KR20230022211A - 고안정성 친수성 연결 단위를 갖는 캄프토테신 약물 및 이의 접합체 - Google Patents

고안정성 친수성 연결 단위를 갖는 캄프토테신 약물 및 이의 접합체 Download PDF

Info

Publication number
KR20230022211A
KR20230022211A KR1020237000429A KR20237000429A KR20230022211A KR 20230022211 A KR20230022211 A KR 20230022211A KR 1020237000429 A KR1020237000429 A KR 1020237000429A KR 20237000429 A KR20237000429 A KR 20237000429A KR 20230022211 A KR20230022211 A KR 20230022211A
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
antibody
compound
formula
added
cancer
Prior art date
Application number
KR1020237000429A
Other languages
English (en)
Inventor
이 주
웨이리 완
시 주오
용 장
이잉 장
티안지 유
강루이 리
시우주안 양
Original Assignee
바이리-바이오 (청두) 파마슈티칼 컴퍼니, 리미티드
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 바이리-바이오 (청두) 파마슈티칼 컴퍼니, 리미티드 filed Critical 바이리-바이오 (청두) 파마슈티칼 컴퍼니, 리미티드
Publication of KR20230022211A publication Critical patent/KR20230022211A/ko

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
    • C07K7/06—Linear peptides containing only normal peptide links having 5 to 11 amino acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6889—Conjugates wherein the antibody being the modifying agent and wherein the linker, binder or spacer confers particular properties to the conjugates, e.g. peptidic enzyme-labile linkers or acid-labile linkers, providing for an acid-labile immuno conjugate wherein the drug may be released from its antibody conjugated part in an acidic, e.g. tumoural or environment
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/47—Quinolines; Isoquinolines
    • A61K31/4738—Quinolines; Isoquinolines ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems
    • A61K31/4745—Quinolines; Isoquinolines ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems condensed with ring systems having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. phenantrolines
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/54—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic compound
    • A61K47/545—Heterocyclic compounds
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
    • A61K47/64—Drug-peptide, drug-protein or drug-polyamino acid conjugates, i.e. the modifying agent being a peptide, protein or polyamino acid which is covalently bonded or complexed to a therapeutically active agent
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
    • A61K47/65—Peptidic linkers, binders or spacers, e.g. peptidic enzyme-labile linkers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6851—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/30—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/32—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against translation products of oncogenes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered

Abstract

고안정성의 친수성 연결 단위를 갖는 캄프토테신 약물 및 이의 접합체 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 이의 제조 방법, 및 암의 예방 및/또는 치료에서의 이의 응용. 상기 접합체는 종양 세포에서 고도로 발현되는 수용체에 특이적으로 결합할 수 있다. 상기 접합체는 우수한 수용성, 안정성 및 균질성을 갖고, 종양 및/또는 기타 질환의 예방 및/또는 치료에 사용될 수 있다.

