JPWO2013080941A1 - 核酸増幅用基材及び核酸増幅方法 - Google Patents
核酸増幅用基材及び核酸増幅方法 Download PDFInfo
- Publication number
- JPWO2013080941A1 JPWO2013080941A1 JP2012557340A JP2012557340A JPWO2013080941A1 JP WO2013080941 A1 JPWO2013080941 A1 JP WO2013080941A1 JP 2012557340 A JP2012557340 A JP 2012557340A JP 2012557340 A JP2012557340 A JP 2012557340A JP WO2013080941 A1 JPWO2013080941 A1 JP WO2013080941A1
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- nucleic acid
- acid amplification
- gel
- substrate
- primer
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6844—Nucleic acid amplification reactions
- C12Q1/686—Polymerase chain reaction [PCR]
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Apparatus Associated With Microorganisms And Enzymes (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Description
(I)アレイ化された複数の画分を有し、当該画分中に、核酸を増幅するための異なる種類のプライマー対、ポリメラーゼ及びバッファー成分を含む加熱により溶解し得る親水性ゲルが保持された、核酸増幅用基材。
また、バッファー成分が、例えば、KCl、Tris−HCl、MgCl2、ゼラチン及びTriton X−100からなる群より選ばれる少なくとも1種を含むものであってもよい。
また、親水性ゲル(加熱により溶解し得る親水性ゲル)が、アガロース、アルギン酸、デキストラン、ビニルアルコール及びエチレングリコールからなる群より選ばれる少なくとも1種をモノマー成分として用いて調製されたゲルであってもよく、特に、アガロースゲルが好ましい。ここで、親水性ゲルの濃度は、例えば、0.5〜2質量%であってもよい。
(1)複数本の中空繊維を、中空繊維の各繊維軸が同一方向となるように3次元に配列し、その配列を樹脂で固定することにより、中空繊維束を製造する工程
(2)プライマーを含むゲル前駆体溶液を、予め加温した中空繊維束の各中空繊維の中空部に導入する工程
(3)中空繊維束の中空部に導入したゲル前駆体溶液を反応させ、プライマーを含むゲル状物を中空繊維の中空部に保持する工程
(4)疎水性の液体中で、中空繊維束を繊維の長手方向に交差する方向で切断して薄片化する工程
なお、本明細書は、本願優先権主張の基礎となる特願2011-263730号明細書等(2011年12月1日出願)の全体を包含する。また、本明細書において引用された全ての刊行物、例えば先行技術文献、及び公開公報、特許公報その他の特許文献は、参照として本明細書に組み込まれる。
本発明に用いる核酸増幅用基材(以下、「基材」ということがある。)の素材(原料)は、加熱処理を行う反応容器として用いるため、例えば100℃以上の温度下でも形状を維持できるものであることが好ましく、より好ましくは110℃以上の温度下でも形状を維持できるものである。このような素材としては、例えば、ガラス、シリコン、樹脂等が挙げられる。樹脂としては、エポキシ樹脂、ポリプロピレン樹脂、ポリスチレン樹脂、ポリウレタン樹脂等を使用することができる。
本発明において、基材が有する複数の画分は、アレイ化されたものである。アレイ化とは、例えば、どのような種類のプライマー対が、どの画分に含まれているか(配置されているか)が明確となっていることを含む意味である。
本発明の基材の画分中に保持するゲルの種類は、核酸増幅反応を行うことができる限り限定されない。酵素反応を行う必要があるので、親水性ゲルを使用するのが好ましい。親水性ゲルの中でも、加熱により溶解し得るものが好ましく、具体的には、室温付近(好ましくは25℃以下、より好ましくは30℃以下、さらに好ましくは35℃以下)においてはゲルとして存在し、核酸増幅反応を実施する温度(例えば、好ましくは60℃以上、好ましくは50℃以上、さらに好ましくは40℃以上の加熱条件下)においては液相(溶液状)であるものが好ましい。核酸増幅反応時には溶液中(加熱により溶解した親水性ゲル中)で当該反応が効率良く進み、その他の時にはゲルを形成することにより、取り扱いやすいからである。
複数種類の標的核酸配列を増幅するためには、アレイ化された複数の画分に、画分ごとに異なる種類のプライマー対が搭載されている必要がある。プライマー自体は、DNAからなるオリゴヌクレオチドであってもよいし、特異性及び反応性に影響の無い範囲において、RNAやPNA、LNA等を用いることも可能である。
本発明の核酸増幅反応用基材は、基材を作製した後に画分を形成することもできるし、中空の管や繊維を用いて基材を製造することもできる。例えば、以下の工程を含む方法により安価かつ大量に製造することが可能である。
(1)複数本の中空繊維を、中空繊維の各繊維軸が同一方向となるように3次元に配列し、その配列を樹脂で固定することにより、中空繊維束を製造する工程
