JPWO2019182765A5 - - Google Patents

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JPWO2019182765A5
JPWO2019182765A5 JP2020550719A JP2020550719A JPWO2019182765A5 JP WO2019182765 A5 JPWO2019182765 A5 JP WO2019182765A5 JP 2020550719 A JP2020550719 A JP 2020550719A JP 2020550719 A JP2020550719 A JP 2020550719A JP WO2019182765 A5 JPWO2019182765 A5 JP WO2019182765A5
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上述から、本発明の具体的な実施形態が、例示目的のために本明細書に記載されているが、本発明の趣旨および範囲から逸脱することなく様々な修正が行われ得ることが理解されよう。したがって、本発明は、添付の特許請求の範囲によるもの以外の限定は受けない。
本発明のまた別の態様は、以下のとおりであってもよい。
〔１〕ポリマー色素、標的指向性部分および二価または三価の金属塩を含む混合物を調製するステップ、および混合物を、共有結合性コンジュゲートを形成するのに十分な時間および温度で熟成させるステップを含む、ポリマー色素と標的指向性部分との共有結合性コンジュゲートを形成する方法であって、
ａ）ポリマー色素が、
ｉ）２つ以上の蛍光または発色部分
ｉｉ）少なくとも１つの負の電荷を帯びた基；および
ｉｉｉ）標的指向性部分の相補性反応性基Ｑ’と共有結合を形成することが可能な反応性基Ｑ
を含み、
ｂ）標的指向性部分が、標的分析対象に親和性を有しており、かつ相補性反応性基Ｑ’を含む、
方法。
〔２〕標的分析対象を検出する方法であって、
ａ）二価または三価の金属塩の存在下で、共有結合性コンジュゲートを標的分析対象と結合させて、分析対象－標的指向性部分複合体を形成するステップであって、共有結合性コンジュゲートが、
ｉ）標的分析対象に対して親和性を有しており、かつポリマー色素への共有結合を含む標的指向性部分
ｉｉ）ポリマー色素であって、
Ａ）２つ以上の蛍光または発色部分
Ｂ）少なくとも１つの負の電荷を帯びた基、および
Ｃ）標的指向性部分への共有結合
を含むポリマー色素を含む、ステップ
ｂ）分析対象－標的指向性部分複合体からの蛍光または発色シグナルを検出するステップ
を含む方法。
〔３〕分析対象－標的指向性部分複合体を二価または三価の金属塩を含む洗浄溶液で処理するステップをさらに含む、前記〔２〕に記載の方法。
〔４〕標的分析対象を検出する方法であって、
ａ）共有結合性コンジュゲートを標的分析対象と結合させて、分析対象－標的指向性部分複合体を形成するステップであって、共有結合性コンジュゲートが、
ｉ）標的分析対象に対して親和性を有しており、かつポリマー色素への共有結合を含む標的指向性部分、ならびに
ｉｉ）ポリマー色素であって、
Ａ）２つ以上の蛍光または発色部分
Ｂ）少なくとも１つの負の電荷を帯びた基、および
Ｃ）標的指向性部分への共有結合
を含むポリマー色素を含む、ステップ、
ｂ）ｉ）共有結合性コンジュゲートと標的分析対象とを結合させる間、共有結合性コンジュゲートおよび標的分析対象を、二価または三価の金属塩で処理するステップ、および／または
ｉｉ）共有結合性コンジュゲートと標的分析対象とを結合させた後に、分析対象－標的指向性部分複合体を、二価または三価の金属塩を含む洗浄溶液で処理するステップ、ならびに
ｃ）分析対象－標的指向性部分複合体からの蛍光または発色シグナルを検出するステップ
を含む方法。
〔５〕共有結合性コンジュゲートを標的分析対象と結合させるステップが、二価または三価の金属塩の存在下で行われる、前記〔４〕に記載の方法。
〔６〕蛍光または発色シグナルを検出する前に、分析対象－標的指向性部分複合体から二価または三価の塩のすべてを実質的に除去するステップをさらに含む、前記〔２〕～〔５〕のいずれか１項に記載の方法。
〔７〕二価または三価の金属塩が、分析対象－標的指向性部分複合体を含む緩衝液から除去される、前記〔６〕に記載の方法。
〔８〕共有結合性コンジュゲートを形成するステップをさらに含む、前記〔２〕～〔７〕のいずれか１項に記載の方法。
〔９〕共有結合性コンジュゲートを形成する前に、ポリマー色素および二価または三価の塩を混合して、ポリマー色素および二価または三価の塩を含む組成物を形成させる、前記〔３〕～〔８〕のいずれか１項に記載の方法。
〔１０〕共有結合性コンジュゲートを形成する前に、ポリマー色素および二価または三価の塩を含む組成物を熟成させるステップをさらに含む、前記〔９〕に記載の方法。
〔１１〕二価または三価の塩が、共有結合性コンジュゲートを形成している間、実質的に存在しない、前記〔８〕または〔９〕に記載の方法。
〔１２〕共有結合性コンジュゲートおよび二価または三価の塩を含む組成物であって、共有結合性コンジュゲートが、
ｉ）ポリマー色素への共有結合を含む標的指向性部分
ｉｉ）ポリマー色素であって、
ａ）２つ以上の蛍光または発色部分
ｂ）少なくとも１つの負の電荷を帯びた基、および
ｃ）標的指向性部分への共有結合
を含むポリマー色素
を含む、組成物。
〔１３〕標的指向性部分が標的分析対象に対して親和性を有する、前記〔１２〕に記載の組成物。
〔１４〕標的指向性部分が抗体を含む、前記〔１３〕に記載の組成物。
〔１５〕二価または三価の塩が、二価の塩である、前記〔１〕～〔１４〕のいずれか１項に記載の方法または組成物。
〔１６〕二価の塩がマグネシウム塩である、前記〔１５〕に記載の方法または組成物。
〔１７〕マグネシウム塩が塩化マグネシウムである、前記〔１６〕に記載の方法または組成物。
〔１８〕蛍光または発色部分が蛍光部分である、前記〔１〕～〔１７〕のいずれか１項に記載の方法または組成物。
〔１９〕蛍光または発色部分が、出現毎に、ピレン、ペリレン、ペリレンモノイミドおよび６－ＦＡＭ部分からなる群から独立して選択される、前記〔１〕～〔１８〕のいずれか１項に記載の方法または組成物。
〔２０〕蛍光または発色部分が、出現毎に独立して、以下の構造の１つ：
〔化１〕
Figure 2019182765000153
を有する、前記〔１〕～〔１９〕のいずれか１項に記載の方法または組成物。
〔２１〕ポリマー色素が、複数の負の電荷を帯びた基を含む、前記〔１〕～〔２０〕のいずれか１項に記載の方法または組成物。
〔２２〕ポリマー色素が、２つ以上の蛍光または発色部分を含み、２つ以上の蛍光または発色部分がそれぞれ、少なくとも１つの負の電荷を帯びた基を含むリンカーを介して、隣接する蛍光または発色部分に結合している、前記〔１〕～〔２１〕のいずれか１項に記載の方法または組成物。
〔２３〕リンカーが、１つまたは複数のアルキレンまたはアルキレンオキシド部分をさらに含む、前記〔２２〕に記載の方法または組成物。