Description

고안정성 친수성 연결 단위를 갖는 캄프토테신 약물 및 이의 접합체
관련 출원에 대한 상호 참조
본 출원은 2021년 5월 31일에 제출된 "고안정성 친수성 연결 단위를 갖는 캄프토테신 약물 및 이의 접합체(Camptothecin Drug Having High-Stability Hydrophilic Connecting Unit And Conjugate Thereof)"라는 명칭의 국제 출원 번호 PCT/CN2021/097302의 국내 단계 출원으로서, 2020년 6월 8일에 출원된 중국 특허 출원 번호 CN202010510363.5의 우선권 이익을 주장하며, 그 전체 내용은 참조로 본원에 포함된다.
본 발명은 고안정성 친수성 연결 단위(hydrophilic connecting unit)를 갖는 캄프토테신(camptothecin) 항체-약물 접합체에 관한 것이다.
새로운 유형의 표적 약물인 항체-약물 접합체(ADC)는 일반적으로 항체 또는 항체 유사 리간드, 소분자 약물 및 리간드와 약물을 연결하는 링커의 세 부분으로 구성된다. 항체-약물 접합체는 항원에 대한 항체의 특이적 인식을 이용하여 약물 분자를 표적 세포 주변으로 수송하고 약물 분자를 효과적으로 방출하여 치료 목적을 달성한다. 2011년 8월, 미국 식품의약국(FDA)은 호지킨 림프종 및 재발성 퇴행성 대세포 림프종(ALCL)의 치료를 위한 시애틀 제네틱스(Seattle Genetics)가 개발한 ADC 신약인 애드세트리스(AdcetrisTM)의 등재를 승인했으며 이의 임상 적용이 입증되었고, 이러한 유형의 약물의 안전성과 유효성이 검토되었다.
이리노테칸, 엑사테칸(exatecan), SN38 등을 포함한 캄프토테신은 항종양 특성을 가진 소분자 화합물로서 DNA 토포이소머라아제 I를 억제하여 항종양 효과를 나타낸다. 많은 캄프토테신 약물이 임상에서 널리 사용되고 있으며, 주요 적응증은 골암(bone cancer), 전립선암(prostate cancer), 유방암(breast cancer), 췌장암(pancreatic cancer) 등이다. 이리노테칸의 현재 임상 용도와 달리, 엑사테칸은 효소를 이용한 활성화가 필요하지 않다. 또한, 이리노테칸의 약력체인 SN-38과 임상에서 또한 사용되고 있는 토포테칸에 비해, 토포이소머라아제 I는 억제 활성이 더 강하고 시험관 내에서 다양한 암세포에 대해 더 강력히 손상시킨다. 특히, P-당단백질의 발현은 SN-38 등에 내성이 있는 암세포에도 영향을 미친다. 엑사테칸은 단일 화학요법 약물로서 성공적으로 시판되지 못했으며, 이는 높은 세포 활성으로 치료창이 좁은 것과 관련이 있는 것으로 추측된다.
ADC(항체-약물 접합체) 약물은 수용성을 증가시키고, 표적화를 개선하고, 특정 항체 및 항원에 결합하고, 표적 세포 주위에 약물을 운반하고, 표적 세포 근처에서 약물을 방출하여 효과적으로 종양을 죽이고, 독성 부작용을 줄이는 장점이 있다. 캄프토테신 약물은 ADC 약물에서 상당한 응용 가능성을 가지고 있다. 현재, 엑사테칸을 독소로 하는 항체 접합 약물인 트라스투주맙 데룩스테칸(상품명 엔허투)이 2019년 12월 20일 미국 FDA의 승인을 받았다. 최초로 시판된 캄프토테신 ADC 약물로서, ADC 분야에서 이러한 유형의 약물의 약물 제조 능력 및 응용 전망이 잘 입증되었다.
ADC 약물 구조는 항체, 링커 및 독소의 세 가지 주요 부분을 포함한다. 임의의 일부 결함은 ADC의 전반적인 효능에 영향을 미칠 수 있다. 이 분야에서, 엔허투의 구조적 설계 결함은 명백하다: 캄프토테신은 고지용성 및 난용성 약물의 한 종류이다. 엔허투에서 사용하는 링커-독소는 Mc 링커를 통해 항체와 연결되고 절단 가능한 테트라펩타이드와 연결되도록 설계되었다. 아미노메톡시 자가 제거 스페이서 단위와 일치하는 단편은 사슬간 시스테인 잔기를 사용하여 비부위 지정 결합 기술에 의해 약물-항체 비율(DAR) 8(특허 CN104755494 참조)을 달성한다. 높은 DAR 값에서의 링커의 설계는 캄프토테신 ADC 약물의 안정성을 감소시키고 단량체 비율을 감소시켜 생체 내에서 ADC의 효능과 안전성을 추가로 감소시킬 것이다.
본 출원이 해결하려는 기술적 문제는 안전성과 유효성이 더 높은 더 나은 항종양 캄프토테신 ADC 약물을 제공하여 임상 요구를 더 잘 충족시키는 것이다.
개요
ADC 약물에 대한 포괄적인 이해를 바탕으로, 본 발명자들은 예기치 않게 고안정성의 친수성 폴리펩타이드 연결 구조 단위를 갖는 캄프토테신 유도체의 일련의 항체-약물 접합체를 발견하였다. 본 발명자들은 실험을 통해 펩타이드 링커를 갖는 다양한 캄프토테신 유도체의 ADC 분자가 생체 내 및 시험관 내에서 높은 안정성을 나타내고, 높은 단량체 비율을 나타내며, 대조군 ADC에 비해 현저하게 높은 약력학적 활성을 가지는 것을 발견하였다. 동시에, 본 발명자들은 복잡한 링커-독소 분자를 효율적으로 생산할 수 있는 합성 경로의 설계 및 혁신을 통해 새로운 탈보호 시약 및 용매 전략을 창조하게 되었다.
한 측면에서, 본 발명은 화학식 I로 표시되는 리간드-약물 접합체(ligand-drug conjugate) 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 제공한다:
Figure pct00001
상기 식에서,
Ab는 항체, 항체 단편, 및 단백질로부터 선택된 리간드 단위이고;
M은 Ab와 연결되는 연결 단위이고;
Ac는 친수성 구조 단위이고;
D는 캄프토테신 약물이고;
1-위치 및 4-위치 키랄 탄소(chiral carbon) 원자는 각각 독립적으로 R 또는 S 배열의 키랄성(chirality)을 가지며;
n은 1 내지 20의 정수로부터 선택된다.
하나의 실시양태에서, 연결 단위 M은 하기 화학식 a로 표시되는 숙신이미드 구조, 또는 화학식 b1 또는 b2로 표시되는 개환된(open-ringed) 숙신이미드 구조를 가진다:
Figure pct00002
화학식 a, 화학식 b1 및 화학식 b2에서, 왼쪽 물결선은 Ab의 연결 부위에 대한 연결을 나타내고, 오른쪽 물결선은 화학식 I에서 1-위치의 3차 탄소 원자에 대한 연결을 나타낸다.
일 실시양태에서, Ac는 하기 화학식 c로 나타낸 구조를 가진다:
Figure pct00003
상기 식에서, X는 친수성 카복실기, 인산, 폴리인산, 아인산, 설폰산, 설핀산 및 폴리에틸렌 글리콜(PEG)로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택된 하나 이상의 기이고;
Y는 아미노기(NH)와 X를 연결하는 스캐폴드(scaffold)이고;
Ac는 아미노 작용기를 통해 화학식 I에서 2-위치의 메틸렌 탄소에 연결된다.
일 실시양태에서, Ac는 비제한적으로 글리신, (D/L)-알라닌, (D/L)-류신, (D/L)-이소류신, (D/L)-발린, (D/L)-페닐알라닌, (D/L)-프롤린, (D/L)-트립토판, (D/L)-세린, (D/L)-티로신, (D/L)-시스테인, (D/L)-시스틴, (D/L)-아르기닌, (D/L)-히스티딘, (D/L)-메티오닌, (D/L)-아스파라긴, (D/L)-글루타민, (D/L)-트레오닌, (D/L)-아스파르트산, (D/L)-글루탐산, 천연 또는 비천연 아미노산 유도체 또는 하기 구조로부터 선택된다:
Figure pct00004
상기 식에서, 왼쪽 물결선은 2번 탄소 원자에 대한 연결을 나타낸다.
일 실시양태에서, 캄프토테신 약물은 하기 화학식 d에 나타낸 구조를 갖는다;
Figure pct00005
상기 식에서, R1은 수소 원자, 중수소 원자, 할로겐, 알킬, 중수소화 알킬, 할로알킬, 사이클로알킬, 사이클로알킬알킬, 알콕시알킬, 헤테로사이클릴, 아릴, 치환된 아릴 및 헤테로아릴로 이루어진 군으로부터 선택되고;
대안적으로, R1과 이에 연결된 탄소 원자는 C3-6 사이클로알킬, 사이클로알킬알킬 또는 헤테로사이클릭 기를 형성하고;
R1에 연결된 키랄 탄소 원자는 R 절대 배열 및 S 절대 배열의 두 가지 키랄성을 가지며;
m은 0 또는 1로부터 선택되고;
R1에 연결된 탄소 원자에 연결된 하이드록실기는 화학식 I에서 3-위치의 산소 원자를 연결하는 데 참여한다.
일 실시양태에서, 캄프토테신 약물은 비제한적으로 하기 화합물로부터 선택된다:
Figure pct00006
일 실시양태에서, 본 출원은 청구항 1에 기재된 화학식 I의 리간드-약물 접합체를 형성하기 위해 리간드 단위 Ab와 커플링(coupling)하기 위한, 하기 화학식 II에 나타낸 구조를 갖는 링커-약물 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 제공한다:
Figure pct00007
상기 식에서, R1은 수소 원자, 중수소 원자, 할로겐, 알킬, 중수소화 알킬, 할로알킬, 사이클로알킬, 사이클로알킬알킬, 알콕시알킬, 헤테로사이클릴, 아릴, 치환된 아릴 및 헤테로아릴로 이루어진 군으로부터 선택되고;
대안적으로, R1과 이에 연결된 탄소 원자는 C3-6 사이클로알킬, 사이클로알킬알킬 또는 헤테로사이클릭 기를 형성하고;
1-위치의 키랄 탄소 원자는 R 절대 배열과 S 절대 배열의 두 가지 키랄성을 가지며;
Ac는 친수성 구조 단위이고;
m은 0 또는 1로부터 선택된다.
일 실시양태에서, Ac는 비제한적으로 글리신, 인산, (D/L)-글루탐산 또는 폴리에틸렌 글리콜(PEG)로부터 선택된다.
일 실시양태에서, 링커-약물 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염은 하기 구조를 포함하나 이에 제한되지 않는 것으로부터 선택된다:
Figure pct00008
Figure pct00009
Figure pct00010
Figure pct00011
Figure pct00012
Figure pct00013
상기 식에서, 1-위치의 키랄 탄소는 R 절대 키랄성 또는 S 절대 키랄성의 두 배열을 갖는다.
다른 실시양태에서, 하기 화학식 III, 화학식 IV-1 또는 화학식 IV-2로 표시되는 구조를 갖는 리간드-약물 접합체 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염이 개시된다.
Figure pct00014
상기 식에서, Ab는 리간드 단위이고;
Ac는 친수성 구조 단위이고;
1-위치의 키랄 탄소는 R의 절대 키랄성 또는 S의 절대 키랄성의 두 배열을 가지며;
R1, m 및 n은 화학식 II에 기재된 바와 같다.
일 실시양태에서, 본 발명자들은 리간드-약물 접합체 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 개시하고, 여기서, 리간드 단위 Ab는 항체, 항체 단편 또는 단백질로부터 선택되고, 항체는 뮤린 항체(murine antibody), 토끼 항체, 파지 디스플레이 항체, 효모 디스플레이 항체, 키메라 항체, 인간화 항체, 완전 인간 항체, 항체 단편, 이중특이적 항체(bispecific antibody) 및 다중특이적 항체로부터 선택된다.
일 실시양태에서, 항체는 단일클론 항체(monoclonal antibody)이고, 항-EGFRvIII 항체, 항-PD-1 항체, 항-PD-L1 항체, 항-DLL-3 항체, 항-PSMA 항체, 항-CD70 항체, 항-MUC16 항체, 항-ENPP3 항체, 항-TDGF1 항체, 항-ETBR 항체, 항-MSLN 항체, 항-TIM-1 항체, 항-LRRC15 항체, 항-LIV-1 항체, 항-CanAg/AFP 항체, 항-클래딘(anti-cladin) 18.2 항체, 항-메소텔린 항체, 항-HER2 (ErbB2) 항체, 항-EGFR 항체, 항-c-MET 항체, 항-SLITRK6 항체, 항-KIT/CD117 항체, 항-STEAP1 항체, 항-SLAMF7/CS1 항체, 항-NaPi2B/SLC34A2 항체, 항-GPNMB 항체, 항-HER3 (ErbB3) 항체, 항-MUC1/CD227 항체, 항-AXL 항체, 항-CD166 항체, 항-B7-H3 (CD276) 항체, 항-PTK7/CCK4 항체, 항-PRLR 항체, 항-EFNA4 항체, 항-5T4 항체, 항-NOTCH3 항체, 항-넥틴 4 항체, 항-TROP-2 항체, 항-CD142 항체, 항-CA6 항체, 항-GPR20 항체, 항-CD174 항체, 항-CD71 항체, 항-EphA2 항체, 항-LYPD3 항체, 항-FGFR2 항체, 항-FGFR3 항체, 항-FRα 항체, 항-CEACAMs 항체, 항-GCC 항체, 항-인테그린 Av 항체, 항-CAIX 항체, 항-P-카드헤린 항체, 항-GD3 항체, 항-카드헤린 6 항체, 항-LAMP1 항체, 항-FLT3 항체, 항-BCMA 항체, 항-CD79b 항체, 항-CD19 항체, 항-CD33 항체, 항-CD56 항체, 항-CD74 항체, 항-CD22 항체, 항-CD30 항체, 항-CD37 항체, 항-CD47 항체, 항-CD138 항체, 항-CD352 항체, 항-CD25 항체 및 항-CD123 항체로 이루어진 군으로부터 비제한적으로 선택된다.
일 실시양태에서, 항체 또는 항원-결합 단편은 하기를 포함하는 트라스투주맙을 포함한다:
MDMRVPAQLLGLLLLWLRGARCDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDVNTAVAWYQQKPGKAPKLLIYSASFLYSGVPSRFSGSRSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQHYTTPPTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC*(서열 번호 1)의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 서열; 및
MDMRVPAQLLGLLLLWLRGARCEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFNIKDTYIHWVRQAPGKGLEWVARIYPTNGYTRYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCSRWGGDGFYAMDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG(서열 번호 2)의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 서열.
일 실시양태에서, 리간드-약물 접합체 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염은 제한없이 하기 숙신이미드 구조 또는 숙신이미드 개환 구조로부터 선택된다:
Figure pct00015
Figure pct00016
Figure pct00017
Figure pct00018
Figure pct00019
Figure pct00020
Figure pct00021
상기 식에서, n은 1 내지 10의 정수로부터 선택된다.
한 측면에서, 본 출원은 개시된 링커-약물 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 제조하기 위한 방법을 제공한다. 일 실시양태에서, 방법은 다음 단계를 포함한다:
Figure pct00022
화학식 L의 화합물을 알칼리성 조건 하에서 축합제의 존재 하에 화학식 d0의 엑사테칸 또는 이의 염과 반응시켜 화학식 IV의 화합물을 제공하고, 이어서 화학식 II의 화합물로 전환시키는 단계;
상기 식에서,
1-위치 탄소 원자 및 R1에 연결된 탄소 원자는 각각 독립적으로 R 또는 S 배열의 키랄성을 갖고;
R2는 Ac로 전환될 수 있는 구조이고;
Ac, R1 및 m은 화학식 II에서 정의된 바와 같다.
한 측면에서, 본 출원은 치료적 유효량의 리간드-약물 접합체 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염 또는 용매화물, 및 약학적으로 허용되는 담체, 희석제 또는 부형제를 함유하는 약학적 조성물을 제공한다.
약학적으로 허용 가능한 염은, 예를 들어, 본 명세서에 개시된 구조식에서 카복실 작용기와 형성된 나트륨염, 칼륨염, 칼슘염 및 마그네슘염, 및 본 명세서에 개시된 구조식에서 질소 함유 작용기와 형성된 아세테이트, 트리플루오로아세테이트, 시트레이트, 옥살레이트, 타르트레이트, 말레이트, 니트레이트, 클로라이드, 브로마이드, 요오다이드, 설페이트, 바이설페이트, 포스페이트, 락테이트, 올레에이트, 아스코르베이트, 살리실레이트, 포르메이트, 글루타메이트, 메탄설포네이트, 에탄설포네이트, 벤젠설포네이트 또는 p-톨루엔설포네이트를 포함한다.
일 실시양태에서, 본 출원은 종양, 자가면역 질환(autoimmune disease) 또는 감염성 질환(infectious disease)의 치료를 위한 약제의 제조에 사용하기 위한 리간드-약물 접합체 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 제공하며, 여기서 상기 리간드-약물 접합체의 항체는 종양, 자가면역 질환 또는 감염성 질환의 표적 세포에 특이적으로 결합한다.
일 실시양태에서, 본 출원은 암(cancer), 유방암(breast cancer), 난소암(ovarian cancer), 자궁경부암(cervical cancer), 자궁암(uterine cancer), 전립선암(prostate cancer), 신장암(kidney cancer), 요도암(urethral cancer), 방광암(bladder cancer), 간암(liver cancer), 위암(gastric cancer), 자궁내막암(endometrial cancer), 침샘암(Salivary gland cancer), 식도암(esophageal cancer), 폐암(lung cancer), 결장직장암(colon cancer), 직장암(rectal cancer), 결장직장암(colorectal cancer), 골암(bone cancer), 피부암(skin cancer), 갑상선암(thyroid cancer), 췌장암(pancreatic cancer), 흑색종(melanoma), 신경교종(glioma), 신경모세포종(neuroblastoma), 다형성 신경교종(glioma multiforme), 육종(Sarcoma), 림프종(lymphoma) 및 백혈병(leukemia) 및 기타 고형 종양(solid tumor)을 포함하는 암의 진단 및 치료, 또는 혈종 약물에 사용하기 위한 리간드-약물 접합체 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 제공한다.
도 1A는 트라스투주맙 단량체 비율의 SEC-HPLC 검출 결과를 나타낸다.
도 1B는 ADC-2 단량체 비율의 SEC-HPLC 검출 결과를 나타낸다.
도 1C는 ADC-6 단량체 비율의 SEC-HPLC 검출 결과를 나타낸다.
도 1D는 ADC-10 단량체 비율의 SEC-HPLC 검출 결과를 나타낸다.
도 1E는 ADC-12 단량체 비율의 SEC-HPLC 검출 결과를 나타낸다.
도 1F는 대조군에서 ADC-61 단량체 비율의 SEC-HPLC 검출 결과를 나타낸다.
도 2A는 ADC-02의 DAR(약물-항체 커플링 비율: drug-antibody coupling ratio) 값의 RP-HPLC 검출 결과를 나타낸다.
도 2B는 ADC-06의 DAR(약물-항체 커플링 비율) 값의 RP-HPLC 검출 결과를 나타낸다.
도 2C는 ADC-10의 DAR(약물-항체 커플링 비율) 값의 RP-HPLC 검출 결과를 나타낸다.
도 2D는 ADC-12의 DAR(약물-항체 커플링 비율) 값의 RP-HPLC 검출 결과를 나타낸다.
도 2E는 대조군 ADC-61의 DAR(약물-항체 결합 비율) 값의 RP-HPLC 검출 결과를 나타낸다.
도 3은 N87(인간 위암 세포)의 증식에 대한 ADC, 단일 약물 및 네이키드 항체의 시험관 내 효능을 나타낸다.
도 3A는 N87(인간 위암 세포) 증식 억제에 대한 ADC 및 네이키드 항체의 시험관 내 효능을 나타낸다.
도 3B는 N87(인간 위암 세포)의 증식 억제에 대한 단일 약물의 시험관 내 효능을 나타낸다.
도 4는 SK-BR-3(인간 유방 선암종 세포) 증식 억제에 대한 ADC, 단일 약물 및 네이키드 항체의 시험관 내 효능을 나타낸다.
도 4A는 SK-BR-3(인간 유방 선암종 세포) 증식 억제에 대한 ADC 및 네이키드 항체의 시험관 내 효능을 나타낸다.
도 4B는 SK-BR-3(인간 유방 선암종 세포) 증식 억제에 대한 단일 약제의 시험관 내 효능을 나타낸다.
상세한 설명
약어 및 정의
달리 정의되지 않는 한, 본원에 사용된 모든 기술 및 과학 용어는 본 발명이 속하는 기술 분야의 통상의 기술자가 일반적으로 이해하는 것과 동일한 의미를 갖는다. 본원에 기술된 것과 유사하거나 등가인 임의의 방법 및 재료가 본 발명의 실시 또는 시험에 사용될 수 있지만, 바람직한 방법 및 재료가 본원에 기술되어 있다. 본 발명을 기술하고 청구함에 있어서, 다음 용어가 하기 정의에 따라 사용될 것이다.
본 발명에서 상표명이 사용되는 경우, 출원인은 상표명 제품의 제형, 상표명 제품의 비특허 및 활성 약물 부분을 포함하고자 한다.
달리 표시되지 않는 한, 본원에 사용된 다음 용어 및 구문은 다음 의미를 갖는 것으로 의도된다. 본원에서 상품명을 사용하는 경우, 문맥상 달리 나타내지 않는 한 상품명은 제품 제형, 제네릭 의약품 및 상품명 제품의 활성 약학 성분을 포함한다.
달리 명시되지 않는 한, 명세서 및 청구범위에서 사용된 용어는 다음과 같은 의미를 갖는다.
용어 "리간드"는 표적 세포와 관련된 항원 또는 수용체를 인식하고 이에 결합할 수 있는 거대분자 화합물이다. 리간드의 역할은 단백질 호르몬, 렉틴, 성장 인자, 항체 또는 세포에 결합할 수 있는 다른 분자를 포함하지만 이에 제한되지 않는, 리간드가 결합하는 표적 세포 집단에 약물을 제공하는 것이다. 일 실시양태에서, 리간드는 Ab로 표시되고, 리간드 상의 헤테로원자를 통해 링커 단위와 연결을 형성할 수 있는 것으로, 바람직하게는 키메라, 인간화, 완전 인간 또는 뮤린 항체로 이루어진 군으로부터 선택되는 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 바람직하게는 단일클론 항체이다.
리간드 단위는 표적 부분에 특이적으로 결합하는 표적제이다. 리간드는 세포 구성요소 또는 관심 있는 다른 표적 분자에 특이적으로 결합할 수 있다. 표적 모이어티 또는 표적은 전형적으로 세포 표면 상에 있다. 일부 측면에서, 리간드 단위는 리간드 단위와 상호작용하는 특정 표적 세포 집단에 약물 단위를 전달하는 기능을한다. 리간드는 당과 같은 비단백질뿐만 아니라 단백질, 폴리펩타이드 및 펩타이드를 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 적합한 리간드 단위는 예를 들어 전장(온전한) 항체 및 이의 항원 결합 단편과 같은 항체를 포함한다. 리간드 단위가 비-항체 표적화제인 실시양태에서, 이는 펩타이드 또는 폴리펩타이드, 또는 비단백질성 분자일 수 있다. 그러한 표적화제의 예는 인터페론, 림포카인, 호르몬, 성장 인자 및 콜로니 자극 인자, 비타민, 영양 수송 분자, 또는 임의의 다른 세포 결합 분자 또는 물질을 포함한다. 일부 실시양태에서, 링커는 리간드의 황 원자에 공유 결합된다. 일부 측면에서, 황 원자는 항체의 사슬간 이황화 결합을 형성하는 시스테인 잔기의 황 원자이다. 또 다른 측면에서, 황 원자는 항체의 사슬간 이황화 결합을 형성하는, 리간드 단위에 도입된 시스테인 잔기의 황 원자이다. 또 다른 측면에서, 황 원자는 (예를 들어, 부위 지정 돌연변이 유발 또는 화학 반응에 의해) 리간드 단위로 도입되는 시스테인 잔기의 황 원자이다. 다른 측면에서, 링커-결합된 황 원자는 항체의 사슬간 이황화 결합을 형성하는 시스테인 잔기 또는 (예를 들어, 부위 지정 돌연변이 유발 또는 화학 반응에 의해) 리간드 단위에 통합된 추가 시스테인 잔기로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, 넘버링 시스템은 Kabat{[Kabat E.A et al, (1991)], Sequences of Immunological Interest (Sequences of proteins of Immunological Interest), fifth edition, NIH publication 91-3242}에서와 같은 EU 인덱스에 따른다.
본원에 사용된 "항체" 또는 "항체 단위"는 그 범위 내에 항체 구조의 임의의 부분을 포함한다. 이 단위는 표적 세포 집단에 존재하는 수용체, 항원 또는 다른 수용체 단위와 결합하거나, 반응적으로 회합하거나, 복합체를 형성할 수 있다. 항체는 치료되거나 생물학적으로 조작될 세포 집단의 일부와 결합하거나, 복합체를 형성하거나, 달리 반응할 수 있는 임의의 단백질 또는 단백질성 분자일 수 있다. 본원에서 항체-약물 접합체를 구성하는 항체는 원래의 야생 상태에서 그의 항원 결합 능력을 유지한다. 따라서, 본원의 항체는 항원에 특이적으로 결합할 수 있다. 고려되는 항원에는 예를 들어 종양 관련 항원(TAA), 세포 표면 수용체 단백질 및 기타 세포 표면 분자, 세포 생존 조절인자, 세포 증식 조절인자, 조직 성장 및 분화와 관련된 분자(예를 들어, 기능적이라고 알려지거나 예측되는 것), 림포카인, 사이토카인, 세포 순환의 조절에 관여하는 분자, 혈관신생에 관여하는 분자, 및 혈관신생과 연관된 분자(예를 들어, 기능적일 것으로 알려지거나 예측되는 것)가 포함된다. 종양 관련 인자는 클러스터 분화 인자(예를 들어, CD 단백질)일 수 있다.
항체 약물 접합체에 유용한 항체는 세포 표면 수용체 및 종양 관련 항원에 대한 항체를 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 이러한 종양 관련 항원은 당업계에 잘 알려져 있고 당업계에 잘 알려진 항체 제조 방법 및 정보에 의해 제조될 수 있다. 암 진단 및 치료를 위한 효과적인 세포 수준 표적을 개발하기 위해, 연구자들은 막관통 또는 기타 종양 관련 폴리펩타이드를 찾았다. 이들 표적은 하나 이상의 암 세포 표면에서 특이적으로 발현될 수 있는 반면, 하나 이상의 비-암 세포 표면에서는 거의 또는 전혀 발현되지 않는다. 전형적으로, 이러한 종양 관련 폴리펩타이드는 비-암 세포의 표면에 비해 암 세포의 표면에서 더 많이 과발현된다. 이러한 종양 관련 인자의 확인은 항체 기반 암 치료의 특이적 표적 특성을 크게 향상시킬 수 있다. 편의상, 당업계에 잘 알려진 항원 관련 정보는 명칭, 별칭 및 GenBank 수탁 번호를 포함하는 것으로 표시된다. 종양 관련 항원에 상응하는 핵산 및 단백질 서열은 Genbank와 같은 공개 데이터베이스에서 찾을 수 있다. 항체는 참고 문헌에서 확인된 서열과 적어도 70%, 80%, 85%, 90% 또는 95% 상동성을 갖거나 인용된 참고 문헌의 종양 관련 항원 서열과 완전히 동일한 생물학적 성질 및 특성을 갖는 모든 아미노산 서열 변이체 및 상동체를 포함하는 상응하는 종양 관련 항원을 표적으로 한다.
"억제하다" 또는 "~의 억제"라는 용어는 검출 가능한 양의 감소 또는 완전한 예방을 지칭한다.
"암"이라는 용어는 조절되지 않는 세포 성장을 특징으로 하는 생리학적 상태 또는 질환을 지칭한다. "종양"은 암세포를 포함한다.
"자가면역 질환"이라는 용어는 개인 자신의 조직 또는 단백질을 표적으로 하여 발생하는 질환 또는 장애이다.
