JPWO2009078495A1 - 穀類植物種子由来の不溶性食物繊維含有物質 - Google Patents
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Abstract
潰瘍性大腸炎などの炎症性腸疾患を治療、改善又は予防するための安全な素材を提供すること。穀類植物の種子又はその発芽幼種子を酵素処理することで得られる不溶性食物繊維を含有する物質、並びに該物質を含有する飲食品及び医薬を提供する。
Description
本発明は、植物の種子及びその発芽幼種子由来の不溶性食物繊維を含有することを特徴とする物質、及びその製造方法に関する。より具体的には、腸管の炎症作用を改善する食品素材及びその製造方法に関する。
腸管の炎症に起因する原因不明の病気としてクローン病や潰瘍性大腸炎がある。潰瘍性大腸炎は、激しい粘血性下痢、腹痛などを主訴とし、緩解と再発を繰り返す慢性且つびまん性の大腸の疾患である。近年の食生活の西欧化に伴い、患者数が増加したことから、食事と潰瘍性大腸炎とに密接な関連があると考えられているが、この疾患の原因については、諸説あるが解明には至っていない。現在、日本の炎症性腸疾患患者数は約９万人を超え、アメリカにおいて直近の１０年間で本疾患の患者数が１０万人から約１００万人に増加したことを考慮すれば、日本においても同様に、相当数の患者数に増加することが予想される。
潰瘍性大腸炎には、原則的に内科的治療が行われるが、いまのところ治療についても決定的に有用な薬は殆どなく、５−アミノサリチル酸（５−ＡＳＡ）製剤や副腎皮質ステロイド剤、血球成分除去法療法、免疫抑制剤が用いられている。
上記のいずれの治療法においても副作用が問題となることがある。５−アミノサリチル酸製剤では、一般に、吐き気、発熱、頭痛、腹痛、下痢を引き起こすことがある。また、副腎皮質ステロイド剤は、一般に、感染症を起こしやすくなり、糖尿病による血糖値上昇を引き起こすといった副作用が報告されており、患者側の不安感が大きい。
潰瘍性大腸炎の実験モデルとして、マウス、ラットにデキストラン硫酸ナトリウムを投与することで潰瘍性大腸炎を誘発させることが知られている。デキストラン硫酸ナトリウムが投与されたマウスは、潰瘍性大腸炎を誘発し、腸管が炎症を起こし、大腸が萎縮し、腸管上皮細胞が脱落する現象が認められ、極度の下痢状態に陥る。その後、体重が減少し、更には、衰弱死に至る場合がある。
食品成分であって、尚且つ炎症性腸疾患に有効な素材としては、木材のチップをヘミセルラーゼ処理することで得られる酸性キシロオリゴ糖（特許文献１）、ガラクトマンナン及びアラビノガラクタン（特許文献２）、植物由来プロアントシアニジン（特許文献３）、イネ科植物の発芽種子由来タンパク質及び不溶性食物センイ（特許文献４）が挙げられる。また、穀物をヘミセルラーゼ処理し、その不溶性残査画分に食品としての機能性付加した報告としては、ふすまをヘミセルラーゼ処理した抗潰瘍剤（特許文献５）、小麦ふすまをヘミセルラーゼ処理した腎臓病患者用食物繊維素材（特許文献６）、穀物ふすまを酵素処理及び湿式粉砕して得られた果皮画分とアロイロン画分からなる精製ふすまからアロイロンタンパク質に富む画分を得る方法、及び食品や飼料への該画分の使用（特許文献７）等が報告されているが、炎症性腸疾患を改善、治療又は予防する効果についての報告例はない。
特開２００７−２３０９９８
特再ＷＯ０５／０５６０２２
特開２００７−７７１２２
特開２００５−２３２１７８
特開２００６−１２４３７０
特開平０６−７０７２０
特表２００４−５２００５８
潰瘍性大腸炎には、原則的に内科的治療が行われるが、いまのところ治療についても決定的に有用な薬は殆どなく、５−アミノサリチル酸（５−ＡＳＡ）製剤や副腎皮質ステロイド剤、血球成分除去法療法、免疫抑制剤が用いられている。
上記のいずれの治療法においても副作用が問題となることがある。５−アミノサリチル酸製剤では、一般に、吐き気、発熱、頭痛、腹痛、下痢を引き起こすことがある。また、副腎皮質ステロイド剤は、一般に、感染症を起こしやすくなり、糖尿病による血糖値上昇を引き起こすといった副作用が報告されており、患者側の不安感が大きい。
潰瘍性大腸炎の実験モデルとして、マウス、ラットにデキストラン硫酸ナトリウムを投与することで潰瘍性大腸炎を誘発させることが知られている。デキストラン硫酸ナトリウムが投与されたマウスは、潰瘍性大腸炎を誘発し、腸管が炎症を起こし、大腸が萎縮し、腸管上皮細胞が脱落する現象が認められ、極度の下痢状態に陥る。その後、体重が減少し、更には、衰弱死に至る場合がある。
食品成分であって、尚且つ炎症性腸疾患に有効な素材としては、木材のチップをヘミセルラーゼ処理することで得られる酸性キシロオリゴ糖（特許文献１）、ガラクトマンナン及びアラビノガラクタン（特許文献２）、植物由来プロアントシアニジン（特許文献３）、イネ科植物の発芽種子由来タンパク質及び不溶性食物センイ（特許文献４）が挙げられる。また、穀物をヘミセルラーゼ処理し、その不溶性残査画分に食品としての機能性付加した報告としては、ふすまをヘミセルラーゼ処理した抗潰瘍剤（特許文献５）、小麦ふすまをヘミセルラーゼ処理した腎臓病患者用食物繊維素材（特許文献６）、穀物ふすまを酵素処理及び湿式粉砕して得られた果皮画分とアロイロン画分からなる精製ふすまからアロイロンタンパク質に富む画分を得る方法、及び食品や飼料への該画分の使用（特許文献７）等が報告されているが、炎症性腸疾患を改善、治療又は予防する効果についての報告例はない。
本発明は、上記の課題を解決できる、例えば炎症性腸疾患の改善等に使用できる安全な素材を提供することを目的とする。また、本発明はかかる素材を含む飲食品及び医薬を提供することを目的とする。
本発明者らは、前記課題を解決すべく検討を重ねた結果、穀類植物、好ましくはイネ科植物の種子から澱粉を除去し、残存した果皮・種皮等にヘミセルラーゼ処理を施した後の不溶性食物繊維を含有する不溶性画分（以下、「不溶性食物繊維含有物質」とも称する。）が、上記目的を達成できることを見出し、本発明を完成した。本発明の要旨は、以下の通りである。
（１）穀類植物の種子由来の不溶性食物繊維含有物質であって、以下のステップ：（ａ）穀類植物の種子を、粉砕することによって、又は搗精することにより生じる種子外側画分を回収することによって、原料物質を調製するステップ；（ｂ）原料物質を澱粉除去処理して澱粉除去画分を調製するステップ；（ｃ）ステップ（ｂ）で調製した画分をヘミセルラーゼ活性を有する酵素によって酵素処理するステップ；及び（ｄ）酵素処理液から不溶性画分を回収するステップを含む処理により製造されることを特徴とする、前記物質。
（２）穀類植物はイネ科植物であることを特徴とする上記（１）記載の物質。
（３）イネ科植物は、米、大麦、ライ麦又は小麦であることを特徴とする上記（２）記載の物質。
（４）ステップ（ｂ）において、澱粉除去処理をアミラーゼ又はグルコアミラーゼを用いた酵素処理により実施することを特徴とする上記（１）記載の物質。
（５）ステップ（ｂ）において、澱粉除去処理を加熱による糊化処理により実施することを特徴とする上記（１）記載の物質。
（６）ステップ（ｂ）において、澱粉除去処理を物理的破壊処理により実施することを特徴とする上記（１）記載の物質。
（７）物理的破壊処理をホモジナイザーにより実施することを特徴とする上記（６）記載の物質。
（８）ステップ（ｂ）において、澱粉除去画分をさらに圧扁剥離処理に供することを特徴とする、上記（１）記載の物質。
（９）前記澱粉除去処理に供する原料物質は米糠、小麦麦芽又は大麦麦芽であることを特徴とする上記（１）記載の物質。
（１０）前記澱粉除去処理に供する原料物質は脱脂米糠であることを特徴とする上記（１）記載の物質。
（１１）前記澱粉除去処理に供する原料物質は小麦ふすま又は大麦搗精粕であることを特徴とする上記（８）記載の物質。
（１２）前記澱粉除去画分はビール仕込み粕であることを特徴とする上記（８）記載の物質。
（１３）ヘミセルラーゼ活性を有する酵素がキシラナーゼであることを特徴とする上記（１）〜（１２）のいずれか記載の物質。
（１４）ステップ（ｃ）において、さらにプロテアーゼを併用することを特徴とする上記（１）〜（１３）のいずれか記載の物質。
（１５）ステップ（ｃ）後に脱脂処理をさらに含むことを特徴とする上記（１）〜（１４）のいずれか記載の物質。
（１６）ステップ（ｄ）の不溶性画分は、実質的に、５〜２５メッシュのＡＳＴＭ（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｓｏｃｉｅｔｙ ｆｏｒ Ｔｅｓｔｉｎｇ ａｎｄ Ｍａｔｅｒｉａｌｓ）規格篩いを通過するが、５００メッシュのＡＳＴＭ規格篩いを通過しない粒度の画分からなることを特徴とする上記（１）〜（１５）のいずれか記載の物質。
（１７）ステップ（ｄ）の不溶性画分は、実質的に２００メッシュのＡＳＴＭ規格篩いを通過しない粒度の画分からなることを特徴とする上記（１６）記載の物質。
（１８）タンパク質含量が２０重量％以下であり、かつ食物繊維含量が５５重量％以上であることを特徴とする上記（１）〜（１７）のいずれか記載の物質。
（１９）不溶性食物繊維はアロイロン層が部分的に又は完全に除去されている、上記（１）〜（１８）のいずれか記載の物質。
（２０）以下の特徴を有する、穀類植物の種子由来の不溶性食物繊維含有物質：（ｉ）実質的に５〜２５メッシュのＡＳＴＭ（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｓｏｃｉｅｔｙ ｆｏｒ Ｔｅｓｔｉｎｇ ａｎｄ Ｍａｔｅｒｉａｌｓ）規格篩いを通過するが、５００メッシュのＡＳＴＭ規格篩いを通過しない粒度の画分からなる；（ｉｉ）タンパク質含量が２０重量％以下であり、かつ食物繊維含量が５５重量％以上である；（ｉｉｉ）不溶性食物繊維のアロイロン層が部分的に又は完全に除去されている；及び（ｉｖ）潰瘍性大腸炎の予防及び／又は改善効果を有する。