(2)プライマー対を含むゲル前駆体溶液を、予め加温した中空繊維束の各中空繊維の中空部に導入する工程
(3)中空繊維束の中空部に導入したゲル前駆体溶液を反応させ、プライマー対を含むゲル状物を中空繊維の中空部に保持する工程
(4)疎水性の液体中で、中空繊維束を繊維の長手方向に交差する方向で切断して薄片化する工程。
複数の繊維を各繊維軸が略同一となるように整然と配列するには、例えば、WO00/53736号記載の配列治具を用いて規則正しく配列させる。配列を構成する繊維の本数は、1cm2あたり10〜1,000,000本で配列させることができる。当該繊維の本数は、本発明の基材の画分数に応じて適宜選択することができる。
薄片化する際は、包埋物を、該包埋物の繊維軸に対して交差する方向に切断する。切断する角度は限定されず実験等の目的に応じて適宜選択することができる。例えば、繊維軸に対して45〜90°、好ましくは60〜90°、さらに好ましくは直交する方向(繊維軸に対して90°)である。
本発明の核酸増幅反応用基材を用いて核酸を増幅及び検出する方法は、プライマーを用いる方法であれば、熱サイクルをかけるPCR法であっても、等温反応のLAMP法であってもよい。これらの手法は当業者であれば核酸増幅反応の条件設定、プライマー設計等は適宜実施できる。ただし、反応時の温度が核酸増幅反基材におけるゲルの融点以上であることが必要である。
まず反応開始前に、本発明の基材中の各画分に、サンプルとなる標的塩基配列を含む核酸(以下、「テンプレート」という。)を供給する。当該テンプレートは、例えば、粉末状などの固体で供給することもできるし、溶液として供給することもできる。
テンプレート供給後の基材を加熱することにより、核酸増幅反応を行う。核酸を増幅させる際の反応条件(加熱条件)は限定されず、使用する酵素(ポリメラーゼ等)、テンプレート等に応じて適宜選択することができる。例えば、PCR法を行う場合は、熱サイクルとして、二本鎖核酸を乖離させるために98℃で10秒間、アニーリングのために55℃で30秒間、核酸の伸長反応のために72℃で1分間加熱する工程を30サイクル程度繰り返すことなどが例示できる。各工程の温度や時間及びサイクル数については、当業者であれば宜選択することが可能である。また、LAMP法を行う場合は、例えば50〜70℃で等温加熱することが例示でき、加熱時間は当業者であれば宜選択することができる。
本発明の基材は、核酸増幅用キットとして使用することも可能である。キットには、本発明の基材と、テンプレート供給用基材とを含むことが好ましい。
板の中央部に直径0.32mmの孔が0.42mm間隔で、格子状に19×12、228個配列された、厚さ0.1mmの多孔板2枚を用い、その多孔板の全ての孔に、カーボンブラックで着色したポリカーボネート製中空繊維(三菱レイヨン株式会社製、外径0.28mm、内径0.18mm、長さ500mm)を通過させ、この2枚の繊維を通過させた多孔板を50mm離間させ、離間した多孔板間に、カーボンブラックで着色したポリウレタン樹脂(日本ポリウレタン工業株式会社製、ニッポラン4276及びコロネート4403)を充填し、長さ50mm、7×12mm角の角柱状の両端に樹脂で固定化されない部分を有する樹脂ブロックを得た。
検出対象の異なる3種類のプライマー対、すなわち、計6種類のプライマー(下記のA1(配列番号1),A2(配列番号2),B1(配列番号3),B2(配列番号4),C1(配列番号5),C2(配列番号6))を、各10pmol/μLの濃度となるように準備し、dNTP、バッファー、DNAポリメラーゼを含有するPCRプレミックス(タカラバイオ(株)PremixTaq)、アガロース(タカラバイオ(株)LO3)、SYBR Green I(LifeTechnologies社)、Streptavidin−Cy5(GEヘルスケア社)、超純水を用いてプライマー対に応じた3種類の核酸増幅反応溶液を調製した(下表1参照)。
プライマーA2:ttatcacgtccttcttcgcc(配列番号2)
プライマーB2:ctttcgcttgaccatattattgtcc(配列番号4)
プライマーC2:atcggctcttactacctaggc(配列番号6)
調製した3種類の核酸増幅反応溶液をヒートブロックで80℃、5分加熱し、アガロースを溶解させた。アガロースの溶解した核酸増幅反応溶液中に、予め65℃に加熱しておいた樹脂ブロックの、末端からはみ出した中空繊維を5本ずつ浸漬し、当該中空繊維の逆端からゲル溶液を吸うことで、樹脂ブロック内へ核酸増幅反応溶液を導入した。
樹脂ブロックを室温まで冷却し、内部の核酸増幅反応溶液をゲル化した。
上記で得た3種類のプライマー対を含む核酸増幅反応溶液からなるゲルが充填された樹脂ブロックを、ミクロトームを用いて250μmの厚さに切り出し、縦12×横19の計228本の孔が規則的に配列された、核酸増幅反応用基材を得た。乾燥紡糸のため、得られた核酸増幅反応用基材の両面をセロハンテープで封止した。
テンプレート溶液として、プライマーA1及びA2の組み合わせでのみ増幅が可能な標的核酸配列A(配列番号7)からなるDNAを1amol/μLの濃度にて用意した。
caggcagacggaagagttcgctatagctcagttggttagagcgctacactgataatgtagaggtcggcagttcaactctgggcgaagaaggacgtgataa(配列番号7)。
核酸増幅反応用基材の片面のセロハンテープを剥がし、同じ面にテンプレート溶液を塗布したシートを圧着した。その後、逆側のセロハンテープを剥がし、50μLのミネラルオイル(QIAGEN社)が入ったサンプルチューブに浸漬した。
