CN105636591B - 配体-细胞毒性药物偶联物、其制备方法及其应用 - Google Patents

配体-细胞毒性药物偶联物、其制备方法及其应用 Download PDF

Info

Publication number
CN105636591B
CN105636591B CN201580002231.9A CN201580002231A CN105636591B CN 105636591 B CN105636591 B CN 105636591B CN 201580002231 A CN201580002231 A CN 201580002231A CN 105636591 B CN105636591 B CN 105636591B
Authority
CN
China
Prior art keywords
cytotoxic drug
ligand
drug conjugate
alkyl
pharmaceutically acceptable
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Expired - Fee Related
Application number
CN201580002231.9A
Other languages
English (en)
Other versions
CN105636591A (zh
Inventor
王亚里
张连山
梁金栋
李昂
杨方龙
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Jiangsu Hengrui Medicine Co Ltd
Shanghai Hengrui Pharmaceutical Co Ltd
Original Assignee
Jiangsu Hengrui Medicine Co Ltd
Shanghai Hengrui Pharmaceutical Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Jiangsu Hengrui Medicine Co Ltd, Shanghai Hengrui Pharmaceutical Co Ltd filed Critical Jiangsu Hengrui Medicine Co Ltd
Priority to CN201580002231.9A priority Critical patent/CN105636591B/zh
Publication of CN105636591A publication Critical patent/CN105636591A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN105636591B publication Critical patent/CN105636591B/zh
Expired - Fee Related legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/32—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against translation products of oncogenes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/40—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom, e.g. sulpiride, succinimide, tolmetin, buflomedil
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/535—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with at least one nitrogen and one oxygen as the ring hetero atoms, e.g. 1,2-oxazines
    • A61K31/537—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with at least one nitrogen and one oxygen as the ring hetero atoms, e.g. 1,2-oxazines spiro-condensed or forming part of bridged ring systems
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
    • A61K39/39558—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against tumor tissues, cells, antigens
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A61K47/6811—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates the drug being a protein or peptide, e.g. transferrin or bleomycin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6849—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a receptor, a cell surface antigen or a cell surface determinant
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6851—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6851—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell
    • A61K47/6855—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell the tumour determinant being from breast cancer cell
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D207/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom
    • C07D207/02—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C07D207/30—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having two double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D207/34—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having two double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D207/36—Oxygen or sulfur atoms
    • C07D207/40—2,5-Pyrrolidine-diones
    • C07D207/416—2,5-Pyrrolidine-diones with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to other ring carbon atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2851—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the lectin superfamily, e.g. CD23, CD72
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2863—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against receptors for growth factors, growth regulators
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2875—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the NGF/TNF superfamily, e.g. CD70, CD95L, CD153, CD154
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2884—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against CD44
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2896—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against molecules with a "CD"-designation, not provided for elsewhere

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)

Abstract

本发明涉及配体‑细胞毒性药物偶联物、其制备方法及其应用。具体而言，本发明提供了一种通式为Pc‑(X‑Y‑D)n的配体‑细胞毒性药物偶联物，其制备方法以及该配体‑细胞毒性药物偶联物及含有其的药物组合物通过受体调节在制备治疗癌症的药物中的用途。

