JPWO2009110270A1 - マイクロチップ及びその製造方法 - Google Patents
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Abstract
Description
前記流路の各位置において、前記流路の幅方向の断面における前記樹脂製フィルムのたわみ角度が0度以上30度未満であることを特徴とするマイクロチップである。
前記樹脂製フィルムは、前記貫通孔を覆うように配されており、
前記貫通孔の最大径を通る長手方向の断面における前記樹脂製フィルムのたわみ量の前記貫通孔の深さに対する値が、0以上0.05未満であることを特徴とする請求の範囲1から請求の範囲4のいずれかに記載のマイクロチップである。
前記接合された前記樹脂製基板と前記樹脂製フィルムとを、所定の温度条件で熱アニールすることにより、前記流路の各位置において、前記流路の幅方向の断面における前記樹脂製フィルムのたわみ角度を0度以上30度未満とするステップと、
を有することを特徴とするマイクロチップの製造方法である。
t 流路用溝における樹脂製フィルムのたわみ量
T 貫通孔における樹脂製フィルムのたわみ量
d 流路用溝の深さ
D 貫通孔の深さ
10 樹脂製基板
11 流路用溝
12 接合面
13 底面
14 壁面
15 貫通孔
16 孔縁
20 樹脂製フィルム
21 下面
30 ピン
31 ピンの先端部
33 ガスベント孔
(マイクロチップの構成)
図1(a)及び(b)に示すように、樹脂製基板10の表面には、流路用溝11が形成されている。樹脂製基板10の流路用溝11が形成された接合面12に樹脂製フィルム20が接合されている。樹脂製基板10と樹脂製フィルム20とが接合することで、マイクロチップが製造される。また、流路用溝11の底面13及び壁面14、並びに樹脂製フィルム20の下面21により、微細流路が構成される。
流路を射出成形またはインプリント成形する際、流路の抜け易さおよび形状の維持を考慮してアスペクト比の上限値を前述のように求めた。
(たわみ角度)
先ず、樹脂製フィルム20のたわみ角度について図2(a)を用いて説明する。微細流路の幅方向の断面において、微細流路の一辺を形成している樹脂製フィルム20の下面21における接線と、樹脂製基板10と樹脂製フィルム20の接合面12とのなす角度の最大角度をたわみ角度θとする。樹脂製基板10の流路用溝11の壁面14が接合面12に対して垂直であれば、たわみ角度θの取り得る範囲は0度以上90度以下である(0≦θ≦90°)である。
(たわみ量)
次に、樹脂製フィルム20のたわみ量について図2(b)を用いて説明する。微細流路の幅方向の断面において、微細流路の一辺を形成している樹脂製フィルム20の下面21の任意点と、樹脂製基板10と樹脂製フィルム20の接合面12との距離をたわみ量tとした。ここで言う距離とは、樹脂製フィルム20の下面21の最下点22から接合面12を含む平面へ向かって垂線を引いたとき、最下点22から平面までの垂線の長さとする。
(たわみ角度の測定方法)
先ず、たわみ角度の測定方法について説明する。たわみ角度の測定にはオリンパス製の走査型共焦点レーザ顕微鏡OLS3000を使用した。λ=408nmのレーザ光源、コンフォーカル光学系、精密なスキャニング機構により、高精度の測定が可能である。
(たわみ量の測定方法)
次に、たわみ量の測定方法について説明する。たわみ量の測定にはオリンパス製の走査型共焦点レーザ顕微鏡OLS3000を使用した。λ=408nmのレーザ光源、コンフォーカル光学系、精密なスキャニング機構により、高精度の測定が可能である。
(熱アニール)