〔２４〕アルキレンオキシド部分がポリエチレンオキシド部分を含む、前記〔２３〕に記載の方法または組成物。
〔２５〕負の電荷を帯びた基がホスフェートである、前記〔１〕～〔２４〕のいずれか１項に記載の方法または組成物。
〔２６〕ポリマー色素が、２～１００の蛍光または発色部分を含み、蛍光または発色部分が、少なくとも１つの負の電荷を帯びた基を含むリンカーを介して、隣接する蛍光または発色部分に結合している、前記〔１〕～〔２５〕のいずれか１項に記載の方法または組成物。
〔２７〕ポリマー色素が、２～１０の蛍光または発色部分を含み、蛍光または発色部分が、少なくとも１つの負の電荷を帯びた基を含むリンカーを介して、隣接する蛍光または発色部分に結合している、前記〔２６〕に記載の方法または組成物。
〔２８〕共有結合性コンジュゲートを精製するステップをさらに含む、前記〔１〕～〔２７〕のいずれか１項に記載の方法または組成物。
〔２９〕精製するステップが、共有結合性コンジュゲートから二価または三価の塩のすべてを実質的に除去するステップを含む、前記〔２８〕に記載の方法または組成物。
〔３０〕共有結合性コンジュゲートが、二価または三価の塩の非存在下で調製した対応するコンジュゲートよりも少なくとも１．１倍高い蛍光吸光係数を有する、前記〔１〕～〔２９〕のいずれか１項に記載の方法または組成物。
〔３１〕共有結合性コンジュゲートが、二価または三価の塩の非存在下で調製した対応するコンジュゲートよりも少なくとも１．２倍高い蛍光吸光係数を有する、前記〔１〕～〔３０〕のいずれか１項に記載の方法または組成物。
〔３２〕標的指向性部分が抗体である、前記〔１〕～〔３１〕のいずれか１項に記載の方法または組成物。
〔３３〕ポリマー色素が、以下の構造（Ｉ）：
〔化２〕
Figure 2019182765000154
(I)
またはその立体異性体、塩もしくは互変異性体（式中、
Ｍは、出現毎に独立して、蛍光または発色部分を含む部分であり、
Ｌ 1 は、出現毎に独立して、ｉ）任意に用いてもよいアルキレン、アルケニレン、アルキニレン、ヘテロアルキレン、ヘテロアルケニレン、ヘテロアルキニレンもしくはヘテロ原子リンカー；またはｉｉ）２つの相補性反応性基の反応によって形成することが可能な官能基を含むリンカーのいずれかであり、
Ｌ 2 およびＬ 3 は、出現毎に独立して、任意に用いてもよいアルキレン、アルケニレン、アルキニレン、ヘテロアルキレン、ヘテロアルケニレン、ヘテロアルキニレンまたはヘテロ原子リンカーであり、
Ｌ 4 は、出現毎に独立して、アルキレンまたはアルキレンオキシドリンカーであり、
Ｒ 1 は、出現毎に独立して、Ｈ、アルキルまたはアルコキシであり、
Ｒ 2 およびＲ 3 は、それぞれ独立して、Ｈ、ＯＨ、ＳＨ、アルキル、アルコキシ、アルキルエーテル、ヘテロアルキル、－ＯＰ（＝Ｒ a ）（Ｒ b ）Ｒ c 、Ｑもしくはその保護形態、またはＬ’であり、
Ｒ 4 は、出現毎に独立して、ＯＨ、ＳＨ、Ｏ - 、Ｓ - 、ＯＲ d またはＳＲ d であり、
Ｒ 5 は、出現毎に独立して、オキソ、チオキソであるか、または存在せず、
Ｒ a は、ＯまたはＳであり、
Ｒ b は、ＯＨ、ＳＨ、Ｏ - 、Ｓ - 、ＯＲ d またはＳＲ d であり、
Ｒ c は、ＯＨ、ＳＨ、Ｏ - 、Ｓ - 、ＯＲ d 、ＯＬ’、ＳＲ d 、アルキル、アルコキシ、ヘテロアルキル、ヘテロアルコキシ、アルキルエーテル、アルコキシアルキルエーテル、ホスフェート、チオホスフェート、ホスホアルキル、チオホスホアルキル、ホスホアルキルエーテルまたはチオホスホアルキルエーテルであり、
Ｒ d は、対イオンであり、
Ｌ’は、出現毎に独立して、Ｑへの共有結合を含むリンカー、標的指向性部分への共有結合を含むリンカー、分析対象分子への共有結合を含むリンカー、固体支持体への共有結合を含むリンカー、固体支持体残基への共有結合を含むリンカー、ヌクレオシドへの共有結合を含むリンカー、または構造（Ｉ）のさらなる化合物への共有結合を含むリンカーであり、
ｍは、出現毎に独立して、０以上の整数であり、ただし、出現するｍの少なくとも１つは、１以上の整数であることを条件とし、こうして、化合物は、少なくとも１つのＬ 4 を含み、
ｎは、１以上の整数である）
を有する、前記〔１〕～〔３２〕のいずれか１項に記載の方法または組成物。
〔３４〕ポリマー色素が、以下の構造（ＩＡ）：
〔化３〕
Figure 2019182765000155
(IA)
（式中、ｚは、２～１００の整数である）
を有する、前記〔１〕～〔３３〕のいずれか１項に記載の方法または組成物。
〔３５〕ｚが、３～６の整数である、前記〔３４〕に記載の方法または組成物。
〔３６〕Ｌ 1 が、以下の構造の１つ：
〔化４〕
Figure 2019182765000156
を有する、前記〔１〕～〔３５〕のいずれか１項に記載の方法または組成物。
〔３７〕出現するＬ 1 の少なくとも１つについて、Ｌ 1 －Ｍが、以下の構造：
〔化５〕
Figure 2019182765000157
（式中、Ｌ 1a およびＬ 1b は、それぞれ独立して、任意に用いてもよいリンカーである）
を有する、前記〔３４〕または〔３５〕に記載の方法または組成物。
〔３８〕出現するＬ 1 の少なくとも１つについて、Ｌ 1 －Ｍが、以下の構造：
〔化６〕
Figure 2019182765000158
（式中、Ｌ 1a およびＬ 1b は、それぞれ独立して、任意に用いてもよいリンカーである）
を有する、前記〔３４〕、〔３５〕または〔３７〕のいずれか１項に記載の方法または組成物。
〔３９〕Ｌ 1a またはＬ 1b 、またはどちらも存在しない、前記〔３７〕または〔３８〕に記載の方法または組成物。
〔４０〕Ｌ 1a またはＬ 1b 、またはどちらも存在する、前記〔３７〕～〔３９〕のいずれか１項に記載の方法または組成物。
〔４１〕Ｌ 1a およびＬ 1b が、存在する場合、それぞれ独立して、アルキレンまたはヘテロアルキレンである、前記〔３７〕～〔４０〕のいずれか１項に記載の方法または組成物。
〔４２〕Ｌ 1a およびＬ 1b が、存在する場合、独立して、以下の構造の１つ：
〔化７〕
Figure 2019182765000159
を有する、前記〔３７〕～〔４１〕のいずれか１項に記載の方法または組成物。
〔４３〕Ｌ 1 が、出現毎に独立して、任意に用いてもよいアルキレンまたはヘテロアルキレンリンカーである、前記〔３４〕～〔４２〕のいずれか１項に記載の方法または組成物。
〔４４〕Ｌ 2 およびＬ 3 が、出現毎に独立して、Ｃ 1 －Ｃ 6 アルキレン、Ｃ 2 －Ｃ 6 アルケニレンまたはＣ 2 －Ｃ 6 アルキニレンである、前記〔３４〕～〔４３〕のいずれか１項に記載の方法または組成物。
〔４５〕化合物が、以下の構造（ＩＢ）：
〔化８〕
Figure 2019182765000160
(IB)
（式中、
ｘ 1 、ｘ 2 、ｘ 3 およびｘ 4 は、出現毎に独立して、０～６の整数であり、
ｚは、２～１００の整数である）
を有する、前記〔３４〕～〔４４〕のいずれか１項に記載の方法または組成物。