Description

配体-细胞毒性药物偶联物、其制备方法及其应用
技术领域
本发明涉及一类全新结构的配体-细胞毒性药物偶联物。具体地说，本发明涉及抗体-细胞毒性药物偶联物，也涉及本发明偶联物的制备方法、包含所述偶联物的药物组合物以及所述偶联物或药物组合物的用途。
背景技术
化疗依然是包括手术、放疗、以及靶向治疗法在内的最重要的抗癌手段之一。尽管高效细胞毒素的种类很多，但是肿瘤细胞和正常细胞之间差别很小，限制了这些抗肿瘤化合物由于毒副作用在临床上的广泛应用。而抗肿瘤单克隆抗体对于肿瘤细胞表面抗原的特异性，抗体药物已成为抗肿瘤治疗的前线药物，但单独使用抗体作为抗肿瘤药物时，疗效经常不尽人意。
抗体药物偶联物(antibody drug conjugate，ADC)把单克隆抗体或者抗体片段通过稳定的化学接头化合物与具有生物活性的细胞毒素相连，充分利用了抗体对正常细胞和肿瘤细胞表面抗原结合的特异性和细胞毒素的高效性，同时又避免了前者疗效偏低和后者毒副作用过大等缺陷。这也就意味着，与以往传统的化疗药物相比，抗体药物偶联物能精准地结合肿瘤细胞并降低将对正常细胞的影响(Mullard A，(2013)Nature Reviews DrugDiscovery，12：329-332；DiJoseph JF，Armellino DC，(2004)Blood，103：1807-1814)。
早期的ADC药物主要使用鼠源的单抗，因为人类的免疫反应造成一部分药物难以到达标靶。其次，早期使用的包括阿霉素(doxorubicin)在内的效应分子的生物活性较低，限制了第一代抗体药物偶联物的疗效。除此之外，抗体的来源、接头连接的方式和数目也未得到优化。
2000年第一个抗体药物偶联物
Figure GPA0000210916770000021
(吉妥珠单抗奥唑米星(gemtuzumabozogamicin)，惠氏制药有限公司)被美国FDA批准上市，用于治疗急性髓细胞白血病(Drugsof the Future(2000)25(7)：686；US4970198；US 5079233；US 5585089；US 5606040；US5693762；US 5739116；US 5767285；US 5773001)。
Figure GPA0000210916770000022
是一种人源CD33抗体-卡利奇霉素偶联物，后来由于疗效有限和毒副作用较高，辉瑞公司主动在2010年将
Figure GPA0000210916770000023
撤市。
2011年8月，
Figure GPA0000210916770000024
(brentuximab vedotin，西雅图基因遗传公司)通过美国FDA快速审评通道，用于治疗霍奇金淋巴瘤以及复发性间变性大细胞淋巴瘤(Nat.Biotechnol(2003)21(7)：778-784；WO2004010957；WO2005001038；US7090843A；US7659241；WO2008025020)。
Figure GPA0000210916770000025
是一种新型靶向ADC药物，能使药物直接作用于淋巴瘤细胞上的靶点CD30后发生内吞作用从而诱导肿瘤细胞的凋亡。
2013年2月，
Figure GPA0000210916770000031
(ado-trastuzumab emtansine，T-DM1)获得美国FDA批准，用于治疗HER2阳性同时对曲妥珠单抗(Tratuzumab，商品名：
Figure GPA0000210916770000032
和紫杉醇有抗药性的晚期或转移性乳腺癌患者(WO2005037992；US8088387)。
Figure GPA0000210916770000033
和
Figure GPA0000210916770000034
都是针对血液肿瘤进行靶向治疗，和固体肿瘤相比组织结构相对简单。
Figure GPA0000210916770000035
是美国FDA批准的治疗固体肿瘤的第一个ADC药物。
Figure GPA0000210916770000036
采用ImmunoGen的技术将高活性的有丝分裂抑制剂DM1用一个稳定的硫醚健接头连到罗氏公司的曲妥珠单抗上，平均一个曲妥珠单抗结合大约3.5个DM1，曲妥珠单抗在病人体内特异性结合乳腺癌细胞，被细胞内吞后在细胞内断裂释放出DM1，DM1在细胞内的聚集浓度足以导致细胞因有丝分裂障碍而死亡，肿瘤灶随之消退(不同于
Figure GPA0000210916770000037
单抗单药治疗时经常发生的肿瘤生长迟缓)。T-DM1既保留了
Figure GPA0000210916770000038
的抗体依赖性的细胞增殖抑制作用，同时又增加了潜在的细胞毒素药物的效应。而且因为其毒素靶向在肿瘤细胞内释放，药物毒副作用并没有随着疗效的增加而同步增大。
帕妥珠单抗(Pertuzumab，也被称作2C4，商品名Perjeta)是一种重组人源化单克隆抗体，它是第一个被称作“HER二聚化抑制剂”的单克隆抗体。通过结合HER2阻滞了HER2与其它HER受体的二聚化作用(Agus DB，(2002)Cancer Cell(2)：127-137；Schaefer G，(1997)Oncogene(15)：1385-1394；Mendoza N，(2002)Cancer Res(62)：5485-5488；TakaiN，(2005)Cancer(104)：2701-2708；Jackson JG，(2004)Cancer Res(64)：2601-2609)。帕妥珠单抗已经被证实在HER2高表达及低表达的前列腺癌模型上均有抑制肿瘤生长的作用(Craft N，(1999)Nat Med(5)：280-285；Oxley JD，(2002)J Clin Pathol(55)：118-120；Reese DM，(2001)Am J Clin Pathol(116)：234-239；Agus DB，(2002)Cancer Cell(2)：127-137)。
与曲妥珠单抗(Trastuzumab，商品名Herceptin)结合位点位于HER2胞外区的近膜区IV亚域上抑制下游信号通路不同，帕妥珠单抗则是通过结合在II域(二聚化域)有效抑制HER2的异源二聚化反应。因此，曲妥珠单抗只能对HER2过表达的癌症患者尤其是乳腺癌患者有一定疗效，而帕妥珠单抗虽然和曲妥珠单抗作用同一靶点，且二者有同样的内吞特点，但因其作用机理不同，在抑制二聚化后可以切断由ErbB家族受体介导的信号通路，可能会有比单独阻断HER2信号通路更广泛的应用范围(Franklin MC，(2001)Cancer Cell(5)：317-328)。
目前ADC药物的偶联技术主要有两种：T-DM1采用的是将细胞毒性药物与抗体的自由氨基随机偶联(WO2005037992)；而
Figure GPA0000210916770000039
采用的是将细胞毒性药物和抗体铰链区还原后的自由巯基偶联(WO2004010957)。两种偶联方法都产出了载药量数不一致的混合物。如T-DM1虽然平均载药量是3.5，但载药量的分布可从0～8。过低的载药量影响了ADC的药效，而过高的载药量则更容易因对抗体的过分修饰而导致ADC药物被组织的巨噬细胞体系识别并破坏。这不仅减低了ADC的半衰期也因为毒素在非靶点组织的积累而增加毒性副作用；而
Figure GPA0000210916770000041
用还原剂将抗体铰链区的二硫键进行还原，对抗体本身的稳定性产生一定影响。
发明内容
为了改进配体，特别是抗体和药物的偶联效果，本发明提供了一种改进的用于配体和药物偶联的连接单元。
本发明公开了一种具有连接单元X的配体-细胞毒性药物偶联物或其可药用盐或溶剂合物，其中所述连接单元X具有以下结构：
Figure GPA0000210916770000042
X1选自H、烷基、环烷基、杂环基、芳基或-杂芳基，其中所述烷基、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基各自独立地任选进一步被一个或多个选自卤素、羟基、氰基、烷基、烷氧基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基的取代基所取代，
X2选自烷基、环烷基、烷基-环烷基、环烷基-烷基、烷基-环烷基-烷基、杂环基、烷基-杂环基、杂环基-烷基、烷基-杂环基-烷基、芳基、烷基-芳基、芳基-烷基、烷基-芳基-烷基、杂芳基、烷基-杂芳基、杂芳基-烷基、烷基-杂芳基-烷基、(CH2)p(OCH2CH2)p、(CH2CH2O)p(CH2)p，各个p独立地选自1-10的整数，其中所述烷基、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基各自独立地任选进一步被一个或多个选自卤素、羟基、氰基、烷基、烷氧基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基的取代基所取代，
或当X1不为H时，X1可与X2以及与X1、X2相连的C原子形成-环烷基-结构，其中环烷基独立地可任选进一步被一个或多个选自卤素、羟基、氰基、烷基、烷氧基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基的取代基所取代，
S为硫原子。
在本发明的一个优选实施方案中，一种上述的配体-细胞毒性药物偶联物或其可药用盐或溶剂合物，其中X1为H或烷基，优选为H。
在本发明的另一个优选实施方案中，一种上述的配体-细胞毒性药物偶联物或其可药用盐或溶剂合物，其中X2为烷基或环烷基，优选为烷基，更优选为直链烷基。
在本发明的另一个优选实施方案中，一种上述的配体-细胞毒性药物偶联物或其可药用盐或溶剂合物，其具有以下式(I)的结构：
Figure GPA0000210916770000043
其中：
Pc为配体；
X如上所定义；
Y为间隔单元；
D为细胞毒性药物；
n为载药量，n选自1-8。
在本发明的另一个具体实施方案中，一种上述的配体-细胞毒性药物偶联物或其可药用盐或溶剂合物，其中连接单元X与Pc的多肽链N端氨基或赖氨酸残基的ε-氨基相连，n选自1-4。
在本发明的另一个具体实施方案中，一种上述的配体-细胞毒性药物偶联物或其可药用盐或溶剂合物，其中所述配体为抗体。
在本发明的另一个具体实施方案中，一种上述的配体-细胞毒性药物偶联物或其可药用盐或溶剂合物，其中所述抗体的抗原为增生性疾病靶细胞和/或组织上表达的细胞表面抗原；所述增生性疾病优选癌症；所述细胞表面抗原优选为细胞表面受体。
在本发明的另一个具体实施方案中，一种上述的配体-细胞毒性药物偶联物或其可药用盐或溶剂合物，其中所述的细胞表面受体选自：
(1)HER2(ErbB2)，
(2)HER3(ErbB3)，
(3)HER4(ErbB4)，
(4)CD20，
(5)CD22，
(6)CD30，
(7)CD33，
(8)CD44，
(9)Lewis Y，
(10)CD56，
(11)CD105，
(12)VEGFR，或
(13)GPNMB。
在本发明的另一个具体实施方案中，一种上述的配体-细胞毒性药物偶联物或其可药用盐或溶剂合物，其中所述的细胞表面受体选自：
(1)HER2(ErbB2)，
(2)CD22，
(3)CD30
(4)CD33，
(5)CD44
(6)CD56，
(7)Lewis Y，或
(8)GPNMB。
在本发明的另一个具体实施方案中，一种上述的配体-细胞毒性药物偶联物或其可药用盐或溶剂合物，其中所述的抗体选自：
(1)Trastuzumab(曲妥珠单抗)(HER2)，
(2)Inotuzumab(奥英妥珠单抗)(CD22)，
(3)Pinatuzumab(帕尼妥珠单抗)(CD22)，
(4)Brentuximab(CD30)，
(5)Gemtuzumab(吉妥珠单抗)(CD33)，
(6)Bivatuzumab(比伐珠单抗)(CD44)，
(7)Lorvotuzumab(CD56)，
(8)cBR96(Lewis Y)，
(9)Glematumamab(GPNMB)或
(10)Pertuzumab(帕妥珠单抗)。
在本发明的另一个具体实施方案中，一种上述的配体-细胞毒性药物偶联物或其可药用盐或溶剂合物，其中所述抗体为能够结合至HER2蛋白的抗体，所述的抗体：
1)含有至少一个选自三个根据Kabat编号系统所定义的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3的轻链，其中
i)CDR-L1为序列SEQ ID No.1的CDR，或至少一个在最佳比对后与序列SEQ-No.1具有至少80％同源性的序列；
ii)CDR-L2为序列SEQ ID No.2的CDR，或至少一个在最佳比对后与序列SEQ-No.2具有至少80％同源性的序列；
iii)CDR-L3为序列SEQ ID No.3的CDR，或至少一个在最佳比对后与序列SEQ-No.3具有至少80％同源性的序列；
2)含有至少一个选自三个根据Kabat编号系统所定义的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3的轻链，其中
iv)CDR-H1为序列SEQ ID No.4的CDR，或至少一个在最佳比对后与序列SEQ-No.4具有至少80％同源性的序列；
v)CDR-H2为序列SEQ ID No.5的CDR，或至少一个在最佳比对后与序列SEQ-No.5具有至少80％同源性的序列；
vi)CDR-H3为序列SEQ ID No.6的CDR，或至少一个在最佳比对后与序列SEQ-No.6具有至少80％同源性的序列。
在本发明的另一个具体实施方案中，一种上述的配体-细胞毒性药物偶联物或其可药用盐或溶剂合物，其中所述的能够结合至HER2蛋白的抗体含有轻链和/或重链，所述轻链具有含有氨基酸序列SEQ ID No.7的序列，所述重链具有含有氨基酸序列SEQ ID No.8的序列。
在本发明的另一个具体实施方案中，一种上述的配体-细胞毒性药物偶联物或其可药用盐或溶剂合物，其中所述细胞毒性药物选自：微管蛋白抑制剂、DNA烷化剂、酪氨酸激酶抑制剂、拓扑异构酶抑制剂或DNA合成抑制剂，优选微管蛋白抑制剂。
在本发明的另一个具体实施方案中，一种上述的配体-细胞毒性药物偶联物或其可药用盐或溶剂合物，其中所述拓扑异构酶抑制剂选自喜树碱、伊立替康、放线菌素、阿霉素、多柔比星、柔红霉素、表柔比星；所述DNA合成抑制剂选自氟尿嘧啶、阿糖胞苷、阿扎胞苷、安西他滨、吉西他滨、卡培他滨、甲氨蝶呤、博来霉素、金属铂配合物；所述DNA烷化剂选自氮芥类(环磷酰胺)、亚乙基亚胺类(塞替派、丝裂霉素)、甲磺酸酯类(白消安)、多元醇类(二溴甘露醇)、亚硝基脲类(卡莫司汀)、三氮烯咪唑类(达卡巴嗪)和肼类(丙卡巴肼)；所述酪氨酸激酶抑制剂选自伊马替尼、吉非替尼、厄洛替尼、舒尼替尼、索拉非尼、拉帕替尼、达沙替尼、尼洛替尼。
在本发明的另一个具体实施方案中，一种上述的配体-细胞毒性药物偶联物或其可药用盐或溶剂合物，其中所述细胞毒性药物微管蛋白抑制剂选自美登素类、卡利奇霉素、紫杉烷类、长春新碱、秋水仙碱、Dolastatins/Auristatins，优选美登素类或Dolastatins/Auristatins。
在本发明的又一个实施方案中，一种上述的配体-细胞毒性药物偶联物，其中所述D选自Dolastatins/Auristatins，其结构式如通式(D1)所示；
Figure GPA0000210916770000071
其中：
R1选自键、H、烷基或环烷基；优选为健；当R1选自H、烷基或环烷基时，D在通式(I)通过R10与Y连接；优选R1为健，D在通式(I)通过R10与Y连接；
R2选自H或烷基；
或R1和R2与相连的N原子形成杂环基，其中所述杂环基任选进一步被一个或多个选自卤素、羟基、氰基、烷基、烷氧基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基的取代基所取代；或形成具有-(CRaRb)e-的结构，Ra和Rb独立地选自-H、-烷基或-杂环基，e选自2-6之间的整数，
R3选自H、烷基、环烷基、芳基、烷基-芳基、烷基-环烷基、杂环基或烷基-杂环基；
R4选自H、烷基、环烷基、芳基、烷基-芳基、烷基-环烷基、杂环基或烷基_杂环基；
R5选自H或甲基；
R6选自H或烷基；
R7选自H、烷基、环烷基、芳基、烷基-芳基、烷基-环烷基、杂环基或烷基-_杂环基；
R8选自H、羟基、烷基、环烷基、烷氧基；
R9选自H或烷基；
当R1选自烷基或环烷基，或R1和R2与相连的N原子形成杂环基，其中所述杂环基各自独立地任选进一步被一个或多个选自卤素、羟基、氰基、烷基、烷氧基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基的取代基所取代时，R10选自下列结构：
Figure GPA0000210916770000081
当R1选自H时，R10选自下列结构：
Figure GPA0000210916770000082
当R1选自键时，其与间隔单元Y相连，其中R10选自下列结构：
Figure GPA0000210916770000083
Z选自O，S、NH或N(R14)；
R11选自H、羟基、氨基、-NHR14、-N(R14)2、烷氧基、烷基、环烷基、芳基、杂环基、烷基-芳基、烷基-环烷基、烷基-杂环基；或R11为O时，可取代与其相连的碳原子上的H并与此碳原子形成羰基(C＝O)；
R12选自芳基或杂环基，所述芳基或杂环基任选进一步被一个或多个选自羟基、烷氧基、烷基或卤素的取代基所取代；
R13选自H、羟基、氨基、NHR14、N(R14)2、COOR14、烷氧基、烷基、环烷基、芳基、杂环基、烷基-芳基、烷基-环烷基、烷基-杂环基或烷氧基-烷氧基-烷氧基：
R14选自H、烷基；
R15选自H、烷基、芳基、杂环基、(R16O)m-R14或(R16O)m-CH(R17)2；
m选自1-1000之间的整数；
R16是C2-C8烷基；
