TW202220702A - 一種含抗體藥物偶聯物的醫藥組成物及其用途 - Google Patents
一種含抗體藥物偶聯物的醫藥組成物及其用途 Download PDFInfo
- Publication number
- TW202220702A TW202220702A TW110136528A TW110136528A TW202220702A TW 202220702 A TW202220702 A TW 202220702A TW 110136528 A TW110136528 A TW 110136528A TW 110136528 A TW110136528 A TW 110136528A TW 202220702 A TW202220702 A TW 202220702A
- Authority
- TW
- Taiwan
- Prior art keywords
- antibody
- seq
- cancer
- pharmaceutical composition
- chain variable
- Prior art date
Links
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 title claims abstract description 101
- 239000000611 antibody drug conjugate Substances 0.000 title claims abstract description 82
- 229940049595 antibody-drug conjugate Drugs 0.000 title claims abstract description 82
- -1 Amino acid-acetate Chemical compound 0.000 claims description 71
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 65
- 239000000872 buffer Substances 0.000 claims description 63
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 52
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 47
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 claims description 42
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 38
- 125000000623 heterocyclic group Chemical group 0.000 claims description 36
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 36
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims description 35
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims description 32
- 125000000753 cycloalkyl group Chemical group 0.000 claims description 31
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 31
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 claims description 27
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 claims description 27
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 claims description 24
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 claims description 23
- 239000000244 polyoxyethylene sorbitan monooleate Substances 0.000 claims description 22
- 235000010482 polyoxyethylene sorbitan monooleate Nutrition 0.000 claims description 22
- 229920000053 polysorbate 80 Polymers 0.000 claims description 22
- 229940068968 polysorbate 80 Drugs 0.000 claims description 22
- 229910052736 halogen Inorganic materials 0.000 claims description 21
- 150000002367 halogens Chemical class 0.000 claims description 21
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 claims description 19
- 125000001072 heteroaryl group Chemical group 0.000 claims description 18
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 claims description 17
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 claims description 17
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 claims description 16
- 239000008351 acetate buffer Substances 0.000 claims description 15
- 125000003545 alkoxy group Chemical group 0.000 claims description 15
- 125000004435 hydrogen atom Chemical group [H]* 0.000 claims description 13
- NTYJJOPFIAHURM-UHFFFAOYSA-N Histamine Chemical compound NCCC1=CN=CN1 NTYJJOPFIAHURM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 claims description 12
- HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N α-D-glucopyranosyl-α-D-glucopyranoside Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(O)C(O)C(O)C(CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 11
- HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N Trehalose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N 0.000 claims description 11
- HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N alpha,alpha-trehalose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N 0.000 claims description 11
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 11
- 125000000449 nitro group Chemical group [O-][N+](*)=O 0.000 claims description 11
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 claims description 11
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 claims description 10
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 claims description 10
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 claims description 10
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 claims description 10
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 claims description 10
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 claims description 10
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 claims description 10
- 229950008882 polysorbate Drugs 0.000 claims description 9
- 125000004093 cyano group Chemical group *C#N 0.000 claims description 8
- 229940068977 polysorbate 20 Drugs 0.000 claims description 8
- 208000005718 Stomach Neoplasms Diseases 0.000 claims description 7
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 claims description 7
- 125000001188 haloalkyl group Chemical group 0.000 claims description 7
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 claims description 6
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 claims description 6
- 206010017758 gastric cancer Diseases 0.000 claims description 6
- 229960001340 histamine Drugs 0.000 claims description 6
- 201000011549 stomach cancer Diseases 0.000 claims description 6
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 claims description 5
- 125000001316 cycloalkyl alkyl group Chemical group 0.000 claims description 5
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 claims description 5
- 208000020816 lung neoplasm Diseases 0.000 claims description 5
- 208000010839 B-cell chronic lymphocytic leukemia Diseases 0.000 claims description 4
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 claims description 4
- 208000031422 Lymphocytic Chronic B-Cell Leukemia Diseases 0.000 claims description 4
- 206010025323 Lymphomas Diseases 0.000 claims description 4
- 208000006664 Precursor Cell Lymphoblastic Leukemia-Lymphoma Diseases 0.000 claims description 4
- 125000004183 alkoxy alkyl group Chemical group 0.000 claims description 4
- 208000029742 colonic neoplasm Diseases 0.000 claims description 4
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 claims description 4
- 201000005202 lung cancer Diseases 0.000 claims description 4
- 208000003747 lymphoid leukemia Diseases 0.000 claims description 4
- 125000000185 sucrose group Chemical group 0.000 claims description 4
- 208000032791 BCR-ABL1 positive chronic myelogenous leukemia Diseases 0.000 claims description 3
- 208000010833 Chronic myeloid leukaemia Diseases 0.000 claims description 3
- 208000033761 Myelogenous Chronic BCR-ABL Positive Leukemia Diseases 0.000 claims description 3
- 206010029260 Neuroblastoma Diseases 0.000 claims description 3
- 206010061902 Pancreatic neoplasm Diseases 0.000 claims description 3
- 229910052805 deuterium Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 claims description 3
- 208000023761 AL amyloidosis Diseases 0.000 claims description 2
- 208000024893 Acute lymphoblastic leukemia Diseases 0.000 claims description 2
- 208000014697 Acute lymphocytic leukaemia Diseases 0.000 claims description 2
- 208000031261 Acute myeloid leukaemia Diseases 0.000 claims description 2
- 208000003950 B-cell lymphoma Diseases 0.000 claims description 2
- 206010005003 Bladder cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 206010005949 Bone cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 208000018084 Bone neoplasm Diseases 0.000 claims description 2
- 208000003174 Brain Neoplasms Diseases 0.000 claims description 2
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 claims description 2
- 206010008342 Cervix carcinoma Diseases 0.000 claims description 2
- 208000005243 Chondrosarcoma Diseases 0.000 claims description 2
- 208000030808 Clear cell renal carcinoma Diseases 0.000 claims description 2
- 208000001333 Colorectal Neoplasms Diseases 0.000 claims description 2
- 206010014733 Endometrial cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 206010014759 Endometrial neoplasm Diseases 0.000 claims description 2
- 208000000461 Esophageal Neoplasms Diseases 0.000 claims description 2
- 208000006168 Ewing Sarcoma Diseases 0.000 claims description 2
- 206010017993 Gastrointestinal neoplasms Diseases 0.000 claims description 2
- 208000032612 Glial tumor Diseases 0.000 claims description 2
- 201000010915 Glioblastoma multiforme Diseases 0.000 claims description 2
- 206010018338 Glioma Diseases 0.000 claims description 2
- 206010073073 Hepatobiliary cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 208000017604 Hodgkin disease Diseases 0.000 claims description 2
- 208000021519 Hodgkin lymphoma Diseases 0.000 claims description 2
- 208000010747 Hodgkins lymphoma Diseases 0.000 claims description 2
- 208000008839 Kidney Neoplasms Diseases 0.000 claims description 2
- 208000031671 Large B-Cell Diffuse Lymphoma Diseases 0.000 claims description 2
- 208000028018 Lymphocytic leukaemia Diseases 0.000 claims description 2
- 208000025205 Mantle-Cell Lymphoma Diseases 0.000 claims description 2
- 208000002030 Merkel cell carcinoma Diseases 0.000 claims description 2
- 208000034578 Multiple myelomas Diseases 0.000 claims description 2
- 201000003793 Myelodysplastic syndrome Diseases 0.000 claims description 2
- 208000033776 Myeloid Acute Leukemia Diseases 0.000 claims description 2
- 201000007224 Myeloproliferative neoplasm Diseases 0.000 claims description 2
- 208000001894 Nasopharyngeal Neoplasms Diseases 0.000 claims description 2
- 206010061306 Nasopharyngeal cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 206010029266 Neuroendocrine carcinoma of the skin Diseases 0.000 claims description 2
- 208000015914 Non-Hodgkin lymphomas Diseases 0.000 claims description 2
- 206010030155 Oesophageal carcinoma Diseases 0.000 claims description 2
- 206010033128 Ovarian cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 206010061535 Ovarian neoplasm Diseases 0.000 claims description 2
- 206010036711 Primary mediastinal large B-cell lymphomas Diseases 0.000 claims description 2
- 206010060862 Prostate cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 208000000236 Prostatic Neoplasms Diseases 0.000 claims description 2
- 206010038389 Renal cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 208000000453 Skin Neoplasms Diseases 0.000 claims description 2
- 206010041067 Small cell lung cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 208000000102 Squamous Cell Carcinoma of Head and Neck Diseases 0.000 claims description 2
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 claims description 2
- 208000024313 Testicular Neoplasms Diseases 0.000 claims description 2
- 206010057644 Testis cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 206010043515 Throat cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 208000024770 Thyroid neoplasm Diseases 0.000 claims description 2
- 208000007097 Urinary Bladder Neoplasms Diseases 0.000 claims description 2
- 208000006105 Uterine Cervical Neoplasms Diseases 0.000 claims description 2
- 201000007455 central nervous system cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 201000010881 cervical cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 208000032852 chronic lymphocytic leukemia Diseases 0.000 claims description 2
- 208000017763 cutaneous neuroendocrine carcinoma Diseases 0.000 claims description 2
- 125000004431 deuterium atom Chemical group 0.000 claims description 2
- 206010012818 diffuse large B-cell lymphoma Diseases 0.000 claims description 2
- 201000004101 esophageal cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 201000003444 follicular lymphoma Diseases 0.000 claims description 2
- 208000005017 glioblastoma Diseases 0.000 claims description 2
- 201000010536 head and neck cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 208000014829 head and neck neoplasm Diseases 0.000 claims description 2
- 201000000459 head and neck squamous cell carcinoma Diseases 0.000 claims description 2
- 125000002768 hydroxyalkyl group Chemical group 0.000 claims description 2
- 201000010982 kidney cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 201000007270 liver cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 208000014018 liver neoplasm Diseases 0.000 claims description 2
- 201000007919 lymphoplasmacytic lymphoma Diseases 0.000 claims description 2
- 208000006178 malignant mesothelioma Diseases 0.000 claims description 2
- 208000015486 malignant pancreatic neoplasm Diseases 0.000 claims description 2
- 201000005282 malignant pleural mesothelioma Diseases 0.000 claims description 2
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 claims description 2
- 208000002154 non-small cell lung carcinoma Diseases 0.000 claims description 2
- 201000002528 pancreatic cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 208000008443 pancreatic carcinoma Diseases 0.000 claims description 2
- 201000000849 skin cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 208000000587 small cell lung carcinoma Diseases 0.000 claims description 2
- 206010041823 squamous cell carcinoma Diseases 0.000 claims description 2
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 claims description 2
- 201000003120 testicular cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 201000002510 thyroid cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 208000029729 tumor suppressor gene on chromosome 11 Diseases 0.000 claims description 2
- 201000005112 urinary bladder cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 208000006265 Renal cell carcinoma Diseases 0.000 claims 1
- 206010073251 clear cell renal cell carcinoma Diseases 0.000 claims 1
- 230000002124 endocrine Effects 0.000 claims 1
- 125000000487 histidyl group Chemical group [H]N([H])C(C(=O)O*)C([H])([H])C1=C([H])N([H])C([H])=N1 0.000 claims 1
- 201000011330 nonpapillary renal cell carcinoma Diseases 0.000 claims 1
- 230000008961 swelling Effects 0.000 claims 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 85
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 54
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 47
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 46
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 39
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 description 39
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 39
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 33
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 33
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 30
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 30
- 102100024952 Protein CBFA2T1 Human genes 0.000 description 26
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 26
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 25
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 25
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 25
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 25
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 21
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 21
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 20
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 19
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 18
- 238000001542 size-exclusion chromatography Methods 0.000 description 18
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 17
- 125000005647 linker group Chemical group 0.000 description 16
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 14
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 14
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 14
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 14
