TW202304920A - 一種dna毒性二聚體化合物及其偶聯物 - Google Patents
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Abstract
一種DNA毒性二聚體化合物及其偶聯物或其藥學上可接受的鹽，包括其製備方法和在預防或治療癌症中的作用。所述偶聯物能夠特異性地結合腫瘤細胞中高表達的受體。具有良好的水溶性，穩定性及均一性，可用於預防或治療腫瘤等疾病。
Description
本發明涉及新型細胞毒性化合物和包含這些細胞毒性化合物和細胞結合劑的藥物。更具體地說，本發明涉及新型苯並二氮雜卓二聚體化合物、其衍生物、其中間體其藥學上可接受的鹽及其偶聯物，它們可用作藥物，尤其是用作抗腫瘤藥物。
配體-藥物偶聯物(ADC)作為新型的靶向藥物，一般由三部分所組成：抗體或抗體類配體，小分子藥物以及將配體和藥物偶聯起來的連接子。抗體藥物偶聯物利用抗體對抗原的特異性辨識，將藥物分子運輸至靶細胞附近並有效釋放藥物分子，達到治療目的。2011年8月，美國食品藥品監督管理局(FDA)批准西雅圖基因公司研製的用於治療霍奇金淋巴瘤以及復發性變性大細胞淋巴瘤(ALCL)的ADC新藥AdecteisTM上市，臨床應用已經證明瞭此類藥物的安全性和有效性。隨著ADC藥物的發展，需要更加有效、更新作用機制的小分子藥物。
苯並二氮雜卓類衍生物，具有辨識並結合特定DNA序列的能力，是一種高度有效的鏈間交聯劑，能與DNA小溝中的鳥嘌呤反應，形成DNA加合物，干擾DNA的加工，因此將它們作為抗腫瘤藥物使用。(Rahman et al.(2009)Jour.Amer.Chem.Soc.131(38)：13756-13766；Thurston et al.(1994)Chem.Rev.,94：433-465；Bose et al.(1992)J.Am.Chem.Soc.114：4939-4941；Gregson et al.(2004)Jour.Med.Chem.47(5)：1161-1174)。
1-(氯甲基)-2,3-二氫-1H-苯並[e]吲哚(CBI)類的DNA小溝烷化劑是有力的細胞毒素(Atwell et al.(1999)J.Med.Chem.,42：3400)，而且已經作為效應器單元用於為癌症療法設計的多類前體藥物。已經通過烷基鏈將CBI和苯並二氮雜卓類衍生物連接到一起(CN105636612 A)。
咪唑並[1,2-a]吡啶類衍生物是一種強有力的DNA粘合單元，已經用於抗腫瘤抗生素倍癌黴素(duocarmycins)衍生物的合成，並表現出非常有效的細胞毒性(RonaldC.Elgersma et al.(2015)Mol.Pharmaceutics.12：1813-1835)。
現有技術公開的苯並二氮雜卓類衍生物毒性極大，在極低劑量時是有毒的，因此，改進的較低毒性且仍
有治療活性的，高治療窗的苯並二氮雜卓類衍生物顯得非常必要。
本發明旨在提供一種具有良好治療窗的細胞毒性的苯並二氮雜卓二聚體衍生物及其抗體偶聯物。全新設計的細胞毒性的苯並二氮雜卓二聚體衍生物的偶聯物中小分子藥物具有氯甲基(CBI)和亞胺(PBD)兩個官能團。氯甲基是一個前體藥物結構，進入體內可形成三元環結構，進一步可以發生DNA烷基化。這兩個官能團的存在可增強DNA的交聯。發明人意外發現，此類苯並二氮雜卓類ADC藥物，具有良好的安全性和高效的抗腫瘤活性。
本發明揭示一種如式I所示的配體-藥物偶聯物，或其藥學上可接受的鹽、氘代物及溶劑化物：
Ab-L-D (I)
其中：
Ab為配體單元，選自抗體、抗體片段、靶向蛋白或Fc-融合蛋白；
L為D與Ab的連接單元；
D為藥物單元，選自以下結構：
或
其中：
波浪線表示藥物與L連接的位點，且只存在三個位點中的一個位點與L相連；
R1為H、氘、OH或由OR3表示的醚、亞硫酸根SO3 -或OSO3 -，其中R3選自C1-C10的直鏈、支鏈或環狀烷基、烯基或炔基；
在N和C之間的雙線
表示單鍵或雙鍵，條件是當其為雙鍵時，N處不與L相連且R1是H；當其為單鍵時，N處與L相連，R1選自OH或由OR3表示的醚、亞硫酸根SO3 -或OSO3 -，其中R3選自C1-C10的直鏈、支鏈或環狀烷基、烯基或炔基；
R2為H或烷基取代基；
T選自於C2-C12烴基、Z、(C1-C6亞烷基)-Z-(C1-C6亞烷基)、(C1-C6亞烷基)-Z-(C1-C6亞烷基)-Z-(C1-C6亞烷基)、(C1-C6亞烯基)-Z-(C1-C6亞烯基)或(C1-C6亞炔基)-Z-(C1-C6亞炔基)；
其中：
Z獨立選自O、S、NR4、芳基或雜芳基；其中R4選自於H、P(O)3H2或C(O)NR5R6；其中R5和R6選自H、C1-C6烷
基、一或多個F取代的C1-C6烷基，或者R5和R6形成五元或六元雜環基基團；
亞烷基，亞烯基，芳基和雜芳基是獨立且任選用F、OH、O(C1-C6烷基)、NH2、NHCH3、N(CH3)2或C1-C6烷基取代的，其中烷基任選是用一或多個F取代的；
Y選自於一或多個H或C1-C4的烷基；
X獨立選自於-O-、-N-、-S-、-OC(O)-CR7R8-(CR9R10)m-O-、-OC(O)-CR7R8-(CR9R10)m-NH-、-OC(O)-CR7R8-(CR9R10)m-S-、-NHC(O)-CR7R8-(CR9R10)m-O-、-NHC(O)-CR7R8-(CR9R10)m-NH-或-NHC(O)-CR7R8-(CR9R10)m-S-等；
其中：
R7、R8分別獨立地為氫原子、氘原子、鹵素、烷基、氘代烷基、鹵代烷基、環烷基、環烷基烷基、烷氧基烷基、雜環基、芳基、取代芳基或雜芳基；或者，R7、R8及其所連接碳原子構成C3-C6環烷基、環烷基烷基或雜環基；
R9、R10相同或者不同，且分別獨立地為氫原子、氘原子、鹵素、烷基、鹵代烷基、氘代烷基、烷氧基、羥基、氨基、氰基、硝基、羥烷基、環烷基或雜環基；或者，R9、R10及其所連接碳原子構成C3-C6環烷基、環烷基烷基或雜環基；
m選自0-4的整數；
X1選自於鹵素或OSO2R11，其中R11可獨立的選自於H、C1-C4的烴基、苯基或者取代苯基。
作為優選方式，Ab為抗體，可通過其雜原子與連接單元形成連接鍵，所述抗體選自鼠源抗體、嵌合抗體、人源化抗體、全人源抗體、抗體片段、雙特異性抗體或多特異性抗體。
進一步優選，抗體或其抗原結合片段，非限制性地選自：抗EGFR VIII抗體、抗DLL-3抗體、抗PSMA抗體、抗CD70抗體、抗MUC16抗體、抗ENPP3抗體、抗TDGF1抗體、抗ETBR抗體、抗MSLN抗體、抗TIM-1抗體、抗LRRC15抗體、抗LIV-1抗體、抗CanAg/AFP抗體、抗cladin 18.2抗體、抗Mesothelin抗體、抗HER2(ErbB2)抗體、抗EGFR抗體、抗c-MET抗體、抗SLITRK6抗體、抗KIT/CD117抗體、抗STEAP1抗體、抗SLAMF7/CS1抗體、抗NaPi2B/SLC34A2抗體、抗GPNMB抗體、抗HER3(ErbB3)抗體、抗MUC1/CD227抗體、抗AXL抗體、抗CD166抗體、抗B7-H3(CD276)抗體、抗PTK7/CCK4抗體、抗PRLR抗體、抗EFNA4抗體、抗5T4抗體、抗NOTCH3抗體、抗Nectin 4抗體、抗TROP-2抗體、抗CD142抗體、抗CA6抗體、抗GPR20抗體、抗CD174抗體、抗CD71抗體、抗EphA2抗體、抗LYPD3抗體、抗FGFR2抗體、抗FGFR3抗體、抗FRα抗體、抗CEACAMs抗體、抗GCC抗體、抗Integrin Av抗體、抗CAIX抗體、抗P-cadherin
抗體、抗GD3抗體、抗Cadherin 6抗體、抗LAMP1抗體、抗FLT3抗體、抗BCMA抗體、抗CD79b抗體、抗CD19抗體、抗CD33抗體、抗CD56抗體、抗CD74抗體、抗CD22抗體、抗CD30抗體、抗CD37抗體、抗CD47抗體、抗CD138抗體、抗CD352抗體、抗CD25抗體或抗CD123抗體。
一種DNA毒性二聚體化合物及其偶聯物或其藥學上可接受的鹽、氘代物及溶劑化物，作為優選：L為可裂解型或不可裂解型。
一種DNA毒性二聚體化合物及其偶聯物或其藥學上可接受的鹽、氘代物及溶劑化物，所述藥學上可接受的鹽包括與結構式中酸性官能團形成的鈉鹽、鉀鹽、鈣鹽或鎂鹽；或與結構中鹼性官能團形成的醋酸鹽、三氟乙酸鹽、檸檬酸鹽、草酸鹽、酒石酸鹽、蘋果酸鹽、硝酸鹽、氯化物、溴化物、碘化物、硫酸鹽、硫酸氫鹽、磷酸鹽、乳酸鹽、油酸鹽、抗壞血酸鹽、水楊酸鹽、甲酸鹽、谷氨酸鹽、甲磺酸鹽、乙磺酸鹽、苯磺酸鹽或對甲苯磺酸鹽。
一種DNA毒性二聚體化合物及其偶聯物或其藥學上可接受的鹽，其製備用於治療或預防腫瘤藥物的用途。
作為優選，腫瘤為乳腺癌、卵巢癌、宮頸癌、子宮癌、前列腺癌、腎癌、尿道癌、膀胱癌、肝癌、胃癌、子宮內膜癌、唾液腺癌、食道癌、肺癌、結腸癌、直腸癌、結直腸癌、骨癌、皮膚癌、甲狀腺癌、胰腺癌、黑色素瘤、
神經膠質瘤、神經母細胞瘤、多形性膠質細胞瘤、肉瘤、淋巴瘤和白血病等實體瘤或血液瘤。
本發明還揭示與Ab連接的通式為II或III的化合物，或其藥學上可接受的鹽或溶劑化物：
或
其中：
R1為H、OH或由OR3表示的醚、亞硫酸根SO3 -或OSO3 -，其中R3選自C1-C10的直鏈、支鏈或環狀烷基、烯基或炔基；在N和C之間的雙線
表示單鍵或雙鍵，條件是當其為雙鍵時，R12不存在且R1是H；當其為單鍵時，R12為-C(O)O-L3，其中L3為連接單元；R1選自OH、由OR3表示的醚、亞硫酸根SO3 -或OSO3 -，其中R3選自C1-C10的直鏈、支鏈或環狀烷基、烯基或炔基；
R2為H或烷基取代基；
T選自於C2-C12烴基、Z、(C1-C6亞烷基)-Z-(C1-C6亞烷基)、(C1-C6亞烷基)-Z-(C1-C6亞烷基)-Z-(C1-C6亞烷基)、(C1-C6亞烯基)-Z-(C1-C6亞烯基)或(C1-C6亞炔基)-Z-(C1-C6亞炔基)；
其中：
Z獨立選自O，S，NR4，芳基和雜芳基；其中R4選自於H，P(O)3H2，C(O)NR5R6，其中R5和R6選自H，C1-C6烷基，一或多個F取代的C1-C6烷基，或者R5和R6形成五元或六元雜環基基團；
亞烷基，亞烯基，芳基和雜芳基是獨立且任選用F，OH，O(C1-C6烷基)，NH2，NHCH3，N(CH3)2和C1-C6烷基取代的，其中烷基任選是用一或多個F取代的；
Y選自於一或多個H或C1-C4的烷基；
X獨立選自於-O-、-N-、-S-、-OC(O)-CR7R8-(CR9R10)m-O-、-OC(O)-CR7R8-(CR9R10)m-NH-、-OC(O)-CR7R8-(CR9R10)m-S-、-NHC(O)-CR7R8-(CR9R10)m-O-、-NHC(O)-CR7R8-(CR9R10)m-NH-或-NHC(O)-CR7R8-(CR9R10)m-S-；
其中：
R7、R8分別獨立地為氫原子、氘原子、鹵素、烷基、氘代烷基、鹵代烷基、環烷基、環烷基烷基、烷氧基烷基、雜環基、芳基、取代芳基或雜芳基；或者，R7、R8及其所連接碳原子構成C3-C6環烷基、環烷基烷基或雜環基；
R9、R10相同或者不同，且分別獨立地為氫原子、氘原子、鹵素、烷基、鹵代烷基、氘代烷基、烷氧基、羥基、氨基、氰基、硝基、羥烷基、環烷基或雜環基；或者，R9、R10
及其所連接碳原子構成C3-C6環烷基、環烷基烷基或雜環基；
m選自0-4的整數；
X1選自於鹵素或OSO2R11，其中R11可獨立的選自於H，C1-C4的烴基，苯基或者取代苯基；
L1，L2為連接單元或取代基。
作為優選方式，T選自C2-C12的亞烷基。
進一步優選，T為
。
作為優選方式，X為-O-、-N-或-NHC(O)-CR7R8-(CR9R10)m-O-。
作為優選方式，L3為：
其中：波浪線處與-C(O)O-相連；L4為連接單元，與配體單元相連。
作為優選方式，L4非限制性地選自：
其中：波浪線處，左側(碳端)與配體單元相連，右側(氮端或酯羰基端)與X2相連。
作為優選方式，Q為：
其中Qx為氨基酸殘基或由氨基酸構成的肽殘基。
作為優選方式，X2為：
其中a選自0-5的整數，b選自0-16的整數，c選自0-1的整數，d選自0-5的整數。
進一步優選，L3非限制性地選自：
其中：波浪線處，左側(丁二醯亞胺端)與配體單元相連，右側與-C(O)O-相連。
作為優選方式，通式為II或III的化合物或其藥學上可接受的鹽或溶劑化物，L1和L2分別獨立選自：
結構A：氫原子，C(O)NR'R''，其中R'和R''選自H、C1-C6烷基一或多個F取代的C1-C6烷基，或者R'和R''形成五元或六元雜環基基團；
結構B：L4-L5-，L4-L6-或L4-L7-L8-L9-，其中L4、L5、L6、L7、L8和L9均為連接單元，L4與配體單元連接，L5、L6、L9與X相連。
進一步優選，
當N和C之間為單鍵即R12存在時，L1、L2分別獨立選自於結構A；
當N和C之間為雙鍵即R12不存在時，L1為結構A或B，則L2為結構B或A。
進一步優選，L5為-((CH2)sO)r(CH2)sX3L10-或-((CH2)sO)r(CH2)sX4L10-；
L6為-((CH2)sO)r(CH2)s-；
L10為-(CH2)s-或-((CH2)sNHC(=O)X5X6C(=O)(CH2)s-；
其中：
X3非限制性地選自：
X4非限制性地選自：
X5非限制性地選自：
X6選自由氨基酸組成的肽殘基，非限制性地選自：
s選自1-10的整數，r選自1-14的整數。
進一步優選，L7為-NC(R14R15)C(O)、-NR16(CH2)oC(O)-、-NR16(CH2CH2O)o
CH2C(O)-、-S(CH2)pC(O)-或者化學鍵，其中o選自0-20的整數；p選自0-20的整數；R14與R15相同或者不同，且各自獨立地選自氫原子、氘原子、烷基、取代烷基、氘代烷基、雜烷基、羧基、氨基、取代氨基；R16選自氫原子、氘原子、鹵素、烷基、取代烷基、氘代烷基、環烷基烷基、烷氧基烷基、芳基、取代芳基或雜芳；
L8選自由氨基酸構成的肽殘基，優選由一個、兩個或者多個選自苯丙氨酸(F)、甘氨酸(G)、纈氨酸(V)、賴氨酸(K)、瓜氨酸、絲氨酸(S)、谷氨酸(E)或者天冬氨酸(D)中的氨基酸形成的肽殘基；
L9為-NR17(CR18R19)q-、-C(O)NR17-、-C(O)NR17(CH2)q-或者化學鍵，其中q選自0-6的整數；R17、R18和R19相同或者不同，且各自獨立地選自氫原子、氘原子、鹵素、烷基、取代烷基、氘代烷基、環烷基、環烷基烷基、烷氧基烷基、雜環基、芳基、取代芳基或雜芳基。
進一步優選，L1、L2獨立從結構B中非限制性地選自以下結構：
更進一步優選，通式為II或III的化合物或其藥學上可接受的鹽或溶劑化物，非限制性地選自以下結構：
作為優選，抗體-藥物偶聯物或其藥學上可接受的鹽、氘代物及溶劑化物，非限制性地選自以下結構：