R17选自H、羧基、-(CH2)t-N(R18)2、-(CH2)t-SO3R14；
R18选自H、烷基或-(CH2)t-COOH；
t选自0-6之间的整数；
R19选自芳基、环烷基或杂环基。
在本发明的又一个优选实施方案中，一种含有通式(D1)的配体-细胞毒性药物偶联物或其可药用盐或溶剂合物，
其中：
R1选自键或烷基；
R2选自H或烷基；
R3选自H、烷基或环烷基；
R4、R5、R6、R7各自独立地任选H、烷基、环烷基或杂环基；
R8选自H、烷基、环烷基或烷氧基；
R9选自H或烷基；
当R1选自-烷基时，R10选自下列结构：
Figure GPA0000210916770000091
当R1选自键时，其与间隔单元Y相连，其中R10选自下列结构：
Figure GPA0000210916770000092
Z选自NH；
R11选自H、羟基或烷基；
R12选自芳基，所述芳基任选进一步被一个或多个选自羟基、烷氧基、烷基或卤素的取代基所取代；
R13选自H、烷基或COOR14；
R14选自H、烷基，所述烷基任选进一步被烷氧基或烷氧基-烷氧基-烷氧基取代；
R19选自芳基。
在本发明的又一个优选实施方案中，通式(D1)中R3选自H或异丙基。
在本发明的另一个具体实施方案中，一种上述的配体-细胞毒性药物偶联物或其可药用盐或溶剂合物，其中所述D选自美登素类，其结构式如通式(DM)所示：
Figure GPA0000210916770000101
其中：
R20选自O或S；
R21选自H、烷基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基，其中所述烷基、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基各自独立地任选进一步被一个或多个选自卤素、羟基、氰基、硝基、烷基、烷氧基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基的取代基所取代。
在本发明的另一个具体实施方案中，一种D为D1的配体-细胞毒性药物偶联物或其可药用盐或溶剂合物，其中间隔单元Y具有以下通式结构：
Figure GPA0000210916770000102
其中：
YL选自烷基、环烷基、O-烷基、O-烷氧基、芳基、烷基-环烷基、环烷基-烷基、烷基-芳基、烷基-环烷基-烷基、杂环基、烷基-杂环基、杂环基-烷基、烷基-杂环基-烷基、芳基、烷基-芳基、芳基-烷基、烷基-芳基-烷基、杂芳基、烷基-杂芳基、杂芳基-烷基、烷基-杂芳基-烷基、CH2(OCH2CH2)t、(CH2CH2O)tCH2、(CH2CH2O)t，t是选自1-10的整数，优选为烷基，进一步优选为C2-C8直链烷基；
Kk是氨基酸单元，其中K为氨基酸，k选自0-10的整数，k优选为2，Kk优选为缬氨酸-瓜氨酸；
Qq是延伸单元，其中q是0、1或2。
本发明还涉及一种具有以下结构式(II)的化合物：
Figure GPA0000210916770000103
其用作制备如结构式(III)所示的化合物的中间体，
其中：
Pc如结构式(I)所定义；
X如连接单元X所定义；
T选自H、叔丁基、乙酰基、正丙酰基、异丙酰基，三苯基甲基、甲氧基甲基、2-(三甲硅烷基)乙氧甲基，优选为-H或-乙酰基；
n选自1-4。
在本发明的另一个具体实施方案中，一种上述的配体-细胞毒性药物偶联物或其可药用盐或溶剂合物，其具有以下结构式(III)：
Figure GPA0000210916770000111
其中：
Pc为抗体；
X如连接单元X所定义；
YL、Kk、Qq如通式(Y)中所定义；
n选自1-4；
D为细胞毒性药物。
在本发明的另一个具体实施方案中，一种上述的配体-细胞毒性药物偶联物或其可药用盐或溶剂合物，其具有以下任意一种结构：
Figure GPA0000210916770000112
Figure GPA0000210916770000121
Figure GPA0000210916770000131
其中配体Pc为配体，n为载药量，且n选自1-8。
在本发明的另一个具体实施方案中，一种上述的配体-细胞毒性药物偶联物或其可药用盐或溶剂合物，其中所述Pc为Trastuzumab、Inotuzumab和Brentuximab，优选Trastuzumab或Pertuzumab，更优选Pertuzumab。
在本发明的另一个具体实施方案中，一种上述的配体-细胞毒性药物偶联物或其可药用盐或溶剂合物，其选自：
Figure GPA0000210916770000132
Figure GPA0000210916770000141
Figure GPA0000210916770000151
n选自1-8，优选1-4。
在本发明的另一个具体实施方案中，一种上述的配体-细胞毒性药物偶联物或其可药用盐或溶剂合物，其选自：
Figure GPA0000210916770000152
Figure GPA0000210916770000161
Figure GPA0000210916770000171
n选自1-8，优选1-4。
本发明还进一步涉及一种制备如通式(III)所示的抗体-细胞毒性药物偶联物的方法，
Figure GPA0000210916770000181
其包括如下步骤：
1)向通式IA化合物和通式IB化合物中加入还原剂RA，在反应体系pH值为3-6和反应温度为0-40℃的条件下进行反应，得到通式IC化合物，
Figure GPA0000210916770000182
其中T选自叔丁基、乙酰基、正丙酰基、异丙酰基、三苯基甲基、甲氧基甲基、2-(三甲硅烷基)乙氧甲基，优选为乙酰基；
2)在反应温度为0-40℃的条件下，向通式(IC)化合物中加入脱保护剂脱去巯基保护基T，得到通式ID化合物，
Figure GPA0000210916770000183
3)在反应温度为0-40℃的条件下，通式ID化合物和通式IE化合物之间发生迈克尔加成反应，偶联得到通式(III)化合物(问题同权利要求)，
Figure GPA0000210916770000184
其中所述反应温度优选为15-30℃，最优选为20-25℃；所述脱保护剂优选为盐酸羟胺；所述还原剂RA优选为氰基硼氢化钠或三乙酰氧基硼氢化钠；
其中X1、X2如通式X所定义；PC为配体；T，n如通式(II)所定义；YL、Kk、Qq如通式(Y)所定义，D为细胞毒性药物。
本发明进一步涉及一种药物组合物，其特征在于，所述药物组合物含有治疗有效量的如上所述的抗体-药物偶联化合物或其可药用盐或溶剂合物以及一种或多种药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。
本发明进一步涉及如上所述的抗体-药物偶联化合物或其可药用盐或溶剂合物或包含其的药物组合物在制备治疗癌症的药物中的用途，其中所述癌症选自以下一种或多种肿瘤相关受体(1)-(8)过表达的癌症：
(1)HER2(ErbB2)，
(2)CD22，
(3)CD30
(4)CD33，
(5)CD44
(6)CD56，
(7)Lewis Y，或
(8)GPNMB。
本发明进一步涉及一种体外调节受体的方法，该方法包括对于受测物施用有效剂量的如上所述的配体-细胞毒性药物偶联物或其可药用盐或溶剂合物或包含其的药物组合物，所述受体选自：
(1)HER2(ErbB2)，
(2)CD22，
(3)CD30，
(4)CD33，
(5)CD44，
(6)CD56，
(7)Lewis Y，或
(8)GPNMB。
本发明进一步涉及一种治疗哺乳动物癌症的方法，该方法包括对于哺乳动物施用有效剂量的如上所述的配体-细胞毒性药物偶联物或其可药用盐或溶剂合物或包含其的药物组合物；其中所述哺乳动物优选为人；所述癌症选自乳腺癌、卵巢癌、胃癌、子宫内膜癌、唾液腺癌、肺癌、结肠癌、肾癌、直肠癌、甲状腺癌、胰腺癌、前列腺癌、膀胱癌、急性淋巴细胞白血病、急性髓细胞白血病、急性早幼粒细胞白血病、慢性髓细胞白血病、慢性淋巴细胞白血病、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤或复发性间变性大细胞淋巴瘤，优选为乳腺癌、霍奇金淋巴瘤或复发性间变性大细胞淋巴瘤；更优选为2+或更高水平过表达HER2的乳腺癌；最优选为与HER2表达相关的乳腺癌。
本发明进一步涉及一种通式为(IV)所示的化合物、互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体及其混合物形式、及可药用的盐在制备治疗癌症的药物中的用途：
Figure GPA0000210916770000191
其中：
YL选自烷基、环烷基、O-烷基、O-烷氧基、芳基、烷基-环烷基、环烷基-烷基、烷基-芳基、烷基-环烷基-烷基、杂环基、烷基-杂环基、杂环基-烷基、烷基-杂环基-烷基、芳基、烷基-芳基、芳基-烷基、烷基-芳基-烷基、杂芳基、烷基-杂芳基、杂芳基-烷基、烷基-杂芳基-烷基、CH2(OCH2CH2)t、(CH2CH2O)tCH2、(CH2CH2O)t，t是选自1-10的整数，优选为烷基，进一步优选为C2-C8直链烷基；
Kk是氨基酸单元，其中K为氨基酸，k选自0-10的整数，k优选为2，Kk优选为缬氨酸-瓜氨酸；
Qq是延伸单元，其中q是0、1或2；
R20选自O或S；
R21选自H、烷基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基，其中所述烷基、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基各自独立地任选进一步被一个或多个选自卤素、羟基、氰基、硝基、烷基、烷氧基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基的取代基所取代。
本发明在抗体的N端氨基和/或赖氨酸残基的氨基上连接本发明含有游离巯基的连接单元X后，可避免对抗体铰链区进行还原反应，从而减少对抗体自身结构的影响，并且引入的碳-氮键结构稳定，不易在体内循环中分解，进一步通过控制反应条件，可使载药量在0～5范围内正态分布。
发明详述
除非另有限定，本文所用的所有技术和科学术语均与本发明所属领域普通技术人员的通常理解一致。虽然也可采用与本文所述相似或等同的任何方法和材料实施或测试本发明，但本文描述了优选的方法和材料。描述和要求保护本发明时，依据以下定义使用下列术语。
当本发明中使用商品名时，申请人旨在包括该商品名产品的制剂、该商品名产品的非专利药和活性药物部分。
除非有相反陈述，在说明书和权利要求书中使用的术语具有下述含义。
术语“烷基”指饱和脂肪族烃基团，其为包含1至20个碳原子的直链或支链基团，优选含有1至12个碳原子的烷基，更优选含有1至10个碳原子的烷基，最优选含有1至6个碳原子的烷基。非限制性实例包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、仲丁基、正戊基、1，1-二甲基丙基、1，2-二甲基丙基、2，2-二甲基丙基、1-乙基丙基、2-甲基丁基、3-甲基丁基、正己基、1-乙基-2-甲基丙基、1，1，2-三甲基丙基、1，1-二甲基丁基、1，2-二甲基丁基、2，2-二甲基丁基、1，3-二甲基丁基、2-乙基丁基、2-甲基戊基、3-甲基戊基、4-甲基戊基、2，3-二甲基丁基、正庚基、2-甲基己基、3-甲基己基、4-甲基己基、5-甲基己基、2，3-二甲基戊基、2，4-二甲基戊基、2，2-二甲基戊基、3，3-二甲基戊基、2-乙基戊基、3-乙基戊基、正辛基、2，3-二甲基己基、2，4-二甲基己基、2，5-二甲基己基、2，2-二甲基己基、3，3-二甲基己基、4，4-二甲基己基、2-乙基己基、3-乙基己基、4-乙基己基、2-甲基-2-乙基戊基、2-甲基-3-乙基戊基、正壬基、2-甲基-2-乙基己基、2-甲基-3-乙基己基、2，2-二乙基戊基、正癸基、3，3-二乙基己基、2，2-二乙基己基，及其各种支链异构体等。更优选的是含有1至6个碳原子的低级烷基，非限制性实施例包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、仲丁基、正戊基、1，1-二甲基丙基、1，2-二甲基丙基、2，2-二甲基丙基、1-乙基丙基、2-甲基丁基、3-甲基丁基、正己基、1-乙基-2-甲基丙基、1，1，2-三甲基丙基、1，1-二甲基丁基、1，2-二甲基丁基、2，2-二甲基丁基、1，3-二甲基丁基、2-乙基丁基、2-甲基戊基、3-甲基戊基、4-甲基戊基、2，3-二甲基丁基等。烷基可以是取代的或非取代的，当被取代时，取代基可以在任何可使用的连接点上被取代，所述取代基优选为一个或多个以下基团，其独立地选自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、卤素、巯基、羟基、硝基、氰基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、环烷氧基、杂环烷氧基、环烷硫基、杂环烷硫基、氧代基。
术语“环烷基”指饱和或部分不饱和单环或多环环状烃取代基，环烷基环包含3至20个碳原子，优选包含3至12个碳原子，更优选包含3至10个碳原子，最优选包含3至8个碳原子。单环环烷基的非限制性实例包括环丙基、环丁基、环戊基、环戊烯基、环己基、环己烯基、环己二烯基、环庚基、环庚三烯基、环辛基等；多环环烷基包括螺环、稠环和桥环的环烷基。
术语“杂环基”指饱和或部分不饱和单环或多环环状烃取代基，其包含3至20个环原子，其中一个或多个环原子为选自氮、氧或S(O)m(其中m是整数0至2)的杂原子，但不包括-O-O-、-O-S-或-S-S-的环部分，其余环原子为碳。优选包含3至12个环原子，其中1～4个是杂原子；更优选环烷基环包含3至10个环原子。单环杂环基的非限制性实例包括吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基、吗啉基、硫代吗啉基、高哌嗪基等。多环杂环基包括螺环、稠环和桥环的杂环基。
所述杂环基环可以稠合于芳基、杂芳基或环烷基环上，其中与母体结构连接在一起的环为杂环基，其非限制性实例包括：
Figure GPA0000210916770000211
等。
杂环基可以是任选取代的或非取代的，当被取代时，取代基优选为一个或多个以下基团，其独立地选自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、卤素、巯基、羟基、硝基、氰基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、环烷氧基、杂环烷氧基、环烷硫基、杂环烷硫基、氧代基。
术语“芳基”指具有共轭的π电子体系的6至14元全碳单环或稠合多环(也就是共享毗邻碳原子对的环)基团，优选为6至10元，例如苯基和萘基，优选苯基。所述芳基环可以稠合于杂芳基、杂环基或环烷基环上，其中与母体结构连接在一起的环为芳基环，其非限制性实例包括：
Figure GPA0000210916770000221
芳基可以是取代的或非取代的，当被取代时，取代基优选为一个或多个以下基团，其独立地选自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、卤素、巯基、羟基、硝基、氰基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、环烷氧基、杂环烷氧基、环烷硫基、杂环烷硫基。
术语“杂芳基”指包含1至4个杂原子、5至14个环原子的杂芳族体系，其中杂原子选自氧、硫和氮。杂芳基优选为5至10元，更优选为5元或6元，例如呋喃基、噻吩基、吡啶基、吡咯基、N-烷基吡咯基、嘧啶基、吡嗪基、咪唑基、四唑基等。所述杂芳基环可以稠合于芳基、杂环基或环烷基环上，其中与母体结构连接在一起的环为杂芳基环，其非限制性实例包括：
Figure GPA0000210916770000222
杂芳基可以是任选取代的或非取代的，当被取代时，取代基优选为一个或多个以下基团，其独立地选自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、卤素、巯基、羟基、硝基、氰基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、环烷氧基、杂环烷氧基、环烷硫基、杂环烷硫基。
术语“烷氧基”指-O-(烷基)和-O-(非取代的环烷基)，其中烷基的定义如上所述。烷氧基的非限制性实例包括：甲氧基、乙氧基、丙氧基、丁氧基、环丙氧基、环丁氧基、环戊氧基、环己氧基。烷氧基可以是任选取代的或非取代的，当被取代时，取代基优选为一个或多个以下基团，其独立地选自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、卤素、巯基、羟基、硝基、氰基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、环烷氧基、杂环烷氧基、环烷硫基、杂环烷硫基。
术语“键”指用“-”表示的共价键。
术语“羟基”指-OH基团。
术语“卤素”指氟、氯、溴或碘。
术语“氨基”指-NH2。
术语“氰基”指-CN。
术语“硝基”指-NO2。
术语“氧代基”指＝O。
术语“羧酸基”指-C(O)OH。
术语“羧酸酯基”指-C(O)O(烷基)或-C(O)O(环烷基)，其中烷基的定义如上所述。
术语“苄基”指甲基苯：
Figure GPA0000210916770000231
“任选”或“任选地”意味着随后所描述的事件或环境可以但不必发生，该说明包括该事件或环境发生或不发生地场合。例如，“任选被烷基取代的杂环基团”意味着烷基可以但不必须存在，该说明包括杂环基团被烷基取代的情形和杂环基团不被烷基取代的情形。
“取代的”指基团中的一个或多个氢原子，优选为最多5个，更优选为1～3个氢原子彼此独立地被相应数目的取代基取代。不言而喻，取代基仅处在它们的可能的化学位置，本领域技术人员能够在不付出过多努力的情况下确定(通过实验或理论)可能或不可能的取代。例如，具有游离氢的氨基或羟基与具有不饱和(如烯属)键的碳原子结合时可能是不稳定的。