〔４６〕出現するｘ 1 、ｘ 2 、ｘ 3 またはｘ 4 の少なくとも１つが１である、前記〔４５〕に記載の方法または組成物。
〔４７〕ｘ 1 、ｘ 2 、ｘ 3 およびｘ 4 が、出現毎に、それぞれ１である、前記〔４５〕または〔４６〕に記載の方法または組成物。
〔４８〕Ｌ 1 が、出現毎に独立して、トリアゾリル官能基を含む、前記〔４５〕～〔４７〕のいずれか１項に記載の方法または組成物。
〔４９〕Ｌ 1 が、出現毎に独立して、任意に用いてもよいアルキレンまたはヘテロアルキレンリンカーである、前記〔３４〕～〔４８〕のいずれか１項に記載の方法または組成物。
〔５０〕Ｒ 4 が、出現毎に独立して、ＯＨ、Ｏ - またはＯＲ d である、前記〔３３〕～〔４９〕のいずれか１項に記載の方法または組成物。
〔５１〕Ｒ 5 が、出現毎に、オキソである、前記〔３３〕～〔５０〕のいずれか１項に記載の方法または組成物。
〔５２〕Ｒ 1 が、出現毎に、Ｈである、前記〔３３〕～〔５１〕のいずれか１項に記載の方法または組成物。
〔５３〕Ｒ 2 およびＲ 3 が、それぞれ独立して、ＯＨまたは－ＯＰ（＝Ｒ a ）（Ｒ b ）Ｒ c である、前記〔３３〕～〔５２〕のいずれか１項に記載の方法または組成物。
〔５４〕Ｒ 2 またはＲ 3 の一方が、ＯＨまたは－ＯＰ（＝Ｒ a ）（Ｒ b ）Ｒ c であり、Ｒ 2 またはＲ 3 のもう一方が、ＱまたはＱへの共有結合を含むリンカーである、前記〔３３〕～〔５３〕のいずれか１項に記載の方法または組成物。
〔５５〕Ｒ 2 およびＲ 3 が、それぞれ独立して、－ＯＰ（＝Ｒ a ）（Ｒ b ）Ｒ c である、前記〔３３〕～〔５４〕のいずれか１項に記載の方法または組成物。
〔５６〕Ｒ c がＯＬ’である、前記〔５５〕に記載の方法または組成物。
〔５７〕Ｌ’が、Ｑ、標的指向性部分、分析対象分子、固体支持体、固体支持体残基、ヌクレオシドまたは構造（Ｉ）のさらなる化合物へのヘテロアルキレンリンカーである、前記〔３３〕～〔５６〕のいずれか１項に記載の方法または組成物。
〔５８〕Ｌ’が、アルキレンオキシドもしくはホスホジエステル部分、またはそれらの組合せを含む、前記〔３３〕～〔５７〕のいずれか１項に記載の方法または組成物。
〔５９〕Ｌ’が、以下の構造：
〔化９〕
Figure 2019182765000161
（式中、
ｍ”およびｎ”は、独立して、１～１０の整数であり、
Ｒ e は、Ｈ、電子対または対イオンであり、
Ｌ”は、Ｒ e 、またはＱ、標的指向性部分、分析対象分子、固体支持体、固体支持体残基、ヌクレオシドもしくは構造（Ｉ）のさらなる化合物への直接結合もしくは連結基である）
を有する、前記〔３３〕～〔５８〕のいずれか１項に記載の方法または組成物。
〔６０〕Ｒ 2 またはＲ 3 が、以下の構造の１つ：
〔化１０〕
Figure 2019182765000162
を有する、前記〔３３〕～〔５９〕のいずれか１項に記載の方法または組成物。
〔６１〕Ｒ 2 またはＲ 3 が、以下の構造：
〔化１１〕
Figure 2019182765000163
を有する、前記〔３３〕～〔６０〕のいずれか１項に記載の方法または組成物。
〔６２〕Ｑが、求核性反応性基、求電子性反応性基または環化付加反応性基を含む、前記〔３３〕～〔６１〕のいずれか１項に記載の方法または組成物。
〔６３〕Ｑが、スルフヒドリル、ジスルフィド、活性化エステル、イソチオシアネート、アジド、アルキン、アルケン、ジエン、求ジエン体、酸ハロゲン化物、ハロゲン化スルホニル、ホスフィン、α－ハロアミド、ビオチン、アミノまたはマレイミド官能基を含む、前記〔３３〕～〔６２〕のいずれか１項に記載の方法または組成物。
〔６４〕活性化エステルが、Ｎ－スクシンイミドエステル、イミドエステルまたはポリフルオロフェニルエステルである、前記〔６３〕に記載の方法または組成物。
〔６５〕アジドが、アルキルアジドまたはアシルアジドである、前記〔６３〕に記載の方法または組成物。
〔６６〕Ｑが、表１から選択される部分である、前記〔３３〕～〔６５〕のいずれか１項に記載の方法または組成物。
〔６７〕ｍが、出現毎に独立して、１～１０の整数である、前記〔３３〕～〔６６〕のいずれか１項に記載の方法または組成物。
〔６８〕ｍが、出現毎に独立して、１～５の整数である、前記〔３３〕～〔６７〕のいずれか１項に記載の方法または組成物。
〔６９〕ｎが、１～１００の整数である、前記〔３３〕～〔６８〕のいずれか１項に記載の方法または組成物。
〔７０〕ｎが、１～１０の整数である、前記〔３３〕～〔６９〕のいずれか１項に記載の方法または組成物。
〔７１〕Ｍが、出現毎に独立して、４つ以上のアリールもしくはヘテロアリール環、またはそれらの組合せを含む部分である、前記〔３３〕～〔７０〕のいずれか１項に記載の方法または組成物。
〔７２〕Ｍが発色性である、前記〔３３〕～〔７１〕のいずれか１項に記載の方法または組成物。
〔７３〕Ｍが蛍光性である、前記〔３３〕～〔７１〕のいずれか１項に記載の方法または組成物。
〔７４〕Ｍが、出現毎に独立して、少なくとも４つの縮合環を含む、縮合多環式アリール部分を含む、前記〔３３〕～〔７３〕のいずれか１項に記載の方法または組成物。
〔７５〕Ｍが、出現毎に独立して、ジメチルアミノスチルベン、キナクリドン、フルオロフェニル－ジメチル－ＢＯＤＩＰＹ、ｈｉｓ－フルオロフェニル－ＢＯＤＩＰＹ、アクリジン、テリレン、セキシフェニル、ポルフィリン、ベンゾピレン、（フルオロフェニル－ジメチル－ジフルオロボラ－ジアザ－インダセン）フェニル、（ビス－フルオロフェニル－ジフルオロボラ－ジアザ－インダセン）フェニル、クアテルフェニル、ビ－ベンゾチアゾール、ター－ベンゾチアゾール、ビ－ナフチル、ビ－アントラシル、スクアライン、スクアリリウム、９，１０－エチニルアントラセンまたはター－ナフチル部分である、前記〔３３〕～〔７４〕のいずれか１項に記載の方法または組成物。
〔７６〕Ｍが、出現毎に独立して、ｐ－ターフェニル、ペリレン、アゾベンゼン、フェナジン、フェナントロリン、アクリジン、チオキサントレン、クリセン、ルブレン、コロネン、シアニン、ペリレンイミドもしくはペリレンアミド、またはそれらの誘導体である、前記〔３３〕～〔７５〕のいずれか１項に記載の方法または組成物。
〔７７〕Ｍが、出現毎に独立して、クマリン色素、レゾルフィン色素、ジピロメテンボロンジフルオリド色素、ルテニウムビピリジル色素、エネルギー移動色素、チアゾールオレンジ色素、ポリメチンまたはＮ－アリール－１，８－ナフタルイミド色素である、前記〔３３〕～〔７６〕のいずれか１項に記載の方法または組成物。
〔７８〕Ｍが、出現毎に独立して、ピレン、ペリレン、ペリレンモノイミドもしくは６－ＦＡＭ、またはそれらの誘導体である、前記〔３３〕～〔７７〕のいずれか１項に記載の方法または組成物。
〔７９〕Ｍが、出現毎に独立して、以下の構造の１つ：
〔化１２〕
Figure 2019182765000164
を有する、前記〔３３〕～〔７８〕のいずれか１項に記載の方法または組成物。
〔８０〕ポリマー色素が、表２から選択される構造を有する、前記〔３３〕～〔７９〕のいずれか１項に記載の方法または組成物。