（２１）実質的に２００メッシュのＡＳＴＭ規格篩いを通過しない粒度の画分からなることを特徴とする上記（２０）記載の物質。
（２２）炎症性腸疾患の改善、治療又は予防効果を有することを特徴とする上記（１）〜（２１）のいずれか記載の物質。
（２３）炎症性腸疾患は潰瘍性大腸炎であることを特徴とする上記（２２）記載の物質。
（２４）飲食品又は医薬に配合されている上記（１）〜（２３）のいずれか記載の物質。
（２５）機能性食品に配合されている上記（２４）記載の物質。
（２６）炎症性腸疾患を治療、改善又は予防するための飲食品又は医薬を製造するための、上記（１）〜（２５）のいずれか記載の物質の使用。
（２７）穀類植物の種子由来の不溶性食物繊維含有物質の製造方法であって、以下のステップ：（ａ）穀類植物の種子を、粉砕することによって、又は搗精することにより生じる種子外側画分を回収することによって、原料物質を調製するステップ；（ｂ）原料物質を澱粉除去処理して澱粉除去画分を調製するステップ；（ｃ）ステップ（ｂ）で調製した画分をヘミセルラーゼ活性を有する酵素によって酵素処理するステップ；及び（ｄ）酵素処理液から不溶性画分を回収するステップを含む処理により製造されることを特徴とする、前記方法。
（２８）上記（２０）に記載の物質を製造する方法であって、以下のステップ：（ａ１）穀類植物の種子を、粉砕することによって、又は搗精することにより生じる種子外側画分を回収することによって、原料物質を調製するステップ；（ｂ１）原料物質を物理的破壊によって澱粉除去処理して澱粉除去画分を調製するステップ；（ｃ１）ステップ（ｂ１）で調製した画分から５〜２５メッシュのＡＳＴＭ（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｓｏｃｉｅｔｙ ｆｏｒ Ｔｅｓｔｉｎｇ ａｎｄ Ｍａｔｅｒｉａｌｓ）規格篩いを通過するが、５００メッシュのＡＳＴＭ規格篩いを通過しない不溶性画分を回収するステップを含む、前記方法。
本明細書は本願の優先権の基礎である日本国特許出願２００７−３２７９６７号、２００８−２９７１７４号の明細書及び／又は図面に記載される内容を包含する。
本発明者らは、前記課題を解決すべく検討を重ねた結果、穀類植物、好ましくはイネ科植物の種子から澱粉を除去し、残存した果皮・種皮等にヘミセルラーゼ処理を施した後の不溶性食物繊維を含有する不溶性画分（以下、「不溶性食物繊維含有物質」とも称する。）が、上記目的を達成できることを見出し、本発明を完成した。本発明の要旨は、以下の通りである。
（１）穀類植物の種子由来の不溶性食物繊維含有物質であって、以下のステップ：（ａ）穀類植物の種子を、粉砕することによって、又は搗精することにより生じる種子外側画分を回収することによって、原料物質を調製するステップ；（ｂ）原料物質を澱粉除去処理して澱粉除去画分を調製するステップ；（ｃ）ステップ（ｂ）で調製した画分をヘミセルラーゼ活性を有する酵素によって酵素処理するステップ；及び（ｄ）酵素処理液から不溶性画分を回収するステップを含む処理により製造されることを特徴とする、前記物質。
（２）穀類植物はイネ科植物であることを特徴とする上記（１）記載の物質。
（３）イネ科植物は、米、大麦、ライ麦又は小麦であることを特徴とする上記（２）記載の物質。
（４）ステップ（ｂ）において、澱粉除去処理をアミラーゼ又はグルコアミラーゼを用いた酵素処理により実施することを特徴とする上記（１）記載の物質。
（５）ステップ（ｂ）において、澱粉除去処理を加熱による糊化処理により実施することを特徴とする上記（１）記載の物質。
（６）ステップ（ｂ）において、澱粉除去処理を物理的破壊処理により実施することを特徴とする上記（１）記載の物質。
（７）物理的破壊処理をホモジナイザーにより実施することを特徴とする上記（６）記載の物質。
（８）ステップ（ｂ）において、澱粉除去画分をさらに圧扁剥離処理に供することを特徴とする、上記（１）記載の物質。
（９）前記澱粉除去処理に供する原料物質は米糠、小麦麦芽又は大麦麦芽であることを特徴とする上記（１）記載の物質。
（１０）前記澱粉除去処理に供する原料物質は脱脂米糠であることを特徴とする上記（１）記載の物質。
（１１）前記澱粉除去処理に供する原料物質は小麦ふすま又は大麦搗精粕であることを特徴とする上記（８）記載の物質。
（１２）前記澱粉除去画分はビール仕込み粕であることを特徴とする上記（８）記載の物質。
（１３）ヘミセルラーゼ活性を有する酵素がキシラナーゼであることを特徴とする上記（１）〜（１２）のいずれか記載の物質。
（１４）ステップ（ｃ）において、さらにプロテアーゼを併用することを特徴とする上記（１）〜（１３）のいずれか記載の物質。
（１５）ステップ（ｃ）後に脱脂処理をさらに含むことを特徴とする上記（１）〜（１４）のいずれか記載の物質。
（１６）ステップ（ｄ）の不溶性画分は、実質的に、５〜２５メッシュのＡＳＴＭ（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｓｏｃｉｅｔｙ ｆｏｒ Ｔｅｓｔｉｎｇ ａｎｄ Ｍａｔｅｒｉａｌｓ）規格篩いを通過するが、５００メッシュのＡＳＴＭ規格篩いを通過しない粒度の画分からなることを特徴とする上記（１）〜（１５）のいずれか記載の物質。
（１７）ステップ（ｄ）の不溶性画分は、実質的に２００メッシュのＡＳＴＭ規格篩いを通過しない粒度の画分からなることを特徴とする上記（１６）記載の物質。
（１８）タンパク質含量が２０重量％以下であり、かつ食物繊維含量が５５重量％以上であることを特徴とする上記（１）〜（１７）のいずれか記載の物質。
（１９）不溶性食物繊維はアロイロン層が部分的に又は完全に除去されている、上記（１）〜（１８）のいずれか記載の物質。
（２０）以下の特徴を有する、穀類植物の種子由来の不溶性食物繊維含有物質：（ｉ）実質的に５〜２５メッシュのＡＳＴＭ（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｓｏｃｉｅｔｙ ｆｏｒ Ｔｅｓｔｉｎｇ ａｎｄ Ｍａｔｅｒｉａｌｓ）規格篩いを通過するが、５００メッシュのＡＳＴＭ規格篩いを通過しない粒度の画分からなる；（ｉｉ）タンパク質含量が２０重量％以下であり、かつ食物繊維含量が５５重量％以上である；（ｉｉｉ）不溶性食物繊維のアロイロン層が部分的に又は完全に除去されている；及び（ｉｖ）潰瘍性大腸炎の予防及び／又は改善効果を有する。
（２１）実質的に２００メッシュのＡＳＴＭ規格篩いを通過しない粒度の画分からなることを特徴とする上記（２０）記載の物質。
（２２）炎症性腸疾患の改善、治療又は予防効果を有することを特徴とする上記（１）〜（２１）のいずれか記載の物質。
（２３）炎症性腸疾患は潰瘍性大腸炎であることを特徴とする上記（２２）記載の物質。
（２４）飲食品又は医薬に配合されている上記（１）〜（２３）のいずれか記載の物質。
（２５）機能性食品に配合されている上記（２４）記載の物質。
（２６）炎症性腸疾患を治療、改善又は予防するための飲食品又は医薬を製造するための、上記（１）〜（２５）のいずれか記載の物質の使用。
（２７）穀類植物の種子由来の不溶性食物繊維含有物質の製造方法であって、以下のステップ：（ａ）穀類植物の種子を、粉砕することによって、又は搗精することにより生じる種子外側画分を回収することによって、原料物質を調製するステップ；（ｂ）原料物質を澱粉除去処理して澱粉除去画分を調製するステップ；（ｃ）ステップ（ｂ）で調製した画分をヘミセルラーゼ活性を有する酵素によって酵素処理するステップ；及び（ｄ）酵素処理液から不溶性画分を回収するステップを含む処理により製造されることを特徴とする、前記方法。
（２８）上記（２０）に記載の物質を製造する方法であって、以下のステップ：（ａ１）穀類植物の種子を、粉砕することによって、又は搗精することにより生じる種子外側画分を回収することによって、原料物質を調製するステップ；（ｂ１）原料物質を物理的破壊によって澱粉除去処理して澱粉除去画分を調製するステップ；（ｃ１）ステップ（ｂ１）で調製した画分から５〜２５メッシュのＡＳＴＭ（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｓｏｃｉｅｔｙ ｆｏｒ Ｔｅｓｔｉｎｇ ａｎｄ Ｍａｔｅｒｉａｌｓ）規格篩いを通過するが、５００メッシュのＡＳＴＭ規格篩いを通過しない不溶性画分を回収するステップを含む、前記方法。
本明細書は本願の優先権の基礎である日本国特許出願２００７−３２７９６７号、２００８−２９７１７４号の明細書及び／又は図面に記載される内容を包含する。
図１は、調製試料１に含まれるアロイロン層部分の写真図を示す。
図２は、調製試料２に含まれるアロイロン層部分の写真図を示す。
図３は、実験群１、２及び比較群１、２の下痢スコアを示す。
図４は、実験群１、２及び比較群１、２の組織学的スコアを示す。
図５は、調製試料３に含まれるアロイロン層部分の写真図を示す。
図６は、調製例３において、アミラーゼを６５℃で作用させず冷水で澱粉のみを除去した場合のアロイロン層部分の写真図を示す。
図７は、調製試料４に含まれるアロイロン層部分の写真図を示す。
図８は、実験群３、４及び比較群３、４の下痢スコアを示す。
図９は、調製試料５に含まれるアロイロン層部分の写真図を示す。
図１０は、調製試料６に含まれるアロイロン層部分の写真図を示す。
図１１は、実験群５、６及び比較群５、６の下痢スコアを示す。
図１２は、実験群７、８、９及び比較群７、８の下痢スコアを示す。
図１３は、実験群７、８、９及び比較群７、８の組織学的スコアを示す。
図１４は、実験群１０及び比較群９、１０の下痢スコアを示す。
図１５は、比較群９の大腸粘膜の様子を示す生物の写真である。
図１６は、比較群１０の大腸粘膜の様子を示す生物の写真である。