术语“药物组合物”表示含有一种或多种本文所述化合物或其生理学上/可药用的盐或前体药物与其他化学组分的混合物，以及其他组分例如生理学/可药用的载体和赋形剂。药物组合物的目的是促进对生物体的给药，利于活性成分的吸收进而发挥生物活性。
术语“可药用盐”是指本发明配体-细胞毒性药物偶联物的盐，这类盐用于哺乳动物体内时具有安全性和有效性，且具有应有的生物活性，本发明抗体-抗体药物偶联化合物至少含有一个氨基，因此可以与酸形成盐，可药用盐的非限制性实例包括：盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、硫酸盐、硫酸氢盐、柠檬酸盐、乙酸盐、琥珀酸盐、抗坏血酸盐、草酸盐、硝酸盐、梨酸盐、磷酸氢盐、磷酸二氢盐、水杨酸盐、柠檬酸氢盐、酒石酸盐、马来酸盐、富马酸盐、甲酸盐、苯甲酸盐、甲磺酸盐、乙磺酸盐、苯磺酸盐、对甲苯磺酸盐。
术语“溶剂合物”指本发明的配体-药物偶联化合物与一种或多种溶剂分子形成可药用的溶剂合物，溶剂分子的非限制性实例包括水、乙醇、乙腈、异丙醇、DMSO、乙酸乙酯。
术语“配体”是能识别和结合目标细胞相关的抗原或受体的大分子化合物。配体的作用是将药物呈递给与配体结合的目标细胞群，这些配体包括但不限于蛋白类激素、凝集素、生长因子、抗体或其他能与细胞结合的分子。在本发明实施方式中，配体表示为Pc，配体可通过配体上的杂原子与连接单元形成连接键。
术语“抗原或受体”可供配体识别和结合目标细胞。本发明中优选针对在增生性疾病，例如癌症的靶细胞和/或组织上表达的细胞表面抗原或受体的配体；非限制性细胞表面受体实施例选自HER2，HER3，HER4，CD20，CD22，CD30，CD33，CD44，Lewis Y，CD56，CD105，VEGFR或GPNMB。的细胞表面受体；最优选为选自HER2，CD22，CD30，CD33，CD44，CD56，Lewis Y或GPNMB的细胞表面受体。具体的优选的非限制性实施例为Trastuzumab(HER2)，Inotuzumab(CD22)，Pinatuzumab(CD22)，Brentuximab(CD30)，Gemtuzumab(CD33)，Bivatuzumab(CD44)，Lorvotuzumab(CD56)，cBR96(Lewis Y)或Glematumamab(GPNMB)。
本发明所述的“抗体”是指表现出所需生物学活性的任何形式的抗体。因此，它以最广义使用，具体地说，包括但不限于全长抗体，抗体结合片段或衍生物。抗体的来源包括但不限于单克隆抗体、多克隆抗体、基因工程抗体(例如双特异性抗体)。
术语“全长抗体”是指包含4条多肽链即2条重链和2条轻链通过二硫键相互交联形成多聚体的免疫球蛋白分子(例如IgM)。每条重链包含一段重链可变区(简称VH)和一段重链恒定区，重链恒定区包含3个结构域：CH1、CH2和CH3。每条轻链包含一段轻链可变区(简称VL)和一段轻链恒定区，轻链恒定区包含1个结构域(CL1)。VH区和VL区可进一步分为高变区，术语为互补决定区(CDRs)，各互补决定区之间穿插着更加保守的结构域，称为框架区(FR)。
术语“抗体结合片段或衍生物”包括任何一种自然发生的，酶催化获得的，合成的，或是通过基因工程得到的可与抗原特异性结合形成复合物的多肽或糖蛋白；通常包括亲本抗体的至少部分抗原结合区或可变区(例如一个或多个CDR)，其保留亲本抗体的至少某些结合特异性。“抗体结合片段或衍生物”可能由抗体衍生而来，例如通过适宜的标准技术包括蛋白水解或重组基因工程技术(包括对表达抗体可变区和部分恒定区的DNA进行操作和表达)对抗体全长进行改造而得。“抗体结合片段或衍生物”包括但不限于：(i)Fab片段；(ii)F(ab’)2片段；(iii)Fd片段；(iv)Fv片段；(v)单链Fv(scFv)；(vi)dAb片段；和(vii)模拟抗体高变区氨基酸残基的最小识别单元(如一个分离的互补决定区(CDR))。其它工程分子如双价抗体、三价抗体、四价抗体和微抗体也在“抗体结合片段或衍生物”范围内。
“Fab片段”由一条完整的轻链和重链的VH和CH1功能区组成。Fab分子的重链不能与另一个重链分子形成二硫键。
“Fc”区包含含有抗体的CH1与CH2结构域的两个重链片段。两个重链片段通过两个以上的二硫键和通过CH3结构域的疏水作用保持在一起。
“Fab’片段”包含一条轻链和重链的VH和CH1功能区，还包含在CH1与CH2结构域之间的区域，以致于可在两个Fab’片段的两条重链之间形成链间二硫键，以形成F(ab’)2分子。
“F(ab’)2片段”包含二条轻链和含有CH1与CH2结构域之间的部分恒定区的两条重链，以致于在两条重链之间形成链间二硫键。因此，F(ab’)2片段由通过两条重链之间的二硫键保持在一起的两个Fab’片段组成。
“Fv片段”包含轻链或/和重链的可变区VH功能区。
“Fc区”相当于IgG的CH2和CH3功能区，无抗原结合活性，是抗体分子与效应分子和细胞相互作用的部位。
“铰链区”用于连接抗体的Fab段和Fc段。在本发明中可以将双特异性融合蛋白与Fc段连接。
本发明所述的抗体优选为针对靶细胞上细胞表面抗原的特异性抗体，非限制性实施例为以下抗体：
针对细胞表面抗原HER2(多存在于乳腺癌细胞表面)的抗体；针对大多数B细胞淋巴瘤上过表达的CD20或CD22抗原的抗体；针对细胞表面抗原CD33的抗体(所述细胞表面抗原在某些人骨髓瘤、尤其是急性髓样白血病中普遍存在)；针对细胞表面抗原CD30、CD44、Lewis Y、CD56、CD105、VEGFR或GPNMB的抗体；另外一些市售的抗体如曲妥珠单抗(商品名
Figure GPA0000210916770000251
)也可用作配体。曲妥珠单抗是用于治疗乳腺癌的人源化抗HER2抗体，适用于治疗HER2过度表达的转移性乳腺癌。
“同源性”是指两个多核苷酸序列之间或两个多肽之间的序列相似性。当两个比较序列中的位置均被相同碱基或氨基酸单体亚基占据时，例如如果两个DNA分子的每一个位置都被腺嘌呤占据时，那么所述分子在该位置是同源的。两个序列之间的同源怀百分率是两个序列共有的匹配或同源位置数除以比较的位置数×100的函数。例如，在序列最佳比对时，如果两个序列中的10个位置有6个匹配或同源，那么两个序列为60％同源。一般而言，当比对两个序列而得到最大的同源性百分率时进行比较。
术语“间隔单元”(Y)是一种双功能化合物，可用于连接本发明中所述的配体和细胞毒性药物，以形成配体-间隔单元-药物偶联物，或可用于形成抗肿瘤相关抗原的免疫偶联物。这种免疫偶联物可以将细胞毒性药物选择性递送给肿瘤细胞。
术语“细胞毒性药物”是指在肿瘤细胞内具有较强破坏其正常生长的化学分子。细胞毒性药物原则上在足够高的浓度下都可以杀死肿瘤细胞，但是由于缺乏特异性，在杀伤肿瘤细胞的同时，也会导致正常细胞的凋亡，导致严重的副作用。在本发明的实施方式中，细胞毒性药物表示为D，其非限制性实例包括微管蛋白抑制剂、DNA烷化剂、酪氨酸激酶抑制剂、拓扑异构酶抑制剂或DNA合成抑制剂，优选微管蛋白抑制剂。
Auristatins是全合成药物，化学结构式相对容易改造，以便优化其物理性质和成药特性。用于和抗体偶联的Auristatins衍生物主要包括monomethyl auristatin E(MMAE)和monomethyl auristatin F(MMAF)，前者是又天然微管蛋白聚合酶抑制剂dolastatin-10衍生出的合成五肽，在C-端加上一个2-氨基-1-苯基丙基-1-醇而合成。MMAE对多种人类肿瘤细胞株的抑制活性小于一纳摩尔。为了降低MMAE自身细胞毒活性，MMAF在dolastatin-10的C-端加上一个苯丙氨酸，因为在结构上引入一个羧基，MMAF的细胞膜通过性较差，因此对细胞的生物活性显著降低，但是和抗体偶联后对细胞的抑制活性大幅度提高(US7750116)。
术语“微管蛋白抑制剂”是指通过一直微管蛋白的聚合或促进微管蛋白的聚合而干扰细胞的有丝分裂过程，从而发挥抗肿瘤作用的一类化合物。其非限制性实例包括：美登素类、卡利奇霉素、紫杉烷类、长春新碱、秋水仙碱、Dolastatins/Auristatins，优选自美登素类或Dolastatins/Auristatins；更优选自通式D1或DM所示的化合物。
术语“DNA烷化剂”是指一类在体内能形成碳正离子或其他具有活泼的亲电性基团进而与细胞中的DNA中含有丰富电子的基团(如氨基，巯基，羟基，羧基、磷酸基等)发生共价结合，使其DNA分子发生结构改变或断裂，从而导致肿瘤细胞死亡的化合物。其非限制性实例包括：氮芥类(环磷酰胺)、亚乙基亚胺类(塞替派、丝裂霉素)、甲磺酸酯类(白消安)、多元醇类(二溴甘露醇)、亚硝基脲类(卡莫司汀)、三氮烯咪唑类(达卡巴嗪)和肼类(丙卡巴肼)。
术语“酪氨酸激酶抑制剂”是一类指可作为三磷酸腺苷(ATP)与酪氨酸激酶结合的竞争性抑制剂，也可作为酪氨酸的类似物，阻断酪氨酸激酶的活性，抑制细胞增殖的化合物。其非限制性实例包括：伊马替尼、吉非替尼、厄洛替尼、舒尼替尼、索拉非尼、拉帕替尼、达沙替尼、尼洛替尼等。
术语“蛋白质合成抑制剂”是指一类可影响靶细胞的蛋白质合成的化合物。蛋白质合成抑制剂可作用于蛋白质合成的各个环节如DNA复制、RNA转录，通过抑制起始因子、延长因子及核糖核蛋白体等发挥作用。其非限制性实例包括：氨基糖苷类、四环素类、大环内酯类、氯霉素类。
术语“载药量”是指式(I)分子中每个配体上加载的细胞毒性药物平均数量，也可以表示为药物量和抗体量的比值，药物载量的范围可以是每个配体(Pc)连接1-8个细胞毒性药物(D)，在本发明的实施方式中，载药量表示为n，可用常规方法如UV/可见光光谱法，质谱，ELISA试验和HPLC特征鉴定偶联反应后每个ADC分子的药物品均数量。
在本发明中，n可能受连接位点数量的限制，本发明的一个实施方式中，细胞毒性药物通过连接单元偶联在配体的N端氨基和/或赖氨酸残基的ε-氨基上，一般地，偶联反应中能与抗体偶联的药物分子数将小于理论上的最大值。
可以用以下非限制性方法控制配体细胞毒性药物偶联物的载量，包括：
(1)控制连接试剂和单抗的摩尔比，
(2)控制反应时间和温度，
(3)选择不同的反应试剂。
术语“连接单元”指一端通过碳原子与配体共价连接而另一端通过硫原子与细胞毒性药物相连的化学结构片段。在本发明中，连接单元如通式(X)所定义。连接单元通过还原胺化的方式与抗体中的氨基反应而连接，优选为抗体N端和/或赖氨酸残基上的ε-氨基。
术语“间隔单元”是一种双功能化合结构片段，可用于偶联连接单元和细胞毒性药物最终形成配体-细胞毒性药物偶联物，这种偶联方式可以将细胞毒性药物选择性的连接到连接单元上。在本发明中，优选间隔单元如通式(Y)所示。
术语“氨基酸单元”是指如果存在延伸单元的情况下，可以将以下结构式YR中的羰基与延伸单元相连，如果没有延伸单元的情况下，可以将YR直接连接在细胞毒性药物上的氨基酸，在本发明实施方式中，氨基酸单元表示为-Kk-：
Figure GPA0000210916770000271
-Kk-是二肽、三肽、四肽、五肽、六肽、七肽、八肽、九肽或十肽，-K-单元各自独立地具有以下结构式Ka或Kb，k是0-10之间的一个整数：
Figure GPA0000210916770000272
其中：
R23为-H或甲基；
R24为H、甲基、异丙基、异丁基、仲丁基、苄基、对羟基苄基、-CH2OH、-CH(OH)CH3、-CH2CH2SCH3、-CH2CONH2、-CH2COOH、-CH2CH2CONH2、-CH2CH2COOH、-(CH2)3NHC(＝NH)NH2、-(CH2)3NH2、-(CH2)3NHCOCH3、-(CH2)3NHCHO、-(CH2)4NHC(＝NH)NH2、-(CH2)4NH2、-(CH2)4NHCOCH3、-(CH2)4NHCHO、-(CH2)3NHCONH2、-(CH2)4NHCONH2、-CH2CH2CH(OH)CH2NH2、2-吡啶基甲基-、3-吡啶基甲基-、4-吡啶基甲基-、苯基、环己基，
Figure GPA0000210916770000273
R25为-芳基-、-烷基-芳基-、-环烷基-、-烷基-环烷基-、-环烷基-烷基-、-烷基-环烷基-烷基-、-杂环基-，-烷基-杂环基-、-杂环基-烷基-、-烷基-杂环基-烷基-、-芳基-、-烷基-芳基-、-芳基-烷基-、-烷基-芳基-烷基-、-杂芳基-、-烷基-杂芳基-、-杂芳基-烷基-、-烷基-杂芳基-烷基-。
在一个实施方案中，-Kk-为二肽，优选为-缬氨酸-瓜氨酸-、-苯丙氨酸-赖氨酸-或-N-甲基缬氨酸-瓜氨酸-，进一步优选为-缬氨酸-瓜氨酸-。
在另一个实施方案中，-Kk-为二肽，优选为
Figure GPA0000210916770000281
Figure GPA0000210916770000282
术语“氨基酸”是指分子结构中含有氨基和羧基、并且氨基和羧基都直接连接在-CH-结构上的有机化合物。通式是H2NCHRCOOH。根据氨基连结在羧酸中碳原子的位置，可分为α、β、γ、δ、ε......-氨基酸。在生物界中，构成天然蛋白质的氨基酸具有其特定的结构特点，即其氨基直接连接在α-碳原子上，即α-氨基酸，包括甘氨酸(Glycine)、丙氨酸(Alanine)、缬氨酸(Valine)、亮氨酸(Leucine)、异亮氨酸(Isoleucine)、苯丙氨酸(Phenylalanine)、色氨酸(Tryptophan)、酪氨酸(Tyrosine)、天冬氨酸(Aspartic acid)、组氨酸(Histidine)、天冬酰胺(Asparagine)、谷氨酸(Glutamic acid)、赖氨酸(Lysine)、谷氨酰胺(Glutamine)、甲硫氨酸(Methionine)、精氨酸(Arginine)、丝氨酸(Serine)、苏氨酸(Threonine)、半胱氨酸(Cysteine)、脯氨酸(Proline)等。
在本发明的一个实施方案中，氨基酸选自
Figure GPA0000210916770000283
术语“延伸单元”是指当氨基酸单元存在的情况下，可以将氨基酸单元与细胞毒性药物偶联，或当氨基酸单元不存在时，可通过与YR上羰基与细胞毒性药物偶联的化学结构。在本发明实施方式中，延伸单元表示为-Qq-，q选自0，1，2。
在一个优选的实施方案中，Q是对氨基苄基醇结构，在此实施方案中，其在体内可能的释放药物机制见方案1(Toki BE，Cerveny CG，J Org.Chem.2002(67)1866-1872)：
Figure GPA0000210916770000291
其中：
W选自C1-C8烷基、卤素、硝基或氰基；
w选自0-4的整数。
常规的药物组合物的制备见中国药典。
术语“载体”用于本发明的药物，是指能改变药物进入人体的方式和在体内的分布、控制药物的释放速度并将药物输送到靶向器官的体系。药物载体释放和靶向系统能够减少药物降解及损失，降低副作用，提高生物利用度。如可作为载体的高分子表面活性剂由于其独特的两亲性结构，可以进行自组装，形成各种形式的聚集体，优选的实例如胶束、微乳液、凝胶、液晶、囊泡等。这些聚集体具有包载药物分子的能力，同时又对膜有良好的渗透性，可以作为优良的药物载体。
术语“赋形剂”是在药物制剂中除主药以外的附加物，也可称为辅料。如片剂中的黏合剂、填充剂、崩解剂、润滑剂；半固体制剂软膏剂、霜剂中的基质部分；液体制剂中的防腐剂、抗氧剂、矫味剂、芳香剂、助溶剂、乳化剂、增溶剂、渗透压调节剂、着色剂等均可称为赋形剂。
术语“稀释剂”又称填充剂，其主要用途是增加片剂的重量和体积。稀释剂的加入不仅保证一定的体积大小，而且减少主要成分的剂量偏差，改善药物的压缩成型性等。当片剂的药物含有油性组分时，需加入吸收剂吸收油性物，使保持“干燥”状态，以利于制成片剂。如淀粉、乳糖、钙的无机盐、微晶纤维素等。
药物组合物可以是无菌注射水溶液形式。可在使用的可接受的溶媒和溶剂中有水、林格氏液和等渗氯化钠溶液。无菌注射制剂可以是其中活性成分溶于油相的无菌注射水包油微乳。例如将活性成分溶于大豆油和卵磷脂的混合物中。然后将油溶液加入水和甘油的混合物中处理形成微乳。可通过局部大量注射，将注射液或微乳注入患者的血流中。或者，最好按可保持本发明化合物恒定循环浓度的方式给予溶液和微乳。为保持这种恒定浓度，可使用连续静脉内递药装置。这种装置的实例是Deltec CADD-PLUS.TM.5400型静脉注射泵。
药物组合物可以是用于肌内和皮下给药的无菌注射水或油混悬液的形式。可按已知技术，用上述那些适宜的分散剂或湿润剂和悬浮剂配制该混悬液。无菌注射制剂也可以是在无毒肠胃外可接受的稀释剂或溶剂中制备的无菌注射溶液或混悬液，例如1，3-丁二醇中制备的溶液。此外，可方便地用无菌固定油作为溶剂或悬浮介质。为此目的，可使用包括合成甘油单或二酯在内的任何调和固定油。此外，脂肪酸例如油酸也可以制备注射剂。
术语“还原剂”是在氧化还原反应里，失去电子或有电子偏离的物质。还原剂本身在广义上说也是抗氧化剂，具有还原性，被氧化，其产物叫氧化产物。在本发明的实施方式中，还原剂表示为RA，还原剂的非限制性实例包括：H2、碳(C)、一氧化碳(CO)、还原铁粉(Fe)、锌粉(Zn)、碱金属(常用的有Li、Na、K)、其他活泼金属(如Mg、Al、Ca、La等)、氯化亚锡(SnCl2)、草酸、硼氢化钾(KBH4)、硼氢化钠(NaBH4)、氰基硼氢化钠(NaCNBH3)、三乙酰氧基硼氢化钠((CH3COO)3BHNa)、氢化铝锂(LiAlH4)、次磷酸、次磷酸钠、硫代硫酸钠(Na2S2O3)，本发明优选的还原剂为氰基硼氢化钠或三乙酰氧基硼氢化钠。
术语“巯基保护基”指当同时含有巯基和其他基团的化学分子参与反应的情况下，为使反应只发生在特定的基团处，而避免巯基遭受影响，将巯基加以保护，当反应完成后脱除的基团，在本发明的实施方式中，巯基保护基表示为T，巯基保护基的非限制性实例包括：-叔丁基、-乙酰基、-正丙酰基、-异丙酰基、-三苯基甲基、-甲氧基甲基、-2-(三甲硅烷基)乙氧甲基，本发明优选的巯基保护基为乙酰基。