次に、熱アニールについて説明する。流路又は貫通孔15における樹脂製フィルム20のたわみが発生しているということは、流路用溝11又は貫通孔15を覆う樹脂製フィルム20が膨張している、もしくは加圧により樹脂製フィルム20の厚みが減少し、結果として面積が増加した分が流路用溝11や貫通孔15に押し込まれた結果ということが考えられる。すなわち、樹脂製フィルム20のたわみを減少し、又は樹脂製フィルム20のたわみをなくするためには、流路用溝11及び貫通孔15を覆う樹脂製フィルム20を収縮させれば良い。ガラス転移温度前後まで加熱してやれば樹脂製フィルム20が収縮し、樹脂製フィルム20のたわみが減少又はなくなることが実験によって確かめられた。加熱温度、加熱時間などの熱アニール条件は樹脂製フィルム20の物性、厚み、流路用溝11の幅、貫通孔15の径により異なるため、マイクロチップごとに決める必要がある。熱アニール条件が所定の温度条件に相当する。
[実施例]
次に、具体的な実施例及び比較例について、図2、図3及び図6を参照して説明する。図6は、実施例及び比較例の条件を示す表である。
(実施例1)
(樹脂製基板10と樹脂製フィルム20との接合、熱アニール)
次に、実施例1について説明する。射出成形機で透明樹脂材料のポリメチルメタクリレート等のアクリル系樹脂(旭化成製、デルペット70NH)を成形し、外形寸法が50mm×50mm×1mmの板状部材に幅50μm、深さ50μmの複数の流路用溝11と、内径2mmの複数の貫通孔15で構成される樹脂製基板10を作製した。
(マイクロチップを使った電気泳動テスト)
先ず、貫通孔15から粘稠なポリマー溶液(ポリジメチルアクリルアミド、pDMA)を充填した。ポリメチルメタクリレート等のアクリル系樹脂の樹脂製基板10は親水性であるため、毛細管現象で導入することが可能であった。各貫通孔15にも液面高さが等しくなるよう、ポリマー溶液を充填した。次に塩基対数が100bpから1,000bpの蛍光標識されたDNAを試料投入用の貫通孔15に滴下し、直流電圧を印加して導入、分離を行った。所定の検出部にて共焦点レーザ顕微鏡を使って励起、検出を行ったところ、DNAのプラグ(バンド)は栓流を形成しながら分離される様子が観察できた。DNAのプラグの境界がはっきりしているため、検出側で明確なピークを検出することができた。また、同一条件で複数回テストを実施したところ、非常に良好な再現性を確認できた。
(実施例2)
(樹脂製基板10と樹脂製フィルム20との接合、熱アニール)
次に、実施例2について説明する。射出成形機で透明樹脂材料のポリメチルメタクリレート等のアクリル系樹脂(旭化成製、デルペット70NH)を成形し、外形寸法が50mm×50mm×1mmの板状部材に幅50μm、深さ50μmの複数の流路用溝11と、内径2mmの複数の貫通孔15で構成される樹脂製基板10を作製した。
(マイクロチップを使った電気泳動テスト)
先ず、貫通孔15から粘稠なポリマー溶液(ポリジメチルアクリルアミド、pDMA)を充填した。ポリメチルメタクリレート等のアクリル系樹脂の樹脂製基板10は親水性であるため、毛細管現象で導入することが可能であった。各貫通孔15にも液面高さが等しくなるよう、ポリマー溶液を充填した。次に塩基対数が100bpから1,000bpの蛍光標識されたDNAを試料投入用の貫通孔15に滴下し、直流電圧を印加して導入、分離を行った。所定の検出部にて共焦点レーザ顕微鏡を使って励起、検出を行ったところ、DNAのプラグ(バンド)はやや流路用溝11の両端で尾を引くテーリングが観察されたものの、中心部は栓流に近い形状をしていた。DNAのプラグの境界がはっきりしているため、検出側で明確なピークを検出することができた。また、同一条件で複数回テストを実施したところ、良好な再現性を確認できた。
(実施例3)
(樹脂製基板10と樹脂製フィルム20との接合、熱アニール)