- 238000001943 fluorescence-activated cell sorting Methods 0.000 description 13
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 230000008033 biological extinction Effects 0.000 description 12
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 12
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 description 12
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 11
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 11
- 239000012931 lyophilized formulation Substances 0.000 description 11
- 125000006413 ring segment Chemical group 0.000 description 11
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 11
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 10
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 10
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 10
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 10
- NFGXHKASABOEEW-UHFFFAOYSA-N 1-methylethyl 11-methoxy-3,7,11-trimethyl-2,4-dodecadienoate Chemical group COC(C)(C)CCCC(C)CC=CC(C)=CC(=O)OC(C)C NFGXHKASABOEEW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 9
- PZBFGYYEXUXCOF-UHFFFAOYSA-N TCEP Chemical compound OC(=O)CCP(CCC(O)=O)CCC(O)=O PZBFGYYEXUXCOF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 9
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 9
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 9
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 9
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 8
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 8
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 8
- 125000005842 heteroatom Chemical group 0.000 description 8
- 238000004007 reversed phase HPLC Methods 0.000 description 8
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 8
- 102000002029 Claudin Human genes 0.000 description 7
- 108050009302 Claudin Proteins 0.000 description 7
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 7
- 230000010056 antibody-dependent cellular cytotoxicity Effects 0.000 description 7
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 7
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 7
- 210000004602 germ cell Anatomy 0.000 description 7
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 7
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 7
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 7
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 7
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 6
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 6
- 125000003342 alkenyl group Chemical group 0.000 description 6
- 125000004414 alkyl thio group Chemical group 0.000 description 6
- 125000000304 alkynyl group Chemical group 0.000 description 6
- 125000002619 bicyclic group Chemical group 0.000 description 6
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 6
- 125000003367 polycyclic group Chemical group 0.000 description 6
- 125000005913 (C3-C6) cycloalkyl group Chemical group 0.000 description 5
- 108050009324 Claudin-18 Proteins 0.000 description 5
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 5
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 5
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 5
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 5
- 125000002947 alkylene group Chemical group 0.000 description 5
- 125000004429 atom Chemical group 0.000 description 5
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 5
- 125000000000 cycloalkoxy group Chemical group 0.000 description 5
- 125000005366 cycloalkylthio group Chemical group 0.000 description 5
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 5
- 125000000592 heterocycloalkyl group Chemical group 0.000 description 5
- PPZMYIBUHIPZOS-UHFFFAOYSA-N histamine dihydrochloride Chemical compound Cl.Cl.NCCC1=CN=CN1 PPZMYIBUHIPZOS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 229960000645 histamine hydrochloride Drugs 0.000 description 5
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 5
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 5
- 238000012792 lyophilization process Methods 0.000 description 5
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 5
- 125000002950 monocyclic group Chemical group 0.000 description 5
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 5
- 230000003204 osmotic effect Effects 0.000 description 5
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 5
- 239000000047 product Substances 0.000 description 5
- 238000011160 research Methods 0.000 description 5
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 5
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 5
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 5
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 5
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 5
- 125000004169 (C1-C6) alkyl group Chemical group 0.000 description 4
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 4
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 102000002038 Claudin-18 Human genes 0.000 description 4
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 description 4
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 description 4
- 241000699660 Mus musculus Species 0.000 description 4
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 4
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 4
- 150000001721 carbon Chemical group 0.000 description 4
- 238000013461 design Methods 0.000 description 4
- UQLDLKMNUJERMK-UHFFFAOYSA-L di(octadecanoyloxy)lead Chemical compound [Pb+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O UQLDLKMNUJERMK-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- 230000012202 endocytosis Effects 0.000 description 4
- 125000004404 heteroalkyl group Chemical group 0.000 description 4
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 4
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 4
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 4
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 4
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 4
- 239000012669 liquid formulation Substances 0.000 description 4
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 4
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 4
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 4
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 4
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 4
- 241000894007 species Species 0.000 description 4
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 4
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 4
- 239000008362 succinate buffer Substances 0.000 description 4
- KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-N succinic acid Chemical compound OC(=O)CCC(O)=O KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 4
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M Acetate Chemical compound CC([O-])=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 3
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 3
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N L-histidine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 3
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 3
- 101710096655 Probable acetoacetate decarboxylase 1 Proteins 0.000 description 3
- 101710096660 Probable acetoacetate decarboxylase 2 Proteins 0.000 description 3
- DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N Propylene glycol Chemical compound CC(O)CO DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229910020008 S(O) Inorganic materials 0.000 description 3
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 3
- 150000001335 aliphatic alkanes Chemical group 0.000 description 3
- 125000003282 alkyl amino group Chemical group 0.000 description 3
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 3
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 3
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 3
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 3
- 239000007979 citrate buffer Substances 0.000 description 3
- 239000000562 conjugate Substances 0.000 description 3
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 3
- 239000002254 cytotoxic agent Substances 0.000 description 3
- 229940127089 cytotoxic agent Drugs 0.000 description 3
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 3
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 3
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 3
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 3
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 3
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 3
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 3
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 3
- MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N fluorescein-5-isothiocyanate Chemical compound O1C(=O)C2=CC(N=C=S)=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000036541 health Effects 0.000 description 3
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 3
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 3
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 3
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 3
- 238000004020 luminiscence type Methods 0.000 description 3
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 3
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 3
- 125000001820 oxy group Chemical group [*:1]O[*:2] 0.000 description 3
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 3
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 3
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 3
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 3
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 3
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 3
- 230000008569 process Effects 0.000 description 3
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 3
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 3
- 235000020183 skimmed milk Nutrition 0.000 description 3
- VBGUQBPWJMPQBI-UHFFFAOYSA-M sodium;butanedioic acid;4-hydroxy-4-oxobutanoate Chemical compound [Na+].OC(=O)CCC(O)=O.OC(=O)CCC([O-])=O VBGUQBPWJMPQBI-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 210000004988 splenocyte Anatomy 0.000 description 3
- 125000000475 sulfinyl group Chemical group [*:2]S([*:1])=O 0.000 description 3
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 3
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 3
- 125000005918 1,2-dimethylbutyl group Chemical group 0.000 description 2
- OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 100676-05-9 Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OCC1C(O)C(O)C(O)C(OC2C(OC(O)C(O)C2O)CO)O1 OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000006176 2-ethylbutyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])C([H])(C([H])([H])*)C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 2
- 125000004493 2-methylbut-1-yl group Chemical group CC(C*)CC 0.000 description 2
- 125000005916 2-methylpentyl group Chemical group 0.000 description 2
- 125000003542 3-methylbutan-2-yl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])(*)C([H])(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 2
- 125000005917 3-methylpentyl group Chemical group 0.000 description 2
- UZOVYGYOLBIAJR-UHFFFAOYSA-N 4-isocyanato-4'-methyldiphenylmethane Chemical compound C1=CC(C)=CC=C1CC1=CC=C(N=C=O)C=C1 UZOVYGYOLBIAJR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102100035360 Cerebellar degeneration-related antigen 1 Human genes 0.000 description 2
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 108010047041 Complementarity Determining Regions Proteins 0.000 description 2
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 2
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 2
- 238000012286 ELISA Assay Methods 0.000 description 2
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 2
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010054477 Immunoglobulin Fab Fragments Proteins 0.000 description 2
- 102000001706 Immunoglobulin Fab Fragments Human genes 0.000 description 2
- 108010067060 Immunoglobulin Variable Region Proteins 0.000 description 2
- 102000017727 Immunoglobulin Variable Region Human genes 0.000 description 2
- GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N Maltose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)OC(O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N 0.000 description 2
- 101000797092 Mesorhizobium japonicum (strain LMG 29417 / CECT 9101 / MAFF 303099) Probable acetoacetate decarboxylase 3 Proteins 0.000 description 2
- 108091007491 NSP3 Papain-like protease domains Proteins 0.000 description 2
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 2
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 2
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 2
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 2
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 2
- 125000001931 aliphatic group Chemical group 0.000 description 2
- 150000003973 alkyl amines Chemical group 0.000 description 2
- 125000005119 alkyl cycloalkyl group Chemical group 0.000 description 2
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 2
- GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N beta-maltose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N 0.000 description 2
- 229960003237 betaine Drugs 0.000 description 2
- 239000013060 biological fluid Substances 0.000 description 2
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 2
- 230000022534 cell killing Effects 0.000 description 2
- 238000012054 celltiter-glo Methods 0.000 description 2
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 2
- 230000008859 change Effects 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- 229940044683 chemotherapy drug Drugs 0.000 description 2
- 125000001309 chloro group Chemical group Cl* 0.000 description 2
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 2
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 2
- 231100000599 cytotoxic agent Toxicity 0.000 description 2
- 239000002619 cytotoxin Substances 0.000 description 2
- 238000007405 data analysis Methods 0.000 description 2
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 2
- 150000001975 deuterium Chemical group 0.000 description 2
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 2
- 150000002016 disaccharides Chemical class 0.000 description 2
- SILCDLWESNHZKB-UHFFFAOYSA-L disodium 4-hydroxy-4-oxobutanoate Chemical compound [Na+].[Na+].OC(=O)CCC([O-])=O.OC(=O)CCC([O-])=O SILCDLWESNHZKB-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 238000006073 displacement reaction Methods 0.000 description 2
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 2
- 238000002296 dynamic light scattering Methods 0.000 description 2
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 2
- 125000001495 ethyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 2
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N ethylene glycol Natural products OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000011049 filling Methods 0.000 description 2
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 2
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 2
- 230000002496 gastric effect Effects 0.000 description 2
- KWIUHFFTVRNATP-UHFFFAOYSA-N glycine betaine Chemical compound C[N+](C)(C)CC([O-])=O KWIUHFFTVRNATP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000005843 halogen group Chemical group 0.000 description 2
- 206010073071 hepatocellular carcinoma Diseases 0.000 description 2