PCR実施前に、蛍光顕微鏡を用い、ミラーユニット(オリンパス WIB−UMWIB3)にて二本鎖核酸に特異的にインターカレートしたSYBRGreenIの蛍光を検出、CCDカメラにて撮像の後、各孔における蛍光の強度を画像処理ソフト(Media Cybernetics社 ImagePro)にて数値化した(図5)。PCR反応を実施していないため二本鎖核酸は生成されておらず、ここで得られたシグナルはバックグラウンドとみなすことが可能である。
核酸増幅反応用基材を浸漬したエッペンチューブを、サーマルサイクラーにセットし、98℃10秒、55℃30秒、72℃1分を1サイクルとし、これを30サイクル繰り返した。
蛍光顕微鏡を用い、ミラーユニット(オリンパス WIB−UMWIB3)にて二本鎖核酸に特異的にインターカレートしたSYBRGreenIの蛍光を検出、CCDカメラにて撮像の後、各孔における蛍光の強度を画像処理ソフト(Media Cybernetics社 ImagePro)にて数値化したところ、3種類のプライマーセットのうち、プライマー対Aを導入した画分でのみ、シグナル強度の有意な増強が確認された。
調製した核酸増幅反応溶液をヒートブロックで80℃、5分加熱し、アガロースを溶解させた。ヒートブロック及び樹脂ブロック等を全て70℃環境の恒温装置に入れ、当該温度条件下において、アガロースの溶解した核酸増幅反応溶液に対して樹脂ブロックの末端からはみ出した中空繊維を19本ずつ浸漬し、当該中空繊維の逆端からゲル溶液を吸うことを12回繰り繰り返し、樹脂ブロック内へ核酸増幅反応溶液を導入した。
樹脂ブロックを室温まで冷却し、内部の核酸増幅反応溶液をゲル化した。
上記で得た核酸増幅反応溶液からなるゲルが充填された樹脂ブロックを、ミネラルオイル(QIAGEN社)で樹脂ブロック表面及びスライス刃を被覆した条件下(具体的には、樹脂ブロックをミネラルオイル中に浸漬させた状況下)において、ミクロトームを用いて500μmの厚さに切り出し、縦12×横19の計228本の孔が規則的に配列された核酸増幅反応用基材を15枚得た。
スライスして得られた核酸増幅反応用基材について、それぞれを光学顕微鏡にて観察し、樹脂ブロック中の中空糸内に担持されたアガロースゲルの割合(残存割合)を調べたところ、図6に示す結果となった。
配列番号2:プライマー
配列番号3:プライマー
配列番号4:プライマー
配列番号5:プライマー
配列番号6:プライマー
配列番号7:テンプレート
Claims (10)
- アレイ化された複数の画分を有し、当該画分中に、核酸を増幅するための異なる種類のプライマー対、DNAポリメラーゼ及びバッファー成分を含む加熱により溶解し得る親水性ゲルが保持された、核酸増幅用基材。
- 各画分中のプライマーの濃度が、1〜1000fmol/μLである請求項1に記載の基材。
- バッファー成分が、KCl、Tris−HCl、MgCl2、ゼラチン及びTriton X−100からなる群より選ばれる少なくとも1種を含む、請求項1又は2に記載の基材。
- 親水性ゲルが、アガロース、アルギン酸、デキストラン、ビニルアルコール及びエチレングリコールからなる群より選ばれる少なくとも1種をモノマー成分として用いて調製されたゲルである、請求項1〜3のいずれか1項に記載の基材。
- 親水性ゲルがアガロースゲルである、請求項1〜3のいずれか1項に記載の基材。
- 親水性ゲルの濃度が0.5〜2質量%である、請求項1〜5のいずれか1項に記載の基材。
- 各画分の大きさは、該画分の形状の最大幅が10μm〜1000μmである、請求項1〜6のいずれか1項に記載の基材。
- 下記工程を含む、請求項1に記載の核酸増幅用基材の製造方法。
(1)複数本の中空繊維を、中空繊維の各繊維軸が同一方向となるように3次元に配列し、その配列を樹脂で固定することにより、中空繊維束を製造する工程
(2)プライマーを含むゲル前駆体溶液を、予め加温した中空繊維束の各中空繊維の中空部に導入する工程
(3)中空繊維束の中空部に導入したゲル前駆体溶液を反応させ、プライマーを含むゲル状物を中空繊維の中空部に保持する工程
(4)疎水性の液体中で、中空繊維束を繊維の長手方向に交差する方向で切断して薄片化する工程 - 請求項1〜7のいずれか1項に記載の基材とテンプレート供給用基材とを含む、核酸増幅用キット。
- 請求項1〜7のいずれか1項に記載の基材の各画分にテンプレートを供給する工程、及び、当該供給後の基材を加熱する工程を含む、核酸増幅方法。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2011263730 | 2011-12-01 | ||
JP2011263730 | 2011-12-01 | ||
PCT/JP2012/080548 WO2013080941A1 (ja) | 2011-12-01 | 2012-11-27 | 核酸増幅用基材及び核酸増幅方法 |
Related Child Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2016155259A Division JP2017018118A (ja) | 2011-12-01 | 2016-08-08 | 核酸増幅用基材及び核酸増幅方法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPWO2013080941A1 true JPWO2013080941A1 (ja) | 2015-04-27 |
JP6040775B2 JP6040775B2 (ja) | 2016-12-07 |
Family
ID=48535396