Claims (17)

  1. ポリマー色素、標的指向性部分およびマグネシウム塩を含む混合物を調製するステップ、および混合物を、共有結合性コンジュゲートを形成するのに十分な時間および温度で熟成させるステップを含む、ポリマー色素と標的指向性部分との共有結合性コンジュゲートを形成する方法であって、
    ａ）ポリマー色素が、
    ｉ）２つ以上の蛍光または発色部分
    ｉｉ）少なくとも１つの負の電荷を帯びたホスフェート基；および
    ｉｉｉ）標的指向性部分の相補性反応性基Ｑ’と共有結合を形成することが可能な反応性基Ｑ
    を含み、ここで、２つ以上の蛍光または発色部分がそれぞれ、少なくとも１つの負の電荷を帯びたホスフェート基を含むリンカーを介して、隣接する蛍光または発色部分に結合しており、
    ｂ）標的指向性部分が、標的分析対象に親和性を有しており、かつ相補性反応性基Ｑ’を含む、
    方法。
  2. 標的分析対象を検出する方法であって、
    ａ）マグネシウム塩の存在下で、共有結合性コンジュゲートを標的分析対象と結合させて、分析対象－標的指向性部分複合体を形成するステップであって、共有結合性コンジュゲートが、
    ｉ）標的分析対象に対して親和性を有しており、かつポリマー色素への共有結合を含む標的指向性部分
    ｉｉ）ポリマー色素であって、
    Ａ）２つ以上の蛍光または発色部分
    Ｂ）少なくとも１つの負の電荷を帯びたホスフェート基、および
    Ｃ）標的指向性部分への共有結合
    を含むポリマー色素を含み、ここで、２つ以上の蛍光または発色部分がそれぞれ、少なくとも１つの負の電荷を帯びたホスフェート基を含むリンカーを介して、隣接する蛍光または発色部分に結合している、ステップ
    ｂ）分析対象－標的指向性部分複合体からの蛍光または発色シグナルを検出するステップ
    を含む方法。
  3. 標的分析対象を検出する方法であって、
    ａ）共有結合性コンジュゲートを標的分析対象と結合させて、分析対象－標的指向性部分複合体を形成するステップであって、共有結合性コンジュゲートが、
    ｉ）標的分析対象に対して親和性を有しており、かつポリマー色素への共有結合を含む標的指向性部分、ならびに
    ｉｉ）ポリマー色素であって、
    Ａ）２つ以上の蛍光または発色部分
    Ｂ）少なくとも１つの負の電荷を帯びたホスフェート基、および
    Ｃ）標的指向性部分への共有結合
    を含むポリマー色素を含み、ここで、２つ以上の蛍光または発色部分がそれぞれ、少なくとも１つの負の電荷を帯びたホスフェート基を含むリンカーを介して、隣接する蛍光または発色部分に結合している、ステップ、
    ｂ）ｉ）共有結合性コンジュゲートと標的分析対象とを結合させる間、共有結合性コンジュゲートおよび標的分析対象を、マグネシウム塩で処理するステップ、および／または
    ｉｉ）共有結合性コンジュゲートと標的分析対象とを結合させた後に、分析対象－標的指向性部分複合体を、マグネシウム塩を含む洗浄溶液で処理するステップ、ならびに
    ｃ）分析対象－標的指向性部分複合体からの蛍光または発色シグナルを検出するステップ
    を含む方法。
  4. 共有結合性コンジュゲートを標的分析対象と結合させるステップが、マグネシウム塩の存在下で行われる、請求項３に記載の方法。
  5. Ａ）蛍光または発色シグナルを検出する前に、分析対象－標的指向性部分複合体からマグネシウム塩のすべてを実質的に除去するステップ、
    Ｂ）共有結合性コンジュゲートを形成するステップであって、共有結合性コンジュゲートを形成する前に、ポリマー色素およびマグネシウム塩を混合して、ポリマー色素およびマグネシウム塩を含む組成物を形成させる、ステップ、及び
    Ｃ）共有結合性コンジュゲートを形成する前に、ポリマー色素およびマグネシウム塩を含む組成物を熟成させるステップ、
    をさらに含む、請求項２～４のいずれか１項に記載の方法。
  6. マグネシウム塩が塩化マグネシウムである、請求項５に記載の方法。
  7. リンカーが、１つまたは複数のアルキレンまたはアルキレンオキシド部分をさらに含み、任意にアルキレンオキシド部分がポリエチレンオキシド部分を含む、請求項１～６のいずれか１項に記載の方法。
  8. Ａ）共有結合性コンジュゲートが、マグネシウム塩の非存在下で調製した対応するコンジュゲートよりも少なくとも１．１倍高い蛍光吸光係数を有するか、又は
    Ｂ）共有結合性コンジュゲートが、マグネシウム塩の非存在下で調製した対応するコンジュゲートよりも少なくとも１．２倍高い蛍光吸光係数を有する、請求項１～７のいずれか１項に記載の方法。
  9. ポリマー色素が、以下の構造（Ｉ）：