其中u選自1-10的整數。
縮寫和定義
除非另有說明，否則如本文所用的以下術語和短語旨在具有以下含義。當本文中使用商標名稱時，除非上下文中另有指明，否則商標名稱包括所述商標名稱產品的產品配方、通用藥物和活性成分。
除非有相反陳述，本文申請專利範圍和說明書中使用的術語具有下述含義。
術語「配體」是能辨識和結合目標細胞相關的抗原或受體的大分子化合物。配體的作用是將藥物呈遞給與
配體結合的目標細胞群，這些配體包括但不限於蛋白類激素、凝集素、生長因數、抗體或其他能與細胞結合的分子。在本發明實施方式中，配體表示為Ab，配體可通過配體上的雜原子與連接單元形成連接鍵，優選為抗體或其抗原結合片段，所述抗體選自嵌合抗體、人源化抗體、全人抗體或鼠源抗體；優選為單克隆抗體。
配體單元是與靶標部分特異性結合的靶向劑。所述配體能夠特異性結合至細胞組分或結合至細胞組分或結合至其他感興趣的靶標分子。靶標部分或靶標通常在細胞表面上。在一些方面中，配體單元的作用是將藥物單元遞送至配體單元與之相互作用的特定靶細胞群。配體包括但不限於蛋白質、多肽和肽，以及非蛋白質如糖。合適的配體單元包括，例如，抗體，例如全長(完整)抗體及其抗原結合片段。在配體單元是非抗體靶向試劑的實施方式中，其可以是肽或多肽，或非蛋白質分子。這類靶向試劑的示例包括干擾素、淋巴因數、激素、生長因數和集落刺激因數、維生素、營養轉運分子、或任何其他細胞結合分子或物質。在一些實施方式中，連接子共價連接至配體的硫原子。在一些方面中，硫原子是半胱氨酸殘基的硫原子，其形成抗體的鏈間二硫鍵。在另一方面中，硫原子是已經導入配體單元的半胱氨酸殘基的硫原子，其形成抗體的鏈間二硫鍵。在另一方面中，硫原子是已經導入配體單元的半胱氨酸殘基的硫原子(例如，通過定點誘變或化學反應)。在其他方面中，連接子結合的硫原子選自形成抗體
的鏈間二硫鍵的半胱氨酸殘基或已經引入配體單元的額半胱氨酸殘基(例如，通過定點誘變或化學反應)。在一些實施方式中，按照Kabat{[Kabat E.A等，(1991)]《免疫學感興趣的蛋白質序列》(Sequences of proteins of Immunological Interest)，第五版，NIH出版物91-3242}中的EU索引編號系統。
如本文所用，「抗體」或「抗體單元」在其所屬的範圍內，包括抗體結構的任何部分。這一單元可以結合，反應性關聯，或者絡合一個受體，抗原或者靶向細胞群體具有的其它受體單元。抗體可以是任何蛋白或蛋白類分子，它可以結合、絡合或者與待治療或生物改造的細胞群體的一部分發生反應。本發明中組成抗體藥物偶聯物的抗體保持其原有野生狀態時的抗原結合能力。因此，本發明中的抗體能夠專一性地與抗原結合。涉及的抗原包括，例如，腫瘤相關抗原(TAA)，細胞表面受體蛋白和其他細胞表面分子，細胞存活調節因數，細胞增殖調節因數，與組織生長與分化相關的分子(如已知或預知的具有功能性的)，淋巴因數，細胞因數，參與細胞循環調節的分子，參與血管產生的分子，以及與血管產生有關的分子(如已知或預知的具有功能性的)。腫瘤相關因數可以是簇分化因數(如CD蛋白)。
應用在抗體藥物偶聯物中的抗體包括，但不局限於，針對細胞表面受體和腫瘤相關抗原的抗體。這樣的腫瘤相關抗原是業內所熟知的，可以通過業內熟知的抗體製
備方法和資訊來製備。為了開發可用於癌症診斷與治療的有效的細胞水平目標物，研究人員力圖找尋跨膜或其他腫瘤相關多肽。這些目標物能夠特異性的表達在一或多個癌細胞表面，而在一或多個非癌細胞表面表達很少或不表達。通常，相對於非癌細胞表面而言，這樣的腫瘤相關多肽在癌細胞表面更加過度表達。確認這樣的腫瘤相關因數，可大大提高基於抗體治療癌症的專一靶向特性。為方便起見，為業內所熟知的抗原相關資訊標示如下，包括名稱、其他名稱、基因庫登錄號。與腫瘤相關抗原對應的核酸和蛋白序列可參見公開資料庫，例如Genbank。抗體靶向對應的腫瘤相關抗原包括所有的氨基酸序列變種和同種，與參考文件中確認的序列具有至少70%,80%,85%,90%或者95%的同源性，或者具備與引用文件中的腫瘤相關抗原序列具有完全一致的生物性質和特徵。
術語「抑制」或「的抑制」指，減少了可檢測的量，或完全阻止。
術語「癌症」指的是以失調的細胞生長為特徵的生理病症或疾病。「腫瘤」包括癌細胞。
術語「自身免疫疾病」是源自針對個體自身的組織或蛋白質的疾病或紊亂。
術語「藥物」是指細胞毒性藥物，藥物表示d，能在腫瘤細胞內具有較強破壞其正常生長的化學分子。細胞毒性藥物原則上在足夠高的濃度下都可以殺死腫瘤細胞，但是由於缺乏特異性，在殺傷腫瘤細胞的同時，也會導致
正常細胞的凋亡，導致嚴重的副作用。該術語包括毒素，如細菌、真菌、植物或動物來源的小分子毒素或酶活性毒素，放射性同位素(例如At211、I131、I125、Y90、Re186、Re188、Sm153、Bi212、P32和Lu176的放射性同位素)，毒性藥物，化療藥物，抗生素和核溶酶，優選為毒性藥物。
術語「連接子」或「連接片段」或「連接單元」是指一端與配體連接而另一端與藥物相連的化學結構片段或鍵，也可以連接其他接頭後再與藥物相連。
接頭，包括延伸物、間隔物和氨基酸單元，可以通過本領域己知方法合成，諸如US2005-0238649A1中所記載的。接頭可以是便於在細胞中釋放藥物的「可切割接頭」。例如，可使用酸不穩定接頭(例如腙)、蛋白酶敏感(例如肽酶敏感)接頭、光不穩定接頭、二甲基接頭、或含二硫化物接頭(Chari等Cancer Research 52：127-131,1992)；美國專利No.5,208,020。
按照在細胞內藥物釋放的機制，如本文所用，「連接子」或「抗體藥物偶聯物的連接子」可被分為兩類：不可斷裂連接子和可斷裂連接子。對於含有不可斷裂連接子的抗體-藥物偶聯物，其藥物釋放機制為：偶聯物與抗原結合並被細胞內吞後，抗體在溶酶體中被酶解，釋放出由小分子藥物，連接子，和抗體氨基酸殘基共同組成的活性分子。由此帶來的藥物分子結構改變並不減弱其細胞毒性，但由於活性分子是帶電荷的(氨基酸殘基)，從而導致其不能滲入鄰近細胞。因此，此類活性藥物不能殺死鄰近不
表達靶向抗原(抗原陰性細胞)的腫瘤細胞(旁觀者效應，bystander effect)(Ducry等，2010，Bioconjugate Chem.21：5-13)。
術語「抗體-藥物偶聯物」，指抗體通過穩定的連接單元與具有生物活性的藥物相連。在本發明中「配體-藥物偶聯物」優選為抗體-藥物偶聯物(antibody drug conjugate,ADC)，指把單克隆抗體或者抗體片段通過穩定的連接單元與具有生物活性的毒性藥物相連。
本案所用氨基酸三字母代碼和單字母代碼如J.boil.Chem.1968,243,3558.中所述。
術語「烷基」指飽和脂肪族烴基團，其為包含1至20個碳原子的直鏈或支鏈基團，優選含有1至12個碳原子的烷基，更優選含有1至10個碳原子的烷基，最佳含有1至6個碳原子的烷基。非限制性實例包括甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、叔丁基、仲丁基、正戊基、1,1-二甲基丙基、1,2-二甲基丙基、2,2-二甲基丙基、1-乙基丙基、2-甲基丁基、3-甲基丁基、正己基、1-乙基-2-甲基丙基、1,1,2-三甲基丙基、1,1-二甲基丁基、1,2-二甲基丁基、2,2-二甲基丁基、1,3-二甲基丁基、2-乙基丁基、2-甲基戊基、3-甲基戊基、4-甲基戊基、2,3-二甲基丁基、正庚基、2-甲基己基、3-甲基己基、4-甲基己基、5-甲基己基、2,3-二甲基戊基、2,4-二甲基戊基、2,2-二甲基戊基、3,3-二甲基戊基、2-乙基戊基、3-乙基戊基、正辛基、2,3-二甲基己基、2,4-二甲基己
基、2,5-二甲基己基、2,2-二甲基己基、3,3-二甲基己基、4,4-二甲基己基、2-乙基己基、3-乙基己基、4-乙基己基、2-甲基-2-乙基戊基、2-甲基-3-乙基戊基、正壬基、2-甲基-2-乙基己基、2-甲基-3-乙基己基、2,2-二乙基戊基、正癸基、3,3-二乙基己基、2,2-二乙基己基，及其各種支鏈異構體等。更優選的是含有1至6個碳原子的低級烷基，非限制性實施例包括甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、叔丁基、仲丁基、正戊基、1,1-二甲基丙基、1,2-二甲基丙基、2,2-二甲基丙基、1-乙基丙基、2-甲基丁基、3-甲基丁基、正己基、1-乙基-2-甲基丙基、1,1,2-三甲基丙基、1,1-二甲基丁基、1,2-二甲基丁基、2,2-二甲基丁基、1,3-二甲基丁基、2-乙基丁基、2-甲基戊基、3-甲基戊基、4-甲基戊基、2,3-二甲基丁基等。烷基可以是取代的或非取代的，當被取代時，取代基可以在任何可使用的連接點上被取代，所述取代基優選為一或多個以下基團，其獨立地選自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、鹵素、巰基、羥基、硝基、氰基、環烷基、雜環烷基、芳基、雜芳基、環烷氧基、雜環烷氧基、環烷硫基、雜環烷硫基、氧代基。
術語「取代烷基」指烷基中的氫被取代基團取代，除非文中另有說明，烷基的取代基可以是選自下組的多種基團：-鹵素、-OR’、-NR’R”、-SR’、-SiR’R”R'''、-OC(O)R’、-C(O)R’、-CO2R’、-CONR’R”、-OC(O)NR’R”、-NR”C(O)R’、
-NR’-C(O)NR”R'''、-NR”C(O)2R’、-NH-C(NH2)=NH、-NR’C(NH2)=NH、-NH-C(NH2)=NR’、-S(O)R’、-S(O)2R’、-S(O)2NR’R”、-NR’S(O)2R”、-CN和-NO2，取代基數量為0至(2m’+1)，其中m’為該基團中碳原子的總數。R’、R”和R'''各自獨立的指代氫、未取代的C1-8烷基、未取代的芳基、由1-3個鹵素取代的芳基、未取代的C1-8烷基、C1-8烷氧基或C1-8硫代烷氧基、或未取代的芳基-C1-4烷基。R’和R”連接於同一個氮原子時，它們可與該氮原子一起形成3-，4-，5-，6-或7-元環。例如，-NR’R”包括1-吡咯烷基和4-嗎啉基。
術語「雜烷基」指含有一或多個選自N、O或S的雜原子的烷基，其中烷基如上所定義。
術語「亞烷基」指飽和的直鏈或支鏈脂肪族烴基，其具有2個從母體烷的相同碳原子或兩個不同的碳原子上除去兩個氫原子所衍生的殘基，其為包含1至20個碳原子的直鏈或支鏈基團，優選含有1至12個碳原子，更優選含有1至6個碳原子的亞烷基。亞烷基的非限制性實例包括但不限於亞甲基(-CH2-、1,1-亞乙基(-CH(CH3)-)、1,2-亞乙基(-CH2CH2)-、1,1-亞丙基(-CH(CH2CH3)-)、1,2-亞丙基(-CH2CH(CH3)-)、1,3-亞丙基(-CH2CH2CH2-)、1,4-亞丁基(-CH2CH2CH2CH2-)和1,5-亞丁基(-CH2CH2CH2CH2CH2-)等。亞烷基可以是取代的或非
取代的，當被取代時，取代基可以在任何可使用的連接點上被取代，所述取代基優選獨立地任選選自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、鹵素、巰基、羥基、硝基、氰基、環烷基、雜環基、芳基、雜芳基、環烷氧基、雜環烷氧基、環烷硫基、雜環烷硫基和氧代基中的一或多個取代基所取代。
術語「烷氧基」指-O-(烷基)和-O-(環烷基)，其中烷基或環烷基的定義如前述。烷氧基的非限制性實例包括：甲氧基、乙氧基、丙氧基、丁氧基、環丙氧基、環丁氧基、環戊氧基、環己氧基。烷氧基可以是任選取代的或非取代的，當被取代時，取代基優選為一或多個以下基團，其獨立地選自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、鹵素、巰基、羥基、硝基、氰基、環烷基、雜環烷基、芳基、雜芳基、環烷氧基、雜環烷氧基、環烷硫基、雜環烷硫基。
術語「環烷基」指飽和或部分不飽和單環或多環環狀烴取代基，環烷基環包含3至20個碳原子，優選包含3至12個碳原子，更優選包含3至10個碳原子，最佳包含3至8個碳原子。單環環烷基的非限制性實例包括環丙基、環丁基、環戊基、環戊烯基、環己基、環己烯基、環己二烯基、環庚基、環庚三烯基、環辛基等；多環環烷基包括螺環、稠環和橋環的環烷基。
術語「雜環基」指飽和或部分不飽和單環或多環環狀烴取代基，其包含3至20個環原子，其中一或多個環
原子為選自氮、氧或S(O)m(其中m是整數0至2)的雜原子，但不包括-O-O-、-O-S-或-S-S-的環部分，其餘環原子為碳。優選包含3至12個環原子，其中1~4個是雜原子；更優選環烷基環包含3至10個環原子。單環雜環基的非限制性實例包括吡咯烷基、呱啶基、呱嗪基、嗎啉基、硫代嗎啉基、高呱嗪基等。多環雜環基包括螺環、稠環和橋環的雜環基。
術語「環烷基烷基」指烷基被一或多個環烷基取代，優選被一個環烷基取代，其中烷基如上所定義，其中環烷基如上所定義。
術語「鹵代烷基」指烷基被一或多個鹵素取代，其中烷基如上所定義。
術語「氘代烷基」指烷基被一或多個氘原子取代，其中烷基如上所定義。
術語「羥基」指-OH基團。
術語「鹵素」指氟、氯、溴或碘。
術語「氨基」指-NH2。術語「硝基」指-NO2。
術語「醯胺基"指-C(O)N(烷基)或(環烷基)，其中烷基、環烷基如上所定義。
術語「羧酸酯基"指-C(O)O(烷基)或(環烷基)，其中烷基、環烷基如上所定義。
本發明還包括各種氘化形式的式I。與碳原子連接的各個可用的氫原子可獨立地被氘原子替換。本領域技藝人士能夠參考相關文件合成氘化形式的式I。在製備氘代形
式的式I時可使用市售的氘代起始物質，或它們可使用一般技術採用氘代試劑合成，氘代試劑的非限制性實例包括：氘代硼烷、三氘代硼烷四氫呋喃溶液、氘代氫化鋰鋁、氘代碘乙烷和氘代碘甲烷等。
術語「抗體」指免疫球蛋白，是由兩條相同的重鏈和兩條相同的輕鏈通過鏈間二硫鍵連接而成的四肽鏈結構。免疫球蛋白重鏈恒定區的氨基酸組成和排列順序不同，故其抗原性也不同。據此，可將免疫球蛋白分為五類，或稱為免疫球蛋白的同種型，即IgM、IgD、IgG、IgA和IgE，其相應的重鏈分別為μ鏈、δ鏈、γ鏈、α鏈和ε鏈。同一類Ig根據其鉸鏈區氨基酸組成和重鏈二硫鍵的數目和位置的差別，又可分為不同的亞類，如IgG可分為IgG1、IgG2、IgG3、IgG4。輕鏈通過恒定區的不同分為κ鏈或λ鏈。五類Ig中每類Ig都可以有κ鏈或λ鏈。本發明所述的抗體優選為針對靶細胞上細胞表面抗原的特異性抗體，非限制性實施例為以下抗體：抗EGFRvIII抗體、抗DLL-3抗體、抗PSMA抗體、抗CD70抗體、抗MUC16抗體、抗ENPP3抗體、抗TDGF1抗體、抗ETBR抗體、抗MSLN抗體、抗TIM-1抗體、抗LRRC15抗體、抗LIV-1抗體、抗CanAg/AFP抗體、抗cladin 18.2抗體、抗Mesothelin抗體、抗HER2(ErbB2)抗體、抗EGFR抗體、抗c-MET抗體、抗SLITRK6抗體、抗KIT/CD117抗體、抗STEAP1抗體、抗SLAMF7/CS1抗體、抗NaPi2B/SLC34A2抗體、抗GPNMB抗體、抗