"약물"이라는 용어는 d로 표시된 세포 독성 약물, 즉 종양 세포의 정상적인 성장을 손상시키는 강한 능력을 갖는 화학 분자를 지칭한다. 세포 독성 약물은 원칙적으로 충분히 높은 농도에서 종양 세포를 죽일 수 있지만, 특이성이 부족하여 종양 세포를 죽이는 동시에 정상 세포의 사멸을 일으켜 심각한 부작용을 초래할 수 있다. 이 용어는 독소, 예컨대 박테리아, 진균, 식물 또는 동물 기원의 소분자 독소 또는 효소 활성 독소, 방사성 동위원소(예를 들어, At211, I131, I125, Y90, Re186, Re188, Sm153, Bi212, P32 및 Lu176 방사성 동위원소), 독성 약물, 화학요법 약물, 항생제 및 핵분해 효소, 바람직하게는 독성 약물을 포함한다.
"캄프토테신 약물"이라는 용어는 10-하이드록시캄프토테신, SN38(7-에틸-10-하이드록시캄프토테신), 토포테칸, 엑사테칸, 이리노테칸 또는 9-니트로-10-하이드록시캄프토테신 및 이의 유도체 또는 약학적으로 허용 가능한 염으로부터 선택되나 이에 제한되지 않는 세포 독성 캄프토테신 및 이의 유도체를 지칭한다.
"링커" 또는 "링커 단편" 또는 "링커 단위"라는 용어는 한쪽 끝이 리간드에 연결되고 다른 쪽 끝이 약물에 연결된 화학 모이어티 또는 결합을 지칭하며, 다른 링커에 부착 후 약물에 연결될 수 있다.
증량제, 스페이서 및 아미노산 단위를 포함하는 링커는 US2005-0238649A 1에 기술된 것과 같은 당업계에 공지된 방법에 의해 합성될 수 있다. 링커는 세포에서 약물의 방출을 촉진하는 "절단가능한 링커"일 수 있다. 예를 들어, 산-불안정 링커(예를 들어, 하이드라존), 프로테아제-민감성(예를 들어, 펩티다제-민감) 링커, 광불안정 링커, 디메틸 링커 또는 디설파이드-함유 링커가 사용될 수 있다(Chari et al Cancer Research 52: 127-; 미국 특허 번호 5,208,020).
세포에서 약물 방출의 메카니즘에 따라, 본원에서 사용되는 "링커" 또는 "항체 약물 접합체의 링커"는 비절단성 링커 및 절단 가능한 링커의 두 범주로 나눌 수 있다. 비절단성 링커를 포함하는 리간드-약물 접합체의 경우, 약물 방출 메커니즘은 다음과 같다: 접합체가 항원과 결합하고 세포에 의해 엔도사이토시스된(endocytosed) 후, 항체가 리소좀에서 효소 분해되어 소분자 약물, 링커 및 항체 아미노산 잔기로 이루어진 활성 분자를 방출한다. 그 결과 약물 분자의 구조적 변화는 그의 세포 독성을 감소시키지 않지만, 활성 분자는 전하(아미노산 잔기)를 띠기 때문에 이웃 세포로 침투할 수 없다. 따라서, 이러한 활성 약물은 표적 항원을 발현하지 않는 인접 종양 세포(항원 음성 세포)를 사멸시킬 수 없다(Ducry et al, 2010, Bioconjugate chem.21: 5-13).
"리간드-약물 접합체"라는 용어는 안정적인 연결 단위를 통해 생물학적 활성 약물에 연결된 항체를 지칭한다. 일 실시양태에서, "리간드-약물 접합체"는 안정한 연결 단위를 통해 생물학적 활성 독성 약물에 연결된 단일클론 항체 또는 항체 단편을 지칭하는 항체 약물 접합체(ADC)이다.
본 발명에서 사용된 아미노산에 대한 3개의 문자 코드 및 1개의 문자 코드는 [j.boil.chem.1968,243,3558]에 기술된 바와 같다.
"알킬"이라는 용어는 1 내지 20개의 탄소 원자를 포함하는 직쇄 또는 분지쇄 기, 바람직하게는 1 내지 12개의 탄소 원자, 보다 바람직하게는 1 내지 10개의 탄소 원자를 포함하는 알킬기인 포화 지방족 탄화수소기를 지칭한다. 1 내지 6개의 탄소 원자를 포함하는 알킬기가 가장 바람직하다. 비제한적인 예는 메틸, 에틸, n-프로필, 이소프로필, n-부틸, 이소부틸, tert-부틸, sec-부틸, n-펜틸, 1,1-디메틸프로필, 1,2-디메틸프로필, 2,2-디메틸프로필, 1-에틸프로필, 2-메틸부틸, 3-메틸부틸, n-헥실, 1-에틸-2-메틸프로필, 1,1,2-트리메틸프로필, 1,1-디메틸부틸, 1,2-디메틸부틸, 2,2-디메틸부틸, 1,3-디메틸부틸, 2-에틸부틸, 2-메틸펜틸, 3-메틸펜틸, 4-메틸펜틸, 2,3-디메틸부틸, n-헵틸, 2 -메틸헥실, 3-메틸헥실, 4-메틸헥실, 5-메틸헥실, 2,3-디메틸펜틸, 2,4-디메틸펜틸, 2,2-디메틸 펜틸, 3,3-디메틸펜틸, 2-에틸펜틸, 3-에틸펜틸, n-옥틸, 2,3-디메틸헥실, 2,4-디메틸헥실, 2,5-디메틸헥실, 2,2-디메틸헥실, 3,3-디메틸헥실, 4,4-디메틸헥실, 2-에틸헥실, 3-에틸헥실, 4-에틸 2-메틸헥실, 2-메틸-2-에틸펜틸, 2-메틸-3-에틸펜틸, n-노닐, 2-메틸-2-에틸헥실, 2-메틸-3-에틸 기반 헥실, 2,2-디에틸펜틸, n-데실, 3,3-디에틸헥실, 2,2-디에틸헥실 및 각종 분지형 이성체를 포함한다. 1 내지 6개의 탄소 원자를 함유하는 저급 알킬기가 보다 바람직하다. 비제한적인 예는 메틸, 에틸, n-프로필, 이소프로필, n-부틸, 이소부틸, tert-부틸, 및 sec-부틸기, n-펜틸, 1,1-디메틸프로필, 1,2-디메틸프로필, 2,2-디메틸프로필, 1-에틸프로필, 2-메틸부틸, 3-메틸부틸, n-헥실, 1-에틸-2-메틸프로필, 1,1,2-트리메틸프로필, 1,1-디메틸부틸, 1,2-디메틸 부틸, 2,2-디메틸부틸, 1,3-디메틸부틸, 2-에틸부틸, 2-메틸펜틸, 3-메틸펜틸, 4-메틸펜틸기, 2,3-디메틸부틸 등을 포함한다. 알킬기는 치환되거나 비치환될 수 있다. 치환된 경우, 치환체는 임의의 이용 가능한 부착 지점에서 치환될 수 있다. 치환체는 바람직하게는 알칸기, 알케닐, 알키닐, 알콕시, 알킬티오, 알킬아미노, 할로겐, 머캅토, 하이드록실, 니트로, 시아노, 사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, 아릴, 헤테로아릴, 사이클로알칸옥시, 헤테로사이클로알콕시, 사이클로알킬티오, 헤테로사이클로알킬티오, 옥소로부터 독립적으로 선택되는 기 중 하나 이상이다.
"치환된 알킬"이라는 용어는 알킬기 내의 수소가 치환기로 치환된 것을 의미하며, 본원에서 달리 나타내지 않는 한, 알킬기의 치환기는 하기로 이루어진 군으로부터 선택된 다양한 기일 수 있다: -할로겐, OR', -NR'R', -SR', -SiR'R'", -OC(O)R', -C(O)R', -CO2R', -CONR'R", -OC(O)NR'R", -NR"C(O)R', -NR'-C(O)NR"R'", -NR"C(O)2R', -NH-C(NH2)=NH, -NR'C(NH2)=NH, -NH-C(NH2)=NR', -S(O)R', -S(O)2R', -S(O)2NR'R", -NR'S(O)2R", -CN 및 -NO2. 치환체의 수는 0 내지 (2m'+1)이며, 여기서, m'는 기의 총 탄소 원자 수이다. R', R" 및 R'"는 각각 독립적으로 수소, 비치환된 C1-8 알킬, 비치환된 아릴, 헤테로아릴 및 임의로 치환된 헤테로아릴, 1 내지 3개의 할로겐으로 치환된 아릴, 비치환된 C1-8 알킬 라디칼, C1-8 알콕시 또는 C1-8 티오알콕시, 또는 비치환된 아릴-C1-4 알킬 라디칼을 나타낸다. R' 및 R"가 동일한 질소 원자에 부착된 경우, 이들은 질소 원자와 함께 3-, 4-, 5-, 6- 또는 7-원 환을 형성할 수 있다. 예를 들어, -NR'R"는 1-피롤리디닐 및 4-모르폴리닐을 포함한다.
"치환된 알킬"이라는 용어는 알킬기의 수소가 치환기로 대체된 것을 의미한다. 문맥에서 달리 명시되지 않는 한, 알킬기의 치환체는 하기 기로부터 선택된 다양한 기일 수 있다: -할로겐, -OR', -NR'R", -SR', -SiR'R"R"', -OC(O)R', -C(O)R', -CO2R', -CONR'R", -OC(O)NR'R", -NR"C(O)R', -NR'-C(O)NR"R"', -NR"C(O)2R', -NH-C(NH2)=NH, -NR'C(NH2)=NH, -NH-C(NH2)=NR', -S(O)R', -S(O)2R', -S(O)2NR'R", -NR'S(O)2R", -CN 및 -NO2. 치환체의 수는 0 내지 (2m'+1)이며, 여기서, m'는 기의 총 탄소 원자 수이다. R', R" 및 R'"는 각각 독립적으로 수소, 비치환된 C1-8 알킬, 비치환된 아릴, 1 내지 3개의 할로겐으로 치환된 아릴, 비치환된 C1-8 알킬 라디칼, C1-8 알콕시 또는 C1-8 티오알콕시, 또는 비치환된 아릴-C1-4 알킬기를 지칭한다. R' 및 R"가 동일한 질소 원자에 부착된 경우, 이들은 질소 원자와 함께 3-, 4-, 5-, 6- 또는 7-원 환을 형성할 수 있다. 예를 들어, -NR'R"는 1-피롤리디닐 및 4-모르폴리닐을 포함한다.
"헤테로알킬"이라는 용어는 N, O 또는 S로부터 선택되는 하나 이상의 헤테로원자를 함유하는 알킬기를 지칭하며, 여기서, 알킬은 상기 정의된 바와 같다.
"알킬렌"이라는 용어는 1 내지 20개의 탄소 원자, 바람직하게는 1 내지 12개의 탄소 원자, 보다 바람직하게는 1 내지 6개의 탄소 원자를 가지는 직쇄 또는 분지쇄인 모 알칸의 동일한 탄소 원자 또는 2개의 상이한 탄소 원자로부터 2개의 수소 원자가 제거되어 유도된 2개의 잔기를 갖는 포화된 선형 또는 분지형 지방족 탄화수소기를 지칭한다. 알킬렌기의 비제한적인 예는 메틸렌 (-CH2　-, 1,1-에틸렌 (-CH(CH3)-), 1,2-에틸렌 (-CH2CH2)-, 1,1-프로필렌 (-CH(CH2CH3)-), 1,2-프로필렌 (-CH2CH(CH3)-), 1,3-프로필렌 (-CH2CH2CH2-), 1,4-부틸렌 (-CH2CH2CH2CH2-) 및 1,5-부틸렌 (-CH2CH2CH2CH2CH2-) 등을 포함한다. 알킬렌기는 치환되거나 비치환될 수 있다. 치환된 경우, 치환체는 임의의 이용 가능한 부착 지점에서 치환될 수 있다. 치환체는 바람직하게는 독립적으로 알킬, 알케닐, 알킨기, 알콕시, 알킬티오, 알킬아미노, 할로겐, 머캅토, 하이드록실, 니트로, 시아노, 사이클로알킬, 헤테로사이클릭, 아릴, 헤테로아릴, 사이클로알콕시, 기의 하나 이상의 치환체로 치환된 헤테로사이클로알콕시, 사이클로알킬티오기, 헤테로사이클로알킬티오기 및 옥소기로부터 임의로 선택된다.
용어 "알콕시"라는 용어는 -O-(알킬) 및 -O-(사이클로알킬)을 지칭하며, 여기서 알킬 또는 사이클로알킬은 상기 정의된 바와 같다. 알콕시기의 비제한적인 예는 메톡시, 에톡시, 프로폭시, 부톡시, 사이클로프로폭시, 사이클로부톡시, 사이클로펜틸옥시, 사이클로헥실옥시를 포함한다. 알콕시는 임의로 치환되거나 비치환될 수 있으며, 치환된 경우, 치환체는 바람직하게는 알킬, 알케닐, 알키닐, 알콕시, 알킬티오, 알킬아미노, 할로겐, 머캅토, 하이드록시, 니트로, 시아노, 사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, 아릴, 헤테로아릴, 사이클로알콕시, 헤테로사이클로알콕시, 사이클로알킬티오, 헤테로사이클로알킬티오로부터 독립적으로 선택된 하나 이상의 기이다.
"사이클로알킬"이라는 용어는 포화 또는 부분 불포화 모노사이클릭 또는 폴리사이클릭 환형 탄화수소 치환체를 지칭하며, 여기서 사이클로알킬 환은 3 내지 20개의 탄소 원자, 바람직하게는 3 내지 12개의 탄소 원자, 보다 바람직하게는 3 내지 10개의 탄소 원자, 가장 바람직하게는 3개에서 8개의 탄소 원자를 가진다. 모노사이클릭 사이클로알킬기의 비제한적인 예는 사이클로프로필, 사이클로부틸, 사이클로펜틸, 사이클로펜테닐, 사이클로헥실, 사이클로헥세닐, 사이클로헥사디에닐, 사이클로헵틸, 사이클로헵타트리에닐, 사이클로옥틸 등을 포함하고; 폴리사이클릭 사이클로알킬기는 스피로, 융합 및 가교 사이클로알킬기를 포함한다.
"헤테로사이클릴"이라는 용어는 3 내지 20개의 환 원자를 함유하는 포화 또는 부분 불포화 모노- 또는 폴리사이클릭 환형 탄화수소 치환체를 지칭하며, 여기서 하나 이상의 환 원자는 질소, 산소 또는 S(O)m(여기서 m은 0 내지 2의 정수임)으로부터 선택되나, -O-O-, -O-S- 또는 -S-S-의 환 모이어티를 포함하지 않으며, 나머지 환 원자는 탄소이다. 바람직하게는 사이클로알킬 환은 3 내지 12개의 환 원자(이 중 1 내지 4개는 헤테로원자임)를 함유하며; 보다 바람직하게는 사이클로알킬 환은 3 내지 10개의 환 원자를 함유한다. 모노사이클릭 헤테로사이클릴기의 비제한적인 예는 피롤리디닐, 피페리디닐, 피페라지닐, 모르폴리닐, 티오모르폴리닐, 호모피페라지닐 등을 포함한다. 폴리사이클릭 헤테로사이클릭 기는 스피로, 융합 및 가교 헤테로사이클릭 기를 포함한다.
"사이클로알킬알킬"이라는 용어는 하나 이상의 사이클로알킬기, 바람직하게는 하나의 사이클로알킬기로 치환된 알킬기를 의미하며, 여기서 알킬은 상기 정의된 바와 같고 사이클로알킬은 상기 정의된 바와 같다.
"할로알킬"이라는 용어는 하나 이상의 할로겐으로 치환된 알킬기를 지칭하며, 여기서 알킬은 상기 정의된 바와 같다.
"중수소화 알킬"이라는 용어는 하나 이상의 중수소 원자로 치환된 알킬기를 지칭하며, 여기서 알킬은 상기 정의된 바와 같다.
"하이드록시"라는 용어는 -OH 기를 지칭한다.
"할로겐"이라는 용어는 불소, 염소, 브롬 또는 요오드를 지칭한다.
"아미노"라는 용어는 -NH2 기를 지칭한다. "니트로"라는 용어는 -NO2를 의미한다.
"아미도"라는 용어는 -C(O)N (알킬) 또는 (사이클로알킬)을 지칭하며, 여기서 알킬, 사이클로알킬은 상기 정의된 바와 같다.
"카복실레이트"라는 용어는 -C(O)O (알킬) 또는 (사이클로알킬)을 지칭하며, 여기서 알킬, 사이클로알킬은 상기 정의된 바와 같다.
"아릴"이라는 용어는 공액 파이-전자계를 갖는 6 내지 14원, 바람직하게는 6 내지 10원의 모든 탄소 모노사이클릭 또는 융합된 폴리사이클릭(즉, 인접한 탄소 원자 쌍을 공유하는 환) 기, 예컨대 페닐을 지칭한다. 아릴기는 치환되거나 비치환될 수 있고, 치환된 경우, 치환체는 바람직하게는 알킬, 알케닐, 알키닐, 알콕시, 알킬티오, 알킬아미노, 할로겐, 중수소 원자, 머캅토, 하이드록실, 니트로, 시아노, 사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, 아릴, 헤테로아릴, 사이클로알콕시, 헤테로사이클로알콕시, 사이클로알킬티오, 또는 헤테로사이클로알킬티오로부터 선택되나 이에 제한되지 않는 하나 이상의 기이다.
본 발명은 또한 화학식 I의 다양한 중수소화 형태를 포함한다. 탄소 원자에 부착된 각각의 이용 가능한 수소 원자는 독립적으로 중수소 원자로 대체될 수 있다. 당업자는 관련 문헌을 참조하여 화학식 I의 중수소화된 형태를 합성할 수 있다. 상업적으로 이용 가능한 중수소화 출발 물질은 화학식 I의 중수소화 형태를 제조하는데 사용될 수 있거나 중수소화 시약을 사용하는 통상적인 기술을 사용하여 합성될 수 있으며, 중수소화 시약의 비제한적인 예로는 특히 중수소화 보란, 트리듀테리오보란 테트라하이드로푸란 용액, 중수소화 리튬 알루미늄 수소화물, 중수소화 요오도에탄, 및 중수소화 요오도메탄이 있다.
"항체"라는 용어는 사슬간 이황화 결합에 의해 연결된 2개의 동일한 중쇄 및 2개의 동일한 경쇄로 구성된 테트라펩타이드 사슬 구조인 면역글로불린을 지칭한다. 면역글로불린 중쇄의 불변 영역의 아미노산 조성과 서열이 다르면 항원성도 다르다. 이에 따라, 면역글로불린은 다섯 가지 범주 또는 면역글로불린의 이소형, 즉 IgM, IgD, IgG, IgA 및 IgE로 나눌 수 있다. 해당 중쇄는 μ쇄, δ쇄, γ쇄, α쇄 및 ε쇄이다. 같은 유형의 Ig라도 힌지 영역의 아미노산 조성 및 중쇄 이황화 결합의 수와 위치에 따라 서로 다른 아부류로 나눌 수 있다. 예를 들어, IgG는 IgG1, IgG2, IgG3 및 IgG4로 나눌 수 있다. 경쇄는 불변 영역의 차이에 따라 카파쇄와 람다쇄로 나뉜다. 5가지 유형의 Ig 각각은 카파쇄 또는 람다쇄를 가질 수 있다. 일 실시양태에서, 항체는 표적 세포 상의 세포 표면 항원에 대한 특이적 항체일 수 있다. 비제한적인 예는 하기 항체이다: 항-EGFRvIII 항체, 항-DLL-3 항체, 항-PSMA 항체, 항-CD70 항체, 및 항-MUC16 항체, 항-ENPP3 항체, 항-TDGF1 항체, 항-ETBR 항체, 항-MSLN 항체, 항-TIM-1 항체, 항-LRRC15 항체, 항-LIV-1 항체, 항-CanAg/AFP 항체, 항-클래딘 18.2 항체, 항-메소텔린 항체, 항-HER2 (ErbB2) 항체, 항-EGFR 항체, 항-c-MET 항체, 항-SLITRK6 항체, 항-KIT/CD117 항체, 항-STEAP1 항체, 항-SLAMF7/CS1 항체, 항-NaPi2B/SLC34A2 항체, 항-GPNMB 항체, 항-HER3 (ErbB3) 항체, 항-MUC1/CD227 항체, 항-AXL 항체, 항-CD166 항체, 항-B7-H3 (CD276) 항체, 항-PTK7/CCK4 항체, 항-PRLR 항체, 항-EFNA4 항체, 항-5T4 항체, 항-NOTCH3 항체, 항-넥틴 4 항체, 항-TROP-2 항체, 항-CD142 항체, 항-CA6 항체, 항-GPR20 항체, 항-CD174 항체, 항-CD71 항체, 항-EphA2 항체, 항-LYPD3 항체, 항-FGFR2 항체, 항-FGFR3 항체, 항-FRα 항체, 항-CEACAMs 항체, 항-GCC 항체, 항-인테그린 Av 항체, 항-CAIX 항체, 항-P-카드헤린 항체, 항-GD3 항체, 항-카드헤린 6 항체, 항-LAMP1 항체, 항-FLT3 항체, 항-BCMA 항체, 항-CD79b 항체, 항-CD19 항체, 항-CD33 항체, 항-CD56 항체, 항-CD74 항체, 항-CD22 항체, 항-CD30 항체, 항-CD37 항체, 항-CD138 항체, 항-CD352 항체, 항-CD25 항체 또는 항-CD123 항체 중 하나 이상; 바람직하게는 트라스투주맙 단클론 항체(트라스투주맙, 상품명 허셉틴), 페르투주맙(2C4로도 알려짐, 상품명 퍼제타), 니모투주맙(상품명 타익신솅), 에노블리투주맙, 에미베투주맙, 이노투주맙, 피나투주맙, 브렌툭시맙, 젬투주맙, 비바투주맙, 로르보투주맙, cBR96 및 글레마투마맙.
용어 "용매화물" 또는 "용매화물 화합물"이라는 용어는 본원에 개시된 리간드-약물 접합체가 하나 이상의 용매 분자와 약학적으로 허용되는 용매화물을 형성하는 것을 의미하며, 상기 용매의 비제한적인 예로는 물, 에탄올, 아세토니트릴, 이소프로판올, DMSO, 에틸 아세테이트가 있다.
"약물 부하"라는 용어는 화학식 I에서 항체당 부하된 세포 독성 약물의 평균 양을 지칭하고 약물 양 대 항체 양의 비율로도 표현될 수 있으며, 약물 부하는 0 내지 12, 바람직하게는 1 내지 10의 항체(Ab)당 부착된 세포 독성 약물(D) 범위일 수 있다. 일 실시양태에서, 약물 부하는 n으로 표시되며, 이는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10의 예시적인 평균값일 수 있다. 접합 반응 후 ADC 분자당 약물의 평균량은 UV/가시광선 분광법, 질량 분석법, ELISA 분석 및 HPLC 특성 분석과 같은 통상적인 방법으로 확인할 수 있다.
일 실시양태에서, 세포 독성 약물은 링커를 통해 항체의 개방 사슬간 시스테인 티올-SH 기 및/또는 부위 지정 돌연변이 시스테인 티올-SH 기에 접합되고, 일반적으로 접합 반응에서 항체에 접합될 수 있는 약물 분자의 수는 이론상 최대값보다 작거나 같을 것이다.
리간드 세포 독성 약물 접합체의 부하는 하기를 포함하는 비제한적인 방법에 의해 제어될 수 있다:
(1) 단일클론 항체에 대한 연결 시약의 몰 비 조절,
(2) 반응 시간과 온도 제어,
(3) 다양한 시약의 선택.
통상적인 약학적 조성물의 제조는 중국 약전에 나타나 있다.
"약학적으로 허용 가능한 염" 또는 "약학적으로 허용되는 염"이라는 용어는 포유동물의 체내에서 사용하기에 안전하고 효과적이며 필요한 생물학적 활성을 보유하는 본원에 개시된 바와 같은 리간드-약물 접합체의 염, 또는 본원에 기재된 화합물의 염을 지칭하며, 본원에 개시된 리간드-약물 접합체는 적어도 하나의 카복실기를 함유하고 따라서 염기와 염을 형성할 수 있으며, 상기 염기의 비제한적인 예는 나트륨, 칼륨, 칼슘 또는 마그네슘 염 등을 포함한다.
"약학적으로 허용 가능한 염" 또는 "약학적으로 허용되는 염"이라는 용어는 포유동물 신체에 사용하기에 안전하고 효과적이며 필요한 생물학적을 보유하는 본원에 개시된 바와 같은 리간드-약물 접합체의 염, 또는 본원에 기재된 화합물의 염을 지칭하며, 본원에 개시된 리간드-약물 접합체 화합물은 적어도 하나의 아미노기를 함유하고 따라서 산과 염을 형성할 수 있으며, 상기 산의 비제한적인 예는 하이드로클로라이드, 하이드로브로마이드, 하이드로요오다이드, 설페이트, 황산수소염, 시트레이트, 아세테이트, 숙시네이트, 아스코베이트, 옥살레이트, 니트레이트, 소르베이트, 인산수소, 인산이수소, 살리실레이트, 시트르산수소, 타르트레이트, 말레에이트, 푸마레이트, 포르메이트, 벤조에이트, 메탄설포네이트, 에탄설포네이트, 벤젠설포네이트, p-톨루엔설포네이트를 포함한다.
"산성 아미노산"이란 아미노산의 등전점이 7 미만인 것을 의미하며, 산성 아미노산 분자는 종종 카복실기와 같은 하나 이상의 산성 기를 가지며 구조에서 효과적으로 음이온으로 이온화되어 친수성을 증가시킬 수 있다. 산성 아미노산은 천연 아미노산 또는 비천연 아미노산일 수 있다.
"천연 아미노산"은 살아있는 유기체에 의해 합성되는 아미노산을 지칭한다. 천연 아미노산은 일반적으로 L-형이지만, 천연 및 생합성 모두를 포함한 글리신과 같은 몇 가지 예외가 있다.
"비천연 아미노산"은 합성 수단에 의해 얻어진 아미노산을 지칭한다.
이하, 구체적인 실시예를 들어 본 발명을 더욱 상세하게 예시할 것이나, 이들 실시예는 단지 본 발명을 예시하기 위한 것일 뿐 본 개시내용의 범위를 한정하는 것은 아니다. 하기 실시예에 특정 조건이 기재되지 않은 시험 방법은 일반적으로 통상적인 조건 또는 제조업체가 제안한 조건에 따라 수행된다. 달리 명시되지 않는 한 모든 백분율, 비율 또는 부는 중량 기준이다.
달리 정의되지 않는 한, 본원에 사용된 모든 기술 및 과학 용어는 당업자에게 친숙한 것과 동일한 의미를 갖는다.
또한, 본원에 기재된 것과 유사하거나 동등한 임의의 방법 및 재료가 본원에 개시된 방법에 사용될 수 있다. 본원에 기술된 바람직한 실시예 및 재료는 단지 예시용으로만 제공된다.
실시예 1
화합물 M1의 합성:
Figure pct00023
N-플루오레닐메톡시카보닐-글리신(100g, 282mmol, 1.0eq), 납 테트라아세테이트(175g, 553mmol, 1.4eq), 2000mL 건조 테트라하이드로푸란 및 670mL 톨루엔을 5000mL 1-구 플라스크에 첨가하고; 반응물을 균일하게 교반한 후, 질소로 보호하고, 85℃로 가열하여 2.5시간 동안 반응시켰다; TLC 모니터링 하에서, 반응이 완료된 후에, 혼합물을 실온으로 냉각하고 여과하였다. 여액을 감압 농축하고 잔류물을 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 M1(87g)을 수득하였다; LC-MS: [M+NH4]+ =386.0.
실시예 2
화합물 M3의 합성:
Figure pct00024
SM-2(CN 108452321A에 개시된 방법에 따라 합성됨)(40g, 96mmol, 1.0eq), 트리에틸아민(26.7mL, 2.0eq), 및 톨루엔(400mL)을 1000 mL 1-구 플라스크에 첨가하고, 혼합물을 120℃로 가열하여 2시간 동안 환류시켰다. 거의 전체 반응을 TLC 모니터링하고, 50℃ 이하로 냉각하고, 감압 하에 용매를 제거하였다. 혼합물을 에틸 아세테이트(150mL)와 물(40mL)에 용해시키고, 빙조에서 교반하면서 1M HCl로 pH를 2-3으로 조절한 뒤, 액상을 분리하였다. 수성층을 에틸 아세테이트로 한번 더 추출하고, 유기층을 합하여 무수 황산나트륨으로 건조시켰다. 여과 농축하여 조 생성물을 연황색 오일로 얻고, 이를 컬럼 크로마토그래피(DCM:MeOH = 40:1)로 정제하여 화합물 M2(26.6g)를 수득하였다; LC-MS: [M+H]+ =399.3.
화합물 M2(26.5g, 60.5mmol, 1.0eq), 펜타플루오로페놀(12.2g, 66.5mmol, 1.1eq), DCC(13.7g, 66.5mmol, 1.1eq) 및 THF(300mL)를 1000 mL 1-구 플라스크에 첨가하여 실온에서 30분 동안 반응시키고(TLC로 모니터링), 여과로 불용성 물질을 여과하였다. 반응 용액을 직접 제조하여 정제하고, 제조 용액을 수조에서 35℃에서 감압 하에 수 펌프로 농축하여 아세토니트릴을 제거한 후 동결건조하여 화합물 M3(31.5g)을 64%의 수율로 수득하였다; LC-MS: [M+H]+ =565.1.
실시예 3
화합물 ent -M3의 합성:
Figure pct00025
실시예 2의 합성 경로를 참조하여 화합물 ent -M3(27.8g)을 수득하였다; LC-MS: [M+H]+ =565.2.
실시예 4
화합물 1의 합성:
Figure pct00026
단계 1: 화합물 1a
M1(6g, 16.3mmol), 100mL THF 및 p-톨루엔설폰산 일수화물(0.31g, 1.63mmol)을 250mL 1-구 플라스크에 첨가하여 교반한 후 0℃로 냉각한 다음, 벤질 글리콜레이트(5.4g, 32.6mmol)를 적가하고, 적가 후 반응을 위해 자연적으로 온도를 실온으로 상승시키고(반응은 약 2 내지 4시간) TLC로 모니터링하였다. 반응 종료 후, 포화 NaHCO3 용액을 첨가하고 에틸 아세테이트로 추출한 후 포화 염화나트륨 용액으로 세척하고 무수 황산나트륨으로 건조하여 여과하고 농축하였다. 잔류물을 실리카겔 컬럼(PE:EA=10:1-5:1-1:1)으로 정제하여 1a(4g)를 52%의 수율로 수득하였다; LC-MS: [M+H]+　=475.18.
단계 2: 화합물 1b
1a(2g, 4.2mmol) 및 10mL DMF를 25mL 1-구 플라스크에 첨가하여 0℃에서 교반한 다음, DBU(766mg, 5.04mmol)를 첨가하고, 1시간 동안 반응시킨 뒤, TLC로 모니터링하여 Fmoc 탈보호가 완료되었으면, 따로 보관하였다;
다른 25mL 1-구 병에 M4(특허 CN111051330 A에 공개된 방법을 참조하여 제조)(1.73g, 4.2mmol), PyBOP(2.61g, 5.04mmol), HOBt(680mg, 5.04mmol) 및 10mL DMF를 첨가하고, 빙수조 하에 DIPEA(830uL, 5.04mmol)를 첨가한 뒤 30분 동안 계속 교반한 다음, 위의 반응 용액을 반응 플라스크에 첨가하고 반응을 위해 실온으로 가온하였다. HPLC로 모니터링하면서, 반응이 종료된 후에, 반응 용액을 제조 액상으로 정제하여 생성물 제조 용액을 얻었다. 제조 용액을 디클로로메탄으로 추출하고, 포화 염화나트륨 용액으로 세척한 후, 무수 황산나트륨으로 건조한 다음, 여과하고 여액을 감압 농축하여 고체 1b(1.7g)를 63%의 수율로 수득하였다; LCMS: [M+H]+　=648.26.
단계 3: 화합물 1c
1b(900mg, 1.39mmol)를 25mL 1-구 플라스크에 첨가하여 15mL DMF에 용해시키고 900mg 5% Pd/C를 첨가하여 2시간 동안 수소화 반응시킨 후, 반응 종료 후 여과하여 여액을 얻고 정제없이 다음 반응에 직접 사용하였다.
단계 4: 화합물 1d