    Figure 2019182765000001
    (I)
    またはその立体異性体、塩もしくは互変異性体（式中、
    Ｍは、出現毎に独立して、蛍光または発色部分を含む部分であり、
    Ｌ1は、出現毎に独立して、ｉ）任意に用いてもよいアルキレン、アルケニレン、アルキニレン、ヘテロアルキレン、ヘテロアルケニレン、ヘテロアルキニレンもしくはヘテロ原子リンカー；またはｉｉ）２つの相補性反応性基の反応によって形成することが可能な官能基を含むリンカーのいずれかであり、
    Ｌ2およびＬ3は、出現毎に独立して、任意に用いてもよいアルキレン、アルケニレン、アルキニレン、ヘテロアルキレン、ヘテロアルケニレン、ヘテロアルキニレンまたはヘテロ原子リンカーであり、
    Ｌ4は、出現毎に独立して、アルキレンまたはアルキレンオキシドリンカーであり、
    Ｒ1は、出現毎に独立して、Ｈ、アルキルまたはアルコキシであり、
    Ｒ2およびＲ3は、それぞれ独立して、Ｈ、ＯＨ、ＳＨ、アルキル、アルコキシ、アルキルエーテル、ヘテロアルキル、－ＯＰ（＝Ｒa）（Ｒb）Ｒc、Ｑもしくはその保護形態、またはＬ’であり、
    Ｒ4は、出現毎に独立して、ＯＨ、ＳＨ、Ｏ-、Ｓ-、ＯＲdまたはＳＲdであり、
    Ｒ5は、出現毎に独立して、オキソ、チオキソであるか、または存在せず、
    Ｒaは、ＯまたはＳであり、
    Ｒbは、ＯＨ、ＳＨ、Ｏ-、Ｓ-、ＯＲdまたはＳＲdであり、
    Ｒcは、ＯＨ、ＳＨ、Ｏ-、Ｓ-、ＯＲd、ＯＬ’、ＳＲd、アルキル、アルコキシ、ヘテロアルキル、ヘテロアルコキシ、アルキルエーテル、アルコキシアルキルエーテル、ホスフェート、チオホスフェート、ホスホアルキル、チオホスホアルキル、ホスホアルキルエーテルまたはチオホスホアルキルエーテルであり、
    Ｒdは、対イオンであり、
    Ｌ’は、出現毎に独立して、Ｑへの共有結合を含むリンカー、標的指向性部分への共有結合を含むリンカー、分析対象分子への共有結合を含むリンカー、固体支持体への共有結合を含むリンカー、固体支持体残基への共有結合を含むリンカー、ヌクレオシドへの共有結合を含むリンカー、または構造（Ｉ）のさらなる化合物への共有結合を含むリンカーであり、
    ｍは、出現毎に独立して、０以上の整数であり、ただし、出現するｍの少なくとも１つは、１以上の整数であることを条件とし、こうして、化合物は、少なくとも１つのＬ4を含み、
    ｎは、１以上の整数である）
    を有する、請求項１～８のいずれか１項に記載の方法。
  10. ポリマー色素が、以下の構造（ＩＡ）：