HER3(ErbB3)抗體、抗MUC1/CD227抗體、抗AXL抗體、抗CD166抗體、抗B7-H3(CD276)抗體、抗PTK7/CCK4抗體、抗PRLR抗體、抗EFNA4抗體、抗5T4抗體、抗NOTCH3抗體、抗Nectin 4抗體、抗TROP-2抗體、抗CD142抗體、抗CA6抗體、抗GPR20抗體、抗CD174抗體、抗CD71抗體、抗EphA2抗體、抗LYPD3抗體、抗FGFR2抗體、抗FGFR3抗體、抗FR α抗體、抗CEACAMs抗體、抗GCC抗體、抗Integrin Av抗體、抗CAIX抗體、抗P-cadherin抗體、抗GD3抗體、抗Cadherin 6抗體、抗LAMP1抗體、抗FLT3抗體、抗BCMA抗體、抗CD79b抗體、抗CD19抗體、抗CD33抗體、抗CD56抗體、抗CD74抗體、抗CD22抗體、抗CD30抗體、抗CD37抗體、抗CD138抗體、抗CD352抗體、抗CD25抗體或抗CD123抗體中一或多個。
術語「溶劑化物」或「溶劑化合物」指本發明的配體-藥物偶聯物與一或多個溶劑分子形成可藥用的溶劑化物，溶劑分子的非限制性實例包括水、乙醇、乙腈、異丙醇、DMSO、乙酸乙酯。
術語「載藥量」是指式I中每個抗體上載入的細胞毒性藥物平均數量，也可以表示為藥物量和抗體量的比值，藥物載量的範圍可以是每個抗體(Ab)連接0-12個，優選1-10個細胞毒性藥物(D)。在本發明的實施方式中，載藥量表示為n，示例性的可以為1,2,3,4,5,6,7,8,9,10的均值。可用一般方法如UV/可見光光譜法，質譜，
ELISA試驗和HPLC特徵鑒定偶聯反應後每個ADC分子的藥物品均數量。
本發明的一個實施方式中，細胞毒性藥物通過連接單元偶聯在抗體鏈間打開的半胱氨酸巰基-SH及/或定點突變的半胱氨酸殘基的巰基-SH上，一般地，偶聯反應中能與抗體偶聯的藥物分子數將小於或等於理論上的最大值。
可以用以下非限制性方法控制配體細胞毒性藥物偶聯物的載量，包括：
(1)控制連接試劑和單抗的摩爾比，
(2)控制反應時間和溫度，
(3)選擇不同的反應試劑。
一般的藥物組合物的製備見中國藥典。
術語「藥學上可接受的鹽」或「可藥用鹽」是指本發明配體-藥物偶聯物的鹽，或本發明中所述的化合物的鹽，這類鹽用於哺乳動物體內時具有安全性和有效性，且具有應有的生物活性，本發明配體-藥物偶聯化合物至少含有一個羧基，因此可以與堿形成鹽，藥學上可接受的鹽的非限制性實例包括：鈉鹽、鉀鹽、鈣鹽或鎂鹽等。
術語「藥學上可接受的鹽」或「可藥用鹽」是指本發明抗體-藥物偶聯物的鹽，或本發明中所述的化合物的鹽，這類鹽用於哺乳動物體內時具有安全性和有效性，且具有應有的生物活性，本發明配體-藥物偶聯化合物至少含有一個氨基，因此可以與酸形成鹽，藥學上可接受的鹽的
非限制性實例包括：鹽酸鹽、氫溴酸鹽、氫碘酸鹽、硫酸鹽、硫酸氫鹽、檸檬酸鹽、乙酸鹽、琥珀酸鹽、抗壞血酸鹽、草酸鹽、硝酸鹽、梨酸鹽、磷酸氫鹽、磷酸二氫鹽、水楊酸鹽、檸檬酸氫鹽、酒石酸鹽、馬來酸鹽、富馬酸鹽、甲酸鹽、苯甲酸鹽、甲磺酸鹽、乙磺酸鹽、苯磺酸鹽、對甲苯磺酸鹽。
「酸性氨基酸」指氨基酸的等電點小於7，酸性氨基酸分子中往往帶有一或多個羧基等酸性基團，在結構中可有效電離為負離子形式而增加親水性。酸性氨基酸可以為天然的，也可為非天然的氨基酸。
「天然氨基酸」指由生物合成的氨基酸。天然氨基酸一般情況下是L-型的，但也有少數例外，比如甘氨酸，包括天然的和生物體合成的。
「非天然氨基酸」指通過合成手段所獲得的氨基酸。
下面結合具體實施例，進一步闡述本發明，應理解，這些實施例只用於說明本發明，而不用於限制本發明的範圍。下列實施例中未註明具體條件的試驗方法，通常按照一般條件或按照製造廠商所建議的條件。除非另外說明，否則所有的百分數、比例、比率、或份數按重量計。
實施例1：
化合物A的合成：
化合物A按照專利「CN109180681A」的實施例14化合物012的合成」提供的方法合成。
實施例2：
化合物B和化合物B1-9的合成：
1.化合物B的製備
化合物B按照專利「CN109180681A」的「通用步驟E：CBI-苯並二氮雜卓衍生物合成方法一」提供的方法合成。
2.化合物B1的製備
於25mL單口瓶中加入化合物B(50mg,0.072mmol)，羥基乙酸(11mg,0.14mmol)、EDCI(20mg,0.10mmol)、HOBt(13.5mg,0.10mmol)及3mL DMF，室溫反應2h，HPLC監測反應。反應結束後，反應液直接經過高效液相純化，得到化合物B1(42mg)，收率78%，LC-MS：[M+H]+=747.2。
3.化合物B2的製備
參照化合物B1的合成方法，於25mL單口瓶中加入化合物B(50mg,0.072mmol)，L-乳酸(12.6mg,0.14mmol)、EDCI(20mg,0.10mmol)、HOBt(13.5mg,0.10mmol)及3mL DMF，室溫反應2h，HPLC監測反應。反應結束後，反應液直接經過高效液相純化，得到化合物B2(37mg)，收率68%，LC-MS：[M+H]+=761.2。
4.化合物B3的製備
參照化合物B2的合成方法，將L-乳酸換成D-乳酸，即得化合物B3，LC-MS：[M+H]+=761.2。
5.化合物B4及B5的製備
於25mL單口瓶中加入化合物B(60mg,0.087mmol)，3,3,3-三氟乳酸(25mg,0.17mmol)、EDCI(25mg,0.13mmol)、HOBt(17.6mg,0.13mmol)及3mL DMF，室溫反應1.5h，HPLC監測反應。反應結束後，反應液直接經過高效液相純化，產品製備液凍幹分別得到化合物B4(26mg)，化合物B5(22mg),LC-MS：[M+H]+=815.2。
6.化合物B6和B7的製備
參照化合物B4和B5的合成方法，利用高效液相純化，即得化合物B6和B7，LC-MS：[M+H]+=787.3。
7.化合物B8和B9的製備
參照化合物B4和B5的合成方法，利用高效液相純化，即得化合物B8和B9，LC-MS：[M+H]+=801.3。
實施例3：
化合物C和C1-9的合成：
1.化合物C的製備
化合物C按照專利「CN109180681A」的「通用步驟E：CBI-苯並二氮雜卓衍生物合成方法二」提供的方法合成。
2.化合物C1的製備
於25mL單口瓶中加入化合物C(50mg,0.075mmol)，羥基乙酸(11.4mg,0.15mmol)、EDCI(21.6mg,0.11mmol)、HOBt(15.2mg,0.11mmol)及3mL DMF，室溫反應2h，HPLC監測反應。反應結束後，反應液直接經過高效液相純化，得到化合物C1(35mg)，收率65%，LC-MS：[M+H]+=723.2。
3.化合物C2的製備
參照化合物C1的合成方法，於25mL單口瓶中加入化合物C(50mg,0.075mmol)，L-乳酸(13mg,0.15mmol)、EDCI(21.6mg,0.11mmol)、HOBt(15.2mg,0.11mmol)及3mL DMF，室溫反應2h，HPLC監測反應。反應結束後，反應液直接經過高效液相純化，得到化合物C2(33.5mg)，收率63%，LC-MS：[M+H]+=737.2。
4.化合物C3的製備：
參照化合物C2的合成方法，將L-乳酸換成D-乳酸，即得化合物C3，LC-MS：[M+H]+=737.2。
5.化合物C4及C5的製備：
於25mL單口瓶中加入化合物C(60mg,0.09mmol)，3,3,3-三氟乳酸(26mg,0.18mmol)、EDCI(25mg,0.13mmol)、HOBt(17.6mg,0.13mmol)及3mL DMF，室溫反應1.5h，HPLC監測反應。反應結束後，反應液直接經過高效液相純化，產品製備液凍幹分別得到化合物C4(21mg)，化合物C5(25mg),LC-MS：[M+H]+=791.2。
6.化合物C6和C7的製備：
參照化合物C4和C5的合成方法，利用高效液相純化，即得化合物C6和C7，LC-MS：[M+H]+=763.3。
7.化合物C8和C9的製備：
參照化合物C4和C5的合成方法，利用高效液相純化，即得化合物C8和C9，LC-MS：[M+H]+=777.3。
實施例4：
化合物D1和D1-9的合成：
1.化合物D的製備
化合物D參照專利「CN109180681A」的「通用步驟A：苯並二氮雜卓類衍生物的合成一及通用步驟通用步驟E：CBI-苯並二氮雜卓衍生物合成方法二」提供的方法合成。
2.化合物D1的製備
於25mL單口瓶中加入化合物D(50mg,0.078mmol)，羥基乙酸(12mg,0.16mmol)、EDCI(22.4mg,0.12mmol)、HOBt(15.8mg,0.12mmol)及3mL DMF，室溫反應2h，HPLC監測反應。反應結束後，反應液直接經過高效液相純化，得到化合物D1(34mg)，收率62.5%，LC-MS：[M+H]+=697.2。
3.化合物D2的製備
於25mL單口瓶中加入化合物D(50mg,0.078mmol)，L-乳酸(14mg,0.16mmol)、EDCI(22.4mg,0.12mmol)、HOBt(15.8mg,0.12mmol)及3mL DMF，室溫反應2h，HPLC監測反應。反應結束後，反應液直接經過高效液相純化，得到化合物D2(33.8mg)，收率71%，LC-MS：[M+H]+=711.2。
4.化合物D3的製備
參照化合物D2的合成方法，D-乳酸替代L-乳酸，即得化合物D3，LC-MS：[M+H]+=711.2。
4.化合物D4和D5的製備
於25mL單口瓶中加入化合物D(60mg,0.094mmol)，3,3,3-三氟乳酸(27mg,0.187mmol)、EDCI(27mg,0.14mmol)、HOBt(19mg,0.14mmol)及3mL DMF，室溫反應1.5h，HPLC監測反應。反應結束後，反應液直接經過高效液相純化，產品製備液凍幹分別得到化合物D4(27mg)，化合物D5(29mg),LC-MS：[M+H]+=765.2。
6.化合物D6和D7的製備
參照化合物D4和D5的合成方法，利用高效液相純化，即得化合物D6和D7，LC-MS：[M+H]+=737.3。
7.化合物D8和D9的製備
參照化合物D4和D5的合成方法，利用高效液相純化，即得化合物D8和D9，LC-MS：[M+H]+=751.3。
實施例5：
化合物M1的合成：
於5L單口瓶中加入N-芴甲氧羰基-甘氨酸-甘氨酸(100g,28mmol,1.0eq)，四乙酸鉛(175g,395mmol,1.4eq)，2L四氫呋喃和670mL甲苯，攪拌均勻，加熱至85℃反應2.5h。TLC監控，原料反應完後，冷卻至室溫，過濾，濾液減壓濃縮，殘餘物經柱色譜純化(PE：
EA=5：1-2：1)，得化合物M1(87g)，收率84.4%，LC-MS：[M+NH4]+=386.0。
實施例6：
化合物M3的合成：
於1000mL單口瓶中加入化合物SM-2(按照專利CN108452321A公佈的方法合成)(40g,96mmol,1.0eq)，三乙胺(26.7mL,2.0eq)，甲苯(400mL)，升溫至120℃下回流反應2h。TLC監測基本完全反應，降溫至50℃下減壓旋除溶劑。用乙酸乙酯(150mL)，水(40mL)溶解，冰浴攪拌下用1M HCl調pH至2-3，分液。水層用乙酸乙酯再萃取一次，合併有機層，加入無水硫酸鈉乾燥。過濾後，濃縮得到淡黃色油狀粗品，粗品經柱層析純化(DCM：MeOH=40：1)，得到26.6g化合物M2；LC-MS：[M+H]+=399.3。
於1L單口瓶，加入化合物M2(26.5g,60.5mmol,1.0eq)、五氟苯酚(12.2g,66.5mmol,1.1eq)、DCC(13.7g,66.5mmol,1.1eq)及THF(300mL)，室溫反應30min(採用TLC監測)，過濾濾去不溶物。反應液直接經製備純化，製備液水泵減壓水浴35℃濃縮除去乙腈，凍幹得到31.5g化合物M3，收率64%；LC-MS：[M+H]+=565.1。
實施例7：
化合物1的合成：
第一步：化合物1a的合成
於250mL單口瓶中，加入M1(6g,16.3mmol)，100mL THF，對甲苯磺酸一水合物(0.31g,1.63mmol)，攪拌冷卻至0℃，滴加羥乙酸苄酯(5.4g,32.6mmol)，滴畢自然升溫至室溫反應(反應約2-4h)，TLC監控。反應結束，加入飽和NaHCO3溶液，用乙酸乙酯萃取，飽和氯化鈉溶液洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮，殘餘物經矽膠柱純化(PE：EA=10：1-5：1-1：1)得化合物1a(4g)，收率52%；LC-MS：[M+H]+=475.2。
第二步：化合物1b的合成
於25mL單口瓶，加入化合物1a(2g,4.2mmol)，10mL DMF，0℃攪拌，加入DBU(766mg,5.04mmol)，反應1h，TLC監測Fmoc脫保護完成後，待用；
另取25mL單口瓶中加入化合物M4(參考專利CN111051330 A公佈的方法製備)(1.73g,4.2mmol)，PyBOP(2.61g,5.04mmol)，HOBt(680mg,5.04mmol)及10mL DMF，冰水浴下加入DIPEA(830uL,5.04mmol)，繼續攪拌30min，將上述反應液加至反應瓶中，升至室溫反應。HPLC監測反應結束後，反應液經製備液相純化，得到產品製備液，製備液經二氯甲烷萃取，飽和氯化鈉溶液洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，得到化合物1b(1.7g)，收率63%；LCMS：[M+H]+=648.3。
第三步：化合物1c的合成
於25mL單口瓶中加入化合物1b(900mg,1.39mmol)，15mL DMF溶清後，加入900mg 5%Pd/C，氫化反應2h，反應完畢，過濾，得濾液，未經純化直接用於下一步反應。
第四步：化合物1的合成
將上步所得的化合物1c的DMF溶液置於冰水浴中，加入DIPEA(235uL,1.39mmol)，再加入化合物M3(784mg,1.39mmol)，加畢升至室溫反應1h。HPLC監測反應完畢，反應液經高效液相純化，得製備液，製備液凍幹得到化合物1(604mg)，收率54%；LC-MS：[M+H]+=804.4。
實施例8：
化合物2的合成：
第一步：化合物1c的合成
於25mL單口瓶中加入化合物1b(900mg,1.39mmol)，15mL DMF溶清後，加入900mg 5%Pd/C，氫化反應2h，反應完畢，過濾，得濾液，未經純化直接用於下一步反應。
第二步：化合物2的合成