- 231100000844 hepatocellular carcinoma Toxicity 0.000 description 2
- 230000016784 immunoglobulin production Effects 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- QWXYZCJEXYQNEI-OSZHWHEXSA-N intermediate I Chemical compound COC(=O)[C@@]1(C=O)[C@H]2CC=[N+](C\C2=C\C)CCc2c1[nH]c1ccccc21 QWXYZCJEXYQNEI-OSZHWHEXSA-N 0.000 description 2
- 125000000959 isobutyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])(C([H])([H])[H])C([H])([H])* 0.000 description 2
- 125000004491 isohexyl group Chemical group C(CCC(C)C)* 0.000 description 2
- 125000001972 isopentyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])(C([H])([H])[H])C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 2
- 125000001449 isopropyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])(*)C([H])([H])[H] 0.000 description 2
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 2
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 2
- 108010082117 matrigel Proteins 0.000 description 2
- HEBKCHPVOIAQTA-UHFFFAOYSA-N meso ribitol Natural products OCC(O)C(O)C(O)CO HEBKCHPVOIAQTA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000000325 methylidene group Chemical group [H]C([H])=* 0.000 description 2
- 125000004108 n-butyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 2
- 125000001280 n-hexyl group Chemical group C(CCCCC)* 0.000 description 2
- 125000000740 n-pentyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 2
- 125000004123 n-propyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 2
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 2
- 125000001971 neopentyl group Chemical group [H]C([*])([H])C(C([H])([H])[H])(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 2
- 238000004806 packaging method and process Methods 0.000 description 2
- 125000003538 pentan-3-yl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])C([H])(*)C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 2
- 238000012510 peptide mapping method Methods 0.000 description 2
- 125000001997 phenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(*)C([H])=C1[H] 0.000 description 2
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 2
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 2
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 2
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 2
- 229940002612 prodrug Drugs 0.000 description 2
- 239000000651 prodrug Substances 0.000 description 2
- 239000008213 purified water Substances 0.000 description 2
- RXWNCPJZOCPEPQ-NVWDDTSBSA-N puromycin Chemical compound C1=CC(OC)=CC=C1C[C@H](N)C(=O)N[C@H]1[C@@H](O)[C@H](N2C3=NC=NC(=C3N=C2)N(C)C)O[C@@H]1CO RXWNCPJZOCPEPQ-NVWDDTSBSA-N 0.000 description 2
- 238000003259 recombinant expression Methods 0.000 description 2
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 2
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 2
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 2
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 2
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 2
- BHZOKUMUHVTPBX-UHFFFAOYSA-M sodium acetic acid acetate Chemical compound [Na+].CC(O)=O.CC([O-])=O BHZOKUMUHVTPBX-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 229940074404 sodium succinate Drugs 0.000 description 2
- ZDQYSKICYIVCPN-UHFFFAOYSA-L sodium succinate (anhydrous) Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C(=O)CCC([O-])=O ZDQYSKICYIVCPN-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 2
- 229960002920 sorbitol Drugs 0.000 description 2
- 235000010356 sorbitol Nutrition 0.000 description 2
- 125000003003 spiro group Chemical group 0.000 description 2
- KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-L succinate(2-) Chemical compound [O-]C(=O)CCC([O-])=O KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 239000001384 succinic acid Substances 0.000 description 2
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 2
- 229910052717 sulfur Inorganic materials 0.000 description 2
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 2
- 125000000999 tert-butyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(*)(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 2
- 125000001973 tert-pentyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])C(*)(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 2
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 2
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 2
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 2
- 108700012359 toxins Proteins 0.000 description 2
- XPFJYKARVSSRHE-UHFFFAOYSA-K trisodium;2-hydroxypropane-1,2,3-tricarboxylate;2-hydroxypropane-1,2,3-tricarboxylic acid Chemical group [Na+].[Na+].[Na+].OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O.[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O XPFJYKARVSSRHE-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- LEAHFJQFYSDGGP-UHFFFAOYSA-K trisodium;dihydrogen phosphate;hydrogen phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].OP(O)([O-])=O.OP([O-])([O-])=O LEAHFJQFYSDGGP-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 238000000870 ultraviolet spectroscopy Methods 0.000 description 2
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- QZNNVYOVQUKYSC-JEDNCBNOSA-N (2s)-2-amino-3-(1h-imidazol-5-yl)propanoic acid;hydron;chloride Chemical compound Cl.OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 QZNNVYOVQUKYSC-JEDNCBNOSA-N 0.000 description 1
- 125000003660 2,3-dimethylpentyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])C([H])(C([H])([H])[H])C([H])(C([H])([H])[H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 125000003764 2,4-dimethylpentyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])(C([H])([H])[H])C([H])([H])C([H])(C([H])([H])[H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- VZSRBBMJRBPUNF-UHFFFAOYSA-N 2-(2,3-dihydro-1H-inden-2-ylamino)-N-[3-oxo-3-(2,4,6,7-tetrahydrotriazolo[4,5-c]pyridin-5-yl)propyl]pyrimidine-5-carboxamide Chemical compound C1C(CC2=CC=CC=C12)NC1=NC=C(C=N1)C(=O)NCCC(N1CC2=C(CC1)NN=N2)=O VZSRBBMJRBPUNF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PTUJJIPXBJJLLV-UHFFFAOYSA-N 2-[[2-[[2-[[2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]acetyl]amino]acetyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]acetic acid Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)NCC(=O)NCC(=O)NC(C(=O)NCC(O)=O)CC1=CC=CC=C1 PTUJJIPXBJJLLV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KKMIHKCGXQMFEU-UHFFFAOYSA-N 2-[dimethyl(tetradecyl)azaniumyl]acetate Chemical compound CCCCCCCCCCCCCC[N+](C)(C)CC([O-])=O KKMIHKCGXQMFEU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DIHXSRXTECMMJY-MURFETPASA-N 2-[dimethyl-[(9z,12z)-octadeca-9,12-dienyl]azaniumyl]acetate Chemical compound CCCCC\C=C/C\C=C/CCCCCCCC[N+](C)(C)CC([O-])=O DIHXSRXTECMMJY-MURFETPASA-N 0.000 description 1
- TYIOVYZMKITKRO-UHFFFAOYSA-N 2-[hexadecyl(dimethyl)azaniumyl]acetate Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC[N+](C)(C)CC([O-])=O TYIOVYZMKITKRO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SNQVCAOGQHOSEN-UHFFFAOYSA-N 2-[methyl(octadecyl)amino]acetic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCCN(C)CC(O)=O SNQVCAOGQHOSEN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QFJVDSDGRBUNKZ-UHFFFAOYSA-N 2-[methyl(tetradecyl)azaniumyl]acetate Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCN(C)CC(O)=O QFJVDSDGRBUNKZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SCVJRXQHFJXZFZ-KVQBGUIXSA-N 2-amino-9-[(2r,4s,5r)-4-hydroxy-5-(hydroxymethyl)oxolan-2-yl]-3h-purine-6-thione Chemical compound C1=2NC(N)=NC(=S)C=2N=CN1[C@H]1C[C@H](O)[C@@H](CO)O1 SCVJRXQHFJXZFZ-KVQBGUIXSA-N 0.000 description 1
- 125000003229 2-methylhexyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(C([H])([H])[H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 125000003903 2-propenyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])=C([H])[H] 0.000 description 1
- 125000004336 3,3-dimethylpentyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])C(C([H])([H])[H])(C([H])([H])[H])C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- YLZOPXRUQYQQID-UHFFFAOYSA-N 3-(2,4,6,7-tetrahydrotriazolo[4,5-c]pyridin-5-yl)-1-[4-[2-[[3-(trifluoromethoxy)phenyl]methylamino]pyrimidin-5-yl]piperazin-1-yl]propan-1-one Chemical compound N1N=NC=2CN(CCC=21)CCC(=O)N1CCN(CC1)C=1C=NC(=NC=1)NCC1=CC(=CC=C1)OC(F)(F)F YLZOPXRUQYQQID-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DIROHOMJLWMERM-UHFFFAOYSA-N 3-[dimethyl(octadecyl)azaniumyl]propane-1-sulfonate Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC[N+](C)(C)CCCS([O-])(=O)=O DIROHOMJLWMERM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000004337 3-ethylpentyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])C([H])(C([H])([H])C([H])([H])[H])C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 125000003469 3-methylhexyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(C([H])([H])[H])C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 1
- PVXPPJIGRGXGCY-TZLCEDOOSA-N 6-O-alpha-D-glucopyranosyl-D-fructofuranose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1OC[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)C(O)(CO)O1 PVXPPJIGRGXGCY-TZLCEDOOSA-N 0.000 description 1
- DEXFNLNNUZKHNO-UHFFFAOYSA-N 6-[3-[4-[2-(2,3-dihydro-1H-inden-2-ylamino)pyrimidin-5-yl]piperidin-1-yl]-3-oxopropyl]-3H-1,3-benzoxazol-2-one Chemical compound C1C(CC2=CC=CC=C12)NC1=NC=C(C=N1)C1CCN(CC1)C(CCC1=CC2=C(NC(O2)=O)C=C1)=O DEXFNLNNUZKHNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 7553-56-2 Chemical compound [I] ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012103 Alexa Fluor 488 Substances 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 1
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-M Aminoacetate Chemical compound NCC([O-])=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- WKBOTKDWSSQWDR-UHFFFAOYSA-N Bromine atom Chemical compound [Br] WKBOTKDWSSQWDR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- ZAMOUSCENKQFHK-UHFFFAOYSA-N Chlorine atom Chemical compound [Cl] ZAMOUSCENKQFHK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100040835 Claudin-18 Human genes 0.000 description 1
- 101710112752 Cytotoxin Proteins 0.000 description 1
- HEBKCHPVOIAQTA-QWWZWVQMSA-N D-arabinitol Chemical compound OC[C@@H](O)C(O)[C@H](O)CO HEBKCHPVOIAQTA-QWWZWVQMSA-N 0.000 description 1
- RGHNJXZEOKUKBD-SQOUGZDYSA-M D-gluconate Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C([O-])=O RGHNJXZEOKUKBD-SQOUGZDYSA-M 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N D-mannopyranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N 0.000 description 1
- QWIZNVHXZXRPDR-UHFFFAOYSA-N D-melezitose Natural products O1C(CO)C(O)C(O)C(O)C1OC1C(O)C(CO)OC1(CO)OC1OC(CO)C(O)C(O)C1O QWIZNVHXZXRPDR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 1
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 1
- FEWJPZIEWOKRBE-JCYAYHJZSA-N Dextrotartaric acid Chemical compound OC(=O)[C@H](O)[C@@H](O)C(O)=O FEWJPZIEWOKRBE-JCYAYHJZSA-N 0.000 description 1
- BWGNESOTFCXPMA-UHFFFAOYSA-N Dihydrogen disulfide Chemical compound SS BWGNESOTFCXPMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004386 Erythritol Substances 0.000 description 1
- UNXHWFMMPAWVPI-UHFFFAOYSA-N Erythritol Natural products OCC(O)C(O)CO UNXHWFMMPAWVPI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VGGSQFUCUMXWEO-UHFFFAOYSA-N Ethene Chemical compound C=C VGGSQFUCUMXWEO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PXGOKWXKJXAPGV-UHFFFAOYSA-N Fluorine Chemical compound FF PXGOKWXKJXAPGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000005033 Fourier transform infrared spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 229930091371 Fructose Natural products 0.000 description 1
- 239000005715 Fructose Substances 0.000 description 1
- RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N Fructose Chemical compound OC[C@H]1O[C@](O)(CO)[C@@H](O)[C@@H]1O RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N 0.000 description 1
- VZCYOOQTPOCHFL-OWOJBTEDSA-N Fumaric acid Chemical compound OC(=O)\C=C\C(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-OWOJBTEDSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101000749329 Homo sapiens Claudin-18 Proteins 0.000 description 1
- 101000878605 Homo sapiens Low affinity immunoglobulin epsilon Fc receptor Proteins 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- 102000006496 Immunoglobulin Heavy Chains Human genes 0.000 description 1
- 108010019476 Immunoglobulin Heavy Chains Proteins 0.000 description 1
- 102100034343 Integrase Human genes 0.000 description 1
- 238000001265 Jonckheere trend test Methods 0.000 description 1
- 238000012313 Kruskal-Wallis test Methods 0.000 description 1
- RHGKLRLOHDJJDR-BYPYZUCNSA-N L-citrulline Chemical compound NC(=O)NCCC[C@H]([NH3+])C([O-])=O RHGKLRLOHDJJDR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-M Lactate Chemical compound CC(O)C([O-])=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- 102100038007 Low affinity immunoglobulin epsilon Fc receptor Human genes 0.000 description 1
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 1
- NBGXQZRRLOGAJF-UHFFFAOYSA-N Maltulose Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(O)C(O)(CO)OCC1O NBGXQZRRLOGAJF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AFCARXCZXQIEQB-UHFFFAOYSA-N N-[3-oxo-3-(2,4,6,7-tetrahydrotriazolo[4,5-c]pyridin-5-yl)propyl]-2-[[3-(trifluoromethoxy)phenyl]methylamino]pyrimidine-5-carboxamide Chemical compound O=C(CCNC(=O)C=1C=NC(=NC=1)NCC1=CC(=CC=C1)OC(F)(F)F)N1CC2=C(CC1)NN=N2 AFCARXCZXQIEQB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RHGKLRLOHDJJDR-UHFFFAOYSA-N Ndelta-carbamoyl-DL-ornithine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=O RHGKLRLOHDJJDR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MUBZPKHOEPUJKR-UHFFFAOYSA-N Oxalic acid Chemical compound OC(=O)C(O)=O MUBZPKHOEPUJKR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229930040373 Paraformaldehyde Natural products 0.000 description 1
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 1
- BELBBZDIHDAJOR-UHFFFAOYSA-N Phenolsulfonephthalein Chemical compound C1=CC(O)=CC=C1C1(C=2C=CC(O)=CC=2)C2=CC=CC=C2S(=O)(=O)O1 BELBBZDIHDAJOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- 108010029485 Protein Isoforms Proteins 0.000 description 1
- 102000001708 Protein Isoforms Human genes 0.000 description 1
- 108010092799 RNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 1
- MUPFEKGTMRGPLJ-RMMQSMQOSA-N Raffinose Natural products O(C[C@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O[C@@]2(CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O2)O1)[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 MUPFEKGTMRGPLJ-RMMQSMQOSA-N 0.000 description 1
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 1
- 102100037486 Reverse transcriptase/ribonuclease H Human genes 0.000 description 1
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 1
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UQZIYBXSHAGNOE-USOSMYMVSA-N Stachyose Natural products O(C[C@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O[C@@]2(CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O2)O1)[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO[C@@H]2[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O2)O1 UQZIYBXSHAGNOE-USOSMYMVSA-N 0.000 description 1
- 238000000692 Student's t-test Methods 0.000 description 1
- NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N Sulfur Chemical compound [S] NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 244000299461 Theobroma cacao Species 0.000 description 1