术语“癌症”也被称为恶性肿瘤，是由控制细胞生长增殖机制失常而引起的疾病。癌症根据发生部位不同，病理形态不同，其非限制性实例包括：纤维肉瘤、粘液肉瘤、脂肪肉瘤、软骨肉瘤、成骨肉瘤、脊索瘤、血管肉瘤、内皮肉瘤、淋巴管肉瘤、淋巴管内皮肉瘤、滑膜瘤、间皮瘤、平滑肌肉瘤、横纹肌肉瘤、结肠癌、结直肠癌、肾癌、胰腺癌、骨癌、乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌、食道癌、胃癌、口腔癌、鼻癌、喉癌、汗腺癌、皮脂腺癌、乳头状癌、乳头状腺癌、囊腺癌、髓样癌、支气管癌、肝癌、胆管癌、绒毛膜癌、宫颈癌、子宫癌、睾丸癌、小细胞肺癌、非小细胞肺癌、膀胱癌、上皮癌、胶质瘤、成胶质细胞瘤、星状细胞瘤、髓母细胞瘤、颅咽管瘤、室管膜瘤、松果体瘤、成血细胞瘤、少突神经胶质瘤、脑脊膜癌、皮肤癌、黑色素瘤、神经母细胞瘤、视网膜母细胞瘤、急性淋巴母细胞白血病“ALL”、急性淋巴细胞B-细胞白血病、急性淋巴细胞T-细胞白血病、急性髓母细胞白血病“AML”、急性早幼粒细胞白血病“APL”、急性单核细胞白血病、急性红白血病、急性原巨核细胞白血病、急性骨髓单核细胞白血病、急性非淋巴细胞白血病、急性不分化型白血病、慢性髓细胞白血病“CML”、慢性淋巴细胞白血病“CLL”、毛细胞白血病、多发性骨髓瘤、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤。
本文使用以下连接片段缩写，它们表示如下相应的结构：
MC为如式(V)所示的片段：
Figure GPA0000210916770000311
Val为缬氨酸片段；
Cit为瓜氨酸片段；
PAB为4-亚氨基苄基氨甲酰基片段，其结构如式(VI)所示，连接在D上，
Figure GPA0000210916770000312
本文使用以下细胞毒性药物缩写，它们具有以下所示的定义：
MMAE为单甲基-auristatin E(分子量：718)，结构如式(VII)所示：
Figure GPA0000210916770000313
MMAF为N-甲基缬氨酸-缬氨酸-dolaisoleuine(Dil)-dolaproine(Dap)-苯丙氨酸(分子量：731.5)，结构如式(VIII)所示：
Figure GPA0000210916770000314
附图说明
图1显示化合物16、化合物17、化合物18、阳性对照化合物35对人胃癌NCI-N87裸小鼠移植瘤的疗效；
图2显示化合物16、化合物17、化合物18、阳性对照化合物35对荷瘤裸小鼠体重的影响。
具体实施方式
以下结合实施例进一步描述解释本发明，但这些实施例并非意味着限制本发明的范围。
化合物的结构是通过核磁共振(NMR)或质谱(MS)来确定的。NMR的测定使用BrukerAVANCE-400核磁仪，测定溶剂为氘代二甲基亚砜(DMSO-d6)、氘代氯仿(CDCl3)、氘代甲醇(CD3OD)，内标为四甲基硅烷(TMS)，化学位移是以10-6(ppm)作为单位给出。
MS的测定使用FINNIGAN LCQ Ad(ESI)质谱仪(生产商：Thermo，型号：FinniganLCQ advantage MAX)。
HPLC的测定使用安捷伦1200DAD高压液相色谱仪(Sunfire C18 150×4.6mm色谱柱)和Waters 2695-2996高压液相色谱仪(Gimini C18 150×4.6mm色谱柱)。
薄层层析硅胶板使用烟台黄海HSGF254或青岛GF254硅胶板，薄层色谱法(TLC)使用的硅胶板采用的规格是0.15mm～0.2mm，薄层层析分离纯化产品采用的规格是0.4mm～0.5mm硅胶板。
柱层析一般使用烟台黄海200～300目硅胶为配体。
本发明的已知的起始原料可以采用或按照本领域已知的方法来合成，或可购买自ABCR GmbH&Co.KG，Acros Organnics，Aldrich Chemical Company，韶远化学科技(Accela.ChemBio.Inc.)、达瑞化学品等公司。
实施例中如无特殊说明，反应均在氩气氛或氮气氛下进行。
氩气氛或氮气氛是指反应瓶连接一个约1L容积的氩气或氮气气球。
实施例中如无特殊说明，反应中的溶液是指水溶液。
实施例中如无特殊说明，反应的温度为室温。
室温为最适宜的反应温度，温度范围是20℃～30℃。
实施例中的反应进程的监测采用薄层色谱法(TLC)，反应所使用的展开剂的体系有：A：二氯甲烷和甲醇体系，B：正己烷和乙酸乙酯体系，C：石油醚和乙酸乙酯体系，D：丙酮，溶剂的体积比根据化合物的极性不同而进行调节。
纯化化合物采用的柱层析的洗脱剂的体系和薄层色谱法的展开剂的体系包括：A：二氯甲烷和甲醇体系，B：正己烷和乙酸乙酯体系，C：正己烷和丙酮体系，D：正己烷，E：乙酸乙酯，溶剂的体积比根据化合物的极性不同而进行调节，也可以加入少量的三乙胺和酸性或碱性试剂等进行调节。
本发明化合物的结构是通过Q-TOF LC/MS来确定的。Q-TOF LC/MS使用安捷伦6530精确质量数四级杆-飞行时间质谱仪和安捷伦1290-Infinity超高效液相色谱仪(安捷伦Poroshell 300SB-C8 5μm，2.1×75mm色谱柱)。
本发明的已知的起始原料可以采用或按照本领域已知的方法来合成，实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，或按照原料或商品制造厂商所建议的条件。未注明具体来源的试剂，为市场购买的常规试剂。
实施例1：中间体的制备
一、作为药物的中间体的制备
1、以下中间体化合物1～6采用专利WO2004010957中公开的方法制备
Figure GPA0000210916770000321
Figure GPA0000210916770000331
2、以下中间体化合物7～11采用专利WO2005081711中公开的方法制备
Figure GPA0000210916770000332
Figure GPA0000210916770000341
3、以下中间体化合物12～14采用专利US7750116中公开的方法制备
Figure GPA0000210916770000342
Figure GPA0000210916770000351
4、中间体化合物15的制备
Figure GPA0000210916770000352
具体合成路线如下所示：
Figure GPA0000210916770000353
第一步
3-(顺丁烯二酰亚胺基)丙酸
将β-丙氨酸1a(2.29g，25.8mmol)和顺丁烯二酸酐(2.52g，25.8mmol)溶解于20mL乙酸中，加热至回流，搅拌反应液2小时。反应液减压浓缩，残余物用甲苯共沸除水，加无水硫酸镁干燥后减压浓缩，残余物用乙酸乙酯重结晶，过滤干燥后得标题产物3-(顺丁烯二酰亚胺基)丙酸1b(2.80g，无色晶体)，产率：64.3％。
MS m/z(ESI)：170.04[M+1].
第二步
3-(顺丁烯二酰亚胺基)丙酸丁二酰亚胺酯
将3-(顺丁烯二酰亚胺基)丙酸1b(2.80g，16.6mmol)和N-羟基丁二酰亚胺(2.25g，19.9mmol)溶解于30ml DMF中，冰浴冷却至0℃，加入N，N′-二环己基碳二亚胺(6.85g，33.2mmol)搅拌反应10分钟后，升温至室温并搅拌反应过夜，过滤后向滤液中加入80ml二氯甲烷，用水(60ml×3)、5％碳酸氢钠水溶液(60ml×3)、饱和食盐水(50ml×3)洗涤分别洗涤，有机层加无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，得3-(顺丁烯二酰亚胺基)丙酸丁二酰亚胺酯1c(2.76g，类白色固体)，产率62.5％。
MS m/z(ESI)：267.06[M+1].
第三步
(1r，4r)-4-(叔丁氧羰基氨基甲基)环己基甲酸
将(1r，4r)-4-(氨甲基)环己基甲酸1d(4.72g，30.0mmol)、氢氧化钠(1.28g，32.0mmol)溶解于20ml水和44ml叔丁醇的混合溶剂中，加入二碳酸二叔丁酯(6.99g，32.0mmol)，室温搅拌反应18小时，向反应液中加入100ml水，用正己烷洗涤(100ml×3)，将水层冷却至4℃后，用饱和柠檬酸水溶液将体系pH调至3，酸化后的溶液用乙酸乙酯萃取(50ml×3)，合并有机层，加入无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，得(1r，4r)-4-(叔丁氧羰基氨基甲基)环己基甲酸1e(7.33g，无色晶体)，产率95％。
MS m/z(ESI)：258.17[M+1].
第四步
(1r，4r)-4-((叔丁氧羰基氨基)甲基)环己基甲酸丁二酰亚胺酯
(1r，4r)-4-(叔丁氧羰基氨基甲基)环己基甲酸1e(7.33g，28.5mmol)和N-羟基丁二酰亚胺(3.87g，34.2mmol)溶解于35ml DMF中，冰浴冷却至0℃，加入N，N′-二环己基碳二亚胺(11.76g，57.0mmol)搅拌反应10分钟后，升温至室温并搅拌反应过夜，过滤后向滤液中加入90ml二氯甲烷，分别用水(60ml×3)、5％NaHCO3水溶液(60ml×3)、饱和食盐水(50ml×3)洗涤，有机层加无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，得(1r，4r)-4-(叔丁氧羰基氨基甲基)环己基甲酸丁二酰亚胺酯1f(6.75g，类白色固体)，产率66.8％。
MS m/z(ESI)：355.18[M+1].
第五步
S-2-((1r，4s)-4-((叔丁氧羰基氨基)甲基)-N-甲基-N-环己基甲酰基)丙酸
将(1r，4r)-4-(叔丁氧羰基氨基甲基)环己基甲酸丁二酰亚胺酯1f(6.75g，19.0mmol)和N-甲基-L-丙氨酸1g(1.96g，19.0mmol)溶解于乙二醇二甲醚/水1∶1的混合溶剂90ml中，加入三乙胺(4.05g，40mmol)，室温条件下反应6h，减压浓缩，残余物用100ml乙酸乙酯溶解，用饱和食盐水(80ml×3)洗涤，有机层加入无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，残余物用薄层色谱法以展开剂二氯甲烷/甲醇(50∶1)纯化，得S-2-((1r，4s)-4-((叔丁氧羰基氨基)甲基)-N-甲基-N-环己基甲酰基)丙酸1h(4.78g类白色固体)，产率73.5％。
MS m/z(ESI)：343.22[M+1].
第六步
美登醇1i(565.5mg，1.0mmol，采用公知的合成方法Wayne CW，Sharon DW，EmilyEC等人，J.Med.Chem，2006，49，4392-4408制备而得)和S-2-((1r，4s)-4-((叔丁氧羰基氨基)甲基)-N-甲基-N-环己基甲酰基)丙酸1h(2.05g，6.0mmol)溶解于20ml二氯甲烷中，将N，N′-二环己基碳二亚胺(1.30g，6.3mmol)溶解于5ml二氯甲烷加上述反应液中，取1M的氯化锌的乙醚溶液(1.2ml，1.2mmol)缓慢滴加到反应液中，室温条件下搅拌反应2小时，反应结束后30ml乙酸乙酯，过滤，滤液分别用饱和碳酸氢钠水溶液(15ml×2)和饱和食盐水(10ml×2)洗涤，有机层加无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，残余物用薄层色谱法以展开剂二氯甲烷/甲醇(50∶1)纯化，得化合物1j(201.8mg，类白色固体)，产率22.7％。
MS m/z(ESI)：889.43[M+1].
第七步
将化合物1j(88.9mg，0.1mmol)溶解于8ml二氯甲烷中，加入三氟乙酸(12.6mg，0.11mmol)，室温下搅拌反应1小时，减压浓缩，残余物加20ml乙酸乙酯溶解，用5％的碳酸钠水溶液(6ml×3)洗涤，有机层加无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，得化合物1m(76.8mg，类白色固体)，产率97.3％。
MS m/z(ESI)：789.38[M+1].
第八步
将化合物1m(76.8mg，0.097mmol)和3-(顺丁烯二酰亚胺基)丙酸丁二酰亚胺酯1c(29.3mg，0.11mmol)溶解于10.0ml N，N’-二甲基甲酰胺，向反应液中加入三乙胺(30.6mg，0.3mmol)室温条件下反应8h，减压浓缩，残余物用20ml乙酸乙酯溶解，用饱和食盐水(10ml×3)洗涤，有机层加入无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，残余物用薄层色谱法以展开剂二氯甲烷/甲醇(40∶1)纯化，得化合物15(40.6mg，类白色固体)，产率44.5％。
MS m/z(ESI)：940.41[M+1].
二、作为抗体的中间体的制备
以下抗体按抗体常规方法进行制备：如可进行载体构建后，转染HEK293细胞(LifeTechnologies Cat.No.11625019)，纯化表达。
1、抗体序列
(1)曲妥珠单抗(Trastuzumab)，可以和HER2靶标特异性结合：
轻链序列：
Figure GPA0000210916770000381
重链序列：
Figure GPA0000210916770000382
(2)抗体Inotuzumab，可以和CD22靶标特异性结合：
轻链序列：
Figure GPA0000210916770000383
重链序列：
Figure GPA0000210916770000384
(3)抗体Brentuximab，可以和CD30靶标特异性结合
轻链序列：
Figure GPA0000210916770000391
重链序列：
Figure GPA0000210916770000392
(4)抗体Pertuzumab，可以和HER2靶标特异性结合
轻链CDR-L1序列：KASQDVSIGVA SEQ ID NO.7
轻链CDR-L2序列：SASYRYT SEQ ID NO.8
轻链CDR-L3序列：QQYYIYPYT SEQ ID NO.9
重链CDR-H1序列：DYTMD SEQ ID NO.10
重链CDR-H2序列：DVNPNSGGSIYNQRFKG SEQ ID NO.11
重链CDR-H3序列：NLGPSFYFDY SEQ ID NO.12
轻链序列：
Figure GPA0000210916770000393
重链序列：
Figure GPA0000210916770000394
Figure GPA0000210916770000401
实施例2
抗体药物偶联物化合物16的制备
Figure GPA0000210916770000402
其合成路线如下所示：
Figure GPA0000210916770000403
第一步
曲妥珠单抗-丙硫醇乙酯
取曲妥珠单抗(Trastuzumab)原液(6.9mg/ml，pH＝6.3的PBS溶液)32.0ml(1.49μmol)，等体积置换为0.1M的pH为5.0的乙酸/乙酸钠缓冲液，将3-乙酰巯基丙醛(0.79mg，5.98μmol)，溶解于3.0ml乙腈后滴加入上述缓冲液中，将氰基硼氢化钠(0.92mg，14.6μmol)溶于1.0ml水中滴加入上述反应液中，25℃下搅拌反应3小时。反应结束后用Sephadex G25凝胶柱脱盐纯化(洗脱相：pH为6.2的含2mM EDTA的0.05M的PBS溶液)后得45.1ml曲妥珠单抗-丙硫醇乙酯(16a)溶液，浓度为4.8mg/ml。
第二步
曲妥珠单抗-丙硫醇
向曲妥珠单抗-丙硫醇乙酯(16a)溶液(第一步制得)加入2M盐酸羟胺73μL，25℃下搅拌反应1小时后将反应液用Sephadex G25凝胶柱脱盐纯化(洗脱相：pH为6.2的含2mMEDTA的0.05M的PBS溶液)后得71.3ml曲妥珠单抗-丙硫醇(16b)溶液，浓度3.0mg/ml。
第三步
曲妥珠单抗-丙基-1-硫-MC-Val-Cit-PAB-MMAE(化合物16)
取化合物1(MC-Val-Cit-PAB-MMAE，19.1mg，14.5μmol)溶解于7ml乙腈中，加入曲妥珠单抗-丙硫醇(16b)溶液(第二步制得)中，25℃下搅拌反应4小时后将反应液用Sephadex G25凝胶柱脱盐纯化(洗脱相：pH为6.2的含2mM EDTA的0.05M的PBS溶液)，在无菌条件下通过0.2μm滤器过滤后得101.0ml曲妥珠单抗-丙基-1-硫-MC-Val-Cit-PAB-MMAE(16)溶液，浓度为2.03mg/ml，在无菌条件下通过0.2μm滤器过滤后-20℃冷冻储存。
Q-TOF LC/MS：148381.5(MAb+0D)、149613.2(MAb+1D)、151169.8(MAb+2D)、152587.7(MAb+3D)、153868.1(MAb+4D)、155484.4(MAb+5D)。
n＝1.9。
实施例3
抗体药物偶联物化合物22的制备
Figure GPA0000210916770000411
其合成路线如下所示：(如上面的描述相一致)
Figure GPA0000210916770000412
第一步
Inotuzumab-1-甲基丙硫醇乙酯
取Inotuzumab原液(8.1mg/ml，pH＝6.0的PBS溶液)20.0ml(1.08μmol)，将S-(3-氧代丁基)硫代乙酸乙酯(0.70mg，4.32μmol)，溶解于3.0ml乙腈后滴加入上述溶液中，将三甲氧基硼氢化钠(2.29mg，10.8μmol)溶于2.0ml水中滴加入上述反应液中，30℃下搅拌反应48小时。反应结束后用Sephadex G25凝胶柱脱盐纯化(洗脱相：pH为6.2的含2mM EDTA的0.05M的PBS溶液)后得29.2ml Inotuzumab-1-甲基丙硫醇乙酯(22a)溶液，浓度为5.4mg/ml。
参照实施例2的操作步骤第二步、第三步并且第三步采用化合物2制备得化合物22。