將上步所得的化合物1c的DMF溶液置於冰水浴中，加入DIPEA(235uL,1.39mmol)，再加入McOSu(428.5mg,1.39mmol)，加畢升至室溫反應1h。HPLC監測反應完畢，反應液經高效液相純化，得製備液，製備液凍幹得到化合物2(500mg)，收率58%；LC-MS：[M+H]+=617.3。
實施例9：
化合物3A和3B的合成：
1.化合物3A的製備
第一步：化合物3a的合成
於25mL單口瓶中加入M1(1.5g，4.0mmol，1.0eq)，對甲苯磺酸一水合物(77mg，0.4mmol，0.1eq)及15mL THF，攪拌均勻後，降至0℃，再緩慢加入L-乳酸苄酯(2.2g,12.0mmol,3eq)，加完後升至室溫反應。TLC監控，反應結束後，加入飽和NaHCO3溶液，用乙酸乙酯萃取，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮，殘餘物經反相柱純化得化合物3a(1.03g)，收率52%，LC-MS：[M+NH4]+=506.2。
第二步：化合物3b的合成
於25mL單口瓶中加入化合物3a(1g,2.04mmol)和8mL DMF，攪拌均勻後，降至0℃，再緩慢加入DBU(373mg,2.45mmol)，加完後升至室溫反應。TLC監控，反應結束，記為反應液
；
另取25mL單口瓶中加入M4(846mg,2.04mmol)，PyBOP(1.27g,2.45mmol)和6mL DMF，室溫攪拌5min，加入反應液
，室溫反應，HPLC監測。反應完畢，反應液經高效液相純化，凍幹得化合物
3b(913mg)，收率67.6%，LC-MS：[M+NH4]+=679.2。
第三步：化合物3c的合成
於100mL單口瓶中加入化合物3b(800mg,1.21mmol,1.0eq)，DMF(15mL)溶解，再加入5%Pd/C(800mg)，室溫氫化反應2h(採用HPLC監測反應程序)。過濾Pd/C，濾液未經濃縮，直接用於下一步。
第四步：化合物3A的合成
將上步所得化合物3c的DMF溶液置於冰水浴中，加入DIPEA(219uL,1.21mmol)，再加入化合物M3(683mg,1.21mmol)，加畢升至室溫反應1h。HPLC監測反應完畢，反應液經高效液相純化，得製備液，製備液凍幹得到化合物3A(524mg)，收率53%，LC-MS：[M-H]-=816.3。
2.化合物3B的製備
參照上述化合物3A的合成方法，將第一步中L-乳酸苄酯改成D-乳酸苄酯，即得化合物3B，LC-MS：[M-H]-=816.3。
實施例10：
化合物4A和4B的合成：
1.化合物4A的製備
第一步：化合物3c的合成
於100mL單口瓶中加入3b(800mg,1.21mmol,1.0eq)，DMF(15mL)溶解，再加入5%Pd/C(800mg)，室溫氫化反應2h(採用HPLC監測反應程序)。過濾Pd/C，濾液未經濃縮，直接用於下一步。
第二步：化合物4A的合成
將上步所得的化合物3c的DMF溶液置於冰水浴中，加入DIPEA(219uL,1.21mmol)，再加入McOSu(373mg,1.21mmol)，加畢升至室溫反應1h。HPLC監測反應完畢，反應液經高效液相純化，得製備液，製備液凍幹得到化合物4A(450mg)，收率59%；LC-MS：[M+H]+=631.3。
2.化合物4B的合成
參照化合物4A的合成方法，得到化合物4B，LC-MS：[M+H]+=631.3。
實施例11：
化合物5的合成：
第一步：化合物5a的合成
於250mL單口瓶中加入M1(10g,27.1mmol),3,3,3-三氟乳酸苄酯(參照專利WO2020063673A1公佈的方法製備)(12.7g,54.3mmol)，醋酸鋅(9.96g,54.3mmol)及100mL甲苯，加熱至100℃反應4h。反應完畢，降至室溫，過濾除去不溶物，濾液濃縮得粗品。粗品經矽膠柱層析純化(PE：EA=10：1-5：1-2：1)得到化合物5a(5.15)g，收率35.1%；LC-MS：[M+H]+=543.2。
第二步：化合物5b的合成
於50mL單口瓶中加入化合物5a(5g,9.2mmol)及15mL DMF，溶清後，冰水浴下，加入DBU(1.68g,11mmol)，反應1h，記為反應液
；
另取50mL單口瓶，加入M4(3.8g,9.2mmol)，PyBDP(5.75g,11mmol)，HOBt(1.49g,11mmol)及10mL DMF，溶清後，冰水浴下，加入DIPEA(1.82mL,11mmol)，繼續反應30min，加入反應液
，升至室溫反應2h。HPLC監測反應程序，反應完畢後，反應液經高效液相純化，得製備液。製備液經二氯甲烷萃取、飽和氯化鈉溶液洗滌、無水硫酸鈉乾燥、過濾、濃縮得到化合物5b(4.1)g，收率62.3%；LC-MS：[M+H]+=716.3。
第三步：化合物5的合成
於25mL單口瓶中加入化合物5b(900mg,1.26mmol)，15mL DMF溶清後，加入900mg 5%Pd/C，氫化反應2h，反應完畢，過濾，將濾液置於冰水浴中，加入DIPEA(228uL,1.38mmol)，再加入化合物M3(712mg,1.26mmol)，加畢升至室溫反應1h。HPLC監測反應完畢，反應液經高效液相純化，得製備液，製備液凍幹得到產品化合物5(525)mg，收率47.9%；LC-MS：[M-H]-=870.3。
實施例12：
化合物6的合成：
於25mL單口瓶中加入化合物5b(900mg,1.26mmol)，15mL DMF溶清後，加入900mg 5%Pd/C，氫化反應2h，反應完畢，過濾，將濾液置於冰水浴中，加入DIPEA(228uL,1.38mmol)，再加入McOSu(388mg,1.26mmol)，加畢升至室溫反應1h。HPLC監測反應完畢，反應液經高效液相純化，得製備液，製備液凍幹得到產品化合物6(450)mg，收率52%；LC-MS：[M-H]-=683.3。
實施例13：
化合物7的合成：
第一步：化合物7a的合成
於250mL單口瓶中加入M1(10g,27.1mmol),2-環丙基-2-羥基乙酸苄酯(參照專利WO2020244657A1公佈的方法製備)(11.2g,54.3mmol)，醋酸鋅(9.96g,54.3mmol)及100mL甲苯，加熱至100℃反應4h。反應完畢，降至室溫，過濾除去不溶物，濾液濃縮得粗品。粗品經矽膠柱層析純化(PE：EA=10：1-5：1-2：1)得到化合物7a(4.97g)，收率36%；LC-MS：[M+H]+=515.2。
第二步：化合物7b的合成
於50mL單口瓶中加入化合物7a(4g,7.8mmol)及10mL DMF，溶清後，冰水浴下，加入DBU(1.42g,9.3mmol)，反應1h，記為反應液
；【0122】另取50mL單口瓶，加入M4(3.2g,7.8mmol)，PyBOP(4.5g,8.6mmol)，HOBt(1.16g,8.6mmol)及10mL DMF，溶清後，冰水浴下，加入DIPEA(1.65mL,10mmol)，繼續反應30min，加入反應液
，升至室溫反應2h。HPLC監測反應程序，反應完畢後，反應液經高效液相純化，得製備液。製備液經二氯甲烷萃取、飽和氯化鈉溶液洗滌、無水硫酸鈉乾燥、過濾、濃縮得到化合物7b(4.2g)，收率78%；LC-MS：[M+H]+=688.3。
第三步：化合物7的合成
於25mL單口瓶中加入化合物7b(1000mg,1.45mmol)，15mL DMF溶清後，加入1000mg 5%Pd/C，氫化反應2h，反應完畢，過濾，將濾液置於冰水浴中，加入DIPEA(248uL,1.5mmol)，再加入化合物M3(720mg,1.45mmol)，加畢升至室溫反應1h。HPLC監測反應完畢，反應液經高效液相純化，得製備液，製備液凍幹得到產品化合物7(503mg)，收率41%；LC-MS：[M-H]-=842.3。
實施例14：
化合物8的合成：
第一步：化合物8a的合成
於250mL單口瓶中加入M1(10g,27.1mmol),2-羥基-3-環丙基丙酸苄酯(參照專利WO2020063676A公佈的方法合成)(12.0g,54.3mmol)，醋酸鋅(9.96g,54.3mmol)及100mL甲苯，加熱至100℃反應4h。反應完畢，降至室溫，過濾除去不溶物，濾液濃縮得粗品。粗品經矽膠柱層析純化(PE：EA=10：1-5：1-2：1)得到目標物8a(5.09g)；LC-MS：[M+H]+=529.2。
第二步：化合物8b的合成
於50mL單口瓶中加入化合物8a(4g,7.6mmol)及10mL DMF，溶清後，冰水浴下，加入DBU(1.39g,9.1mmol)，反應1h，記為反應液
；【0126】另取50mL單口瓶，加入M4(3.12g,7.6mmol)，PyBOP(4.5g,8.6mmol)，HOBt(1.16g,8.6mmol)及10mL DMF，溶清後，冰水浴下，加入DIPEA(1.65mL,10mmol)，繼續反應30min，加入反應液
，升至室溫反應2h。HPLC監測反應程序，反應完畢後，反應液經高效液相純化，得製備液。製備液經
二氯甲烷萃取、飽和氯化鈉溶液洗滌、無水硫酸鈉乾燥、過濾、濃縮得到化合物8b(4.5g)，收率84%；LC-MS：[M+H]+=702.3。
第三步：化合物8的合成
於25mL單口瓶中加入8b(1000mg,1.42mmol)，15mL DMF溶清後，加入1000mg 5%Pd/C，氫化反應2h，反應完畢，過濾，將濾液置於冰水浴中，加入DIPEA(248uL,1.5mmol)，再加入化合物M3(708mg,1.42mmol)，加畢升至室溫反應1h。HPLC監測反應完畢，反應液經高效液相純化，得製備液，製備液凍幹得到產品化合物8(443mg)，收率36%；LC-MS：[M-H]-=856.4。
實施例15：
化合物9的合成：
第一步：化合物9a的合成
於500mL單口瓶中加入氨基-八聚乙二醇-羧基(10g，22.7mmol)，20mL DMF溶清，加入McOSu(8.38g，27.2mmol)，
DIEA(5.6mL,3.4mmol)，室溫反應2h，TLC監測。反應結束後，將反應液倒入100mL水中，用二氯甲烷萃取三次，合併有機相，用飽和氯化鈉溶液洗滌兩次，無水硫酸鈉乾燥。過濾，45℃減壓濃縮得粗品。粗品經過矽膠柱層析純化(DCM：MeOH=30：1-10：1)，收集產品洗脫液，濃縮得到化合物9a(12.1g)，收率84.5%，LCMS：[M-H]+=633.3。
第二步：化合物9b的合成
於500mL單口瓶，加入化合物9a(12.0g,18.9mmol)、五氟苯酚(3.83g,20.8mmol)、DCC(4.28g,20.8mmol)及THF(50mL)，室溫反應1h，TLC監測。反應結束後，過濾濾去不溶物。濾液水泵減壓45℃濃縮除去溶劑得殘餘物。殘餘物經過矽膠柱層析純化(PE：EA=5：1-2：1)，收集產品洗脫液，濃縮得到化合物9b(13.8g)，收率91.5%，LCMS：[M+H]+=801.3。
第三步：化合物9的合成
向化合物1c(220mg,0.5mmol)中加入10mL DMF，冰水浴加入化合物9b(500mg,0.6mmol)冷卻至0℃，加入化合物DIPEA(124uL,0.75mmol)，室溫反應1h，HPLC監測反應。反應完畢後，反應液經製備級高效液相色譜法純化得到產品製備液，製備液減壓除去乙腈以後，凍幹，得到化合物9(430mg)，收率83%，LCMS：[M-H]+=1038.5。
實施例16：
化合物10的合成：
於25mL單口瓶中加入化合物2(50mg,0.081mmol)，化合物B(55.8mg,0.081mmol)，PyBOP(50.4mg,0.097mmol)，HOBt(13.1mg,0.097mmol)及5mL DMF，冰水浴下加入DIPEA(15.5mg,0.12mmol)，升至室溫反應2h。HPLC監測反應完畢後，反應液經高效液相純化，得製備液，製備液凍幹得到化合物10(80mg)，收率76.7%，LC-MS：[M+H]+=1287.5。
實施例17：
化合物11的合成：
於25mL單口瓶中加入化合物9(84.2mg,0.081mmol)，化合物B(55.8mg,0.081mmol)，PyBOP(50.4mg,0.097mmol)，HOBt(13.1mg,0.097mmol)及5mL DMF，冰水浴下加入
DIPEA(15.5mg,0.12mmol)，升至室溫反應2h。HPLC監測反應完畢後，反應液經高效液相純化，得產品製備液，製備液凍幹，得到化合物11(100mg)，收率70.9%，LC-MS：[M/2+H]+=855.86。
實施例18：
化合物12A和12B的合成：
1.化合物12A的製備
於25mL單口瓶中加入化合物4A(51mg,0.081mmol)，化合物B(55.8mg,0.081mmol)，PyBOP(50.4mg,0.097mmol)，HOBt(13.1mg,0.097mmol)及5mL DMF，冰水浴下加入DIPEA(15.5mg,0.12mmol)，升至室溫反應2h。HPLC監測反應完畢後，反應液經高效液相純化，得製備液，製備液凍幹得到化合物12A(80mg)，收率76.2%，LC-MS：[M+H]+=1301.5。
2.化合物12B的製備
參照化合物12A的合成方法，即得化合物12B，LC-MS：[M+H]+=1301.5。
實施例19：
化合物13A和13B的合成：
於50mL單口瓶中加入化合物6(99.3mg,0.145mmol)，化合物B(100mg,0.145mmol)，PyBOP(90.5mg,0.174mmol)，HOBt(23.5mg,0.174mmol)及10mL DMF，冰水浴下加入DIPEA(28.2mg,0.218mmol)，升至室溫反應2h。HPLC監測反應完畢後，反應液經高效液相純化，得化合物13A和化合物13B的製備液，製備液分別凍幹，得到化合物13A(90mg)、化合物13B(80mg)，LC-MS：[M+H]+=1355.5。
實施例20：
化合物14的合成：
第一步：化合物14a的合成
於50mL單口瓶中加入化合物1(500mg,0.62mmol)，化合物B(427.3mg,0.62mmol)，PyBOP(385mg,0.74mmol)，HOBt(100mg,0.74mmol)及15mL DMF，冰水浴下加入DIPEA(120mg,0.93mmol)，升至室溫反應2h。HPLC監測反應完畢後，反應液經高效液相純化，得化合物14a的製備液，製備液凍幹得到固體化合物14a(550mg)，收率60%，LC-MS：[M+H]+=1474.6。
第二步：化合物14的合成