次に、実施例3について説明する。射出成形機で透明樹脂材料のポリメチルメタクリレート等のアクリル系樹脂(旭化成製、デルペット70NH)を成形し、外形寸法が50mm×50mm×1mmの板状部材に幅50μm、深さ50μmの複数の流路用溝11と、内径2mmの複数の貫通孔15で構成される樹脂製基板10を作製した。
(マイクロチップを使った電気泳動テスト)
先ず、貫通孔15から粘稠なポリマー溶液(ポリジメチルアクリルアミド、pDMA)を充填した。ポリメチルメタクリレート等のアクリル系樹脂の樹脂製基板10は親水性であるため、毛細管現象で導入することが可能であった。各貫通孔15にも液面高さが等しくなるよう、ポリマー溶液を充填した。次に塩基対数が100bpから1,000bpの蛍光標識されたDNAを試料投入用の貫通孔15に滴下し、直流電圧を印加して導入、分離を行った。所定の検出部にて共焦点レーザ顕微鏡を使って励起、検出を行ったところ、DNAのプラグ(バンド)はやや流路用溝11の両端で尾を引くテーリングが観察されたものの、中心部は栓流に近い形状をしていた。DNAのプラグの境界がはっきりしているため、検出側で明確なピークを検出することができた。また、同一条件で複数回テストを実施したところ、流路用溝11内の方へ樹脂製フィルム20がたわんだ影響により微細流路の断面積が安定せず、やや再現性が悪化してしまったが、分析対象物によっては使用できるレベルであることが分かった。
(実施例4)
(樹脂製基板10と樹脂製フィルム20との接合、熱アニール)
次に、実施例4について説明する。射出成形機で透明樹脂材料のポリメチルメタクリレート等のアクリル系樹脂(旭化成製、デルペット70NH)を成形し、外形寸法が50mm×50mm×1mmの板状部材に幅50μm、深さ50μmの複数の流路用溝11と、内径2mmの複数の貫通孔15で構成される樹脂製基板10を作製した。
(マイクロチップを使った電気泳動テスト)
先ず、貫通孔15から粘稠なポリマー溶液(ポリジメチルアクリルアミド、pDMA)を充填した。ポリメチルメタクリレート等のアクリル系樹脂の樹脂製基板10は親水性であるため、毛細管現象で導入することが可能であった。各貫通孔15にも液面高さが等しくなるよう、ポリマー溶液を充填した。次に塩基対数が100bpから1,000bpの蛍光標識されたDNAを試料投入用の貫通孔15に滴下し、直流電圧を印加して導入、分離を行った。所定の検出部にて共焦点レーザ顕微鏡を使って励起、検出を行ったところ、DNAのプラグ(バンド)は流路用溝11の両端で尾を引くテーリングが観察され、各塩基間の信号が重なり合う部分が出てきてしまったが、検出は可能なレベルであった。また、同一条件で複数回テストを実施したところ、流路用溝11内の方へ樹脂製フィルム20がたわんだ影響により微細流路の断面積が安定せず、やや再現性が悪化してしまったが、分析対象物によっては使用できるレベルであることが分かった。
(実施例5)
(樹脂製基板10と樹脂製フィルム20との接合、熱アニール)
次に、実施例5について説明する。射出成形機で透明樹脂材料のポリメチルメタクリレート等のアクリル系樹脂(旭化成製、デルペット70NH)を成形し、外形寸法が50mm×50mm×1mmの板状部材に幅50μm、深さ50μmの複数の流路用溝11と、内径2mmの複数の貫通孔15で構成される樹脂製基板10を作製した。
(マイクロチップを使った電気泳動テスト)
