JPWO2020046793A5 - - Google Patents

Description

更に別の実施形態は、細胞培養液またはタンパク質精製中間体を精製すると同時に、ｉｎ ｓｉｔｕラマン分光法を使用してリアルタイムで賦形剤の濃度を測定すること、ならびに採取された細胞培養液および／もしくはタンパク質精製中間体における所定量の賦形剤を取得または維持するために、精製ステップのパラメーターをリアルタイムで調整することによって、下流での精製中に、採取された細胞培養液および／またはタンパク質精製中間体における賦形剤のレベルをモニターおよび制御するための方法が提供される。賦形剤は、酢酸塩、クエン酸塩、ヒスチジン、コハク酸塩、リン酸塩、ヒドロキシメチルアミノメタン（トリス）、プロリン、アルギニン、スクロース、またはそれらの組み合わせであり得る。賦形剤は、ポリソルベート８０、ポリソルベート２０、およびポロキサマー１８８などの表面賦形剤であり得る。
[本発明1001]
濃縮タンパク質精製中間体を生成する方法であって、
タンパク質精製中間体を濃縮すると同時に、ｉｎ ｓｉｔｕラマン分光法を使用してリアルタイムで前記タンパク質精製中間体の濃度を測定することと、
前記濃縮ステップのパラメーターをリアルタイムで調整して、前記濃縮タンパク質精製中間体および／または最終濃縮プールを取得することと
を含む、前記方法。
[本発明1002]
前記濃縮タンパク質産物が、5ｍｇ／ｍＬ～300ｍｇ／ｍＬである濃度を有する、本発明1001の方法。
[本発明1003]
前記タンパク質精製中間体の濃度が少なくとも50ｍｇ／ｍＬである、本発明1001または1002のいずれかの方法。
[本発明1004]
前記タンパク質精製中間体の濃度が少なくとも150ｍｇ／ｍＬである、本発明1001または1002のいずれかの方法。
[本発明1005]
前記タンパク質精製中間体が、限外濾過、バッファー交換、またはその両方を使用して濃縮される、本発明1001～1004のいずれかの方法。
[本発明1006]
前記タンパク質精製中間体が、バイオリアクター、流加培養、または連続培養から採取される、本発明1001～1005のいずれかの方法。
[本発明1007]
前記タンパク質精製中間体の濃度を測定することが、リアルタイムで連続的または断続的に行われる、本発明1001～1006のいずれかの方法。
[本発明1008]
前記タンパク質濃度の定量化が、30秒から10分までの間隔で、毎時、または毎日行われる、本発明1001～1006のいずれかの方法。
[本発明1009]
前記タンパク質精製中間体が、抗体もしくはその抗原結合フラグメント、融合タンパク質、または組換えタンパク質である、本発明1001～1008のいずれかの方法。
[本発明1010]
スペクトルデータが、977～1027ｃｍ ^－1 、1408～1485ｃｍ ^－1 、1621～1711ｃｍ ^－1 、2823～3046ｃｍ ^－1 、およびそれらの組み合わせからなる群から選択される1つ以上の波数範囲で収集される、本発明1001～1009のいずれかの方法。
[本発明1011]
タンパク質精製中間体を生成する方法であって、
複数のタンパク質精製中間体のいずれか1つを定量化できるユニバーサルモデルを生成するために、前記複数のタンパク質精製中間体に対して独立してラマン分光分析を実行することと、
タンパク質精製中間体の濃縮中に前記ユニバーサルモデルを用いたｉｎ ｓｉｔｕラマン分光法を使用して前記タンパク質精製中間体の濃度を測定することと、
前記濃縮タンパク質精製中間体が所定の濃度または最終濃縮プール目標に達したときに、前記濃縮タンパク質精製中間体を生成することと
を含む、前記方法。
[本発明1012]
前記モデルが、生スペクトルデータおよびオフラインタンパク質濃度データの部分最小二乗回帰分析を使用して生成される、本発明1011の方法。
[本発明1013]
前記ラマン分光法データに対して正規化技術またはポイント平滑化を実行することを更に含む、本発明1012の方法。
[本発明1014]
前記正規化技術が標準正規変量を含む、本発明1013の方法。
[本発明1015]
前記ポイント平滑化が、21ｃｍ ^－1 平滑化一次導関数を含む、本発明1013の方法。
[本発明1016]