조 생성물 1c를 빙수조에 넣고 DIPEA(235uL, 1.39mmol)를 첨가한 후, 화합물 M3(784mg, 1.39mmol)을 첨가하고, 첨가 후 실온으로 승온시켜 1시간 동안 반응시켰다. HPLC로 모니터링하면서, 반응이 종료된 후에, 반응 용액을 고성능 액상으로 정제하여 제조 용액을 얻고, 이를 동결건조하여 1d(504 mg)를 수득하였다; LC-MS: [M+H]+　=804.4.
단계 5: 화합물 1e
1d(500mg, 0.62mmol), M5(310mg, 0.62mmol), PyBOP(448mg, 0.86mmol), HOBt(116mg, 0.86mmol) 및 15mL DMF를 50mL 1-구 병에 첨가하고, DIPEA(378uL, 2.29mmol)를 빙수조 하에 첨가한 뒤, 실온으로 가온하고 2시간 동안 반응시켰다. HPLC로 모니터링하면서, 반응이 종료된 후에, 반응 용액을 고성능 액상으로 정제하여 화합물 1e의 제조 용액을 얻고, 이를 동결건조하여 1e(210 mg)를 수득하였다; LC-MS: [M+H]+　=1221.6.
단계 6: 화합물 1
1e(100mg, 0.081mmol), 브롬화아연(368mg, 1.63mmol) 및 5mL 니트로메탄을 25mL 1-구 병에 첨가하고, 40℃에서 1시간 동안 반응시켰다. HPLC로 모니터링하면서, 반응이 종료된 후에, 감압 농축하여 용매를 제거하고 조 생성물을 얻었다. 조 생성물을 고성능 액상으로 정제하여 생성물 제조 용액을 얻고, 이를 동결건조하여 고체 화합물 1(60 mg)을 수득하였다; LC-MS: [M+H]+　=1065.3.
실시예 5
화합물 2의 합성:
Figure pct00027
실시예 4의 합성 경로를 참조하여 화합물 2(51mg)를 수득하였다; LC-MS: [M+H]+　=1065.3.
실시예 6
화합물 3의 합성:
Figure pct00028
단계 1: 화합물 3a
M1(6g, 16.3mmol), 100mL THF 및 p-톨루엔설폰산 일수화물(0.31g, 1.63mmol)을 250mL 1-구 플라스크에 첨가하여 교반한 다음 0℃로 냉각하고, 2-하이드록시-2-메틸프로판 벤질산 에스테르(6.3g, 32.6mmol)를 적가하고, 적가 후 반응을 위해 자연적으로 온도를 실온으로 상승시키고(반응은 약 2 내지 4시간) TLC로 모니터링하였다. 반응 종료 후, 포화 NaHCO3 용액을 첨가하고, 에틸 아세테이트로 추출한 후, 포화 염화나트륨 용액으로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조하여 여과한 뒤 농축하였다. 잔류물을 실리카겔 컬럼(PE:EA=10:1-5:1-2:1)으로 정제하여 3a(4.2g)를 52%의 수율로 수득하였다; LC-MS: [M+H]+　=503.3.
단계 2: 화합물 3b
3a(2g, 4.0mmol), 10mL DMF를 25mL 1-구 플라스크에 첨가하여 0℃에서 교반한 다음, DBU(760mg, 5.0mmol)를 첨가하고, 1시간 동안 반응시킨 뒤, Fmoc 탈보호가 완료될 때까지 TLC로 모니터링하고, 따로 보관하였다.
다른 25mL 1-구 병에 M4(1.65g, 4.0mmol), PyBOP(2.59g, 5.0mmol), HOBt(675mg, 5.0mmol) 및 10mL DMF를 첨가하였다. 빙수조 하에서 DIPEA(823uL, 5.04mmol)를 첨가하고 30분 동안 교반을 계속한 뒤, 상기 반응 용액을 반응 플라스크에 첨가하고 반응물을 실온으로 올렸다. HPLC로 모니터링하면서, 반응이 종료된 후에, 반응 용액을 제조 액상으로 정제하여 생성물 제조 용액을 얻었다. 제조 용액을 디클로로메탄으로 추출하고 포화 염화나트륨 용액으로 세척한 후, 무수 황산나트륨으로 건조하고, 여과한 다음 여액을 감압 농축하여 고체 3b(1.4g)를 53%의 수율로 수득하였다; LC-MS: [M+H]+　=676.2.
단계 3: 화합물 3c
3b(700mg, 1.04mmol)를 25mL 1-구 병에 첨가하고 10mL DMF를 용해시킨 후, 700mg 5% Pd/C를 첨가하여 1.5시간 동안 수소화 반응시킨 다음, 반응 종료 후 여과하여 여액을 얻고 정제없이 다음 반응에 직접 사용하였다.
단계 4: 화합물 3d
조 생성물 3c를 빙수조에 넣고, DIPEA(210uL, 1.25mmol)를 첨가하고, M3 (704mg, 1.25mmol)을 첨가한 후 실온으로 승온시켜 1시간 동안 반응시켰다. HPLC로 모니터링하면서, 반응이 종료된 후에, 반응 용액을 고성능 액상으로 정제하여 제조 용액을 얻고, 이를 동결건조하여 3d(486 mg)를 수득하였다; LC-MS: [MH]-　=830.5.
단계 5: 화합물 3e
3d(300mg, 0.36mmol), M5(180mg, 0.36mmol), PyBOP(260mg, 0.5mmol), HOBt(67mg, 0.5mmol) 및 10mL DMF를 50mL 1-구 병에 첨가하고 DIPEA(219.5uL, 1.33 mmol)를 첨가한 뒤, 실온으로 가온하고 3시간 동안 반응시켰다. HPLC로 모니터링하면서, 반응이 종료된 후에, 반응 용액을 고성능 액상으로 정제하여 화합물 3e의 제조 용액을 얻고, 이를 동결건조하여 3e(157 mg)를 수득하였다; LC-MS: [M+H]+　=1249.6.
단계 6: 화합물 3
3e(100mg, 0.08mmol), 브롬화아연(360mg, 1.6mmol) 및 5mL 니트로메탄을 25mL 1-구 플라스크에 첨가하고 40℃에서 1시간 동안 반응시켰다. HPLC로 모니터링하면서, 반응이 종료된 후에, 감압 농축하여 용매를 제거하고 조 생성물을 얻었다. 조 생성물을 고성능 액상으로 정제하여 생성물 제조 용액을 얻고, 이를 동결건조하여 고체 화합물 3(64 mg)을 수득하였다; LC-MS: [M+H]+　=1093.1.
실시예 7
화합물 4의 합성:
Figure pct00029
실시예 6의 합성 경로를 참조하여 4(60mg)를 수득하였다; LC-MS: [M+H]+　=1093.2.
실시예 8
화합물 5A의 합성:
Figure pct00030
단계 1: 화합물 5a
M1(500mg, 1.4mmol, 1.0eq), p-톨루엔설폰산 일수화물(26mg, 0.1mmol, 0.1eq) 및 10mL THF를 25mL 1-구 플라스크에 첨가하고 잘 교반한 후 0℃로 낮추고 L-벤질 락테이트(1.2g, 7.0mmol, 5eq)를 천천히 첨가하고, 첨가 후, 반응을 위해 실온으로 가온하였다. TLC로 모니터링하여 반응 후, 포화 NaHCO3 용액을 첨가하고 에틸 아세테이트로 추출한 다음, 무수 황산나트륨으로 건조하고 여과한 뒤 농축하였다. 잔류물을 역상 컬럼으로 정제하여 5a(400mg)를 수득하였다;
LC-MS: [M+NH4]+　=506.2.
1H NMR (400Mz, CDCl3/CD3OD): 1.39 (3H, d, J=6.8 Hz), 3.78 (2H, t, J=4.0 Hz), 4.17-4.27 (2H, m), 4.42 (2H,d, J=4.0Hz),4.72-4.85(2H,m), 5.11-5.58 (2H,m), 5.43 (1H,s), 7.06 (1H,t, J=8.0Hz), 7.25-7.33(6H, m), 7.38 (2H, t, J=8.0 Hz), 7.57 (2H, d, J=8.0 Hz), 7.75 (2H, d, J=8.0 Hz).
단계 2: 화합물 5b
화합물 5a(400mg, 0.8mmol, 1.0eq) 및 4mL DMF를 25mL 1-구 플라스크에 첨가하고 잘 교반한 후 0℃로 낮추고 DBU(137mg, 0.9mmol, 1.1eq)를 천천히 첨가하고, 첨가 후, 실온으로 가온하여 반응을 완료하였다. 반응이 끝날 때까지 TLC로 모니터링하고, 반응 용액 ①로 하였다;
다른 25mL 1-구 플라스크에 M4(372mg, 0.9mmol, 1.1eq), PyBOP(852mg, 1.6mmol, 2.0eq) 및 3mL DMF를 첨가하고 실온에서 5분간 교반한 후 반응 용액 ①을 첨가하고 실온에서 반응시키고 HPLC로 모니터링하였다. 반응 종료 후, 반응 용액을 HPLC로 정제하여 화합물 5b(326 mg)를 수득하였다. LC-MS: [M+NH4]+　=679.2.
단계 3: 화합물 5c
5b(4.0 g, 6.05 mmol, 1.0 eq)를 100mL 1-구 플라스크에 첨가하고, DMF(60 mL)를 용해시킨 후, 5% Pd/C(4 g)를 첨가하여 실온에서 4시간 동안 수소화 반응을 진행하였다(반응 진행을 모니터링하기 위해 HPLC 사용). Pd/C를 여과한 뒤 여액을 농축하지 않고, 나중 사용을 위해 바로 빙수조(약 0℃)에 두었다.
단계 4: 화합물 5d
조 생성물 5c를 빙수조에 두고 DIPEA(1.1 mL, 1.1 eq)를 첨가한 후, 화합물 M3(3.4 g, 6.05 mmol)을 첨가하고, 첨가 후 2시간 동안 실온으로 올렸다. 반응을 HPLC로 모니터링하고 반응 용액을 고성능 액상으로 정제하여 제조 용액을 얻었다. 제조 용액을 동결건조하여 5d(3.15g)를 수득하였다; LC-MS: [MH]-　=816.3.
단계 5: 화합물 5e
5d(2.07g, 2.53mmol, 1.0eq), M5(1.35g, 2.53mmol, 1.0eq), PyBOP(1.98g, 3.79mmol, 1.5eq), HOBt(0.51g, 3.79mmol, 1.5 eq) 및 DMF(40 mL)를 첨가하고, DIPEA(1.05 mL, 1.5 eq)를 빙수조 하에 첨가한 뒤 2시간 동안 실온으로 가열하였다(HPLC로 모니터링). 반응 용액을 직접 제조하여 정제하고, 제조 용액을 35℃ 진공 수조에서 농축하여 아세토니트릴을 제거한 후, 동결건조하여 화합물 5e(1.92g)를 61%의 수율로 수득하였다. LC-MS: [M+H]+　=1235.4.
단계 6: 화합물 5A
화합물 5e(1.0g, 0.8mmol, 1.0eq) 및 35mL 니트로메탄을 100mL 1-구 플라스크에 첨가하고 용해시킨 후 브롬화아연(3.64g, 16mmol, 20.0eq)을 40℃ 오일욕(예열하여 미리 안정화시킴)에 첨가하였다. 30분 동안 반응시킨 후, 45℃의 감압 수조에서 워터 펌프로 농축하여 니트로메탄을 제거하고 황색 고체 잔류물을 얻었다(HPLC로 모니터링함). 산법으로 제조하여 화합물 5A의 제조 용액을 얻었다. 제조 용액을 35℃의 감압 수조에서 워터 펌프로 농축하여 아세토니트릴을 제거하고 동결건조하여 화합물 5A(786mg)를 90%의 수율로 수득하였다.
LC-MS: [M+H]+　=1079.4;
1H NMR(400MHz, DMSO-d6) δ 9.39-9.02(m,1H), 8.70(t, J=6.5Hz,1H), 8.64(t, J=5.7Hz,1H), 8.56(d, J=8.8Hz,1H), 8.34(t, J=5.7Hz,1H), 8.16(d, J=8.2Hz,1H), 8.01(t, J=5.5Hz,1H),7.71(d, J=10.9 Hz, 1H), 7.30(s, 1H), 7.28-7.15(m, 4H), 7.14(s, 2H), 5.53(dd, J=14.5, 6.4 Hz, 1H), 5.49-5.34(m, 2H),5.22(d, J=18.8Hz,1H), 5.09(d, J=18.7Hz,1H), 5.03(dd, J=9.6,3.9Hz,1H), 4.73(dd, J=9.9,6.9Hz, 1H), 4.59(dd, J=10.1, 6.5 Hz, 1H), 4.49(ddd, J=13.2, 8.6, 4.4 Hz, 1H), 4.14(dd, J=13.3, 6.6 Hz, 2H), 3.93(s, 2H), 3.84(dd, J=16.5, 6.3 Hz, 1H), 3.76(dd, J=16.9, 5.7 Hz, 2H), 3.70(d, J=5.2 Hz, 2H), 3.60(dd, J=16.7, 5.4 Hz, 1H), 3.52(dd, J=16.4, 5.1 Hz, 1H), 3.45(dd, J=12.8, 10.1 Hz, 1H), 3.25-3.15(m, 1H), 3.14-3.05(m,1H),3.01(dd, J=13.7,4.1Hz,1H), 2.73(dd, J=13.5,9.8Hz,1H), 2.54-2.47(m,1H),2.33(s,2H),2.17(d, J=5.5 Hz, 2H), 1.91-1.79(m, 2H), 1.33(d, J=6.6 Hz, 2H), 0.87(t, J=7.3 Hz, 2H).
실시예 9
화합물 5B의 합성:
Figure pct00031
단계 1: 화합물 5d-1
화합물 5b(300mg, 0.45mmol, 1.0eq) 및 DMF(3mL)를 25mL 1-구 플라스크에 첨가하고, 혼합물을 교반하여 용액이 맑아지면 5% Pd/C(300mg)를 첨가하였다. 수소 치환을 3회 수행하였다. 수소화 반응 시간은 2시간이었으며, 반응은 HPLC로 모니터링하였다. 반응 후, 여과하여 Pd/C를 제거하고 여액을 0-5℃로 냉각시킨 다음, DIPEA(65mg, 0.5mmol, 1.1eq)를 첨가하고 ent-M3(255mg, 0.45mmol)을 여액에 첨가하였다. 첨가 후, 1시간 동안 온도를 20±5℃로 올려 반응시키고 반응 종료를 HPLC로 모니터링하였다. 반응 후, 생성물을 HPLC로 제조하여 정제한 후, 생성물 제제를 수집하고 동결건조하여 화합물 5d-1(200 mg)을 54%의 수율로 수득하였다; LC-MS: [MH]-　=816.3.
단계 2: 화합물 5e-1
화합물 5d-1(200mg, 0.24mmol, 1.0eq), M5(127mg, 0.24mmol, 1.0eq), PyBOP(187mg, 0.36mmol, 1.2eq), HOBt(48mg, 0.36mmol, 1.2eq) 및 DMF(6mL)를 25mL 1-구 플라스크에 첨가하고 빙수조에서 0-5℃로 냉각시킨 뒤, DIPEA(62mg, 0.48mmol, 2.0eq)를 첨가하고, 첨가 후 온도를 20±5℃로 올려 2시간 동안 반응시켰다. HPLC로 반응 완료를 모니터링하였다. 반응 용액을 직접 HPLC로 제조하여 정제하고 생성물 제조 용액을 수집하고 동결건조하여 화합물 5e-1(162.8mg)을 수득하였다. LC-MS: [M+H]+　=1235.4.
단계 3: 화합물 5B
화합물 5e-1(110mg, 0.089mmol, 1.0eq), ZnBr2(400mg, 1.78mmol, 20.0eq) 및 CH3NO2(10mL)를 25mL 1-구 플라스크에 차례로 첨가하였다. 첨가 후, 온도를 0.5시간 동안 40℃로 승온시켜 반응을 정지시키고, 반응 용액을 직접 45℃에서 감압 하에 회전 건조시켜 황색 고체를 얻고, 샘플을 HPLC에 취해 반응을 모니터링하였다. 회전 건조된 고체를 직접 HPLC로 제조하여 정제하였다. 생성물 제제를 수집하고 동결건조하여 화합물 5B(73.4mg)를 76.5%의 수율로 수득하였다; LC-MS: [M+H]+　=1079.4.
실시예 10
화합물 6A의 제조:
Figure pct00032
실시예 8의 합성 경로를 참조하여 6A(71mg)를 수득하였다; LC-MS: [M+H]+　=1079.4.
실시예 11
화합물 6B의 제조:
Figure pct00033
실시예 9의 합성 경로를 참조하여 6B(59mg)를 수득하였다; LC-MS: [M+H]+　=1079.4.
실시예 12
화합물 7A 및 7B의 제조:
Figure pct00034
단계 1: 화합물 7a
M1(10g, 27.1mmol), 3,3,3-트리플루오로 벤질 락테이트(특허 WO2020063673A1에 공개된 방법을 참조하여 제조)(12.7g, 54.3mmol), 아세트산아연(9.96g, 54.3mmol) 및 100mL 톨루엔을 1-구 병에 첨가하고 100℃에서 4시간 동안 가열하였다. 반응 종료 후, 온도를 실온으로 낮추고, 여과로 불용성 물질을 제거한 뒤, 여액을 농축하여 조 생성물을 얻었다. 조 생성물을 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(PE:EA=10:1-5:1-2:1)로 정제하여 목적 생성물 5.15g을 35.1%의 수율로 수득하였다. LC-MS: [M+H]+ =543.17.
단계 2: 화합물 7b
7a(5g, 9.2mmol) 및 15mL DMF를 50mL 1-구 플라스크에 첨가하여 용해시킨 후, 빙수조에서 DBU(1.68g, 11mmol)를 첨가하고 1시간 동안 반응시킨 것을 반응 용액 ①로 하였다;
다른 50mL 1-구 병에 M4(3.8g, 9.2mmol), PyBOP(5.75g, 11mmol), HOBt(1.49g, 11mmol) 및 10mL DMF를 첨가하였다. 용해시킨 후, 빙수조 하에 DIPEA (1.82mL, 11mmol)를 첨가하고, 30분 동안 반응을 계속하고, 반응 용액 ①을 첨가한 다음, 2시간 동안 실온으로 가온하였다. 반응 진행을 HPLC로 모니터링하였다. 반응 종료 후, 반응 용액을 고성능 액상으로 정제하여 제조 용액을 얻었다. 제조 용액을 디클로로메탄으로 추출하고 포화 염화나트륨 용액으로 세척한 후, 무수 황산나트륨으로 건조하고, 여과한 다음 농축하여 고체 4.1g을 62.3%의 수율로 수득하였다; LC-MS: [M+H]+　=716.25.
단계 3: 화합물 7d
7b(900mg, 1.26mmol)를 25mL 1-구 플라스크에 첨가하고 15mL DMF를 용해시킨 후, 900mg 5% Pd/C를 첨가하여 2시간 동안 수소화 반응시키고, 반응 종료 후, 여과하고 여액을 빙수조에 넣고, DIPEA(228uL, 1.38mmol)를 첨가한 후, M3(712mg, 1,26mmol)을 첨가하고, 첨가 후 실온으로 승온시켜 1시간 동안 반응시켰다. 반응을 HPLC로 모니터링하고, 반응 용액을 고성능 액상으로 정제하여 제조 용액을 얻었다. 제조 용액을 동결건조하여 525 mg의 생성물을 47.9%의 수율로 수득하였다; LC-MS: [MH]-　=870.33.
단계 4: 화합물 7e
7d(500mg, 0.57mmol), M5(305mg, 0.57mmol), PyBOP(448mg, 0.86mmol), HOBt(116mg, 0.86mmol) 및 15mL DMF를 50mL 1-구 병에 첨가하고, DIPEA(378uL, 2.29mmol)를 빙수조 하에 넣고, 실온으로 가온하여 2시간 동안 반응시켰다. HPLC로 모니터링하면서, 반응이 종료된 후에, 반응 용액을 고성능 액상으로 정제하여 화합물 7e-1 및 화합물 7e-2의 제조 용액을 얻었다. 제조 용액을 각각 동결건조하여 150 mg의 화합물 7e-1(LC-MS: [M+H]+　=1289.46); 및 220 mg의 화합물 7e-2(LC-MS: [M+H]+　=1289.46)을 수득하였다.
단계 5: 화합물 7A
Figure pct00035
7e-1(100mg, 0.077mmol), 브롬화아연(349mg, 1.55mmol) 및 5mL 니트로메탄을 25mL 1-구 플라스크에 첨가하고 40℃에서 1시간 동안 반응시켰다. HPLC로 모니터링하면서, 반응이 종료된 후에, 감압 농축하여 용매를 제거하고 조 생성물을 얻었다. 조 생성물을 고성능 액상으로 정제하여 생성물 제조 용액을 얻고, 이를 동결건조하여 고체(52mg)를 수득하였다; TOF 결과: 1133.3613.
단계 6: 화합물 7B
Figure pct00036
7e-2(100mg, 0.077mmol), 브롬화아연(349mg, 1.55mmol) 및 5mL 니트로메탄을 25mL 1-구 플라스크에 첨가하고 40℃에서 1시간 동안 반응시켰다. HPLC로 모니터링하면서, 반응이 종료된 후에, 감압 농축하여 용매를 제거하고 조 생성물을 얻었다. 조 생성물을 고성능 액상으로 정제하여 생성물 제조 용액을 얻고, 이를 동결건조하여 고체(63mg)를 수득하였다; TOF 결과: 1133.3668.
실시예 13
화합물 8A 및 8B의 합성:
Figure pct00037
단계 1: 화합물 8d
7c(900mg, 1.83mmol)를 25mL 1-구 플라스크에 첨가하였다. 20mL의 DMF를 용해시킨 후, DIPEA(303uL, 1.83mmol)를 첨가하고 ent-M3(1034mg, 1.83mmol)을 첨가한 뒤, 혼합물을 실온으로 가열하여 1시간 동안 반응시켰다. HPLC로 모니터링하면서, 반응이 종료된 후에, 반응 용액을 고성능 액상으로 정제하여 제조 용액을 얻었다. 제조 용액을 동결건조하여 613 mg의 생성물을 38.5%의 수율로 수득하였다; LC-MS: [MH]-　=870.32.
단계 2: 화합물 8e-1 및 화합물 8e-2
8d(500mg, 0.57mmol), M5(305mg, 0.57mmol), PyBOP(448mg, 0.86mmol), HOBt(116mg, 0.86mmol) 및 15mL DMF를 50mL 1-구 병에 첨가하고, DIPEA(378uL, 2.29mmol)를 빙수조 하에 첨가한 뒤 실온으로 가온하여 2시간 동안 반응시켰다. HPLC로 모니터링하면서, 반응이 종료된 후에, 반응 용액을 고성능 액상으로 정제하여 화합물 8e-1 및 화합물 8e-2의 제조 용액을 얻었다. 제조 용액을 각각 동결건조하여 140 mg의 화합물 8e-1 및 210 mg의 화합물 8e-2를 수득하였다. 화합물 8e-1의 LC-MS: [M+H]+　=1289.47; 화합물 8e-2의 LC-MS: [M+H]+　=1289.47
단계 3: 화합물 8A
Figure pct00038
화합물 8e-1(100mg, 0.077mmol), 브롬화아연(349mg, 1.55mmol) 및 5mL 니트로메탄을 25mL 1-구 플라스크에 첨가하고 40℃에서 1시간 동안 반응시켰다. HPLC로 모니터링하면서, 반응이 종료된 후에, 감압 농축하여 용매를 제거하고 조 생성물을 얻었다. 조 생성물을 고성능 액상으로 정제하여 생성물 제조 용액을 얻고, 이를 동결건조하여 고체(50mg)를 수득하였다; TOF 결과: 1133.3623.
단계 4: 화합물 8B
Figure pct00039
화합물 8e-2(100mg, 0.077mmol), 브롬화아연(349mg, 1.55mmol) 및 5mL 니트로메탄을 25mL 1-구 플라스크에 첨가하고 40℃에서 1시간 동안 반응시켰다. HPLC로 모니터링하면서, 반응이 종료된 후에, 감압 농축하여 용매를 제거하고 조 생성물을 얻었다. 조 생성물을 고성능 액상으로 정제하여 생성물 제조 용액을 얻고, 이를 동결건조하여 58mg 고체를 수득하였다; TOF 결과: 1133.3653.
실시예 14
화합물 9A의 합성:
Figure pct00040
단계 1: 화합물 9a
M1(6g, 16.3mmol), 100mL THF, p-톨루엔설폰산 일수화물(0.31g, 1.63mmol)을 250mL 1-구 플라스크에 첨가하고 교반한 뒤 0℃로 냉각하고, 2-하이드록시-2-사이클로프로필 벤질 아세테이트(특허 US20050020645A1에 공개된 방법을 참조하여 제조)(6.3g, 32.6mmol)를 적가한 후, 적가 후 반응을 위해 자연적으로 온도를 실온으로 상승시키고(반응은 약 2 내지 4시간) TLC로 모니터링하였다. 반응 종료 후, 포화 NaHCO3 용액을 첨가하고 에틸 아세테이트로 추출한 후, 포화 염화나트륨 용액으로 세척하고 무수 황산나트륨으로 건조하여 여과한 뒤 농축하였다. 잔류물을 실리카겔 컬럼(PE:EA=10:1-5:1-2:1)으로 정제하여 9a(3.7g)를 45%의 수율로 수득하였다; LC-MS: [M+H]+　=501.5.
단계 2: 화합물 9b
9a(2g, 4.0mmol), 10mL DMF를 25mL 1-구 플라스크에 첨가하여 0℃에서 교반한 후, DBU(760mg, 5.0mmol)를 첨가하고, 1시간 동안 반응시킨 다음, TLC로 모니터링하여 Fmoc 탈보호가 완료되었으면, 따로 보관하였다;
다른 25mL 1-구 병에 M4(1.65g, 4.0mmol), PyBOP(2.59g, 5.0mmol), HOBt(675mg, 5.0mmol) 및 10mL DMF를 첨가하였다. 빙수조 하에 DIPEA(823uL, 5.04mmol)를 첨가하고 30분 동안 계속 교반한 뒤, 상기 반응 용액을 반응 플라스크에 첨가하고 반응물을 실온으로 올렸다. HPLC로 모니터링하면서, 반응이 종료된 후에, 반응 용액을 제조 액상으로 정제하여 생성물 제조 용액을 얻었다. 제조 용액을 디클로로메탄으로 추출하고, 포화 염화나트륨 용액으로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조한 뒤, 여과하고, 여액을 감압 농축하여 1.5g 고체를 56%의 수율로 수득하였다; LC-MS: [M+H]+　=674.7.
단계 3: 화합물 9c
9b(900mg, 1.3mmol)를 25mL 1-구 병에 첨가하고 DMF 10mL를 첨가한 다음 900mg 5% Pd/C를 첨가하여 1.5시간 동안 수소화 반응시키고, 반응 종료 후 여과하여 여액을 얻고 정제없이 다음 반응에 직접 사용하였다.
단계 4: 화합물 9d
조 생성물 9c를 빙수조에 넣고 DIPEA(223uL, 1.3mmol)를 첨가한 후, 화합물 M3(750mg, 1.3mmol)을 첨가하고, 첨가 후 실온으로 승온시켜 1시간 동안 반응시켰다. 반응을 HPLC로 모니터링하고, 반응 용액을 고성능 액상으로 정제하여 제조 용액을 얻은 다음, 동결건조하여 9d (529 mg)를 수득하였다; LC-MS: [MH]-　=828.4.
단계 5: 화합물 9e
9d(500mg, 0.6mmol), M5(300mg, 0.6mmol), PyBOP(416mg, 0.8mmol), HOBt(108mg, 0.5mmol) 및 15mL DMF를 50mL 1-구 병에 첨가하고 빙수조 하에 DIPEA(351uL, 2.13mmol)를 첨가한 후, 실온으로 가온하여 3시간 동안 반응시켰다. HPLC로 모니터링하면서, 반응이 종료된 후에, 반응 용액을 고성능 액상으로 정제하여 화합물 9e의 제조 용액을 얻고, 이를 동결건조하여 9e(257 mg)를 수득하였다; LC-MS: [M+H]+　=1247.5.
단계 6: 화합물 9A
9e(100mg, 0.08mmol), 브롬화아연(360mg, 1.6mmol) 및 5mL 니트로메탄을 25mL 1-구 플라스크에 첨가하고 40℃에서 1시간 동안 반응시켰다. HPLC로 모니터링하면서, 반응이 종료된 후에, 감압 농축하여 용매를 제거하고 조 생성물을 얻었다. 조 생성물을 고성능 액상으로 정제하여 생성물 제조 용액을 얻고, 이를 동결건조하여 고체 화합물 9A(55 mg)를 수득하였다; LC-MS: [M+H]+　=1091.3.
실시예 15
화합물 9B의 합성:
Figure pct00041
실시예 14의 합성 경로를 참조하여 화합물 9B(44mg)를 수득하였다; LC-MS: [M+H]+　=1091.3.
실시예 16
화합물 10A의 합성:
Figure pct00042
단계 1: 화합물 10a
M1(6g, 16.3mmol), THF 100mL 및 p-톨루엔설폰산 일수화물(0.31g, 1.63mmol)을 250mL 1-구 플라스크에 첨가하여 교반한 다음 0℃로 냉각하고, 3-하이드록시-2-사이클로프로필 벤질 프로피오네이트(특허 WO2013187496A1에 공개된 방법을 참조하여 제조)(6.7g, 32.6mmol)를 적가하고, 적가 후 반응을 위해 자연적으로 온도를 실온으로 상승시키고(반응은 약 2 내지 4시간) TLC로 모니터링하였다. 반응 종료 후, 포화 NaHCO3 용액을 첨가하고 에틸 아세테이트로 추출한 후, 포화 염화나트륨 용액으로 세척하고 무수 황산나트륨으로 건조하여 여과한 뒤 농축하였다. 잔류물을 실리카겔 컬럼(PE:EA=10:1-5:1-2:1)으로 정제하여 10a(4.9g)를 58%의 수율로 수득하였다; LC-MS: [M+H]+　=515.4.
단계 2: 화합물 10b
10a(4g, 7.8mmol) 및 10mL DMF를 25mL 1-구 플라스크에 첨가하여 0℃에서 교반한 뒤, DBU(1.2g, 8.0mmol)를 첨가하고, 1시간 동안 반응시킨 다음, TLC로 모니터링하여 Fmoc 탈보호가 완료되었으면, 따로 보관하였다;