    Figure 2019182765000002
    (IA)
    （式中、Ａ）ｚは、２～１００の整数であるか、又は、Ｂ）ｚは、３～６の整数である）
    を有する、請求項１～９のいずれか１項に記載の方法。
  11. Ａ）Ｌ1が、以下の構造の１つ：

    Figure 2019182765000003
    を有するか、
    Ｂ）出現するＬ1の少なくとも１つについて、Ｌ1－Ｍが、以下の構造：

    Figure 2019182765000004
    （式中、Ｌ1aおよびＬ1bは、それぞれ独立して、任意に用いてもよいリンカーである）
    を有するか、
    Ｃ）出現するＬ1の少なくとも１つについて、Ｌ1－Ｍが、以下の構造：
    Figure 2019182765000005
    （式中、Ｌ1aおよびＬ1bは、それぞれ独立して、任意に用いてもよいリンカーであるか、
    Ｌ1aおよびＬ1bが、存在する場合、それぞれ独立して、アルキレンまたはヘテロアルキレンであるか、または、
    Ｌ1aおよびＬ1bが、存在する場合、独立して、以下の構造の１つ：

    Figure 2019182765000006
    を有する）を有するか、又は
    Ｄ）Ｌ1が、出現毎に独立して、任意に用いてもよいアルキレンまたはヘテロアルキレンリンカーである、
    請求項１～１０のいずれか１項に記載の方法。
  12. 化合物が、以下の構造（ＩＢ）：

    Figure 2019182765000007
    (IB)
    （式中、
    ｘ1、ｘ2、ｘ3およびｘ4は、出現毎に独立して、０～６の整数であり、
    ｚは、２～１００の整数である）
    を有する、請求項１０～１１のいずれか１項に記載の方法。
  13. Ａ）Ｒ4が、出現毎に独立して、ＯＨ、Ｏ-またはＯＲdである、及び／又は
    Ｂ）Ｒ 5 が、出現毎に、オキソである、及び／又は
    Ｃ）Ｒ 1 が、出現毎に、Ｈである、及び／又は
    Ｄ）Ｒ 2 およびＲ 3 が、それぞれ独立して、ＯＨまたは－ＯＰ（＝Ｒ a ）（Ｒ b ）Ｒ c である、及び／又は
    Ｅ）Ｒ 2 またはＲ 3 の一方が、ＯＨまたは－ＯＰ（＝Ｒ a ）（Ｒ b ）Ｒ c であり、Ｒ 2 またはＲ 3 のもう一方が、ＱまたはＱへの共有結合を含むリンカーである、及び／又は
    Ｆ）Ｒ 2 およびＲ 3 が、それぞれ独立して、－ＯＰ（＝Ｒ a ）（Ｒ b ）Ｒ c である、ここで、任意にＲ c がＯＬ’であってもよく、及び／又は、
    Ｌ’が、Ｑ、標的指向性部分、分析対象分子、固体支持体、固体支持体残基、ヌクレオシドまたは構造（Ｉ）のさらなる化合物へのヘテロアルキレンリンカーであり、及び／又は、
    Ｌ’が、アルキレンオキシドもしくはホスホジエステル部分、またはそれらの組合せを含み、及び／又は、
    Ｌ’が、以下の構造：

    Figure 2019182765000008
    （式中、
    ｍ”およびｎ”は、独立して、１～１０の整数であり、
    Ｒ e は、Ｈ、電子対または対イオンであり、
    Ｌ”は、Ｒ e 、またはＱ、標的指向性部分、分析対象分子、固体支持体、固体支持体残基、ヌクレオシドもしくは構造（Ｉ）のさらなる化合物への直接結合もしくは連結基である）
    を有する、及び／又は
    Ｇ）Ｒ 2 またはＲ 3 が、以下の構造の１つ：