図１７は、実験群１０の大腸粘膜の様子を示す生物の写真である。
図１８は、実験群１１、１２及び比較群１１、１２の下痢スコアを示す。
図１９は、実験群１３及び比較群１３、１４の下痢スコアを示す。
図２０は、調製試料１４に含まれるアロイロン層部分の写真図を示す。
図２１は、調製試料１５に含まれるアロイロン層部分の写真図を示す。
図２２は、実験群１４、１５、１６及び比較群１５の下痢スコアを示す。
図２３は、実験群１７、１８及び比較群１６の下痢スコアを示す。
図２４は、実験群１９、２０及び比較群１７の下痢スコアを示す。
図２５は、調製試料２１に含まれるアロイロン層部分の写真図を示す。
図２６は、調製試料２２に含まれるアロイロン層部分の写真図を示す。
図２７は、実験群２１、２２及び比較群１８の下痢スコアを示す。
図２８は、調製試料２３に含まれるアロイロン層部分の写真図を示す。
図２９は、実験群２２、２３及び比較群１９の下痢スコアを示す。
図３０は、調製試料２１、２２を酵素で再分解した際の回収率を示す。
図３１は、調製試料２１、２２を酵素で再分解した際の遊離の糖量を示す。
図２は、調製試料２に含まれるアロイロン層部分の写真図を示す。
図３は、実験群１、２及び比較群１、２の下痢スコアを示す。
図４は、実験群１、２及び比較群１、２の組織学的スコアを示す。
図５は、調製試料３に含まれるアロイロン層部分の写真図を示す。
図６は、調製例３において、アミラーゼを６５℃で作用させず冷水で澱粉のみを除去した場合のアロイロン層部分の写真図を示す。
図７は、調製試料４に含まれるアロイロン層部分の写真図を示す。
図８は、実験群３、４及び比較群３、４の下痢スコアを示す。
図９は、調製試料５に含まれるアロイロン層部分の写真図を示す。
図１０は、調製試料６に含まれるアロイロン層部分の写真図を示す。
図１１は、実験群５、６及び比較群５、６の下痢スコアを示す。
図１２は、実験群７、８、９及び比較群７、８の下痢スコアを示す。
図１３は、実験群７、８、９及び比較群７、８の組織学的スコアを示す。
図１４は、実験群１０及び比較群９、１０の下痢スコアを示す。
図１５は、比較群９の大腸粘膜の様子を示す生物の写真である。
図１６は、比較群１０の大腸粘膜の様子を示す生物の写真である。
図１７は、実験群１０の大腸粘膜の様子を示す生物の写真である。
図１８は、実験群１１、１２及び比較群１１、１２の下痢スコアを示す。
図１９は、実験群１３及び比較群１３、１４の下痢スコアを示す。
図２０は、調製試料１４に含まれるアロイロン層部分の写真図を示す。
図２１は、調製試料１５に含まれるアロイロン層部分の写真図を示す。
図２２は、実験群１４、１５、１６及び比較群１５の下痢スコアを示す。
図２３は、実験群１７、１８及び比較群１６の下痢スコアを示す。
図２４は、実験群１９、２０及び比較群１７の下痢スコアを示す。
図２５は、調製試料２１に含まれるアロイロン層部分の写真図を示す。
図２６は、調製試料２２に含まれるアロイロン層部分の写真図を示す。
図２７は、実験群２１、２２及び比較群１８の下痢スコアを示す。
図２８は、調製試料２３に含まれるアロイロン層部分の写真図を示す。
図２９は、実験群２２、２３及び比較群１９の下痢スコアを示す。
図３０は、調製試料２１、２２を酵素で再分解した際の回収率を示す。
図３１は、調製試料２１、２２を酵素で再分解した際の遊離の糖量を示す。
以下、本発明の不溶性食物含有物質及びその製造方法、並びに飲食品及び医薬品について説明する。
本発明の不溶性食物繊維含有物質は、穀類植物、好ましくはイネ科植物の種子由来の不溶性食物繊維を含有することを特徴とする。
本発明に使用することができるイネ科植物として、植物分類表において、イネ科に分類される全ての植物が挙げられる。具体的には米、大麦、小麦、ライ麦、あわ、ひえ、とうもろこし等が例示されるが、これに限定されるものではない。このうち、米、大麦、ライ麦及び小麦などを使用することが好ましい。
本発明の不溶性食物繊維含有物質は、穀類植物、好ましくはイネ科植物の種子を原料にして、澱粉等を除去した澱粉除去画分を酵素処理することにより生じる不溶性画分を回収することにより製造することができる。
具体的には、（ａ）穀類植物の種子を、粉砕することによって、又は搗精により生じる種子外側画分を回収することによって、原料物質を調製するステップ；（ｂ）原料物質を澱粉除去処理して澱粉除去画分を調製するステップ；（ｃ）ステップ（ｂ）で調製した画分をヘミセルラーゼ活性を有する酵素によって酵素処理するステップ；及び（ｄ）酵素処理液から不溶性画分を回収するステップを含む処理により製造することができる。
ステップ（ａ）は、粉砕及び／又は搗精により、穀類植物の種子から本発明の不溶性食物繊維含有物質の原料物質を得るステップである。粉砕は、例えばロールミル、ディスクミル、ハンマーミル等によって行うことができる。また搗精は、穀類植物の種子から果皮、種皮、胚芽等を除去・分離することを意味し、これは例えば、精米機または石臼のように表面を削り取る原理を有している機器によって行うことができる。搗精を行う場合には、この処理により生じる果皮、種皮、胚芽を含む種子外側画分をステップ（ｂ）の原料物質とすることができる。このステップは、穀類植物の種子を粉砕及び／又は搗精の他、種子が穀皮を含むものである場合には脱穀処理を含んでもよい。また使用する穀類植物の種子は発芽又は未発芽のものいずれを用いてもよい。
ステップ（ａ）は、実質的に同等の処理が施されている材料を原料物質として使用する場合には、省略することができる。かかる材料の非限定的な例としては、小麦粉を製造した際に副次的に生成されるふすま、精米後に副次的に生成される米糠などが挙げられる。このような材料の使用は、既に穀類植物種子中の大部分の澱粉が除去されていること、及びステップの簡略化の観点から好ましい。原料物質として米糠を使用する場合には、米糠に脱脂処理を施した後に生じる脱脂米糠を使用することが好ましい。脱脂米糠は、米糠よりも安価な材料であり、香味的にも優れているからである。また等量の米糠を用いる場合に比較して、より多くの不溶性食物繊維含有物質を得ることができるという利点も有する。
ステップ（ｂ）は、ステップ（ａ）で調製した原料物質から澱粉を除去し、澱粉除去画分を調製するステップである。この澱粉除去処理は、原料物質から澱粉を除去できる方法であればどのような方法を用いてもよく、例えば酵素による澱粉分解処理、加熱による糊化と糊化後の篩いによる除去、物理的破壊による澱粉除去処理などにより行うことができる。
澱粉除去処理を酵素による糖化処理により行う場合には、非限定的にアミラーゼ又はグルコアミラーゼを用いることにより行うことができる。本発明に使用することができるアミラーゼ及びグルコアミラーゼとして、これに限定されるものではないが、例えば商品名オリエンターゼ（エイチビィアイ社製）、商品名コクゲン（大和化成社製）、商品名スミチーム（新日本化学工業社製）、商品名ターマミル（ノボザイムズ社製）、商品名グルクザイム（天野エンザイム社製）などの市販の酵素製剤や、トリコデルマ属、テルモミセス属、オウレオバシヂウム属、ストレプトミセス属、アスペルギルス属、クロストリジウム属、バチルス属、テルモトガ属、テルモアスクス属、カルドセラム属、テルモモノスポラ属、フミコーラ属、リゾップス属、ペニシリウム属などの微生物により生産されるアミラーゼ、グルコアミラーゼが挙げられる。本発明で使用する上記酵素は、酵素活性を保持する限り、精製酵素、粗製酵素、固定化酵素などの任意の形態とすることができる。固定化酵素は、ポリマー、多糖類、無機物質などの担体に結合された酵素である。粗製酵素は、例えば酵素含有微生物からの酵素含有抽出物、乾燥物などの処理物を含む。また糖化処理は、一般的には、１０〜９０℃、好ましくは３０〜６０℃の温度、３〜１０、好ましくは５〜７のｐＨで行うが、使用するアミラーゼ、グルコアミラーゼの至適温度又は至適ｐＨ近位の値にて行うことが好ましい。また酵素処理時間は、３０分〜一晩、例えば３時間とすることができる。なお、酵素の添加量は、調製した原料物質の量に応じて当業者が設定することができる。
加熱による糊化は、澱粉を水中に懸濁し加熱することにより、澱粉粒が吸水して次第に膨張して最終的には粒子が崩壊し、溶解する現象を利用することによって行うことができる。その後、糊化した澱粉は篩いにより固液分離することによって除去することができる。
物理的破壊による澱粉除去処理は、例えばホモジナイザー、高速ミキサー、ホモミキサー、ホモジスターラーなどを用いた処理によって行うことができる。これらの物理的破壊による澱粉除去処理によって、澱粉の除去だけでなく、アロイロン層の一部除去を行うこともできる。
穀類植物の種子として発芽形態のものを使用する場合は、アミラーゼ又はグルコアミラーゼを外的に添加することなく、単に加熱することをもって澱粉除去処理を行うことができる。この場合には、発芽種子自身がアミラーゼを産生しているからである。
本発明の製造方法において、実質的にステップ（ａ）〜（ｂ）と同等の処理が施されている材料を澱粉除去画分として以降のステップに使用してもよい。かかる材料の非限定的な例としては、ビールを製造した際に生じる大麦麦芽であるビール仕込み粕を挙げることができる。このような材料の使用は、既に大部分の澱粉が除去されていること、及びステップの簡略化の観点からも好ましい。
ステップ（ｂ）により調製される澱粉除去画分には、アロイロン層、果皮、種皮の主要成分の他、穀皮、胚芽、その他タンパク質、脂質等が含まれていてもよい。麦芽のアロイロン層、果皮、種皮などの植物組織は、Ａｌｅｘａｎｄｅｒ Ｗ．ＭａｃＧｒｅｇｏｒら編集のＢａｒｌｅｙ：Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ｐ４６ Ｆｉｇ．８に示されている。またＪｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｅｒｅａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ ３６（２００２）２６１−２８４において、これらがイネ科植物の種子に共通して存在していることが示されている。