Family Applications (2)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2012557340A Expired - Fee Related JP6040775B2 (ja) | 2011-12-01 | 2012-11-27 | 核酸増幅用基材及び核酸増幅方法 |
JP2016155259A Pending JP2017018118A (ja) | 2011-12-01 | 2016-08-08 | 核酸増幅用基材及び核酸増幅方法 |
Family Applications After (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2016155259A Pending JP2017018118A (ja) | 2011-12-01 | 2016-08-08 | 核酸増幅用基材及び核酸増幅方法 |
Country Status (5)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US20140342935A1 (ja) |
EP (1) | EP2787068A4 (ja) |
JP (2) | JP6040775B2 (ja) |
CN (1) | CN103975053A (ja) |
WO (1) | WO2013080941A1 (ja) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US10053732B2 (en) | 2012-05-02 | 2018-08-21 | Mitsubishi Chemical Corporation | Probe or probe set for evaluating influence of ultraviolet ray on skin and nucleic acid microarray |
Families Citing this family (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2015104363A (ja) * | 2013-11-29 | 2015-06-08 | セイコーエプソン株式会社 | 核酸増幅反応用カートリッジ、及び核酸増幅反応用カートリッジキット |
CN106854674B (zh) * | 2015-12-08 | 2021-03-09 | 上海交通大学 | 一种基于毛细管微阵列的核酸高通量快速检测方法 |
JP2022060807A (ja) * | 2020-10-05 | 2022-04-15 | キヤノンメディカルシステムズ株式会社 | 乾燥試薬、試薬キット、乾燥試薬の製造方法、分析方法及び核酸増幅方法 |
Citations (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2001133453A (ja) * | 1999-08-26 | 2001-05-18 | Mitsubishi Rayon Co Ltd | 生体高分子配列薄片の製造方法 |
EP1158047A1 (en) * | 1999-03-05 | 2001-11-28 | Mitsubishi Rayon Co., Ltd. | Carriers having biological substance |
JP2004337064A (ja) * | 2003-05-15 | 2004-12-02 | Mitsubishi Gas Chem Co Inc | 遺伝子検出用チップ |
JP2008304356A (ja) * | 2007-06-08 | 2008-12-18 | Toppan Printing Co Ltd | ラボオンチップの試薬封止構造及びラボオンチップ |
WO2010087466A1 (ja) * | 2009-01-27 | 2010-08-05 | 国立大学法人東京農工大学 | Pcrチャンバーの調製方法およびpcrキット |
Family Cites Families (14)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
MX9705922A (es) * | 1995-02-01 | 1997-10-31 | Schneider Usa Inc | Procedimientos para hidrofilizar polimeros hidrofobos. |
JP3829491B2 (ja) * | 1998-08-27 | 2006-10-04 | 株式会社日立製作所 | プローブチップ、プローブチップ作成方法、試料検出方法、及び試料検出装置 |
US6277628B1 (en) * | 1998-10-02 | 2001-08-21 | Incyte Genomics, Inc. | Linear microarrays |
CN1226409C (zh) * | 1999-03-05 | 2005-11-09 | 三菱丽阳株式会社 | 带有生物物质的载体 |
US6713309B1 (en) * | 1999-07-30 | 2004-03-30 | Large Scale Proteomics Corporation | Microarrays and their manufacture |
US6642000B1 (en) * | 1999-11-12 | 2003-11-04 | University Of Chicago | PCR amplification on microarrays of gel immobilized oligonucleotides |