- 235000009470 Theobroma cacao Nutrition 0.000 description 1
- 102000000591 Tight Junction Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010002321 Tight Junction Proteins Proteins 0.000 description 1
- 241000711955 Turkey rhinotracheitis virus Species 0.000 description 1
- MUPFEKGTMRGPLJ-UHFFFAOYSA-N UNPD196149 Natural products OC1C(O)C(CO)OC1(CO)OC1C(O)C(O)C(O)C(COC2C(C(O)C(O)C(CO)O2)O)O1 MUPFEKGTMRGPLJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Natural products CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100038968 WAP four-disulfide core domain protein 1 Human genes 0.000 description 1
- 238000001793 Wilcoxon signed-rank test Methods 0.000 description 1
- TVXBFESIOXBWNM-UHFFFAOYSA-N Xylitol Natural products OCCC(O)C(O)C(O)CCO TVXBFESIOXBWNM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BHATUINFZWUDIX-UHFFFAOYSA-N Zwittergent 3-14 Chemical compound CCCCCCCCCCCCCC[N+](C)(C)CCCS([O-])(=O)=O BHATUINFZWUDIX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CHKFLBOLYREYDO-SHYZEUOFSA-N [[(2s,4r,5r)-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)-4-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl] phosphono hydrogen phosphate Chemical compound O=C1N=C(N)C=CN1[C@H]1[C@H](O)C[C@@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(O)=O)O1 CHKFLBOLYREYDO-SHYZEUOFSA-N 0.000 description 1
- 125000002777 acetyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(*)=O 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 1
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 1
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 1
- 125000006242 amine protecting group Chemical group 0.000 description 1
- 230000003698 anagen phase Effects 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 1
- 229940041181 antineoplastic drug Drugs 0.000 description 1
- 238000000149 argon plasma sintering Methods 0.000 description 1
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 1
- 150000001510 aspartic acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 125000001797 benzyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 238000013357 binding ELISA Methods 0.000 description 1
- 238000012925 biological evaluation Methods 0.000 description 1
- 239000012496 blank sample Substances 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 1
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 1
- GDTBXPJZTBHREO-UHFFFAOYSA-N bromine Substances BrBr GDTBXPJZTBHREO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052794 bromium Inorganic materials 0.000 description 1
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 1
- VSGNNIFQASZAOI-UHFFFAOYSA-L calcium acetate Chemical compound [Ca+2].CC([O-])=O.CC([O-])=O VSGNNIFQASZAOI-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- QIIZPUIPFGEZFO-UHFFFAOYSA-L calcium;4-hydroxy-4-oxobutanoate Chemical compound [Ca+2].OC(=O)CCC([O-])=O.OC(=O)CCC([O-])=O QIIZPUIPFGEZFO-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 238000013368 capillary electrophoresis sodium dodecyl sulfate analysis Methods 0.000 description 1
- 238000001818 capillary gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 238000000533 capillary isoelectric focusing Methods 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 238000005277 cation exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 125000002091 cationic group Chemical group 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 238000003570 cell viability assay Methods 0.000 description 1
- 210000004978 chinese hamster ovary cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000000460 chlorine Substances 0.000 description 1
- 229910052801 chlorine Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000003593 chromogenic compound Substances 0.000 description 1
- 235000013477 citrulline Nutrition 0.000 description 1
- 229960002173 citrulline Drugs 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 108091036078 conserved sequence Proteins 0.000 description 1
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 230000001276 controlling effect Effects 0.000 description 1
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 description 1
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 1
- 150000001924 cycloalkanes Chemical class 0.000 description 1
- 125000001995 cyclobutyl group Chemical group [H]C1([H])C([H])([H])C([H])(*)C1([H])[H] 0.000 description 1
- 125000000582 cycloheptyl group Chemical group [H]C1([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(*)C([H])([H])C1([H])[H] 0.000 description 1
- 125000003678 cyclohexadienyl group Chemical group C1(=CC=CCC1)* 0.000 description 1
- 125000000596 cyclohexenyl group Chemical group C1(=CCCCC1)* 0.000 description 1
- 125000000113 cyclohexyl group Chemical group [H]C1([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(*)C([H])([H])C1([H])[H] 0.000 description 1
- 125000002433 cyclopentenyl group Chemical group C1(=CCCC1)* 0.000 description 1
- 125000001511 cyclopentyl group Chemical group [H]C1([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(*)C1([H])[H] 0.000 description 1
- 125000001559 cyclopropyl group Chemical group [H]C1([H])C([H])([H])C1([H])* 0.000 description 1
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 1
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000006240 deamidation Effects 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 1
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 1
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 description 1
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 239000000032 diagnostic agent Substances 0.000 description 1
- 229940039227 diagnostic agent Drugs 0.000 description 1
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 1
- 239000012470 diluted sample Substances 0.000 description 1
- CBMPTFJVXNIWHP-UHFFFAOYSA-L disodium;hydrogen phosphate;2-hydroxypropane-1,2,3-tricarboxylic acid Chemical compound [Na+].[Na+].OP([O-])([O-])=O.OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O CBMPTFJVXNIWHP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 1
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 1
- NGPZJQXXJCDBDS-UHFFFAOYSA-N dodecane-1-sulfonic acid;sodium Chemical compound [Na].CCCCCCCCCCCCS(O)(=O)=O NGPZJQXXJCDBDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000005611 electricity Effects 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 239000012149 elution buffer Substances 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- UNXHWFMMPAWVPI-ZXZARUISSA-N erythritol Chemical compound OC[C@H](O)[C@H](O)CO UNXHWFMMPAWVPI-ZXZARUISSA-N 0.000 description 1
- 235000019414 erythritol Nutrition 0.000 description 1
- 229940009714 erythritol Drugs 0.000 description 1
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 1
- 238000001506 fluorescence spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 239000011737 fluorine Substances 0.000 description 1
- 229910052731 fluorine Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019256 formaldehyde Nutrition 0.000 description 1
- 239000012537 formulation buffer Substances 0.000 description 1
- 239000013022 formulation composition Substances 0.000 description 1
- 125000002541 furyl group Chemical group 0.000 description 1
- 229940050410 gluconate Drugs 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 1
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 1
- 229930182470 glycoside Natural products 0.000 description 1
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 description 1
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 description 1
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000010931 gold Substances 0.000 description 1
- 229910052737 gold Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- ALBYIUDWACNRRB-UHFFFAOYSA-N hexanamide Chemical compound CCCCCC(N)=O ALBYIUDWACNRRB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000012907 honey Nutrition 0.000 description 1
- 150000007857 hydrazones Chemical class 0.000 description 1
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 125000002883 imidazolyl group Chemical group 0.000 description 1
- 210000002865 immune cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 1
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 1
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 1
- 239000011630 iodine Substances 0.000 description 1
- 229910052740 iodine Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000005342 ion exchange Methods 0.000 description 1
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- FZWBNHMXJMCXLU-BLAUPYHCSA-N isomaltotriose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1OC[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C=O)O1 FZWBNHMXJMCXLU-BLAUPYHCSA-N 0.000 description 1
- 238000006317 isomerization reaction Methods 0.000 description 1
- 230000002147 killing effect Effects 0.000 description 1
- 239000000832 lactitol Substances 0.000 description 1
- 235000010448 lactitol Nutrition 0.000 description 1
- VQHSOMBJVWLPSR-JVCRWLNRSA-N lactitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]([C@H](O)CO)O[C@@H]1O[C@H](CO)[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O VQHSOMBJVWLPSR-JVCRWLNRSA-N 0.000 description 1
- 229960003451 lactitol Drugs 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- JCQLYHFGKNRPGE-FCVZTGTOSA-N lactulose Chemical compound OC[C@H]1O[C@](O)(CO)[C@@H](O)[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 JCQLYHFGKNRPGE-FCVZTGTOSA-N 0.000 description 1
- 229960000511 lactulose Drugs 0.000 description 1
- PFCRQPBOOFTZGQ-UHFFFAOYSA-N lactulose keto form Natural products OCC(=O)C(O)C(C(O)CO)OC1OC(CO)C(O)C(O)C1O PFCRQPBOOFTZGQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IZWSFJTYBVKZNK-UHFFFAOYSA-N lauryl sulfobetaine Chemical compound CCCCCCCCCCCC[N+](C)(C)CCCS([O-])(=O)=O IZWSFJTYBVKZNK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004973 liquid crystal related substance Substances 0.000 description 1
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000008176 lyophilized powder Substances 0.000 description 1
- 235000018977 lysine Nutrition 0.000 description 1
- 125000003588 lysine group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 1
- UEGPKNKPLBYCNK-UHFFFAOYSA-L magnesium acetate Chemical compound [Mg+2].CC([O-])=O.CC([O-])=O UEGPKNKPLBYCNK-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- JTZOLXFFEVQYRD-UHFFFAOYSA-L magnesium hydron 2-hydroxypropane-1,2,3-tricarboxylate Chemical compound [H+].[H+].[H+].[H+].[Mg++].OC(CC([O-])=O)(CC([O-])=O)C([O-])=O.OC(CC([O-])=O)(CC([O-])=O)C([O-])=O JTZOLXFFEVQYRD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000000845 maltitol Substances 0.000 description 1
- 235000010449 maltitol Nutrition 0.000 description 1
- VQHSOMBJVWLPSR-WUJBLJFYSA-N maltitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]([C@H](O)CO)O[C@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O VQHSOMBJVWLPSR-WUJBLJFYSA-N 0.000 description 1
- 229940035436 maltitol Drugs 0.000 description 1
- JCQLYHFGKNRPGE-HFZVAGMNSA-N maltulose Chemical compound OC[C@H]1O[C@](O)(CO)[C@@H](O)[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 JCQLYHFGKNRPGE-HFZVAGMNSA-N 0.000 description 1
- 238000000816 matrix-assisted laser desorption--ionisation Methods 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- QWIZNVHXZXRPDR-WSCXOGSTSA-N melezitose Chemical compound O([C@@]1(O[C@@H]([C@H]([C@@H]1O[C@@H]1[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1)O)O)CO)CO)[C@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O QWIZNVHXZXRPDR-WSCXOGSTSA-N 0.000 description 1
- 239000000693 micelle Substances 0.000 description 1
- 239000004530 micro-emulsion Substances 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 239000002808 molecular sieve Substances 0.000 description 1
- OWFJMGQSOHDIPP-UHFFFAOYSA-L monocalcium citrate Chemical compound [Ca+2].OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC([O-])=O.OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC([O-])=O OWFJMGQSOHDIPP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 150000002772 monosaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 125000002757 morpholinyl group Chemical group 0.000 description 1
- 210000000066 myeloid cell Anatomy 0.000 description 1
- IFYDWYVPVAMGRO-UHFFFAOYSA-N n-[3-(dimethylamino)propyl]tetradecanamide Chemical compound CCCCCCCCCCCCCC(=O)NCCCN(C)C IFYDWYVPVAMGRO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000003136 n-heptyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 125000001624 naphthyl group Chemical group 0.000 description 1
- 201000011519 neuroendocrine tumor Diseases 0.000 description 1
- 125000001117 oleyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])/C([H])=C([H])\C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 238000012803 optimization experiment Methods 0.000 description 1
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 description 1
- 238000013495 osmolality determination method Methods 0.000 description 1
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 1
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 1
- 229920002866 paraformaldehyde Polymers 0.000 description 1
- 230000035699 permeability Effects 0.000 description 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 1
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 description 1
- 229960003531 phenolsulfonphthalein Drugs 0.000 description 1
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000004193 piperazinyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000003386 piperidinyl group Chemical group 0.000 description 1
- 229920001451 polypropylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 1
- 229940068965 polysorbates Drugs 0.000 description 1
- UUEIAEHLBMETSI-UHFFFAOYSA-M potassium butanedioic acid 4-hydroxy-4-oxobutanoate Chemical compound C(CCC(=O)O)(=O)[O-].C(CCC(=O)O)(=O)O.[K+] UUEIAEHLBMETSI-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- ALVOEUTXKIPYGD-UHFFFAOYSA-M potassium;3-carboxy-3,5-dihydroxy-5-oxopentanoate;2-hydroxypropane-1,2,3-tricarboxylic acid Chemical compound [K+].OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O.OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC([O-])=O ALVOEUTXKIPYGD-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- FHUOTRMCFQTSOA-UHFFFAOYSA-M potassium;acetic acid;acetate Chemical compound [K+].CC(O)=O.CC([O-])=O FHUOTRMCFQTSOA-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- BUCIWTBCUUHRHZ-UHFFFAOYSA-K potassium;disodium;dihydrogen phosphate;hydrogen phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].[K+].OP(O)([O-])=O.OP([O-])([O-])=O BUCIWTBCUUHRHZ-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 230000003449 preventive effect Effects 0.000 description 1
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 1
- 235000019833 protease Nutrition 0.000 description 1
- 235000019419 proteases Nutrition 0.000 description 1
- 125000006239 protecting group Chemical group 0.000 description 1
- 230000005180 public health Effects 0.000 description 1
- 229950010131 puromycin Drugs 0.000 description 1
- 125000003373 pyrazinyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000004076 pyridyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000000714 pyrimidinyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000000719 pyrrolidinyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000000168 pyrrolyl group Chemical group 0.000 description 1