於25mL單口瓶中加入化合物14a(200mg,0.136mmol)，溴化鋅(612mg,2.72mmol)及6mL硝基甲烷，室溫反應1h。HPLC監測反應完畢後，減壓濃縮除去溶劑，得粗品。粗品經高效液相純化，得到產品製備液，製備液凍幹得到固體化合物14(100mg)，收率56%，LC-MS：[M+H]+=1318.5。
實施例21：
化合物15A和15B的合成：
1.化合物15A的製備
第一步：化合物15a的合成
於50mL單口瓶中加入化合物3A(507mg,0.62mmol)，化合物B(427.3mg,0.62mmol)，PyBOP(385mg,0.74mmol)，HOBt(100mg,0.74mmol)及15mL DMF，冰水浴下加入DIPEA(120mg,0.93mmol)，升至室溫反應2h。HPLC監測反應完畢後，反應液經高效液相純化，得化合物15a的製備液，製備液凍幹得到固體化合物15a(650mg)，收率70%，LC-MS：[M+H]+=1488.6。
第二步：化合物15A的合成
於25mL單口瓶中加入化合物15a(200mg,0.134mmol)，溴化鋅(603.5mg,2.68mmol)及6mL硝基甲烷，室溫反應1h。HPLC監測反應完畢後，減壓濃
縮除去溶劑，得粗品。粗品經高效液相純化，得到產品製備液，製備液凍幹得到固體化合物15A(110mg)，收率62%，LC-MS：[M+H]+=1332.5。
2.化合物15B的製備
參照化合物15A的合成方法，即得化合物15B，LC-MS：[M+H]+=1332.5。
實施例22：
化合物16A和16B的合成：
第一步：化合物16a和16b的合成
於50mL單口瓶中加入化合物5(540mg,0.62mmol)，化合物B(427.3mg,0.62mmol)，PyBOP(385mg,0.74mmol)，HOBt(100mg,0.74mmol)及15mL DMF，冰水浴下加入DIPEA(120mg,0.93mmol)，升至室溫反應2h。HPLC監測反應完畢後，反應液經高效液相純化，得化合物16a和化合物16b的製備液，製備液分別凍幹得到化合物16a(350mg)、化合物16b(300mg)，LC-MS：[M/2+H]+=771.8。
第二步：化合物16A的合成
於25mL單口瓶中加入化合物16a(200mg,0.13mmol)，溴化鋅(585.5mg,2.6mmol)及6mL硝基甲烷，室溫反應1h。HPLC監測反應完畢後，減壓濃縮除去溶劑，得粗品。粗品經高效液相純化，得到產品製備液，製備液凍幹得到固體化合物16A(120mg)，收率66%，LC-MS：[M+H]+=1386.4。
第三步：化合物16B的合成
於25mL單口瓶中加入化合物16b(200mg,0.13mmol)，溴化鋅(585.5mg,2.6mmol)及6mL硝基甲烷，室溫反應1h。HPLC監測反應完畢後，減壓濃縮除去溶劑，得粗品。粗品經高效液相純化，得到產品製備液，製備液凍幹得到固體化合物16B(115mg)，收率64%，LC-MS：[M+H]+=1386.4。
實施例23：
化合物17A和17B的合成：
第一步：化合物17a和17b的合成
於50mL單口瓶中加入化合物7(523mg,0.62mmol)，化合物B(427.3mg,0.62mmol)，PyBOP(385mg,0.74mmol)，HOBt(100mg,0.74mmol)及15mL DMF，冰水浴下加入
DIPEA(120mg,0.93mmol)，升至室溫反應2h。HPLC監測反應完畢後，反應液經高效液相純化，得化合物17a和化合物17b的製備液，製備液分別凍幹得到化合物17a(320mg)、化合物17b(280mg)，LC-MS：[M/2+H]+=757.8。
第二步：化合物17A的合成
於25mL單口瓶中加入化合物17a(200mg,0.132mmol)，溴化鋅(594.5mg,2.64mmol)及6mL硝基甲烷，室溫反應1h。HPLC監測反應完畢後，減壓濃縮除去溶劑，得粗品。粗品經高效液相純化，得到產品製備液，製備液凍幹得到固體化合物17A(120mg)，收率67%，LC-MS：[M+H]+=1358.5。
第三步：化合物17B的合成
於25mL單口瓶中加入化合物17b(200mg,0.132mmol)，溴化鋅(594.5mg,2.64mmol)及6mL硝基甲烷，室溫反應1h。HPLC監測反應完畢後，減壓濃縮除去溶劑，得粗品。粗品經高效液相純化，得到產品製備液，製備液凍幹得到固體化合物17B(116mg)，收率65%，LC-MS：[M+H]+=1358.5。
實施例24：
化合物18A和18B的合成：
第一步：化合物18a和18b的合成
於50mL單口瓶中加入化合物8(532mg,0.62mmol)，化合物B(427.3mg,0.62mmol)，PyBOP(385mg,0.74mmol)，HOBt(100mg,0.74mmol)及15mL DMF，冰水浴下加入DIPEA(120mg,0.93mmol)，升至室溫反應2h。HPLC監測反應完畢後，反應液經高效液相純化，得化合物18a和化合物18b的製備液，製備液分別凍幹得到化合物18a
(300mg)、化合物18b(280mg)，LC-MS：[M/2+H]+=764.8。
第二步：化合物18A的合成
於25mL單口瓶中加入化合物18a(200mg,0.131mmol)，溴化鋅(590.0mg,2.62mmol)及6mL硝基甲烷，室溫反應1h。HPLC監測反應完畢後，減壓濃縮除去溶劑，得粗品。粗品經高效液相純化，得到產品製備液，製備液凍幹得到固體化合物18A(125mg)，收率70%，LC-MS：[M+H]+=1372.5。
第三步：化合物18B的合成
於25mL單口瓶中加入化合物18b(200mg,0.131mmol)，溴化鋅(590.0mg,2.62mmol)及6mL硝基甲烷，室溫反應1h。HPLC監測反應完畢後，減壓濃縮除去溶劑，得粗品。粗品經高效液相純化，得到產品製
備液，製備液凍幹得到固體化合物18B(120mg)，收率67%，LC-MS：[M+H]+=1372.5。
實施例25：
化合物19的合成：
第一步：化合物19a的合成
於50mL單口瓶中加入化合物1(500mg,0.62mmol)，化合物C(412.4mg,0.62mmol)，PyBOP(385mg,0.74mmol)，HOBt(100mg,0.74mmol)及15mL DMF，冰水浴下加入DIPEA(120mg,0.93mmol)，升至室溫反應2h。HPLC監測反應完畢後，反應液經高效液相純化，得化合物19a的製備液，製備液凍幹得到固體化合物19a(600mg)，收率66%，LC-MS：[M+H]+=1450.6。
第二步：化合物19的合成
於25mL單口瓶中加入化合物19a(200mg,0.138mmol)，溴化鋅(621mg,2.76mmol)及6mL硝基甲烷，室溫反應1h。HPLC監測反應完畢後，減壓濃
縮除去溶劑，得粗品。粗品經高效液相純化，得到產品製備液，製備液凍幹得到固體化合物19(120mg)，收率67%，LC-MS：[M+H]+=1294.5。
實施例26：
化合物20A和化合物20B的合成：
1.化合物20A的製備
第一步：化合物20a的合成
於50mL單口瓶中加入化合物3A(507mg,0.62mmol)，化合物C(412.4mg,0.62mmol)，PyBOP(385mg,0.74mmol)，HOBt(100mg,0.74mmol)及15mL DMF，冰水浴下加入DIPEA(120mg,0.93mmol)，升至室溫反應2h。HPLC監測反應完畢後，反應液經高效液相純化，得化合物20a的製備液，製備液凍幹得到固體化合物20a(560mg)，收率62%，LC-MS：[M+H]+=1464.6。
第二步：化合物20A的合成
於25mL單口瓶中加入化合物20a(200mg,0.136mmol)，溴化鋅(614.8mg,2.73mmol)及6mL硝基甲烷，室溫反應1h。HPLC監測反應完畢後，減壓濃縮除去溶劑，得粗品。粗品經高效液相純化，得到產品製備液，製備液凍幹得到固體化合物20A(120mg)，收率67%，LC-MS：[M+H]+=1308.5。
2.化合物20B的製備
參照化合物20A的合成方法，即得化合物20B，LC-MS：[M+H]+=1308.5。
實施例27：
化合物21A和21B的合成：
第一步：化合物21a和21b的合成
於50mL單口瓶中加入化合物5(540mg,0.62mmol)，化合物C(412.4mg,0.62mmol)，PyBOP(385mg,0.74mmol)，HOBt(100mg,0.74mmol)及15mL DMF，冰水浴下加入DIPEA(120mg,0.93mmol)，升至室溫反應2h。HPLC監測反應完畢後，反應液經高效液相純化，得化合物21a和化合物21b的製備液，製備液分別凍幹得到化合物21a(330mg)、化合物21b(300mg)，LC-MS：[M/2+H]+=759.8。
第二步：化合物21A的合成
於25mL單口瓶中加入化合物21a(200mg,0.132mmol)，溴化鋅(594.5mg,2.64mmol)及6mL硝基甲烷，室溫反應1h。HPLC監測反應完畢後，減壓濃縮除去溶劑，得粗品。粗品經高效液相純化，得到產品製備液，製備液凍幹得到固體化合物21A(125mg)，收率69%，LC-MS：[M+H]+=1362.4。
第三步：化合物21B的合成
於25mL單口瓶中加入化合物21b(200mg,0.132mmol)，溴化鋅(594.5mg,2.64mmol)及6mL硝基甲烷，室溫反應1h。HPLC監測反應完畢後，減壓濃縮除去溶劑，得粗品。粗品經高效液相純化，得到產品製備液，製備液凍幹得到固體化合物21B(112mg)，收率62%，LC-MS：[M+H]+=1362.4。
實施例28：
化合物22A和22B的合成：
第一步：化合物22a和22b的合成
於50mL單口瓶中加入化合物7(523mg,0.62mmol)，化合物C(412.4mg,0.62mmol)，PyBOP(385mg,0.74mmol)，HOBt(100mg,0.74mmol)及15mL DMF，冰水浴下加入DIPEA(120mg,0.93mmol)，升至室溫反應2h。HPLC監測反應完畢後，反應液經高效液相純化，得化合物22a和化合物22b的製備液，製備液分別凍幹得到化合物22a(330mg)、化合物22b(300mg)，LC-MS：[M+H]+=1490.6。
第二步：化合物22A的合成
於25mL單口瓶中加入化合物22a(200mg,0.134mmol)，溴化鋅(603.5mg,2.68mmol)及6mL硝基甲烷，室溫反應1h。HPLC監測反應完畢後，減壓濃縮除去溶劑，得粗品。粗品經高效液相純化，得到產品製備液，製備液凍幹得到固體化合物22A(120mg)，收率67%，LC-MS：[M+H]+=1334.5。
第三步：化合物22B的合成
於25mL單口瓶中加入化合物22b(200mg,0.134mmol)，溴化鋅(603.5mg,2.68mmol)及6mL硝基甲烷，室溫反應1h。HPLC監測反應完畢後，減壓濃縮除去溶劑，得粗品。粗品經高效液相純化，得到產品製備液，製備液凍幹得到固體化合物22B(115mg)，收率65%，LC-MS：[M+H]+=1334.5。
實施例29：
化合物23A和23B的合成：
第一步：化合物23a和23b的合成
於50mL單口瓶中加入化合物8(532mg,0.62mmol)，化合物C(412.4mg,0.62mmol)，PyBOP(385mg,0.74mmol)，HOBt(100mg,0.74mmol)及15mL DMF，冰水浴下加入DIPEA(120mg,0.93mmol)，升至室溫反應2h。HPLC監測反應完畢後，反應液經高效液相純化，得化合物23a和化合物23b的製備液，製備液分別凍幹得到化合物23a(320mg)、化合物23b(300mg)，LC-MS：[M/2+H]+=752.8。
第二步：化合物23A的合成
於25mL單口瓶中加入化合物23a(200mg,0.133mmol)，溴化鋅(598.5mg,2.66mmol)及6mL硝基甲烷，室溫反應1h。HPLC監測反應完畢後，減壓濃縮除去溶劑，得粗品。粗品經高效液相純化，得到產品製備液，製備液凍幹得到固體化合物23A(122mg)，收率68%，LC-MS：[M+H]+=1348.5。
第三步：化合物23B的合成
於25mL單口瓶中加入化合物23b(200mg,0.133mmol)，溴化鋅(598.5mg,2.66mmol)及6mL硝基甲烷，室溫反應1h。HPLC監測反應完畢後，減壓濃縮除去溶劑，得粗品。粗品經高效液相純化，得到產品製備液，製備液凍幹得到固體化合物23B(115mg)，收率64%，LC-MS：[M+H]+=1348.5。
實施例30：
化合物24的合成：
第一步：化合物24a的合成
於50mL單口瓶中加入化合物1(500mg,0.62mmol)，化合物D(396.3mg,0.62mmol)，PyBOP(385mg,0.74mmol)，HOBt(100mg,0.74mmol)及15mL DMF，冰水浴下加入DIPEA(120mg,0.93mmol)，升至室溫反應2h。HPLC監測反應完畢後，反應液經高效液相純化，得化合物24a的製備液，製備液凍幹得到固體化合物24a(600mg)，收率68%，LC-MS：[M+H]+=1424.6。
第二步：化合物24的合成
於25mL單口瓶中加入化合物24a(200mg,0.14mmol)，溴化鋅(631mg,2.8mmol)及6mL硝基甲烷，室溫反應1h。HPLC監測反應完畢後，減壓濃縮除去溶劑，得粗品。粗品經高效液相純化，得到產品製備液，製備液凍幹得到固體化合物24(120mg)，收率68%，LC-MS：[M+H]+=1268.4。
實施例31：
化合物25A和化合物25B的合成：
1.化合物25A的製備
第一步：化合物25a的合成
於50mL單口瓶中加入化合物3A(507mg,0.62mmol)，化合物D(396.3mg,0.62mmol)，PyBOP(385mg,0.74mmol)，HOBt(100mg,0.74mmol)及15mL DMF，冰水浴下加入DIPEA(120mg,0.93mmol)，升至室溫反應2h。HPLC監測反應完畢後，反應液經高效液相純化，得化合物25a的製備液，製備液凍幹得到固體化合物25a(560mg)，收率63%，LC-MS：[M+H]+=1438.6。
第二步：化合物25A的合成
於25mL單口瓶中加入化合物25a(200mg,0.139mmol)，溴化鋅(626mg,2.78mmol)及6mL硝基甲烷，室溫反應1h。HPLC監測反應完畢後，減壓濃縮除去溶劑，得粗品。粗品經高效液相純化，得到產品製
備液，製備液凍幹得到固體化合物25A(115mg)，收率65%，LC-MS：[M+H]+=1282.5。
2.化合物25B的製備