前記モデルが、オフラインタンパク質濃度値と比較して誤差が5％以下の、タンパク質濃度の予測値を提供する、本発明1011～1015のいずれかの方法。
[本発明1017]
前記モデルが、オフラインタンパク質濃度値と比較して誤差が3％以下の、タンパク質濃度の予測値を提供する、本発明1011～1015のいずれかの方法。
[本発明1018]
前記濃縮タンパク質精製中間体が、5ｍｇ／ｍＬ～300ｍｇ／ｍＬである濃度を有する、本発明1011の方法。
[本発明1019]
前記濃縮タンパク質精製中間体の濃度が少なくとも100ｍｇ／ｍＬである、本発明1011の方法。
[本発明1020]
前記濃縮タンパク質精製中間体の濃度が少なくとも150ｍｇ／ｍＬである、本発明1011の方法。
[本発明1021]
前記濃縮タンパク質精製中間体が、限外濾過、透析濾過、またはその両方を使用して濃縮される、本発明1011の方法。
[本発明1022]
前記濃縮タンパク質精製中間体が、バイオリアクター、流加培養、または連続培養から採取される、本発明1011の方法。
[本発明1023]
前記タンパク質精製中間体の濃度を測定することが、リアルタイムで連続的または断続的に行われる、本発明1001～1022のいずれかの方法。
[本発明1024]
前記タンパク質濃度の定量化が、30秒から10分までの間隔で、毎時、または毎日行われる、本発明1001～1023のいずれかの方法。
[本発明1025]
前記タンパク質精製中間体が、抗体もしくはその抗原結合フラグメント、融合タンパク質、または組換えタンパク質である、本発明1011～1024のいずれかの方法。
[本発明1026]
本発明1001～1025のいずれかに従って生成される、タンパク質精製中間体。
[本発明1027]
下流のタンパク質精製プロセシング中にタンパク質精製中間体の重要品質特性をモニターおよび制御する方法であって、
ｉｎ ｓｉｔｕラマン分光法を使用して、前記タンパク質精製中間体の1つ以上の重要品質特性を定量化することと、
所定の重要品質特性レベルに一致させるために、前記タンパク質精製中間体の前記1つ以上の重要品質特性を調整することと
を含む、前記方法。
[本発明1028]
前記重要品質特性が、抗体価、タンパク質濃度、高分子量種、薬物対抗体比、およびバッファー賦形剤からなる群から選択される、本発明1027の方法。
[本発明1029]
前記下流のタンパク質精製プロセシングが限外濾過／透析濾過である、本発明1027または1028のいずれかの方法。
[本発明1030]
下流での精製中に採取した細胞培養液および／またはタンパク質精製中間体における賦形剤レベルをモニターおよび制御するための方法であって、
前記細胞培養液またはタンパク質精製中間体を精製すると同時に、ｉｎ ｓｉｔｕラマン分光法を使用してリアルタイムで前記賦形剤の濃度を測定することと、
前記採取された細胞培養液および／もしくはタンパク質精製中間体における所定量の前記賦形剤を取得または維持するために、前記精製ステップのパラメーターをリアルタイムで調整することと
を含む、前記方法。
[本発明1031]
前記賦形剤がバッファー賦形剤を含む、本発明1030の方法。
[本発明1032]
前記賦形剤が、酢酸塩、クエン酸塩、ヒスチジン、コハク酸塩、リン酸塩、ヒドロキシメチルアミノメタン（トリス）、プロリン、アルギニン、スクロース、またはそれらの組み合わせからなる群から選択される、本発明1030または1031のいずれかの方法。
[本発明1033]
前記賦形剤が、界面活性剤賦形剤を含む、本発明1030の方法。
[本発明1034]
前記界面活性剤賦形剤が、ポリソルベート80、ポリソルベート20、およびポロキサマー188からなる群から選択される、本発明1030または1033のいずれかの方法。
[本発明1035]
前記賦形剤がポリエチレングリコールを含む、本発明1011の方法。

Claims (41)

1. 濃縮タンパク質精製中間体を生成する方法であって、
   複数のタンパク質精製中間体を使用して生成されたユニバーサルモデルを提供することと、
   タンパク質精製中間体を濃縮すると同時に、前記ユニバーサルモデルを用いたｉｎ ｓｉｔｕラマン分光法を使用してリアルタイムで前記タンパク質精製中間体の濃度を測定することと、