ステップ（ｂ）は、澱粉除去画分の圧扁剥離処理をさらに含むことができる。圧扁剥離処理とは、二つのロールの回転速度が微妙に異なるロールミルの適切な隙間に多層からなる組成物を通すことで、圧扁面に平行した力が加わり層の一部を剥離させる処理を指す。圧扁剥離処理には被処理原料に圧縮力を与える構造の粉砕機であればいかなる物でも使用可能である。例えば、圧扁剥離処理には、回転速度の異なるロールミル以外にも、隙間と回転速度が制御された臼状の圧扁処理装置なども使用することができる。特にロールミルを使用することが望ましい。その際、ロール間の間隙は０．１５〜０．０１ｍｍ、好ましくは０．０８〜０．０２ｍｍであるものとするが、剥離させる多層物に効率的な物理的破砕が施されるサイズを選択する。これにより、澱粉除去画分中に含まれるアロイロン層が露出し、ステップ（ｃ）のヘミセルラーゼ酵素処理によるアロイロン層の除去処理をより効率的なものとすることができる。特に、使用する原料物質、澱粉除去画分によっては、この圧扁剥離処理が、最終的に得られる本発明の不溶性食物繊維含有物質の炎症性腸疾患の改善効果に明らかに影響することがわかっており、そのような原料物質、澱粉除去画分を使用する場合には、ステップ（ｂ）においてこの処理を行うことが好ましい。圧扁剥離処理を行うことが好ましい原料物質、澱粉除去画分としては、例えば小麦ふすま、大麦搗精粕及びビール仕込み粕を挙げることができる。一方、圧扁剥離処理を行わなくても、最終的に得られる本発明の不溶性食物繊維含有物質が効果的な炎症性腸疾患改善効果を示す原料物質としては、例えば米糠、脱脂米糠、小麦麦芽及び大麦麦芽を挙げることができる。また、穀類植物種子として発芽種子を使用する場合にも、かかる圧扁剥離処理を省略できるとの示唆も存在する。
ステップ（ｂ）は、澱粉除去画分の水の存在下での篩い分け処理をさらに含むことができる。この篩い分け処理は、穀皮やその他澱粉除去画分中に大量に含まれる非標的物質を除去し、アロイロン層、果皮及び種皮を主成分とする画分（以下、果皮・種皮画分とも称する）を粗分画することを目的とするものである。この篩い分け処理は、例えば、澱粉除去画分を適切な篩い目のサイズを有するメッシュを通過させ、メッシュ上に残った画分を除去することによって行うことができる。この篩い分け処理にて使用するメッシュの篩い目のサイズは、使用する原料物質、澱粉除去画分に応じて変化する場合があるが、典型的には、ＡＳＴＭ（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｓｏｃｉｅｔｙ ｆｏｒ Ｔｅｓｔｉｎｇ ａｎｄ Ｍａｔｅｒｉａｌｓ）規格篩いの５〜２５メッシュ、例えば１２メッシュ、１６メッシュ、２０メッシュを使用する。この処理は、大量の非標的物質を除去することができるため、以降の操作のハンドリングの観点からも好ましい。
ステップ（ｂ）において、上記圧扁剥離処理と篩い分け処理とを併用することが好ましい。この場合、好ましくは、この処理の組合せを２〜５回繰り返して行う。これにより、アロイロン層、果皮及び種皮を主成分とする画分をより効率的に得ることができるからである。
上記したように、使用する穀類植物種子の種類及びその発芽状態並びに原料物質の種類などに応じて、圧扁剥離処理等の前処理の有無が、最終的に得られる本発明の不溶性食物繊維含有物質の炎症性腸疾患改善効果に影響する場合があることがわかっている。すなわち、上記ステップ（ａ）〜（ｂ）は、ステップ（ｃ）のヘミセルラーゼ酵素処理によるアロイロン層の分解をより効率的に行うための前処理ステップとして規定することができる。したがって、ステップ（ｃ）に供する澱粉除去画分に関し、ステップ（ｃ）の前に、ステップ（ａ）〜（ｂ）による前処理が最適になされているかを確認し、必要に応じて、圧扁剥離処理等の前処理を追加又は反復することが好ましいであろう。その際、例えばステップ（ａ）〜（ｂ）により調製した澱粉除去処理画分中の組織の顕微鏡観察等又はヨウ素澱粉反応を利用した分析により、前処理が最適になされているかを判断することが考えられる。
ステップ（ｃ）は、上記の通り、ステップ（ｂ）で調製した澱粉除去画分又は果皮・種皮画分に含まれるアロイロン層を除去するステップである。このステップは、ヘミセルラーゼ酵素活性を有する酵素による澱粉除去画分又は果皮・種皮画分の酵素処理を含む。このステップで使用することができるヘミセルラーゼ酵素活性を有する酵素として、これに限定されるものではないが、例えばβ−グルコシダーゼ、セルラーゼ、キシロシダーゼ、キシラナーゼ、マンノシダーゼ、マンナナーゼ、アラビノシダーゼ、アラバナーゼ、ペクチナーゼ、グルカナーゼなどを挙げることができる。特にキシラナーゼを含むキシラン分解酵素を使用することが好ましい。具体的に、本発明に使用することができるヘミセルラーゼとして、これに限定されるものではないが、例えば、商品名セルロシン（エイチビィアイ社製）、商品名マルチフェクト７２０（ジェンコア協和社製）、商品名スミチーム（新日本化学工業社製）、商品名ペントパン（ノボザイムズ社製）、商品名ヘミセルラーゼ「アマノ」９０（天野エンザイム社製）などの市販の酵素製剤や、トリコデルマ属、テルモミセス属、オウレオバシヂウム属、ストレプトミセス属、アスペルギルス属、クロストリジウム属、バチルス属、テルモトガ属、テルモアスクス属、カルドセラム属、テルモモノスポラ属、フミコーラ属、リゾップス属、ペニシリウム属などの微生物により生産されるキシラナーゼを挙げることができる。本発明で使用する上記酵素は、酵素活性を保持する限り、精製酵素、粗製酵素、固定化酵素などの任意の形態とすることができる。固定化酵素は、ポリマー、多糖類、無機物質などの担体に結合された酵素である。粗製酵素は、例えば酵素含有微生物からの酵素含有抽出物、乾燥物などの処理物を含む。ヘミセルラーゼ酵素処理は、一般的には、１０〜９０℃、好ましくは３０〜６０℃の温度、３〜１０、好ましくは５〜７のｐＨで行うが、使用するヘミセルラーゼ酵素の至適温度又は至適ｐＨ近位の値にて行うことが好ましい。また酵素処理時間は、３０分〜一晩とすることができる。なお、酵素の添加量は、調製した澱粉除去画分又は果皮・種皮画分の量に応じて当業者が設定することができる。ヘミセルラーゼ酵素処理後、澱粉除去画分又は果皮・種皮画分中のアロイロン層が部分的に又は完全に除去されていることを蛍光顕微鏡又は電子顕微鏡などで視覚的に確認することができる。蛍光顕微鏡での分析法としては、「ＰＬＡＮＴ ＭＩＣＲＯＴＥＣＨＮＩＱＵＥ ＡＮＤ ＭＩＣＲＯＳＣＯＰＹ」ＳＴＥＶＥＮ Ｅ．ＲＵＺＥＮ著 Ｃｈａｐｔｅｒ７（ｐ８７〜１１９）に記載されているような当業者に一般的な方法で確認することができる。また、電子顕微鏡での分析法としても、当業者が一般的に用いる方法で確認することができる。
ステップ（ｃ）の酵素処理において、プロテアーゼ処理を併用することが好ましい。これにより、アロイロン層を分解するために使用するヘミセルラーゼ酵素活性を有する酵素の量を、該酵素を単独で使用するよりも１／５〜１／１０倍量まで減らすことができ、コスト面で有利である。
ステップ（ｃ）は、ヘミセルラーゼ処理後の脱脂処理を含むことが好ましい。これにより、本発明の不溶性食物繊維含有物質の味質を改善及び品質を向上することができる。脱脂の方法は、特に限定されないが、例えばエタノール、アセトン、ヘキサンなどを用いた脱脂処理により行うことができる。これらの技術は当業者に自明である。なお、上記澱粉除去処理に供する原料物質として脱脂米糠を使用する場合には、かかる脱脂処理を行わなくても上記利点が得られる点に留意する。
ステップ（ｄ）は、ステップ（ｃ）の酵素処理液中の不溶性画分を回収するステップである。好ましくは、このステップで５〜２５メッシュのＡＳＴＭ規格篩いを通過するが、５００メッシュのＡＳＴＭ規格の篩いを通過しない不溶性画分が回収される。５００メッシュを通過する粒径分布（粒度）の画分は、後述する本発明の有利な効果を有しないため（〔試験例１０の結果〕参照）、このステップにおいて５００メッシュのＡＳＴＭ規格篩いを通過しない画分を得ることが、より高い効果を得るために特に重要である。具体的に、この篩い分け処理は、２段階方式により行うことができる。即ち、ヘミセルラーゼ処理液を第１のメッシュにて篩い分けし、篩いを通過した画分を第１のメッシュよりも篩い目の細かい第２のメッシュにて篩い分けし、篩い上に残った不溶性食物繊維に富む不溶性画分（すなわち、不溶性食物繊維含有物質）を回収する。この篩い分け処理にて使用する第１のメッシュと第２のメッシュの篩い目のサイズは、上記粒度を有する画分を回収できるような組合せであれば特に制限されない。例えば、第１のメッシュとしてＡＳＴＭ規格篩いの５〜２５メッシュ、例えば１２メッシュ、１６メッシュ、好ましくは２０〜２５メッシュを選択し、第２のメッシュとしてＡＳＴＭ規格篩いの５０〜５００メッシュを選択することができる。この篩い分け処理により、酵素処理液中の目的の画分を得ることができる。
ステップ（ｄ）で回収される不溶性画分は、２００メッシュのＡＳＴＭ規格篩いを通過しない画分であることがさらに好ましい。５００メッシュのＡＳＴＭ規格篩いを通過しない粒度の画分と、２００メッシュのＡＳＴＭ規格篩いを通過しない粒度の画分とでは、２００メッシュを通過しない粒度の画分の方がより高い効果を有することが立証されているからである（〔試験例９の結果〕参照）。
なお、ステップ（ｂ）において、既に果皮・種皮画分を粗分画している場合には、必ずしもステップ（ｄ）を２段階方式にて行う必要はなく、上記第２のメッシュを用いた篩い分け処理により、篩い上に残った画分を回収すればよい。
ステップ（ｄ）で取得した不溶性画分は、通常、凍結乾燥等により乾燥し、好ましくは微粉砕等の更なる加工を施すことなく、本発明の不溶性食物繊維含有物質として使用することができる。
このようにして製造される本発明の不溶性食物繊維含有物質は、ステップ（ｄ）の篩い分け処理に基づき、好ましくは実質的に５〜２５メッシュのＡＳＴＭ規格篩いを通過するが、５００メッシュのＡＳＴＭ規格篩いを通過しない画分からなる。本明細書で使用する「実質的に」とは、上記粒度範囲外の成分がわずかながら混入している不溶性食物繊維含有物質も本発明の範囲に含まれることを意図すべく使用される。したがって、実質的に５〜２５メッシュのＡＳＴＭ規格篩いを通過するが、５００メッシュのＡＳＴＭ規格篩いを通過しない画分からなる本発明の不溶性食物繊維含有物質は、上記粒度の画分を少なくとも９０％以上、好ましくは９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％、最も好ましくは１００％含んでいる。
また本発明の不溶性食物繊維含有物質は、好ましくはタンパク質の含量が２０重量％以下で、不溶性食物繊維の含量が５５重量％以上であるという性質を有する。ここでいうタンパク質の含量とは、ケルダール法を用いて得られた窒素量に、タンパク質換算係数として６．２５を乗じて得た数値から求めたものである。また、食物繊維の含量は、ＡＯＡＣ法に基づいて求めたものである。
また本発明の不溶性食物繊維含有物質に含まれる不溶性食物繊維は、アロイロン層が部分的に又は完全に除去されている。ここでいう「部分的に」とは、不溶性食物繊維のアロイロン層の７０％以上、好ましくは８０％以上、より好ましくは９０％以上、より好ましくは９５％以上、最も好ましくは９９％以上が除去されていることをいう。前記不溶性食物繊維のアロイロン層は完全に除去されていることが好ましい。
不溶性食物繊維のアロイロン層が部分的に又は完全に除去されていることは、上記のように蛍光顕微鏡又は電子顕微鏡などで視覚的に確認することによる他、例えば、本発明の不溶性食物繊維含有物質をヘミセルラーゼ酵素処理に供し、当該処理後の回収率を評価することによって確認することができる。本発明の不溶性食物繊維含有物質は上記の通りアロイロン層の大部分が除去されている画分であるため、再度のヘミセルラーゼ酵素処理に供しても当該処理後の回収率が非常に高いものである。具体的に、本発明の不溶性食物繊維含有物質は、５０ｍＭ酢酸緩衝液中（ｐＨ４．５、５０℃）４．０％ヘミセルラーゼ製剤（新日本化学工業社製スミチームＮＸ）で一晩の再度のヘミセルラーゼ酵素処理に供した際に、少なくとも約７０％以上、好ましくは少なくとも約８０％以上の回収率を有することによって特徴付けることができる。なお、ここでいう「回収率」とは、取得された不溶性食物繊維含有物質の重量を１００％として、これに再度酵素処理（４．０％ヘミセルラーゼ、ｐＨ４．５、５０℃、一晩）を行った後に、凍結乾燥により得られた物質重量の相対的な値をいう。
本発明の不溶性食物繊維含有物質が有するその他の特徴として、膨潤能を挙げることができる。ここで膨潤能とは、不溶性食物繊維含有物質内（植物組織の間）に水分子を取り込み、粒子が膨らんで大きくなる特性をいう。本発明の不溶性食物繊維含有物質が膨潤能を有することは、例えば、不溶性食物繊維含有物質を一定量メスシリンダーに計り取り、それに一定量の水を入れて一定時間置き、メスシリンダーの目盛りにより膨らみを定量することによって確認することができる。本発明の不溶性食物繊維含有物質の膨潤能は、１ｇ当たり２０ｍｌ〜３５ｍｌの容積にまで膨らむことで特徴付けることができる。
以下、澱粉除去画分としてビール仕込み粕を、原料物質として小麦ふすま、米糠を使用した場合の本発明の不溶性食物繊維含有物質の製造について具体的に説明する。
本発明の不溶性食物繊維含有物質の製造は、上記の通り、ビールを製造した際に生じる大麦麦芽であるビール仕込み粕、小麦粉を製造した際に副次的に生成されるふすま、精米後に副次的に生成される米糠など利用することが経済的に好ましい。
本発明の不溶性食物繊維含有物質の製造にビール仕込み粕を使用する場合、本発明の不溶性食物繊維含有物質を得る具体的な方法の例として、特公平４−３１６６６号公報に記載された方法を用いることができる。すなわち、湿体状態にあるビール仕込み粕を圧扁粉砕処理し、得られた圧扁粉砕処理物を水の存在下において、篩い分け処理にて果皮・種皮及びアロイロン層を大量に含む画分を調製し、それをヘミセルラーゼにて処理すればよい。
より具体的には、大麦特有の穀皮を除去するために、湿体状態のビール仕込み粕を圧扁剥離処理する。ビール仕込み粕の圧扁剥離処理には被処理原料に圧縮力を与える構造の粉砕機であればいかなる物でも使用可能であるが、特にロールミルの使用が望ましい。ロール間の間隙は０．１５〜０．０１ｍｍ、好ましくは０．０８〜０．０２ｍｍであるものとするが、剥離させる多層物が効率的に物理的破砕が行われるサイズを選択する。ビール仕込み粕を圧扁剥離処理する際に、ビール仕込み粕中の水分を６５％以上に調整することが望ましい。次に、得られた圧扁剥離処理物を水の存在下において篩い分け処理する。この篩い分け処理により、穀皮画分が篩い上に残り、アロイロン層に富む果皮・種皮画分が篩いを通過する。篩い目の寸法はＡＳＴＭ規格篩いの５〜２０メッシュ、好ましくは１６〜２０メッシュとする。以上の作業により、大麦特有の穀皮を多量に含む画分を除去することができる。また、果皮・種皮画分を効率よく得るためには、更に、先の篩いより目の細かい篩いを用いて篩い分けを行う。その際に、果皮・種皮画分は篩いの上に残り、果皮・種皮画分を調製することができる。後者の篩い目の寸法は、ＡＳＴＭ規格篩いの５０〜２００メッシュとする。前記の圧扁剥離処理とこの篩い分け処理とを２〜５回繰り返して行うのが好ましい。上記のようにして得られた果皮・種皮画分にヘミセルラーゼ処理を行い、再度ＡＳＴＭ規格篩いの５０〜２００メッシュにて篩い分けし、ヘミセルラーゼによる分解物を除去し、篩いの上に残った不溶性画分が、目的の不溶性食物繊維含有物質である。こうして取得した不溶性食物繊維含有物質は、通常、乾燥させてから用いる。乾燥方法は特に限定されないが具体例としては、凍結乾燥による方法などが挙げられる。
本発明の不溶性食物繊維含有物質の製造に小麦ふすまを使用する場合、まず澱粉を除去するために、乾燥状態の小麦ふすまをアミラーゼ又はグルコアミラーゼを含んだ溶液に懸濁することにより、澱粉を分解させる処理を施す。長時間（例えば３０分〜一晩）アミラーゼ反応を施した後、ヘミセルラーゼ酵素処理の効率化のために、例えばロールミルによる圧扁剥離処理を行う。ロール間の間隙は、０．１５〜０．０１ｍｍ、好ましくは０．０８〜０．０２ｍｍであるものとするが、剥離させる多層物が効率的に物理的破砕が行われるサイズを選択する。次に、篩い目がＡＳＴＭ規格篩いの５０〜２００メッシュ、好ましくは２００メッシュにて篩い分けし、アミラーゼによる分解物を除去し、篩いの上に残った果皮・種皮画分を回収する。次に、本画分をヘミセルラーゼを含んだ溶液に懸濁し、長時間（例えば３０分〜一晩）反応後、同様に、篩い目がＡＳＴＭ規格篩いの５０〜２００メッシュ、好ましくは２００メッシュにて篩い分けし、ヘミセルラーゼによる分解物を除去し、篩いの上に残った不溶性画分を回収することにより、本発明の不溶性食物繊維含有物質を得ることができる。こうして取得した不溶性食物繊維含有物質は、通常、乾燥させてから用いられる。乾燥方法は特に限定されないが具体例としては、凍結乾燥による方法などが挙げられる。
本発明の不溶性食物繊維含有物質の製造に米糠を使用する場合、まず澱粉を除去するために、乾燥状態の米糠をアミラーゼ又はグルコアミラーゼを含んだ溶液に懸濁することにより、澱粉を分解させる処理を施す。長時間（例えば３０分〜一晩）アミラーゼ反応を施した後に、篩い目がＡＳＴＭ規格篩いの５０〜２００メッシュ、好ましくは２００メッシュにて篩い分けし、アミラーゼによる分解物を除去し、篩いの上に残った果皮・種皮画分を回収する。次に、本画分をヘミセルラーゼを含んだ溶液に懸濁し、長時間（例えば３０分〜一晩）反応後、同様に、篩い目がＡＳＴＭ規格篩いの５０〜２００メッシュ、好ましくは２００メッシュにて篩い分けし、ヘミセルラーゼによる分解物を除去し、篩いの上に残った画分を回収することにより本発明の不溶性食物繊維含有物質を得ることができる。この不溶性食物含有物質は、通常、乾燥させてから用いられる。乾燥方法は特に限定されないが、凍結乾燥による方法などが挙げられる。
以上、本発明の不溶性食物繊維含有物質及びその製造方法を説明してきたが、本発明の不溶性食物繊維含有物質の製造方法は上記方法に限定されるものではない。すなわち、穀類植物の種子から、以下の特徴（ｉ）〜（ｉｖ）を有する不溶性食物繊維含有物質を製造することができるものであれば、他の製造方法を採用してもよい：（ｉ）実質的に、５〜２５メッシュのＡＳＴＭ規格篩いを通過するが、５００メッシュのＡＳＴＭ規格篩いを通過しない粒度の画分からなり；（ｉｉ）タンパク質含量が２０重量％以下であり、かつ食物繊維含量が５５重量％以上であり；（ｉｉｉ）不溶性食物繊維のアロイロン層が部分的に又は完全に除去されており；かつ（ｉｖ）潰瘍性大腸炎の予防及び／又は改善効果を有する。なお、潰瘍性大腸炎の予防及び／又は改善効果については後述する。
上記特徴を有する本発明の不溶性食物繊維含有物質の代替的な製造方法の例として、以下のステップ：（ａ１）穀類植物の種子を、粉砕することによって、又は搗精することにより生じる種子外側画分を回収することによって、原料物質を調製するステップ；（ｂ１）原料物質を物理的破壊によって澱粉除去処理して澱粉除去画分を調製するステップ；（ｃ１）ステップ（ｂ１）で調製した画分から５〜２５メッシュのＡＳＴＭ規格篩いを通過するが、５００メッシュのＡＳＴＭ規格篩いを通過しない不溶性画分を回収するステップを含む方法が挙げられる。