Q-TOF LC/MS：149611.1(MAb+0D)、151039.9(MAb+1D)、152470.6(MAb+2D)、153904.4(MAb+3D)、155317.0(MAb+4D)、156757.9(MAb+5D)。
n＝1.8。
Figure GPA0000210916770000421
Figure GPA0000210916770000431
Figure GPA0000210916770000441
Figure GPA0000210916770000451
Figure GPA0000210916770000461
Figure GPA0000210916770000471
实施例4
抗体药物偶联物化合物31的制备
Figure GPA0000210916770000481
其合成路线如下所示：
Figure GPA0000210916770000482
第一步
帕妥珠单抗-丙硫醇乙酯
取帕妥珠单抗(Pertuzumab)原液(在PH＝5.7的20mM L-组氨酸醋酸，120mM蔗糖缓冲体系中保存)，用G-25排阻柱进行换液到PH＝4.3-4.5的100mM的醋酸-醋酸钠缓冲液中，并浓缩至浓度为10.0mg/ml左右，得P-mAb的醋酸-醋酸钠缓冲液200ml(13.5mmol)，将3-乙酰巯基丙醛(14.3mg，0.108mmol)，溶解于20ml乙腈后滴加入上述缓冲液中，将氰基硼氢化钠(173mg，2.7mmol)溶于10ml水中滴加入上述反应液中，25℃下搅拌反应3小时。反应结束后用Sephadex G25凝胶柱脱盐纯化(洗脱相：pH为6.3的含2mM EDTA的0.05M的PBS溶液)后得300ml帕妥珠单抗-丙硫醇乙酯(31a)溶液，浓度为6.5mg/ml。
第二步
帕妥珠单抗-丙硫醇
向帕妥珠单抗-丙硫醇乙酯(31a)溶液(第一步制得)加入2M盐酸羟胺6.0mL，25℃下搅拌反应1小时后将反应液用Sephadex G25凝胶柱脱盐纯化(洗脱相：pH为6.3的含2mMEDTA的0.05M的PBS溶液)后得450ml帕妥珠单抗-丙硫醇(31b)溶液，浓度4.3mg/ml。
第三步
帕妥珠单抗-丙基-1-硫-MC-MMAF
取化合物12(MC-MMAF，125mg，13.5mmol)溶解于45ml乙腈中，加入帕妥珠单抗-丙硫醇(31b)溶液(第二步制得)中，25℃下搅拌反应4小时后将反应液用Sephadex G25凝胶柱脱盐纯化(洗脱相：pH为6.3的含2mM EDTA的0.05M的PBS溶液)，浓缩后在无菌条件下通过0.2μm滤器过滤后得240ml帕妥珠单抗-丙基-1-硫-MC-MMAF(化合物31)溶液，浓度为8.02mg/ml，然后-20℃冷冻储存。
实施例5
抗体药物偶联物化合物32的制备
Figure GPA0000210916770000491
其合成路线如下所示：
Figure GPA0000210916770000492
第一步
帕妥珠单抗-丙硫醇乙酯
取帕妥珠单抗(Pertuzumab)原液(在PH＝5.7的20mM L-组氨酸醋酸，120mM蔗糖缓冲体系中保存)，用G-25排阻柱进行换液到PH＝4.3-4.5的100mM的醋酸-醋酸钠缓冲液中，并浓缩至浓度为10.0mg/ml左右，得P-mAb的醋酸-醋酸钠缓冲液2.0ml(0.135mmol)，将3-乙酰巯基丙醛(0.15mg，1.1umol)，溶解于0.2ml乙腈后滴加入上述缓冲液中，将氰基硼氢化钠(173mg，2.7mmol)溶于0.2ml水中滴加入上述反应液中，25℃下搅拌反应3小时。反应结束后用Sephadex G25凝胶柱脱盐纯化(洗脱相：pH为6.3的含2mM EDTA的0.05M的PBS溶液)后得3.0ml帕妥珠单抗-丙硫醇乙酯(31a)溶液，浓度为6.5mg/ml。
第二步
帕妥珠单抗-丙硫醇
向帕妥珠单抗-丙硫醇乙酯(31a)溶液(第一步制得)加入2M盐酸羟胺0.06mL，25℃下搅拌反应1小时后将反应液用Sephadex G25凝胶柱脱盐纯化(洗脱相：pH为6.3的含2mMEDTA的0.05M的PBS溶液)后得5.0ml帕妥珠单抗-丙硫醇(31b)溶液，浓度3.8mg/ml。
第三步
帕妥珠单抗-丙基-1-硫-MC-MMAE
取化合物11(MC-MMAE，1.3mg，1.4ummol)溶解于0.55ml乙腈中，加入帕妥珠单抗-丙硫醇(31b)溶液(第二步制得)中，25℃下搅拌反应4小时后将反应液用Sephadex G25凝胶柱脱盐纯化(洗脱相：pH为6.3的含2mM EDTA的0.05M的PBS溶液)，在无菌条件下通过0.2μm滤器过滤后得8.0ml帕妥珠单抗-丙基-1-硫-MC-MMAE(化合物32)溶液，浓度为2.4mg/ml，然后-20℃冷冻储存。
实施例6
抗体药物偶联物化合物33的制备
Figure GPA0000210916770000501
其合成路线如下所示：
Figure GPA0000210916770000502
第一步
帕妥珠单抗-丙硫醇乙酯
取帕妥珠单抗(Pertuzumab)原液(在PH＝5.7的20mM L-组氨酸醋酸，120mM蔗糖缓冲体系中保存)，用G-25排阻柱进行换液到PH＝4.3-4.5的100mM的醋酸-醋酸钠缓冲液中，并浓缩至浓度为10.0mg/ml左右，得P-mAb的醋酸-醋酸钠缓冲液200ml(13.5mmol)，将3-乙酰巯基丙醛(14.3mg，0.108mmol)，溶解于20ml乙腈后滴加入上述缓冲液中，将氰基硼氢化钠(173mg，2.7mmol)溶于10ml水中滴加入上述反应液中，25℃下搅拌反应3小时。反应结束后用Sephadex G25凝胶柱脱盐纯化(洗脱相：pH为6.3的含2mM EDTA的0.05M的PBS溶液)后得300ml帕妥珠单抗-丙硫醇乙酯(31a)溶液，浓度为6.5mg/ml。
第二步
帕妥珠单抗-丙硫醇
向帕妥珠单抗-丙硫醇乙酯(31a)溶液(第一步制得)加入2M盐酸羟胺6.0mL，25℃下搅拌反应1小时后将反应液用Sephadex G25凝胶柱脱盐纯化(洗脱相：pH为6.3的含2mMEDTA的0.05M的PBS溶液)后得450ml帕妥珠单抗-丙硫醇(31b)溶液，浓度4.3mg/ml。
第三步
帕妥珠单抗-丙基-1-硫-MC-VC-PAB-MMAF
取化合物7(MC-VC-PAB-MMAF，180mg，13.5mmol)溶解于45ml乙腈中，加入帕妥珠单抗-丙硫醇(31b)溶液(第二步制得)中，25℃下搅拌反应4小时后将反应液用Sephadex G25凝胶柱脱盐纯化(洗脱相：pH为6.3的含2mM EDTA的0.05M的PBS溶液)，浓缩后在无菌条件下通过0.2μm滤器过滤后得240ml帕妥珠单抗-丙基-1-硫-MC-VC-PAB-MMAF(化合物33)溶液，浓度为8.0mg/ml，然后-20℃冷冻储存。
实施例7
抗体药物偶联物化合物34的制备
Figure GPA0000210916770000511
其合成路线如下所示：
Figure GPA0000210916770000512
第一步
帕妥珠单抗-丙硫醇乙酯
取帕妥珠单抗(Pertuzumab)原液(在PH＝5.7的20mM L-组氨酸醋酸，120mM蔗糖缓冲体系中保存)，用G-25排阻柱进行换液到PH＝4.3-4.5的100mM的醋酸-醋酸钠缓冲液中，并浓缩至浓度为10.0mg/ml左右，得P-mAb的醋酸-醋酸钠缓冲液2.0ml(0.135mmol)，将3-乙酰巯基丙醛(0.15mg，1.1umol)，溶解于0.2ml乙腈后滴加入上述缓冲液中，将氰基硼氢化钠(173mg，2.7mmol)溶于0.2ml水中滴加入上述反应液中，25℃下搅拌反应3小时。反应结束后用Sephadex G25凝胶柱脱盐纯化(洗脱相：pH为6.3的含2mM EDTA的0.05M的PBS溶液)后得3.0ml帕妥珠单抗-丙硫醇乙酯(31a)溶液，浓度为6.5mg/ml。
第二步
帕妥珠单抗-丙硫醇
向帕妥珠单抗-丙硫醇乙酯(31a)溶液(第一步制得)加入2M盐酸羟胺0.06mL，25℃下搅拌反应1小时后将反应液用Sephadex G25凝胶柱脱盐纯化(洗脱相：pH为6.3的含2mMEDTA的0.05M的PBS溶液)后得5.0ml帕妥珠单抗-丙硫醇(31b)溶液，浓度3.8mg/ml。
第三步
帕妥珠单抗-丙基-1-硫-MC-VC-PAB-MMAE
取化合物1(MC-VC-PAB-MMAE，1.7mg，1.4ummol)溶解于0.55ml乙腈中，加入帕妥珠单抗-丙硫醇(31b)溶液(第二步制得)中，25℃下搅拌反应4小时后将反应液用SephadexG25凝胶柱脱盐纯化(洗脱相：pH为6.3的含2mM EDTA的0.05M的PBS溶液)，在无菌条件下通过0.2μm滤器过滤后得8.0ml帕妥珠单抗-丙基-1-硫-MC-VC-PAB-MMAE(化合物34)溶液，浓度为2.4mg/ml，然后-20℃冷冻储存。
实施例8
阳性对照抗体药物偶联物化合物35的制备
Figure GPA0000210916770000521
其合成路线如下所示：
Figure GPA0000210916770000522
抗体药物偶联物化合物35的制备可以参考专利US20050169933。
以下结合测试例进一步描述解释本发明，但这些实施例并非意味着限制本发明的范围。
生物学评价
测试例1：BT474细胞增殖实验
一、试验目的：
检测本发明样品对BT474细胞增殖的抑制作用。
二、试验材料：
本发明样品：抗体药物偶联物化合物16(以下简称化合物)、化合物17、化合物18、化合物31-34
阳性对照药：化合物35；
BT474细胞：购于中科院细胞库，货号：TCHu143；
CCK-8：Cell Counting Kit-8，购于Dojindo，货号：CK04；
FBS：Fetal Bovine Serum，购于Gibco，货号：10099-141；
RPMI1640：购于Hyclone，货号：SH30809.01B；
NOVOSTAR多功能酶标仪(BMG)。
三、试验方法：
1. 96孔板中，每孔加入100μl含15000个BT474细胞的10％FBS的RPMI1640培养基，培养板放在37℃、5％CO2培养箱中培养。
2.将样品用含10％FBS的RPMI1640培养基进行两倍梯度稀释，共稀释9个点，起始稀释浓度为5ug/ml。
3.将稀释好的药物转移至铺好的BT474细胞的96孔细胞培养板中，50μl/孔。每个浓度设置三个复孔，同时要设置不加任何药物的对照孔。在37℃、5％CO2条件下连续培养细胞。
4. 96小时后，每孔加入加入10μl CCK-8溶液显色，放入37℃、5％CO2培养箱中。显色4小时，在酶标仪上读取OD450，经Graphpad Prism 5软件处理后即可得IC50。
四、试验结果：
本发明化合物的生物活性由上述分析所得，计算所得的IC50值列于下表1：
表1.本发明化合物对BT474细胞的增殖抑制的IC50
化合物编号 IC<sub>50</sub>(BT474)/nM
35 1.867
16 0.358
17 3.38
18 0.152
19 0.124
结论：本发明优选化合物均对BT474细胞具有明显的增殖抑制活性。
测试例2：Daudi细胞增殖实验
一、试验目的：
检测本发明样品对Daudi细胞增殖的抑制作用。
二、试验材料与仪器：
本发明样品：化合物22、化合物23、化合物24、化合物25；
RPMI1640：购于Hyclone，货号：SH30809.01B；
Pen Strep(P/S)，购于Gibco，货号15140；
CCK-8：Cell Counting Kit-8，购于Dojindo，货号：CK04；
75cm TC-Treated Culture Flask，购于Corning Incorporated，货号：430641；
PBS：购于Gibco，货号：20012-027；
Daudi人Burkitt′s淋巴瘤细胞，购于中科院细胞库，货号：TcHu140；
NOVOSTAR多功能酶标仪(BMG)；
抗体Inotuzumab：阳性对照。
三、试验方法：
1.将Daudi人Burkitt′s淋巴瘤细胞培养在含有10％FBS和1％P/S的RPMI-1640培养基中。实验时，将细胞密度调整为5×104个/ml，在96孔板中每孔加入90ul培养基；
2.将样品用PBS进行四倍梯度稀释，共稀释9个点，起始稀释浓度为2.5ug/ml；
3.将稀释好的药物转移到铺好Daudi人Burkitt′s淋巴瘤细胞的96孔细胞培养板中，10μl/孔，对照孔加入10μl PBS。在5％CO2的37℃培养箱中连续培养；
4. 72小时后，每孔加入加入10μl CCK-8溶液显色，放入37℃、5％CO2培养箱中。显色4小时，在酶标仪上读取OD450，经Graphpad Prism 5软件处理后即可得IC50。
表2.本发明化合物对Daudi人Burkitt′s淋巴瘤细胞的增殖抑制的IC50
化合物编号 IC<sub>50</sub>(BT474)/nM
Inotuzumab 95.6
22 1.43
23 22.71
24 0.511
25 5.94
结论：本发明优选化合物均对Daudi人Burkitt′s淋巴瘤细胞具有明显的增殖抑制活性。
测试例3：NCI-N87抑瘤率实验
一、试验目的
评价并比较本发明抗体细胞毒素偶联物对人胃癌NCI-N87细胞(ATCC，CRL-5822)裸小鼠移植瘤的疗效。
二、受试药物
本发明样品：化合物16；化合物17；化合物18；化合物31。
阳性对照药：化合物35；
配制方法：均用生理盐水配制。
三.试验动物
BALB/cA-nude裸小鼠，6-7周，雌性，购自上海斯莱克实验动物有限责任公司。合格证号：SCXK(沪)2012-0002。饲养环境：SPF级。
四、试验步骤
裸小鼠皮下接种人胃癌NCI-N87细胞，待肿瘤生长至100-200mm3后，将
动物随机分组(D0)。给药剂量和给药方案见表1。每周测2-3次瘤体积，称鼠重，记录数据。肿瘤体积(V)计算公式为：
V＝1/2×a×b2
其中：a、b分别表示长、宽。
T/C(％)＝(T-T0)/(C-C0)×100％其中T、C为实验结束时的肿瘤体积；T0、C0为实验开始时的肿瘤体积。
表3.化合物(16、17、18、35)对人胃癌NCI-N87裸小鼠移植瘤的疗效
Figure GPA0000210916770000551
D0：第一次给药时间。P值指与对照相比，实验开始时的小鼠数目：对照组n＝10，治疗组n＝6。
表4.化合物(31、35)对人胃癌NCI-N87裸小鼠移植瘤的疗效
Figure GPA0000210916770000552
D0：第一次给药时间；P值指与溶剂相比；**P＜0.01，与化合物35 3mg/kg组比较；均采用Student’s t检验。实验开始时小鼠数目；对照组n＝10，治疗组n＝6。
五、试验结果
在第一组试验中，化合物16(3、10mg/kg，IV，D0、7、14)显著抑制HER2高表达胃癌NCI-N87裸小鼠皮下移植瘤的生长，抑瘤率分别为85％和156％，并分别引起1/6和6/6小鼠肿瘤部分消退；化合物18相同剂量和方案对NCI-N87的抑瘤率分别为74％和150％，其中高剂量引起6/6小鼠肿瘤部分消退；参比药物化合物35对NCI-N87的抑瘤率分别为66％和145％，其中高剂量引起6/6小鼠肿瘤部分消退；化合物17对NCI-N87的抑瘤率分别为17％和50％。荷瘤小鼠对以上药物均能较好耐受。受试药物对肿瘤生长的抑制作用如表1和图1所示。给药过程中没有出现小鼠死亡，各组小鼠给药期间体重没有明显下降如图2所示，提示目前给药剂量没有明显的毒副作用。
在第二组试验中，化合物31(1、3、10mg/kg，IV，每周1次，共2次)剂量依赖性地抑制高表达HER2人胃癌NCI-N87裸小鼠皮下移植瘤的生长，抑瘤率分别为48％、118％和200％；3mg/kg组有4/6肿瘤部分消退，10mg/kg组有6/6肿瘤完全消退；参比药物化合物35(3、10mg/kg，IV，每周1次，共2次)对NCI-N87的抑瘤率分别为86％和178％；10mg/kg组有2/6肿瘤部分消退，4/6肿瘤完全消退。荷瘤小鼠对以上药物均能很好耐受。相比较，化合物31对NCI-N87的疗效强于阳性对照化合物35(P＜0.01，3mg/kg组比较)，见表4。
测试例4SK-BR-3细胞增殖实验
一、试验目的：
采用CCK法测试样品对SK-BR-3细胞增殖活性的抑制作用，根据IC50大小评价样品的体外活性。
二、试验材料：
SK-BR-3细胞：ATCC，货号HTB-30；
McCoy′s 5A培养基：Gibco，货号16600-108；
CCK-8：Cell Counting Kit-8，购于Dojindo，货号：CK04；
PBS：购于Gibco，货号：20012-027；
三、试验方法：
1.SK-BR-3细胞培养在含10％FBS的McCoy′s 5A培养基中，一周传代2～3次，传代比列1∶3或1∶6。传代时，吸掉培养基，用5ml 0.25％的胰酶冲洗细胞层，然后吸掉胰酶，将细胞放在培养箱中消化3～5分钟，加入新鲜培养基重悬细胞。
2.在96孔细胞培养板中加入100μL的细胞悬液，密度为5×104细胞/ml，培养基为10％FBS的McCoy′s 5A，96孔板外围只加入100ul 10％FBS的McCoy′s 5A培养基。
3. 24小时细胞贴壁后，去掉培养基，每孔加入90ul 2％FBS的McCoy′s 5A培养基。
4.样品用PBS稀释成不同浓度梯度，96孔板中每孔加入10μL配置的不同浓度的待测样品，每个样品两复孔。
5.将培养板在培养箱中孵育3天(37℃，5％CO2)。
6.向每孔加入10μL CCK-8溶液(注意不要在孔中生成气泡，它们会影响OD值的读数)。
7.将培养板在培养箱内孵育3小时。用酶标仪测定在450nm处的吸光度。
四、试验结果：
化合物编号 SK-BR-3 IC50(ng/ml)
31 5.94
35 54.75
结论：本发明优选化合物均对SK-BR-3细胞具有明显的增殖抑制活性。