   前記濃縮ステップのパラメーターをリアルタイムで調整して、前記濃縮タンパク質精製中間体および／または最終濃縮プールを取得することと
   を含み、
   前記タンパク質精製中間体の濃度が少なくとも１５０ｍｇ／ｍＬである、
   前記方法。
2. 前記濃縮タンパク質産物が、１５０ｍｇ／ｍＬ～３００ｍｇ／ｍＬである濃度を有する、請求項１に記載の方法。
3. 前記タンパク質精製中間体が、限外濾過、バッファー交換、またはその両方を使用して濃縮される、請求項１に記載の方法。
4. 前記タンパク質精製中間体が、バイオリアクター、流加培養、または連続培養から採取される、請求項１に記載の方法。
5. 前記タンパク質精製中間体の濃度を測定することが、リアルタイムで連続的または断続的に行われる、請求項１に記載の方法。
6. 前記タンパク質濃度の定量化が、３０秒から１０分までの間隔で、毎時、または毎日行われる、請求項１に記載の方法。
7. 前記タンパク質精製中間体が、抗体もしくはその抗原結合フラグメント、融合タンパク質、または組換えタンパク質である、請求項１に記載の方法。
8. タンパク質精製中間体を生成する方法であって、
   複数のタンパク質精製中間体に対して独立してラマン分光分析を実行して、前記複数のタンパク質精製中間体のいずれか１つを定量化できるユニバーサルモデルを生成することと、
   タンパク質精製中間体の濃縮中に前記ユニバーサルモデルを用いたｉｎ ｓｉｔｕラマン分光法を使用して前記タンパク質精製中間体の濃度を測定することと、
   前記濃縮タンパク質精製中間体が所定の濃度または最終濃縮プール目標に達したときに、前記濃縮タンパク質精製中間体を生成することと
   を含み、
   前記タンパク質精製中間体の濃度が少なくとも１５０ｍｇ／ｍＬである、
   前記方法。
9. 前記モデルが、生スペクトルデータおよびオフラインタンパク質濃度データの部分最小二乗回帰分析を使用して生成される、請求項８に記載の方法。
10. 前記ラマン分光法データに対して正規化技術またはポイント平滑化を実行することを更に含む、請求項９に記載の方法。
11. 前記正規化技術が標準正規変量を含む、請求項１０に記載の方法。
12. 前記ポイント平滑化が、２１ｃｍ^－１平滑化一次導関数を含む、請求項１０に記載の方法。
13. 前記モデルが、オフラインタンパク質濃度値と比較して誤差が５％以下の、複数のタンパク質精製中間体のタンパク質濃度の予測値を提供する、請求項８に記載の方法。
14. 前記モデルが、オフラインタンパク質濃度値と比較して誤差が３％以下の、複数のタンパク質精製中間体のタンパク質濃度の予測値を提供する、請求項８に記載の方法。
15. 前記濃縮タンパク質精製中間体が、１５０ｍｇ／ｍＬ～３００ｍｇ／ｍＬである濃度を有する、請求項８に記載の方法。
16. 前記濃縮タンパク質精製中間体が、限外濾過、透析濾過、またはその両方を使用して濃縮される、請求項８に記載の方法。
17. 前記濃縮タンパク質精製中間体が、バイオリアクター、流加培養、または連続培養から採取される、請求項８に記載の方法。
18. 前記タンパク質精製中間体の濃度を測定することが、リアルタイムで連続的または断続的に行われる、請求項８に記載の方法。
19. 前記タンパク質濃度の定量化が、３０秒から１０分までの間隔で、毎時、または毎日行われる、請求項８に記載の方法。
20. 前記タンパク質精製中間体が、抗体もしくはその抗原結合フラグメント、融合タンパク質、または組換えタンパク質である、請求項８に記載の方法。
21. 請求項１に従って生成される、タンパク質精製中間体。
22. 下流のタンパク質精製プロセシング中にタンパク質精製中間体の重要品質特性をモニターおよび制御する方法であって、
    複数のタンパク質精製中間体を使用して生成されたユニバーサルモデルを提供することと、
    ｉｎ ｓｉｔｕラマン分光法を使用して、前記タンパク質精製中間体の１つ以上の重要品質特性を定量化することと、
    所定の重要品質特性レベルに一致させるために、前記タンパク質精製中間体の前記１つ以上の重要品質特性を調整することと
    を含み、
    前記タンパク質精製中間体の濃度が少なくとも１５０ｍｇ／ｍＬである、
    前記方法。