この方法は、物理的破壊を含む澱粉除去処理に供する点、及びヘミセルラーゼ活性を有する酵素による酵素処理ステップを含まない点を除き、上記方法と同様にして行うことができる。
この方法において、物理的破壊による澱粉除去処理は、例えばホモジナイザー、高速ミキサー、ホモミキサー、ホモジスターラーなどを用いた処理によって行うことができる。これにより澱粉除去処理に併せてアロイロン層の除去を行うことができる。
上記澱粉除去処理は、上記方法のステップ（ｂ）で説明した篩い分け処理を併用して複数回、例えば２〜５回実施することが好ましい。これにより澱粉除去処理とこれに伴うアロイロン層の除去をより効率的に行うことができる。
上記澱粉除去処理は、物理的破壊以外の他の澱粉除去処理、例えば酵素による澱粉分解処理、加熱による糊化、糊化後の篩いによる除去を併用してもよい。
上記のようにして製造した本発明の不溶性食物繊維含有物質は、炎症性腸疾患、例えば潰瘍性大腸炎の治療、改善又は予防効果を有する。本明細書で使用する「潰瘍性大腸炎の治療」又は「潰瘍性大腸炎を治療する」という用語は、本発明の不溶性食物繊維含有物質の服用又は投与により、下痢状態のスコアを０〜１まで回復させること、又は大腸組織学的スコアを０〜１まで回復させること、の１つ以上を指す。本明細書で使用する「潰瘍性大腸炎の改善」又は「潰瘍性大腸炎を改善する」という用語は、本発明の不溶性食物繊維含有物質の服用又は投与により、下痢状態のスコアの低減、又は大腸組織学的スコアの低減、の１つ以上を指す。本明細書で使用する「潰瘍性大腸炎の予防」又は「潰瘍性大腸炎を予防する」という用語は、本発明の不溶性食物繊維含有物質の服用又は投与により、下痢状態のスコアを０〜１に維持すること、又は大腸組織学的スコアを０〜１に維持すること、の１つ以上を指す。なお、下痢状態のスコア及び大腸組織学的スコアについては下記の実施例にて定義される。
したがって、本発明の不溶性食物繊維含有物質を経口摂取することで、炎症性腸疾患（例えば潰瘍性大腸炎）に由来する激しい下痢を解消し、腸管における炎症を改善することができる。また、日常的に摂取することにより炎症性腸疾患に罹ることを予防することができる。この目的のために、本発明の不溶性食物繊維含有物質を１日あたり、１ｇ以上、好ましくは５ｇ以上摂取することが望ましい。本発明の不溶性食物繊維含有物質は、穀類植物の種子から食品用酵素により処理して得られた成分であるので、日常の食生活に取り入れることができる。また、投与ないしは摂取の時期は、食前、食間及び食後のいずれの時期でもよい。
本発明の不溶性食物繊維含有物質は、特定の組成物、例えば飲食品又は医薬品に配合して提供することができる。
本発明の不溶性食物繊維含有物質を飲食品に配合して提供する場合、あらゆる食品形態に加工することが可能である。本発明の不溶性食物繊維含有物質を配合することのできる飲食品としては、天然物及びその加工品を含む飲食物等を挙げることができる。またその配合量は、飲食品１０ｇに対し、本発明の不溶性食物繊維含有物質を１ｇ以上配合することができる。
飲食品の例としては、これに限定されるものではないが、錠剤形、粉末状、顆粒状、カプセル状、ゼリー状等の機能性食品、パン類、菓子類、クッキー、ビスケット等の穀類加工品、牛乳、ヨーグルト、アイスクリーム等の乳製品類、炭酸飲料、清涼飲料、果汁入り飲料、薬系ドリンク等の飲料、惣菜や加工食品等が挙げられる。
本発明の不溶性食物繊維含有物質を医薬品に配合して提供する場合には、潰瘍性大腸炎の治療、改善又は予防用の医薬として製剤化することができる。製剤の投与形態は特に限定されないが、例えば投与経路として、経口投与、経腸投与等を挙げることができる。経口投与又は経腸投与の場合、本発明の不溶性食物繊維含有物質をそのまま投与してもよいが、医薬的に許容できる賦形剤とともに、液剤、懸濁剤、散剤、顆粒剤、錠剤、カプセル剤などの形態で投与してもよい。
医薬的に許容できる賦形剤としては、これに限定されるものではないが、乳糖、ショ糖、ブドウ糖などの糖類、デンプン、炭酸カルシウム、硫酸カルシウム等の無機物、結晶セルロース、蒸留水、精製水、ゴマ油、ダイズ油、トウモロコシ油、オリーブ油、綿実油等の一般に使用されているものを例示することができる。また賦形剤の他、結合剤、滑沢剤、分散剤、懸濁剤、乳化剤、希釈剤、緩衝剤、抗酸化剤、細菌抑制剤などの添加剤を使用することができる。他の医薬品と混合、或いは併用することも可能である。なお、上記の製剤は殺菌処理を行なってもよい。
本発明の医薬を適用する対象は特に限定されず、健常者、潰瘍性大腸炎の患者、潰瘍性大腸炎の治療中の患者、潰瘍性大腸炎の予防を検討している健常者等のいずれであってもよい。またその対象はヒトに限らず、ヒト以外の動物に適用してもよい。
本発明の医薬品の投与量は、被験者の年齢、体重、性別、肥満の程度など、様々な要因に応じて変化するが、典型的には、本発明の不溶性食物含有物質を１日あたり、１ｇ以上、好ましくは５ｇ以上投与する量とし、投与間隔は特に制限されない。
本発明の不溶性食物繊維含有物質は、効率的に炎症性腸疾患を改善することができ、かつ、穀類植物の種子から食品用酵素により処理して得られた成分であるので、安全性が高く、飲食品又は医薬における使用に有用である。これに関連し、本発明の不溶性食物繊維含有物質は、食物繊維含量が高いため、比較的少量で炎症性腸疾患の改善効果を得ることができるという利点を有する。
さらに、本発明の不溶性食物繊維含有物質は、米糠や小麦ふすまといった、比較的安価な原料から製造することが可能であるため、コスト面にも優れている。
飲食品又は医薬品組成物に、本発明の不溶性食物繊維含有物質が含まれている場合は、以下の方法で検出することができる。すなわち、最初に飲食品又は医薬品組成物を水に懸濁した後、水中で２００メッシュ（ＡＳＴＭ規格：篩い目開き０．０７５ｍｍ）篩いを用いて篩い分けし、不溶性画分を回収する。そして、ナイルブルー又はその他の疎水性物質の染色等に適した染色試薬で前記不溶性画分を染色し、蛍光顕微鏡などで観察することにより、本発明の不溶性食物繊維含有物質を検出することができる。その際、本発明の不溶性食物繊維含有物質は、染色される層と染色されない層が重なっているという特徴により、他の不溶性組成物と区別することができる。染色に適したその他の試薬としては、ズダン ＩＩＩ、ズダンブラック、オイルレッド、フルオロルイエロー０８８などが挙げられる。
以下の実施例により、本発明をさらに具体的に説明する。但し、本発明の範囲はこれらの実施例により限定されるものではない。実施例中、特にことわらない限り、％表示は重量基準によるものとする。また、分析により求める各成分値について、粗タンパク質はケルダール法を（窒素のタンパク質換算係数は６．２５とした。）用いて、粗脂肪はジエチルエーテルを抽出溶媒としたソックスレー抽出法を用いて測定した。食物繊維の含量は、ＡＯＡＣ法に基づいて求めた。
〔調製例１〕（ビール仕込み粕⇒ロールミル）
湿体状態のビール仕込み粕（水分：７７．６重量％）をロールミル（ロール回転数：１００ｒｐｍ、ロール間隙：０．０８ｍｍ）で圧扁剥離処理後、水中で１６メッシュ篩い（ＡＳＴＭ規格：篩い目開き１．１８ｍｍ）を用いて篩い分けし、通過画分をさらに５０メッシュ（ＡＳＴＭ規格：篩い目開き０．３００ｍｍ）篩いを用いて篩い分けし、通過しない画分を回収して凍結乾燥に供した後、不溶性食物繊維含有物質を得た。これを調製試料１とした。この分析値は下記表１に示すとおりである。また、調製試料１に含まれるアロイロン層部分の走査型電子顕微鏡写真像を図１に示す。
〔調製例２〕（ビール仕込み粕⇒ロールミル＋ヘミセルラーゼ）
湿体状態のビール仕込み粕（水分：７７．６重量％）をロールミル（ロール回転数：１００ｒｐｍ、ロール間隙：０．０８ｍｍ）で圧扁剥離処理後、水中で１６メッシュ篩い（ＡＳＴＭ規格：篩い目開き１．１８ｍｍ）を用いて篩い分けし、通過画分をさらに５０メッシュ（ＡＳＴＭ規格：篩い目開き０．３００ｍｍ）篩いを用いて篩い分けし、通過しない画分を回収した。回収した画分にヘミセルラーゼ製剤（新日本化学工業社製スミチームＮＸ）１．０％を５０ｍＭ酢酸緩衝液中（ｐＨ４．５、５０℃）で１晩反応させて、植物組織のアロイロン層を完全に分解した後、水中で２００メッシュ（篩い目開き：０．０７５ｍｍ）篩いを用いて篩い分けし、通過しない画分を回収して凍結乾燥に供した後、不溶性食物繊維含有物質を得た。これを調製試料２とした。この分析値は下記表１に示すとおりである。また、調製試料２に含まれるアロイロン層部分の走査型電子顕微鏡写真像を図２に示す。
〔試験例１〕
調製例１、２で得られた不溶性食物繊維含有物質を用いて潰瘍性大腸炎の激しい下痢や大腸粘膜の異常を治療できるかについて実験した。
〔材料及び方法〕
供試動物として、ＳＤ系雄ラット（５週令、１００ｇ前後）を１週間固形飼料（ＣＥ−２、日本クレア製）で予備飼育して実験環境に馴化したものを各群７匹ずつに区分けして使用した。試験例１で用いた飼料は下記表２に示すとおりである。
潰瘍性大腸炎はデキストラン硫酸ナトリウムを飼料に混合して与えることで実験的に発症させた。なお、この方法は金内らの方法に従った（Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ ３３、１７９−１８８、１９９８）。不溶性食物繊維含有物質も飼料に混合して与えるものとし、自由摂取とした。５日間飼育後、糞便及び肛門の様子を観察し、下痢の様子をスコア化して評価した。その後、大腸を摘出し、一部を１０％ホルマリン緩衝液で固定化後、粘膜の切片を作製し、粘膜像の観察を行い、組織学的スコア化を行った。
下痢の様子のスコア化とは、下痢の様子のスコア化とは、以下のように糞便やラットの状態に応じて設定したスコアに基づき、各ラットの下痢状態のスコアづけ行い、平均値を算出した。