JP2002335960A (ja) | 2001-05-15 | 2002-11-26 | Moritex Corp | Pcr用マイクロプレート及びそれを用いたpcr法 |
IL164366A0 (en) * | 2002-04-03 | 2005-12-18 | Mitsubishi Rayon Co | Biological substance-immobilized gel and microarray using the same |
DE602004021235D1 (de) * | 2003-02-21 | 2009-07-09 | Geneform Technologies Ltd | Verfahren, kits und reagenzien zur nukleinsäuresequenzierung |
JP2006304709A (ja) * | 2005-04-28 | 2006-11-09 | Institute Of Physical & Chemical Research | 極微量の細胞から行えるゲノムワイドな制限酵素反応部位または変異もしくは修飾部位の検索法およびそのためのキット |
JP2008154490A (ja) | 2006-12-22 | 2008-07-10 | Olympus Corp | 複数種類の標的塩基配列を同時に増幅するために用いられる基板と、該基板を用いた塩基配列の増幅方法 |
JP2008245612A (ja) | 2007-03-30 | 2008-10-16 | Hitachi Ltd | 試料調製法および装置 |
CN101851652B (zh) * | 2010-04-27 | 2013-11-13 | 上海交通大学 | 基于微阵列芯片的通用多重聚合酶链式反应的实现方法 |
CN105779604A (zh) * | 2011-02-10 | 2016-07-20 | 三菱丽阳株式会社 | 核酸的检测方法 |
-
2012
- 2012-11-27 EP EP12853911.1A patent/EP2787068A4/en not_active Withdrawn
- 2012-11-27 WO PCT/JP2012/080548 patent/WO2013080941A1/ja active Application Filing
- 2012-11-27 US US14/361,544 patent/US20140342935A1/en not_active Abandoned
- 2012-11-27 JP JP2012557340A patent/JP6040775B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2012-11-27 CN CN201280059130.1A patent/CN103975053A/zh active Pending
-
2016
- 2016-08-08 JP JP2016155259A patent/JP2017018118A/ja active Pending
Patent Citations (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP1158047A1 (en) * | 1999-03-05 | 2001-11-28 | Mitsubishi Rayon Co., Ltd. | Carriers having biological substance |
JP2001133453A (ja) * | 1999-08-26 | 2001-05-18 | Mitsubishi Rayon Co Ltd | 生体高分子配列薄片の製造方法 |
JP2004337064A (ja) * | 2003-05-15 | 2004-12-02 | Mitsubishi Gas Chem Co Inc | 遺伝子検出用チップ |
JP2008304356A (ja) * | 2007-06-08 | 2008-12-18 | Toppan Printing Co Ltd | ラボオンチップの試薬封止構造及びラボオンチップ |
WO2010087466A1 (ja) * | 2009-01-27 | 2010-08-05 | 国立大学法人東京農工大学 | Pcrチャンバーの調製方法およびpcrキット |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US10053732B2 (en) | 2012-05-02 | 2018-08-21 | Mitsubishi Chemical Corporation | Probe or probe set for evaluating influence of ultraviolet ray on skin and nucleic acid microarray |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
EP2787068A9 (en) | 2015-08-12 |
EP2787068A4 (en) | 2014-10-22 |
EP2787068A1 (en) | 2014-10-08 |
CN103975053A (zh) | 2014-08-06 |
JP6040775B2 (ja) | 2016-12-07 |
US20140342935A1 (en) | 2014-11-20 |
WO2013080941A1 (ja) | 2013-06-06 |