다른 25mL 1-구 병에 M4(3.3g, 8.0mmol), PyBOP(5.2g, 10.0mmol), HOBt(1.35g, 10.0mmol) 및 10mL DMF를 첨가하고 빙수조 하에 DIPEA(1.65mL, 10.1mmol)를 첨가하고 50분 동안 교반을 계속한 다음, 상기 반응 용액을 반응 플라스크에 첨가하고 반응을 실온으로 올렸다. HPLC로 모니터링하면서, 반응이 종료된 후에, 반응 용액을 제조 액상으로 정제하여 생성물 제조 용액을 얻었다. 제조 용액을 디클로로메탄으로 추출하고, 포화 염화나트륨 용액으로 세척한 다음, 무수 황산나트륨으로 건조하고, 여과한 뒤, 여액을 감압 농축하여 2.3g 고체를 42%의 수율로 수득하였다; LC-MS: [M+H]+　=688.8.
단계 3: 화합물 10c
10b(1.0g, 1.45mmol)를 25mL 1-구 플라스크에 첨가하고 15mL DMF를 용해시킨 후, 1.0g 5% Pd/C를 첨가하여 1.5시간 동안 수소화 반응시킨 후, 반응이 종료되면 여과하여 여액을 얻은 다음, 정제없이 직접 사용하였다. 1 단계 반응.
단계 4: 화합물 10d
조 생성물 10c를 빙수조에 넣고 DIPEA(258uL, 1.5mmol)를 첨가한 후, M3(837mg, 1.45mmol)을 첨가하고, 첨가 후 실온으로 승온시켜 1시간 동안 반응시켰다. HPLC로 모니터링하면서, 반응이 종료된 후에, 반응 용액을 고성능 액상으로 정제하여 제조 용액을 얻고, 이를 동결건조하여 10d(499 mg)를 수득하였다; LC-MS: [MH]-　=842.4.
단계 5: 화합물 10e
10d(400mg, 0.48mmol), M5(240mg, 0.48mmol), PyBOP(250mg, 0.48mmol), HOBt(104mg, 0.48mmol) 및 15mL DMF를 50mL 1-구 병에 첨가하였다. DIPEA(330uL, 2.0mmol)를 첨가하고, 첨가 후 실온으로 가온하여 3시간 동안 반응시켰다. HPLC로 모니터링하면서, 반응이 종료된 후에, 반응 용액을 고성능 액상으로 정제하여 화합물 10e의 제조 용액을 얻고, 이를 동결건조하여 10e(188 mg)를 수득하였다; LC-MS: [M+H]+　=1261.5.
단계 6: 화합물 10A
10e(100mg, 0.08mmol), 브롬화아연(360mg, 1.6mmol) 및 5mL 니트로메탄을 25mL 1-구 플라스크에 첨가하고 40℃에서 1시간 동안 반응시켰다. HPLC로 모니터링하면서, 반응이 종료된 후에, 감압 농축하여 용매를 제거하고 조 생성물을 얻었다. 조 생성물을 고성능 액상으로 정제하여 생성물 제조 용액을 얻고, 이를 동결건조하여 고체 화합물 10A(61 mg)를 수득하였다; LC-MS: [M+H]+　=1105.4.
실시예 17
화합물 10B의 합성:
Figure pct00043
실시예 16의 합성 경로를 참조하여 10B(75mg)를 수득하였다; LC-MS: [M+H]+　=1105.4.
실시예 18
화합물 11A의 합성:
Figure pct00044
단계 1: 화합물 11a
M1(6g, 16.3mmol), THF 100mL 및 p-톨루엔설폰산 일수화물(0.31g, 1.63mmol)을 250mL 1-구 플라스크에 첨가하여 교반한 다음 0℃로 냉각하고, 2-하이드록시-2-사이클로부틸 벤질 아세테이트(Journal of Medicinal Chemistry, 2013, 56(13), 5541-5552에 공개된 방법을 참조하여 합성)(6.7g, 32.6mmol)를 적가하고, 적가 후 반응에 따라 자연적으로 실온으로 가열되고(반응은 약 2 내지 4시간) TLC로 모니터링하였다. 반응 종료 후, 포화 NaHCO3 용액을 첨가하고 에틸 아세테이트로 추출한 후, 포화 염화나트륨 용액으로 세척하고 무수 황산나트륨으로 건조한 뒤 여과하고 농축하였다. 잔류물을 실리카겔 컬럼(PE:EA=10:1-5:1-2:1)으로 정제하여 11a(5.1g)를 62%의 수율로 수득하였다; LC-MS: [M+H]+　=515.7.
단계 2: 화합물 11b
11a(4g, 7.8mmol) 및 10mL DMF를 25mL 1-구 플라스크에 첨가하고, 0℃에서 교반한 다음, DBU(1.2g, 8.0mmol)를 첨가하고, 1시간 동안 반응시킨 후, TLC로 모니터링하여 Fmoc 탈보호가 완료되었으면, 따로 보관하였다;
다른 25mL 1-구 병에 M4(3.3g, 8.0mmol), PyBOP(5.2g, 10.0mmol), HOBt(1.35g, 10.0mmol) 및 10mL DMF를 첨가하였다. 빙수조 하에 DIPEA(1.63mL, 10.0mmol)를 첨가하여 40분간 교반한 후, 상기 반응 용액을 반응 플라스크에 첨가하고 반응물을 실온으로 승온시켰다. HPLC로 모니터링하면서, 반응이 종료된 후에, 반응 용액을 제조 액상으로 정제하여 생성물 제조 용액을 얻었다. 제조 용액을 디클로로메탄으로 추출하고, 포화 염화나트륨 용액으로 세척한 뒤, 무수 황산나트륨으로 건조하고, 여과한 다음 여액을 감압 농축하여 2.3g 고체를 42%의 수율로 수득하였다; LC-MS: [M+H]+　=688.3.
단계 3: 화합물 11c
11b(2.0g, 2.9mmol)를 25mL 1-구 플라스크에 첨가하고 25mL DMF를 용해시킨 후, 2.0g 5% Pd/C를 첨가하여 3시간 동안 수소화 반응시킨 후, 반응 종료 후 여과하여 여액을 얻고 정제 반응없이 다음 단계에 직접 사용하였다.
단계 4: 화합물 11d
조 생성물 11c를 빙수조에 넣고 DIPEA(516uL, 3.0mmol)를 첨가한 후 M3(1.7g, 2.9mmol)을 첨가하고, 첨가 후 실온으로 승온시켜 2시간 동안 반응시켰다. 반응을 HPLC로 모니터링하고, 반응 용액을 고성능 액상으로 정제하여 제조 용액을 얻고, 이를 동결건조하여 11d(934mg)를 수득하였다; LC-MS: [MH]-　=842.4.
단계 5: 화합물 11e
11d(800mg, 0.96mmol), M5(480mg, 0.96mmol), PyBOP(500mg, 0.96mmol), HOBt(208mg, 0.96mmol) 및 30mL DMF를 50mL 1-구 병에 첨가하고 DIPEA(660uL, 4.0 mmol)를 첨가한 다음, 실온으로 가온하여 4시간 동안 반응시켰다. HPLC로 모니터링하면서, 반응이 종료된 후에, 반응 용액을 고성능 액상으로 정제하여 화합물 11e의 제조 용액을 얻고, 이를 동결건조하여 11e(401 mg)를 수득하였다; LC-MS: [M+H]+　=1261.4.
단계 6: 화합물 11A
11e(150mg, 0.12mmol), 브롬화아연(532mg, 2.4mmol) 및 10mL 니트로메탄을 25mL 1-구 플라스크에 첨가하고 40℃에서 1시간 동안 반응시켰다. HPLC로 모니터링하면서, 반응이 종료된 후에, 감압 농축하여 용매를 제거하고 조 생성물을 얻었다. 조 생성물을 고성능 액상으로 정제하여 생성물 제조 용액을 얻고, 이를 동결건조하여 고체 화합물 11A(86 mg)를 수득하였다; LC-MS: [M+H]+　=1105.4.
실시예 19
화합물 11B의 합성
Figure pct00045
실시예 18의 합성 경로에 따라 화합물 11B(50mg)를 수득하였다. LC-MS: [M+H]+　1105.4.
실시예 20
화합물 12A의 합성:
Figure pct00046
단계 1: 화합물 12a
M1(6g, 16.3mmol), THF 100mL 및 p-톨루엔설폰산 일수화물(0.31g, 1.63mmol)을 250mL 1-구 플라스크에 첨가하여 교반한 다음 0℃로 냉각하고, 3-하이드록시-2-사이클로부틸 벤질 프로피오네이트(특허 WO2009011285A1에 공개된 방법을 참조하여 제조)(7.2g, 32.6mmol)를 적가하고, 적가 후 반응을 위해 자연적으로 온도를 실온으로 상승시키고(반응은 약 2 내지 4시간) TLC로 모니터링하였다. 반응 종료 후, 포화 NaHCO3 용액을 첨가하고 에틸 아세테이트로 추출한 후, 포화 염화나트륨 용액으로 세척하고 무수 황산나트륨으로 건조한 뒤 여과하고 농축하였다. 잔류물을 실리카겔 컬럼(PE:EA=10:1-5:1-2:1)으로 정제하여 12a(4.5g)를 52%의 수율로 수득하였다; LC-MS: [M+H]+　=529.4.
단계 2: 화합물 12b
12a(4g, 7.6mmol) 및 10mL DMF를 25mL 1-구 플라스크에 첨가하여 0℃에서 교반한 후 DBU(1.2g, 8.0mmol)를 첨가하고 1시간 동안 반응시킨 다음, TLC로 모니터링하여 Fmoc 탈보호가 완료되었으면 따로 보관하였다;
다른 25mL 1-구 병에 M4(3.2g, 7.6mmol), PyBOP(4.7g, 9.0mmol), HOBt(1.22g, 9.0mmol) 및 10mL DMF를 첨가하고, 빙수조 하에 DIPEA(1.49mL, 0.9mmol)를 첨가한 다음, 30분 동안 교반을 계속하고, 상기 반응 용액을 반응 플라스크에 첨가하고, 반응을 실온으로 승온시켰다. HPLC로 모니터링하면서, 반응이 종료된 후에, 반응 용액을 제조 액상으로 정제하여 생성물 제조 용액을 얻었다. 제조 용액을 디클로로메탄으로 추출하고, 포화 염화나트륨 용액으로 세척한 뒤, 무수 황산나트륨으로 건조하고, 여과한 다음, 여액을 감압 농축하여 2.0g 고체를 37%의 수올로 수득하였다; LC-MS: [M+H]+　=702.8.
단계 3: 화합물 12c
12b(1.0g, 1.43mmol)를 25mL 1-구 플라스크에 첨가하고 DMF 15mL를 용해시킨 후, 1.0g 5% Pd/C를 첨가하여 1.5시간 동안 수소화 반응시킨 후, 반응 종료 후 여과하여 여액을 얻고, 정제없이 직접 사용하였다. 1 단계 반응.
단계 4: 화합물 12d
조 생성물 12c를 빙수조에 넣고 DIPEA(258uL, 1.5mmol)를 첨가한 후, M3(825mg, 1.43mmol)을 첨가하고, 첨가 후 실온으로 승온시켜 1시간 동안 반응시켰다. 반응을 HPLC로 모니터링하고, 반응 용액을 고성능 액상으로 정제하여 제조 용액을 얻었다. 제조 용액을 동결건조하여 12d(522mg)를 수득하였다. LC-MS: [MH]-　=856.4.
단계 5: 화합물 12e
12d(400mg, 0.47mmol), M5(240mg, 0.47mmol), PyBOP(250mg, 0.47mmol), HOBt(101mg, 0.47mmol) 및 15mL DMF를 50mL 1-구 병에 첨가하고, DIPEA(330uL, 2.0mmol)를 첨가한 후 실온으로 가온하여 3시간 동안 반응시켰다. HPLC로 모니터링하면서, 반응이 종료된 후에, 반응 용액을 고성능 액상으로 정제하여 화합물 12e의 제조 용액을 얻고, 이를 동결건조하여 12e(198 mg)를 수득하였다; LC-MS: [M+H]+　=1275.4.
단계 6: 화합물 12A
12e(100mg, 0.08mmol), 브롬화아연(360mg, 1.6mmol) 및 5mL 니트로메탄을 25mL 1-구 플라스크에 첨가하고 40℃에서 1시간 동안 반응시켰다. HPLC로 모니터링하면서, 반응이 종료된 후에, 감압 농축하여 용매를 제거하고 조 생성물을 얻었다. 조 생성물을 고성능 액상으로 정제하여 생성물 제조 용액을 얻고, 이를 동결건조하여 고체 화합물 12A(55 mg)를 수득하였다; LC-MS: [M+H]+　=1119.4.
실시예 21
화합물 12B의 합성:
Figure pct00047
실시예 20의 합성 경로를 참조하여 12B(50 mg)를 수득하였다; LC-MS: [M+H]+　=1119.4.
실시예 22
화합물 13A의 합성:
Figure pct00048
단계 1: 화합물 13a
M1(6g, 16.3mmol), 100mL THF 및 p-톨루엔설폰산 일수화물(0.31g, 1.63mmol)을 250mL 1-구 플라스크에 첨가하여 교반한 다음 0℃로 냉각하고, 2-하이드록시-2-사이클로펜틸 벤질 아세테이트(Journal of Medicinal Chemistry, 2013, 56(13), 5541-5552에 공개된 방법을 참조하여 합성)(7.2g, 32.6mmol)를 적가하고, 적가 후 반응을 위해 자연적으로 실온으로 상승시키고(반응은 약 2 내지 4시간) TLC로 모니터링하였다. 반응 종료 후, 포화 NaHCO3 용액을 첨가하고 에틸 아세테이트로 추출한 후, 포화 염화나트륨 용액으로 세척하고 무수 황산나트륨으로 건조한 뒤 여과하고 농축하였다. 잔류물을 실리카겔 컬럼(PE:EA=10:1-5:1-2:1)으로 정제하여 13a(4.6g)를 53%의 수율로 수득하였다; LC-MS: [M+H]+　=529.5.
단계 2: 화합물 13b
13a(4g, 7.6mmol) 및 10mL DMF를 25mL 1-구 플라스크에 첨가하여 0℃에서 교반한 후 DBU(1.17g, 7.8mmol)를 첨가하고 1시간 동안 반응시킨 다음, TLC로 모니터링하여 Fmoc 탈보호가 완료되었으면 따로 보관하였다;
다른 25mL 1-구 병에 M4(3.14g, 7.6mmol), PyBOP(4.42g, 8.5mmol), HOBt(1.15g, 8.5mmol) 및 10mL DMF를 첨가하고 빙수조 하에 DIPEA(1.39mL, 0.85mmol)를 첨가한 뒤, 30분 동안 교반을 계속하고, 상기 반응 용액을 반응 플라스크에 첨가하고, 반응물을 실온으로 승온시켰다. HPLC로 모니터링하면서, 반응이 종료된 후에, 반응 용액을 제조 액상으로 정제하여 생성물 제조 용액을 얻었다. 제조 용액을 디클로로메탄으로 추출하고, 포화 염화나트륨 용액으로 세척한 후, 무수 황산나트륨으로 건조하고, 여과한 뒤, 여액을 감압 농축하여 2.1g 고체를 39%의 수율로 수득하였다; LC-MS: [M+H]+　=702.8.
단계 3: 화합물 13c
13b(1.5g, 1.87mmol)를 25mL 1-구 플라스크에 첨가하고 DMF 25mL를 용해시킨 후, 1.5g 5% Pd/C를 첨가하여 3시간 동안 수소화 반응시킨 후, 반응 종료 후 여과하여 여액을 얻고 정제 반응없이 다음 단계에 직접 사용하였다.
단계 4: 화합물 13d
조 생성물 13c를 빙수조에 넣고 DIPEA(333uL, 1.93mmol)를 첨가한 후, M3(1.1g, 1.87mmol)을 첨가하고, 첨가 후 실온으로 승온시켜 1시간 동안 반응시켰다. 반응을 HPLC로 모니터링하고, 반응 용액을 고성능 액상으로 정제하여 제조 용액을 얻었다. 제조 용액을 동결건조하여 13d(519mg)를 수득하였다. LC-MS: [MH]-　=856.6.
단계 5: 화합물 13e
13d(400mg, 0.47mmol), M5(240mg, 0.48mmol), PyBOP(250mg, 0.48mmol), HOBt(103mg, 48mmol) 및 15mL DMF를 50mL 1-구 병에 첨가하고 빙수조 하에 DIPEA(330uL, 2.0mmol)를 첨가한 후 실온으로 가온하여 4시간 동안 반응시켰다. HPLC로 모니터링하면서, 반응이 종료된 후에, 반응 용액을 고성능 액상으로 정제하여 화합물 13e의 제조 용액을 얻고, 이를 동결건조하여 13e(187 mg)를 수득하였다; LC-MS: [M+H]+　=1275.5.
단계 6: 화합물 13A
13e(100mg, 0.08mmol), 브롬화아연(355mg, 0.16mmol) 및 5mL 니트로메탄을 25mL 1-구 플라스크에 첨가하고 40℃에서 1시간 동안 반응시켰다. HPLC로 모니터링하면서, 반응이 종료된 후에, 감압 농축하여 용매를 제거하고 조 생성물을 얻었다. 조 생성물을 고성능 액상으로 정제하여 생성물 제조 용액을 얻고, 이를 동결건조하여 고체 화합물 13A(60 mg)를 수득하였다; LC-MS: [M+H]+　=1119.6.
실시예 23
화합물 13B의 합성:
Figure pct00049
실시예 22의 합성 경로를 참조하여 13B(51mg)를 수득하였다; LC-MS: [M+H]+　=1119.6.
실시예 24
화합물 14A의 합성:
Figure pct00050
단계 1: 화합물 14a
M1(6g, 16.3mmol), THF 100mL 및 p-톨루엔설폰산 일수화물(0.31g, 1.63mmol)을 1-구 플라스크에 첨가하여 교반한 다음 0℃로 냉각하고, 3-하이드록시-2-사이클로펜틸 벤질 프로피오네이트(특허 WO2009011285A1에 공개된 방법을 참조하여 합성)(7.6g, 32.6mmol)를 적가하고, 적가 후, 반응을 위해 자연적으로 온도를 실온으로 상승시키고(반응은 약 2 내지 4시간) TLC로 모니터링하였다. 반응 종료 후, 포화 NaHCO3 용액을 첨가하고 에틸 아세테이트로 추출한 후, 포화 염화나트륨 용액으로 세척하고 무수 황산나트륨으로 건조한 뒤 여과하고 농축하였다. 잔류물을 실리카겔 컬럼(PE:EA=10:1-5:1-2:1)으로 정제하여 14a(4.4g)를 49%의 수율로 수득하였다; LC-MS: [M+H]+　=543.6.
단계 2: 화합물 14b
14a(4g, 7.4mmol) 및 10mL DMF를 25mL 1-구 플라스크에 첨가하고, 0℃에서 교반한 다음, DBU(1.2g, 8.0mmol)를 첨가하여 1시간 동안 반응시키고, TLC로 모니터링하여 Fmoc 탈보호가 완료되었으면, 따로 보관하였다;
다른 25mL 1-구 병에 M4(3.1g, 7.4mmol), PyBOP(4.6g, 8.8mmol), HOBt(1.19g, 8.8mmol) 및 10mL DMF를 첨가하였다. 빙수조 하에 DIPEA(1.49mL, 9.0mmol)를 첨가하고, 30분 동안 교반을 계속한 후, 상기 반응 용액을 반응 플라스크에 첨가하고, 반응물을 실온으로 승온시켰다. HPLC로 모니터링하면서, 반응이 종료된 후에, 반응 용액을 제조 액상으로 정제하여 생성물 제조 용액을 얻었다. 제조 용액을 디클로로메탄으로 추출하고, 포화 염화나트륨 용액으로 세척한 뒤, 무수 황산나트륨으로 건조하고, 여과한 다음, 여액을 감압 농축하여 2.6g 고체를 49%의 수율로 수득하였다; LC-MS: [M+H]+　=716.4.
단계 3: 화합물 14c
14b(1.0g, 1.4mmol)를 25mL 1-구 병에 첨가하고 15mL DMF를 용해시킨 후, 1.0g 5% Pd/C를 첨가하여 1.5시간 동안 수소화 반응시킨 다음, 반응 종료 후 여과하여 여액을 얻고 정제없이 그대로 사용하였다. 1 단계 반응.
단계 4: 화합물 14d
조 생성물 14c를 빙수조에 넣고 DIPEA(248uL, 1.5mmol)를 첨가한 후, M3(808mg, 1.4mmol)을 첨가하고, 첨가 후 실온으로 승온시켜 1시간 동안 반응시켰다. HPLC로 모니터링하면서, 반응이 종료된 후에, 반응 용액을 고성능 액상으로 정제하여 제조 용액을 얻고, 이를 동결건조하여 14d(500 mg)를 수득하였다; LC-MS: [MH]-　=870.5.
단계 5: 화합물 14e
14d(400mg, 0.46mmol), M5(235mg, 0.46mmol), PyBOP(245mg, 0.46mmol), HOBt(99mg, 0.46mmol) 및 15mL DMF를 50mL 1-구 병에 첨가하고 DIPEA(331uL, 2.0mmol)를 첨가한 뒤 실온으로 가온하여 3시간 동안 반응시켰다. HPLC로 모니터링하면서, 반응이 종료된 후에, 반응 용액을 고성능 액상으로 정제하여 화합물 14e의 제조 용액을 얻고, 이를 동결건조하여 14e(146 mg)를 수득하였다; LC-MS: [M+H]+　=1289.5.
단계 6: 화합물 14A
14e(100mg, 0.08mmol), 브롬화아연(360mg, 1.6mmol) 및 5mL 니트로메탄을 25mL 1-구 플라스크에 첨가하고 40℃에서 1시간 동안 반응시켰다. HPLC로 모니터링하면서, 반응이 종료된 후에, 감압 농축하여 용매를 제거하고 조 생성물을 얻었다. 조 생성물을 고성능 액상으로 정제하여 생성물 제조 용액을 얻고, 이를 동결건조하여 고체 화합물 14A(52 mg)를 수득하였다; LC-MS: [M+H]+　=1133.4.
실시예 25
화합물 14B의 합성:
Figure pct00051
실시예 24의 합성 경로를 참조하여 14B(48mg)를 수득하였다; LC-MS: [M+H]+　=1133.4.
실시예 26
화합물 15A 및 15B의 합성:
Figure pct00052
단계 1: 화합물 15a
M1(10g, 27.1mmol), 2-하이드록시-부티르산 벤질 에스테르(문헌 Chemical Communications, 2019, 55(53), 7699-7702에 공개된 방법을 참조하여 제조)(10.5g, 54.3mmol), 아세트산아연(9.96g, 54.3mmol) 및 100mL 톨루엔을 250mL 1-구 병에 첨가하고, 100℃로 가열하여 4시간 동안 반응시켰다. 반응 종료 후, 온도를 실온으로 낮추고 여과로 불용성 물질을 제거한 뒤, 여액을 농축하여 조 생성물을 얻었다. 조 생성물을 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(PE:EA=10:1-5:1-2:1)로 정제하여 목적 생성물 5.67g을 42%의 수율로 수득하였다. LC-MS: [M+H]+　=503.5.
단계 2: 화합물 15b
15a(5g, 9.95mmol) 및 15mL DMF를 50mL 1-구 플라스크에 첨가하였다. 용해시킨 후, 빙수조에 DBU(1.68g, 11mmol)를 첨가하여 1시간 동안 반응시킨 것을 반응 용액 ①로 하였다.
다른 50mL 1-구 병에 M4(4.1g, 10.0mmol), PyBOP(5.75g, 11mmol), HOBt(1.49g, 11mmol) 및 10mL DMF를 첨가하였다. 용해시킨 후, 빙수조 하에 DIPEA(1.82mL, 11mmol)를 첨가하여 40분 동안 반응을 계속한 다음, 반응 용액 ①을 첨가하고, 실온으로 가온하여 2시간 동안 반응시켰다. 반응 진행을 HPLC로 모니터링하였다. 반응 종료 후, 반응 용액을 고성능 액상으로 정제하여 제조 용액을 얻었다. 제조 용액을 디클로로메탄으로 추출하고 포화 염화나트륨 용액으로 세척한 후 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과한 뒤 농축하여 고체 4.6g을 68%의 수율로 수득하였다; LC-MS: [M+H]+　=676.7.
단계 3: 화합물 15d
15b(2.0g, 2.96mmol)를 25mL 1-구 플라스크에 첨가하고 15mL DMF를 용해시킨 후, 2.0g 5% Pd/C를 첨가하여 2시간 동안 수소화 반응시킨 다음, 반응 종료 후 여과하고, 여액을 빙수조에 넣고 DIPEA(496uL, 3.0mmol)를 첨가하고 M3(1.7g, 2.96mmol)을 첨가한 뒤, 첨가 후 실온으로 승온시켜 1시간 동안 반응시켰다. HPLC로 모니터링하면서, 반응이 종료된 후에, 반응 용액을 고성능 액상으로 정제하여 제조 용액을 얻었다. 제조 용액을 동결건조하여 1120.0 mg의 생성물을 45%의 수율로 수득하였다; LC-MS: [MH]-　= 830.3.
단계 4: 화합물 15e
15d(500mg, 0.60mmol), M5(321mg, 0.60mmol), PyBOP(469mg, 0.90mmol), HOBt(121mg, 0.90mmol) 및 15mL DMF를 50mL 1-구 병에 첨가하였다. DIPEA(446uL, 2.7mmol)를 첨가하고, 첨가 후 실온으로 가온하여 2시간 동안 반응시켰다. HPLC로 모니터링하면서, 반응이 종료된 후에, 반응 용액을 고성능 액상으로 정제하여 화합물 15e-1 및 화합물 15e-2의 제제를 얻었다. 제제를 동결건조하여 138 mg의 화합물 15e-1(LC-MS: [M+H]+　=1249.5); 및 140mg의 화합물 15e-2(LC-MS: [M+H]+　=1249.5)를 수득하였다.
단계 5: 화합물 15A
Figure pct00053
15e-1(100mg, 0.08mmol), 브롬화아연(360mg, 1.6mmol) 및 5mL 니트로메탄을 25mL 1-구 플라스크에 첨가하고 40℃에서 1시간 동안 반응시켰다. HPLC로 모니터링하면서, 반응이 종료된 후에, 감압 농축하여 용매를 제거하고 조 생성물을 얻었다. 조 생성물을 고성능 액상으로 정제하여 생성물 제조 용액을 얻고, 이를 동결건조하여 고체(59mg)를 수득하였다; LC-MS: [M+H]+　=1093.4.
단계 6: 화합물 15B
Figure pct00054
15e-2(100mg, 0.08mmol), 브롬화아연(360mg, 1.6mmol) 및 5mL 니트로메탄을 25mL 1-구 플라스크에 첨가하고 40℃에서 1시간 동안 반응시켰다. HPLC로 모니터링하면서, 반응이 종료된 후에, 감압 농축하여 용매를 제거하고 조 생성물을 얻었다. 조 생성물을 고성능 액상으로 정제하여 생성물 제조 용액을 얻고, 이를 동결건조하여 고체(60mg)를 수득하였다; LC-MS: [M+H]+　=1093.4
실시예 27
화합물 16A 및 16B의 합성:
Figure pct00055
실시예 26의 합성 경로를 참조하여 16A(55mg)를 수득하였다; LC-MS: [M+H]+　=1093.4.
Figure pct00056
실시예 26의 합성 경로를 참조하여 16B(54mg)를 수득하였다; LC-MS: [M+H]+　=1093.4.
실시예 28
화합물 17A 및 17B의 합성:
Figure pct00057
단계 1: 화합물 17a
M1(10g, 27.1mmol), 2-하이드록시-페닐프로피온산 벤질 에스테르(Nature Communications, 2020.11(1), 56의 공개된 방법 참조)(14.7g, 54.3mmol), 아세트산 아연(9.96g, 54.3mmol) 및 100mL 톨루엔을 첨가하고 100℃로 가열하여 4시간 동안 반응시켰다. 반응 종료 후, 온도를 실온으로 낮추고 여과로 불용성 물질을 제거하고 여액을 농축하여 조 생성물을 얻었다. 조 생성물을 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(PE:EA=10:1-5:1-2:1)로 정제하여 목적 생성물 6.13g을 40%의 수율로 수득하였다. LC-MS: [M+H]+ =565.6.
단계 2: 화합물 17b
17a(5g, 8.86mmol) 및 15mL DMF를 50mL 1-구 플라스크에 첨가하였다. 용해시킨 후, 빙수조에 DBU(1.53g, 10mmol)를 첨가하고 1시간 동안 반응시킨 것을 반응 용액 ①로 하였다;
다른 50mL 1-구 병에 M4(3.6g, 8.86mmol), PyBOP(5.23g, 10mmol), HOBt(1.36g, 10mmol) 및 10mL DMF를 첨가하였다. 용해시킨 후, 빙수조 하에 DIPEA(1.65mL, 10mmol)를 첨가하여 30분 동안 반응을 계속한 다음, 반응 용액 ①을 첨가하고, 2시간 동안 실온으로 가온하였다. 반응 진행을 HPLC로 모니터링하였다. 반응 종료 후, 반응 용액을 고성능 액상으로 정제하여 제조 용액을 얻었다. 제조 용액을 디클로로메탄으로 추출하고 포화 염화나트륨 용액으로 세척한 후 무수 황산나트륨으로 건조하고, 여과한 뒤, 농축하여 고체(5.0g)를 77%의 수율로 수득하였다. LC-MS: [M+H]+　=738.3.
단계 3: 화합물 17d
17b(3.0g, 4.07mmol)를 25mL 1-구 플라스크에 첨가하고 15mL DMF를 용해시킨 후, 3.0g 5% Pd/C를 첨가하여 2시간 동안 수소화 반응시킨 다음, 반응이 완료되면 여과하고 여액을 빙수조에 넣고 DIPEA(744uL, 4.5mmol)를 첨가한 후 M3(2.34g, 4.07mmol)을 첨가하고, 첨가 후 실온으로 승온시켜 1시간 동안 반응시켰다. HPLC로 모니터링하면서, 반응이 종료된 후에, 반응 용액을 고성능 액상으로 정제하여 제조 용액을 얻었다. 제조 용액을 동결건조하여 1.2g의 생성물을 33%의 수율로 수득하였다; LC-MS: [MH]-　= 892.4.
단계 4: 화합물 17e
17d(500mg, 0.56mmol), M5(300mg, 0.56mmol), PyBOP(438mg, 0.84mmol), HOBt(113mg, 0.84mmol) 및 15mL DMF를 50mL 1-구 병에 첨가하고 DIPEA(330uL, 2.0mmol)를 첨가한 후, 실온으로 가온하고 2시간 동안 반응시켰다. HPLC로 모니터링하면서, 반응이 종료된 후에, 반응 용액을 고성능 액상으로 정제하여 화합물 17e-1 및 화합물 17e-2의 제제를 얻었다. 제제를 동결건조하여 156 mg의 화합물 17e-1(LC-MS: [M+H]+　=1311.4); 및 150 mg의 화합물 17e-2(LC-MS: [M+H]+　=1311.7)를 수득하였다.
단계 5: 화합물 17A
Figure pct00058
17e-1(100mg, 0.08mmol), 브롬화아연(360mg, 1.6mmol) 및 5mL 니트로메탄을 25mL 1-구 플라스크에 첨가하여 40℃에서 1시간 동안 반응시켰다. HPLC로 모니터링하면서, 반응이 종료된 후에, 감압 농축하여 용매를 제거하고 조 생성물을 얻었다. 조 생성물을 고성능 액상으로 정제하여 생성물 제조 용액을 얻고, 이를 동결건조하여 고체(43mg)를 수득하였다; LC-MS: [M+H]+　=1155.4.
단계 6: 화합물 17B
Figure pct00059
17e-2(100mg, 0.08mmol), 브롬화아연(360mg, 1.6mmol) 및 5mL 니트로메탄을 25mL 1-구 플라스크에 첨가하고 40℃에서 1시간 동안 반응시켰다. HPLC로 모니터링하면서, 반응이 종료된 후에, 감압 농축하여 용매를 제거하고 조 생성물을 얻었다. 조 생성물을 고성능 액상으로 정제하여 생성물 제조 용액을 얻고, 이를 동결건조하여 고체(40 mg)를 수득하였다; LC-MS: [M+H]+　=1155.4.
실시예 29
화합물 18A 및 18B의 합성:
Figure pct00060
실시예 28의 합성 경로를 참조하여 화합물 18A(54mg)를 수득하였다; LC-MS: [M+H]+　=1155.4.
Figure pct00061
실시예 28의 합성 경로를 참조하여 18B(55mg)를 수득하였다; LC-MS: [M+H]+　=1155.4.
실시예 30
화합물 19A 및 19B의 합성:
Figure pct00062
단계 1: 화합물 19a
M1(10g, 27.1mmol), 2-사이클로프로필-2-하이드록시아세테이트 벤질 에스테르(특허 WO2020244657A1에 공개된 방법을 참조하여 제조)(11.2g, 54.3mmol), 아세트산아연 (9.96g, 54.3mmol) 및 100mL 톨루엔을 첨가하고 100℃로 가열하여 4시간 동안 반응시켰다. 반응 종료 후, 온도를 실온으로 낮추고 여과로 불용성 물질을 제거한 다음, 여액을 농축하여 조 생성물을 얻었다. 조 생성물을 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(PE:EA=10:1-5:1-2:1)로 정제하여 목적 생성물 4.97g을 36%의 수율로 수득하였다. LC-MS: [M+H]+　=515.2.
단계 2: 화합물 19b
19a(4g, 7.8mmol) 및 10mL DMF를 50mL 1-구 플라스크에 첨가하였다. 용해시킨 후, 빙수조 하에 DBU(1.42g, 9.3mmol)를 첨가하고 1시간 동안 반응시킨 것을 반응 용액 ①로 하였다;
다른 50mL 1-구 병에 M4(3.2g, 7.8mmol), PyBOP(4.5g, 8.6mmol), HOBt(1.16g, 8.6mmol) 및 10mL DMF를 첨가하였다. 용해시킨 후, DIPEA(1.65mL, 10mmol)를 첨가하고 30분간 반응을 계속 진행한 후 반응 용액 ①을 첨가하고 실온으로 가온하여 2시간 동안 반응시켰다. 반응 진행을 HPLC로 모니터링하였다. 반응 종료 후, 반응 용액을 고성능 액상으로 정제하여 제조 용액을 얻었다. 제조 용액을 디클로로메탄으로 추출하고 포화 염화나트륨 용액으로 세척한 후 무수 황산나트륨으로 건조하고, 여과한 뒤, 농축하여 고체(4.2g)를 78%의 수율로 수득하였다. LC-MS: [M+H]+　=688.3.
단계 3: 화합물 19d
19b(1000mg, 1.45mmol)를 25mL 1-구 플라스크에 첨가하고 15mL DMF를 용해시킨 후, 1000mg 5% Pd/C를 첨가하여 2시간 동안 수소화 반응시킨 다음, 반응이 완료되면 여과하고 여액을 빙수조에 넣고, DIPEA(248uL, 1.5mmol)에 이어 M3(720mg, 1.45mmol)을 첨가한 후, 실온으로 승온하여 1시간 동안 반응시켰다. 반응을 HPLC로 모니터링하고 반응 용액을 고성능 액상으로 정제하여 제조 용액을 얻었다. 제조 용액을 동결건조하여 503 mg의 생성물을 41%의 수율로 수득하였다; LLC-MS: [MH]-　=842.3.
단계 4: 화합물 19e-1 및 19e-2
19d(500mg, 0.59mmol), M5(317mg, 0.59mmol), PyBOP(339mg, 0.65mmol), HOBt(88mg, 0.86mmol) 및 10mL DMF를 50mL 1-구 병에 첨가하고 빙수조 하에 DIPEA(292uL, 1.77mmol)를 첨가한 후, 실온으로 승온시키고 2시간 동안 반응시켰다. HPLC로 모니터링하면서, 반응이 종료된 후에, 반응 용액을 고성능 액상으로 정제하여 화합물 19e-1 및 화합물 19e-2의 제조 용액을 얻었다. 제조 용액을 동결건조하여 112 mg의 화합물 19e-1(LC-MS: [M+H]+　=1261.5); 및 131 mg의 화합물 19e-2(LC-MS: [M+H]+　=1261.5)를 수득하였다.
단계 5: 화합물 19A
Figure pct00063
19e-1(100mg, 0.079mmol), 브롬화아연(357mg, 1.59mmol) 및 5mL 니트로메탄을 25mL 1-구 플라스크에 첨가하고 40℃에서 1시간 동안 반응시켰다. HPLC로 모니터링하면서, 반응이 종료된 후에, 감압 농축하여 용매를 제거하고 조 생성물을 얻었다. 조 생성물을 고성능 액상으로 정제하여 생성물 제조 용액을 얻고, 이를 동결건조하여 55 mg 고체를 수득하였다; LC-MS: [M+H]+　=1105.4.
단계 6: 화합물 19B
Figure pct00064
19e-2(100mg, 0.079mmol), 브롬화아연(357mg, 1.59mmol) 및 5mL 니트로메탄을 25mL 1-구 플라스크에 첨가하고 40℃에서 1시간 동안 반응시켰다. HPLC로 모니터링하면서, 반응이 종료된 후에, 감압 농축하여 용매를 제거하고 조 생성물을 얻었다. 조 생성물을 고성능 액상으로 정제하여 생성물 제조 용액을 얻고, 이를 동결건조하여 58 mg 고체를 수득하였다; LC-MS: [M+H]+　=1105.4.
실시예 31
화합물 20A 및 20B의 합성:
Figure pct00065
단계 1: 화합물 20a
M1(10g, 27.1mmol), 2-하이드록시-사이클로프로필프로피온산 벤질 에스테르(특허 WO2020063676A에 공개된 방법을 참조하여 합성)(12.0g, 54.3mmol), 아세트산아연(9.96g, 54.3mmol) 및 100mL의 톨루엔을 250mL 1-구 병에 첨가하고, 4시간 동안 100℃로 가열하였다. 반응 종료 후, 온도를 실온으로 낮추고 여과로 불용성 물질을 제거한 뒤, 여액을 농축하여 조 생성물을 얻었다. 조 생성물을 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(PE:EA=10:1-5:1-2:1)로 정제하여 목적 생성물 5.09g을 수득하였다; LC-MS: [M+H]+　=529.2.
단계 2: 화합물 20b
20a(4g, 7.6mmol) 및 10mL DMF를 50mL 1-구 플라스크에 첨가하였다. 용해시킨 후, 빙수조 하에 DBU(1.39g, 9.1mmol)를 첨가하고 1시간 동안 반응시킨 것을 반응 용액 ①로 하였다;
다른 50mL 1-구 병에 M4(3.12g, 7.6mmol), PyBOP(4.5g, 8.6mmol), HOBt(1.16g, 8.6mmol) 및 10mL DMF를 첨가하였다. 용해시킨 후, DIPEA(1.65mL, 10mmol)를 첨가하고 30분간 반응을 계속 진행한 후 반응 용액 ①을 첨가하고 실온으로 가온하여 2시간 동안 반응시켰다. 반응 진행을 HPLC로 모니터링하였다. 반응 종료 후, 반응 용액을 고성능 액상으로 정제하여 제조 용액을 얻었다. 제조 용액을 디클로로메탄으로 추출하고, 포화 염화나트륨 용액으로 세척한 다음, 무수 황산나트륨으로 건조하고, 여과한 뒤, 농축하여 4.5g 고체를 84%의 수율로 수득하였다; LC-MS: [M+H]+　=702.3.
단계 3: 화합물 20d
20b(1000mg, 1.42mmol)를 25mL 1-구 플라스크에 첨가하고 15mL DMF를 용해시킨 후, 1000mg 5% Pd/C를 첨가하여 2시간 동안 수소화 반응시킨 다음, 반응 종료 후 여과하고 여액을 빙수조에 놓은 뒤, DIPEA(248uL, 1.5mmol)에 이어 M5(708mg, 1.42mmol)를 첨가하고, 첨가 후 실온으로 승온시켜 1시간 동안 반응시켰다. HPLC로 모니터링하면서, 반응이 종료된 후에, 반응 용액을 고성능 액상으로 정제하여 제조 용액을 얻었다. 제조 용액을 동결건조하여 443 mg의 생성물을 36%의 수율로 수득하였다; LC-MS: [MH]-　=856.4.
단계 4: 화합물 20e-1 및 20e-2
20d(400mg, 0.47mmol), 엑사테칸 메실레이트(250mg, 0.47mmol), PyBOP(223mg, 0.56mmol), HOBt(83mg, 0.56mmol) 및 10mL DMF를 50mL 1-구 병에 첨가하고, 빙수조 하에 DIPEA(248uL, 1.5mmol)를 첨가한 뒤, 혼합물을 실온으로 가열하여 2시간 동안 반응시켰다. HPLC로 모니터링하면서, 반응이 종료된 후에, 반응 용액을 고성능 액상으로 정제하여 화합물 20e-1 및 화합물 20e-2의 제조 용액을 얻었다. 제조 용액을 각각 동결건조하여 103 mg의 화합물 20e-1(LC-MS: [M+H]+　=1275.5); 103mg의 화합물 20e-2(LC-MS: [M+H]+　=1275.5)를 수득하였다.
단계 5: 화합물 20A
Figure pct00066
8A(100mg, 0.078mmol), 브롬화아연(352mg, 1.57mmol) 및 5mL 니트로메탄을 25mL 1-구 플라스크에 첨가하고 40℃에서 1시간 동안 반응시켰다. HPLC로 모니터링하면서, 반응이 종료된 후에, 감압 농축하여 용매를 제거하고 조 생성물을 얻었다. 조 생성물을 고성능 액상으로 정제하여 생성물 제조 용액을 얻고, 이를 동결건조하여 고체(51mg)를 수득하였다; LC-MS: [M+H]+　=1119.4.
단계 6: 화합물 20B
Figure pct00067
20e-2(100mg, 0.079mmol), 브롬화아연(357mg, 1.59mmol) 및 5mL 니트로메탄을 25mL 1-구 플라스크에 첨가하고 40℃에서 1시간 동안 반응시켰다. HPLC로 모니터링하면서, 반응이 종료된 후에, 감압 농축하여 용매를 제거하고 조 생성물을 얻었다. 조 생성물을 고성능 액상으로 정제하여 생성물 제조 용액을 얻고, 이를 동결건조하여 고체(47 mg)를 수득하였다; LC-MS: [M+H]+　=1119.4.
실시예 32
화합물 21의 합성:
Figure pct00068
단계 1: 화합물 SM3-1
77087-60-6(100g, 458mmol), 말레산(53.4g, 460mmol), TEA(64mL, 460mmol) 및 1000mL 톨루엔을 2000mL 1-구 플라스크에 첨가하고 100℃에서 5시간 동안 가열하여 반응시켰다. 반응 종료 후, 온도를 실온으로 낮추고 여과로 불용성 물질을 제거한 다음, 여액을 농축하여 조 생성물을 얻었다. 조 생성물을 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(PE:EA=100:1-50:1-20:1)로 정제하여 표제 화합물 75.6g을 수득하였다; LC-MS: [M+H]+　=299.1.
단계 2: 화합물 (R)-2-하이드록시-1,5-글루타르산 tert-부틸 에스테르
172793-31-6(100g, 338mmol) 및 1000mL 물을 2000mL 1-구 플라스크에 첨가하고 아질산나트륨(35g, 507mmol), 진한 황산(32mL, 35mmol)을 차례로 첨가한 뒤 서서히 실온으로 가온한 다음 24시간 동안 반응시켰다. 반응 종료 후 500mL의 에틸 아세테이트로 3회 추출하고, 유기상을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과한 뒤, 감압 농축에 의해 용매를 제거하여 조 생성물을 얻었다. 조 생성물을 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(PE:EA=50:1-30:1-2:1)로 정제하여 목적 생성물 91.2g을 수득하였다; LC-MS: [M+H]+　=261.4.
단계 3: 화합물 SM3
(R)-2-하이드록시-1,5-글루타르산 tert-부틸 에스테르(50g, 192mmol) 및 1000mL 무수 테트라하이드로푸란을 2000mL 1-구 병에 첨가하고 빙수조에서 0℃로 냉각시킨 다음, PPh3(87.7g, 288mmol), DEAD(50.2g, 288mmol) 및 SM3-1(57.3, 192mmol)을 첨가하고 서서히 실온으로 가온하여 13시간 동안 반응시켰다. 반응 종료 후 여과로 불용성 물질을 제거한 뒤, 여액을 농축하여 조 생성물을 얻었다. 조 생성물을 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(PE:EA=50:1-30:1-1:1)로 정제하여 68.6g의 생성물을 수득하였다;
위의 생성물을 500mL 메탄올에 용해시키고 빙수조에서 0℃로 냉각시킨 다음, 이 온도에서 NaOH(64mL, 190mmol, 3M/L)를 적가하고 12시간 동안 온도를 유지한 후, HCl(6M/L)을 가하여 pH 3까지 조절한 다음, 500 mL 디클로로메탄으로 5회 추출하고, 무수 황산나트륨으로 건조한 뒤 여과하고 여액을 감압 농축하였다. 생성된 조 생성물을 컬럼 크로마토그래피(DCM/MeOH=50/1-20/1-2/1)로 정제하여 SM3 50.4g을 수득하였다; LC-MS: [MH]-　=525.5.
단계 4: 화합물 M6
화합물 SM3(50g, 95mmol, 1.0eq), 펜타플루오로페놀(19.2g, 104.5mmol, 1.1eq), DCC(21.5g, 104.5mmol, 1.1eq) 및 THF(600mL)를 2000mL 1-구 플라스크에 첨가한 후, 실온에서 1시간 동안 반응시키고(TLC로 모니터링), 여과하여 불용성 물질을 제거하였다. 반응 용액을 직접 제조하여 정제하고, 제조 용액을 35℃에서 감압 하에 워터 펌프로 농축하여 아세토니트릴을 제거한 후 동결건조하여 화합물 M6(51.9g)을 79%의 수율로 수득하였다; LC-MS: [M+H]+　=693.3.
단계 5: 화합물 21a
1c(1g, 2.36mmol)를 25mL 1-구 플라스크에 첨가하였다. 25mL의 DMF를 용해시킨 후, DIPEA(430uL, 2.6mmol)를 첨가하고 M6(1177mg, 2.36mmol)을 첨가하였다. 첨가 후, 실온으로 가열하고 1시간 동안 반응시켰다. HPLC로 모니터링하면서, 반응이 종료된 후에, 반응 용액을 고성능 액상으로 정제하여 제조 용액을 얻고, 이를 동결건조하여 555 mg의 생성물을 수득하였다; LC-MS: [MH]-　=931.0.
단계 6: 화합물 21b
21a(500mg, 0.54mmol), 엑사테칸 메실레이트 M5(285mg, 0.54mmol), PyBOP(239mg, 0.6mmol), HOBt(239mg, 0.6mmol) 및 10mL DMF를 첨가하고, 빙수조 하에 DIPEA(248uL, 1.5mmol)를 첨가한 뒤, 실온으로 가열하여 2시간 동안 반응시켰다. HPLC로 모니터링하면서, 반응이 종료된 후에, 반응 용액을 고성능 액상으로 정제하여 화합물 21b의 제조 용액을 수득하고, 제조 용액을 동결건조하여 화합물 231 mg을 수득하였다; LC-MS: [M+H]+　=1349.5.
단계 7: 화합물 21
화합물 21b(200mg, 0.1488mmol), 브롬화아연(665mg, 2.96mmol) 및 10mL 니트로메탄을 25mL 1-구 플라스크에 첨가하고, 40℃에서 1시간 동안 반응시켰다. HPLC로 모니터링하면서, 반응이 종료된 후에, 감압 농축하여 용매를 제거하고 조 생성물을 얻었다. 조 생성물을 고성능 액상으로 정제하여 생성물 제조 용액을 얻고, 이를 동결건조하여 고체(103mg)를 수득하였다; LC-MS: [M+H]+　=1137.5.
실시예 33
화합물 22의 합성:
Figure pct00069
화합물 M6 및 3c를 출발 물질로 사용하고 실시예 32의 합성 경로를 참조하여 화합물 22(91 mg)를 수득하였다; LC-MS: [M+H]+　=1165.5.
실시예 34
화합물 23 및 24의 합성:
Figure pct00070
화합물 M6 및 5c를 출발 물질로 사용하고 실시예 32의 합성 경로를 참조하여 102 mg의 화합물 23(LC-MS: [M+H]+　=1151.4); 및 99 mg의 화합물 24(LC-MS: [M+H]+　= 1151.4)을 수득하였다.
실시예 35
화합물 25 및 26의 합성:
Figure pct00071
화합물 M6 및 7c를 출발 물질로 사용하고 실시예 32의 합성 경로를 참조하여 83mg의 화합물 25(LC-MS: [M+H]+　=1205.7); 및 80mg의 화합물 26(LC-MS: [M+H]+　=1205.7)을 수득하였다.
실시예 36
화합물 27 및 28의 합성:
Figure pct00072
화합물 M6 및 19c를 출발 물질로 사용하고 실시예 32의 합성 경로를 참조하여 100 mg의 화합물 27(LC-MS: [M+H]+　= 1177.5); 및 101 mg의 화합물 28(LC-MS: [M+H]+　= 1177.5)을 수득하였다.
실시예 37
화합물 29의 합성:
Figure pct00073
단계 1: 화합물 SM4-1
말레산(50g, 431mmol, 1.0eq), 114559-25-0(110g, 431mmol, 1eq), TEA(263g, 2.16mol, 5eq) 및 톨루엔(2000mL)을 5000mL 1-구 플라스크에 첨가하고 5시간 동안 가열 환류하여 반응시키고(TLC로 모니터링), 여과하여 불용성 물질을 제거하였다. 반응 용액을 직접 감압 하에 회전시켜 용매를 제거하고 잔류물을 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(PE/EA=50/1-20/1-1/1)에 적용하여 SM4-1(64.7g)을 50%의 수율로 수득하였다; LC-MS: [M+H]+　=299.2.
단계 2: 화합물 SM4-2
SM4-1(64g, 215mmol)을 2000mL 1-구 플라스크에 첨가하였다. 1000mL DMF를 용해시킨 후, DIPEA(71mL, 430mmol)에 이어 비에틸렌 글리콜 모노메틸 에테르 메탄설포네이트(111.5g, 220mmol)를 첨가하고, 첨가 후 실온으로 승온시킨 후 2시간 동안 반응시켰다. 반응을 HPLC로 모니터링하고 반응 용액을 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(PE/EA=50/1-20/1-1/1)로 정제하여 59.9g의 생성물을 수득하였다; LC-MS: [M+H]+　=709.4.
단계 3: 화합물 SM4
SM4-2(59g, 83mmol)를 2000mL 1-구 플라스크에 첨가하고 1000mL MeOH를 용해시킨 후, K2CO3(11.75g, 85mmol)을 첨가한 뒤, 첨가 완료 후 반응을 실온에서 4시간 동안 수행하였다. 반응을 HPLC로 모니터링하고 여과로 불용성 물질을 제거하였다. 반응 용액을 직접 제조하여 정제하였다. 제조 용액을 35℃의 감압 수조 하에 워터 펌프로 농축하여 아세토니트릴을 제거하고 동결건조하여 화합물 SM4(27g)를 수득하였다; LC-MS: [MH]-　=693.5.
단계 4: 화합물 M7
화합물 SM4(25g, 36mmol, 1.0eq), 펜타플루오로페놀(7.3g, 40mmol, 1.1eq), DCC(8.2g, 40mmol, 1.1eq) 및 THF(200mL)를 500mL 1-구 플라스크에 첨가하고 실온에서 1시간 동안 반응시킨 뒤(TLC를 사용하여 모니터링), 여과하여 불용성 물질을 제거하였다. 반응 용액을 직접 제조하여 정제하고, 제조 용액을 35℃의 진공 수조에서 농축하여 아세토니트릴을 제거한 후 동결건조하여 화합물 M7(23.3g)을 93%의 수율로 수득하였다; LC-MS: [M+H]+　=695.8.
단계 5: 화합물 29a
1c(1g, 2.36mmol)를 25mL 1-구 플라스크에 첨가하였다. 25mL의 DMF를 용해시킨 후, DIPEA(430uL, 2.6mmol)에 이어 M7(1640mg, 2.36mmol)을 첨가한 다음 실온으로 가열하여 1시간 동안 반응시켰다. HPLC로 모니터링하면서, 반응이 종료된 후에, 반응 용액을 고성능 액상으로 정제하여 제조 용액을 얻고, 이를 동결건조하여 생성물 609 mg을 수득하였다; LC-MS: [MH]- =1098.5.
단계 6: 화합물 29b
29a(500mg, 0.45mmol), 엑사테칸 메실레이트 M5(240mg, 0.45mmol), PyBOP(215mg, 0.54mmol), HOBt(215mg, 0.54mmol) 및 10mL DMF를 첨가하고, 빙수조 하에 DIPEA(248uL, 1.5mmol)를 첨가한 뒤 실온으로 가열하여 2시간 동안 반응시켰다. HPLC로 모니터링하면서, 반응이 종료된 후에, 반응 용액을 고성능 액상으로 정제하여 화합물 29b의 제조 용액을 얻고, 제조 용액을 동결건조하여 화합물 187 mg을 수득하였다; LC-MS: [M+H]+　=1517.6.
단계 7: 화합물 29
화합물 29b(150mg, 0.988mmol), 브롬화아연(223mg, 0.988mmol) 및 10mL 니트로메탄을 25mL 1-구 플라스크에 첨가하고 40℃에서 1시간 동안 반응시켰다. HPLC로 모니터링하면서, 반응이 종료된 후에, 감압 농축하여 용매를 제거하고 조 생성물을 얻었다. 조 생성물을 고성능 액상으로 정제하여 생성물 제조 용액을 얻고, 이를 동결건조하여 고체(114mg)를 수득하였다; LC-MS: [M+H]+　=1517.9.
실시예 38
화합물 30의 합성:
Figure pct00074
화합물 M7 및 3c를 출발 물질로 사용하고 실시예 37의 합성 경로를 참조하여 화합물 30(125 mg)을 수득하였다; LC-MS: [M+H]+　=1445.6.
실시예 39
화합물 31 및 32의 합성:
Figure pct00075
화합물 M7 및 5c를 출발 물질로 사용하고, 실시예 37의 합성 경로를 참조하여 61mg의 화합물 31(LC-MS: [M+H]+　=1431.7); 및 63 mg의 화합물 32(LC-MS: [M+H]+　=1431.7)를 수득하였다.
실시예 40
화합물 33 및 34의 합성:
Figure pct00076
화합물 M7 및 7c를 출발 물질로 사용하고 실시예 37의 합성 경로를 참조하여 60 mg의 화합물 33(LC-MS: [M+H]+　=1485.6); 및 58 mg의 화합물 34(LC-MS: [M+H]+　= 1485.6)를 수득하였다.
실시예 41
화합물 35 및 36의 합성:
Figure pct00077
화합물 M7 및 19c를 출발 물질로 사용하고 실시예 37의 합성 경로를 참조하여, 102 mg의 화합물 35(LC-MS: [M+H]+　=1457.8); 및 102 mg의 화합물 36(LC-MS: [M+H]+　=1457.8)을 수득하였다.
실시예 42
화합물 37의 합성:
Figure pct00078
단계 1: 화합물 SM5-1
화합물 16947-84-5(100g, 295mmol, 1.0eq), DIPEA(50mL, 300mmol), 벤질 브로마이드(51.3g, 300mmol) 및 THF(1000mL)를 2000mL 1-구 플라스크에 첨가하고 실온에서 12시간 동안 반응시킨 뒤(TLC로 모니터링), 여과하여 불용성 물질을 제거하였다. 반응 용액을 직접 감압 하에 회전시켜 용매를 제거하고, 잔류물을 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(PE/EA=50/1-20/1-2/1)에 적용하여 SM5-1(110.1g)을 87%의 수율로 수득하였다; LC-MS: [M+H]+　=429.2.
단계 2: 화합물 SM5-2
화합물 SM5-1(100g, 233.4mmol, 1.0eq) 및 THF(1000mL)를 2000mL 1-구 플라스크에 첨가하고 빙수조에서 0℃로 냉각시킨 후 NaH(37.4g, 933.5mmol), MeI(132.5g, 933.5mmol)를 첨가한 다음, 반응을 0℃에서 24시간 동안 유지하고(TLC로 모니터링), 500mL의 포화 NH4Cl 수용액을 첨가하여 반응을 켄칭하고, 500mL의 에틸 아세테이트 3회 추출하고, 유기상을 무수 황산나트륨으로 건조하고 여과하였다. 여액을 직접 감압 하에 회전시켜 용매를 제거하고 잔류물을 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(PE/EA=100/1-50/1-10/1)에 적용하여 SM5-2(37.1g)를 수득하였다. LC-MS: [M+H]　+　=443.3.
단계 3: 화합물 SM5(문헌 [Org. Lett., 2006, 8, 3387-3390] 참조)
화합물 SM5-2(35g, 79mmol, 1.0eq) 및 DCE(500mL)를 1-구 플라스크에 첨가하고, 팔라듐 디아세테이트(180mg, 0.8mmol), I2(20g, 79mmol), 디아세테이트 요오도벤젠(40.8g, 126.4 mmol)을 첨가한 뒤, 60℃로 가열하여 40시간 동안 반응시키고(TLC로 모니터링), 500 mL의 포화 티오황산나트륨 수용액을 첨가하여 켄칭한 다음, 500 mL의 디클로로메탄으로 3회 추출하고, 유기상을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하였다. 여액을 직접 감압 하에 회전시켜 용매를 제거하고 잔류물을 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(PE/EA=100/1-50/1-10/1)에 적용하여 SM5(28g)를 수득하였다; LC-MS: [M+H]+　= 501.3.
단계 4: 화합물 SM6
화합물 SM5(25g, 50mmol, 1.0eq), 디-tert-부틸 포스페이트 칼륨염(13.66g, 55mmol, 1.1eq), p-톨루엔설폰산 일수화물(951mg, 5mmol, 0.1eq) 및 THF(200mL)를 500mL 1-구 플라스크에 첨가하고, 실온에서 1시간 동안 반응시킨 뒤(TLC로 모니터링), 여과하여 불용성 물질을 제거하였다. 반응 용액을 직접 제조하여 정제하였다. 제조 용액을 35℃의 진공 수조에서 농축하여 아세토니트릴을 제거하고 동결건조하여 화합물 SM6(15.1g)을 46%의 수율로 수득하였다; LC-MS: [M+H]+　=651.4.
단계 5: 화합물 SM7
SM6(15g, 23mmol) 및 100mL DMF를 250mL 1-구 플라스크에 첨가하였다. 용해시킨 후, 빙수조 하에 15g 5% Pd/C를 첨가하고 시스템 분위기를 수소로 3회 치환하였다. 실온에서 12시간 동안 반응시키고 여과하여 Pd/C를 제거하였다. 오일 펌프로 감압 증발시켜 용매를 제거하고 따로 보관하였다;
다른 250mL 1-구 플라스크에 위의 조 생성물과 100mL 톨루엔, 트리에틸아민(6.4mL, 46mmol) 및 말레산 무수물(2.4g, 24mmol)을 첨가하여 용해시킨 후, 100℃로 승온시켜 2시간 동안 반응시켰다. 반응 진행을 HPLC로 모니터링하였다. 반응 종료 후, 반응 용액을 고성능 액상으로 정제하여 제조 용액을 얻었다. 제조 용액을 디클로로메탄으로 추출하고 포화 염화나트륨 용액으로 세척한 후, 무수 황산나트륨으로 건조하고, 여과한 뒤 농축하여 고체(4.2g)를 36%의 수율로 수득하였다; LC-MS: [M+H]+　=507.3.
단계 6: 화합물 M8
화합물 SM7(4g, 7.9mmol, 1.0eq), 펜타플루오로페놀(1.6g, 8.7mmol, 1.1eq), DCC(1.8g, 8.7mmol, 1.1eq) 및 THF(60mL)를 100mL 1-구 플라스크에 첨가한 뒤, 실온에서 1시간 동안 반응을 수행하고(TLC로 모니터링), 불용성 물질을 여과하였다. 반응 용액을 직접 제조하여 정제하였다. 제조 용액을 35℃의 진공 수조에서 농축하여 아세토니트릴을 제거하고 동결건조하여 화합물 M8(3.7g)을 70%의 수율로 수득하였다; LC-MS: [M+H]+　=673.2.
단계 7: 화합물 37a
1c(1g, 2.36mmol)를 25mL 1-구 플라스크에 첨가하였다. 25mL의 DMF를 용해시킨 후, DIPEA(430uL, 2.6mmol)에 이어 M8(1.2g, 2.36mmol)을 첨가하였다. 첨가 후, 실온으로 가열하고 1시간 동안 반응시켰다. HPLC로 모니터링하면서, 반응이 종료된 후에, 반응 용액을 고성능 액상으로 정제하여 제조 용액을 얻고, 이를 동결건조하여 488 mg의 생성물을 수득하였다; LC-MS: [MH]-　=911.0.
단계 8: 화합물 37b
37a(400mg, 0.44mmol), 엑사테칸 메실레이트 M5(235mg, 0.44mmol), PyBOP(199mg, 0.5mmol), HOBt(69mg, 0.5mmol) 및 10mL DMF를 100mL 1-구 병에 첨가하였다. DIPEA(218uL, 1.32mmol)를 수조 하에 첨가하고 실온으로 가열하여 2시간 동안 반응시켰다. HPLC로 모니터링하면서, 반응이 종료된 후에, 반응 용액을 고성능 액상으로 정제하여 화합물 37b의 제조 용액을 얻었다. 제조 용액을 동결건조하여 화합물 201 mg을 수득하였다; LC-MS: [M+H]+　=1329.6.
단계 9: 화합물 37
화합물 37b(130mg, 0.098mmol), 브롬화아연(221mg, 0.98mmol) 및 10mL 니트로메탄을 25mL 1-구 플라스크에 첨가하고 40℃에서 1시간 동안 반응시켰다. HPLC로 모니터링하면서, 반응이 종료된 후에, 감압 농축하여 용매를 제거하고 조 생성물을 얻었다. 조 생성물을 고성능 액상으로 정제하여 생성물 제조 용액을 얻고, 이를 동결건조하여 고체(96mg)를 수득하였다; LC-MS: [M+H]+　=1117.4.
실시예 43
화합물 38의 합성:
Figure pct00079
화합물 M8 및 3c를 출발 물질로 사용하고 실시예 42의 합성 경로를 참조하여 화합물 38(51 mg)을 수득하였다; LC-MS: [M+H]+　=1145.6.
실시예 44
화합물 39 및 40의 합성:
Figure pct00080
화합물 M8 및 5c를 출발 물질로 사용하고 실시예 42의 합성 경로를 참조하여 57 mg의 화합물 39(LC-MS: [M+H]+　=1131.4); 및 60 mg의 화합물 40(LC-MS: [M+H]+　=1131.4)을 수득하였다.
실시예 45
화합물 41 및 42의 합성:
Figure pct00081
화합물 M7 및 7c를 출발 물질로 사용하고 실시예 42의 합성 경로를 참조하여 44 mg의 화합물 41(LC-MS: [M+H]+　=1185.3); 및 44 mg의 화합물 42(LC-MS: [M+H]+　=1185.3)를 수득하였다.
실시예 46
화합물 43 및 44의 합성:
Figure pct00082
화합물 M8 및 19c를 출발 물질로 사용하고 실시예 42의 합성 경로를 참조하여 62 mg의 화합물 43(LC-MS: [M+H]+　=1157.4); 및 59 mg의 화합물 44(LC-MS: [M+H]+　= 1157.4)를 수득하였다.
실시예 47(비교예)
화합물 45의 합성:
Figure pct00083
특허 "CN104755494A"의 실시예 58에 제공된 방법을 참조하여 화합물 45를 합성하였다.
다음은 트라스투주맙의 서열이다:
경쇄
MDMRVPAQLLGLLLLWLRGARCDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDVNTAVAWYQQKPGKAPKLLIYSASFLYSGVPSRFSGSRSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQHYTTPPTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC*
중쇄
MDMRVPAQLLGLLLLWLRGARCEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFNIKDTYIHWVRQAPGKGLEWVARIYPTNGYTRYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCSRWGGDGFYAMDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
리간드-약물 접합체의 제조:
1) 일반적인 커플링 방법
예비 정제 후, 단량체 비율이 95%를 초과하는 항체 분자를 한외여과 원심분리기 관을 사용하여 10 mg/mL 농도로 인산염 완충 용액으로 교환하였다. TCEP를 항체 몰 수의 20배로 첨가하고, 실온에서 4시간 동안 반응시켜 항체 사슬 사이의 이황화 결합을 열었다. 링커-약물 화합물(페이로드)을 항체 분자 몰 수의 20배로 첨가하고 실온에서 2시간 동안 반응시켰다. 반응이 끝나면 분자량 컷오프가 30KDa인 한외여과 원심분리기 관을 사용하여 액체를 PBS로 교환하고 결합되지 않은 페이로드를 제거하였다. 액체 교환 후, ADC 샘플을 0.22 미크론 멸균 필터로 여과하여 사용하였다.
2) 리간드-약물 접합체의 DAR 값 결정
단일 속도 검출 조건:
샘플을 14000rpm에서 5분 동안 원심분리하고, 상청액을 분석용으로 취하였다;
기기: Waters e2695(2489UV/Vis);
크로마토그래피 컬럼: TSKgel G3000SWXL(7.8×300mm, 5μm);
이동상: A: 50mM PB, 300mM NaCl, 200mM Arg, 5% IPA, pH 6.5;
이동상 A를 30분 동안 등용매 용출시키고; 유속은 0.714mL/분, 컬럼 온도는 25℃, 검출 파장은 280nm이었다.
DAR 검출 조건:
샘플을 14000rpm에서 5분 동안 원심분리하고, 상청액을 분석용으로 취하였다;
기기: Waters H-class(TUV);
크로마토그래피 컬럼: Proteomix HIC 부틸-NP5(4.6×35mm, 5μm);
이동상: A: 1.5M 황산암모늄, 0.025M 무수 인산나트륨, pH 7.0, B: 0.025M 무수 인산나트륨, 25% IPA, pH 7.0;
이동상 A로 크로마토그래피 컬럼을 평형화하고, 이동상 A와 B를 구배 용출시키고 유속은 0.8mL/분; 컬럼 온도는 25℃; 검출 파장은 214nm이었다.
실시예 48: ADC-1
Figure pct00084
ADC-1을 일반적인 커플링 방법에 따라 제조하였다.
실시예 49: ADC-2
Figure pct00085
ADC-2를 일반적인 커플링 방법에 따라 제조하였다.
실시예 50: ADC-3
Figure pct00086
ADC-3을 일반적인 커플링 방법에 따라 제조하였다.
실시예 51: ADC-4
Figure pct00087
ADC-4를 일반적인 커플링 방법에 따라 제조하였다.
실시예 52: ADC-5
Figure pct00088
ADC-5를 일반적인 커플링 방법에 따라 제조하였다.
실시예 53: ADC-6
Figure pct00089
ADC-6을 일반적인 커플링 방법에 따라 제조하였다.
실시예 54: ADC-7
Figure pct00090
ADC-7을 일반적인 커플링 방법에 따라 제조하였다.
실시예 55: ADC-8
Figure pct00091
ADC-8을 일반적인 커플링 방법에 따라 제조하였다.
실시예 56: ADC-9
Figure pct00092
ADC-9를 일반적인 커플링 방법에 따라 제조하였다.
실시예 57: ADC-10
Figure pct00093
ADC-10을 일반적인 커플링 방법에 따라 제조하였다.
실시예 58: ADC-11
Figure pct00094
ADC-11을 일반적인 커플링 방법에 따라 제조하였다.
실시예 59: ADC-12
Figure pct00095
ADC-12를 일반적인 커플링 방법에 따라 제조하였다.
실시예 60: ADC-13
Figure pct00096
ADC-13을 일반적인 커플링 방법에 따라 제조하였다.
실시예 61: ADC-14
Figure pct00097
ADC-14를 일반적인 커플링 방법에 따라 제조하였다.
실시예 62: ADC-15
Figure pct00098
ADC-15를 일반적인 커플링 방법에 따라 제조하였다.
실시예 63: ADC-16
Figure pct00099
ADC-16을 일반적인 커플링 방법에 따라 제조하였다.
실시예 64: ADC-17
Figure pct00100
ADC-17을 일반적인 커플링 방법에 따라 제조하였다.
실시예 65: ADC-18
Figure pct00101
ADC-18을 일반적인 커플링 방법에 따라 제조하였다.
실시예 66: ADC-19
Figure pct00102
ADC-19를 일반적인 커플링 방법에 따라 제조하였다.
실시예 67: ADC-20
Figure pct00103
ADC-20을 일반적인 커플링 방법에 따라 제조하였다.
실시예 68: ADC-21
Figure pct00104
ADC-21을 일반적인 커플링 방법에 따라 제조하였다.
실시예 69: ADC-22
Figure pct00105
ADC-22를 일반적인 커플링 방법에 따라 제조하였다.
실시예 70: ADC-23
Figure pct00106
ADC-23을 일반적인 커플링 방법에 따라 제조하였다.
실시예 71: ADC-24
Figure pct00107
ADC-24를 일반적인 커플링 방법에 따라 제조하였다.
실시예 72: ADC-25
Figure pct00108
ADC-25를 일반적인 커플링 방법에 따라 제조하였다.
실시예 73: ADC-26
Figure pct00109
ADC-26을 일반적인 커플링 방법에 따라 제조하였다.
실시예 74: ADC-27
Figure pct00110
ADC-27을 일반적인 커플링 방법에 따라 제조하였다.
실시예 75: ADC-28
Figure pct00111
ADC-28을 일반적인 커플링 방법에 따라 제조하였다.
실시예 76: ADC-29
Figure pct00112
ADC-29를 일반적인 커플링 방법에 따라 제조하였다.
실시예 77: ADC-30
Figure pct00113
ADC-30을 일반적인 커플링 방법에 따라 제조하였다.
실시예 78: ADC-31
Figure pct00114
ADC-31을 일반적인 커플링 방법에 따라 제조하였다.
실시예 79: ADC-32
Figure pct00115
ADC-32를 일반적인 커플링 방법에 따라 제조하였다.
실시예 80: ADC-33
Figure pct00116
ADC-33을 일반적인 커플링 방법에 따라 제조하였다.
실시예 81: ADC-34
Figure pct00117
ADC-34를 일반적인 커플링 방법에 따라 제조하였다.
실시예 82: ADC-35
Figure pct00118
ADC-35를 일반적인 커플링 방법에 따라 제조하였다.
실시예 83: ADC-36
Figure pct00119
ADC-36을 일반적인 커플링 방법에 따라 제조하였다.
실시예 84: ADC-37
Figure pct00120
ADC-37을 일반적인 커플링 방법에 따라 제조하였다.
실시예 85: ADC-38
Figure pct00121
ADC-38을 일반적인 커플링 방법에 따라 제조하였다.
실시예 86: ADC-39
Figure pct00122
ADC-39를 일반적인 커플링 방법에 따라 제조하였다.
실시예 87: ADC-40
Figure pct00123
ADC-40을 일반적인 커플링 방법에 따라 제조하였다.
실시예 88: ADC-41
Figure pct00124
ADC-41을 일반적인 커플링 방법에 따라 제조하였다.
실시예 89: ADC-42
Figure pct00125
ADC-42를 일반적인 커플링 방법에 따라 제조하였다.
실시예 90: ADC-43
Figure pct00126
ADC-43을 일반적인 커플링 방법에 따라 제조하였다.
실시예 91: ADC-44
Figure pct00127
ADC-44를 일반적인 커플링 방법에 따라 제조하였다.
실시예 92: ADC-45
Figure pct00128
ADC-45를 일반적인 커플링 방법에 따라 제조하였다.
실시예 93: ADC-46
Figure pct00129
ADC-46을 일반적인 커플링 방법에 따라 제조하였다.
실시예 94: ADC-47
Figure pct00130
ADC-47을 일반적인 커플링 방법에 따라 제조하였다.
실시예 95: ADC-48
Figure pct00131
ADC-48을 일반적인 커플링 방법에 따라 제조하였다.
실시예 96: ADC-49
Figure pct00132
ADC-49를 일반적인 커플링 방법에 따라 제조하였다.
실시예 97: ADC-50
Figure pct00133
ADC-50을 일반적인 커플링 방법에 따라 제조하였다.
실시예 98: ADC-51
Figure pct00134
ADC-51을 일반적인 커플링 방법에 따라 제조하였다.
실시예 99: ADC-52
Figure pct00135
ADC-52를 일반적인 커플링 방법에 따라 제조하였다.
실시예 100: ADC-53
Figure pct00136
ADC-53을 일반적인 커플링 방법에 따라 제조하였다.
실시예 101: ADC-54
Figure pct00137
ADC-54를 일반적인 커플링 방법에 따라 제조하였다.
실시예 102: ADC-55
Figure pct00138
ADC-55를 일반적인 커플링 방법에 따라 제조하였다.
실시예 103: ADC-56
Figure pct00139
ADC-56을 일반적인 커플링 방법에 따라 제조하였다.
실시예 104: ADC-57
Figure pct00140
ADC-57을 일반적인 커플링 방법에 따라 제조하였다.
실시예 105: ADC-58
Figure pct00141
ADC-58을 일반적인 커플링 방법에 따라 제조하였다.
실시예 106: ADC-59
Figure pct00142
ADC-59를 일반적인 커플링 방법에 따라 제조하였다.
실시예 107: ADC-60
Figure pct00143
ADC-60을 일반적인 커플링 방법에 따라 제조하였다.
실시예 108: ADC-61(대조군)
Figure pct00144
ADC-61을 일반적인 커플링 방법에 따라 제조하였다.
실시예 109: 혈장 안정성
1) 조작
일정량의 ADC 샘플을 취해 인간 IgG가 제거된 인간 혈장에 첨가하였다. 각 ADC의 세 튜브에 대해 반복하고 37℃ 수조에 두었다. 각각 72시간 및 144시간 동안 인큐베이션한 후, ADC 샘플을 꺼내고 각 튜브에 100uL 단백질A 수지(MabSelect SuReTM LX Lot:#10221479GE, PBS로 세척)를 첨가하고, 버티칼 믹서에서 진탕하여 2시간 동안 흡착시키고, 세척 및 용출하여 ADC 샘플을 얻었다. 특정 시간 동안 인큐베이션된 ADC 샘플을 RP-HPLC로 측정하였다.
2) 결과
일 실시양태에서, 개시된 리간드-약물 접합체(ADC)의 리간드-약물 접합체(ADC) DAR 값 및 단량체 비율 데이터
분자명 DAR 집합체% 단량체%
트라스투주맙 NA 1.61 98.39
ADC-2 7.67 1.51 98.49
ADC-6 7.55 1.61 98.39
ADC-10 7.66 1.45 98.55
ADC-12 7.64 2.28 97.72
ADC-15 7.63 1.44 98.56
ADC-20 7.60 1.40 98.60
ADC-29 7.66 1.62 98.38
ADC-35 7.59 1.67 98.33
ADC-36 7.68 1.38 98.62
ADC-41 7.64 1.51 98.49
ADC-48 7.67 1.77 98.23
ADC-52 7.58 1.61 98.39
ADC-56 7.60 1.61 98.39
ADC-61(대조군) 7.59 8.21 91.79
일 실시양태에 개시된 리간드-약물 접합체(ADC)의 혈장 안정성 데이터.
분자 DAR
비인큐베이션 인큐베이션
0일		 인큐베이션
3일		 인큐베이션
7일
ADC-2 7.67 7.51 6.77 6.43
ADC-6 7.55 7.52 7.46 7.44
ADC-10 7.66 7.48 6.43 6.21
ADC-12 7.64 7.43 6.73 6.11
ADC-29 7.66 7.60 6.91 6.65
ADC-36 7.68 7.64 7.02 6.96
ADC-48 7.67 7.65 7.63 7.48
ADC-56 7.60 7.49 7.08 6.33
ADC-61(대조군) 7.59 7.48 5.31 5.02
3) 결론
표 1에서 나타낸 바와 같이, 본 발명에 개시된 고안정성의 친수성 연결 단위를 갖는 캄프토테신 ADC는 높은 DAR 값(>7.5)과 높은 단량체 비율(>97%)의 우수한 특성을 가지며, 대조군 ADC-61과 비교하여 현저하게 더 높은 모노머 비율을 가진다.
표 2에서 나타낸 바와 같이, 본 발명의 ADC 혈장에서 7일 동안 인큐베이션한 후에도 DAR 값은 대조군 ADC-61에 비해 여전히 높은 수준을 유지할 수 있으며, 이는 본 발명의 ADC가 혈장에서 우수한 안정성을 가짐을 입증한다.
실시예 110: 시험관 내 활성 시험
1) 실험 재료
세포: 중국 과학 아카데미(Chinese Academy of Sciences)의 세포 은행에서 입수;
종양 세포 배양 배지: Gibco;
FBS: BIOWEST;
2) 배지 준비
성장 배지(10% FBS, 페니실린/스트렙토마이신(100U/mL) 함유);
검출 배지(1% FBS, 페니실린/스트렙토마이신(100U/mL) 함유);
3) 조작
30분 전에 생물학적 안전 캐비닛의 UV 램프를 켜고 3분 동안 환기시켰다. 성장 배지, 검출 배지, D-PBS 및 판크레아틴을 37℃ 항온 수조에 넣어 예열한 다음, 표면을 알코올로 소독하고 생물학적 안전 캐비닛에 넣었다. ~80%의 합류(대수 성장 단계)가 있는 세포를 선택하여 생물학적 안전 캐비닛에 넣고, 이전 배지를 흡인하여 D-PBS로 헹구고 흡인하여 버린 후 2~3분 동안 트립신으로 분해한 다음, 배지에 트립신을 첨가하여 성장을 정지시키고, 500×g에서 5분 동안 원심분리하였다. 원심분리 상청액을 흡인하고 4mL 검출 배지와 잘 혼합한 후, 100uL를 계수용으로 취하였다(50uL 세포액을 취해 50μL 0.4% Trypan Blue Stain을 첨가하여 잘 혼합하고, 혼합 후 계수하였다). 앞서 설정한 세포 수에 따라 플레이트를 플레이팅하고 96-웰 플레이트에 웰당 80uL씩 플레이팅하였다. 웰 E11, F11 및 G11에는 80uL 검출 배지만을 첨가하고 가장자리 구멍에 200uL DPBS를 첨가하여 가장자리를 밀봉하였다. 플레이팅된 세포가 벽에 완전히 부착된 후(보통 최소 4시간), 시험 샘플을 준비하여 희석하였다: 검출 배지와 함께 1.0mL, 2.5μM(5×Top Dose) 시험 샘플을 준비하고, V형 96-웰 플레이트의 1번째 컬럼에 웰당 200μL씩 분취하고; 2번째 컬럼부터 8번째 컬럼까지는 검출 배지 180μL를 첨가하고, 1번째 컬럼에서 30μL를 취하여 2번째 컬럼에 첨가하고, 로우건으로 위아래로 10회 섞은 후, 피펫팁을 버렸다. 나머지 검출 농도점을 순차적으로 조작하여 7-배 구배 농도 희석을 실시하였다. 웰당 20uL의 양으로 구배 농도의 시험 샘플을 세포에 첨가하였다. 동시에, 11번째 컬럼에는 검출 배지 20uL만을 첨가하고 각 농도별로 3개의 중복 웰을 세팅한 후, 96-웰 플레이트를 5% CO2, 37℃ 세포 인큐베이터에 넣고 5일 동안 배양하였다.
4) 검출
시험 샘플을 5일 동안 노출시킨 후 MTS 시약을 꺼냈다. 빛을 피해 실온에서 해동한 후 볼텍싱하여 잘 섞었다. 생물학적 안전 캐비닛에서 웰의 측벽을 따라 100μL 세포 배양 부피마다 20μL Cell Titer One Solution Reagen MTS 시약을 첨가하였다. MTS 용액이 고르게 섞이도록 플레이트 표면을 가볍게 두드려서 5% CO2 하의 세포 인큐베이터에 넣고 37℃ 암실에서 2시간 동안 인큐베이션하였다. 반응 후, 96-웰 플레이트를 꺼내 마이크로플레이트 리더에서 OD490nm 흡광도 값을 검출한 뒤, 데이터를 기록하고, 분류 뒤 보관하였다.
5) 결과
Figure pct00145
시험관 내에서 항체-약물 접합체 및 독소에 의한 SK-BR-3 종양 세포의 증식 억제에 대한 IC50 값.
샘플 트라스투주맙 ADC-61
(대조군)		 ADC-12 ADC-6 ADC-10 ADC-2 d3 d6 d1
IC50(nM) >500 >500 135.295 435.861 115.987 116.329 182.766 239.311 103.798
6) 검토
표 3에 나타낸 바와 같이, HER2를 표적으로 하는 본 발명의 리간드-약물 접합체는 HER2 양성 세포 N87에 대한 명백한 시험관 내 증식 억제 활성을 가지며, 이는 네이키드 항체(트라스투주맙), 대조군 ADC-61 및 독소 단일 약물보다 훨씬 우수하였다.
표 4에 나타낸 바와 같이, 네이키드 항체(트라스투주맙) 및 대조군 ADC와 비교하여, 본 발명에 개시된 ADC 및 단일 약제도 HER2-양성 세포 SK-BR-3에 대한 시험관 내 증식 억제 활성이 명백하다.
실시예 111: 생체 내 활성 시험
1) 실험 재료
세포: 중국 과학 아카데미(Chinese Academy of Sciences)의 세포 은행에서 입수;
종양 세포 배양 배지: Gibco;
Balb/c-nu 누드 마우스: 암컷, 5-7주령(종양 세포 접종 시점의 마우스 연령), 체중 18.0-24.0g, 170(110 + 60 예비 마우스). Beijing Weitong Lihua Laboratory Animal Technology Co., Ltd.에서 구입;
시험 물질 및 참조 물질:
시험 제품: ADC-61 및 ADC-6은 Chengdu Dote Antibody Drug Co., Ltd.에서 제공받았다.
히스티딘 완충액은 Chengdu Dote Antibody Pharmaceutical Co., Ltd.에서 제공받았다.
0.9% 염화나트륨 주사제: Kelun Pharmaceutical Co., Ltd.
2) 세포 배양
NCI-H1975(인간 비-소세포 폐암 선암종 세포: human non-small cell lung cancer adenocarcinoma cell)를 RPMI1640 배지에서 배양하였다. 지수 성장기의 NCI-H1975 세포를 수집하고, 마우스의 피하 종양 접종에 적합한 농도로 RPMI1640 배지에 재현탁시켰다.
NCI-N87(인간 위암 세포)을 RPMI1640 배지에서 배양하였다. 지수 성장기의 NCI-N87 세포를 수집하고, 마우스의 피하 종양 접종에 적합한 농도로 RPMI1640 배지에 재현탁시켰다.
3) 동물 모델링 및 랜덤 그룹화
5×107 NCI-H1975 세포를 85마리 암컷 누드 마우스의 오른쪽 어깨에 피하 접종하였다. 평균 종양 용적이 약 170mm3 일 때 종양 크기에 따라 무작위로 그룹화하였다. 적절한 종양 용적을 갖는 55마리의 종양 보유 마우스를 선택하여 무작위로 그룹으로 나누고 투여를 시작하였다(꼬리 정맥 주사, 투여 부피는 0.1ml/10g). 그룹화 날짜를 0일로 정의하였다.
5×107 NCI-N87 세포를 85마리 암컷 누드 마우스의 오른쪽 어깨에 피하 접종하였다. 평균 종양 용적이 170mm3 일 때 종양 크기에 따라 무작위로 그룹화하였다. 적절한 종양 용적을 갖는 55마리의 종양 보유 마우스를 선택하여 무작위로 그룹으로 나누고 투여를 시작하였다(꼬리 정맥 주사, 투여 부피는 0.1ml/10g). 그룹화 날짜를 0일로 정의하였다.
4) 시험 물질 및 대조 물질의 제조
Figure pct00146
참고: 제제가 균일하도록 사용하기 전에 잘 섞는다.
5) 실험 관찰 및 데이터 수집
이 실험 과정에서, 동물 실험 작업은 항종양 약물의 생체 내 스크리닝을 위한 표준 작업 절차의 요구 사항에 따라 수행되었다. 종양 접종 후, 일상적인 모니터링에는 종양 성장(종양은 주 2회 측정됨) 및 동물의 정상적인 행동에 대한 치료 효과가 포함된다. 구체적인 내용은 실험 동물의 활동성, 식음 상태, 체중 증감(주 2회 체중 측정), 눈, 털 및 기타 이상 상태를 포함한다. 실험 중 관찰된 임상 증상을 원본 데이터에 기록하였다. 종양 용적 계산 공식: 종양 용적(mm3)= 1/2 ×(a×b2)(여기서, a는 긴 직경을 나타내고 b는 짧은 직경을 나타냄). 종양의 긴 직경과 짧은 직경의 측정, 동물의 체중 측정을 포함하여 수동으로 기록된 데이터를 실험에 사용하였다.
6) 효능 평가 기준
상대 종양 증식율, T/C%는 특정 시점에서 종양 용적 또는 종양 무게에 대한 처리군 및 대조군의 백분율 값이다. 이는 다음과 같이 계산된다:
T/C%=TRTV/CRTV×100%(TRTV: 처리군의 평균 RTV; CRTV: 비히클 대조군의 평균 RTV; RTV=Vt/V0, V0는 그룹화 시 동물의 종양 용적, Vt는 치료 종양 용적 후 동물의 종양 용적); 또는 T/C% = TTW/CTW×100%(TTW: 처리군에서 실험 종료 시 평균 종양 무게; CTW: 비히클 대조군에서 실험 종료 시 평균 종양 무게).
상대 종양 억제율, TGI(%)는 다음과 같이 계산된다: TGI%=(1-T/C)×100%. [T 및 C는 각각 특정 시점에서 처리군 및 대조군의 상대 종양 용적(RTV) 또는 종양 무게(TW)임].
7) 결과
Figure pct00147
Figure pct00148
Figure pct00149
참고: * 표시된 그룹에서 2마리 마우스의 사망이 관찰되었다.
8) 검토
표 6에서 나타낸 바와 같이, 저용량 대조군(3.75mg/Kg)에서 본원에 개시된 ADC-6은 종양 보유 마우스 NCI-H1975에 대해 대조군 ADC-61 및 네이키드 항체보다 월등히 우수한 생체 내 효능을 갖는다; 용량을 11.25mg/Kg으로 증가시키면 본원에 개시된 ADC-6의 치료 효과는 더욱 향상되고 대조군 ADC-61보다 훨씬 우수해진다.
표 7에서 나타낸 바와 같이, 동일한 투여량(3.75mg/Kg)에서, 본원에 개시된 ADC-6은 종양 보유 마우스 NCI-N87에 대해 대조군 ADC-61보다 훨씬 더 우수한 생체 내 효능을 갖는다. 고용량 네이키드 항체(11.25mg/Kg)와 비교하여 생체 내 효능이 한층 현저해진다.
표 8에서 나타낸 바와 같이, 본 출원은 고용량 대조군에서 11.25mg/Kg의 ADC-6이 고용량 군에서도 ADC-61보다 NCI-H1975 종양 보유 마우스의 체중에 미치는 영향이 현저히 작다는 것을 나타낸다. 대조군에서와 같이 마우스의 사망은 없었으며, 이는 본원에 개시된 ADC 약물이 안전성 측면에서 상당한 이점이 있음을 입증한다.