    Figure 2019182765000009
    を有する、及び／又は
    Ｈ）Ｒ 2 またはＲ 3 が、以下の構造：

    Figure 2019182765000010
    を有する、
    請求項９～１２のいずれか１項に記載の方法。
  14. Ａ）Ｑが、求核性反応性基、求電子性反応性基または環化付加反応性基を含む、
    Ｂ）Ｑが、スルフヒドリル、ジスルフィド、活性化エステル、イソチオシアネート、アジド、アルキン、アルケン、ジエン、求ジエン体、酸ハロゲン化物、ハロゲン化スルホニル、ホスフィン、α－ハロアミド、ビオチン、アミノまたはマレイミド官能基を含み、任意に活性化エステルが、Ｎ－スクシンイミドエステル、イミドエステルまたはポリフルオロフェニルエステルであり、又は、アジドが、アルキルアジドまたはアシルアジドである、及び／又は
    Ｃ）Ｑが、以下の構造：
    Figure 2019182765000011

    Figure 2019182765000012

    Figure 2019182765000013

    Figure 2019182765000014

    Figure 2019182765000015

    Figure 2019182765000016

    Figure 2019182765000017

    又は、－ＮＨ 2 、の一つを有する部分であり、ここで、Ｘはハロであり、及びＥＷＧは電子吸引基である、
    請求項９～１３のいずれか１項に記載の方法。
  15. Ａ）Ｍが、出現毎に独立して、４つ以上のアリールもしくはヘテロアリール環、またはそれらの組合せを含む部分である、及び／又は
    Ｂ）Ｍが発色性である、及び／又は
    Ｃ）Ｍが蛍光性である、及び／又は
    Ｄ）Ｍが、出現毎に独立して、少なくとも４つの縮合環を含む、縮合多環式アリール部分を含む、及び／又は
    Ｅ）Ｍが、出現毎に独立して、ジメチルアミノスチルベン、キナクリドン、フルオロフェニル－ジメチル－ＢＯＤＩＰＹ、ｈｉｓ－フルオロフェニル－ＢＯＤＩＰＹ、アクリジン、テリレン、セキシフェニル、ポルフィリン、ベンゾピレン、（フルオロフェニル－ジメチル－ジフルオロボラ－ジアザ－インダセン）フェニル、（ビス－フルオロフェニル－ジフルオロボラ－ジアザ－インダセン）フェニル、クアテルフェニル、ビ－ベンゾチアゾール、ター－ベンゾチアゾール、ビ－ナフチル、ビ－アントラシル、スクアライン、スクアリリウム、９，１０－エチニルアントラセンまたはター－ナフチル部分である、及び／又は
    Ｆ）Ｍが、出現毎に独立して、ｐ－ターフェニル、ペリレン、アゾベンゼン、フェナジン、フェナントロリン、アクリジン、チオキサントレン、クリセン、ルブレン、コロネン、シアニン、ペリレンイミドもしくはペリレンアミド、またはそれらの誘導体である、及び／又は
    Ｇ）Ｍが、出現毎に独立して、クマリン色素、レゾルフィン色素、ジピロメテンボロンジフルオリド色素、ルテニウムビピリジル色素、エネルギー移動色素、チアゾールオレンジ色素、ポリメチンまたはＮ－アリール－１，８－ナフタルイミド色素である、及び／又は
    Ｈ）Ｍが、出現毎に独立して、ピレン、ペリレン、ペリレンモノイミドもしくは６－ＦＡＭ、またはそれらの誘導体である、及び／又は
    Ｉ）Ｍが、出現毎に独立して、以下の構造：

    Figure 2019182765000018
    の１つを有する、
    請求項９～１４のいずれか１項に記載の方法。
  16. ポリマー色素が、以下の構造：
    Figure 2019182765000019

    Figure 2019182765000020

    Figure 2019182765000021

    Figure 2019182765000022

    Figure 2019182765000023

    Figure 2019182765000024

    Figure 2019182765000025

    Figure 2019182765000026

    Figure 2019182765000027

    Figure 2019182765000028

    Figure 2019182765000029

    Figure 2019182765000030
    （式中、ｚは３～６の整数であり、ｍは２～５の整数であり、及びｎは１～１０の整数である）、
    Figure 2019182765000031