先ず、貫通孔15から粘稠なポリマー溶液(ポリジメチルアクリルアミド、pDMA)を充填した。ポリメチルメタクリレート等のアクリル系樹脂の樹脂製基板10は親水性であるため、毛細管現象で導入することが可能であった。各貫通孔15にも液面高さが等しくなるよう、ポリマー溶液を充填した。次に塩基対数が100bpから1,000bpの蛍光標識されたDNAを試料投入用の貫通孔15に滴下し、直流電圧を印加して導入、分離を行った。所定の検出部にて共焦点レーザ顕微鏡を使って励起、検出を行ったところ、DNAのプラグ(バンド)はやや流路用溝11の両端で尾を引くテーリングが観察されたものの、中心部は栓流に近い形状をしていた。DNAのプラグの境界がはっきりしているため、検出側で明確なピークを検出することができた。また、同一条件で複数回テストを実施したところ、良好な再現性を確認できた。
(実施例6)
(樹脂製基板10と樹脂製フィルム20との接合、熱アニール)
次に、実施例6について説明する。射出成形機で透明樹脂材料のポリメチルメタクリレート等のアクリル系樹脂(旭化成製、デルペット70NH)を成形し、外形寸法が50mm×50mm×1mmの板状部材に幅50μm、深さ50μmの複数の流路用溝11と、内径2mmの複数の貫通孔15で構成される樹脂製基板10を作製した。
再び流路用溝11における樹脂製フィルム20のたわみ角度、たわみ量、貫通孔15における樹脂製フィルム20のたわみ量について測定したところ、θ=20°、t/d=0.12、T/D=0.03であり、たわみが減少していることを確認できた。
(マイクロチップを使った電気泳動テスト)
先ず、貫通孔15から粘稠なポリマー溶液(ポリジメチルアクリルアミド、pDMA)を充填した。ポリメチルメタクリレート等のアクリル系樹脂の樹脂製基板10は親水性であるため、毛細管現象で導入することが可能であった。各貫通孔15にも液面高さが等しくなるよう、ポリマー溶液を充填した。次に塩基対数が100bpから1,000bpの蛍光標識されたDNAを試料投入用の貫通孔15に滴下し、直流電圧を印加して導入、分離を行った。所定の検出部にて共焦点レーザ顕微鏡を使って励起、検出を行ったところ、DNAのプラグ(バンド)はやや流路用溝11の両端で尾を引くテーリングが観察されたものの、中心部は栓流に近い形状をしていた。DNAのプラグの境界がはっきりしているため、検出側で明確なピークを検出することができた。また、同一条件で複数回テストを実施したところ、樹脂製フィルム20が流路用溝11内へたわむ影響により微細流路の断面積が安定せず、やや再現性が悪化してしまったが、分析対象物によっては使用できるレベルであることが分かった。
(実施例7)
(樹脂製基板10と樹脂製フィルム20との接合、熱アニール)
次に、実施例7について説明する。射出成形機で透明樹脂材料のポリメチルメタクリレート等のアクリル系樹脂(旭化成製、デルペット70NH)を成形し、外形寸法が50mm×50mm×1mmの板状部材に幅50μm、深さ50μmの複数の流路用溝11と、内径2mmの複数の貫通孔15で構成される樹脂製基板10を作製した。
(マイクロチップを使った電気泳動テスト)
先ず、貫通孔15から粘稠なポリマー溶液(ポリジメチルアクリルアミド、pDMA)を充填した。ポリメチルメタクリレート等のアクリル系樹脂の樹脂製基板10は親水性であるため、毛細管現象で導入することが可能であった。各貫通孔15にも液面高さが等しくなるよう、ポリマー溶液を充填した。次に塩基対数が100bpから1,000bpの蛍光標識されたDNAを試料投入用の貫通孔15に滴下し、直流電圧を印加して導入、分離を行った。所定の検出部にて共焦点レーザ顕微鏡を使って励起、検出を行ったところ、DNAのプラグ(バンド)は栓流を形成しながら分離される様子が観察できた。DNAのプラグの境界がはっきりしているため、検出側で明確なピークを検出することができた。また、同一条件で複数回テストを実施したところ、非常に良好な再現性を確認できた。
(実施例8)
(樹脂製基板10と樹脂製フィルム20との接合、熱アニール)