Claims (33)

1.一种配体-细胞毒性药物偶联物或其可药用盐，其具有以下式(III)的结构：
Figure FDA0002359767610000011
其中：
连接单元X与Pc的多肽链N端氨基和/或赖氨酸残基的ε-氨基相连；连接单元X具有以下结构
Figure FDA0002359767610000012
X1为H或C1-6烷基，
X2选自C1-6烷基或、C1-6烷基-苯基、苯基-C1-6烷基或C1-6烷基-苯基-C1-6烷基；
S为硫原子；
YL选自C1-6烷基、O-C1-6烷基、O-C1-6烷氧基、CH2(OCH2CH2)t、(CH2CH2O)tCH2、(CH2CH2O)t，t是选自1-10的整数；
Kk是氨基酸单元，其中K为氨基酸，k选自0-10的整数；
Qq是延伸单元，其中：
Q是
Figure FDA0002359767610000013
q是0、1或2；
Pc为抗体；
D为细胞毒性药物；
n为载药量，n选自1-8。
2.根据权利要求1所述的配体-细胞毒性药物偶联物或其可药用盐，其中所述抗体为单克隆抗体。
3.根据权利要求2所述的配体-细胞毒性药物偶联物或其可药用盐，其中所述抗体的抗原为增生性疾病靶细胞和/或组织上表达的细胞表面抗原。
4.根据权利要求3所述的配体-细胞毒性药物偶联物或其可药用盐，其中所述增生性疾病为癌症；所述细胞表面抗原为细胞表面受体。
5.根据权利要求4所述的配体-细胞毒性药物偶联物或其可药用盐，其特征在于，所述细胞表面受体选自：
1)HER2(ErbB2)，
2)HER3(ErbB3)，
3)HER4(ErbB4)，
4)CD20，
5)CD22，
6)CD30，
7)CD33，
8)CD44，
9)Lewis Y，
10)CD56，
11)CD105，
12)VEGFR，或
13)GPNMB。
6.根据权利要求4所述的配体-细胞毒性药物偶联物或其可药用盐，其特征在于，所述细胞表面受体选自：
1)HER2(ErbB2)，
2)CD22，
3)CD30
4)CD33，
5)CD44
6)CD56，
7)Lewis Y，或
8)GPNMB。
7.根据权利要求1所述的配体-细胞毒性药物偶联物或其可药用盐，其特征在于，所述抗体选自：
1)Trastuzumab(HER2)，
2)Inotuzumab(CD22)，
3)Pinatuzumab(CD22)，
4)Brentuximab(CD30)，
5)Gemtuzumab(CD33)，
6)Bivatuzumab(CD44)，
7)Lorvotuzumab(CD56)，
8)cBR96(Lewis Y)，
9)Glematumamab(GPNMB)或
10)Pertuzumab。
8.根据权利要求7所述的配体-细胞毒性药物偶联物或其可药用盐，其中所述的抗体为能够结合至HER2蛋白的抗体，其特征在于其：
1)含有至少一个选自三个根据Kabat编号系统所定义的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3的轻链，其中
i)CDR-L1为序列SEQ ID No.7的CDR，或至少一个在最佳比对后与序列SEQ-No.7具有至少80％同源性的序列；
ii)CDR-L2为序列SEQ ID No.8的CDR，或至少一个在最佳比对后与序列SEQ-No.8具有至少80％同源性的序列；
iii)CDR-L3为序列SEQ ID No.9的CDR，或至少一个在最佳比对后与序列SEQ-No.9具有至少80％同源性的序列；
2)含有至少一个选自三个根据Kabat编号系统所定义的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3的轻链，其中
iv)CDR-H1为序列SEQ ID No.10的CDR，或至少一个在最佳比对后与序列SEQ-No.10具有至少80％同源性的序列；
v)CDR-H2为序列SEQ ID No.11的CDR，或至少一个在最佳比对后与序列SEQ-No.11具有至少80％同源性的序列；
vi)CDR-H3为序列SEQ ID No.12的CDR，或至少一个在最佳比对后与序列SEQ-No.12具有至少80％同源性的序列。
9.根据权利要求8所述的配体-细胞毒性药物偶联物或其可药用盐，其特征在于，所述能够结合至HER2蛋白的抗体含有轻链和/或重链，所述轻链具有含有氨基酸序列SEQ IDNo.13的序列，所述重链具有含有氨基酸序列SEQ ID No.14的序列。
10.根据权利要求1所述的配体-细胞毒性药物偶联物或其可药用盐，其中所述细胞毒性药物选自：微管蛋白抑制剂、拓扑异构酶抑制剂、DNA烷化剂、酪氨酸激酶抑制剂或DNA合成抑制剂。
11.根据权利要求10所述的配体-细胞毒性药物偶联物或其可药用盐，其中所述细胞毒性药物为微管蛋白抑制剂。
12.根据权利要求11所述的配体-细胞毒性药物偶联物或其可药用盐，其中所述细胞毒性药物微管蛋白抑制剂选自美登素类、卡利奇霉素、紫杉烷类、长春新碱、秋水仙碱、Dolastatins/Auristatins。
13.根据权利要求12所述的配体-细胞毒性药物偶联物或其可药用盐，其中所述细胞毒性药物微管蛋白抑制剂选自美登素类或Dolastatins/Auristatins。
14.根据权利要求1所述的配体-细胞毒性药物偶联物或其可药用盐，其中所述D选自Dolastatins/Auristatins，其结构式如通式(D1)所示：
Figure FDA0002359767610000041
其中：
R1选自键或C1-6烷基；
R2选自H或C1-6烷基；
R3选自H或C1-6烷基；
R4选自H或C1-6烷基；
R5选自H或甲基；
R6选自H或C1-6烷基；
R7选自H或C1-6烷基；
R8选自H、羟基、C1-6烷基或C1-6烷氧基；
R9选自H或C1-6烷基；
当R1选自为C1-6烷基时，
R10为下列结构：
Figure FDA0002359767610000042
当R1为键时，其与间隔单元Y相连，其中R10选自下列结构：
Figure FDA0002359767610000043
Z选自O，S、NH和N(R14)；
R11选自H、羟基或C1-6烷基；
R12选自芳基；
R13选自H、羟基、COOR14、C1-6烷氧基或C1-6烷基；
R14选自H或C1-6烷基；
R15选自H、C1-6烷基或(R16O)m-R14；
m选自1-10之间的整数；
R16是C2-C8烷基；
t选自0-6之间的整数；
R19为芳基。
15.根据权利要求14所述的配体-细胞毒性药物偶联物或其可药用盐，其中R1为键。
16.根据权利要求1所述的配体-细胞毒性药物偶联物或其可药用盐，其中所述D选自美登素类，其结构式如通式(DM)所示：
Figure FDA0002359767610000051
其中：
R20选自O或S；
R21选自H或C1-6烷基。
17.根据权利要求1所述的配体-细胞毒性药物偶联物或其可药用盐，其中YL选自C1-10烷基或(CH2CH2O)tCH2；k为2；n选自1-4。
18.根据权利要求17所述的配体-细胞毒性药物偶联物或其可药用盐，其中所述的YL为C2-C8烷基；Kk为缬氨酸-瓜氨酸。
19.根据权利要求1所述的配体-细胞毒性药物偶联物或其可药用盐，其具有以下任意一种结构：
Figure FDA0002359767610000052
Figure FDA0002359767610000061
Figure FDA0002359767610000071
其中配体Pc、n如权利要求1所定义。
20.根据权利要求19所述的配体-细胞毒性药物偶联物或其可药用盐，其中所述Pc选自Trastuzumab、Inotuzumab、Brentuximab和Pertuzumab。
21.根据权利要求20所述的配体-细胞毒性药物偶联物或其可药用盐，其中所述Pc选自Trastuzumab和Pertuzumab。
22.根据权利要求1所述的配体-细胞毒性药物偶联物或其可药用盐，其选自：
Figure FDA0002359767610000081
Figure FDA0002359767610000091
n选自1-4。
23.一种具有以下结构式(II)的化合物：
Figure FDA0002359767610000101
其中：
Pc、X、n如权利要求1所定义；
T选自H或乙酰基。
24.一种制备如通式(III)所示的抗体-细胞毒性药物偶联物的方法，
Figure FDA0002359767610000102
其包括如下步骤：
1)向通式IA化合物和通式IB化合物中加入还原剂RA，进行反应，得到通式IC化合物；所述反应体系pH值为3-6；
Figure FDA0002359767610000103
2)向通式IC化合物中加入脱保护剂脱去巯基保护基T，得到通式ID化合物；
Figure FDA0002359767610000104
3)通式ID化合物和通式IE化合物之间发生迈克尔加成反应，偶联得到通式(III)化合物；
Figure FDA0002359767610000105
其中：
D选自Dolastatins/Auristatins或美登素类；
X1、X2、PC、YL、Kk和Qq如权利要求1所定义；T、n如权利要求23所定义。
25.根据权利要求24所述制备如通式(III)所示的抗体-细胞毒性药物偶联物的方法，其中所述的反应温度为0-40℃。
26.根据权利要求24所述制备如通式(III)所示的抗体-细胞毒性药物偶联物的方法，其中所述的反应温度为15-30℃。
27.根据权利要求24所述制备如通式(III)所示的抗体-细胞毒性药物偶联物的方法，其中所述的反应温度为20-25℃。
28.根据权利要求24所述制备如通式(III)所示的抗体-细胞毒性药物偶联物的方法，其中所述的脱保护剂为盐酸羟胺；所述还原剂RA为氰基硼氢化钠或三乙酰氧基硼氢化钠。
29.一种药物组合物，其特征在于，所述药物组合物含有治疗有效量的根据权利要求1-22中任意一项所述的配体-细胞毒性药物偶联物或其可药用盐以及一种或多种药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。
30.根据权利要求1-22中任意一项所述的配体-细胞毒性药物偶联物或其可药用盐或根据权利要求29所述的药物组合物在制备治疗癌症的药物中的用途，其中所述癌症选自以下一种或多种肿瘤相关受体(1)-(8)过表达的癌症：
1)HER2(ErbB2)，
2)CD22，
3)CD30
4)CD33，
5)CD44
6)CD56，
7)Lewis Y，或
8)GPNMB。
31.根据权利要求1-22中任意一项所述的配体-细胞毒性药物偶联物或其可药用盐或根据权利要求29所述的药物组合物在制备用于治疗哺乳动物癌症的药物中的用途，其中所述哺乳动物为人，所述癌症选自乳腺癌、卵巢癌、胃癌、子宫内膜癌、唾液腺癌、肺癌、结肠癌、肾癌、直肠癌、甲状腺癌、胰腺癌、前列腺癌、膀胱癌、急性淋巴细胞白血病、急性髓细胞白血病、急性早幼粒细胞白血病、慢性髓细胞白血病、慢性淋巴细胞白血病、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤或复发性间变性大细胞淋巴瘤。
32.根据权利要求31所述的用途，其中所述癌症选自乳腺癌症、霍奇金淋巴瘤或复发性间变性大细胞淋巴瘤。
33.根据权利要求31所述的用途，其中所述癌症为与HER2表达相关的乳腺癌。
CN201580002231.9A 2014-01-29 2015-01-22 配体-细胞毒性药物偶联物、其制备方法及其应用 Expired - Fee Related CN105636591B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201580002231.9A CN105636591B (zh) 2014-01-29 2015-01-22 配体-细胞毒性药物偶联物、其制备方法及其应用