參照化合物25A的合成方法，即得化合物26B，LC-MS：[M+H]+=1282.5。
實施例32：
化合物26A和26B的合成：
第一步：化合物26a和26b的合成
於50mL單口瓶中加入化合物5(540mg,0.62mmol)，化合物D(396.3mg,0.62mmol)，PyBOP(385mg,0.74mmol)，HOBt(100mg,0.74mmol)及15mL DMF，冰水浴下加入DIPEA(120mg,0.93mmol)，升至室溫反應2h。HPLC監測反應完畢後，反應液經高效液相純化，得化合物26a和化合物26b的製備液，製備液分別凍幹得到化合物26a(330mg)、化合物26b(300mg)，LC-MS：[M+H]+=1492.5。
第二步：化合物26A的合成
於25mL單口瓶中加入化合物26a(200mg,0.134mmol)，溴化鋅(603.5mg,2.68mmol)及6mL硝基甲烷，室溫反應1h。HPLC監測反應完畢後，減壓濃縮除去溶劑，得粗品。粗品經高效液相純化，得到產品製備液，製備液凍幹得到固體化合物26A(125mg)，收率70%，LC-MS：[M+H]+=1336.4。
第三步：化合物26B的合成
於25mL單口瓶中加入化合物26b(200mg,0.134mmol)，溴化鋅(603.5mg,2.68mmol)及6mL硝基甲烷，室溫反應1h。HPLC監測反應完畢後，減壓濃縮除去溶劑，得粗品。粗品經高效液相純化，得到產品製備液，製備液凍幹得到固體化合物26B(112mg)，收率63%，LC-MS：[M+H]+=1336.4。
實施例33：
化合物27A和27B的合成：
第一步：化合物27a和27b的合成
於50mL單口瓶中加入化合物7(523mg,0.62mmol)，化合物D(396.3mg,0.62mmol)，
PyBOP(385mg,0.74mmol)，HOBt(100mg,0.74mmol)及15mL DMF，冰水浴下加入DIPEA(120mg,0.93mmol)，升至室溫反應2h。HPLC監測反應完畢後，反應液經高效液相純化，得化合物27a和化合物27b的製備液，製備液分別凍幹得到化合物27a(330mg)、化合物27b(300mg)，LC-MS：[M+H]+=1464.6。
第二步：化合物27A的合成
於25mL單口瓶中加入化合物27a(200mg,0.136mmol)，溴化鋅(614.8mg,2.73mmol)及6mL硝基甲烷，室溫反應1h。HPLC監測反應完畢後，減壓濃縮除去溶劑，得粗品。粗品經高效液相純化，得到產品製備液，製備液凍幹得到固體化合物27A(125mg)，收率70%，LC-MS：[M+H]+=1308.5。
第三步：化合物27B的合成
於25mL單口瓶中加入化合物27b(200mg,0.136mmol)，溴化鋅(614.8mg,2.73mmol)及6mL硝基甲烷，室溫反應1h。HPLC監測反應完畢後，減壓濃縮除去溶劑，得粗品。粗品經高效液相純化，得到產品製備液，製備液凍幹得到固體化合物27B(115mg)，收率64%，LC-MS：[M+H]+=1308.5。
實施例34：
化合物28A和28B的合成：
第一步：化合物28a和28b的合成
於50mL單口瓶中加入化合物8(532mg,0.62mmol)，化合物D(396.3mg,0.62mmol)，
PyBOP(385mg,0.74mmol)，HOBt(100mg,0.74mmol)及15mL DMF，冰水浴下加入DIPEA(120mg,0.93mmol)，升至室溫反應2h。HPLC監測反應完畢後，反應液經高效液相純化，得化合物28a和化合物28b的製備液，製備液分別凍幹得到化合物28a(320mg)、化合物28b(300mg)，LC-MS：[M+H]+=1478.6。
第二步：化合物28A的合成
於25mL單口瓶中加入化合物28a(200mg,0.135mmol)，溴化鋅(608mg,2.7mmol)及6mL硝基甲烷，室溫反應1h。HPLC監測反應完畢後，減壓濃縮除去溶劑，得粗品。粗品經高效液相純化，得到產品製備液，製備液凍幹得到固體化合物28A(121mg)，收率68%，LC-MS：[M+H]+=1322.5。
第三步：化合物28B的合成
於25mL單口瓶中加入化合物28b(200mg,0.135mmol)，溴化鋅(608mg,2.7mmol)及6mL硝基甲烷，室溫反應1h。HPLC監測反應完畢後，減壓濃縮除去溶劑，得粗品。粗品經高效液相純化，得到產品製備液，製備液凍幹得到固體化合物28B(115mg)，收率64%，LC-MS：[M+H]+=1322.5。
實施例34：
化合物29合成：
第一步：化合物29a至化合物29d的合成
參照專利CN102933236A中「化合物26」的合成得到化合物29d。
第二步：化合物29e的合成
在250mL三口瓶中，加入化合物29d(3.0g,5.8mmol)，50mL無水THF，氮氣保護下，冰水浴維持
在0℃，加入硼氫化鈉固體(329mg,8.7mmol)，在0℃下反應30min，升至室溫反應2h，TLC監測反應終點。反應結束後，將反應液至於冰水中，緩慢加入50mL水淬滅反應，再加入1N稀HCl直至不冒氣泡為止，加入乙酸乙酯萃取(60mL * 3)，合併有機相，用飽和氯化鈉溶液洗滌兩次，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮得粗品。粗品經過柱層析純化(DCM/MeOH=20：1-5：1)，得到化合物29e(2.1g，黃色固體)，收率73.8%，LCMS：[M+H]+=491.2。
第三步：化合物29f的合成
在100mL單口瓶中加入化合物29e(2.1g,4.3mmol)，TBSC1(1.3g,8.6mmol)，咪唑(580mg,8.6mmol)，15mL無水DMF溶解，室溫下反應3h，TLC監測反應終點。反應結束後將反應倒入30mL水中，用DCM萃取(25mL * 3)，合併有機相，用水和鹽水洗滌、無水硫酸鈉乾燥並且減壓蒸發，得到粗品。粗品通過柱層析(PE/EA=5：1-1：2)，得到化合物29f(2.4g，黃色固體)，收率89.3%，LCMS：[M+H]+=605.3。
第四步：化合物29g的合成
在100mL單口瓶中加入化合物29f(2.4g,4.0mmol)，5%甲酸/甲醇溶液30mL，冰浴冷卻至5℃以下，攪拌下緩慢加入鋅粉(5.2g,80.0mmol)，再升至室溫反應1h，TLC監測反應終點。反應結束後趁熱過濾，濾餅用少量甲醇洗滌，濾液以飽和碳酸氫鈉溶液調pH至7，
然後於45℃下減壓濃縮，除去溶劑，得到棕黃色油狀物，加入60mL DCM，分出有機層，用飽和食鹽水洗一次，無水硫酸鈉乾燥，過濾，於45℃下減壓濃縮，得到粗品。粗品經過柱層析純化(PE：EA=1：1-1：3)，得到化合物29g(1.9g，淡黃色固體)，收率82.5%，LCMS：[M+H]+=575.3。
第五步：化合物29h的合成
在50mL單口瓶中加入化合物29g(1.9g,3.3mmol)，Fmoc-VCPABO-PNP(2.5g,3.3mmol),15mL DMF溶清，再加入DIPEA(827uL,5.0mmol)，室溫反應2h，HPLC監測反應終點。反應結束後，反應液經過高效液相製備純化，得到產品製備液，再凍幹，得到化合物29h(3.3g，淡黃色固體)，收率83.1%，LCMS：[M+H]+=1202.5。
第六步：化合物29i的合成
在50mL單口瓶中加入化合物29h(3.3g,2.7mmol)，8mL THF和8mL水溶解，再加入20mL冰乙酸，室溫反應，HPLC監測反應終點。反應結束後，將反應液緩慢地滴入400mL飽和碳酸氫鈉溶液中，用乙酸乙酯萃取(100mL * 3)，合併有機相，用水和鹽水洗滌、無水硫酸鈉乾燥並且減壓蒸發，得到粗品。粗品通過柱層析(DCM/MeOH=10：1-5：1)，得到化合物29i(2.1g，淡黃色固體)，收率71.1%，LCMS：[M+H]+=1088.5。
第七步：化合物29j的合成
於100mL三口瓶中加入化合物29i(2.1g,1.9mmol)，40mL無水DCM溶解，氮氣保護下，加入Dess-Martin高碘試劑(0.88g,2.1mmol)，室溫反應4h，HPLC監測反應終點。反應結束後，過濾，濾液經過飽和碳酸氫鈉溶液、水、飽和氯化鈉溶液洗滌，無水硫酸鈉乾燥，濃縮得到粗品。粗品經過高效液相純化，產品製備液凍幹得化合物29j(1.6g，白色固體)，收率77.6%，LCMS：[M+H]+=1086.5。
第八步：化合物29k的合成
於50mL三口瓶中加入化合物29j(1.6g,1.5mmol)，5%鈀硫酸鋇(0.29g)，甲酸銨(1.9g,30mmol)，20mL甲醇溶解，氮氣保護下，45℃反應2h，HPLC監測反應終點。反應結束後，過濾，濾液濃縮後，加入20mL DCM，20mL水攪拌均勻後分液，水層用DCM再萃取一次，合併有機層，飽和氯化鈉水溶液洗一次，分液，無水硫酸鈉乾燥，濃縮得到粗品。粗品經過高效液相純化，得產品製備液，凍幹得化合物29k(1.3g，類白色固體)，收率93.3%，LCMS：[M+H]+=996.4。
第九步：化合物291的合成
於100mL單口瓶中加入3-((對甲苯磺醯氧基)甲基)二環[1.1.1]戊烷-1-甲酸苄酯(0.61g,1.2mmol)、化合物29k(1.3g,1.3mmol)和20mL DMF，攪拌溶解後加入碳酸銫(0.78g,2.4mmol)，加畢，氮氣保護下升溫至60℃反應
4h，TLC監測反應終點。往反應液中加入水40mL，以30mL EA萃取2次，合併有機層，依次用水、飽和食鹽水各洗一次，分出有機層，無水硫酸鈉乾燥，過濾，於45℃下減壓濃縮，得到粗品，粗品經過高效液相純化，得產品製備液，凍幹得化合物291(1.2g，類白色固體)，收率84.0%，LCMS：[M+H]+=1210.5。
第十步：化合物29m的合成
於50mL三口瓶中加入化合物291(1.2g,1.0mmol)，5%鈀硫酸鋇(0.24g)，甲酸銨(1.3g,20mmol)，20mL甲醇溶解，氮氣保護下，45℃反應2h，HPLC監測反應終點。反應結束後，過濾，濾液濃縮後，加入20mL DCM，20mL水攪拌均勻後分液，水層用DCM再萃取一次，合併有機層，飽和氯化鈉水溶液洗一次，分液，無水硫酸鈉乾燥，濃縮得到粗品。粗品經過高效液相純化，得產品製備液，凍幹得化合物29m(0.92g，類白色固體)，收率82.5%，LCMS：[M+H]+=1120.5。
第十一步：化合物29n的合成
於100mL單口瓶中加入化合物29m(920mg,0.82mmol)和15mL DMF，室溫攪拌下依次加入1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳醯二亞胺鹽酸鹽(496mg,2.6mmol)和DMAP(313mg,2.6mmol)，N2保護於室溫下攪拌1h，然後加入化合物CBI(參照專利CN109180681A)(376mg,1.0mmol)，N2保護於室溫下反應過夜，HPLC顯示原料基本反應完全。往反應液
中加入水40mL，以30mL DCM萃取2次，合併有機層，依次用水、飽和食鹽水各洗一次，分出有機層，無水硫酸鈉乾燥，過濾，於40℃下減壓濃縮，得到粗品。粗品經過高效液相純化，得產品製備液，凍幹得化合物29n(874mg，類白色固體)，收率74.5%，LCMS：[M+H]+=1439.5。
第十二步：化合物29o的合成
於50mL三口瓶中加入化合物29n(874mg,0.60mmol)，5%鈀硫酸鋇(174mg)，甲酸銨(390mg,6mmol)，20mL甲醇溶解，氮氣保護下，45℃反應2h，HPLC監測反應終點。反應結束後，過濾，濾液濃縮後，加入20mL DCM，20mL水攪拌均勻後分液，水層用DCM再萃取一次，合併有機層，飽和氯化鈉水溶液洗一次，分液，無水硫酸鈉乾燥，濃縮得到粗品。粗品經過高效液相純化，得產品製備液，凍幹得化合物29o(667mg，類白色固體)，收率82.4%，LCMS：[M+H]+=1349.5。
第十三步：化合物29p的合成
於50mL單口瓶中加入化合物29o(667mg,0.49mmol)，20%的六氫吡啶DMF溶液(15mL)，室溫下反應2h，HPLC監測反應終點。反應結束後，過濾，濾液經過高效液相純化，得產品製備液，凍幹得化合物29p(428mg，類白色固體)，收率77.5%，LCMS：[M+H]+=1127.5。
第十四步：化合物29的合成
於50mL單口瓶中加入化合物29p(428mg,0.38mmol)，DIPEA(156uL,0.95mmol)，McOSu(166mg,0.57mmol)，20mL DMF溶解，室溫下反應2h，HPLC監測反應終點。反應結束後，反應液經過高效液相純化，得產品製備液，凍幹得化合物29(386mg，類白色固體)，收率77.0%，LCMS：[M+H]+=1320.5。
實施例35：
化合物30合成：
第一步：化合物30a的合成
於50mL單口瓶中加入化合物29p(560mg,0.50mmol)，DIPEA(161mg,1.25mmol)，化合物M3(423mg,0.75mmol)，10mL DMF溶解，室溫下反應2h，HPLC監測反應終點。反應結束後，反應液經過高效液相純化，得產品製備液，凍幹得化合物30a(622mg,類白色固體)，收率82.6%，LCMS：[M+H]+=1507.6。
第二步：化合物30的合成
於50mL單口瓶中加入化合物30a(622mg,0.41mmol)，溴化鋅(922mg,4.1mmol)，10mL硝基甲烷溶解，25℃下反應45min，HPLC監測反應終點，反應結束後，40℃減壓旋除溶劑得濃縮物，經過高效液相純
化，得產品製備液，凍幹得化合物30(260mg，類白色固體)，收率48%，LCMS：[M+H]+=1322.5。
實施例36：
化合物31合成：
第一步：化合物31a的合成
於100mL單口瓶中加入5-溴戊酸苄酯(488mg,1.8mmol)、化合物29k(1.8g,1.8mmol)和20mL DMF，攪拌溶解後加入碳酸鉀(372mg,2.7mmol)，加畢，升溫至60℃反應4h，HPLC監測反應終點。往反應液中加入水40mL，以30mL EA萃取2次，合併有機層，依次用水、飽和食鹽水各洗一次，分出有機層，無水硫酸鈉乾燥，過濾，於45℃下減壓濃縮，得到粗品，粗品經過高效液相純化，得產品製備液，凍幹得化合
物31a(1.8g，類白色固體)，收率84.0%，LCMS：[M+H]+=1186.5。
第二步：化合物31b的合成
於50mL三口瓶中加入化合物31a(1.8g,1.0mmol)，5%鈀硫酸鋇(0.36g)，甲酸銨(0.95g,15mmol)，20mL甲醇溶解，氮氣保護下，45℃反應2h，HPLC監測反應終點。反應結束後，過濾，濾液濃縮後，加入20mL DCM，20mL水攪拌均勻後分液，水層用DCM再萃取一次，合併有機層，飽和氯化鈉水溶液洗一次，分液，無水硫酸鈉乾燥，濃縮得到粗品。粗品經過高效液相純化，得產品製備液，凍幹得化合物31b(0.85g，類白色固體)，收率78%，LCMS：[M+H]+=1096.5。