スコア０：正常
スコア１：やや柔らかい
スコア２：かなり柔らかい
スコア３：採糞がほぼ不可能
スコア４：下痢だけでなく肛門に若干爛れがある
スコア５：肛門の爛れがかなりひどい下痢
粘膜像の観察による組織学的スコア化とは、金内らの報告に従い（Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ １４、８８０−８８８、１９９９）、以下に設定したスコアに基づいて、肛門側から観察して大腸下部の代表的な部位のスコアづけを行い、平均値を算出した。
スコア０：正常な陰窩
スコア１：陰窩の拡張
スコア２：３分の１の基底部陰窩の欠落
スコア３：３分の２の基底部陰窩の欠落
スコア４：基底部陰窩は全て欠落しているが上皮組織は正常
スコア５：全ての陰窩と上皮組織の欠落
基本飼料はカゼインを用いてタンパク質を１４．６％、コーン油を用いて脂質を５．０％、ビタミン１．０％、ミネラル３．５％、塩化コリン０．２％を含む。コーンスターチを用いて重量を調整するものとする。
試験群は、以下のように設定した：
比較群１：基本飼料にセルロースを３．０％添加し、潰瘍性大腸炎誘発の為にデキストラン硫酸ナトリウムを３．０％添加した群
比較群２：基本飼料にＧＢＦ（キリンヤクルトネクストステージ社「発芽大麦食品」）を１０％添加し、タンパク質含量が１４．６％になるようにカゼインで調整し、潰瘍性大腸炎誘発の為にデキストラン硫酸ナトリウムを３．０％添加した群
実験群１：基本飼料に食物繊維含量が３．０％になるように調製試料１を添加し、タンパク質含量が１４．６％になるようにカゼインで調整し、潰瘍性大腸炎誘発の為にデキストラン硫酸ナトリウムを３．０％添加した群
実験群２：基本飼料に食物繊維含量が３．０％になるように調製試料２を添加し、タンパク質含量が１４．６％になるようにカゼインで調整し、潰瘍性大腸炎誘発の為にデキストラン硫酸ナトリウムを３．０％添加した群
〔試験例１の結果〕
結果を図３〜図４に示す。図３は、実験群１、２及び比較群１、２の下痢スコアを示す。図４は、実験群１、２及び比較群１、２の組織学的スコアを示す。図３から、比較群２、実験群１及び実験群２において下痢スコア改善効果が認められたことから、ＧＢＦ、調製試料１及び調製試料２に下痢スコア改善効果を有していることが確認できた。また、調製試料１、調製試料２は食物繊維含量が高く、食物繊維含量３．０％になるように飼料を調製しているため、ＧＢＦ含量１０％の半分以下の含量で効果を示すことが判明した。実験群１、実験群２を比較した場合に、ヘミセルラーゼによりアロイロン層を分解除去した調製試料２は更に強い効果を有しており、図４の組織学的スコアからも大腸粘膜の損傷が防止されていることが確認された。以上の結果から、潰瘍性大腸炎誘発剤と同時に摂取しても、調製試料１、調製試料２の不溶性食物繊維含有物質は有効に症状の改善を促すことが判明した。
〔調製例３〕（裸麦芽⇒澱粉分解）
発芽した裸大麦（裸麦芽）を原料とした。佐竹製作所製の醸造用テスト精米機ＴＤＢ２Ａ（使用回転数５００ｒｐｍ）により穀皮を除去した後に、それをディスクミルにより粉砕した。その後、加水して６５℃で３時間保持して、裸麦芽の持つアミラーゼを利用して澱粉を分解した。澱粉分解後、水中で１２メッシュ篩い（ＡＳＴＭ規格：篩い目開き１．６８ｍｍ）を用いて篩い分けし、通過画分をさらに２００メッシュ（ＡＳＴＭ規格：篩い目開き０．０７５ｍｍ）篩いを用いて篩い分けし、通過しない画分を回収して凍結乾燥に供した後、不溶性食物繊維含有物質を得た。これを調製試料３とした。この分析値は下記表３に示すとおりである。また、調製試料３に含まれるアロイロン層部分の走査型電子顕微鏡写真像を図５に示す。ちなみにアミラーゼを６５℃で作用させず冷水で澱粉のみを除去した場合のアロイロン層は、図６のような状態となる。
〔調製例４〕（裸麦芽⇒澱粉分解＋ロールミル＋ヘミセルラーゼ）
発芽した裸大麦（裸麦芽）を原料とした。佐竹製作所製の醸造用テスト精米機ＴＤＢ２Ａ（使用回転数５００ｒｐｍ）により穀皮を除去した後に、それをディスクミルにより粉砕した。その後、加水して６５℃で３時間保持して、裸麦芽の持つアミラーゼを利用して澱粉を分解した。澱粉分解後、水中で１２メッシュ篩い（ＡＳＴＭ規格：篩い目開き１．６８ｍｍ）を用いて篩い分けし、通過画分をさらに２００メッシュ（ＡＳＴＭ規格：篩い目開き０．０７５ｍｍ）篩いを用いて篩い分けし、通過しない画分を回収した。次に、回収した画分を湿体状態でロールミル（ロール回転数：１００ｒｐｍ、ロール間隙：０．０８ｍｍ）で圧扁剥離処理後、水中で２００メッシュ（ＡＳＴＭ規格：篩い目開き０．０７５ｍｍ）篩いを用いて篩い分けし、通過しない画分を回収し、ヘミセルラーゼ製剤（新日本化学工業社製スミチームＮＸ）１．０％を５０ｍＭ酢酸緩衝液中（ｐＨ４．５、５０℃）で１晩反応させて、植物組織のアロイロン層を完全に分解した。再度、水中で２００メッシュ（ＡＳＴＭ規格：篩い目開き０．０７５ｍｍ）篩いを用いて篩い分けし、通過しない画分を回収して凍結乾燥に供した後、不溶性食物繊維含有物質を得た。これを調製試料４とした。この分析値は下記表３に示すとおりである。また、調製試料４に含まれるアロイロン層部分の走査型電子顕微鏡写真像を図７に示す。
〔試験例２〕
調製例３、４で得られた不溶性食物繊維含有物質を用いて潰瘍性大腸炎の激しい下痢や大腸粘膜の異常を治療できるかについて実験した。
〔材料及び方法〕
供試動物や潰瘍性大腸炎の発症方法は、試験例１に従った。ただし、試験例２で用いた飼料は下記表４に示すとおりである。
基本飼料はカゼインを用いてタンパク質を１４．６％、コーン油を用いて脂質を５．０％、ビタミン１．０％、ミネラル３．５％、塩化コリン０．２％を含む。コーンスターチを用いて重量を調整するものとする。
試験群は、以下のように設定した：
比較群３：基本飼料にセルロースを３．０％添加し、潰瘍性大腸炎誘発の為にデキストラン硫酸ナトリウムを３．０％添加した群
比較群４：基本飼料にＧＢＦ（キリンヤクルトネクストステージ社「発芽大麦食品」）を１０％添加し、タンパク質含量が１４．６％になるようにカゼインで調整し、潰瘍性大腸炎誘発の為にデキストラン硫酸ナトリウムを３．０％添加した群
実験群３：基本飼料に食物繊維含量が３．０％になるように調製試料３を添加し、タンパク質含量が１４．６％になるようにカゼインで調整し、潰瘍性大腸炎誘発の為にデキストラン硫酸ナトリウムを３．０％添加した群
実験群４：基本飼料に食物繊維含量が３．０％になるように調製試料４を添加し、タンパク質含量が１４．６％になるようにカゼインで調整し、潰瘍性大腸炎誘発の為にデキストラン硫酸ナトリウムを３．０％添加した群
〔試験例２の結果〕
結果を図８に示す。図８は、実験群３、４及び比較群３、４の下痢スコアを示す。図８から、比較群４、実験群３及び実験群４において下痢スコア改善効果が認められたことから、ＧＢＦ、調製試料３及び調製試料４に下痢スコア改善効果を有していることが確認できた。また、調製試料３、調製試料４は食物繊維含量が高く、食物繊維含量３．０％になるように飼料を調製しているため、ＧＢＦ含量１０％の半分以下の含量で効果を示すことが判明した。実験群３、実験群４を比較した場合に、ロールミル処理後にヘミセルラーゼ処理を行い、アロイロン層を分解除去した調製試料４は更に強い下痢スコア改善効果を有していることが確認された。以上の結果から、潰瘍性大腸炎誘発剤と同時に摂取しても、調製試料３、調製試料４の不溶性食物繊維含有物質は有効に症状の改善を促すことが判明した。
〔調製例５〕（裸大麦⇒澱粉分解）
未発芽の裸大麦（裸大麦）を原料とした。佐竹製作所製の醸造用テスト精米機ＴＤＢ２Ａ（使用回転数８００ｒｐｍ）により穀皮を除去した後に、それをディスクミルにより粉砕した。その後、アミラーゼ製剤（新日本化学工業社製スミチームＡＳ）２．０％を５０ｍＭ酢酸緩衝液中（ｐＨ４．５、６５℃）で３時間反応させて、裸大麦中の澱粉を分解した。澱粉分解後、水中で１２メッシュ篩い（ＡＳＴＭ規格：篩い目開き１．６８ｍｍ）を用いて篩い分けし、通過画分をさらに２００メッシュ（ＡＳＴＭ規格：篩い目開き０．０７５ｍｍ）篩いを用いて篩い分けし、通過しない画分を回収して凍結乾燥に供した後、不溶性食物繊維含有物質を得た。これを調製試料５とした。この分析値は下記表５に示すとおりである。また、調製試料５に含まれるアロイロン層部分の走査型電子顕微鏡写真像を図９に示す。
〔調製例６〕（裸大麦⇒澱粉分解＋ロールミル＋ヘミセルラーゼ）
未発芽の裸大麦（裸大麦）を原料とした。佐竹製作所製の醸造用テスト精米機ＴＤＢ２Ａ（使用回転数８００ｒｐｍ）により穀皮を除去した後に、それをディスクミルにより粉砕した。その後、アミラーゼ製剤（新日本化学工業社製スミチームＡＳ）２．０％を５０ｍＭ酢酸緩衝液中（ｐＨ４．５、６５℃）で３時間反応させて、裸大麦中の澱粉を分解した。澱粉分解後、水中で１２メッシュ篩い（ＡＳＴＭ規格：篩い目開き１．６８ｍｍ）を用いて篩い分けし、通過画分をさらに２００メッシュ（ＡＳＴＭ規格：篩い目開き０．０７５ｍｍ）篩いを用いて篩い分けし、通過しない画分を回収した。回収した画分を湿体状態でロールミル（ロール回転数：１００ｒｐｍ、ロール間隙：０．０８ｍｍ）で圧扁剥離処理後、水中で２００メッシュ（ＡＳＴＭ規格：篩い目開き０．０７５ｍｍ）篩いを用いて篩い分けし、通過しない画分を回収した。次に、回収した画分にヘミセルラーゼ製剤（新日本化学工業社製スミチームＮＸ）１．０％を５０ｍＭ酢酸緩衝液中（ｐＨ４．５、５０℃）で１晩反応させて、植物組織のアロイロン層を完全に分解した。再度、水中で２００メッシュ（ＡＳＴＭ規格：篩い目開き０．０７５ｍｍ）篩いを用いて篩い分けし、通過しない画分を回収して凍結乾燥に供した後、不溶性食物繊維含有物質を得た。これを調製試料６とした。この分析値は下記表５に示すとおりである。また、調製試料６に含まれるアロイロン層部分の走査型電子顕微鏡写真像を図１０に示す。