JP2017018118A (ja) | 2017-01-26 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP2017018118A (ja) | 核酸増幅用基材及び核酸増幅方法 | |
US20080241841A1 (en) | Method and apparatus for sample preparation | |
WO2016172373A1 (en) | Methods and compositions for whole transcriptome amplification | |
JP6395925B2 (ja) | 遺伝子解析システム | |
CN107002006B (zh) | 用于检测目标基因的微流体装置、用于制造微流体装置的方法及用于使用微流体装置进行检测的方法 | |
CA2947426A1 (en) | Multiplexed single cell gene expression analysis using template switch and tagmentation | |
KR20230165868A (ko) | 겔 패턴 형성된 표면 | |
WO2016151719A1 (ja) | 核酸反応デバイス | |
JP2012502660A (ja) | マイクロアレイ基板上の生体物質の選択的プロセシング | |
US20190118177A1 (en) | Device for additive delivery of reagents and related methods and systems | |
JP2014021081A (ja) | 分析用マイクロ流路チップの製造方法 | |
CN113604547A (zh) | 一种用于组织样本的高分辨率空间组学检测方法 | |
US20110105356A1 (en) | Compositions and methods for providing substances to and from an array | |
JP2001133453A (ja) | 生体高分子配列薄片の製造方法 | |
AU2011298719B2 (en) | Setting of multiple priming oligonucleotides for solid gel amplification in hydrogels | |
KR102395365B1 (ko) | 소수성 플레이트 상에 배열된 복수의 하이드로젤 미세입자를 포함하는 pcr용 반응 칩 | |
CN117813424A (zh) | 用于分析生物样品的系统和方法 | |
JP2013150567A (ja) | 核酸分析用反応デバイス、及び核酸分析装置 | |
WO2012003579A1 (en) | Solid gel amplification method and apparatus for genotyping and pathogen detection | |
JP2010259340A (ja) | 貫通孔マイクロアレイとその製造方法 | |
JP2005130795A (ja) | ポリヌクレオチドの分析用部材、および検体中の特定塩基配列を有するポリヌクレオチドの存在の有無を判定する方法 | |
JP2000342298A (ja) | 核酸固定化ゲル保持多孔質中空繊維並びに該多孔質中空繊維配列体及びその薄片 | |
US20220154173A1 (en) | Compositions and Methods for Preparing Nucleic Acid Sequencing Libraries Using CRISPR/CAS9 Immobilized on a Solid Support | |
JP2008232899A (ja) | 基板およびその使用方法 | |
WO2023139272A1 (en) | Gelation device with piston |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20150810 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20160705 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20160808 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20161011 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20161024 |
|
R151 | Written notification of patent or utility model registration |
Ref document number: 6040775 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R151 |
|
S533 | Written request for registration of change of name |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R313533 |
|
R350 | Written notification of registration of transfer |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R350 |
|
LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |