学3分钟并追踪解离动力学15分钟，用Biacore T200仪器实时检测反应信号获得结合和解离曲线。在每个实验循环解离完成后，用10mM Gly-HCl pH 1.5(Cat.#BR-1003-54,Cytiva)将生物传感芯片洗净再生。使用Cytiva的BIAevaluation软件以1:1(Langmuir)结合模型分析所得数据，以此法测定的ka(kon)、kd(koff)和KD值显示于下表。
表4.347和Ab1与大鼠/小鼠ROR1抗原的结合能力
结论：
347抗体与大鼠/小鼠的ROR1有较强的交叉结合。
测试例5、PBD类化合物对肿瘤细胞体外增殖抑制测试
一、实验目的
本实验的目的是为了检测本公开中的化合物对HCC827/ROR1肿瘤细胞(ROR1过表达细胞，ATCC，CRL-2868)、MDA-MB-231肿瘤细胞(ATCC，HTB-26)和MCF-7肿瘤细胞(ATCC，HTB-22)的增殖抑制活性，以不同浓度的化合物体外处理细胞，经6天培养后，采用CTG(CellTiter-Luminescent Cell Viability Assay，Promega，货号：G7573)试剂对细胞的增值进行检测，根据IC50值来评价该化合物的体外活性。
三、实验方法
1、细胞培养：HCC827/ROR1、MDA-MB-231和MCF-7细胞分别用含10％FBS(Gibco，10099-141)和1μg/ml Puromycin Dihydrochloride(Invitrogen,货号A11138-03)的1640培养基(GE，货号SH30024.01)、含10％FBS的1640培养基和含10％FBS的DMEM培养基进行培养。
2、细胞铺板：分别将HCC827/ROR1、MDA-MB-231和MCF-7用胰酶(0.25％Trypsin-EDTA(1x)，Life Technologies，货号25200-072)消化后，使用各自培养基进行重悬计数，使密度为1.48×104个/mL，每孔135μL铺至96孔板，使每孔细胞数为2000，于37℃，培养24小时。
3、药物配制：在圆底96孔板中配制PBD类药物。配药板1第一列为0.05mM，此后从第二列到第四列3倍梯度稀释于DMSO中，第五列到第六列5倍梯度稀释于DMSO中，第七列到第第九列10倍梯度稀释于DMSO中，第十列为DMSO。配药板2中第一列至第十列每孔加入相应培养基196μL，从配药板1的第一列至第十列吸取4μL溶液至配药板2，混匀后，吸取15μL加入昨天铺好的细胞中，继续37℃，培养6天。
4、CTG检测：取出细胞培养板，平衡至室温。每孔加入75μL CTG，避光室温反应10分钟，酶标仪(BMG labtech，PHERAstar FS)读取发光值。
三、数据分析
用Graphpad Prism 5对数据进行处理分析，试验结果参见下表1。
表5.本公开化合物对三株肿瘤细胞系增殖抑制的IC50(nM)
实施例编号 HCC827/ROR1 MDA-MB-231 MCF-7
2-2 7.19 4.12 8.47
2-3 10.7 4.1 11.6
测试例6、ROR1-ADC体外药效实验
一、实验目的：
利用CTG(CellTiter-Glo Luminescence Cell Viability Assay○R，Promega，G7573)检测ROR1-ADC在体外对HCC827/ROR1肿瘤细胞(ROR1过表达细胞)、MDA-MB-231肿瘤细胞和MCF-7肿瘤细胞的杀伤作用。
二、实验方法：
1、ROR1表达细胞株HCC827/ROR1(ROR1过表达细胞)、MDA-MB-231和MCF-7细胞用胰酶消化，并用每个细胞对应的新鲜培养液终止消化。1000rpm离心后用新鲜培养液重悬，计数后将细胞悬液密度调整为3703细胞/mL。以每孔135μL加入到96孔细胞培养板中。96孔板外周孔只加入150μL培养基。将培养板在培养箱培养24小时(37℃，5％ CO2)。
2、ADC药物准备。用PBS(磷酸盐缓冲液，上海源培生物科技股份有限公司)稀释，配制成不同浓度的药物，待用。
3、加样操作。向培养板中加入15μL配置的不同浓度的待测样品，每个样品两复孔。将培养板在培养箱孵育4天(37℃，5％ CO2)。
4、显色操作。取出96孔细胞培养板，向每孔加入50μL CTG溶液，室温孵育10分钟。
5、读板操作。取出96孔细胞培养板，置于酶标仪(PE，Envision)中，用酶标仪测定化学发光。
三、结果分析
本实验的数据使用了数据处理软件GraphPad prism5.0。
表6.ROR1-ADC药物在HCC827/ROR1、MDA-MB-231和MCF-7上的杀伤效果
注：+++表示ROR1高表达，+表示ROR1低表达，表示ROR1不表达。
SEC(分子排阻色谱法,Size exclusion chromatography)。
虽然为了清楚的理解，已经借助于实例等详细描述了上述发明，但是描述和实例不应当解释为限制本披露的范围。本文中引用的所有专利和科学文献的公开内容通过引用完整地清楚结合。

Claims (28)

1.一种抗体-药物偶联物或其可药用的盐，其如下式所示：
其中，Pc为抗体，该抗体的糖链是未重构的或重构的糖链；
L为连接子；Pc通过其氨基酸或糖链与L结合，
D为如式(D)所示的药物：
其中：
R1为芳基、杂芳基、环烷基和杂环基，所述的芳基、杂芳基、环烷基和杂环基任选被一个或多个取代基所取代，其中每个取代基独立地选自卤素、卤代烷基、氨基、羟基、羟烷基、烷基和烷氧基；
R2为H、烷基或环烷基；
A为*-CH(R3)-NH-#，*-C(O)-NH-#或*-C(R3)＝N-#；
R3为H、烷基或环烷基；
R4为H、烷基或环烷基；
R5为H、卤素、烷基或环烷基；
R6为H、烷基或环烷基；
R7为H、烷基或环烷基；
X为键或亚烷基；
n选自1-8；
y为约1至约10，优选地，y为1-5。
2.根据权利要求1所述的抗体-药物偶联物或其可药用的盐，其中所述R1为苯基、吡啶基、C3-6环烷基、萘基或喹啉基，所述的苯基、吡啶基、C3-6环烷基、萘基或喹啉基任选被一个或多个取代基所取代，其中每个取代基独立地选自卤素、C1-6卤代烷基、氨基、羟基、C1-6羟烷基、C1-6烷基和C1-6烷氧基；
优选地，R1为苯基或吡啶基，所述的苯基或吡啶基任选被一个或多个取代基所取代，其中每个取代基独立地选自卤素、C1-6卤代烷基、氨基、羟基、C1-6羟烷基、C1-6烷基和C1-6烷氧基。
3.根据权利要求1-2任一项所述的抗体-药物偶联物或其可药用的盐，其中所述R2为H或C1-6烷基；优选地，R2为甲基。
4.根据权利要求1-3任一项所述的抗体-药物偶联物或其可药用的盐，其中所述A为*-CH2-NH-#，*-C(O)-NH-#或*-CH＝N-#。
5.根据权利要求1-4任一项所述的抗体-药物偶联物或其可药用的盐，其中所述R4为H，R5为H，R6为C1-6烷基，R7为C1-6烷基。
6.根据权利要求1-5任一项所述的抗体-药物偶联物或其可药用的盐，其中所述n选自3，4，5和6；优选地，n为5。
7.根据权利要求1-6任一项所述的抗体-药物偶联物或其可药用的盐，其中所述X为键或C1-6亚烷基；优选地，X为键。
8.根据权利要求1-7任一项所述的抗体-药物偶联物或其可药用的盐，其中
R1为苯基、吡啶基、C3-6环烷基、萘基或喹啉基，所述的苯基、吡啶基、C3-6环烷基、萘基或喹啉基任选被一个或多个取代基所取代，其中每个取代基独立地选自卤素、C1-6卤代烷基、氨基、羟基、C1-6羟烷基、C1-6烷基和C1-6烷氧基；
R2为H或C1-6烷基；
A为*-CH2-NH-#，*-C(O)-NH-#或*-CH＝N-#；
R4为H，R5为H，R6为C1-6烷基，R7为C1-6烷基；
n选自3，4，5和6；X为键或C1-6烷基。
9.根据权利要求1-8任一项所述的抗体-药物偶联物或其可药用的盐，其中通式(D)所示的结构为通式(DI)所示的结构：
其中R1为苯基，所述的苯基任选被一个或多个取代基所取代，其中每个取代基独立地选自卤素、C1-6卤代烷基、氨基、羟基、C1-6羟烷基、C1-6烷基和C1-6烷氧基；