- MUPFEKGTMRGPLJ-ZQSKZDJDSA-N raffinose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO[C@@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O2)O)O1 MUPFEKGTMRGPLJ-ZQSKZDJDSA-N 0.000 description 1
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 1
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 description 1
- 238000010188 recombinant method Methods 0.000 description 1
- 238000005215 recombination Methods 0.000 description 1
- 230000006798 recombination Effects 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 239000013557 residual solvent Substances 0.000 description 1
- 238000010839 reverse transcription Methods 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- 102220091150 rs149125238 Human genes 0.000 description 1
- 239000012488 sample solution Substances 0.000 description 1
- 229940043230 sarcosine Drugs 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 125000002914 sec-butyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])C([H])(*)C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 235000004400 serine Nutrition 0.000 description 1
- 239000012679 serum free medium Substances 0.000 description 1
- 230000001568 sexual effect Effects 0.000 description 1
- 238000003998 size exclusion chromatography high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000005549 size reduction Methods 0.000 description 1
- 229940126586 small molecule drug Drugs 0.000 description 1
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 description 1
- URGAHOPLAPQHLN-UHFFFAOYSA-N sodium aluminosilicate Chemical compound [Na+].[Al+3].[O-][Si]([O-])=O.[O-][Si]([O-])=O URGAHOPLAPQHLN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 239000012475 sodium chloride buffer Substances 0.000 description 1
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 229940104256 sodium taurate Drugs 0.000 description 1
- GWLWWNLFFNJPDP-UHFFFAOYSA-M sodium;2-aminoethanesulfonate Chemical compound [Na+].NCCS([O-])(=O)=O GWLWWNLFFNJPDP-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- OESFSXYRSCBAQJ-UHFFFAOYSA-M sodium;3-carboxy-3,5-dihydroxy-5-oxopentanoate;2-hydroxypropane-1,2,3-tricarboxylic acid Chemical compound [Na+].OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O.OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC([O-])=O OESFSXYRSCBAQJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- DAJSVUQLFFJUSX-UHFFFAOYSA-M sodium;dodecane-1-sulfonate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCS([O-])(=O)=O DAJSVUQLFFJUSX-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 125000006850 spacer group Chemical group 0.000 description 1
- 238000004611 spectroscopical analysis Methods 0.000 description 1
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 1
- UQZIYBXSHAGNOE-XNSRJBNMSA-N stachyose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO[C@@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO[C@@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O3)O)O2)O)O1 UQZIYBXSHAGNOE-XNSRJBNMSA-N 0.000 description 1
- 238000000528 statistical test Methods 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 150000005846 sugar alcohols Chemical class 0.000 description 1
- 229940117986 sulfobetaine Drugs 0.000 description 1
- 239000011593 sulfur Substances 0.000 description 1
- 239000013589 supplement Substances 0.000 description 1
- 229940095064 tartrate Drugs 0.000 description 1
- 125000005931 tert-butyloxycarbonyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(OC(*)=O)(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 125000003831 tetrazolyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000001544 thienyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000003396 thiol group Chemical group [H]S* 0.000 description 1
- 125000004568 thiomorpholinyl group Chemical group 0.000 description 1
- VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N trans-butenedioic acid Natural products OC(=O)C=CC(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012096 transfection reagent Substances 0.000 description 1
- 150000004043 trisaccharides Chemical class 0.000 description 1
- GPRLSGONYQIRFK-MNYXATJNSA-N triton Chemical compound [3H+] GPRLSGONYQIRFK-MNYXATJNSA-N 0.000 description 1
- 238000005199 ultracentrifugation Methods 0.000 description 1
- 238000009777 vacuum freeze-drying Methods 0.000 description 1
- 235000014393 valine Nutrition 0.000 description 1
- 239000004474 valine Substances 0.000 description 1
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 1
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 1
- 230000000007 visual effect Effects 0.000 description 1
- 238000011179 visual inspection Methods 0.000 description 1
- 239000003643 water by type Substances 0.000 description 1
- 239000000811 xylitol Substances 0.000 description 1
- 235000010447 xylitol Nutrition 0.000 description 1
- HEBKCHPVOIAQTA-SCDXWVJYSA-N xylitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO HEBKCHPVOIAQTA-SCDXWVJYSA-N 0.000 description 1
- 229960002675 xylitol Drugs 0.000 description 1
- 229950007157 zolbetuximab Drugs 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
- A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
- A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
- A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
- A61K31/4353—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems
- A61K31/4375—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems the heterocyclic ring system containing a six-membered ring having nitrogen as a ring heteroatom, e.g. quinolizines, naphthyridines, berberine, vincamine
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
- A61K47/26—Carbohydrates, e.g. sugar alcohols, amino sugars, nucleic acids, mono-, di- or oligo-saccharides; Derivatives thereof, e.g. polysorbates, sorbitan fatty acid esters or glycyrrhizin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
- A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
- A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
- A61K47/68037—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates the drug being a camptothecin [CPT] or derivatives
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
- A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
- A61K47/6849—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a receptor, a cell surface antigen or a cell surface determinant
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
- A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
- A61K47/6851—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell
- A61K47/6859—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell the tumour determinant being from liver or pancreas cancer cell
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/14—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles
- A61K9/19—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles lyophilised, i.e. freeze-dried, solutions or dispersions
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/30—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
- C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
- C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
- C07K2317/732—Antibody-dependent cellular cytotoxicity [ADCC]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
- C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
- C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
Abstract
本披露關於一種含抗體藥物偶聯物的醫藥組成物及其用途。具體而言,本披露關於一種醫藥組成物,其包含抗密蛋白抗體藥物偶聯物。
Description
本申請要求2020年09月30日提交的中國專利申請(202011061863.1)和2021年09月13日提交的中國專利申請(CN202111069020.0)的優先權。
本披露屬於藥物製劑領域,具體關於一種包含抗體藥物偶聯物的醫藥組成物,以及其作為抗癌藥物的用途。
這裡的陳述僅提供與本披露有關的背景信息,而不必然地構成現有技術。
密蛋白18(Claudin-18,CLDN18)是一種在人類中由Claudin18基因編碼的蛋白質,屬於細胞緊密連接蛋白家族,可以控制層細胞之間的分子流動。Claudin蛋白結構中包括四個跨膜區域、兩個細胞外環(其N末端和C末端在胞漿內)。
Claudin-18具有兩個剪接變體,分別為Claudin 18.1和Claudin 18.2,兩者序列之間僅在第一個細胞外環有八個胺基酸的差異。Claudin 18.1和Claudin 18.2的表達分佈有所不同,Claudin 18.1在正常肺的細胞中選擇性表達,
Claudin 18.2在正常細胞中表達高度受限,但在多種腫瘤(胃癌、肺癌和胰腺癌等)中頻繁異位激活和過表達。Claudin18.2被認為是胃癌和其他癌症類型的潛在治療靶點,此靶點的發現也為胃癌的治療提供了一種新的選擇。
抗體藥物偶聯物(antibody drug conjugate,ADC)將單株抗體或者抗體片段藉由穩定的化學接頭化合物與具有生物活性的細胞毒素相連,充分利用了抗體對正常細胞和腫瘤細胞表面抗原結合的特異性和細胞毒性物質的高效性,同時又避免了前者療效偏低和後者毒副作用過大等缺陷。這也就意味著,與以往傳統的化療藥物相比,抗體藥物偶聯物能更精準地結合腫瘤細胞並降低將對正常細胞的影響。
目前已有靶向Claudin18.2的抗體及ADC藥物的專利報導,如WO2016166122和WO2016165762。
由於ADC具有比抗體更複雜的異質結構,因此,對用於治療目的ADC製劑提出了更大的挑戰。
本披露涉及含抗Claudin18.2抗體藥物偶聯物的藥物製劑及其用途。該製劑具有穩定性好,凍乾形態好等優勢。
本披露提供一種醫藥組成物,其包含抗Claudin18.2抗體藥物偶聯物和緩沖劑,其中該抗Claudin18.2抗體藥物偶聯物中的抗Claudin18.2抗體包含重鏈可變區和輕鏈可變區,其中,
i)該重鏈可變區與如SEQ ID NO:5所示的重鏈可變區具有相同胺基酸序列的HCDR1、HCDR2和HCDR3,該輕鏈可變區包含與如SEQ ID NO:6所示的輕鏈可變區具有相同胺基酸序列的LCDR1、LCDR2和LCDR3;或
ii)該重鏈可變區與如SEQ ID NO:3所示的重鏈可變區具有相同胺基酸序列的HCDR1、HCDR2和HCDR3,該輕鏈可變區與如SEQ ID NO:4所示的輕鏈可變區具有相同胺基酸序列的LCDR1、LCDR2和LCDR3;
該緩衝劑是組胺酸鹽緩衝劑。
在一些實施方案中,如上任一項所述的醫藥組成物,其中該緩衝劑為組胺酸-醋酸鹽緩衝劑。
在一些實施方案中,如上任一項所述的醫藥組成物,其中該抗Claudin18.2抗體包含重鏈可變區和輕鏈可變區,其中,
iii)該重鏈可變區包含分別如SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:16和SEQ ID NO:17所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3,該輕鏈可變區包含分別如SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:19和SEQ ID NO:20所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3;或
iv)該重鏈可變區包含分別如SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:10和SEQ ID NO:11所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3,該輕鏈可變區包含分別如SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:13和SEQ ID NO:14所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3。
在一些實施方案中,如上任一項所述的醫藥組成物,其中該抗Claudin18.2抗體是鼠源抗體、嵌合抗體或人源化抗體。
在一些實施方案中,如上任一項所述的藥醫藥組成物,其中該抗Claudin18.2抗體包含重鏈可變區和輕鏈可變區,其中,包含重鏈可變區和輕鏈可變區,其中,
(1)該重鏈可變區胺基酸序列如SEQ ID NO:3所示或與其有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%的同一性,和該輕鏈可變區胺基酸序列如SEQ ID NO:4所示或與其有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%的同一性;
(2)該重鏈可變區胺基酸序列如SEQ ID NO:24所示或與其有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%的同一性,和該輕鏈可變區胺基酸序列如SEQ ID NO:21所示或與其有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%的同一性;
(3)該重鏈可變區胺基酸序列如SEQ ID NO:5所示或與其有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%的同一性,和該輕鏈可變區胺基酸序列如SEQ ID NO:6所示或與其有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%的同一性;或
(4)該重鏈可變區胺基酸序列如SEQ ID NO:31所示或與其有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%的同一性,和該輕鏈可變區胺基酸序列如SEQ ID NO:28所示或與其有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%的同一性。
在一些實施方案中,如上任一項所述的醫藥組成物,其中該抗Claudin18.2抗體為人源化抗體,該人源化抗體包含來源自人抗體的框架區或其
框架區變體,該框架區變體為在人抗體的輕鏈框架區和/或重鏈框架區上分別具有至多10個胺基酸的回復突變。
在一些實施方案中,如上任一項所述的醫藥組成物,其中該框架區變體包含選自以下(a)或(b)所述的突變:
(a)該輕鏈可變區中包含任選自22S、85I和87H中的一個或更多個胺基酸回復突變,和/或該重鏈可變區中包含任選自48I、82T和69M中的一個或更多個胺基酸回復突變;或
(b)該輕鏈可變區中包含選自任選自4L或22S中的一個或更多個胺基酸回復突變,和/或該重鏈可變區中包含任選自38K、40R、48I、66K、67A、69L、71L和73K中的一個或更多個胺基酸回復突變。
在一些實施方案中,如上任一項所述的醫藥組成物,其中該框架區變體包含選自以下所述的突變:
(a-1)該輕鏈可變區中包含22S、85I和87H的胺基酸回復突變,和該重鏈可變區中包含48I和82T的胺基酸回復突變;或
(b-1)該輕鏈可變區中包含4L的胺基酸回復突變;
其中,該重鏈可變區的82T中的82為Kabat規則的第82A位。
在一些實施方案中,如上任一項所述的醫藥組成物,其中抗Claudin18.2抗體包含如下任一所示的重鏈可變區和輕鏈可變區:
(vii)該重鏈可變區如SEQ ID NO:3所示和該輕鏈可變區如SEQ ID NO:4所示;
(viii)該重鏈可變區如SEQ ID NO:24、25、26或27所示和該輕鏈可變區如SEQ ID NO:21、22或23所示;
(ix)該重鏈可變區如SEQ ID NO:5所示和該輕鏈可變區如SEQ ID NO:6所示;或
(x)該重鏈可變區如SEQ ID NO:31、32、33或34所示和該輕鏈可變區如SEQ ID NO:28、29或30所示;
在一些實施方案中,如上任一項所述的醫藥組成物,其中抗Claudin18.2抗體包含如下任一所示的重鏈可變區和輕鏈可變區:
(xi)該重鏈可變區如SEQ ID NO:31所示和該輕鏈可變區如SEQ ID NO:29所示;或
(xii)該重鏈可變區如SEQ ID NO:26所示和該輕鏈可變區如SEQ ID NO:23所示。
在一些實施方案中,如上任一項所述的藥醫藥組成物,其中抗Claudin18.2抗體包含抗體重鏈恆定區和輕鏈恆定區。
在一些實施方案中,該重鏈恆定區選自人IgG1、IgG2、IgG3和IgG4恆定區及其常规變體,該輕鏈恆定區選自人抗體κ和λ鏈恆定區及其常规變體。在一些實施方案中,該抗體包含如SEQ ID NO:7所示的重鏈恆定區和如SEQ ID NO:8所示的輕鏈恆定區;
在一些實施方案中,該抗體包含:與具有SEQ ID NO:35或42所示胺基酸序列的重鏈具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%同一性的重鏈,和與具有SEQ ID NO:36或39所示胺基酸序列的輕鏈有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%同一性的輕鏈;或與具有SEQ ID NO:37或49所示胺基酸序列的重鏈具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%
同一性的重鏈,和與具有SEQ ID NO:38或46所示胺基酸序列的輕鏈有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%同一性的輕鏈。
在一些實施方案中,如上任一項所述的醫藥組成物,其中抗Claudin18.2抗體包含如下任一所示的重鏈和輕鏈:
(c)序列如SEQ ID NO:35所示的重鏈和序列如SEQ ID NO:36所示的輕鏈;
(d)序列如SEQ ID NO:42、43、44或45所示的重鏈和序列如SEQ ID NO:39、40或41所示的輕鏈;
(e)序列如SEQ ID NO:37所示的重鏈和序列如SEQ ID NO:38所示的輕鏈;或
(f)序列如SEQ ID NO:49、50、51或52所示的重鏈和序列如SEQ ID NO:46、47或48所示的輕鏈。
在一些實施方案中,如上任一項所述的醫藥組成物,其中抗Claudin18.2抗體包含如下任一所示的重鏈和輕鏈:
SEQ ID NO:44所示的重鏈,和SEQ ID NO:41所示的輕鏈;或
SEQ ID NO:49所示的重鏈,和SEQ ID NO:47所示的輕鏈。
在一些實施方案中,如上任一項所述的醫藥組成物,其中該抗Claudin18.2抗體藥物偶聯物具有如通式(Pc-L-Y-D)所示的結構:
其中,
Y選自-O-(CRaRb)m-CR1R2-C(O)-、-O-CR1R2-(CRaRb)m-、-O-CR1R2-、-NH-(CRaRb)m-CR1R2-C(O)-和-S-(CRaRb)m-CR1R2-C(O)-;
Ra和Rb相同或不同,且各自獨立地選自氫原子、氘原子、鹵素、烷基、鹵烷基、氘代烷基、烷氧基、羥基、胺基、氰基、硝基、羥烷基、環烷基和雜環基;
或者,Ra和Rb與其相連接的碳原子一起形成環烷基或雜環基;
R1選自鹵素、鹵烷基、氘代烷基、環烷基、環烷基烷基、烷氧基烷基、雜環基、芳基和雜芳基;
R2選自氫原子、鹵素、鹵烷基、氘代烷基、環烷基、環烷基烷基、烷氧基烷基、雜環基、芳基和雜芳基;
或者,R1和R2與其相連接的碳原子一起形成環烷基或雜環基;
或者,Ra和R2與其相連接的碳原子一起形成環烷基或雜環基;
m為0至4的整數;
n為1至10,n是小數或整數;
L為接頭單元;
Pc為抗Claudin18.2抗體;
在一些實施方案中,如上任一項所述的醫藥組成物,其中n是小數或整數,可以是2至8、3至7、3.5至4.5、2、3、3.5、4、4.5、5、6、7、8、9。
在一些實施方案中,如上任一項所述的醫藥組成物,其中該抗Claudin18.2抗體藥物偶聯物具有如通式(Pc-L-Y-D)所示的結構,
其中,
Y為-O-(CRaRb)m-CR1R2-C(O)-;
Ra和Rb相同或不同,且各自獨立地選自氫原子、氘原子、鹵素或C1-6烷基;
R1為鹵C1-6烷基或C3-6環烷基;
R2選自氫原子、鹵C1-6烷基或C3-6環烷基;
或者,R1和R2與其相連接的碳原子一起形成C3-6環烷基;
m為0或1。
在一些實施方案中,如上任一項所述的醫藥組成物,其中該抗Claudin18.2抗體藥物偶聯物具有如通式(Pc-L-Y-D)所示的結構,其中Y選自:
其中Y的O端與接頭單元L相連。
在一些實施方案中,如上任一項所述的醫藥組成物,其中接頭單元-L-為-L1-L2-L3-L4-,
L1選自-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-W-C(O)-、-CH2-C(O)-NR3-W-C(O)-或-C(O)-W-C(O)-,其中W選自C1-8烷基、C1-8烷基-環烷基或1至8個鏈原子的直鏈雜烷基,該雜烷基包含1至3個選自N、O或S的雜原子,其中該C1-8烷基、C1-8烷基-環烷基或1至8個鏈原子的直鏈雜烷基各自獨立地任選進一步被選自鹵素、
羥基、氰基、胺基、C1-6烷基、氯C1-6烷基、氘代C1-6烷基、C1-6烷氧基和C3-6環烷基的一個或多個取代基所取代;
L2選自-NR4(CH2CH2O)p1CH2CH2C(O)-、-NR4(CH2CH2O)p1CH2C(O)-、-S(CH2)p1C(O)-或化學鍵,其中p1為1至20的整數;
L3為由2至7個胺基酸構成的肽殘基,其中該胺基酸殘基選自苯丙胺酸、甘胺酸、纈胺酸、賴胺酸、瓜胺酸、絲胺酸、谷胺酸和天冬胺酸中的胺基酸形成的胺基酸殘基,並任選進一步被選自鹵素、羥基、氰基、胺基、C1-6烷基、氯C1-6烷基、氘代C1-6烷基、C1-6烷氧基和C3-6環烷基中的一個或多個取代基所取代;
L4選自-NR5(CR6R7)t-、-C(O)NR5-、-C(O)NR5(CH2)t-或化學鍵,其中t為1至6的整數;
R3、R4和R5相同或不同,且各自獨立地選自氫原子、C1-6烷基、鹵C1-6烷基、氘代C1-6烷基和C1-6羥烷基;
R6和R7相同或不同,且各自獨立地選自氫原子、鹵素、C1-6烷基、鹵C1-6烷基、氘代C1-6烷基和C1-6羥烷基。
在一些實施方案中,如上任一項所述的醫藥組成物,其中接頭單元-L-為-L1-L2-L3-L4-,
L2為化學鍵;
L3為四肽殘基;較佳為GGFG的四肽殘基(SEQ ID No:55);
L4為-NR5(CR6R7)t-,R5、R6或R7相同或不同,且各自獨立地為氫原子或C1-6烷基,t為1或2;
其中該L1端與Pc相連,L4端與Y相連。
在一些實施方案中,如上任一項所述的醫藥組成物,其中-L-為:
在一些實施方案中,如上任一項所述的醫藥組成物,其中L-Y-任選自:
在一些實施方案中,如上任一項所述的醫藥組成物,其中該抗Claudin18.2抗體藥物偶聯物選自如下任一所示的結構:
其中Pc和n如通式(Pc-L-Y-D)中所定義。
在一些實施方案中,如上任一項所述的醫藥組成物,其中該抗Claudin18.2抗體藥物偶聯物具有如下式所示的結構:
其中,
n為2至8,n是小數或整數;
Pc為抗Claudin18.2抗體。
在一些實施方案中,如上任一項所述的醫藥組成物,其中該醫藥組成物還包含表面活性劑。在一些實施方案中,該表面活性劑選自聚山梨酯(如聚山梨酯20、聚山梨酯80)、聚羥亞烴、Triton、十二烷基磺酸鈉、月桂基磺酸
鈉、辛基糖甙鈉、月桂基-磺基甜菜鹼、肉豆蔻基-磺基甜菜鹼、亞油基-磺基甜菜鹼、硬脂基-磺基甜菜鹼、月桂基-肌胺酸、肉豆蔻基-肌胺酸、亞油基-肌胺酸、硬脂基-肌胺酸、亞油基-甜菜鹼、肉豆蔻基-甜菜鹼、鯨蠟基-甜菜鹼、月桂醯胺基丙基-甜菜鹼、柯卡醯胺基丙基-甜菜鹼、亞油醯胺基丙基-甜菜鹼、肉豆蔻醯胺基丙基-甜菜鹼、棕櫚醯胺基丙基-甜菜鹼、異硬脂醯胺基丙基-甜菜鹼、肉豆蔻醯胺基丙基-二甲基胺、棕櫚醯胺基丙基-二甲基胺、異硬脂醯胺基丙基-二甲基胺、甲基可可醯基鈉、甲基油基牛磺酸鈉、聚乙二醇、聚丙二醇、乙烯與丙烯二醇的共聚物等。
在一些實施方案中,該表面活性劑為聚山梨酯。在一些實施方案中,該表面活性劑為聚山梨酯80或聚山梨酯20。在一些實施方案中,該表面活性劑為聚山梨酯80。
在一些實施方案中,如上任一項所述的醫藥組成物,其中該表面活性劑濃度為0.05mg/mL至0.5mg/mL或0.1mg/mL至0.2mg/mL。在一些實施方案中,該表面活性劑濃度為0.05mg/mL、0.1mg/mL、0.15mg/mL、0.18mg/mL、0.19mg/mL、0.2mg/mL、0.21mg/mL、0.22mg/mL、0.3mg/mL、0.4mg/mL、0.5mg/mL。在一些實施方案中,該表面活性劑濃度為0.2mg/mL。
在一些實施方案中,如上任一項所述的醫藥組成物,其中該組成物還包含糖。在一些實施方案中,該糖選自常規組成物(CH2O)n及其衍生物,包括單糖、二糖、三糖、多糖、糖醇、還原性糖、非還原性糖等等。該糖可選自葡萄糖、蔗糖、海藻糖、乳糖、果糖、麥芽糖、右旋糖苷、甘油、赤藻糖醇、丙三醇、阿拉伯糖醇、木糖醇、山梨糖醇、甘露醇、蜜李二糖、松三糖、蜜三糖、甘露三糖、水蘇糖、麥芽糖、乳果糖、麥芽酮糖、山梨醇、麥芽糖醇、乳糖醇、異
-麥芽酮糖等。在一些實施方案中,該糖選自蔗糖、甘露醇和海藻糖。在一些實施方案中,該糖為蔗糖。
在一些實施方案中,如上任一項所述的醫藥組成物,其中該糖濃度為20mg/mL至100mg/mL或40mg/mL至80mg/mL。在一些實施方案中,該糖濃度為20mg/mL、30mg/mL、40mg/mL、50mg/mL、60mg/mL、70mg/mL、80mg/mL、90mg/mL或100mg/mL。在一些實施方案中,該糖濃度為40mg/mL。
在一些實施方案中,如上任一項所述的醫藥組成物,其中該抗體藥物偶聯物濃度為以蛋白(即抗體)濃度計1mg/mL至100mg/mL或以蛋白濃度計10mg/mL至30mg/mL。在一些實施方案中,該抗體藥物偶聯物濃度為以蛋白濃度計5mg/mL、10mg/mL、20mg/mL、30mg/mL、40mg/mL、50mg/mL、60mg/mL、70mg/mL、80mg/mL、90mg/mL或100mg/mL。在一些實施方案中,該抗體藥物偶聯物濃度為以蛋白濃度計20mg/mL。