第四步：化合物31c的合成
於100mL單口瓶中加入化合物31b(850mg,0.85mmol)和15mL DMF，室溫攪拌下依次加入1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳醯二亞胺鹽酸鹽(514mg,2.7mmol)和DMAP(324mg,2.7mmol)，N2保護於室溫下攪拌1h，然後加入化合物CBI(參照專利CN109180681A)(376mg,1.0mmol)，N2保護於室溫下反應過夜，HPLC顯示原料基本反應完全。往反應液中加入水40mL，以30mL DCM萃取2次，合併有機層，依次用水、飽和食鹽水各洗一次，分出有機層，無水硫酸鈉乾燥，過濾，於40℃下減壓濃縮，得到粗品。粗品經過
高效液相純化，得產品製備液，凍幹得化合物31c(941mg，類白色固體)，收率78.2%，LCMS：[M+H]+=1415.6。
第五步：化合物31d的合成
於50mL三口瓶中加入化合物31c(941mg,0.66mmol)，5%鈀硫酸鋇(188mg)，甲酸銨(415mg,6.6mmol)，20mL甲醇溶解，氮氣保護下，45℃反應2h，HPLC監測反應終點。反應結束後，過濾，濾液濃縮後，加入20mL DCM，20mL水攪拌均勻後分液，水層用DCM再萃取一次，合併有機層，飽和氯化鈉水溶液洗一次，分液，無水硫酸鈉乾燥，濃縮得到粗品。粗品經過高效液相純化，得產品製備液，凍幹得化合物31d(735mg，類白色固體)，收率84.0%，LCMS：[M+H]+=1325.5。
第六步：化合物31e的合成
於50mL單口瓶中加入化合物31d(735mg,0.55mmol)，20%的六氫吡啶DMF溶液(15mL)，室溫下反應2h，HPLC監測反應終點。反應結束後，過濾，濾液經過高效液相純化，得產品製備液，凍幹得化合物31e(428mg，類白色固體)，收率86.5%，LCMS：[M+H]+=1103.5。
第七步：化合物31f的合成
於50mL單口瓶中加入化合物31e(524mg,0.48mmol)，DIPEA(168mg,1.30mmol)，化合物M3(441mg,0.78mmol)，10mL DMF溶解，室溫下反應2h，HPLC監測反應終點。反應結束後，反應液經過高
效液相純化，得產品製備液，凍幹得化合物31f(549mg，類白色固體)，收率77.2%，LCMS：[M+H]+=1483.6。
第八步：化合物31的合成
於50mL單口瓶中加入化合物31f(549mg,0.37mmol)，溴化鋅(832mg,3.7mmol)，10mL硝基甲烷溶解，25℃下反應45min，HPLC監測反應終點，反應結束後，40℃減壓旋除溶劑得濃縮物，經過高效液相純化，得產品製備液，凍幹得化合物31(213mg，類白色固體)，收率43.5%，LCMS：[M+H]+=1326.5。
實施例37：
化合物32合成：
第一步：化合物32a的合成
於50mL單口瓶中，加入化合物N-炔丙基馬來醯亞胺(500mg,3.7mmol)，N3-PEG4-OH(811mg,3.7mmol)，10mL DMF及5mL水溶解，再加入CuSO4．5H2O(1.01g,4.1mmol)，抗壞血酸鈉(806mg,4.1mmol)，室溫反應1h，HPLC監測反應終點。反應結束後，反應液經過高效液相製備純化，得到產品製備液，製備液凍幹，得到化合物32a(1.06g)，收率81%，LCMS：[M+H]+=355.1。
第二步：化合物32的合成
於50mL三口瓶中加入化合物32a(20mg，0.056mmol)、化合物A(19.8mg，0.028mmol)、三苯基膦(29.6mg，0.11mmol)及8mL DMF，氮氣保護，冰水浴滴加偶氮二甲酸二異丙酯(28uL，0.11mmol)，滴畢升至室溫反應，HPLC監測。反應結束後製備純化，凍幹得化合物32(18mg)，收率63%，LC-MS：[M+H]+=1040.4。
實施例38：
化合物33合成：
第一步：化合物33a的合成
按照專利CN111686259A中「化合物22」的合成方法製備。
第二步：化合物33c的合成
於50mL單口瓶中加入化合物33a(500mg，2.0mmol)，溶於8mL DMF中，加入300mg 5%Pd/C，
氫化反應2h，TLC監測反應終點。反應結束後，過濾，得化合物32b的DMF溶液，備用。
向上述DMF溶液中加入化合物Mc-三肽(992mg，2.0mmol)，PyBop(1.3g，2.5mmol)、HOBt(339mg，2.5mmol)及DIEA(415uL，2.5mmol)，室溫反應2h，HPLC監測反應終點。反應液經過高效液相製備純化，得產品製備液，凍幹得化合物33c(580mg)，收率52%，LC-MS：[M+H]+=559.2。
第三步：化合物33的合成
於50mL三口瓶中加入化合物33c(20mg，0.035mmol)、化合物A(12.6mg，0.018mmol)、三苯基膦(18.4mg，0.07mmol)及5mL DMF，氮氣保護，冰水浴滴加偶氮二甲酸二異丙酯(14.2uL，0.07mmol)，滴畢升至室溫反應，HPLC監測。反應結束後製備純化，凍幹得化合物33(15mg)，收率68%，LC-MS：[M+H]+=1244.5。
實施例39(對照例)：
化合物34和35的合成：
化合物34按照專利CN105636612A中「化合物56」的合成方法合成。
化合物35按照文件「ACS Med Chem Lett.2016；7：983-987」中「SG3249，tesirine」的合成方法合成。
實施例40：
以下為Trastuzumab的序列：
輕鏈
MDMRVPAQLLGLLLLWLRGARC
重鏈
MDMRVPAQLLGLLLLWLRGARC
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFNIKDTYIHWVRQAPGKGLEWVARIYPTNGYTRYA
DSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCSRWGGDGFYAMDYWGQGTLVTVSS
配體-藥物偶聯物的製備：
1)通用偶聯方法
將通過初步的純化後單體率大於95%的抗體分子，使用超濾離心管換液至磷酸鹽緩衝液中，濃度10mg/mL。加入20倍於抗體摩爾分子數的TCEP，室溫下反應4h以打開抗體鏈間二硫鍵。加入20倍於抗體摩爾分子數的連接子-藥物化合物(payload)，室溫下反應2h。反應結束後，使用截留分子量為30KDa的超濾離心管換液至PBS中，並去除未偶聯的payload。換液後的ADC樣品使用0.22微米除菌篩檢程式過濾後備用。
2)配體-藥物偶聯物DAR值的測定
單體率檢測條件：
樣品14000rpm離心5分鐘，取上清液進樣分析；
儀器：Waters e2695(2489UV/Vis)；
色譜柱：TSKgel G3000SWXL(7.8×300mm，5μm)；
流動相：A：50mM PB，300mM NaCl，200mM Arg，5%IPA，pH為6.5；
流動相A等度洗脫30min，流速：0.714mL/min，柱溫25℃，檢測波長：280nm。
DAR檢測條件：
樣品14000rpm離心5分鐘，取上清液進樣分析；
儀器：Waters H-class(TUV)；
色譜柱：Proteomix HIC Butyl-NP5(4.6×35mm，5μm)；
流動相：A：1.5M硫酸銨，0.025M無水磷酸鈉，pH為7.0，B：0.025M無水磷酸鈉，25% IPA，pH為7.0；
流動相A平衡色譜柱，流動相A和B梯度洗脫，流速0.8mL/min；柱溫25℃，檢測波長：214nm。
實施例41：
按照實施例40的通用偶聯方法製備得到ADC-1：
實施例42：
按照實施例40的通用偶聯方法製備得到ADC-2：
實施例43：
按照實施例40的通用偶聯方法製備得到ADC-3：
實施例44：
按照實施例40的通用偶聯方法製備得到ADC-4：
實施例45：
按照實施例40的通用偶聯方法製備得到ADC-5：
實施例46：
按照實施例40的通用偶聯方法製備得到ADC-6：
實施例47：
按照實施例40的通用偶聯方法製備得到ADC-7：
實施例48：
按照實施例40的通用偶聯方法製備得到ADC-8：
實施例49：
按照實施例40的通用偶聯方法製備得到ADC-9：
實施例50：
按照實施例40的通用偶聯方法製備得到ADC-10：
實施例51：
按照實施例40的通用偶聯方法製備得到ADC-11：
實施例52：
按照實施例40的通用偶聯方法製備得到ADC-12：
實施例53：
按照實施例40的通用偶聯方法製備得到ADC-13：
實施例54：
按照實施例40的通用偶聯方法製備得到ADC-14：
實施例55：
按照實施例40的通用偶聯方法製備得到ADC-15：
實施例56：
按照實施例40的通用偶聯方法製備得到ADC-16：
實施例57：
按照實施例40的通用偶聯方法製備得到ADC-17：
實施例58：
按照實施例40的通用偶聯方法製備得到ADC-18：
實施例59：
按照實施例40的通用偶聯方法製備得到ADC-19：
實施例60：
按照實施例40的通用偶聯方法製備得到ADC-20：
實施例61：
按照實施例40的通用偶聯方法製備得到ADC-21：
實施例62：
按照實施例40的通用偶聯方法製備得到ADC-22：
實施例63：
按照實施例40的通用偶聯方法製備得到ADC-23：
實施例64：
按照實施例40的通用偶聯方法製備得到ADC-24：
實施例65：
按照實施例40的通用偶聯方法製備得到ADC-25：
實施例66：
按照實施例40的通用偶聯方法製備得到ADC-26：
實施例67：
按照實施例40的通用偶聯方法製備得到ADC-27：
實施例68：
按照實施例40的通用偶聯方法製備得到ADC-28：
實施例69：
按照實施例40的通用偶聯方法製備得到ADC-29：
實施例70：
按照實施例40的通用偶聯方法製備得到ADC-30：
實施例71：
按照實施例40的通用偶聯方法製備得到ADC-31：
實施例72：
按照實施例40的通用偶聯方法製備得到ADC-32：
實施例73：
按照實施例40的通用偶聯方法製備得到ADC-33：
實施例74：
按照實施例40的通用偶聯方法製備得到ADC-34：
實施例75：
按照實施例40的通用偶聯方法製備得到ADC-35：
實施例76：
按照實施例40的通用偶聯方法製備得到ADC-36：
實施例77：
按照實施例40的通用偶聯方法製備得到ADC-37：
實施例78：
按照實施例40的通用偶聯方法製備得到ADC-38：
實施例79(對照)：
按照實施例40的通用偶聯方法製備得到ADC-39：
實施例80(對照)：
按照實施例40的通用偶聯方法製備得到ADC-40：
實施例81：血漿穩定性實驗
1.操作
取一定量的ADC樣品，加入到已去除人IgG的人血漿中，每種ADC重複三管，放置37℃水浴中孵，分別孵育72h、144h後，取出ADC樣品，每管加入ProteinA resin(MabSelect SuReTM LX Lot：#10221479GE，用取PBS洗滌過的)100uL，垂直混合儀晃動吸附2h，經過洗滌洗脫步驟，獲得孵育後的ADC。對孵育特定的時間的ADC樣品進行RP-HPLC檢測。
2.結果
3)結論
如表1所示，本發明公開的ADC具有DAR值(>7.5)及單體率(>97%)高的優異性質。
如表2所示，本發明公開的ADC血漿中孵育7天后DAR值仍可以保持較高水平，證明本發明的ADC在血漿中具有優異的穩定性。
實施例82：體外活性測試
1)實驗材料
細胞：來源於中國科學院細胞庫；
腫瘤細胞培養基：Gibco；
FBS：BIOWEST；
2)培養基的配製
生長培養基(with 10%FBS，Penicillin/streptomycin(100U/mL)；
檢測培養基(with 1%FBS，Penicillin/streptomycin(100U/mL)；
3)操作
提前30min開啟生物安全櫃紫外燈照射，後通風3min。將生長培養基、檢測培養基、D-PBS和胰酶放入37℃恒溫水浴鍋預熱，之後用酒精對表面進行消毒，放入生物安全櫃中。選擇匯合度在~80%的細胞(對數生長期)，放於生物安全櫃中，吸掉舊培養基，用D-PBS潤洗，吸棄，用胰酶消化2~3min，後加入生長培養基終止胰酶，500×g離心5min。吸去離心上清液，用4mL檢測培養基混勻，取100uL計數(其中取出50uL細胞液，加入50μL 0.4% Trypan Blue Stain並混勻，混勻後計數)。按照之前設置好的細胞數鋪板，80uL/孔鋪於96孔板中，孔E11、F11、G11只加80uL檢測培養基，邊緣孔加入200uL的DPBS封邊。待鋪板細胞完全貼壁後(通常至少需要4小時)，進行受試樣品配置與稀釋：用檢測培養基配置1.0mL,2.5μM(5×Top Dose)的受試樣品，分裝於V型96孔板第一列，每孔200μL；後面第2至8列分別加入180μL的檢測培養基，從第一列中取30μL加入到第二列，用排槍上下混勻10次，棄槍頭，剩餘檢測濃度點依次操作，進行7倍梯度濃度稀釋。將梯度濃度的受試樣品按照每孔20uL的量加入細胞中，同時第11列只加入20uL的檢測培養基，每個濃度設置3個複孔，隨後將96孔板放入5%CO2,37℃細胞培養箱，培養5天。
4)檢測
受試樣品作用5天后取出MTS試劑，常溫避光解凍後，充分渦旋混勻後，在生物安全櫃中，沿孔側壁按每
100μL細胞培養體積加入20μL Cell Titer One Solution Reagen MTS試劑，輕輕拍動板面，使MTS溶液混合均勻，放於細胞培養箱中5%CO2,37℃避光靜置孵育2h。反應結束後，取出96孔板，於酶標儀中檢測OD490nm吸光值，並進行資料記錄、整理、儲存。
5)結果
表4：抗體藥物偶聯物及毒素對SK-BR-3腫瘤細胞的體外增值抑制的IC50值。
6)結論
如表3所示，本發明針對HER2靶標的配體-藥物偶聯物對HER2陽性細胞N87具有明顯的體外增值抑制活性，明顯優於裸抗(Trastuzumab)、對照組ADC-39。
如表4所示，與裸抗(Trastuzumab)及對照組ADC對比，本發明公開的ADC及單藥對HER2陽性的細胞SK-BR-3也具有明顯的體外增值抑制活性。
實施例83：體內安全性測試
1)實驗材料
細胞：來源於中國科學院細胞庫；
腫瘤細胞培養基：Gibco；
Balb/c-nu裸鼠：雌性，5-7周(腫瘤細胞接種時的小鼠周齡)，體重18.0-24.0g，180只(120只加60只富餘小鼠)。購自北京維通利華實驗動物技術有限公司；