23. 前記重要品質特性が、抗体価、タンパク質濃度、高分子量種、薬物対抗体比、およびバッファー賦形剤からなる群から選択される、請求項２２に記載の方法。
24. 前記下流のタンパク質精製プロセシングが限外濾過／透析濾過である、請求項２２に記載の方法。
25. 下流での精製中に採取した細胞培養液および／またはタンパク質精製中間体における賦形剤レベルをモニターおよび制御するための方法であって、
    複数のタンパク質精製中間体を使用して生成されたユニバーサルモデルを提供することと、
    前記細胞培養液またはタンパク質精製中間体を精製すると同時に、ｉｎ ｓｉｔｕラマン分光法を使用してリアルタイムで前記賦形剤の濃度を測定することと、
    前記採取された細胞培養液および／もしくはタンパク質精製中間体における所定量の前記賦形剤を取得または維持するために、前記精製ステップのパラメーターをリアルタイムで調整することと
    を含み、
    前記タンパク質精製中間体の濃度が少なくとも１５０ｍｇ／ｍＬである、
    前記方法。
26. 前記賦形剤がバッファー賦形剤を含む、請求項２５に記載の方法。
27. 前記賦形剤が、酢酸塩、クエン酸塩、ヒスチジン、コハク酸塩、リン酸塩、ヒドロキシメチルアミノメタン（トリス）、プロリン、アルギニン、スクロース、またはそれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項２５に記載の方法。
28. 前記賦形剤が、界面活性剤賦形剤を含む、請求項２５に記載の方法。
29. 前記界面活性剤賦形剤が、ポリソルベート８０、ポリソルベート２０、およびポロキサマー１８８からなる群から選択される、請求項２８に記載の方法。
30. 賦形剤を更に含み、前記賦形剤がポリエチレングリコールおよび／またはスクロースを含む、請求項８に記載の方法。
31. 複数のタンパク質精製中間体に対してラマン分光分析を独立に実行してユニバーサルモデルを生成することを更に含み、前記ユニバーサルモデルが、限外濾過／透析（ＵＦ／ＤＦ）システムにおいて、０～１２０ｇ／Ｌの濃度での一次濃縮および／もしくは透析濾過中に、並びに／または２００ｇ／Ｌ超の濃度での最終濃縮中に、前記複数のタンパク質精製中間体のいずれか１つを定量化できる、請求項１に記載の方法。
32. 採取された細胞培養液および／またはタンパク質精製中間体を精製すると同時に、ｉｎ ｓｉｔｕラマン分光法を使用して賦形剤の濃度をリアルタイムで測定することと、
    前記採取された細胞培養液および／またはタンパク質精製中間体における所定量の前記賦形剤を取得または維持するために、前記精製ステップのパラメータをリアルタイムで調整することと
    を更に含む、請求項１に記載の方法。
33. ｉｎ ｓｉｔｕラマン分光法を使用して、前記タンパク質精製中間体の１つ以上の重要品質特性を定量化することと、
    所定の重要品質特性レベルに一致させるために、前記タンパク質精製中間体の前記１つ以上の重要品質特性を調整することと
    を更に含み、
    前記重要品質属性が、抗体価、タンパク質濃度、高分子量種、薬物対抗体比、およびバッファー賦形剤からなる群から選択される、
    請求項１に記載の方法。
34. スペクトルデータが、９７７～１０２７ｃｍ ^－１ 、１４０８～１４８５ｃｍ ^－１ 、１６２１～１７１１ｃｍ ^－１ 、２８２３～３０４６ｃｍ ^－１ 、およびそれらの組み合わせからなる群から選択される１つ以上の波数範囲で収集される、請求項１に記載の方法。
35. 前記タンパク質精製中間体が融合タンパク質である、請求項１に記載の方法。
36. 前記タンパク質精製中間体が、細胞表面受容体の細胞外ドメインまたはそのフラグメントを含む、請求項１に記載の方法。
37. 前記タンパク質精製中間体が、組換えタンパク質である、請求項１に記載の方法。
38. 前記タンパク質精製中間体が、組換え融合タンパク質である、請求項１に記載の方法。
39. 前記タンパク質精製中間体が、Ｆｃ融合タンパク質またはそのフラグメントを含む、請求項１に記載の方法。
40. 前記タンパク質精製中間体が、抗ＶＥＧＦ抗体またはそのフラグメントを含む、請求項１に記載の方法。
41. 前記タンパク質精製中間体が、抗体またはその抗原結合フラグメントである、請求項１に記載の方法。