在一些實施方案中,如上任一項所述的醫藥組成物,其中該緩衝劑的濃度為5mM至50mM或10mM至30mM。在一些實施方案中,該緩衝劑的濃度為5mM、10mM、15mM、20mM、25mM、30mM、35mM、40mM、45mM或50mM。在一些實施方案中,該緩衝劑的濃度為30mM。
在一些實施方案中,如上任一項所述的醫藥組成物,其中該醫藥組成物的pH為5.0-6.5或5.0-5.5。在一些實施方案中,該醫藥組成物的pH為5.0、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6.0、6.1、6.2、6.3、6.4或6.5。在一些實施方案中,該醫藥組成物的pH為5.0-5.4。在一些實施方案中,該醫藥組成物的pH為5.0-5.3。
在一些實施方案中,如上任一項所述的醫藥組成物,其包含如下組分:
(a)以蛋白濃度計10mg/mL至30mg/mL的該抗Claudin18.2抗體藥物偶聯物,(b)0.1mg/mL至0.2mg/mL的聚山梨酯,(c)40mg/mL至80mg/mL的糖,和(d)10mM至30mM的組胺酸鹽緩衝劑;該醫藥組成物的pH為約5.0-5.5。
在一些實施方案中,如上任一項所述的醫藥組成物,其包含如下組分:
(a)以蛋白濃度計10mg/mL至30mg/mL的該抗Claudin18.2抗體藥物偶聯物,(b)0.1mg/mL至0.2mg/mL的聚山梨酯80,(c)40mg/mL至80mg/mL的蔗糖,和(d)10mM至30mM的組胺酸鹽緩衝劑;該醫藥組成物的pH為約5.0-5.5。
在一些實施方案中,如上任一項所述的醫藥組成物,其包含如下組分:
(a)以蛋白濃度計20mg/mL的該抗Claudin18.2抗體藥物偶聯物,(b)0.2mg/mL的聚山梨酯80,(c)40mg/mL的蔗糖,和(d)30mM組胺酸-醋酸鹽緩衝劑,該醫藥組成物的pH為5.0-5.3。
在一些實施方案中,如上任一項所述的醫藥組成物,該抗Claudin18.2抗體藥物偶聯物具有如下式所示的結構:
其中,
n為2至8,n是小數或整數;
Pc為抗Claudin18.2抗體,其包含SEQ ID NO:49所示的重鏈,和SEQ ID NO:47所示的輕鏈;該醫藥組成物含有以蛋白濃度計20mg/mL的該抗體藥物偶聯物;
該醫藥組成物還包含以下組分:
0.2mg/mL的聚山梨酯80、40mg/mL的蔗糖和30mM組胺酸-醋酸鹽緩衝劑,該醫藥組成物的pH為5.0-5.3。
在一些實施方案中,如上任一項所述的醫藥組成物,該醫藥組成物是液體製劑。在一些實施方案中,該液體製劑的溶劑是水。
本披露還提供一種含抗體藥物偶聯物的凍乾製劑,其特徵在於該製劑複溶後可形成如上任一項所述的醫藥組成物。
本披露還提供一種的凍乾製劑,其為如上任一項所述的醫藥組成物的凍乾形式。
本披露還提供一種製備含抗體藥物偶聯物的凍乾製劑的方法,其中包括將如上任一項所述的醫藥組成物進行冷凍乾燥的步驟。
本披露還提供一種含抗體藥物偶聯物的凍乾製劑,該製劑藉由將如上任一項所述的醫藥組成物經冷凍乾燥獲得。
在一些實施方案中,如上任一項所述冷凍乾燥依次包括預凍、一次乾燥和二次乾燥的步驟。
在一些實施方案中,凍乾程序如下所示:預凍,溫度為5℃;預凍,溫度為-45℃;一次乾燥,溫度為-20℃,真空度為20Pa;二次乾燥的的溫度為25℃,真空度為1Pa。在一些實施方案中,凍乾程序如下所示:預凍,溫度為5℃,時間10min;預凍,溫度為-45℃,時間50min;一次乾燥,溫度為-20℃,真空度為20Pa,時間120min;二次乾燥的的溫度為25℃,真空度為1Pa,時間60min。
在一些實施方案中,凍乾製劑於2-8℃穩定至少3個月,至少6個月,至少12個月,至少18個月或至少24個月。在一些實施方案中,該凍乾製劑於40℃穩定至少7天,至少14天或至少28天。
本披露還提供一種的凍乾製劑,其為如上任一項所述的凍乾製劑的複溶形式。
本披露還提供一種含抗體藥物偶聯物的複溶溶液,其特徵在於該複溶溶液是藉由將如上任一項所述的凍乾製劑經複溶製備獲得。
在一些實施方案中,如上所述的複溶溶液包含如下組分:
(a)以蛋白濃度計10mg/mL至30mg/mL的該抗Claudin18.2抗體藥物偶聯物,(b)0.1mg/mL至0.2mg/mL的聚山梨酯,(c)40mg/mL至80mg/mL的糖,和(d)10mM至30mM的組胺酸鹽緩衝劑;該複溶溶液的pH為約5.0-5.5。
在一些實施方案中,如上所述的複溶溶液包含如下組分:
(a)以蛋白濃度計10mg/mL至30mg/mL的該抗Claudin18.2抗體藥物偶聯物,(b)0.1mg/mL至0.2mg/mL的聚山梨酯80,(c)40mg/mL至80mg/mL的蔗糖,和(d)10mM至30mM的組胺酸鹽緩衝劑;該複溶溶液的pH為約5.0-5.5。
在一些實施方案中,如上所述的複溶溶液包含如下組分:
(a)以蛋白濃度計20mg/mL的該抗Claudin18.2抗體藥物偶聯物,(b)0.2mg/mL的聚山梨酯80,(c)40mg/mL的蔗糖,和(d)30mM組胺酸-醋酸鹽緩衝劑,該複溶溶液的pH為5.0-5.3。
本披露還提供一種製品,其包括容器,該容器中裝有如上任一項所述的醫藥組成物、如上任一項所述的凍乾製劑或如上任一項所述的複溶溶液。
本披露還提供一種治療腫瘤或癌症的方法,包括向受試者施用有效量的如上任一項所述的醫藥組成物、如上任一項的凍乾製劑、如上任一項的複溶溶液、或如上任一項所述的製品。
在一些實施方案中,本披露還提供如上任一項所述的醫藥組成物、如上任一項的凍乾製劑、如上任一項的複溶溶液或如上任一項所述的製品在製備治療腫瘤或癌症的藥物中的用途。
在一些實施方案中,本披露還提供用作藥物的如上任一項所述的醫藥組成物、如上任一項的凍乾製劑、如上任一項的複溶溶液或如上任一項所述的製品。
在一些實施方案中,該腫瘤或癌症較佳為頭和頸鱗狀細胞癌、頭和頸癌、腦癌、神經膠質瘤、多形性成膠質細胞瘤、神經母細胞瘤、中樞神經系統癌、神經內分泌腫瘤、咽喉癌、鼻咽癌、食管癌、甲狀腺癌、惡性胸膜間皮瘤、肺癌、乳腺癌、肝癌、肝細胞瘤、肝細胞癌、肝膽癌、胰腺癌、胃癌、胃腸道癌、
腸癌、結腸癌、結腸直腸癌、腎癌、透明細胞腎細胞癌、卵巢癌、子宮內膜癌、子宮頸癌、膀胱癌、前列腺癌、睾丸癌、皮膚癌、黑色素瘤、白血病、淋巴瘤、骨癌、軟骨肉瘤、骨髓瘤、多發性骨髓瘤、骨髓異常增生綜合症、庫肯勃氏瘤、骨髓增生性腫瘤、鱗狀細胞癌、尤因氏肉瘤、全身性輕鏈澱粉樣變性和梅克爾細胞癌。
在一些實施方案中,該淋巴瘤選自:何傑金淋巴瘤、非何傑金淋巴瘤、瀰漫性大B-細胞淋巴瘤、濾泡性淋巴瘤、原發性縱隔大B-細胞淋巴瘤、套細胞淋巴瘤、小淋巴細胞性淋巴瘤、富含T-細胞/組織細胞的大B-細胞淋巴瘤和淋巴漿細胞性淋巴瘤。
在一些實施方案中,該肺癌選自:非小細胞肺癌和小細胞肺癌。
在一些實施方案中,該白血病選自:慢性髓細胞樣白血病、急性髓細胞樣白血病、淋巴細胞白血病、成淋巴細胞性白血病、急性成淋巴細胞性白血病、慢性淋巴細胞性白血病和髓樣細胞白血病。
圖1:人源化抗體在細胞水平與人Claudin18.2的結合FACS檢測結果。
圖2:人源化抗體的NUGC4細胞內吞實驗。
圖3A至圖3C:抗體在不同Claudin18.2表達程度的NUGC4細胞中ADCC效應檢測。圖3A為抗體在野生型NUGC4細胞(Claudin18.2低表達)中的ADCC效應檢測;圖3B為抗體在Claudin18.2中等表達NUGC4細胞中的ADCC效應檢測;圖3C為抗體在Claudin18.2高表達NUGC4細胞中的ADCC效應檢測。
圖4:本披露ADC-1的抑瘤實驗結果。
圖5:本披露ADC-2的抑瘤實驗結果。
術語
為了更容易理解本披露,以下具體定義了某些技術和科學術語。除非在本文中另有明確定義,本文使用的所有其它技術和科學術語都具有本披露所屬技術領域具有通常知識者通常理解的含義。
“抗體藥物偶聯物(antibody drug conjugate,ADC)”是把抗體或者抗體片段藉由穩定的化學接頭化合物與具有生物活性的細胞毒素或具有細胞殺傷活性的小分子藥物相連,充分利用了抗體對腫瘤細胞特異或高表達抗原結合的特異性和細胞毒素的高效性,避免對正常細胞的毒副作用。與以往傳統的化療藥物相比,抗體藥物偶聯物能精準地結合腫瘤細胞並降低將對正常細胞的影響。
“緩衝劑”指藉由其酸-鹼共軛組分的作用而耐受pH變化的緩衝劑。將pH控制在適當範圍中的緩衝劑的例子包括醋酸鹽、琥珀酸鹽、葡萄糖酸鹽、組胺酸鹽、草酸鹽、乳酸鹽、磷酸鹽、枸櫞酸鹽、酒石酸鹽、延胡索酸鹽、甘胺醯甘胺酸和其它有機酸緩衝劑。
“組胺酸鹽緩衝劑”是包含組胺酸根離子的緩衝劑。組胺酸鹽緩衝劑的實例包括組胺酸-鹽酸鹽,組胺酸-醋酸鹽,組胺酸-磷酸鹽,組胺酸-硫酸鹽等緩衝劑;較佳組胺酸-醋酸鹽緩衝劑。組胺酸-醋酸鹽緩衝劑是組胺酸與醋酸配製而成,組胺酸鹽酸鹽緩衝劑是組胺酸與鹽酸配製而成。
“枸櫞酸鹽緩衝劑”是包括枸櫞酸根離子的緩衝劑。枸櫞酸鹽緩衝劑的實例包括枸櫞酸-枸櫞酸鈉、枸櫞酸-枸櫞酸鉀、枸櫞酸-枸機酸鈣、枸據酸-枸櫞酸鎂等。較佳的枸櫞酸鹽緩衝劑是枸機酸-枸櫞酸鈉。
“琥珀酸鹽緩衝劑”是包括琥珀酸根離子的緩衝劑。琥珀酸鹽緩衝劑的實例包括琥珀酸-琥珀酸鈉、琥珀酸-琥珀酸鉀、琥珀酸-琥珀酸鈣鹽等。較佳的琥珀酸鹽緩衝劑是琥珀酸-琥珀酸鈉。示例性的,該琥珀酸-琥珀酸鈉可由琥鉑酸與氫氧化鈉配製而成,或由琥鉑酸與琥珀酸鈉配製而成。
“磷酸鹽緩衝劑”是包括磷酸根離子的緩衝劑。磷酸鹽緩衝劑的實例包括磷酸氫二鈉-磷酸二氫鈉、磷酸氫二鈉-磷酸二氫鉀、磷酸氫二鈉-枸櫞酸等。較佳的磷酸鹽緩衝劑是磷酸氫二鈉-磷酸二氫鈉。
“醋酸鹽緩衝劑”是包括醋酸根離子的緩衝劑。醋酸鹽緩衝劑的實例包括醋酸-醋酸鈉、醋酸組胺酸鹽、醋酸-醋酸鉀、醋酸醋酸鈣、醋酸-醋酸鎂等。較佳的醋酸鹽緩衝劑是醋酸-醋酸鈉。
“醫藥組成物”表示含有一種或多種本文所述抗體藥物偶聯物或其生理學上/可藥用的鹽或前體藥物與其他化學組分的混合物,該其他組分例如生理學/可藥用的載體和賦形劑。醫藥組成物的目的是保持活性成分的穩定性,促進對生物體的給藥,利於活性成分的吸收進而發揮生物活性。
本披露中,“醫藥組成物”和“製劑”並不互相排斥。
本披露中所述醫藥組成物的溶液形式,若無特殊說明,其中的溶劑均為水。
“凍乾製劑”表示液體或溶液形式的醫藥組成物或液體或溶液製劑經真空冷凍乾燥步驟之後獲得的製劑或醫藥組成物。
儘管本披露提供了含量範圍或含量值,但所屬技術領域具有通常知識者理解,該含量範圍或含量值涵蓋了所測定具體值的可接受誤差範圍。
本披露所述的醫藥組成物能夠達到一種穩定的效果:其中的抗體藥物偶聯物在貯藏後基本上保留其物理穩定性和/或化學穩定性和/或生物學活性的醫藥組成物,較佳地,醫藥組成物在貯藏後基本上保留其物理和化學穩定性以及其生物學活性。貯藏期一般基於醫藥組成物的預定保存期來選擇。目前有多種測量蛋白質穩定性的分析技術,可測量在選定溫度貯藏選定時間段後的穩定性。
穩定的製劑是在下述情况下没有觀察到顯著變化的製劑:在冷藏溫度(2-8℃)保存至少3個月、較佳6個月、更佳1年,且甚至更佳地多達2年。另外,穩定的液體製劑包括這樣的液體製劑:其在包括25℃的溫度保存包括1個月、3個月、6個月在內的時段後表現出期望的特徵。穩定性的典型的例子:藉由SEC-HPLC測得,通常不超過約10%、較佳不超過約5%的抗體單體發生聚集或降解。藉由視覺分析,製劑是淡黄色近無色澄明液體或者無色,或澄清至稍微乳白色。該製劑的濃度、pH和重量克分子滲透壓濃度具有不超過±10%變化。通常觀察到不超過約10%、較佳不超過約5%的減少。通常形成不超過約10%、較佳不超過約5%的聚集。
如果在目檢顏色和/或澄清度後,或者藉由UV光散射、尺寸排阻色譜法(SEC)和動態光散射(DLS)測得,抗體藥物偶聯物沒有顯示出顯著的聚集增加、沉澱和/或變性,那麼該抗體藥物偶聯物在藥物製劑中“保留它的物理穩定性”。蛋白構象的變化可以藉由螢光光譜法(其確定蛋白三級結構)和藉由FTIR光譜法(其確定蛋白二級結構)來評價。
如果抗體藥物偶聯物沒有顯示出顯著的化學改變,那麼該抗體在藥物製劑中“保留它的化學穩定性”。藉由檢測和定量化學上改變的形式的蛋白,可以評估化學穩定性。經常改變蛋白化學結構的降解過程包括水解或截短(藉由諸如尺寸排阻色譜法和CE-SDS等方法來評價)、氧化(藉由諸如與質譜法或MALDI/TOF/MS結合的肽譜法等方法來評價)、脫醯胺作用(藉由諸如離子交換色譜法、毛細管等電聚焦、肽譜法、異天冬胺酸測量等方法來評價)和異構化(藉由測量異天冬胺酸含量、肽譜法等來評價)。
如果抗體藥物偶聯物在給定時間的生物活性是在製備藥物製劑時表現出的生物活性的預定範圍內,那麼該抗體藥物偶聯物在藥物製劑中“保留它的生物活性”。
本披露所用胺基酸三字母代碼和單字母代碼如J.biol.chem,243,p3558(1968)中所述。
本披露的術語“抗體”以最廣義使用,其涵蓋各種抗體結構,包括但不限於單株抗體,多株抗體,多特異性抗體(例如雙特異性抗體),全長抗體或其抗原結合片段(也稱‘“原結合部分”),只要它們展現出期望的抗原結合活性。全長抗體是包含由二硫鍵互相連接的至少兩條重鏈和兩條輕鏈的免疫球蛋白(Ig)。免疫球蛋白重鏈恆定區的胺基酸組成和排列順序不同,故其抗原性也不同。據此,可將免疫球蛋白分為五類,或稱為免疫球蛋白的同種型,即IgM、IgD、IgG、IgA和IgE,其相應的重鏈分別為μ鏈、δ鏈、γ鏈、α鏈、和ε鏈。同一類Ig根據其鉸鏈區胺基酸組成和重鏈二硫鍵的數目和位置的差別,又可分為不同的亞類,如IgG可分為IgG1、IgG2、IgG3、IgG4。輕鏈藉由恆定區的不同分為κ鏈或λ鏈。五類Ig中每類Ig都可以有κ鏈或λ鏈。
全長抗體重鏈和輕鏈靠近N端的約110個胺基酸的序列變化很大,為可變區(縮寫為Fv區);靠近C端的其餘胺基酸序列相對穩定,為恆定區。每條重鏈由重鏈可變區(縮寫為VH)和重鏈恆定區(縮寫為CH)組成。重鏈恆定區包含CH1、CH2和CH3三個結構域。每條輕鏈由輕鏈可變區(縮寫為VL)和輕鏈恆定區(縮寫為CL)組成。重鏈可變區和輕鏈可變區包括高變區(也稱為互補性決定區,縮寫為CDR或HVR)和序列相對保守的骨架區(也稱框架區,縮寫為FR)。每個VL和VH由從胺基末端排到羧基末端按以下順序排列的3個CDR 4個FR組成:FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4。輕鏈的3個CDR區指LCDR1、LCDR2、和LCDR3;重鏈的3個CDR區指HCDR1、HCDR2和HCDR3。
本披露中所述人抗體重鏈恆定區和人抗體輕鏈恆定區的“常規變體”是指現有技術已公開的來源於人的不改變抗體可變區結構和功能的重鏈恆定區或輕鏈恆定區的變體,示例性變體包括對重鏈恆定區進行定點改造和胺基酸替換的IgG1、IgG2、IgG3或IgG4重鏈恆定區變體,具體替換如現有技術已知的YTE突變、L234A和/或L235A突變、S228P突變、265A(例如D265A)和/或297A(例如N297A),和/或獲得knob-into-hole結構的突變(使得抗體重鏈具有knob-Fc和hole-Fc組合),這些突變已被證實使得抗體具有新的性能,但不改變抗體可變區的功能。
術語“抗原結合片段”或“功能片段”或“抗原結合部分”是指保持特異性結合抗原的能力的完整抗體的一個或更多個片段。已顯示可利用全長抗體的片段來進行抗體的抗原結合功能。示例性的,涵蓋在術語“抗原結合片段”的結合片段的實例包括:(i)Fab片段,一種由VL、VH、CL和CH1結構域組成的單價片段;(ii)F(ab')2片段,一種包含藉由鉸鏈區上的二硫橋連接的兩個Fab片段
的二價片段,(iii)由VH和CH1結構域組成的Fd片段;(iv)由抗體的單臂的VH和VL結構域組成的Fv片段;(v)dsFv,由VH和VL經鏈間二硫鍵形成的穩定的抗原結合片段;(vi)包含scFv、dsFv、Fab等片段的雙抗體、雙特異性抗體和多特異性抗體。此外,雖然Fv片段的兩個結構域VL和VH由分開的基因編碼,但可使用重組方法將這兩個結構域藉由能夠使它們形成為單條蛋白質鏈的人工肽接頭來接合,其中VL和VH配對形成單價分子,稱為單鏈Fv(scFv)(參見,例如,Bird等人(1988)Science242:423-426;和Huston等人(1988)Proc.Natl.Acad.Sci USA85:5879-5883))。此類單鏈抗體也包括在術語抗體的“”抗原結合片段”中。使用所屬技術領域具有通常知識者已知的常規技術獲得此類抗體片段,並且以與對於完整抗體的方式相同的方式就功用性篩選片段。可藉由重組DNA技術或藉由酶促或化學斷裂完整免疫球蛋白來產生抗原結合部分。
術語“胺基酸差異”或“胺基酸突變”是指相較於原蛋白質或多肽,變體蛋白質或多肽存在胺基酸的改變或突變,包括在原蛋白質或多肽的基礎上發生1個、2個、3個或更多個胺基酸的插入、缺失或替換。
術語“抗體框架”或“FR區”,是指可變結構域VL或VH的一部分,其用作該可變結構域的抗原結合環(CDR)的支架。從本質上講,其是不具有CDR的可變結構域。
術語“互補決定區”、“CDR”或“高變區”是指抗體的可變結構域內主要促成抗原結合的6個高變區之一。通常,每個重鏈可變區中存在三個CDR(HCDR1、HCDR2、HCDR3),每個輕鏈可變區中存在三個CDR(LCDR1、LCDR2、LCDR3)。可以使用各種公知方案中的任何一種來確定CDR的胺基酸序列邊界,包括“Kabat”編號規則(參見Kabat等(1991),“Sequences of Proteins of
Immunological Interest”,第5版,Public Health Service,National Institutes of Health,Bethesda,MD)、“Chothia”編號規則(參見Al-Lazikani等人,(1997)JMB 273:927-948)和ImMunoGenTics(IMGT)編號規則(Lefranc M.P.,Immunologist,7,132-136(1999);Lefranc,M.P.等,Dev.Comp.Immunol.,27,55-77(2003)等。例如,對於經典格式,遵循Kabat規則,該重鏈可變域(VH)中的CDR胺基酸殘基編號為31-35(HCDR1)、50-65(HCDR2)和95-102(HCDR3);輕鏈可變域(VL)中的CDR胺基酸殘基編號為24-34(LCDR1)、50-56(LCDR2)和89-97(LCDR3)。遵循Chothia規則,VH中的CDR胺基酸編號為26-32(HCDR1)、52-56(HCDR2)和95-102(HCDR3);並且VL中的胺基酸殘基編號為26-32(LCDR1)、50-52(LCDR2)和91-96(LCDR3)。藉由組合Kabat和Chothia兩者的CDR定義,CDR由人VH中的胺基酸殘基26-35(HCDR1)、50-65(HCDR2)和95-102(HCDR3)和人VL中的胺基酸殘基24-34(LCDR1)、50-56(LCDR2)和89-97(LCDR3)構成。遵循IMGT規則,VH中的CDR胺基酸殘基編號大致為26-35(CDR1)、51-57(CDR2)和93-102(CDR3),VL中的CDR胺基酸殘基編號大致為27-32(CDR1)、50-52(CDR2)和89-97(CDR3)。遵循IMGT規則,抗體的CDR區可以使用程序IMGT/DomainGap Align確定。遵循AbM規則,VH中的CDR胺基酸編號為26-32(HCDR1)、50-58(HCDR2)和95-102(HCDR3);並且VL中的胺基酸殘基編號為24-34(LCDR1)、50-56(LCDR2)和89-97(LCDR3)。本披露的抗體的重鏈可變區和輕鏈可變區及其CDR符合Kabat編號規則。
胺基酸序列“同一性”是指:胺基酸序列比對時(必要時允許引入間隙以達成最大的序列同一性百分比),第一序列中與第二序列中的相同胺基酸殘基的百分比;其中保守性取代不視為序列同一性的一部分。為測定胺基酸序列同
一性百分比,比對可以藉由屬於本領域技術的範圍內的多種方式來實現,例如使用公開可得到的計算機軟體,諸如BLAST、BLAST-2、ALIGN、ALIGN-2或Megalign(DNASTAR)軟體。所屬技術領域具有通常知識者可確定適用於測量比對的參數,包括在所比較的序列全長上達成最大比對所需的任何算法。
本披露工程化的抗體或抗原結合片段可用常規方法製備和純化。比如,編碼重鏈和輕鏈的cDNA序列,可以選殖並重組至GS表達載體。重組的免疫球蛋白表達載體可以穩定地轉染CHO細胞。作為一種更推薦的現有技術,哺乳動物類表達系統會導致抗體的糖基化,特別是在Fc區的高度保守N端位點。藉由表達與抗原結合的抗體得到穩定的純株。陽性的純株在生物反應器的無血清培養基中擴大培養以生產抗體。分泌了抗體的培養液可以用常規技術純化。比如,用含調整過的緩衝液的A或G Sepharose FF管柱進行純化。洗去非特異性結合的組分。再用pH梯度法沖提結合的抗體,用SDS-PAGE檢測抗體片段,收集。抗體可用常規方法進行過濾濃縮。可溶的混合物和多聚體,也可以用常規方法去除,比如分子篩、離子交換。得到的產物需立即冷凍,如-70℃,或者凍乾。
“保守修飾”或“保守置換或取代”是指具有類似特徵(例如電荷、側鏈大小、疏水性/親水性、主鏈構象和剛性等)的其它胺基酸置換蛋白中的胺基酸,使得可頻繁進行改變而不改變蛋白的生物學活性。所屬技術領域具有通常知識者知曉,一般而言,多肽的非必需區域中的單個胺基酸置換基本上不改變生物學活性(參見例如Watson等(1987)Molecular Biology of the Gene,The Benjamin/Cummings Pub.Co.,第224頁,(第4版))。另外,結構或功能類似的胺基酸的置換不大可能破環生物學活性。示例性保守取代如下:
術語“裸抗體”,是指未與異源模塊(例如細胞毒性模塊)或放射性標記物綴合的抗體。本披露中,抗體藥物偶聯物的含量以蛋白濃度計,即以偶聯物中蛋白(抗體部分)的重量/體積計。
術語“接頭單元”或“接頭”是指一端與抗體或其抗原結合片段連接而另一端與藥物相連的化學結構片段或鍵,也可以連接其他接頭後再與藥物相連。本披露的較佳方案表示為L和L1至L4,其中L1端與抗體相連,L4端與結構單元Y相連後與化合物或毒素相連。接頭,包括延伸物、間隔物和胺基酸單元,可以藉由本領域已知方法合成,諸如US2005-0238649A1中所記載的。接頭可以是便於在細胞中釋放藥物的“可切割接頭”。例如,可使用酸不穩定接頭(例如腙)、蛋白酶敏感(例如肽酶敏感)接頭、光不穩定接頭、二甲基接頭、或含二硫化物接頭(Chari等,Cancer Research 52:127-131(1992);美國專利No.5,208,020)。
術語“烷基”指飽和脂肪族烴基團,其為包含1至20個碳原子的直鏈或支鏈基團,較佳含有1至12個碳原子的烷基,更佳含有1至10個碳原子的烷基,最佳含有1至6個碳原子的烷基。非限制性實例包括甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、第三丁基、第二丁基、正戊基、1,1-二甲基丙基、1,2-二甲基丙基、2,2-二甲基丙基、1-乙基丙基、2-甲基丁基、3-甲基丁基、正己基、1-乙基-2-甲基丙基、1,1,2-三甲基丙基、1,1-二甲基丁基、1,2-二甲基丁基、2,2-二甲基丁基、1,3-二甲基丁基、2-乙基丁基、2-甲基戊基、3-甲基戊基、4-甲基戊基、2,3-二甲基丁基、正庚基、2-甲基己基、3-甲基己基、4-甲基己基、5-甲基己基、2,3-二甲基戊基、2,4-二甲基戊基、2,2-二甲基戊基、3,3-二甲基戊基、2-乙基戊基、3-乙基戊基、正辛基、2,3-二甲基己基、2,4-二甲基己基、2,5-二甲基己基、2,2-二甲基己基、3,3-二甲基己基、4,4-二甲基己基、2-乙基己基、3-乙
基己基、4-乙基己基、2-甲基-2-乙基戊基、2-甲基-3-乙基戊基、正壬基、2-甲基-2-乙基己基、2-甲基-3-乙基己基、2,2-二乙基戊基、正癸基、3,3-二乙基己基、2,2-二乙基己基,及其各種支鏈異構體等。更佳的是含有1至6個碳原子的低級烷基,非限制性的實施例包括甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、第三丁基、第二丁基、正戊基、1,1-二甲基丙基、1,2-二甲基丙基、2,2-二甲基丙基、1-乙基丙基、2-甲基丁基、3-甲基丁基、正己基、1-乙基-2-甲基丙基、1,1,2-三甲基丙基、1,1-二甲基丁基、1,2-二甲基丁基、2,2-二甲基丁基、1,3-二甲基丁基、2-乙基丁基、2-甲基戊基、3-甲基戊基、4-甲基戊基、2,3-二甲基丁基等。烷基可以是取代的或非取代的,當被取代時,取代基可以在任何可使用的連接點上被取代,該取代基較佳為一個或多個以下基團,其獨立地選自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基胺基、鹵素、巰基、羥基、硝基、氰基、環烷基、雜環烷基、芳基、雜芳基、環烷氧基、雜環烷氧基、環烷硫基、雜環烷硫基、側氧基。
術語“雜烷基”指含有一個或多個選自N、O或S的雜原子的烷基,其中烷基如上所定義。
術語“亞(伸)烷基”指飽和的直鏈或支鏈脂肪族烴基,其具有兩個從母體烷的相同碳原子或兩個不同的碳原子上除去兩個氫原子所衍生的殘基。伸烷基為包含1至20個碳原子的直鏈或支鏈基團,較佳含有1至12個碳原子,更佳含有1至6個碳原子的亞(伸)烷基。亞(伸)烷基的非限制性實例包括但不限於亞甲基(-CH2-)、1,1-亞乙基(-CH(CH3)-)、1,2-伸乙基(-CH2CH2-)、1,1-亞丙基(-CH(CH2CH3)-)、1,2-伸丙基(-CH2CH(CH3)-)、1,3-伸丙基(-CH2CH2CH2-)、1,4-伸丁基(-CH2CH2CH2CH2-)和1,5-伸丁基(-CH2CH2CH2CH2CH2-)等。伸烷基可以是取代的或非取代的。當被取代時,取代基可以在任何可使用的連接點上被取代,該取
代基較佳獨立地任選選自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基胺基、鹵素、巰基、羥基、硝基、氰基、環烷基、雜環基、芳基、雜芳基、環烷氧基、雜環烷氧基、環烷硫基、雜環烷硫基和側氧基中的一個或多個取代基所取代。
術語“烷氧基”指-O-(烷基)和-O-(非取代的環烷基),其中烷基或環烷基的定義如上所述。烷氧基的非限制性實例包括:甲氧基、乙氧基、丙氧基、丁氧基、環丙氧基、環丁氧基、環戊氧基、環己氧基。烷氧基可以是任選取代的或非取代的,當被取代時,取代基較佳為一個或多個以下基團,其獨立地選自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基胺基、鹵素、巰基、羥基、硝基、氰基、環烷基、雜環烷基、芳基、雜芳基、環烷氧基、雜環烷氧基、環烷硫基、雜環烷硫基。
術語“環烷基”指飽和或部分不飽和單環或多環環狀烴取代基。環烷基環包含3至20個碳原子,較佳包含3至12個碳原子,更佳包含3至10個碳原子,最佳包含3至7個碳原子。單環環烷基的非限制性實例包括環丙基、環丁基、環戊基、環戊烯基、環己基、環己烯基、環己二烯基、環庚基、環庚三烯基、環辛基等;多環環烷基包括螺環、稠環和橋環的環烷基。
術語“雜環基”指飽和或部分不飽和單環或多環環狀烴取代基,其包含3至20個環原子,其中一個或多個環原子為選自氮、氧或S(O)m(其中m是整數0至2)的雜原子,但不包括-O-O-、-O-S-或-S-S-的環部分,其餘環原子為碳。雜環基較佳包含3至12個環原子,其中1至4個是雜原子;更佳環烷基環包含3至10個環原子。單環雜環基的非限制性實例包括吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基、嗎啉基、硫代嗎啉基、高哌嗪基等。多環雜環基包括螺環、稠環和橋環的雜環基。
術語“螺雜環基”指單環之間共用一個原子(稱螺原子)的5至20元多環雜環基團,其中一個或多個環原子為選自氮、氧或S(O)m(其中m是整數0至2)的雜原子,其餘環原子為碳。其可以含有一個或多個雙鍵,但沒有一個環具有完全共軛的π電子系統。較佳為6至14員,更佳為7至10員。根據環與環之間共用螺原子的數目將螺雜環基分為單螺雜環基、雙螺雜環基或多螺雜環基,較佳為單螺雜環基和雙螺雜環基。更佳為4員/4員、4員/5員、4員/6員、5員/5員或5員/6員單螺雜環基。螺雜環基的非限制性實例包括:
術語“稠雜環基”指5至20員多環雜環系統,其中的每個環與系統中的其他環共享一對毗鄰的原子。在稠雜環基中,一個或多個環可以含有一個或多個雙鍵,但沒有一個環具有完全共軛的π電子系統,其中一個或多個環原子為選自氮、氧或S(O)m(其中m是整數0至2)的雜原子,其餘環原子為碳。稠雜環基較佳為6至14員,更佳為7至10員。根據組成環的數目,稠雜環基可以分為雙環、三環、四環或多環;較佳為雙環或三環;更佳為5員/5員、或5員/6員雙環稠雜環基。稠雜環基的非限制性實例包括:
術語“橋雜環基”指5至14員的多環雜環基團,其中任意兩個環共用兩個不直接連接的原子。橋雜環基可以含有一個或多個雙鍵,但沒有一個環具有完全共軛的π電子系統,其中一個或多個環原子為選自氮、氧或S(O)m(其中m是整數0至2)的雜原子,其餘環原子為碳。橋雜環基較佳為6至14員,更佳為7至10員。根據組成環的數目,橋雜環基可以分為雙環、三環、四環或多環;較佳為雙環、三環或四環;更佳為雙環或三環。橋雜環基的非限制性實例包括:
該雜環基環可以稠合於芳基、雜芳基或環烷基環上,其中與母體結構連接在一起的環為雜環基,其非限制性實例包括:
雜環基可以是任選取代的或非取代的。當被取代時,取代基較佳為一個或多個以下基團,其獨立地選自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基胺基、鹵素、巰基、羥基、硝基、氰基、環烷基、雜環烷基、芳基、雜芳基、環烷氧基、雜環烷氧基、環烷硫基、雜環烷硫基、側氧基。
術語“芳基”指具有共軛的π電子體系的6至14員全碳單環或稠合多環(也就是共享毗鄰碳原子對的環)基團。芳基較佳為6至10員,例如苯基
和萘基,較佳苯基。該芳基環可以稠合於雜芳基、雜環基或環烷基環上,其中與母體結構連接在一起的環為芳基環,其非限制性實例包括:
芳基可以是取代的或非取代的。當被取代時,取代基較佳為一個或多個以下基團,其獨立地選自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基胺基、鹵素、巰基、羥基、硝基、氰基、環烷基、雜環烷基、芳基、雜芳基、環烷氧基、雜環烷氧基、環烷硫基、雜環烷硫基。
術語“雜芳基”指包含1至4個雜原子、5至14個環原子的雜芳族體系,其中雜原子選自氧、硫和氮。雜芳基較佳為5至10員,更佳為5員或6員,例如呋喃基、噻吩基、吡啶基、吡咯基、N-烷基吡咯基、嘧啶基、吡嗪基、咪唑基、四唑基等。該雜芳基環可以稠合於芳基、雜環基或環烷基環上,其中與母體結構連接在一起的環為雜芳基環,其非限制性實例包括:
雜芳基可以是任選取代的或非取代的。當被取代時,取代基較佳為一個或多個以下基團,其獨立地選自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷
基胺基、鹵素、巰基、羥基、硝基、氰基、環烷基、雜環烷基、芳基、雜芳基、環烷氧基、雜環烷氧基、環烷硫基、雜環烷硫基。
術語“胺基保護基”是這樣一種基團:當分子其它部位進行反應時,為了使胺基保持不變,用易於脫去的基團對胺基進行保護。非限制性的實施例包含9-芴甲氧羰基、第三丁氧羰基、乙醯基、苄基、烯丙基和對甲氧苄基等。這些基團可任選地被選自鹵素、烷氧基或硝基中的1-3個取代基所取代。該胺基保護基較佳為9-芴甲氧羰基。
術語“環烷基烷基”指烷基上的氫被一個或多個環烷基取代,較佳被一個環烷基取代,其中烷基如上所定義,其中環烷基如上所定義。
術語“鹵烷基”指烷基上的氫被一個或多個鹵素取代,其中烷基如上所定義。
術語“氘代烷基”指烷基上的氫被一個或多個氘原子取代,其中烷基如上所定義。
術語“羥基”指-OH基團。
術語“鹵素”指氟、氯、溴或碘。
術語“胺基”指-NH2。
術語“硝基”指-NO2。
“任選”或“任選地”意味著隨後所描述地事件或環境可以但不必發生,該說明包括該事件或環境發生或不發生的場合。例如,“任選包含1-3個抗體重鏈可變區”意味著特定序列的抗體重鏈可變區可以但不必須存在。
“取代的”指基團中的一個或多個氫原子,較佳為最多5個,更佳為1至3個氫原子彼此獨立地被相應數目的取代基取代。不言而喻,取代基僅處
在它們的可能的化學位置,所屬技術領域具有通常知識者能夠在不付出過多努力的情況下確定(藉由實驗或理論)可能或不可能的取代。例如,具有游離氫的胺基或羥基與具有不飽和(如烯屬)鍵的碳原子結合時可能是不穩定的。
術語“載藥量”是指ADC分子中每個抗體或其抗原結合片段上加載的細胞毒性藥物平均數量,也可以表示為藥物量和抗體量的比值,藥物載量的範圍可以是每個抗體或其抗原結合片段(Pc)連接0-12個,較佳1-10個,更佳2-8個,最佳3.5-4.5個細胞毒性藥物(D)。在本披露的實施方式中,載藥量表示為n,示例性的n可以為1,2,3,4,5,6,7,8,9,或10中的一個或多個經計算所得的均值。可用常規方法如UV/可見光光譜法、質譜、ELISA試驗和HPLC特徵鑑定偶聯反應後每個ADC分子的藥物平均數量。
本披露的一個實施方式中,細胞毒性藥物藉由接頭單元偶聯在抗體或其抗原結合片段的N端胺基、賴胺酸殘基的ε-胺基和/或巰基上。一般地,偶聯反應中能與抗體偶聯的藥物分子數將小於理論上的最大值。
可以用以下非限制性方法控制細胞毒性藥物的載量,包括:
(1)控制連接試劑和單抗的莫耳比,
(2)控制反應時間和溫度,
(3)選擇不同的反應試劑。
常規的醫藥組成物的製備見中國藥典。
術語“載體”用於本披露的醫藥組成物,是指能改變藥物進入人體的方式和在體內的分佈、控制藥物的釋放速度並將藥物輸送到靶向器官的體系。藥物載體釋放和靶向系統能夠減少藥物降解及損失,降低副作用,提高生物利用度。如可作為載體的高分子表面活性劑由於其獨特的兩親性結構,可以進行自組
裝,形成各種形式的聚集體,較佳的實例如膠束、微乳液、凝膠、液晶、囊泡等。這些聚集體具有包載藥物分子的能力,同時又對膜有良好的滲透性,可以作為優良的藥物載體。
“施用”、“給予”和“處理”當應用於動物、人、實驗受試者、細胞、組織、器官或生物流體時,是指外源性藥物、治療劑、診斷劑或組成物與動物、人、受試者、細胞、組織、器官或生物流體的接觸。“施用”、“給予”和“處理”可以指例如治療、藥物代謝動力學、診斷、研究和實驗方法。細胞的處理包括試劑與細胞的接觸,以及試劑與流體的接觸,其中該流體與細胞接觸。“施用”、“給予”和“處理”還意指藉由試劑、診斷、結合組成物或藉由另一種細胞體外和離體處理例如細胞。“處理”當應用於人、獸醫學或研究受試者時,是指治療處理、預防或預防性措施,研究和診斷應用。
“治療”意指給予患者內用或外用治療劑,例如包含本披露的任一種結合化合物的組成物,該患者具有一種或多種疾病症狀,而已知該治療劑對這些症狀具有治療作用。通常,在受治療患者或群體中以有效緩解一種或多種疾病症狀的量給予治療劑,以誘導這類症狀退化或抑制這類症狀發展到任何臨床可測量的程度。有效緩解任何具體疾病症狀的治療劑的量(也稱作“治療有效量”)可根據多種因素變化,例如患者的疾病狀態、年齡和體重,以及藥物在患者產生需要療效的能力。藉由醫生或其它專業衛生保健人士通常用於評價該症狀的嚴重性或進展狀況的任何臨床檢測方法,可評價疾病症狀是否已被減輕。儘管本披露的實施方案(例如治療方法或製品)在緩解每個目標疾病症狀方面可能無效,但是根據本領域已知的任何統計學檢驗方法如Student t檢驗、卡方檢驗、依據Mann
和Whitney的U檢驗、Kruskal-Wallis檢驗(H檢驗)、Jonckheere-Terpstra檢驗和Wilcoxon檢驗確定,其在統計學顯著數目的患者中應當減輕目標疾病症狀。
“有效量”包含足以改善或預防醫學疾病的症狀或病症的量。有效量還意指足以允許或促進診斷的量。用於特定患者或獸醫學受試者的有效量可依據以下因素而變化:例如,待治療的病症、患者的總體健康情況、給藥的方法途徑和劑量以及副作用嚴重性。有效量可以是避免顯著副作用或毒性作用的最大劑量或給藥方案。