    Figure 2019182765000032

    Figure 2019182765000033

    Figure 2019182765000034
    （式中、Ｒ 2 は

    Figure 2019182765000035

    であり、及びＲ 3 は


    Figure 2019182765000036

    である）、
    Figure 2019182765000037
    （式中、Ｒ 2 は
    Figure 2019182765000038

    であり、及び、Ｒ 3 は

    Figure 2019182765000039

    である）、
    Figure 2019182765000040
    （式中、Ｒ 2 は、

    Figure 2019182765000041

    であり、及びＲ 3 は、
    Figure 2019182765000042

    である） 、
    Figure 2019182765000043
    （式中、Ｒ 2 は、

    Figure 2019182765000044

    であり、ここでＡは抗体であり、及びＲ 3 は、

    Figure 2019182765000045

    である） 、
    Figure 2019182765000046
    （式中、Ｒ 2 は、

    Figure 2019182765000047

    であり、及びＲ 3 は、

    Figure 2019182765000048

    である）、
    Figure 2019182765000049
    （式中、Ｒ 2 は、

    Figure 2019182765000050

    （式中、ｍ”は４又は１０である）であり、及びＲ 3 は、

    Figure 2019182765000051


    である）、
    Figure 2019182765000052
    （式中、Ｒ 2 は、

    Figure 2019182765000053

    （式中、ｍ”は４又は１０であり、及びＡは抗体である）であり、及び、Ｒ 3 は、

    Figure 2019182765000054

    である） 、
    Figure 2019182765000055
    （式中、Ｒ 2 は、

    Figure 2019182765000056

    （式中、ｍ”は４又は１０である）であり、及びＲ 3 は、

    Figure 2019182765000057

    である）、
    Figure 2019182765000058
    （式中、Ｒ 2 は、

    Figure 2019182765000059

    （式中、ｍ”は４又は１０である）であり、及びＲ 3 は、

    Figure 2019182765000060

    である）、
    Figure 2019182765000061

    （式中、Ｒ 2 は、

    Figure 2019182765000062

    （式中、ｍ”は４又は１０である）であり、及びＲ 3 は、

    Figure 2019182765000063

    である）、
    Figure 2019182765000064
    （式中、Ｒ 2 は、

    Figure 2019182765000065

    であり、及びＲ 3 は、

    Figure 2019182765000066

    である）、
    Figure 2019182765000067
    （式中、Ｒ 2 は、

    Figure 2019182765000068

    であり、及びＲ 3 は、

    Figure 2019182765000069

    である）、
    Figure 2019182765000070
    （式中、Ｒ 2 は、

    Figure 2019182765000071

    であり、ここでＡは抗体であり、及びＲ 3 は、

    Figure 2019182765000072

    である）、
    Figure 2019182765000073
    （式中、Ｒ 2 は、

    Figure 2019182765000074

    であり、及びＲ 3 は、


    Figure 2019182765000075

    である）、
    Figure 2019182765000076
    （式中、Ｒ 2 は、

    Figure 2019182765000077

    であり、及びＲ 3 は、

    Figure 2019182765000078

    である）、
    Figure 2019182765000079
    （式中、Ｒ 2 は、

    Figure 2019182765000080

    （式中、ｍ”は４又は１０である）であり、及びＲ 3 は、

    Figure 2019182765000081

    である）、
    Figure 2019182765000082
    （式中、Ｒ 2 は、

    Figure 2019182765000083

    であり、及びＲ 3 は、

    Figure 2019182765000084

    である）、
    Figure 2019182765000085
    （式中、Ｒ 2 は、

    Figure 2019182765000086

    であり、及びＲ 3 は、

    Figure 2019182765000087

    である）、
    Figure 2019182765000088
    （式中、Ｒ 2 は、

    Figure 2019182765000089

    であり、ここでＡは抗体であり、及びＲ 3 は、

    Figure 2019182765000090

    である） 、
    Figure 2019182765000091
    （式中、Ｒ 2 は、

    Figure 2019182765000092

    であり、及びＲ 3 は、

    Figure 2019182765000093

    である） 、
    Figure 2019182765000094
    （式中、Ｒ 2 は、

    Figure 2019182765000095

    であり、及びＲ 3 は、

    Figure 2019182765000096

    である） 、
    Figure 2019182765000097
    （式中、Ｒ 2 は、

    Figure 2019182765000098

    であり、及びＲ 3 は、

    Figure 2019182765000099

    である） 、
    Figure 2019182765000100
    （式中、Ｒ 2 は、

    Figure 2019182765000101

    であり、及びＲ 3 は、

    Figure 2019182765000102

    である） 、
    Figure 2019182765000103
    （式中、Ｒ 2 は、

    Figure 2019182765000104

    であり、及びＲ 3 は、


    Figure 2019182765000105

    である） 、

    Figure 2019182765000106
    （式中、Ｒ 2 は、

    Figure 2019182765000107

    であり、ここでＡは抗体であり、及びＲ 3 は、


    Figure 2019182765000108

    である） 、
    Figure 2019182765000109
    （式中、Ｒ 2 は、

    Figure 2019182765000110

    であり、及びＲ 3 は、

    Figure 2019182765000111

    である） 、

    Figure 2019182765000112
    （式中、Ｒ 2 及びＲ 3 は、

    Figure 2019182765000113

    である） 、

    Figure 2019182765000114

    Figure 2019182765000115

    Figure 2019182765000116
    （式中、Ｒ 3 は、

    Figure 2019182765000117

    である） 、

    Figure 2019182765000118

    Figure 2019182765000119

    Figure 2019182765000120

    （式中、Ｒ 3 は、

    Figure 2019182765000121

    である） 、
    Figure 2019182765000122
    （式中、Ｒ 2 は、

    Figure 2019182765000123

    であり、及びＲ 3 は、

    Figure 2019182765000124

    である） 、
    Figure 2019182765000125
    （式中、Ｒ 2 は、

    Figure 2019182765000126

    であり、及びＲ 3 は、

    Figure 2019182765000127

    である）、
    Figure 2019182765000128
    （式中、Ｒ 3 は、

    Figure 2019182765000129

    である） 、
    Figure 2019182765000130
    （式中、Ｒ 3 は、

    Figure 2019182765000131

    である） 、
    Figure 2019182765000132
    （式中、Ｒ 3 は、

    Figure 2019182765000133

    である） 、
    Figure 2019182765000134
    （式中、Ｒ 3 は、

    Figure 2019182765000135

    である） 、
    Figure 2019182765000136
    （式中、Ｒ 2 は、

    Figure 2019182765000137

    であり、及びＲ 3 は、

    Figure 2019182765000138

    である） 、
    Figure 2019182765000139
    （式中、Ｒ 3 は、

    Figure 2019182765000140

    である） 、
    Figure 2019182765000141
    （式中、Ｒ 2 は、

    Figure 2019182765000142

    であり、及びＲ 3 は、

    Figure 2019182765000143

    である） 、
    Figure 2019182765000144
    （式中、Ｒ 2 は、

    Figure 2019182765000145

    であり、及びＲ 3 は、

    Figure 2019182765000146

    であり、ここでＡは抗体である）、
    Figure 2019182765000147
    （式中、Ｒ 3 は、

    Figure 2019182765000148

    であり、ここでＡは抗体である）、又は

    Figure 2019182765000149

    （式中、ｎは２３であり、Ｆ、Ｆ’及びＦ”は、それぞれ以下の構造を有する：
    Figure 2019182765000150

    Figure 2019182765000151
    、及び、ｄＴは以下の構造を有する：
    Figure 2019182765000152

    ）、の１つを有する、請求項１０～１５のいずれか１項に記載の方法。
  17. 共有結合性コンジュゲートおよびマグネシウム塩を含む組成物であって、共有結合性コンジュゲートが、
    ｉ）ポリマー色素への共有結合を含む標的指向性部分
    ｉｉ）ポリマー色素であって、
    ａ）２つ以上の蛍光または発色部分
    ｂ）少なくとも１つの負の電荷を帯びたホスフェート基、および
    ｃ）標的指向性部分への共有結合
    を含むポリマー色素
    を含み、ここで、２つ以上の蛍光または発色部分がそれぞれ、少なくとも１つの負の電荷を帯びたホスフェート基を含むリンカーを介して、隣接する蛍光または発色部分に結合している、組成物。
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