R2为H或C1-6烷基；
A为*-CH2-NH-#，*-C(O)-NH-#或*-CH＝N-#；
n选自3，4，5和6。
10.根据权利要求1所述的抗体-药物偶联物或其可药用的盐，其中L为-La-Lb-Lc-Ld-，
La选自
其中星号表示与Lb结合，波浪线表示与Pc的糖链或重构的糖链结合；
Lb选自-C(O)-CH2CH2-C(O)-，-C(O)-(CH2CH2)2-C(O)-，
-C(O)-CH2CH2-C(O)-NH-(CH2CH2)2-C(O)-，
-C(O)-CH2CH2-C(O)-NH-(CH2CH2O)2-CH2-C(O)-，-C(O)-CH2CH2-NH-C(O)-(CH2CH2 O)4-CH2 CH2-C(O)-，-CH2-OC(O)-和-OC(O)-；
Lc为由2至7个氨基酸残基构成的肽残基，其中所述氨基酸残基是由苯丙氨酸、丙氨酸、脯氨酸、异亮氨酸、甘氨酸、缬氨酸、赖氨酸、瓜氨酸、丝氨酸、谷氨酸或天冬氨酸所形成的残基，所述氨基酸残基是未被取代的或各自独立地被一个或多个取代基所取代，其中每个取代基独立地选自卤素、羟基、氰基、氨基、C1-6烷基、卤代C1-6烷基、C1-6烷氧基和C3-6环烷基；
Ld为-NH-Ra-CH2O-C(O)-、-NH-CH2O-Rb-C(O)-或键；
Ra为苯基或5-6元杂环基，所述苯基和5-6元杂环基是未被取代的或各自独立地被一个或多个取代基所取代，其中每个取代基独立地选自卤素、氧代基、羟基、氰基、氨基、C1-6烷基、卤代C1-6烷基和C1-6烷氧基；
Rb为C1-6烷基或C3-6环烷基，所述C1-6烷基和C3-6环烷基是未被取代的或各自独立地被一个或多个取代基所取代，其中每个取代基独立地选自卤素、氧代基、羟基、氰基、氨基、C1-6烷基、C3-6环烷基、5-6元杂环基、卤代C1-6烷基和C1-6烷氧基。
11.根据权利要求10所述的抗体-药物偶联物或其可药用的盐，其中
Lb为-C(O)-CH2CH2-C(O)-；
Lc为-GGVA-、-VA-、-GGFG-、-GGPI-、-GGVK-和-GGPL-；优选为-GGVA-；
Ld为-NH-Ra-CH2O-C(O)-，Ra为1,4-苯基。
12.根据权利要求1-11任一项所述的抗体-药物偶联物或其可药用的盐，所述Pc为与肿瘤细胞结合且能被吞入肿瘤细胞内的抗体，优选地，所述Pc为抗ROR1抗体、抗HER2(ErbB2)抗体、抗EGFR抗体、抗B7H3抗体、抗c-Met抗体、抗HER3(ErbB3)抗体、抗HER4(ErbB4)抗体、抗CD20抗体、抗CD22抗体、抗CD30抗体、抗CD33抗体、抗CD44抗体、抗CD56抗体、抗CD70抗体、抗CD73抗体、抗CD105抗体、抗CEA抗体、抗A33抗体、抗Cripto抗体、抗EphA2抗体、抗G250抗体、抗MUCl抗体、抗Lewis Y抗体、抗VEGFR抗体、抗GPNMB抗体、抗Integrin抗体、抗PSMA抗体、抗Tenascin-C抗体、抗Trop2抗体、抗CD79b抗体、抗SLC44A4抗体或抗Mesothelin抗体。
13.根据权利要求12所述的抗体-药物偶联物或其可药用的盐，其中所述抗体为抗ROR1抗体，其包含重链可变区和轻链可变区，其中：
所述重链可变区包含分别如SEQ ID NO：4，SEQ ID NO：5和SEQ ID NO：6所示的HCDR1，HCDR2和HCDR3；和
所述轻链可变区包含分别如SEQ ID NO：7，SEQ ID NO：8和SEQ ID NO：9所示的LCDR1，LCDR2和LCDR3；
优选地，其中：
所述重链可变区，其氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示；和
所述轻链可变区，其氨基酸序列如SEQ ID NO：3所示。
14.根据权利要求13所述的抗体-药物偶联物或其可药用的盐，其中所述抗体为抗ROR1抗体，其包含：
如SEQ ID NO：12所示的重链和如SEQ ID NO：13所示的轻链。