“置換”是指溶解抗體或ADC的溶劑體系的置換,例如,使用穩定製劑的緩衝體系經物理操作方式將含抗體或ADC的高鹽或高滲溶劑體系置換,從而使抗體蛋白存在於穩定製劑中。所稱物理操作方式包括但不限於超濾、透析或離心後複溶。
[實施例]
以下結合實施例進一步描述本披露,但這些實施例並非是對本披露範圍的限制。本披露實施例中未註明具體條件的實驗方法,通常按照常規條件,如參照冷泉港實驗室出版的《抗體技術實驗手冊》,《分子選殖手冊》;或按照原料或商品製造廠商所建議的條件。未註明具體來源的試劑,為市場購買的常規試劑。
一、抗體藥物偶聯物
抗Claudin18.2抗體的製備
實施例1-1:構建高表達Claudin18.2的細胞株
用Lipofectamine 3000轉染試劑,將pCDH-hClaudin18.2慢病毒表達載體質粒與pVSV-G或pCMV-dR8.91慢病毒系統包裝載體轉染至病毒包裝細胞293T
中;收集含有病毒的培養基上清,過濾並進行超高速離心;使用濃縮後的病毒感染人胃印戒細胞癌細胞株NUGC4,經puromycin篩選兩至三週,再進行FACS單細胞分選。
根據腫瘤IHC評分來區分Claudin18.2表達程度。與腫瘤IHC評分為3分的腫瘤Claudin18.2表達水平相當的細胞為高表達細胞,與腫瘤IHC評分為2分的腫瘤Claudin18.2表平水平相當的細胞為中等表達細胞。
根據藉由FACS檢測慢病毒感染的NUGC4細胞表面的Claudin18.2表達,挑選出Claudin18.2表達量高的NUGC4/hClaudin18.2單株細胞株。同時藉由FACS檢測野生型NUGC4細胞表面的Claudin18.2表達,挑選出Claudin18.2表達量中等的NUGC4純株細胞株,野生型NUGC4為Claudin18.2低表達量細胞。
將挑選出的單純株細胞株擴大培養,凍存備庫以便後續實驗。
Claudin18.2序列Genbank:NP_001002026(SEQ ID NO:1):
Claudin18.2 DNA序列(SEQ ID NO:2):
實施例1-2:抗人claudin18.2單株抗體產生
1 免疫
藉由免疫小鼠產生抗人Claudin18.2單株抗體。
實驗用SJL白小鼠,雌性,6-8週齡(北京維通利華實驗動物技術有限公司Charles River Laboratory Animal Technology Co.,Ltd.,Beijing;動物生產許可證號:SCXK(京)2012-0001)。飼養環境:SPF級。小鼠購進後,實驗室環境飼養1週,12/12小時光/暗週期調節,溫度20-25℃;濕度40-60%。將已適應環境的小鼠按以下方案免疫。免疫抗原為huClaudin18.2-HEK293細胞(轉染人Claudin18.2質粒的HEK-293穩轉細胞株)。
免疫方案:首次免疫細胞前,用TiterMax® Gold Adjuvant(Sigma Cat No.T2684)0.1ml/隻注射小鼠腹膜內(IP);半小時後每隻小鼠腹膜內(IP)注射0.1ml生理鹽水稀釋至1×108/ml濃度的細胞液。細胞吹散均勻後進行接種,時間為第0、14、28、42、56天。於第21,35,49,63天取血,用ELISA方法確定小鼠血清中的抗體滴度。在第4-5次免疫以後,選擇血清中抗體滴度高並且滴度趨於平臺的小鼠進行脾細胞融合。在進行脾細胞融合前3天加強免疫,腹膜內(IP)注射1×107細胞。
2 脾細胞融合
採用PEG介導的融合步驟將脾淋巴細胞與骨髓瘤細胞Sp2/0細胞(ATCC® CRL-8287TM)進行融合得到融合瘤細胞。融合瘤細胞以0.5-1×106/ml的密度用完全培養基(含20% FBS、1×HAT、1×OPI的IMDM培養基)重新懸浮,100μl/孔種於96孔板中,37℃,5%CO2孵育3-4天後,補充HAT完全培養基100μl/孔,繼續培養3-4天至形成純株。去除上清,加入200μl/孔的HT完全培養基(含20%FBS、1×HT和1×OPI的IMDM培養基),37℃,5%CO2培養3天後進行ELISA檢測。
3 融合瘤細胞篩選
根據融合瘤細胞生長密度,用結合ELISA方法檢測培養上清。選擇與huClaudin18.2-HEK293細胞結合能力強,同時與HEK293細胞沒有結合的細胞,及時進行擴增凍存;經過二到三次亞選殖直至獲得單細胞純株。
每次亞選殖細胞均需進行細胞結合實驗。藉由以上實驗篩選得到融合瘤純株,用無血清細胞培養法進一步製備抗體,按純化實例純化抗體,供在檢測例中使用。
實施例1-3:鼠源抗體的人源化
挑選出體外活性高的單純株融合瘤細胞株mAb1901,mAb1902;選殖其中的單株抗體序列,再進行人源化、重組表達和活性評價。
從融合瘤中選殖序列的過程如下。收集對數生長期融合瘤細胞,用Trizol(Invitrogen,15596-018)提取RNA(按照試劑盒說明書步驟)並進行反轉錄(PrimeScriptTM Reverse Transcriptase,Takara,cat# 2680A)。將反轉錄得到的cDNA採用mouse Ig-Primer Set(Novagen,TB326 Rev.B 0503)進行PCR擴增,送測序公司測序。得到的DNA序列對應的胺基酸序列SEQ ID NO:3-6所示:
mAb1901鼠源重鏈可變區(SEQ ID NO:3)
mAb1901鼠源輕鏈可變區(SEQ ID NO:4)
mAb1902鼠源重鏈可變區(SEQ ID NO:5)
mAb1902鼠源輕鏈可變區(SEQ ID NO:6)
上述鼠源重鏈可變區和輕鏈可變區分別與下述人IgG1抗體的重鏈恆定區和人源κ輕鏈恆定區連接形成嵌合抗體ch1901和ch1902。
各抗體的恆定區選自以下序列:
人IgG1抗體的重鏈恆定區:(SEQ ID NO:7)
人源κ輕鏈恆定區:(SEQ ID NO:8)
如本領域許多文獻公示的方法,對鼠源單株抗體進行人源化。簡言之,使用人恆定結構域替代親本(鼠源抗體)恆定結構域,根據鼠源抗體和人抗體的同源性選擇人種系抗體序列,進行CDR移植。本發明選擇活性好的候選分子進行人源化,結果如下。
1、鼠源抗體的CDR區
表1中VH/VL CDR的胺基酸殘基由Kabat編號系統確定並注釋。
鼠源抗體的CDR序列如表1所述:
2、選擇人種系FR區序列
在所獲得的鼠源抗體VH/VLCDR典型結構的基礎上,將重、輕鏈可變區序列與抗體Germline數據庫比較,獲得同源性高的人種系模板。其中人類種系輕鏈框架區來自人κ輕鏈基因。2.1 mAb1901的人源化改造和回復突變設計
選擇適當的人抗體種系,對mAb1901鼠源抗體進行人源化改造,將鼠源抗體mAb1901的CDR區移植到選擇的人源化模板上,替換人源化可變
區,再與IgG恆定區重組,形成完整抗體。同時,對人源化抗體的V區中FR區進行回復突變,示例性回復突變方式及組合如下:
*表格中所有胺基酸位置編號為Kabat編號規則的編號,重鏈可變區的N82T中,82為Kabat規則的第82A位。
上表中對應重鏈可變區與SEQ ID NO:7所示的人IgG1重鏈恆定區連接形成全長抗體的重鏈,輕鏈可變區與SEQ ID NO:8所示的人κ輕鏈恆定區連接形成全長抗體的輕鏈。在其他實施方案中,重鏈可變區和輕鏈可變區也可與其他重鏈恆定區和輕鏈恆定區分別連接形成全長抗體。
2.2 mAb1902的人源化改造和回復突變設計
選擇適當的人抗體種系,對mAb1902鼠源抗體進行人源化改造,將鼠源抗體mAb1902的CDR區移植到選擇的人源化模板上,替換人源化可變區,再與IgG恆定區重組,形成完整抗體。同時,對人源化抗體的V區中FR區進行回復突變,示例性回復突變方式及組合如下:
*表格中所有胺基酸位置編號為Kabat編號規則的編號。
上表中對應重鏈可變區與SEQ ID NO:7所示的人IgG1重鏈恆定區連接形成全長抗體的重鏈,輕鏈可變區與SEQ ID NO:8所示的人κ輕鏈恆定區連接形成全長抗體的輕鏈。
嵌合抗體ch1901
ch1901重鏈:(SEQ ID NO:35)
ch1901輕鏈:(SEQ ID NO:36)
嵌合抗體ch1902
ch1902重鏈:(SEQ ID NO:37)
ch1902輕鏈:(SEQ ID NO:38)
全長抗體輕重鏈序列如下所示:
全長抗體輕重鏈序列如下所示:
本披露陽性對照抗體為IMAB-362(來自WO2016166122)。
重鏈(SEQ ID NO:53)
輕鏈(SEQ ID NO:54)
用常規基因選植、重組表達的方法分別選植、表達、純化上述抗體。
抗Claudin18.2 ADC偶聯物的製備
藥物
本披露中抗Claudin18.2 ADC偶聯物的藥物部分可以是任意適宜的藥物。特別適宜的藥物描述於例如PCT公開號WO2020063676A1(藉由援引完整收入本文)。本披露的化合物9-A是N-((2R,10S)-10-苄基-2-環丙基-1-(((1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]吡喃并[3',4':6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-1-基)胺基)-1,6,9,12,15-五側氧-3-氧雜-5,8,11,14-四
氮雜十六-16-基)-6-(2,5-二側氧-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯胺,其具有如下的結構:
ADC原液藥物載量分析
1. UV-HPLC方法
將裝有琥珀酸鈉緩衝液的比色皿分別置於參比吸收池和樣品測定吸收池中後,扣除溶劑空白後,再將裝有待測樣品溶液的比色皿置於樣品測定吸收池中,測定280nm和370nm處吸光度。
結果計算:採用紫外分光光度法(使用儀器:Thermo nanodrop2000紫外分光光度計)測定ADC原液載量,其原理是在某波長下ADC原液的總吸光值等於藥物與單株抗體在該波長下吸光值的加和,即:
(1)A280nm=εmab-280bCmab+εDrug-280bCDrug
εDrug-280:藥物在280nm平均莫耳消光係數5100;
CDrug:藥物的濃度;
εmab-280:單抗原液在280nm平均莫耳消光係數214600;
Cmab:單抗原液的濃度;
b:光程長度為1cm。
同理可以得到樣品在370nm下的總吸光值方程:
(2)A370nm=εmab-370bCmab+εDrug-370bCDrug
εDrug-370:藥物在370nm平均莫耳消光係數19000;
CDrug:藥物的濃度;
εmab-370:單抗原液在370nm消光係數為0;
Cmab:單抗原液的濃度;
b:光程長度為1cm。
由(1)和(2)兩種方程結合單株抗體和藥物在兩個檢測波長下的消光係數和濃度數據可以計算出藥物的載量。
藥物載量=CDrug/Cmab。
2.RP-HPLC方法
裸抗體和待測ADC樣品(濃度為1mg/ml),加入4μl DDT(sigma)還原,37℃水浴1小時,結束後取出到內插管中。使用高效液相色譜儀Agilent 1200進行檢測,色譜管柱選用Agilent PLRP-S 1000A 8μm 4.6*250mm,管柱溫:80℃;DAD檢測器波長280nm;流速:1mL/min;進樣量為:40μL;之後藉由樣品與裸抗體的譜圖比對,區分出輕重鏈的位置,然後對檢測樣品的譜圖進行積分,計算出DAR值。
溶液配製:
1)0.25M DTT溶液:
配製示例:取DTT 5.78mg,加入150μl純化水充分溶解後,配得0.25M DTT溶液,-20℃保存。
2)流動相A(0.1% TFA水溶液):
配製示例:量筒量取1000ml純化水,加入1mL TFA(sigma),充分混勻後使用,2-8℃保存14天。
3)流動相B(0.1% TFA乙腈溶液):
配製示例:量筒量取1000ml乙腈,加入1mL TFA,充分混勻後使用,2-8℃保存14天。
數據分析:
藉由樣品與裸抗體的譜圖比對,區分出輕鏈與重鏈的位置,然後對檢測樣品的譜圖進行積分,計算出DAR值。
計算公式如下:
LC峰面積總和=LC峰面積+LC+1峰面積;
HC峰面積總和=HC峰面積+HC+1峰面積+HC+2峰面積+HC+3峰面積;
LC DAR=Σ(連接藥物數*峰面積百分比)/LC峰面積總和;
HC DAR=Σ(連接藥物數*峰面積百分比)/HC峰面積總和;
DAR=LC DAR+HC DAR。
實施例1-4:ADC-1/ADC-2
在37℃條件下,向含抗體h1902-5的PBS緩衝液(pH=6.5、0.05M的PBS緩衝液;10.0mg/mL,320.0mL,21.62μmol)加入三(2-羧乙基)膦(TCEP)的水溶液(10mM,11.03mL,110.3μmol),置於水浴振盪器,於37℃下振盪反應3小時,停止反應。
將反應液用水浴降溫至25℃,再將化合物9-A(350mg,303mol)溶解於13.2ml乙腈和6.6ml DMSO中後加入到反應液中,置於水浴振盪器,於25℃下振盪反應3小時,停止反應。
反應液藉由超濾膜純化,除去小分子。純化先後採用5L的50mM pH=6.5 PBS緩衝液(4%乙腈2% DMSO)和5L的10mM pH=5.3琥珀酸緩衝液。隨後在經純化的溶液中加入蔗糖至60mg/mL、吐溫-20至0.2mg/mL,製備得到ADC-1(10mM、pH=5.3的琥珀酸緩衝液;10mg/mL,2.626g),收率:81.81%。後製成20mg/瓶的凍乾粉。
UV-HPLC計算平均值:n=6.8。
使用上述方法,可以用抗體h1901-11代替h1902-5,和化合物9-A製備得到ADC-2,n=7.1。
實施例1-5:ADC-3
在37℃條件下,向含抗體h1901-11的PBS緩衝水溶液(pH=6.5的0.05M的PBS緩衝水溶液;10.0mg/mL,1mL,67.5nmol)加入配置好的TCEP水溶液(10mM,10.1μL,101nmol),置於水浴振盪器,於37℃下振盪反應3小時,停止反應。將反應液用水浴降溫至25℃。
將化合物9-A(0.58mg,540nmol)溶解於34μl DMSO中,加入到上述反應液中,置於水浴振盪器,於25℃下振盪反應3小時,停止反應。將反應液用Sephadex G25凝膠管柱脫鹽純化(沖提相:pH為6.5的0.05M的PBS緩衝水溶液,含0.001M的EDTA),得到ADC-3的PBS緩衝液(0.72mg/mL,11.2mL),於4℃儲存。RP-HPLC計算平均值:n=2.51。
實施例1-6:ADC-4
在37℃條件下,向含抗體h1901-11的PBS緩衝水溶液(pH=6.5的0.05M的PBS緩衝水溶液;10.0mg/mL,1mL,67.5nmol)加入配置好的TCEP水溶液(10mM,16.9μL,169nmol),置於水浴振盪器,於37℃下振盪反應3小時,停止反應。將反應液用水浴降溫至25℃。
將化合物9-A(0.73mg,680nmol)溶解於43μl DMSO中,加入到上述反應液中,置於水浴振盪器,於25℃下振盪反應3小時,停止反應。將反應液用Sephadex G25凝膠管柱脫鹽純化(沖提相:pH為6.5的0.05M的PBS緩衝水溶液,含0.001M的EDTA),得到ADC-4的PBS緩衝液(0.62mg/mL,12.5mL),於4℃儲存。RP-HPLC計算平均值:n=4.06。
實施例1-7:ADC-5
在37℃條件下,向抗體h1901-11的PBS緩衝水溶液(pH=6.5的0.05M的PBS緩衝水溶液;10.0mg/mL,1mL,67.5nmol)加入配置好的TCEP水溶液(10mM,35.8μL,358nmol),置於水浴振盪器,於37℃下振盪反應3小時,停止反應。將反應液用水浴降溫至25℃。
將化合物9-A(1.09mg,1015nmol)溶解於64μl DMSO中,加入到上述反應液中,置於水浴振盪器,於25℃下振盪反應3小時,停止反應。將反
應液用Sephadex G25凝膠管柱脫鹽純化(沖提相:pH為6.5的0.05M的PBS緩衝水溶液,含0.001M的EDTA),得到ADC-5的PBS緩衝液(0.54mg/mL,12.5mL),於4℃儲存。RP-HPLC計算平均值:n=6.8。
實施例1-8:ADC-6
在37℃條件下,向抗體h1902-5的PBS緩衝水溶液(pH=6.5的0.05M的PBS緩衝水溶液;10.0mg/mL,1.08mL,72.9nmol)加入配置好的TCEP水溶液(10mM,10.9μL,109nmol),置於水浴振盪器,於37℃下振盪反應3小時,停止反應。將反應液用水浴降溫至25℃。
將化合物9-A(0.63mg,587nmol)溶解於40μl DMSO中,加入到上述反應液中,置於水浴振盪器,於25℃下振盪反應3小時,停止反應。將反應液用Sephadex G25凝膠管柱脫鹽純化(沖提相:pH為6.5的0.05M的PBS緩衝水溶液,含0.001M的EDTA),得到ADC-6的PBS緩衝液(0.7mg/mL,13.0mL),於4℃儲存。RP-HPLC計算平均值:n=2.69。
實施例1-9:ADC-7
在37℃條件下,向抗體h1902-5的PBS緩衝水溶液(pH=6.5的0.05M的PBS緩衝水溶液;10.0mg/mL,1.08mL,72.9nmol)加入配置好的TCEP水溶液(10mM,18.3μL,183nmol),置於水浴振盪器,於37℃下振盪反應3小時,停止反應。將反應液用水浴降溫至25℃。
將化合物9-A(0.79mg,736nmol)溶解於50μl DMSO中,加入到上述反應液中,置於水浴振盪器,於25℃下振盪反應3小時,停止反應。將反應液用Sephadex G25凝膠管柱脫鹽純化(沖提相:pH為6.5的0.05M的PBS緩
衝水溶液,含0.001M的EDTA),得到ADC-7的PBS緩衝液(0.6mg/mL,14.0mL),於4℃儲存。RP-HPLC計算平均值:n=4.25。
實施例1-10:ADC-8
在37℃條件下,向抗體h1902-5的PBS緩衝水溶液(pH=6.5的0.05M的PBS緩衝水溶液;10.0mg/mL,1.08mL,72.9nmol)加入配置好的TCEP水溶液(10mM,38.7μL,387nmol),置於水浴振盪器,於37℃下振盪反應3小時,停止反應。將反應液用水浴降溫至25℃。
將化合物9-A(1.18mg,1099nmol)溶解於70μl DMSO中,加入到上述反應液中,置於水浴振盪器,於25℃下振盪反應3小時,停止反應。將反應液用Sephadex G25凝膠管柱脫鹽純化(沖提相:pH為6.5的0.05M的PBS緩衝水溶液,含0.001M的EDTA),得到ADC-8的PBS緩衝液(0.56mg/mL,14.2mL),於4℃儲存。RP-HPLC計算平均值:n=7.01。
實施例1-11:ADC-9
在12℃條件下,向含抗體h1902-5的組胺酸-醋酸-Tris/EDTA緩衝液(pH 7.2的10mM組胺酸-醋酸-Tris和2.5mM EDTA的緩衝液;20.6g/L,6.49L,0.91mmol)中加入配製好的TCEP組胺酸緩衝液(10mM組胺酸緩衝液;1.717mM,1.16L1.99mmol),置於恆溫水浴鍋中,於12℃下攪拌反應2小時,停止反應,得到中間體I溶液。
將化合物9-A(4.72g,4.39mmol)溶解於0.38L DMSO中,生成化合物9-A的DMSO溶液。向上述中間體I溶液中預加0.38L DMSO,再加入上述化合物9-A的DMSO溶液,置於恆溫水浴鍋中,於12℃下攪拌反應1小時,停止反應。
將上述反應液經Capto S Impact陽離子層析管柱純化,分別用9個管柱體積的含有10%(v/v)DMSO的0.05M醋酸緩衝液(pH=5.0)和6個管柱體積0.05M醋酸緩衝液(pH=5.0)洗滌,再用0.05M醋酸、0.30M氯化鈉緩衝液(pH=5.5)進行沖提,去除反應液中游離毒素和殘留溶劑。在22℃下,將陽離子沖提液進行7倍體積等體積超濾(超濾膜包採用30KD的聚纖維素膜包)得到產物ADC-9。RP-HPLC計算平均值:n=4.1。
生物學評價
測試例1:細胞Cell水平ELISA結合實驗
基於細胞的ELISA實驗被用來檢測Claudin18.2抗體的結合特性。將穩轉表達Claudin18.2的NUGC4細胞培養於96孔細胞板(Corning,3599)中,待生長至90%密度時加入4%多聚甲醛固定細胞1小時,用PBST緩衝液(pH 7.4 PBS含0.05% Tween-20)洗板3次後,加入用PBS稀釋的5%脫脂牛奶(光明脫脂奶粉)封閉液200μl/孔,37℃孵育箱孵育2.5小時或4℃放置過夜(16-18小時)進行封閉。封閉結束後,棄去封閉液,並用PBST緩衝液洗板3次後,加入50μl/孔用樣品稀釋液(pH7.4 PBS含1%脫脂乳)稀釋的不同濃度待測抗體,放於37℃孵育箱孵育2小時。孵育結束後用PBST洗板5次,加入100μl/孔用樣品稀釋液稀釋的HRP標記的羊抗人二抗(Jackson Immuno Research,109-035-003),37℃孵育1小時。用PBST洗板6次後,加入50μl/孔TMB顯色底物(KPL,52-00-03),於室溫孵育10-15min,加入50μl/孔1M H2SO4終止反應,用MD Versa Max TM酶標儀在450nm處讀取吸收值,計算Claudin18.2抗體對Claudin18.2的結合EC50值。
測試例2:抗體細胞水平結合實驗
將穩轉表達Claudin18.2的NUGC4細胞用FACS緩衝液(2%胎牛血清(Gibco,10099141)pH7.4 PBS(Sigma,P4417-100TAB))製備成1×106/ml的細胞懸液,100μl/孔加入96孔圓底板(Corning,3795)中。離心去除上清後加入50μl/孔用FACS緩衝液稀釋的不同濃度待測Claudin18.2抗體,放於4℃冰箱中避光孵育1小時。以FACS緩衝液300g離心洗滌3次後,加入工作濃度的Alexa Fluor 488包被的抗人IgG(H+L)(invitrogen,A-11013),放於4℃冰箱中避光孵育40分鐘。以FACS緩衝液300g離心洗滌3次後,在BD FACS CantoII流式細胞儀上檢測幾何平均
數螢光強度,計算Claudin18.2抗體對穩轉表達Claudin18.2的NUGC4細胞的結合EC50值,結果見圖1。
測試例3:抗體內吞實驗
將預標記了DyLight 488 NHS Ester(thermofisher,46403)的待測Claudin18.2抗體,以5μg/ml終濃度加入1×106/ml穩轉表達Claudin18.2的NUGC4細胞中,放於冰上避光孵育1小時,以預冷的FACS緩衝液(pH7.4 PBS,2%胎牛血清)離心洗滌3次,去上清後加入預熱的完全培養基,放入37℃ 5% CO2細胞培養箱。分別在0、0.5、1、2、4小時後取出細胞,放置於冰上避光保存。待樣品全部收集後,300g低溫離心去除上清,加入沖提緩衝液(pH1.7 0.05M甘胺酸,0.1M氯化鈉)後,室溫孵育7分鐘,以FACS緩衝液300g離心洗滌1次,在BD FACS CantoII流式細胞儀上檢測幾何平均數螢光強度,計算Claudin18.2抗體對穩轉表達Claudin18.2的NUGC4細胞的內吞效率。結果顯示(見圖2),人源化抗體具有良好的細胞內吞效率。
測試例4:基於流式細胞技術測定抗體親和力
實驗當天收集HEK293/hClaudin18.2細胞於U底96孔板中,每孔1×105至2×105個細胞。加入起始濃度5μg/ml,2×梯度稀釋(12個濃度點)的Claudin18.2抗體,4℃孵育1小時,陽性對照為IMAB362,同時設置不加抗體的陰性對照。離心去除抗體,再加入100μl/孔FITC抗人IgG Fc抗體(200×),4℃避光孵育30分鐘,用PBS+2%FBS清洗兩遍後準備進行流式細胞檢測。啟動BD FACS CantoII,預熱完成後打開BD FACSDiva軟體,建立一個新的實驗,檢測HEK293/hClaudin18.2陰性對照樣品,調節FSC及SSC電壓至適當的數值並保存。根據QuantumTM FITC-5 MESF Kit說明書,分別檢測空白樣品B及標準曲線
1,調節FITC電壓至適當的數值並保存。在保存的電壓下檢測U底96孔板中的樣品,記錄數據。使用Flowjo軟體分析實驗數據得到Geo Mean數值,根據QuantumTM FITC-5 MESF Kit說明書擬合MESF-Geo Mean標準曲線,根據FITC抗人IgG Fc抗體的濃度螢光值計算出與HEK293/hClaudin18.2細胞結合的Claudin18.2抗體的莫耳濃度及游離抗體濃度,利用Scatchard作圖法計算抗體的Bmax和解離常數KD。結果見表14。
測試例5:抗體的ADCC效應評價
消化各種NUGC4細胞(高中低表達Claudin18.2),1000rpm離心後,重新懸浮計數。將細胞以3×105細胞/ml的密度重新懸浮在添加10% FBS(新西蘭超低IgG胎牛血清,Gibco,1921005PJ)的無酚紅RPMI 1640中(Gibco,11835-030)。在96孔板(Corning,3903)中,每孔加入25μl細胞(7500個/孔)。將抗體稀釋在上述無酚紅培養基中,配製成3×的抗體稀釋液,向細胞板中加入25μl/孔的抗體。在37℃、5% CO2培養箱中孵育0.5小時。
收集效應細胞(FcrR3A-V158-NFAT-RE-Jurkat細胞),1000rpm離心後,重新懸浮計數。將細胞以3×106細胞/ml的密度重新懸浮在添加10%FBS(新西蘭超低IgG胎牛血清)的無酚紅RPMI 1640中,在實驗板中每孔加入25μl細胞(7.5×104個細胞/孔)。在37℃、5% CO2培養箱中孵育6小時。
向實驗板的每個孔中加入75μl/孔的Bright-Glo(Promega,E2610),用酶標儀(PerkinElmer,VITOR3)檢測化學發光(luminescence)。
結果顯示(見表15和圖3A-圖3C),在低(圖3A)-中(圖3B)-高(圖3C)不同程度Claudin18.2表達的NUGC4細胞中,抗體h1901-11和h1902-5均顯示出很強的ADCC活性。
測試例6:ADC分子細胞活性實驗
本實驗藉由利用CellTiter-Glo Luminescence Cell Viability Assay檢測ADC分子在體外對人胃癌細胞株的殺傷作用。第一天,收集NUGC4-claudin18.2低表達,NUGC4-claudin18.2中表達,NUGC4-claudin18.2高表達細胞,調整密度為2.5×104/ml,在96孔白色透明底板中加入90μl/孔,約為2500個細胞每孔。37℃,5% CO2培養箱過夜培養。第二天,在U底96孔板中稀釋樣品,起始濃度為5μM,4×梯度稀釋,9個濃度點,向細胞板中加入10μl/well稀釋好的樣品。37℃,5% CO2培養6天。第八天,取出細胞培養板,加入50μl/well Cell Titer-Glo Reagent,室溫放置2至3分鐘,在PHERAstar FS microplate reader上讀取luminescence數值。利用GraphPad Prism軟體進行數據分析。見表16。
測試例7:ADC分子體內藥效評價
Balb/c裸在右肋部皮下接種人胃癌細胞NUGC4(Claudin18.2中等表達)細胞(5×106含50% matrigel基質膠/隻),第0日分組,8隻/組,共8組。平均瘤體積約84.41mm3。
ADC腹腔注射,共給藥3次,每隻按體重注射10g/0.1ml,分別於第0日,4日,11日給藥。
分組當天ADC腹腔注射,共給藥4次,間隔5天給藥,每隻按體重注射10g/0.1ml。
每週測量2次瘤體積和體重,記錄數據。
使用Excel 2003統計軟體:平均值以avg計算;SD值以STDEV計算;SEM值以STDEV/SQRT計算;組間差異P值以TTEST計算。
腫瘤體積(V)計算公式為:V=1/2×L長×L短 2
相對體積(RTV)=VT/V0
抑瘤率(%)=(CRTV-TRTV)/CRTV(%)
其中V0、VT分別為實驗開始時(首次給藥當天為第0天)及實驗結束時的腫瘤體積。CRTV、TRTV分別為實驗結束時的空白對照組(Vehicle)及實驗組的相對腫瘤體積。結果見表17和圖4、圖5。
vs空白對照組:**p<0.01。
二、製劑
製劑製備與檢測過程中使用的設備及結果計算方法如下:
SEC分子排阻色譜法:
根據凝膠孔隙的孔徑大小與高分子樣品分子的線團尺寸間的相對關係而對溶質進行分離的分析的方法。
SEC%(SEC單體含量百分比)=A單體/A總*100%(A單體為樣品中主峰單體的峰面積,A總為所有峰面積之和)。
SEC測定用儀器:安捷倫1260;管柱:waters,XBrige BEH200Å SEC(300×7.8mm 3.5μm)。
CE毛細管凝膠電泳:
將凝膠移到毛細管中作為支持介質進行的一種電泳,並在一定的電壓下根據樣品分子量的大小進行分離的方法。
還原CE純度百分比=A主峰/A總*100%(A主峰為樣品中輕鏈主峰+重鏈主峰的峰面積,A總為所有峰面積之和。
CE測定用儀器:Beckman型號plus800。
滲透壓測定:
冰點法測定滲透壓,以冰點下降值與溶液的莫耳濃度成正比例關係為基礎,採用高靈敏度感溫元件,測定溶液結冰點,藉由電量轉化為滲透壓。儀器廠家羅澤Loser,型號OM815。
蛋白濃度測定:
因為抗體藥物偶聯物中的藥物在280nm下有吸收,用以下公式對蛋白濃度進行校正,
A280=Cd*ε280d+Cmab*ε280mab;
A370=Cc*ε370d;
Cd代表藥物的濃度,Cmab代表蛋白的濃度,ε280d代表藥物在280nm下的消光係數,ε280mab代表蛋白在280nm下的消光係數,ε370d代表藥物在370nm下的消光係數。ε280mab=1.49mg-1*cm-1*ml,ε280d=5000(280nm藥物莫耳消光係數)/1074.13(藥物分子量)=4.65mg-1*cm-1*mL,ε370d=19000(370nm藥物莫耳消光係數)/1074.13(藥物分子量)=17.69mg-1*cm-1*mL,以上消光係數為質量消光係數。
蛋白濃度測定儀器:紫外可見分光光度計,型號:Nano Drop oneC,光程為1mm。
實施例2-1:製劑緩衝體系與pH值的篩選
配製含有20mg/mL(蛋白濃度)的ADC-9和以下不同緩衝體系,以及0.1mg/mL聚山梨酯80(PS80)的製劑。
1)10mM檸檬酸-檸檬酸鈉(CA),pH 5.5
2)10mM琥珀酸-琥珀酸鈉(SA),pH 5.0
3)10mM琥珀酸-琥珀酸鈉,pH 5.5
4)10mM組胺酸鹽酸鹽(His-HCl),pH 5.5
5)10mM組胺酸鹽酸鹽,pH 6.0
6)10mM組胺酸鹽酸鹽,pH 6.5
7)10mM組胺酸-醋酸鹽(His-AA).pH 5.0
8)10mM組胺酸-醋酸鹽,pH 5.5
9)10mM磷酸鹽(PB),pH 6.5。
將每種製劑過濾,灌裝,加塞,軋蓋,取樣品進行高溫穩定性(40℃)、振搖(25℃,300rpm)研究,考察外觀、SEC、還原CE。結果見表18。
振搖11天後,只有2)、3)、7)、9)號樣品外觀澄明;40℃放置15天後,1)、2)、3)、7)、8)號樣品外觀澄明。即從外觀的角度看,2)、3)、7)號樣品的製劑較優。
40℃放置15天後,採用SEC檢測樣品,結果顯示:4)、5)、6)、7)、8)號樣品的單體降低幅度在4%左右;其他製劑單體降低幅度為7%-10%。
40℃放置15天後,採用還原CE檢測樣品,結果顯示:4)、5)、7)、8)號樣品的主峰下降幅度在1%-2%左右,優於其他樣品。
綜合以上數據,7)號樣品即10mM His-AA,pH 5.0製劑從外觀及各化學檢測項均優於其餘製劑,因此選擇10mM His-AA,pH 5.0為最終緩衝液。
註:表中“D”表示天,例如D3表示3天,以此類推;D0表示實驗開始時,下同。
實施例2-2:表面活性劑種類及濃度篩選
製備含有不同型號和濃度聚山梨酯,且含有10mM His-AA,pH 5.0的緩衝液、80mg/mL蔗糖和蛋白濃度為20mg/mL的ADC-9的製劑。將每種製劑過濾,灌裝,加塞,軋蓋。將樣品進行高溫穩定性研究(40℃)和凍融研究。其中凍融研究為凍融5次循環(FT5C,35℃-2至8℃)後室溫放置三天(25℃ D3),考察外觀、SEC、還原CE,具體製劑設計見表19。
結果見表20,實驗結果顯示採用0.2mg/ml PS80的製劑在各條件下外觀和化學檢測項為最優。
綜合以上結果,表面活性劑種類及濃度定為0.2mg/ml PS80。
表19. 聚山梨酯種類及濃度篩選製劑
註:PS20表示聚山梨酯20。
備註:表中“M”表示月,M1表示1個月,以此類推,下同。
實施例2-3:糖種類篩選
製備分別含有蔗糖、海藻糖、甘露醇的製劑,其還含有10mM His-AA(pH 5.0)緩衝液、0.2mg/mL PS80和20mg/mL(蛋白濃度)的ADC-9。將每種製劑過濾,灌裝,加塞,軋蓋。將樣品進行高溫穩定性研究(40℃)、-35℃/4℃凍融循環並在室溫放置3天研究,考察外觀、SEC、還原CE。
結果見表21。在不同糖種類製劑凍融條件下,採用蔗糖的樣品的外觀優於採用海藻糖或甘露醇的樣品。SEC檢測結果顯示,採用蔗糖或海藻糖的
樣品優於甘露醇;40℃放置一個月後,採用蔗糖的樣品的外觀優於採用海藻糖或甘露醇的樣品,SEC和還原CE的檢測結果也顯示採用蔗糖的樣品略優於採用海藻糖的樣品。
製備分別含有蔗糖、海藻糖、甘露醇的製劑,其還含有10mM His-AA(pH 5.0)緩衝液、0.2mg/mL PS80和20mg/mL(蛋白濃度)的ADC-9。將每種製劑過濾、灌裝、半加塞、凍乾、加塞、軋蓋,放置高溫穩定性研究(40℃)考察外觀、SEC、還原CE。凍乾工藝參見表22的凍乾工藝參數1。
40℃放置一個月後,SEC的檢測結果(見表23)顯示採用蔗糖的樣品略優於採用海藻糖的樣品,更優於採用甘露醇的樣品,還原CE的檢測結果(見表23)顯示,採用蔗糖的樣品和採用海藻糖的樣品相當,同時優於採用甘露醇的樣品。
實施例2-4:凍乾後樣品外觀優化實驗
按照10mM His-AA,pH 5.0、80mg/mL蔗糖、0.2mg/mL PS80和20mg/mL(蛋白濃度)ADC-9配製原液,過濾灌裝後按照凍乾工藝參數1凍乾(見表22),考察凍乾後樣品外觀。凍乾樣品為表面平整白色粉餅,但粉餅底部邊緣略有縮小。
將樣品的糖濃度進一步下調至60mg/mL,按照10mM His-AA,pH5.0、60mg/mL蔗糖、0.2mg/mL PS80和20mg/mL(蛋白濃度)ADC-9配製原液,過濾灌裝後按照表22的凍乾工藝參數1凍乾。凍乾後,粉餅表面平整無皺縮,粉餅底部邊緣略有縮底。
將糖濃度降至40mg/ml,但此時成品滲透壓過低,在臨床給藥時有滲透壓偏低的風險,為了保證成品滲透壓,將緩衝液離子強度提高至30mM。按照30mM His-AA,pH 5.0、40mg/mL蔗糖、0.2mg/mL PS80和20mg/mL(蛋白濃度)ADC-9配製原液,過濾灌裝後繼續按照凍乾工藝參數1凍乾。凍乾後樣品粉餅表面平整無塌陷,粉餅底部邊緣完整。
三種製劑的結果見表24。
實施例2-5:凍乾後樣品穩定性
按照表25中的製劑配製原液,過濾灌裝後按照凍乾工藝參數1凍乾(見表22),將凍乾後樣品於40℃ M1條件下放置後複溶檢測其穩定性變化。
穩定性結果顯示見表25,3號製劑的凍乾樣品在40℃ M1條件下還原CE下降約3.7%,其餘兩製劑各化學檢測項均無明顯變化,穩定性明顯優於3號製劑。2號製劑凍乾前原液的pH為5.04,凍乾後複溶溶液的pH為5.27。
實施例2-6:凍乾製劑溶液劑穩定性
按照表26中的製劑製備製劑,過濾,灌裝,加塞,軋蓋後進行-35℃/4℃凍融循環並在室溫放置3天研究,振搖11天研究和高溫穩定性研究(40℃),考察對應條件下樣品外觀,SEC和還原CE變化。
穩定性結果顯示見表26,在降低蔗糖濃度和提高緩衝液離子強度後,2號製劑在外觀和純度項變化上與1號製劑無明顯差異,在高溫條件下還原CE降幅略優於1號製劑。
<110> 江蘇恆瑞醫藥股份有限公司(JIANGSU HENGRUI MEDICINE CO.,LTD.) 上海恆瑞醫藥有限公司(SHANGHAI HENFRUI PHARMACEUTICAL CO.,LTD.)