次に、実施例8について説明する。射出成形機で透明樹脂材料のポリメチルメタクリレート等のアクリル系樹脂(旭化成製、デルペット70NH)を成形し、外形寸法が50mm×50mm×1mmの板状部材に幅50μm、深さ50μmの複数の流路用溝11と、内径2mmの複数の貫通孔15で構成される樹脂製基板10を作製した。
(マイクロチップを使った電気泳動テスト)
先ず、貫通孔15から粘稠なポリマー溶液(ポリジメチルアクリルアミド、pDMA)を充填した。ポリメチルメタクリレート等のアクリル系樹脂は親水性であるため、毛細管現象で導入することが可能であった。各貫通孔15にも液面高さが等しくなるよう、ポリマー溶液を充填した。次に塩基対数が100bpから1,000bpの蛍光標識されたDNAを試料投入用の貫通孔15に滴下し、直流電圧を印加して導入、分離を行った。所定の検出部にて共焦点レーザ顕微鏡を使って励起、検出を行ったところ、DNAのプラグ(バンド)は栓流を形成しながら分離される様子が観察できた。DNAのプラグの境界がはっきりしているため、検出側で明確なピークを検出することができた。また、同一条件で複数回テストを実施したところ、非常に良好な再現性を確認できた。
(比較例1)
(樹脂製基板10と樹脂製位フィルムの接合)
次に、比較例1を説明する。射出成形機で透明樹脂材料のポリメチルメタクリレート等のアクリル系樹脂(旭化成製、デルペット70NH)を成形し、外形寸法が50mm×50mm×1mmの板状部材に幅50μm、深さ50μmの複数の流路用溝11と、内径2mmの複数の貫通孔15で構成される樹脂製基板10を作製した。
(マイクロチップを使った電気泳動テスト)
先ず、貫通孔15から粘稠なポリマー溶液(ポリジメチルアクリルアミド、pDMA)を充填した。ポリメチルメタクリレート等のアクリル系樹脂の樹脂製基板10は親水性であるため、毛細管現象で導入することが可能であった。各貫通孔15にも液面高さが等しくなるよう、ポリマー溶液を充填した。次に塩基対数が100bpから1,000bpの蛍光標識されたDNAを試料投入用の貫通孔15に滴下し、直流電圧を印加して導入、分離を行った。所定の検出部にて共焦点レーザ顕微鏡を使って励起、検出を行ったところ、DNAのプラグ(バンド)は流路用溝11の両端で尾を引くテーリングが観察され、三日月に近い形状をしていた。また、微細流路が擬似的に平凹シリンドリカルレンズを形成してしまい、励起、検出光が発散してしまった。その結果、検出ピークが弱く、ブロードな形状になってしまったため、DNAを明確に検出することができなかった。また、同一条件で複数回テストを実施したところ、貫通孔15における樹脂製フィルム20のたわみ(微細流路のへこみ)の影響で微細流路の断面積が安定せず、また貫通孔15における樹脂製フィルム20のたわみ量の差でポリマー溶液の導入量にもばらつきができてしまい、良好な再現性が得られなかった。
(比較例2)
(樹脂製基板10と樹脂製フィルム20との接合)
次に、比較例2について説明する。射出成形機で透明樹脂材料のポリメチルメタクリレート等のアクリル系樹脂(旭化成製、デルペット70NH)を成形し、外形寸法が50mm×50mm×1mmの板状部材に幅50μm、深さ50μmの複数の流路用溝11と、内径2mmの複数の貫通孔15で構成される樹脂製基板10を作製した。
そして、流路用溝11が形成された樹脂製基板10の接合面12に樹脂製フィルム20を合わせ、熱プレス機にてプレス温度105℃、10kgf/cm2の力で圧着させ、樹脂製基板10と樹脂製フィルム20とを接合した。接合後、オリンパス製の走査型共焦点レーザ顕微鏡OLS3000を使用し、流路用溝11における樹脂製フィルム20のたわみ角度、たわみ量、貫通孔15における樹脂製フィルム20のたわみ量について測定した。樹脂製フィルム20のたわみ角度θ=35°、流路用溝11の深さdに対するたわみ量tの比(=t/d)は0.17、貫通孔15の深さDに対するたわみ量Tの比(=T/D)は0.08であった。