15.根据权利要求1-14任一项所述的抗体-药物偶联物或其可药用的盐，所述Pc通过与其重链第297位Asn结合的糖链与L结合，所述糖链为N297糖链；
所述N297糖链结构选自：
式中，波浪线表示与Pc重链第297位的Asn结合，L(PEG)表示-(CH2CH2O)qCH2CH2-NH-，q选自0-20，优选自1-10，星号表示与所述连接子L结合。
16.根据权利要求1所述的抗体-药物偶联物或其可药用的盐，其为如下结构：
其中Pc’为除N297糖链以外的Pc的结构，L，D如权利要求1中所定义，t选自1或2，N297糖链如权利要求17或18中所定义；
优选地，所述的抗体-药物偶联物或其可药用的盐选自：
组1：
和/或
组2：
和/或
17.一种式(DL)所示的化合物或其可药用的盐：
其中：
R1为芳基、杂芳基、环烷基和杂环基，所述的芳基、杂芳基、环烷基和杂环基任选被一个或多个取代基所取代，其中每个取代基独立地选自卤素、卤代烷基、氨基、羟基、羟烷基、烷基和烷氧基；
R2为H、烷基或环烷基；
A为*-CHR3-NH-#，*-C(O)-NH-#或*-CR3＝N-#；
R3为H、烷基或环烷基；
R4为H、烷基或环烷基；
R5为H、卤素、烷基或环烷基；
R6为H、烷基或环烷基；
R7为H、烷基或环烷基；
X为键或亚烷基；
n选自1-8；
R8为-La’-Lb-Lc-Ld-：
La’为
Lb选自-C(O)-CH2CH2-C(O)-，-C(O)-(CH2CH2)2-C(O)-，
-C(O)-CH2CH2-C(O)-NH-(CH2CH2)2-C(O)-，
-C(O)-CH2CH2-C(O)-NH-(CH2CH2O)2-CH2-C(O)-，-C(O)-CH2CH2-NH-C(O)-(CH2CH2 O)4-CH2 CH2-C(O)-，-CH2-OC(O)-和-OC(O)-；
Lc为由2至7个氨基酸残基构成的肽残基，其中所述氨基酸残基是由苯丙氨酸、丙氨酸、脯氨酸、异亮氨酸、甘氨酸、缬氨酸、赖氨酸、瓜氨酸、丝氨酸、谷氨酸或天冬氨酸所形成的残基，所述氨基酸残基是未被取代的或各自独立地被一个或多个取代基所取代，其中每个取代基独立地选自卤素、羟基、氰基、氨基、C1-6烷基、卤代C1-6烷基、C1-6烷氧基和C3-6环烷基；
Ld为-NH-Ra-CH2O-C(O)-、-NH-CH2O-Rb-C(O)-或键；
Ra为1,4-苯基或5-6元杂环基，所述1,4-苯基和5-6元杂环基是未被取代的或各自独立地被一个或多个取代基所取代，其中每个取代基独立地选自卤素、氧代基、羟基、氰基、氨基、C1-6烷基、卤代C1-6烷基和C1-6烷氧基；
Rb为C1-6烷基或C3-6环烷基，所述C1-6烷基和C3-6环烷基是未被取代的或各自独立地被一个或多个取代基所取代，其中每个取代基独立地选自卤素、氧代基、羟基、氰基、氨基、C1-6烷基、C3-6环烷基、5-6元杂环基、卤代C1-6烷基和C1-6烷氧基；
R9为H、羟基或烷氧基；
或者R8和R9与相连的原子一起形成亚胺键(N＝C)。
18.据权利要求17所述的化合物或其可药用的盐，其中R8和R9与相连的原子一起形成亚胺键(N＝C)。
19.根据权利要求17所述的化合物或其可药用的盐，其中
R8为-La’-Lb-Lc-Ld-：
La’为
Lb选自-C(O)-CH2CH2-C(O)-，-C(O)-(CH2CH2)2-C(O)-，
-C(O)-CH2CH2-C(O)-NH-(CH2CH2)2-C(O)-，
-C(O)-CH2CH2-C(O)-NH-(CH2CH2O)2-CH2-C(O)-，-C(O)-CH2CH2-NH-C(O)-(CH2CH2 O)4-CH2 CH2-C(O)-，-CH2-OC(O)-和-OC(O)-；
Lc为由2至7个氨基酸残基构成的肽残基，其中所述氨基酸残基是由苯丙氨酸、丙氨酸、脯氨酸、异亮氨酸、甘氨酸、缬氨酸、赖氨酸、瓜氨酸、丝氨酸、谷氨酸或天冬氨酸所形成的残基，所述氨基酸残基是未被取代的或各自独立地被一个或多个取代基所取代，其中每个取代基独立地选自卤素、羟基、氰基、氨基、C1-6烷基、卤代C1-6烷基、C1-6烷氧基和C3-6环烷基；