<120> 一種含抗體藥物偶聯物的醫藥組成物及其用途
<130> 721106CGTW
<150> 202011061863.1
<151> 2020-09-30
<150> 202111069020.0
<151> 2021-09-13
<160> 55
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 261
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<220>
<221> 肽
<223> Claudin18.2蛋白
<400> 1
<210> 2
<211> 3350
<212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<220>
<221> 基因
<223> Claudin18.2
<400> 2
<210> 3
<211> 120
<212> PRT
<213> 小鼠(Mus musculus)
<220>
<221> 結構域
<223> mAb1901鼠源抗體重鏈可變區
<400> 3
<210> 4
<211> 113
<212> PRT
<213> 小鼠(Mus musculus)
<220>
<221> 結構域
<223> mAb1901鼠源抗體輕鏈可變區
<400> 4
<210> 5
<211> 118
<212> PRT
<213> 小鼠(Mus musculus)
<220>
<221> 結構域
<223> mAb1902鼠源抗體重鏈可變區
<400> 5
<210> 6
<211> 113
<212> PRT
<213> 小鼠(Mus musculus)
<220>
<221> 結構域
<223> mAb1902鼠源抗體輕鏈可變區
<400> 6
<210> 7
<211> 330
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<220>
<221> 結構域
<223> 人IgG1抗體的重鏈恆定區
<400> 7
<210> 8
<211> 107
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<220>
<221> 結構域
<223> 人源抗體κ輕鏈恆定區
<400> 8
<210> 9
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 結構域
<223> mAb1901 HCDR1
<400> 9
<210> 10
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 結構域
<223> mAb1901 HCDR2
<400> 10
<210> 11
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 結構域
<223> mAb1901 HCDR3
<400> 11
<210> 12
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 結構域
<223> mAb1901 LCDR1
<400> 12
<210> 13
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 結構域
<223> mAb1901 LCDR2
<400> 13
<210> 14
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 結構域
<223> mAb1901 LCDR3
<400> 14
<210> 15
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 結構域
<223> mAb1902 HCDR1
<400> 15
<210> 16
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 結構域
<223> mAb1902 HCDR2
<400> 16
<210> 17
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 結構域
<223> mAb1902 HCDR3
<400> 17
<210> 18
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 結構域
<223> mAb1902 LCDR1
<400> 18
<210> 19
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 結構域
<223> mAb1902 LCDR2
<400> 19
<210> 20
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 結構域
<223> mAb1902 LCDR3
<400> 20
<210> 21
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 結構域
<223> VL1
<400> 21
<210> 22
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 結構域
<223> VL2
<400> 22
<210> 23
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 結構域
<223> VL3
<400> 23
<210> 24
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 結構域
<223> VH1
<400> 24
<210> 25
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificiel Sequence)
<220>
<221> 結構域
<223> VH2
<400> 25
<210> 26
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 結構域
<223> VH3
<400> 26
<210> 27
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 結構域
<223> VH4
<400> 27
<210> 28
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 結構域
<223> VL11
<400> 28
<210> 29
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 結構域
<223> VL12
<400> 29
<210> 30
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 結構域
<223> VL13
<400> 30
<210> 31
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 結構域
<223> VH11
<400> 31
<210> 32
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 結構域
<223> VH12
<400> 32
<210> 33
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 結構域
<223> VH13
<400> 33
<210> 34
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 結構域
<223> VH14
<400> 34
<210> 35
<211> 450
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 鏈
<223> ch1901重鏈
<400> 35
<210> 36
<211> 220
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 鏈
<223> ch1901輕鏈
<400> 36
<210> 37
<211> 448
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 鏈
<223> ch1902重鏈
<400> 37
<210> 38
<211> 220
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 鏈
<223> ch1902輕鏈
<400> 38
<210> 39
<211> 220
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 鏈
<223> L1
<400> 39
<210> 40
<211> 220
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 鏈
<223> L2
<400> 40
<210> 41
<211> 220
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 鏈
<223> L3
<400> 41
<210> 42
<211> 450
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 鏈
<223> H1
<400> 42
<210> 43
<211> 450
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 鏈
<223> H2
<400> 43
<210> 44
<211> 450
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 鏈
<223> H3
<400> 44
<210> 45
<211> 450
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 鏈
<223> H4
<400> 45
<210> 46
<211> 220
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 鏈
<223> L11
<400> 46
<210> 47
<211> 220
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 鏈
<223> L12
<400> 47
<210> 48
<211> 220
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 鏈
<223> L13
<400> 48
<210> 49
<211> 448
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 鏈
<223> H11
<400> 49
<210> 50
<211> 448
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 鏈
<223> H12
<400> 50
<210> 51
<211> 448
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 鏈
<223> H13
<400> 51
<210> 52
<211> 448
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 鏈
<223> H14
<400> 52
<210> 53
<211> 448
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 鏈
<223> IMAB-362重鏈
<400> 53
<210> 54
<211> 220
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 鏈
<223> IMAB-362輕鏈
<400> 54
<210> 55
<211> 4
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 四肽接頭
<400> 55
Claims (18)
- 一種醫藥組成物,包含抗Claudin18.2抗體藥物偶聯物和緩衝劑,其中該抗Claudin18.2抗體藥物偶聯物中的抗Claudin18.2抗體包含重鏈可變區和輕鏈可變區,其中,i)該重鏈可變區與如SEQ ID NO:5所示的重鏈可變區具有相同胺基酸序列的HCDR1、HCDR2和HCDR3,該輕鏈可變區包含與如SEQ ID NO:6所示的輕鏈可變區具有相同胺基酸序列的LCDR1、LCDR2和LCDR3;或ii)該重鏈可變區與如SEQ ID NO:3所示的重鏈可變區具有相同胺基酸序列的HCDR1、HCDR2和HCDR3,該輕鏈可變區與如SEQ ID NO:4所示的輕鏈可變區具有相同胺基酸序列的LCDR1、LCDR2和LCDR3;該緩衝劑是組胺酸鹽緩衝劑,較佳為組胺酸-醋酸鹽緩衝劑。
- 如請求項1所述的醫藥組成物,其中該抗Claudin18.2抗體包含重鏈可變區和輕鏈可變區,其中,iii)該重鏈可變區包含分別如SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:16和SEQ ID NO:17所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3,該輕鏈可變區包含分別如SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:19和SEQ ID NO:20所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3;或iv)該重鏈可變區包含分別如SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:10和SEQ ID NO:11所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3,該輕鏈可變區包含分別如SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:13和SEQ ID NO:14所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3;較佳地,該抗Claudin18.2抗體包含重鏈可變區和輕鏈可變區,其中,v)該重鏈可變區如SEQ ID NO:31所示和該輕鏈可變區如SEQ ID NO:29所示;或vi)該重鏈可變區如SEQ ID NO:26所示和該輕鏈可變區如SEQ ID NO:23所示;更佳地,該抗Claudin18.2抗體包含:vii)SEQ ID NO:49所示的重鏈,和SEQ ID NO:47所示的輕鏈;或viii)SEQ ID NO:44所示的重鏈,和SEQ ID NO:41所示的輕鏈。
- 如請求項1或2所述的醫藥組成物,其中該抗Claudin18.2抗體藥物偶聯物具有如通式(Pc-L-Y-D)所示的結構:其中,Y 選自-O-(CRaRb)m-CR1R2-C(O)-、-O-CR1R2-(CRaRb)m-、-O-CR1R2-、-NH-(CRaRb)m-CR1R2-C(O)-和-S-(CRaRb)m-CR1R2-C(O)-;Ra和Rb相同或不同,且各自獨立地選自氫原子、氘原子、鹵素、烷基、鹵烷基、氘代烷基、烷氧基、羥基、胺基、氰基、硝基、羥烷基、環烷基和雜環基;或者,Ra和Rb與其相連接的碳原子一起形成環烷基或雜環基;R1選自鹵素、鹵烷基、氘代烷基、環烷基、環烷基烷基、烷氧基烷基、雜環基、芳基和雜芳基;R2選自氫原子、鹵素、鹵烷基、氘代烷基、環烷基、環烷基烷基、烷氧基烷基、雜環基、芳基和雜芳基;或者,R1和R2與其相連接的碳原子一起形成環烷基或雜環基;或者,Ra和R2與其相連接的碳原子一起形成環烷基或雜環基;m為0至4的整數;n为1至10,n是小数或整數;L為接頭單元;Pc為抗Claudin18.2抗體;較佳地,該抗Claudin18.2抗體藥物偶聯物具有如下式所示的結構:其中,n為2至8,n是小數或整數;Pc為抗Claudin18.2抗體。
- 如請求項1至3任一項所述的醫藥組成物,其中該醫藥組成物還包含表面活性劑;較佳地,該表面活性劑為聚山梨酯;更佳地,該表面活性劑為聚山梨酯80或聚山梨酯20;最佳地,該表面活性劑為聚山梨酯80。
- 如請求項4所述的醫藥組成物,其中該表面活性劑濃度為0.05mg/mL至0.5mg/mL,較佳為0.1mg/mL至0.2mg/mL,更佳為0.2mg/mL。
- 如請求項1至5任一項所述的醫藥組成物,其中該組成物還包含糖;較佳地,該糖選自蔗糖、甘露醇和海藻糖;更佳地,該糖為蔗糖。
- 如請求項6所述的醫藥組成物,其中該糖濃度為20mg/mL至100mg/mL,較佳為40mg/mL至80mg/mL,更佳為40mg/mL。
- 如請求項1至7任一項所述的醫藥組成物,其中該抗Claudin18.2抗體藥物偶聯物濃度為以蛋白濃度計1mg/mL至100mg/mL,較佳為以蛋白濃度計10mg/mL至30mg/mL,更佳為以蛋白濃度計20mg/mL。
- 如請求項1至8任一項所述的醫藥組成物,其中該緩衝劑的濃度為5mM至50mM,較佳為10mM至30mM,更佳為30mM。
- 如請求項1至9任一項所述的醫藥組成物,其中該醫藥組成物的pH為5.0-6.5,較佳為5.0-5.5,更佳為5.0-5.3。
- 如請求項1至10任一項所述的醫藥組成物,其包含如下組分:(a)以蛋白濃度計10mg/mL至30mg/mL的所述抗Claudin18.2抗體藥物偶聯物,(b)0.1mg/mL至0.2mg/mL的聚山梨酯,(c)40mg/mL至80mg/mL的糖,和(d)10mM至30mM的組胺酸鹽緩衝劑;該醫藥組成物的pH為5.0-5.5;較佳地,該醫藥組成物包含如下組分:(a)以蛋白濃度計20mg/mL的該抗Claudin18.2抗體藥物偶聯物,(b)0.2mg/mL的聚山梨酯80,(c)40mg/mL的蔗糖,和(d)30mM組胺酸-醋酸鹽緩衝劑,該醫藥組成物的pH為5.0-5.3。
- 一種含抗體藥物偶聯物的凍乾製劑,其特徵在於該製劑複溶後可形成如請求項1至12任一項所述的醫藥組成物。
- 一種製備含抗體藥物偶聯物的凍乾製劑的方法,其中包括將如請求項1至12中任一項所述的醫藥組成物進行冷凍乾燥的步驟。
- 一種含抗體藥物偶聯物的凍乾製劑,該製劑藉由將如請求項1至12中任一項所述的醫藥組成物經冷凍乾燥獲得。
- 一種含抗體藥物偶聯物的複溶溶液,其特徵在於該複溶溶液是藉由將如請求項13或15所述的凍乾製劑經複溶製備獲得;較佳地,該複溶溶液包含如下組分:(a)以蛋白濃度計10mg/mL至30mg/mL的該抗Claudin18.2抗體藥物偶聯物,(b)0.1mg/mL至0.2mg/mL的聚山梨酯,(c)40mg/mL至80mg/mL的糖,和(d)10mM至30mM的組胺酸鹽緩衝劑;該複溶溶液的pH為約5.0-5.5;更佳地,該醫藥組成物包含如下組分:(a)以蛋白濃度計20mg/mL的該抗Claudin18.2抗體藥物偶聯物,(b)0.2mg/mL的聚山梨酯80,(c)40mg/mL的蔗糖,和(d)30mM組胺酸-醋酸鹽緩衝劑,該複溶溶液的pH為5.0-5.3。
- 一種製品,其包括容器,該容器中裝有如請求項1至12任一項所述的醫藥組成物、如請求項13或15所述的凍乾製劑或如請求項16所述的複溶溶液。
- 一種治療腫瘤或癌症的方法,包括給予受試者有效量的如請求項1至12任一項所述的藥醫藥組成物、或如請求項13或15所述的凍乾製劑、或如請求項16所述的複溶溶液、或如請求項17所述製品;其中,該腫瘤或癌症較佳選自:頭和頸鱗狀細胞癌、頭和頸癌、腦癌、神經膠質瘤、多形性成膠質細胞瘤、神經母細胞瘤、中樞神經系統癌、神經內分泌腫 瘤、咽喉癌、鼻咽癌、食管癌、甲狀腺癌、惡性胸膜間皮瘤、肺癌、乳腺癌、肝癌、肝細胞瘤、肝膽癌、胰腺癌、胃癌、胃腸道癌、腸癌、結腸癌、結腸直腸癌、腎癌、透明細胞腎細胞癌、卵巢癌、子宫內膜癌、子宫頸癌、膀胱癌、前列腺癌、睾丸癌、皮膚癌、黑色素瘤、白血病、淋巴瘤、骨癌、軟骨肉瘤、骨髓瘤、多發性骨髓瘤、骨髓異常增生綜合症、庫肯勃氏瘤、骨髓增生性腫瘤、鱗狀細胞癌、尤因氏肉瘤、全身性輕鏈澱粉樣變性和梅克爾細胞癌;更佳地,該淋巴瘤選自:何杰金淋巴瘤、非何杰金淋巴瘤、瀰漫性大B-細胞淋巴瘤、濾泡性淋巴瘤、原發性縱隔大B-細胞淋巴瘤、套細胞淋巴瘤、小淋巴細胞性淋巴瘤、富含T-細胞/組織細胞的大B-細胞淋巴瘤和淋巴漿細胞性淋巴瘤;該肺癌選自:非小細胞肺癌和小細胞肺癌;該白血病選自:慢性髓細胞樣白血病、急性髓細胞樣白血病、淋巴細胞白血病、成淋巴細胞性白血病、急性成淋巴細胞性白血病、慢性淋巴細胞性白血病和髓樣細胞白血病。
Applications Claiming Priority (4)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN202011061863.1 | 2020-09-30 | ||
CN202011061863 | 2020-09-30 | ||
CN202111069020 | 2021-09-13 | ||
CN202111069020.0 | 2021-09-13 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
TW202220702A true TW202220702A (zh) | 2022-06-01 |
Family
ID=80951239
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
TW110136528A TW202220702A (zh) | 2020-09-30 | 2021-09-30 | 一種含抗體藥物偶聯物的醫藥組成物及其用途 |
Country Status (12)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US20240024498A1 (zh) |
EP (1) | EP4223785A1 (zh) |
JP (1) | JP2023545382A (zh) |
KR (1) | KR20230079096A (zh) |
CN (1) | CN116096896A (zh) |
AU (1) | AU2021354827A1 (zh) |
BR (1) | BR112023005789A2 (zh) |
CA (1) | CA3193104A1 (zh) |
IL (1) | IL301658A (zh) |
MX (1) | MX2023003448A (zh) |
TW (1) | TW202220702A (zh) |
WO (1) | WO2022068914A1 (zh) |
Families Citing this family (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
KR20220113728A (ko) * | 2019-12-12 | 2022-08-16 | 지앙수 헨그루이 파마슈티컬스 컴퍼니 리미티드 | 항 클라우딘 항체 약물 접합체 및 그 의약 용도 |
BR112022019042A2 (pt) * | 2020-03-25 | 2022-11-01 | Jiangsu Hengrui Pharmaceuticals Co Ltd | Método de preparação para conjugado anticorpo-fármaco |
JP2023518583A (ja) * | 2020-03-25 | 2023-05-02 | 江蘇恒瑞医薬股▲ふん▼有限公司 | 抗体薬物複合体を含む医薬組成物及びその使用 本願は、2020年3月25日に提出された中国特許出願(出願番号cn 202010219601.7)及び2021年3月17日に提出された中国特許出願(出願番号cn 202110287012.7)の優先権を主張する。 |
Family Cites Families (8)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5208020A (en) | 1989-10-25 | 1993-05-04 | Immunogen Inc. | Cytotoxic agents comprising maytansinoids and their therapeutic use |
ZA200603619B (en) | 2003-11-06 | 2008-10-29 | Seattle Genetics Inc | Monomethylvaline compounds capable of conjugation to ligands |
WO2016165762A1 (en) | 2015-04-15 | 2016-10-20 | Ganymed Pharmaceuticals Ag | Drug conjugates comprising antibodies against claudin 18.2 |
CN113651831A (zh) * | 2017-12-15 | 2021-11-16 | 四川科伦博泰生物医药股份有限公司 | 生物活性物偶联物及其制备方法和用途 |
CN110857322A (zh) * | 2018-08-22 | 2020-03-03 | 瑞阳(苏州)生物科技有限公司 | 抗人claudin 18.2单克隆抗体及其应用 |
KR20210050547A (ko) * | 2018-08-27 | 2021-05-07 | 난징 산홈 팔마세우티칼 컴퍼니 리미티드 | 항-클라우딘18.2 항체 및 이의 용도 |
CA3114137A1 (en) | 2018-09-26 | 2020-04-02 | Jiangsu Hengrui Medicine Co., Ltd. | Ligand-drug conjugate of exatecan analogue, preparation method therefor and application thereof |
CN116920115A (zh) * | 2018-12-17 | 2023-10-24 | 荣昌生物制药(烟台)股份有限公司 | 一种用于抗体药物偶联物的连接子及其应用 |
-
2021
- 2021-09-30 EP EP21874568.5A patent/EP4223785A1/en active Pending
- 2021-09-30 AU AU2021354827A patent/AU2021354827A1/en active Pending
- 2021-09-30 WO PCT/CN2021/122031 patent/WO2022068914A1/zh active Application Filing
- 2021-09-30 CN CN202180055118.2A patent/CN116096896A/zh active Pending
- 2021-09-30 TW TW110136528A patent/TW202220702A/zh unknown
- 2021-09-30 BR BR112023005789A patent/BR112023005789A2/pt unknown
- 2021-09-30 KR KR1020237012680A patent/KR20230079096A/ko unknown
- 2021-09-30 MX MX2023003448A patent/MX2023003448A/es unknown
- 2021-09-30 CA CA3193104A patent/CA3193104A1/en active Pending
- 2021-09-30 JP JP2023519391A patent/JP2023545382A/ja active Pending
- 2021-09-30 IL IL301658A patent/IL301658A/en unknown
- 2021-09-30 US US18/029,075 patent/US20240024498A1/en active Pending
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CA3193104A1 (en) | 2022-04-07 |
EP4223785A1 (en) | 2023-08-09 |
US20240024498A1 (en) | 2024-01-25 |
KR20230079096A (ko) | 2023-06-05 |
JP2023545382A (ja) | 2023-10-30 |
MX2023003448A (es) | 2023-04-19 |
BR112023005789A2 (pt) | 2023-04-25 |
IL301658A (en) | 2023-05-01 |
WO2022068914A1 (zh) | 2022-04-07 |
CN116096896A (zh) | 2023-05-09 |
AU2021354827A1 (en) | 2023-06-01 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
ES2784131T3 (es) | Polipéptidos de unión beta del receptor PDGF | |
WO2022068914A1 (zh) | 一种含抗体药物偶联物的药物组合物及其用途 | |
WO2021147993A1 (zh) | 抗trop-2抗体-依喜替康类似物偶联物及其医药用途 | |
WO2022022508A1 (zh) | 抗cd79b抗体药物偶联物、其制备方法及其医药用途 | |
WO2020094122A1 (zh) | 一种TGF-β受体融合蛋白药物组合物及其用途 | |
WO2021115426A1 (zh) | 抗密蛋白抗体药物偶联物及其医药用途 | |
US20220356246A1 (en) | Anti-ROR1 antibodies and preparation method and uses thereof | |
TWI744261B (zh) | 抗5t4抗體和抗體-藥物共軛體 | |
TW202144013A (zh) | 一種含抗體藥物偶聯物的醫藥組成物及其用途 | |
WO2019120269A1 (zh) | Lag-3抗体药物组合物及其用途 | |
WO2017121867A1 (en) | Formulation for antibody and drug conjugate thereof | |
CN110960490A (zh) | 一种抗egfr抗体偶联药物组合物及其用途 | |
WO2022022660A1 (zh) | 抗pd-1抗体药物组合物及其用途 | |
ES2800674T3 (es) | Polipéptidos biespecíficos de unión a antígeno | |
WO2022117060A1 (zh) | 一种含抗结缔组织生长因子抗体的药物组合物 | |
WO2021121204A1 (zh) | 抗cea抗体-依喜替康类似物偶联物及其医药用途 | |
TW202144016A (zh) | 抗psma抗體-依喜替康類似物偶聯物及其醫藥用途 | |
WO2023143347A1 (zh) | 一种包含抗CD79b抗体药物偶联物的药物组合物及其用途 | |
WO2023151613A1 (zh) | 一种双特异性抗原结合分子及其应用 | |
WO2023040935A1 (zh) | 一种含抗pvrig/tigit双特异性抗体的药物组合物 | |
WO2023236949A1 (zh) | 抗b7h3抗体-药物偶联物及其用途 | |
WO2023185732A1 (zh) | 包含抗Claudin18.2和CD3双特异性抗体的制剂及其制备方法和用途 |