供試品和對照品：
供試品：ADC-3、ADC-40由成都多特抗體藥物有限責任公司提供。
Histidine緩衝液，由成都多特抗體藥物有限責任公司提供。
0.9%氯化鈉注射液：科倫藥業有限責任公司。
2)細胞培養
NCI-H1975(人非小細胞肺癌腺癌細胞)培養在RPMI1640培養基中。收集指數生長期的NCI-H1975細胞，RPMI1640培養基重懸至適合濃度後用於小鼠皮下腫瘤接種。
3)動物造模和隨機封包
120只雌性裸鼠右肩側皮下接種5×107個NCI-H1975細胞。待腫瘤平均體積170mm3左右時，根據腫瘤大小隨機封包。選取120只腫瘤體積合適的荷瘤小鼠，隨機封包並開始給藥(尾靜脈注射，給藥體積按0.1mL/10g)。封包當天定義為第0天。
4)供試品和對照品的配製
表5. 在NCI-H1975(人非小細胞肺癌腺癌細胞)移植瘤模型中抗腫瘤作用研究的供試品和對照品溶液的配製。
5)實驗觀察和資料收集
本實驗程序中，動物實驗操作均根據抗腫瘤藥物體內篩選試驗標準操作規程的要求。腫瘤接種後，一般監測包括了腫瘤生長(腫瘤每週測量2次)及治療對動物正常行為的影響，具體內容有實驗動物的活動性，攝食和飲水
情況，體重增加或降低(體重每週測量2次)情況，眼睛、被毛及其它異常情況。實驗程序中觀察到的臨床症狀均記錄在原始資料中。腫瘤體積計算公式：腫瘤體積(mm3)=1/2×(a×b2)(其中a表示長徑，b表示短徑)。實驗中採用人工記錄資料，包括腫瘤的長短徑的測量和動物體重的稱量。
6)結果
7)結論
如表6所示，本發明公開ADC-3在低劑量及高劑量對NCI-H1975荷瘤小鼠的體重影響明顯相比於ADC-40的影響小，即便在該高劑量組下，也未出現如對照組所示的小鼠死亡，證明本發明所述的ADC藥物在安全性方面具有顯著的優勢。
Claims (25)
- 一種如式I所示的配體-藥物偶聯物，或其藥學上可接受的鹽、氘代物、溶劑化物：Ab-L-D (I)其中：Ab為配體單元，選自抗體、抗體片段、靶向蛋白或Fc-融合蛋白；L為D與Ab的連接單元；D為藥物單元，選自以下結構：
或
其中：波浪線表示藥物與L連接的位點，且只存在三個位點中的一個位點與L相連；R1為H、氘、OH或由OR3表示的醚、亞硫酸根SO3 -或OSO3 -，其中R3選自C1-C10的直鏈、支鏈或環狀烷基、烯基或炔基；在N和C之間的雙線表示單鍵或雙鍵，條件是，當其為雙鍵時，N處不與L相連且R1是H；當其為單鍵時，N處與L相連，R1選自OH或由OR3表示的醚、亞硫酸根SO3 -或OSO3 -，其中R3選自C1-C10的直鏈、支鏈或環狀烷基、烯基或炔基；
R2為H或烷基取代基；T選自於C2-C12烴基、Z、(C1-C6亞烷基)-Z-(C1-C6亞烷基)、(C1-C6亞烷基)-Z-(C1-C6亞烷基)-Z-(C1-C6亞烷基)、(C1-C6亞烯基)-Z-(C1-C6亞烯基)或(C1-C6亞炔基)-Z-(C1-C6亞炔基)；其中：Z選自O、S、NR4、芳基或雜芳基；其中R4選自於H、P(O)3H2或C(O)NR5R6；其中R5和R6選自H、C1-C6烷基、一或多個F取代的C1-C6烷基、或者R5和R6形成五元或六元雜環基基團；亞烷基，亞烯基，芳基和雜芳基選自F、OH、O(C1-C6烷基)、NH2、NHCH3、N(CH3)2或C1-C6烷基取代的，其中烷基是用一或多個F取代的；Y選自於一或多個H或C1-C4的烷基；X選自於-O-、-N-、-S-、 -OC(O)-CR7R8-(CR9R10)m-O-、 -OC(O)-CR7R8-(CR9R10)m-NH-、 -OC(O)-CR7R8-(CR9R10)m-S-、 -NHC(O)-CR7R8-(CR9R10)m-O-、 -NHC(O)-CR7R8-(CR9R10)m-NH-或 -NHC(O)-CR7R8-(CR9R10)m-S-；其中：R7、R8分別獨立地為氫原子、氘原子、鹵素、烷基、氘代烷基、鹵代烷基、環烷基、環烷基烷基、烷氧基烷基、雜環基、芳基、取代芳基或雜芳基；或者，R7、R8及其所連接碳原子構成C3-C6環烷基、環烷基烷基或雜環基；R9、R10相同或者不同，且分別獨立地為氫原子、氘原子、鹵素、烷基、鹵代烷基、氘代烷基、烷氧基、羥基、氨基、氰基、硝基、羥烷基、環烷基或雜環基；或者，R9、R10及其所連接碳原子構成C3-C6環烷基、環烷基烷基或雜環基；m選自0-4的整數；X1選自於鹵素或OSO2R11，其中R11選自於H、C1-C4的烴基、苯基或者取代苯基。 - 根據請求項1之配體-藥物偶聯物或其藥學上可接受的鹽、氘代物、溶劑化物，其中：Ab為抗體，可通過其雜原子與連接單元形成連接鍵，所述抗體選自鼠源抗體、嵌合抗體、人源化抗體、全人源抗體、抗體片段、雙特異性抗體或多特異性抗體。
- 根據請求項1或2之配體-藥物偶聯物或其藥學上可接受的鹽、氘代物、溶劑化物，其中所述的抗 體或其抗原結合片段，非限制性地選自：抗EGFR VIII抗體、抗DLL-3抗體、抗PSMA抗體、抗CD70抗體、抗MUC16抗體、抗ENPP3抗體、抗TDGF1抗體、抗ETBR抗體、抗MSLN抗體、抗TIM-1抗體、抗LRRC15抗體、抗LIV-1抗體、抗CanAg/AFP抗體、抗cladin 18.2抗體、抗Mesothelin抗體、抗HER2(ErbB2)抗體、抗EGFR抗體、抗c-MET抗體、抗SLITRK6抗體、抗KIT/CD117抗體、抗STEAP1抗體、抗SLAMF7/CS1抗體、抗NaPi2B/SLC34A2抗體、抗GPNMB抗體、抗HER3(ErbB3)抗體、抗MUC1/CD227抗體、抗AXL抗體、抗CD166抗體、抗B7-H3(CD276)抗體、抗PTK7/CCK4抗體、抗PRLR抗體、抗EFNA4抗體、抗5T4抗體、抗NOTCH3抗體、抗Nectin 4抗體、抗TROP-2抗體、抗CD142抗體、抗CA6抗體、抗GPR20抗體、抗CD174抗體、抗CD71抗體、抗EphA2抗體、抗LYPD3抗體、抗FGFR2抗體、抗FGFR3抗體、抗FR α抗體、抗CEACAMs抗體、抗GCC抗體、抗Integrin Av抗體、抗CAIX抗體、抗P-cadherin抗體、抗GD3抗體、抗Cadherin 6抗體、抗LAMP1抗體、抗FLT3抗體、抗BCMA抗體、抗CD79b抗體、抗CD19抗體、抗CD33抗體、抗CD56抗體、抗CD74抗體、抗CD22抗體、抗CD30抗體、抗CD37抗體、抗CD47抗體、抗CD138抗體、 抗CD352抗體、抗CD25抗體或抗CD123抗體。
- 根據請求項1或2之配體-藥物偶聯物或其藥學上可接受的鹽、氘代物、溶劑化物，其中：L為可裂解型或不可裂解型。
- 如請求項1或2中所述的配體-藥物偶聯物或其藥學上可接受的鹽、氘代物、溶劑化物，其中：所述藥學上可接受的鹽，包括與結構式中酸性官能團形成的鈉鹽、鉀鹽、鈣鹽或鎂鹽；或與結構中鹼性官能團形成的醋酸鹽、三氟乙酸鹽、檸檬酸鹽、草酸鹽、酒石酸鹽、蘋果酸鹽、硝酸鹽、氯化物、溴化物、碘化物、硫酸鹽、硫酸氫鹽、磷酸鹽、乳酸鹽、油酸鹽、抗壞血酸鹽、水楊酸鹽、甲酸鹽、谷氨酸鹽、甲磺酸鹽、乙磺酸鹽、苯磺酸鹽或對甲苯磺酸鹽。
- 一種如請求項1-5任一所述的配體藥物偶聯物或其藥學上可接受的鹽、氘代物、溶劑化物，其製備用於治療或預防腫瘤藥物的用途。
- 如請求項6之用途，其中：所述腫瘤為實體瘤或血液瘤。
- 如請求項7之用途，其中：所述腫瘤為乳腺癌、卵巢癌、宮頸癌、子宮癌、前列腺癌、腎癌、尿道癌、膀胱癌、肝癌、胃癌、子宮內膜癌、唾液腺癌、食道癌、肺癌、結腸癌、直腸癌、結直腸癌、骨癌、皮膚癌、甲狀腺癌、胰腺癌、黑色素瘤、神經膠質瘤、神經母細胞瘤、多形性膠質細胞瘤、肉瘤、淋巴瘤或白血病。
- 一種用於與請求項1中所述Ab連接的通式為II或III的化合物，或其藥學上可接受的鹽或溶劑化物：
或
其中：R1為H、OH或由OR3表示的醚、亞硫酸根SO3 -或OSO3 -，其中R3選自C1-C10的直鏈、支鏈或環狀烷基、烯基或炔基；在N和C之間的雙線表示單鍵或雙鍵，條件是，當其為雙鍵時，R12不存在且R1是H；當其為單鍵時，R12為-C(O)O-L3，其中L3為連接單元；R1選自OH、由OR3表示的醚、亞硫酸根SO3 -或OSO3 -，其中R3選自C1-C10的直鏈、支鏈或環狀烷基、烯基或炔基；
R2為H或烷基取代基；T選自於C2-C12烴基、Z、(C1-C6亞烷基)-Z-(C1-C6亞烷基)、(C1-C6亞烷基)-Z-(C1-C6亞烷基)-Z-(C1-C6亞烷基)、(C1-C6亞烯 基)-Z-(C1-C6亞烯基)或(C1-C6亞炔基)-Z-(C1-C6亞炔基)；其中：Z選自O，S，NR4，芳基和雜芳基；其中R4選自於H，P(O)3H2，C(O)NR5R6，其中R5和R6選自H，C1-C6烷基，一或多個F取代的C1-C6烷基，或者R5和R6形成五元或六元雜環基基團；亞烷基，亞烯基，芳基和雜芳基選自F，OH，O(C1-C6烷基)，NH2，NHCH3，N(CH3)2和C1-C6烷基取代的，其中烷基是用一或多個F取代的；Y選自於一或多個H或C1-C4的烷基；X選自於-O-、-N-、-S-、 -OC(O)-CR7R8-(CR9R10)m-O-、 -OC(O)-CR7R8-(CR9R10)m-NH-、 -OC(O)-CR7R8-(CR9R10)m-S-、 -NHC(O)-CR7R8-(CR9R10)m-O-、 -NHC(O)-CR7R8-(CR9R10)m-NH-或 -NHC(O)-CR7R8-(CR9R10)m-S-；其中：R7、R8分別獨立地為氫原子、氘原子、鹵素、烷基、氘代烷基、鹵代烷基、環烷基、環烷基烷基、烷氧基烷基、雜環基、芳基、取代芳基或雜芳基；或者，R7、R8及其所連接碳原子構成C3-C6環烷基、環烷基烷基或雜環基；R9、R10相同或者不同，且分別獨立地為氫原子、氘原子、鹵素、烷基、鹵代烷基、氘代烷基、烷氧基、羥基、氨基、氰基、硝基、羥烷基、環烷基或雜環基；或者，R9、R10及其所連接碳原子構成C3-C6環烷基、環烷基烷基或雜環基；m選自0-4的整數；X1選自於鹵素或OSO2R11，其中R11選自於H，C1-C4的烴基，苯基或者取代苯基；L1，L2為連接單元或取代基。 - 根據請求項9所述化合物II、III或其藥學上可接受的鹽或溶劑化物，其中：T選自C2-C12的亞烷基。
- 根據請求項9或10之化合物II、III或其 藥學上可接受的鹽或溶劑化物，其中：T為。
- 根據請求項9或10所述化合物II、III或其藥學上可接受的鹽或溶劑化物，其中：X為-O-、-N-或-NHC(O)-CR7R8-(CR9R10)m-O-。
- 根據請求項9或10所述化合物II、III或其藥學上可接受的鹽或溶劑化物，其中L3為：
其中：波浪線處與-C(O)O-相連；L4為連接單元，與配體單元相連。 - 根據請求項9或10所述化合物II、III， 或其藥學上可接受的鹽或溶劑化物，其中L4非限制性地選自：
其中：波浪線處，左側碳端與配體單元相連，右側氮端或酯羰基端與X2相連。 - 根據請求項9或10所述化合物II、III，或其藥學上可接受的鹽或溶劑化物，其中Q為：
其中Qx為氨基酸殘基或由氨基酸構成的肽殘基。 - 根據請求項9或10所述化合物II、III，或其藥學上可接受的鹽或溶劑物，其特徵在於X2為：
其中a選自0-5的整數，b選自0-16的整數，c選自0-1的整數，d選自0-5的整數。 - 根據請求項9或10所述化合物II、III，或其藥學上可接受的鹽或溶劑化物，其中L3非限制性地選自：
其中：波浪線處，左側丁二醯亞胺端與配體單元相連，右側與-C(O)O-相連。 - 根據請求項9或10所述化合物II、III，或其藥學上可接受的鹽或溶劑化物，其特徵在於L1和L2分別獨立選自：結構A：氫原子、C(O)NR'R''，其中R'和R''分別選自H、C1-C6烷基，一或多個F取代的C1-C6烷基；或者R'和R''形成五元或六元雜環基基團；結構B：L4-L5-，L4-L6-或L4-L7-L8-L9-，其中L4、L5、L6、L7、L8和L9均為連接單元，L4與配體單元連接，L5、L6、L9與X相連。
- 根據請求項9或10所述化合物II、III，或其藥學上可接受的鹽或溶劑化物，其中：當N和C之間為單鍵，即R12存在時，L1、L2分別獨立選自於結構A；當N和C之間為雙鍵，即R12不存在時，L1為結構A或B，則L2為結構B或A。
- 根據請求項18所述化合物II、III，或其藥學上可接受的鹽或溶劑化物，其中：L5為-((CH2)sO)r(CH2)sX3L10-或-((CH2)sO)r(CH2)sX4L10-； L6為-((CH2)sO)r(CH2)s-； L10為-(CH2)s-或-((CH2)sNHC(=O)X5X6C(=O)(CH2)s-；其中：X3非限制性地選自：、
或
，其中R13獨立選自氫 原子、C1-C6烴基、鹵素原子或羥基；
X4非限制性地選自：、
或
，其中R13獨立選自氫 原子，C1-C6烴基、鹵素原子或羥基；
X5非限制性地選自：
X6選自由氨基酸組成的肽殘基，非限制性地選自：
s選自1-10的整數，r選自1-14的整數。 - 根據請求項18所述化合物II、III，或其藥學上可接受的鹽或溶劑化物，其中：L7為-NC(R14R15)C(O)、-NR16(CH2)oC(O)-、-NR16(CH2CH2O)oCH2C(O)-、-S(CH2)pC(O)- 或者化學鍵，其中o選自0-20的整數；p選自0-20的整數；R14與R15相同或者不同，且各自獨立地選自氫原子、氘原子、烷基、取代烷基、氘代烷基、雜烷基、羧基、氨基、取代氨基；R16選自氫原子、氘原子、鹵素、烷基、取代烷基、氘代烷基、環烷基烷基、烷氧基烷基、芳基、取代芳基或雜芳；L8選自由氨基酸構成的肽殘基；L9為-NR17(CR18R19)q-、-C(O)NR17-、 -C(O)NR17(CH2)q-或者化學鍵，其中q選自0-6的整數；R17、R18和R19相同或者不同，且各自獨立地選自氫原子、氘原子、鹵素、烷基、取代烷基、氘代烷基、環烷基、環烷基烷基、烷氧基烷基、雜環基、芳基、取代芳基或雜芳基。
- 根據請求項21所述化合物II、III，或其藥學上可接受的鹽或溶劑化物，其中：所述L8為一或多個選自苯丙氨酸、甘氨酸、纈氨酸、賴氨酸、瓜氨酸、絲氨酸、谷氨酸或者天冬氨酸中的氨基酸形成的肽殘基。
- 根據請求項19所述化合物II、III，或其藥學上可接受的鹽或溶劑化物，其特徵在於L1、L2獨立從結構B中非限制性地選自：
- 根據請求項9所述化合物II、III或其藥學上可接受的鹽或溶劑化物，其中非限制性地選自結構：
- 根據請求項1中所述的抗體-藥物偶聯物或其藥學上可接受的鹽、氘代物、溶劑化物，其中非限制性地選自以下結構：
其中u選自1-10的整數。
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