Ld为-NH-Ra-CH2O-C(O)-、-NH-CH2O-Rb-C(O)-或键；
Ra为1,4-苯基或5-6元杂环基，所述1,4-苯基和5-6元杂环基是未被取代的或各自独立地被一个或多个取代基所取代，其中每个取代基独立地选自卤素、氧代基、羟基、氰基、氨基、C1-6烷基、卤代C1-6烷基和C1-6烷氧基；
Rb为C1-6烷基或C3-6环烷基，所述C1-6烷基和C3-6环烷基是未被取代的或各自独立地被一个或多个取代基所取代，其中每个取代基独立地选自卤素、氧代基、羟基、氰基、氨基、C1-6烷基、C3-6环烷基、5-6元杂环基、卤代C1-6烷基和C1-6烷氧基。
20.根据权利要求17所述的化合物或其可药用的盐，其中R9为H或羟基；优选地，R9为羟基。
21.根据权利要求17所述的化合物或其可药用的盐，其中所述R1为苯基、吡啶基、C3-6环烷基、萘基或喹啉基，所述的苯基、吡啶基、C3-6环烷基、萘基或喹啉基任选被一个或多个取代基所取代，其中每个取代基独立地选自卤素、C1-6卤代烷基、氨基、羟基、C1-6羟烷基、C1-6烷基和C1-6烷氧基；
优选地，R1为苯基或吡啶基，所述的苯基或吡啶基任选被一个或多个取代基所取代，其中每个取代基独立地选自卤素、C1-6卤代烷基、氨基、羟基、C1-6羟烷基、C1-6烷基和C1-6烷氧基。
22.根据权利要求17所述的化合物或其可药用的盐，其中所述A为*-CH2-NH-#，*-C(O)-NH-#或*-CH＝N-#。
23.根据权利要求17所述的化合物或其可药用的盐，其中
R1为苯基、吡啶基、C3-6环烷基、萘基或喹啉基，所述的苯基、吡啶基、C3-6环烷基、萘基或喹啉基任选被一个或多个取代基所取代，其中每个取代基独立地选自卤素、C1-6卤代烷基、氨基、羟基、C1-6羟烷基、C1-6烷基和C1-6烷氧基；
R2为H或C1-6烷基；
A为*-CH2-NH-#，*-C(O)-NH-#或*-CH＝N-#；
R4为H，R5为H，R6为C1-6烷基，R7为C1-6烷基；
n选自3，4，5和6；X为键或C1-6烷基；
R8和R9与相连的原子一起形成亚胺键(N＝C)。
24.根据权利要求17所述的化合物或其可药用的盐，其中
R1为苯基，所述的苯基任选被一个或多个取代基所取代，其中每个取代基独立地选自卤素、C1-6卤代烷基、氨基、羟基、C1-6羟烷基、C1-6烷基和C1-6烷氧基；
R2为H或C1-6烷基；
A为*-CH2-NH-#，*-C(O)-NH-#或*-CH＝N-#；
R4为H，R5为H，R6为C1-6烷基，R7为C1-6烷基；
n选自3，4，5和6；X为键；
R8和R9与相连的原子一起形成亚胺键(N＝C)。
25.根据权利要求17所述的化合物或其可药用的盐，其选自
/>
/>
26.一种药物组合物，其含有治疗有效量的根据权利要求1至16任一项所述的抗体-药物偶联物或其可药用的盐，或根据权利要求17至25任一项所述的式(DL)所示化合物或其可药用的盐，以及药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。
27.根据权利要求1至16任一项所述的抗体-药物偶联物或其可药用的盐，或根据权利要求17至25任一项所述的式(DL)所示化合物或其可药用的盐，或根据权利要求26所述的药物组合物用作药物。
28.根据权利要求1至16任一项所述的抗体-药物偶联物或其可药用的盐，或根据权利要求17至25任一项所述的式(DL)所示化合物或其可药用的盐，或根据权利要求26所述的药物组合物在制备用于治疗或预防肿瘤的药物中的用途；
优选地，所述肿瘤为卵巢癌、肺癌、胃癌、子宫内膜癌、睾丸癌、宫颈癌、胎盘绒毛膜癌、肾癌、尿路上皮癌、大肠癌、前列腺癌、多形性神经胶质母细胞瘤、脑肿瘤、胰腺癌、乳腺癌、黑色素瘤、肝癌、膀胱癌或食道癌。
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