Claims (20)

  1. 화학식 I로 표시되는 고안정성의 친수성 연결 단위(highly stable hydrophilic connecting unit)를 갖는 리간드-약물 접합체(ligand-drug conjugate) 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염:
    Figure pct00150

    상기 식에서,
    Ab는 항체, 항체 단편, 표적 단백질(targeting protein) 또는 Fc-융합 단백질(Fc-fusion protein)로부터 선택되는 리간드 단위이고;
    M은 Ab와 연결되는 연결 단위이고;
    Ac는 친수성 구조 단위이고;
    D는 캄프토테신 약물(camptothecin drug)이고;
    1-위치 탄소 및 4-위치 키랄 탄소(chiral carbon)는 각각 R 또는 S 배열의 키랄성(chirality)을 가지며;
    n은 1 내지 20의 정수로부터 선택된다.
  2. 제1항에 있어서, M은 하기 화학식 a로 표시되는 숙신이미드 구조, 또는 하기 화학식 b1 또는 b2로 표시되는 개환된(open-ringed) 숙신이미드 구조를 갖는, 리간드-약물 접합체 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염:
    Figure pct00151

    상기 화학식 a, 화학식 b1 또는 화학식 b2에서, 왼쪽 물결선은 Ab 상의 연결 부위에 대한 연결을 나타내고, 오른쪽 물결선은 화학식 I에서 1-위치의 3차 탄소에 대한 연결을 나타낸다.
  3. 제1항에 있어서, Ac는 하기 화학식 c로 표시되는 구조를 갖는, 리간드-약물 접합체 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염:
    Figure pct00152

    상기 식에서,
    X는 친수성 카복실기, 인산기, 폴리인산기, 아인산기, 설폰산기, 설핀산기 및 폴리에틸렌 글리콜(PEG) 기로 이루어진 군으로부터 선택되고;
    Y는 아미노기와 X를 연결하는 스캐폴드(scaffold)이고;
    Ac는 아미노기를 통해 화학식 I에서 2-위치의 메틸렌 탄소에 연결된다.
  4. 제1항 또는 제3항에 있어서, Ac는 글리신, (D/L)-알라닌, (D/L)-류신, (D/L)-이소류신, (D/L)-발린, (D/L)-페닐알라닌, (D/L)-프롤린, (D/L)-트립토판, (D/L)-세린, (D/L)-티로신, (D/L)-시스테인, (D/L)-시스틴, (D/L)-아르기닌, (D/L)-히스티딘, (D/L)-메티오닌, (D/L)-아스파라긴, (D/L)-글루타민, (D/L)-트레오닌, (D/L)-아스파르트산, (D/L)-글루탐산, 천연 또는 비천연 아미노산 유도체 또는 하기 구조로부터 선택되는, 리간드-약물 접합체 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염:
    Figure pct00153
  5. 제1항에 있어서, 캄프토테신 약물은 하기 화학식 d로 표시되는 구조를 갖는, 리간드-약물 접합체 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염:
    Figure pct00154

    상기 식에서,
    R1은 수소 원자, 중수소 원자, 할로겐, 알킬, 중수소화 알킬, 할로알킬, 사이클로알킬, 사이클로알킬알킬, 알콕시알킬, 헤테로사이클릴, 아릴, 치환된 아릴 또는 헤테로아릴로부터 선택되고; 대안적으로, R1과 이에 연결된 탄소 원자는 C3-6 사이클로알킬, 사이클로알킬알킬 또는 헤테로사이클릭 기를 형성하고 ;
    R1에 연결된 키랄 탄소 원자는 R 또는 S 배열을 갖고;
    m은 0 또는 1로부터 선택되며;
    상기 화학식 d에서 R1에 연결된 키랄 탄소에 연결되는 하이드록실기는 화학식 I에서 3-위치 산소 원자로서 Ab에 D가 접합되도록 구성된다.
  6. 제1항 또는 제5항에 있어서, 캄프토테신 약물은 하기 화합물로부터 독립적으로 선택되는, 리간드-약물 접합체 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염:
    Figure pct00155

    Figure pct00156
  7. 제1항의 화학식 I의 리간드-약물 접합체를 형성하기 위해 Ab 리간드 단위와 커플링(coupling)하기 위한, 하기 화학식 II로 표시되는 구조를 갖는 링커-약물 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염:
    Figure pct00157

    상기 식에서,
    R1은 수소 원자, 중수소 원자, 할로겐, 알킬, 중수소화 알킬, 할로알킬, 사이클로알킬, 사이클로알킬알킬, 알콕시알킬, 헤테로사이클릴, 아릴, 치환된 아릴 또는 헤테로아릴로부터 선택되고; 대안적으로, R1과 이에 연결된 탄소 원자는 C3-6 사이클로알킬, 사이클로알킬알킬 또는 헤테로사이클릭 기를 형성하고 ;
    1-위치의 키랄 탄소는 R 또는 S 배열을 갖고;
    Ac는 친수성 구조 단위이고;
    m은 0 또는 1이다.
  8. 제7항에 있어서, Ac는 글리신, 인산, (D/L)-글루탐산 또는 폴리에틸렌 글리콜 친수성 구조로부터 선택되는, 링커-약물 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염.
  9. 제7항 또는 제8항에 있어서, 링커-약물 화합물은 하기 구조로부터 선택되는, 링커-약물 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염:
    Figure pct00158

    Figure pct00159

    Figure pct00160

    Figure pct00161

    Figure pct00162

    Figure pct00163

    Figure pct00164

    Figure pct00165

    상기 식에서, 1-위치의 키랄 탄소는 R 또는 S 배열의 키랄성을 갖는다.
  10. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 하기 화학식 III, 화학식 IV-1 또는 화학식 IV-2로 표시되는 구조를 갖는, 리간드-약물 접합체 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염:
    Figure pct00166

    Figure pct00167

    Figure pct00168

    상기 식에서,
    Ab는 리간드 단위이고;
    Ac는 친수성 구조 단위이고;
    1-위치의 키랄 탄소는 R 또는 S 배열을 갖고;
    R1, m 및 n은 화학식 II에 기재된 바와 같다.
  11. 10항에 있어서, 리간드 단위 Ab는 항체, 항체 단편 또는 단백질로부터 선택되고, 상기 항체는 뮤린 항체(murine antibody), 토끼 항체, 파지 디스플레이 항체, 효모 디스플레이 항체, 키메라 항체, 인간화 항체, 완전 인간 항체, 항체 단편, 이중특이적 항체(bispecific antibody) 또는 다중특이적 항체로부터 선택되는, 리간드-약물 접합체 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염.
  12. 제10항에 있어서, 항체는 단일클론 항체(monoclonal antibody)이고, 항-EGFRvIII 항체, 항-PD-1 항체, 항-PD-L1 항체, 항-DLL-3 항체, 항-PSMA 항체, 항-CD70 항체, 항-MUC16 항체, 항-ENPP3 항체, 항-TDGF1 항체, 항-ETBR 항체, 항-MSLN 항체, 항-TIM-1 항체, 항-LRRC15 항체, 항-LIV-1 항체, 항-CanAg/AFP 항체, 항-클래딘(anti-cladin) 18.2 항체, 항-메소텔린 항체, 항-HER2(ErbB2) 항체, 항-EGFR 항체, 항-c-MET 항체, 항-SLITRK6 항체, 항-KIT/CD117 항체, 항-STEAP1 항체, 항-SLAMF7/CS1 항체, 항-NaPi2B/SLC34A2 항체, 항-GPNMB 항체, 항-HER3(ErbB3) 항체, 항-MUC1/CD227 항체, 항-AXL 항체, 항-CD166 항체, 항-B7-H3(CD276) 항체, 항-PTK7/CCK4 항체, 항-PRLR 항체, 항-EFNA4 항체, 항-5T4 항체, 항-NOTCH3 항체, 항-넥틴 4 항체, 항-TROP-2 항체, 항-CD142 항체, 항-CA6 항체, 항-GPR20 항체, 항-CD174 항체, 항-CD71 항체, 항-EphA2 항체, 항-LYPD3 항체, 항-FGFR2 항체, 항-FGFR3 항체, 항-FRα 항체, 항-CEACAMs 항체, 항-GCC 항체, 항-인테그린 Av 항체, 항-CAIX 항체, 항-P-카드헤린 항체, 항-GD3 항체, 항-카드헤린 6 항체, 항-LAMP1 항체, 항-FLT3 항체, 항-BCMA 항체, 항-CD79b 항체, 항-CD19 항체, 항-CD33 항체, 항-CD56 항체, 항-CD74 항체, 항-CD22 항체, 항-CD30 항체, 항-CD37 항체, 항-CD47 항체, 항-CD138 항체, 항-CD352 항체, 항-CD25 항체, 및 항-CD123 항체로 이루어진 군으로부터 선택되는, 리간드-약물 접합체 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염.
  13. 제10항에 있어서, 항체 또는 항원 결합 단편은 다음을 갖는 트라스투주맙을 포함하는, 리간드-약물 접합체 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염.
    MDMRVPAQLLGLLLLWLRGARCDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDVNTAVAWYQQKPGKAPKLLIYSASFLYSGVPSRFSGSRSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQHYTTPPTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC*(서열 번호 1)를 포함하는 경쇄: 및
    MDMRVPAQLLGLLLLWLRGARCEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFNIKDTYIHWVRQAPGKGLEWVARIYPTNGYTRYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCSRWGGDGFYAMDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG(서열 번호 2)를 포함하는 중쇄.
  14. 제10항에 있어서, 하기 숙신이미드 구조 또는 숙신이미드 개환 구조로부터 선택되는, 리간드-약물 접합체 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염:
    Figure pct00169

    Figure pct00170

    Figure pct00171

    Figure pct00172

    Figure pct00173

    Figure pct00174

    Figure pct00175

    상기 식에서,
    n은 1 내지 10의 정수로부터 선택된다.
  15. 제7항 내지 제9항 중 어느 한 항에 따른 링커-약물 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 제조하기 위한 방법으로서,
    화학식 L의 화합물을 알칼리성 조건 하에서 축합제의 존재 하에 화학식 d0의 엑사테칸(Exatecan) 또는 이의 염과 반응시켜 화학식 IV의 화합물을 제공하는 단계, 및
    화학식 IV의 화합물을 화학식 II의 화합물로 전환시키는 단계를 포함하는 방법:
    Figure pct00176

    상기 식에서,
    1-위치 탄소 및 R1에 연결된 탄소는 각각 R 또는 S 절대 배위를 갖고;
    R2는 Ac를 형성하도록 구성되고;
    Ac, R1 및 m은 화학식 II에 정의된 바와 같다.
  16. 제15항에 있어서, 화학식 IV의 화합물을 화학식 II의 화합물로 전환시키는 단계는 탈보호제(deprotecting agent) 및 용매를 사용하여 수행되고, 여기서 탈보호제는 브롬화아연이고 용매는 니트로메탄인, 링커-약물 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 제조하기 위한 방법.
  17. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 따른 리간드-약물 접합체 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 제조하기 위한 방법으로서,
    리간드 단위 Ab를 화학식 II의 화합물과 접합(conjugating)시켜 화학식 III의 리간드-약물 접합체를 제공하는 단계를 포함하는 방법:
    Figure pct00177

    상기 식에서,
    Ab는 항체, 항체 단편 또는 단백질로부터 선택되고;
    Ac는 친수성 구조 단위를 포함하고;
    1-위치 탄소 및 R1에 연결된 탄소는 각각 R 또는 S 절대 배열의 키랄성을 갖고;
    R1, m 및 n은 화학식 II에 기재된 바와 같다.
  18. 치료적 유효량의 제1항 내지 제17항 중 어느 한 항에 따른 리간드-약물 접합체 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염 또는 용매화물, 및 약학적으로 허용 가능한 담체, 희석제 또는 부형제를 포함하는 약학적 조성물.
  19. 암(cancer), 자가면역 질환(autoimmune disease) 또는 감염성 질환(infectious disease)을 치료하기 위한 약물의 제조에 사용하기 위한, 제1항 내지 제18항 중 어느 한 항에 따른 리간드-약물 접합체 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 포함하는 약학적 조성물.
  20. 제19항에 있어서, 암이 유방암(breast cancer), 난소암(ovarian cancer), 자궁경부암(cervical cancer), 자궁암(uterine cancer), 전립선암(prostate cancer), 신장암(kidney cancer), 요도암(urethral cancer), 방광암(bladder cancer), 간암(liver cancer), 위암(gastric cancer), 자궁내막암(endometrial cancer), 침샘암(salivary gland cancer), 식도암(esophageal cancer), 폐암(lung cancer), 결장암(colon cancer), 직장암(rectal cancer), 결장직장암(colorectal cancer), 골암(bone cancer), 피부암(skin cancer), 갑상선암(thyroid cancer), 췌장암(pancreatic cancer), 흑색종(melanoma), 신경교종(glioma), 신경모세포종(neuroblastoma), 다형성 신경교종(glioma multiforme), 육종(sarcoma), 림프종(lymphoma) 및 백혈병(leukemia), 및 기타 고형 종양(solid tumor) 또는 혈종 약물을 포함하는 용도.
KR1020237000429A 2020-06-08 2021-05-31 고안정성 친수성 연결 단위를 갖는 캄프토테신 약물 및 이의 접합체 KR20230022211A (ko)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202010510363 2020-06-08
CN202010510363.5 2020-06-08
PCT/CN2021/097302 WO2021249228A1 (zh) 2020-06-08 2021-05-31 一种带有高稳定性亲水连接单元的喜树碱类药物及其偶联物

Publications (1)

Publication Number Publication Date
KR20230022211A true KR20230022211A (ko) 2023-02-14

Family

ID=78845204

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020237000429A KR20230022211A (ko) 2020-06-08 2021-05-31 고안정성 친수성 연결 단위를 갖는 캄프토테신 약물 및 이의 접합체

Country Status (11)

Country Link
US (1) US20230226207A1 (ko)
EP (1) EP4162954A1 (ko)
JP (1) JP2023529415A (ko)
KR (1) KR20230022211A (ko)
CN (1) CN113827736A (ko)
AU (1) AU2021289927A1 (ko)
BR (1) BR112022024930A2 (ko)
CA (1) CA3186295A1 (ko)
IL (1) IL298787A (ko)
MX (1) MX2022015695A (ko)
WO (1) WO2021249228A1 (ko)

Families Citing this family (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20220378928A1 (en) * 2020-09-15 2022-12-01 Sichuan Baili Pharmaceutical Co. Ltd. A Camptothecin Drug and Its Antibody Conjugate Thereof
IL302053A (en) * 2020-10-12 2023-06-01 Sichuan Baili Pharm Co Ltd Camptothecin derivative is canceled and their conjugation to anti-body drugs
KR20230142710A (ko) * 2021-02-05 2023-10-11 쓰촨 케룬-바이오테크 바이오파마수티컬 컴퍼니 리미티드 캄프토테신 화합물, 그의 제조방법 및 그의 응용
WO2023083381A1 (zh) * 2021-11-15 2023-05-19 成都百利多特生物药业有限责任公司 双特异性抗体-喜树碱类药物偶联物及其医药用途
US11814394B2 (en) 2021-11-16 2023-11-14 Genequantum Healthcare (Suzhou) Co., Ltd. Exatecan derivatives, linker-payloads, and conjugates and thereof
WO2023098889A1 (zh) * 2021-12-03 2023-06-08 成都百利多特生物药业有限责任公司 抗人Trop2抗体-喜树碱类药物偶联物及其医药用途
CN116966314A (zh) * 2022-04-29 2023-10-31 成都百利多特生物药业有限责任公司 一种包含亲水性糖结构的配体-药物偶联物
TW202344252A (zh) * 2022-05-09 2023-11-16 大陸商同宜醫藥（蘇州）有限公司 一種喜樹鹼衍生物，基於其的抗體－藥物偶聯物和藥物組成物，及其應用
WO2024008102A1 (en) * 2022-07-05 2024-01-11 Wuxi Xdc (Shanghai) Co., Ltd. Linker for conjugation
WO2024067811A1 (en) * 2022-09-30 2024-04-04 Beigene, Ltd. Ligand-drug conjugate of exatecan analogue, and medical use thereof
WO2024067754A1 (zh) * 2022-09-30 2024-04-04 成都百利多特生物药业有限责任公司 一种带有高稳定性亲水连接单元的奥瑞他汀类药物及其偶联物
WO2024091437A1 (en) * 2022-10-25 2024-05-02 Merck Sharp & Dohme Llc Exatecan-derived adc linker-payloads, pharmaceutical compositions, and uses thereof

Family Cites Families (15)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5208020A (en) 1989-10-25 1993-05-04 Immunogen Inc. Cytotoxic agents comprising maytansinoids and their therapeutic use
US7365205B2 (en) 2001-06-20 2008-04-29 Daiichi Sankyo Company, Limited Diamine derivatives
AU2002363939A1 (en) * 2001-11-20 2003-06-10 Seattle Genetics, Inc. Treatment of immunological disorders using anti-cd30 antibodies
SG195524A1 (en) 2003-11-06 2013-12-30 Seattle Genetics Inc Monomethylvaline compounds capable of conjugation to ligands
JP2008521828A (ja) * 2004-11-29 2008-06-26 シアトル ジェネティックス， インコーポレイテッド 操作された抗体およびイムノコンジュゲート
SI2032606T1 (sl) * 2006-05-30 2014-02-28 Genentech, Inc. Protitelesa in imunokonjugati in njihove uporabe
WO2009011285A1 (ja) 2007-07-13 2009-01-22 Taisho Pharmaceutical Co., Ltd. ヘテロアリールベンゼン化合物
EP2862856B1 (en) 2012-06-15 2018-08-01 Mitsubishi Tanabe Pharma Corporation Imidazole and triazole compounds as dgat-1 inhibitors
KR20230142808A (ko) * 2012-10-11 2023-10-11 다이이찌 산쿄 가부시키가이샤 글리신아미드 화합물의 제조 방법
ES2754348T3 (es) * 2014-04-10 2020-04-17 Daiichi Sankyo Co Ltd Conjugado de (anticuerpo anti-HER2)-fármaco
CN113952469A (zh) 2017-06-19 2022-01-21 四川百利药业有限责任公司 一种带酸性自稳定接头的抗体-药物偶联物
CN111051330A (zh) 2017-08-31 2020-04-21 第一三共株式会社 抗体-药物缀合物的改进制备方法
EP3858386A4 (en) 2018-09-26 2022-10-12 Jiangsu Hengrui Medicine Co., Ltd. LIGAND-DRUG CONJUGATE OF AN EXATECAN ANALOG, METHOD FOR PREPARATION AND THEIR USE
WO2020063673A1 (zh) 2018-09-30 2020-04-02 江苏恒瑞医药股份有限公司 抗b7h3抗体-依喜替康类似物偶联物及其医药用途
BR112021024406A2 (pt) 2019-06-06 2022-04-19 Jiangsu Hansoh Pharmaceutical Group Co Ltd Conjugado anticorpo-fármaco anti-b7-h4 e uso medicinal do mesmo

Also Published As

Publication number Publication date
MX2022015695A (es) 2023-03-21
EP4162954A1 (en) 2023-04-12
CA3186295A1 (en) 2021-12-16
AU2021289927A1 (en) 2023-01-19
CN113827736A (zh) 2021-12-24
WO2021249228A1 (zh) 2021-12-16
US20230226207A1 (en) 2023-07-20
BR112022024930A2 (pt) 2022-12-27
IL298787A (en) 2023-02-01
JP2023529415A (ja) 2023-07-10

Similar Documents

Publication Publication Date Title
KR20230022211A (ko) 고안정성 친수성 연결 단위를 갖는 캄프토테신 약물 및 이의 접합체
WO2021052402A1 (zh) 一种喜树碱衍生物及其偶联物
CN107428801B (zh) 用于偶联和治疗的哈米特林(hemiasterlin)衍生物
CN114456186B (zh) 一种喜树碱类衍生物及其配体-药物偶联物
CN113766954A (zh) 喜树碱衍生物
CN106573956A (zh) 澳瑞他汀衍生物及其缀合物
WO2022078259A1 (zh) 一种氘代的喜树碱衍生物及其抗体药物偶联物
KR20160045146A (ko) 마크롤라이드 디아스테레오머를 포함하는 약제학적 조성물, 이의 합성 방법 및 치료학적 용도
CN105899515B (zh) uncialamycin的衍生物、合成方法及其作为抗肿瘤剂的用途
KR20160111964A (ko) 리간드-세포독성 약물 접합체, 이의 제조방법 및 이의 용도
WO2022078279A1 (zh) 抗体-药物偶联物及其应用
JP2024503074A (ja) カンプトテシン抗体－薬物コンジュゲート及びその使用方法
CN115209922A (zh) 缀合物及其用途
JP2018123122A (ja) カリケアマイシン誘導体およびその抗体薬物コンジュゲート
WO2023138635A1 (zh) 一种依喜替康衍生物-抗体偶联物及其医药用途
WO2022262789A1 (zh) 一种抗肿瘤化合物及其应用
KR20240016249A (ko) 항체 약물 접합체, 이의 제조 방법, 및 이의 용도
WO2023098889A1 (zh) 抗人Trop2抗体-喜树碱类药物偶联物及其医药用途
WO2023083381A1 (zh) 双特异性抗体-喜树碱类药物偶联物及其医药用途
WO2024067477A1 (zh) 抗cd33抗体和抗cd33抗体-药物偶联物及其用途
WO2023178641A1 (zh) 一种dna毒性二聚体化合物及其偶联物
WO2024012524A1 (zh) 抗体药物偶联物及其制备方法和用途
WO2023208168A1 (zh) 一种包含亲水性糖结构的配体-药物偶联物
WO2022166719A1 (zh) 一种ca4衍生物及其配体-药物偶联物
TW202304920A (zh) 一種dna毒性二聚體化合物及其偶聯物