(マイクロチップを使った電気泳動テスト)
この電気泳動テストの方法及びその結果については、比較例1と同様であったので、その説明を省略する。
(比較例3)
(樹脂製基板10と樹脂製フィルム20との接合)
次に、比較例3について説明する。射出成形機で透明樹脂材料のPMMA樹脂(旭化成製、デルペット70NH)を成形し、外形寸法が50mm×50mm×1mmの板状部材に幅50μm、深さ50μmの複数の流路用溝11と、内径2mmの複数の貫通孔15で構成される樹脂製基板10を作製した。
(マイクロチップを使った電気泳動テスト)
この電気泳動テストの方法及びその結果については、比較例1と同様であったので、その説明を省略する。
Claims (9)
- 流路用溝が形成された樹脂製基板の、前記流路用溝が形成された面に樹脂製フィルムを接合することで、流路が形成されたマイクロチップであり、
前記流路の各位置において、前記流路の幅方向の断面における前記樹脂製フィルムのたわみ角度が、0度以上30度未満であることを特徴とするマイクロチップ。 - 前記樹脂製フィルムのたわみ角度が、0度以上10度未満であることを特徴とする請求の範囲第1項に記載のマイクロチップ。
- 前記流路の各位置において、前記流路の幅方向の断面における前記樹脂製フィルムのたわみ量の前記流路の深さに対する値が、0以上0.1未満であることを特徴とする請求の範囲第1項又は第2項に記載のマイクロチップ。
- 前記樹脂製フィルムのたわみ量の前記流路用溝の深さに対する値が、0以上0.05未満であることを特徴とする請求の範囲第3項に記載のマイクロチップ。
- 前記樹脂製基板には、前記流路用溝に連通する貫通孔がさらに形成され、前記樹脂製フィルムは、前記貫通孔を覆うように配されており、
前記貫通孔の最大径を通る長手方向の断面における前記樹脂製フィルムのたわみ量の前記貫通孔の深さに対する値が、0以上0.05未満であることを特徴とする請求の範囲第1項から請求の範囲第4項のいずれかに記載のマイクロチップ。 - 前記貫通孔の最大径を通る長手方向の断面における前記樹脂製フィルムのたわみ量の前記貫通孔の深さに対する値が、0以上0.01未満であることを特徴とする請求の範囲第5項に記載のマイクロチップ。
- 流路用溝が形成された樹脂製基板の、前記流路用溝が形成された面に樹脂製フィルムを熱融着により接合することで流路を形成するステップと、
前記接合された前記樹脂製基板と前記樹脂製フィルムとを、所定の温度条件で熱アニールすることにより、前記流路の各位値において、前記流路の幅方向の断面における前記樹脂製フィルムのたわみ角度を0度以上30度未満とするステップと、
を有することを特徴とするマイクロチップの製造方法。 - 前記樹脂製基板には、前記流路用溝に連通する貫通孔が形成されており、前記樹脂製フィルムは、前記貫通孔を覆うように接合され、
前記熱アニール工程により、前記貫通孔の最大径を通る長手方向の断面における前記樹脂製フィルムのたわみ量の前記貫通孔の深さに対する値を、0以上0.05未満とすることを特徴とする請求の範囲第7項に記載のマイクロチップの製造方法。 - 前記樹脂製基板の前記流路用溝が形成された面に樹脂製フィルムを接合するステップにおいて、
前記貫通孔の孔縁とほぼ同じ高さの位置にその先端部が位置するようにピンを挿入することにより、前記樹脂製フィルムを支持することを特徴とする請求の範囲第8項に記載のマイクロチップの製造方法。
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