Applications Claiming Priority (6)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201410043554 2014-01-29
CN201410043554X 2014-01-29
CN201410593726 2014-10-29
CN2014105937260 2014-10-29
PCT/CN2015/071289 WO2015113476A1 (zh) 2014-01-29 2015-01-22 配体-细胞毒性药物偶联物、其制备方法及其应用
CN201580002231.9A CN105636591B (zh) 2014-01-29 2015-01-22 配体-细胞毒性药物偶联物、其制备方法及其应用

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN105636591A CN105636591A (zh) 2016-06-01
CN105636591B true CN105636591B (zh) 2020-04-07

Family

ID=53756230

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201580002231.9A Expired - Fee Related CN105636591B (zh) 2014-01-29 2015-01-22 配体-细胞毒性药物偶联物、其制备方法及其应用

Country Status (12)

Country Link
US (1) US10562977B2 (zh)
EP (1) EP3100731A4 (zh)
JP (1) JP2017510548A (zh)
KR (1) KR20160111964A (zh)
CN (1) CN105636591B (zh)
AU (1) AU2015210578B2 (zh)
CA (1) CA2937561A1 (zh)
HK (1) HK1223562A1 (zh)
MX (1) MX2016009332A (zh)
RU (1) RU2685728C2 (zh)
TW (1) TWI662968B (zh)
WO (1) WO2015113476A1 (zh)

Families Citing this family (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
ES2785551T3 (es) 2014-06-30 2020-10-07 Glykos Finland Oy Derivado de sacárido de una carga útil tóxica y sus conjugados con anticuerpos
AU2016218840A1 (en) * 2015-02-15 2017-08-31 Jiangsu Hengrui Medicine Co., Ltd. Ligand-cytotoxicity drug conjugate, preparing method therefor, and application thereof
CN115300640A (zh) * 2015-08-10 2022-11-08 杭州多禧生物科技有限公司 新型连接体及其用于药物和生物分子的特异性偶联
CN107405408B (zh) * 2015-12-21 2021-07-02 江苏恒瑞医药股份有限公司 一种抗体药物偶联物的制备方法
CN107029244B (zh) * 2016-02-04 2021-04-27 浙江昭华生物医药有限公司 抗her2抗体-药物偶联物及其应用
WO2018136455A1 (en) * 2017-01-17 2018-07-26 The Texas A&M University System Endolysosomal targeting conjugates for improved delivery of cargo molecules to the endolysosomal compartment of target cells
JP2020518655A (ja) * 2017-03-30 2020-06-25 江▲蘇▼恒瑞医▲薬▼股▲フン▼有限公司Ｊｉａｎｇｓｕ Ｈｅｎｇｒｕｉ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ Ｃｏ．， Ｌｔｄ． 抗体−薬物コンジュゲートの製造方法
US20210079039A1 (en) * 2018-04-16 2021-03-18 Avelas Biosciences, Inc. Compositions and methods for the selective delivery of therapeutic and imaging agents
CN112168978B (zh) * 2019-07-03 2022-01-11 北京大学 一种抗体偶联药物及其药物组合物与应用
CN110845480B (zh) * 2019-11-22 2022-03-15 荣昌生物制药(烟台)股份有限公司 一种双功能细胞毒素及其用途
CA3200812A1 (en) * 2020-12-04 2022-06-09 Qingsong GUO Antibody-drug conjugate, and intermediate thereof, preparation method thereof, and application thereof
KR20240051956A (ko) * 2021-09-03 2024-04-22 도레이 카부시키가이샤 암의 치료 및/또는 예방용 의약 조성물

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1938046A (zh) * 2003-11-06 2007-03-28 西雅图基因公司 能够与配体偶联的单甲基缬氨酸化合物
CN102973947A (zh) * 2004-06-01 2013-03-20 健泰科生物技术公司 抗体-药物偶联物和方法

Family Cites Families (21)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4970198A (en) 1985-10-17 1990-11-13 American Cyanamid Company Antitumor antibiotics (LL-E33288 complex)
US5079233A (en) 1987-01-30 1992-01-07 American Cyanamid Company N-acyl derivatives of the LL-E33288 antitumor antibiotics, composition and methods for using the same
US5606040A (en) 1987-10-30 1997-02-25 American Cyanamid Company Antitumor and antibacterial substituted disulfide derivatives prepared from compounds possessing a methyl-trithio group
US5530101A (en) 1988-12-28 1996-06-25 Protein Design Labs, Inc. Humanized immunoglobulins
US5773001A (en) 1994-06-03 1998-06-30 American Cyanamid Company Conjugates of methyltrithio antitumor agents and intermediates for their synthesis
EP1337853B1 (en) * 2000-11-21 2009-01-07 Sunesis Pharmaceuticals, Inc. An extended tethering approach for rapid identification of ligands
US7090843B1 (en) 2000-11-28 2006-08-15 Seattle Genetics, Inc. Recombinant anti-CD30 antibodies and uses thereof
US20040018194A1 (en) 2000-11-28 2004-01-29 Francisco Joseph A. Recombinant anti-CD30 antibodies and uses thereof
EP1545613B9 (en) 2002-07-31 2012-01-25 Seattle Genetics, Inc. Auristatin conjugates and their use for treating cancer, an autoimmune disease or an infectious disease
US7528235B2 (en) * 2003-01-23 2009-05-05 The Regents Of The Univarsity Of California Multi-functional antibodies
US8088387B2 (en) 2003-10-10 2012-01-03 Immunogen Inc. Method of targeting specific cell populations using cell-binding agent maytansinoid conjugates linked via a non-cleavable linker, said conjugates, and methods of making said conjugates
US7750116B1 (en) 2006-02-18 2010-07-06 Seattle Genetics, Inc. Antibody drug conjugate metabolites
WO2007103288A2 (en) * 2006-03-02 2007-09-13 Seattle Genetics, Inc. Engineered antibody drug conjugates
AR059900A1 (es) * 2006-03-17 2008-05-07 Genentech Inc Anticuerpos anti-tat226 e inmunoconjugados
US8257706B2 (en) 2006-08-25 2012-09-04 Seattle Genetics, Inc. CD30 binding agents and uses thereof
WO2009073524A2 (en) * 2007-11-30 2009-06-11 Medarex, Inc. Conjugates of anti-rg-1 antibodies
CN101455844B (zh) * 2007-12-10 2011-09-14 江苏豪森药业股份有限公司 聚乙二醇化促红细胞生成素偶联物和其制备方法与用途
CN102083461B (zh) * 2008-04-30 2014-09-17 伊缪诺金公司 有效的偶联物和亲水性连接体
PL2437790T3 (pl) * 2009-06-03 2019-09-30 Immunogen, Inc. Sposoby sprzęgania
CN102596922A (zh) * 2009-10-06 2012-07-18 免疫基因公司 有效的缀合物和亲水性连接体
IN2014CN04961A (zh) * 2011-12-05 2015-09-18 Igenica Biotherapeutics Inc

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1938046A (zh) * 2003-11-06 2007-03-28 西雅图基因公司 能够与配体偶联的单甲基缬氨酸化合物
CN102973947A (zh) * 2004-06-01 2013-03-20 健泰科生物技术公司 抗体-药物偶联物和方法

Also Published As

Publication number Publication date
EP3100731A4 (en) 2017-12-20
US20170002090A1 (en) 2017-01-05
RU2016133846A3 (zh) 2018-08-21
AU2015210578B2 (en) 2020-04-16
MX2016009332A (es) 2016-12-20
KR20160111964A (ko) 2016-09-27
RU2016133846A (ru) 2018-03-01
CN105636591A (zh) 2016-06-01
US10562977B2 (en) 2020-02-18
TWI662968B (zh) 2019-06-21
EP3100731A1 (en) 2016-12-07
HK1223562A1 (zh) 2017-08-04
AU2015210578A1 (en) 2016-08-25
WO2015113476A1 (zh) 2015-08-06
CA2937561A1 (en) 2015-08-06
JP2017510548A (ja) 2017-04-13
TW201609133A (zh) 2016-03-16
RU2685728C2 (ru) 2019-04-23

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN105636591B (zh) 配体-细胞毒性药物偶联物、其制备方法及其应用
JP7038717B2 (ja) アマニチン抗体コンジュゲート
ES2815098T3 (es) Conjugados de ligadores (ADCs) con inhibidores de KSP
JP2019073556A (ja) β−グルクロニド−リンカー薬物結合体
CN110312534B (zh) 具有酶促可裂解基团的抗体-药物-缀合物(adc)
JP7022707B2 (ja) Ｋｓｐ阻害剤および抗ｃｄ１２３抗体を含む特異的抗体－薬物－コンジュゲート（ａｄｃ）
AU2012244675A1 (en) Novel binder-drug conjugates (ADCs) and their use
TW201116300A (en) DR5 Ligand Drug Conjugates
KR20170063507A (ko) Her2 항체-약물 접합체
CN110575547B (zh) 靶向于tf的抗体-药物偶联物及其制法和用途
JP2021527640A (ja) 酵素的に切断可能なリンカーおよび改善された活性プロファイルを有する、ｃｘｃｒ５に対して向けられるバインダー／活性薬剤複合体
US20210128740A1 (en) HDAC INHIBITORS-BASED ANTIBODY DRUG CONJUGATES (ADCs) AND USE IN THERAPY
CN110575548A (zh) 靶向于cd73的抗体-药物偶联物及其制法和用途
JP2023549935A (ja) 抗ｃｄ２７６抗体、抗体薬物複合体、及びその使用
TW202327662A (zh) 抗her2抗體藥物偶聯物及其組合物和用途
JP2018515457A (ja) カリケアマイシン構築物および使用方法
WO2022262789A1 (zh) 一种抗肿瘤化合物及其应用
CN108472371B (zh) Egfr抗体-药物偶联物及其在医药上的应用
JP2022500454A (ja) 抗葉酸受容体抗体コンジュゲートによる併用療法
WO2023155808A1 (zh) 抗体-艾日布林或其衍生物的偶联物、其中间体、制备方法、药物组合物和用途
CN113121639B (zh) 澳瑞他汀类似物及其偶联物、其制备方法及其应用
US20240058465A1 (en) Anti-ror1 antibody conjugates, compositions comprising anti ror1 antibody conjugates, and methods of making and using anti-ror1 antibody conjugates
WO2023046202A1 (zh) 一种抗体及其药物偶联物和用途
TW202408589A (zh) 抗ror1抗體及抗體結合物、包含抗ror1抗體或抗體結合物之組合物，及製造及使用抗ror1抗體及抗體結合物之方法
JP2024509099A (ja) 抗ｈｅｒ２抗体‐薬物コンジュゲートおよびその使用

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
REG Reference to a national code

Ref country code: HK

Ref legal event code: DE

Ref document number: 1223562

Country of ref document: HK

GR01 Patent grant
GR01 Patent grant
CF01 Termination of patent right due to non-payment of annual fee
CF01 Termination of patent right due to non-payment of annual fee

Granted publication date: 20200407

Termination date: 20220122