〔試験例３〕
調製例５、６で得られた不溶性食物繊維含有物質を用いて潰瘍性大腸炎の激しい下痢や大腸粘膜の異常を治療できるかについて実験した。
〔材料及び方法〕
供試動物や潰瘍性大腸炎の発症方法は、試験例１に従った。ただし、試験例３で用いた飼料は下記表６に示すとおりである。
基本飼料はカゼインを用いてタンパク質を１４．６％、コーン油を用いて脂質を５．０％、ビタミン１．０％、ミネラル３．５％、塩化コリン０．２％を含む。コーンスターチを用いて重量を調整するものとする。
試験群は、以下のように設定した：
比較群５：基本飼料にセルロースを３．０％添加し、潰瘍性大腸炎誘発の為にデキストラン硫酸ナトリウムを３．０％添加した群
比較群６：基本飼料にＧＢＦ（キリンヤクルトネクストステージ社「発芽大麦食品」）を１０％添加し、タンパク質含量が１４．６％になるようにカゼインで調整し、潰瘍性大腸炎誘発の為にデキストラン硫酸ナトリウムを３．０％添加した群
実験群５：基本飼料に食物センイ含量が３．０％になるように調製試料５を添加し、タンパク質含量が１４．６％になるようにカゼインで調整し、潰瘍性大腸炎誘発の為にデキストラン硫酸ナトリウムを３．０％添加した群
実験群６：基本飼料に食物繊維含量が３．０％になるように調製試料６を添加し、タンパク質含量が１４．６％になるようにカゼインで調整し、潰瘍性大腸炎誘発の為にデキストラン硫酸ナトリウムを３．０％添加した群
〔試験例３の結果〕
結果を図１１に示す。図１１は、実験群５、６及び比較群５、６の下痢スコアを示す。図１１から、比較群６、実験群５及び実験群６において下痢スコア改善効果が認められたことから、ＧＢＦ、調製試料５及び調製試料６に下痢スコア改善効果を有していることが確認できた。また、調製試料５、調製試料６は食物繊維含量が高く、食物繊維含量３．０％になるように飼料を調製しているため、ＧＢＦ含量１０％の半分以下の含量で効果を示すことが判明した。実験群５、実験群６を比較した場合に、ロールミル処理後にヘミセルラーゼ処理を行い、アロイロン層を分解除去した調製試料６は更に強い下痢スコア改善効果を有していることが確認された。以上の結果から、潰瘍性大腸炎誘発剤と同時に摂取しても、調製試料５、調製試料６の不溶性食物繊維含有物質は有効に症状の改善を促すことが判明した。更に、発芽していない種子によるものであっても、ロールミル処理とヘミセルラーゼ処理の併用により、未発芽種子由来の食物繊維含有物質においても下痢スコア改善及び抗炎症作用を有していることが判明した。
〔調製例７〕（裸麦芽⇒澱粉分解＋ロールミル）
発芽した裸大麦（裸麦芽）を原料とした。佐竹製作所製の醸造用テスト精米機ＴＤＢ２Ａ（使用回転数５００ｒｐｍ）により穀皮を除去した後に、それをディスクミルにより粉砕した。その後、加水して６５℃で３時間保持して、裸麦芽の持つアミラーゼを利用して澱粉を分解した。澱粉分解後、水中で１２メッシュ篩い（ＡＳＴＭ規格：篩い目開き１．６８ｍｍ）を用いて篩い分けし、通過画分をさらに２００メッシュ（ＡＳＴＭ規格：篩い目開き０．０７５ｍｍ）篩いを用いて篩い分けし、通過しない画分を回収した。回収した画分を湿体状態でロールミル（ロール回転数：１００ｒｐｍ、ロール間隙：０．０８ｍｍ）で圧扁剥離処理後、水中で２００メッシュ（ＡＳＴＭ規格：篩い目開き０．０７５ｍｍ）篩いを用いて篩い分けし、通過しない画分を回収して凍結乾燥に供した後、不溶性食物繊維含有物質を得た。これを調製試料７とした。この分析値は下記表７に示すとおりである。
〔調製例８〕（（裸麦芽⇒澱粉分解＋ヘミセルラーゼ）
発芽した裸大麦（裸麦芽）を原料とした。佐竹製作所製の醸造用テスト精米機ＴＤＢ２Ａ（使用回転数５００ｒｐｍ）により穀皮を除去した後に、それをディスクミルにより粉砕した。その後、加水して６５℃で３時間保持して、裸麦芽の持つアミラーゼを利用して澱粉を分解した。澱粉分解後に、ヘミセルラーゼ製剤（新日本化学工業社製スミチームＮＸ）１．０％を５０ｍＭ酢酸緩衝液中（ｐＨ４．５、５０℃）で１晩反応させて、植物組織のアロイロン層を完全に分解した後、水中で２００メッシュ（ＡＳＴＭ規格：篩い目開き０．０７５ｍｍ）篩いを用いて篩い分けし、通過しない画分を回収して凍結乾燥に供した後、不溶性食物繊維含有物質を得た。これを調製試料８とした。この分析値は下記表７に示すとおりである。
〔調製例９〕（裸麦芽⇒澱粉分解＋ロールミル＋ヘミセルラーゼ）
再度、調製例４と同様の処理を行い、不溶性食物繊維含有物質を得た。これを調製試料９とした。この分析値は下記表７に示すとおりである。
〔試験例４〕
調製例７、８、９で得られた不溶性食物繊維含有物質を用いて潰瘍性大腸炎の激しい下痢や大腸粘膜の異常を治療できるかについて実験した。
〔材料及び方法〕
供試動物や潰瘍性大腸炎の発症方法は、試験例１に従った。ただし、試験例４で用いた飼料は下記表８に示すとおりである。
基本飼料はカゼインを用いてタンパク質を１４．６％、コーン油を用いて脂質を５．０％、ビタミン１．０％、ミネラル３．５％、塩化コリン０．２％を含む。コーンスターチを用いて重量を調整するものとする。
試験群は、以下のように設定した：
比較群７：基本飼料にセルロースを３．０％添加し、潰瘍性大腸炎誘発の為にデキストラン硫酸ナトリウムを３．０％添加した群
比較群８：基本飼料にＧＢＦ（キリンヤクルトネクストステージ社「発芽大麦食品」）を１０％添加し、タンパク質含量が１４．６％になるようにカゼインで調整し、潰瘍性大腸炎誘発の為にデキストラン硫酸ナトリウムを３．０％添加した群
実験群７：基本飼料に食物繊維含量が３．０％になるように調製試料７を添加し、タンパク質含量が１４．６％になるようにカゼインで調整し、潰瘍性大腸炎誘発の為にデキストラン硫酸ナトリウムを３．０％添加した群
実験群８：基本飼料に食物繊維含量が３．０％になるように調製試料８を添加し、タンパク質含量が１４．６％になるようにカゼインで調整し、潰瘍性大腸炎誘発の為にデキストラン硫酸ナトリウムを３．０％添加した群
実験群９：基本飼料に食物繊維含量が３．０％になるように調製試料９を添加し、タンパク質含量が１４．６％になるようにカゼインで調整し、潰瘍性大腸炎誘発の為にデキストラン硫酸ナトリウムを３．０％添加した群
〔試験例４の結果〕
結果を図１２〜図１３に示す。図１２は、実験群７、８、９及び比較群７、８の下痢スコアを示す。図１３は、実験群７、８、９及び比較群７、８の組織学的スコアを示す。図１２から、比較群８、実験群７、実験群８及び実験群９において下痢スコア改善効果が認められたことから、ＧＢＦ、調製試料７、調製試料８及び調製試料９に下痢スコア改善効果を有していることが確認できた。また、調製試料７、調製試料８及び調製試料９は食物繊維含量が高く、食物繊維含量３．０％になるように飼料を調製しているため、ＧＢＦ含量１０％の半分以下の含量で効果を示すことが判明した。実験群７、実験群８及び実験群９を比較した場合に、ヘミセルラーゼ処理によりアロイロン層を分解除去した調製試料８、または、ロールミル処理後にヘミセルラーゼ処理によりアロイロン層を分解除去した調製試料９はいずれもアロイロン層を完全に分解していない調製試料７よりも強い下痢スコア改善効果を有していることが確認された。図１３の組織学的スコアからも調製試料７、調製試料８、調製試料９は、大腸粘膜の損傷が防止されていることが確認された。また、下痢スコアと同様に、調製試料８及び調製試料９はいずれも調製試料７よりも強い効果が確認された。以上の結果から、潰瘍性大腸炎誘発剤と同時に摂取しても、調製試料７、調製試料８、調製試料９の不溶性食物センイ含有物質は有効に症状の改善を促すことが判明した。
〔調製例１０〕（米糠⇒澱粉分解＋ヘミセルラーゼ）
米糠を原料とした。アミラーゼ製剤（新日本化学工業社製スミチームＡＳ）２．０％を５０ｍＭ酢酸緩衝液中（ｐＨ４．５、６５℃）で３時間反応させて、米糠中の澱粉を分解した。澱粉分解後、水中で２００メッシュ（ＡＳＴＭ規格：篩い目開き０．０７５ｍｍ）篩いを用いて篩い分けし、通過しない画分を回収した。次に、ヘミセルラーゼ製剤（新日本化学工業社製スミチームＮＸ）１．０％を５０ｍＭ酢酸緩衝液中（ｐＨ４．５、５０℃）で１晩反応させて、植物組織のアロイロン層を完全に分解した後、再び水中で２００メッシュ（ＡＳＴＭ規格：篩い目開き０．０７５ｍｍ）篩いを用いて篩い分けし、通過しない画分を回収して凍結乾燥に供した後、不溶性食物繊維含有物質を得た。これを調製試料１０とした。この分析値は下記表９に示すとおりである。
〔試験例５〕
調製例１０で得られた不溶性食物繊維含有物質を用いて潰瘍性大腸炎の激しい下痢や大腸粘膜の異常を治療できるかについて実験した。
〔材料及び方法〕
供試動物や潰瘍性大腸炎の発症方法は、試験例１に従った。ただし、試験例５で用いた飼料は下記表１０に示すとおりである。
基本飼料はカゼインを用いてタンパク質を１４．６％、コーン油を用いて脂質を５．０％、ビタミン１．０％、ミネラル３．５％、塩化コリン０．２％を含む。コーンスターチを用いて重量を調整するものとする。
試験群は、以下のように設定した：
比較群９：基本飼料にセルロースを３．０％添加し、潰瘍性大腸炎誘発の為にデキストラン硫酸ナトリウムを３．０％添加した群
比較群１０：基本飼料にＧＢＦ（キリンヤクルトネクストステージ社「発芽大麦食品」）を１０％添加し、タンパク質含量が１４．６％になるようにカゼインで調整し、潰瘍性大腸炎誘発の為にデキストラン硫酸ナトリウムを３．０％添加した群
実験群１０：基本飼料に食物繊維含量が３．０％になるように調製試料１０を添加し、タンパク質含量が１４．６％になるようにカゼインで調整し、潰瘍性大腸炎誘発の為にデキストラン硫酸ナトリウムを３．０％添加した群
〔試験例５の結果〕
結果を図１４〜１７に示す。図１４は、実験群１０及び比較群９、１０の下痢スコアを示す。図１５は、比較群９の大腸粘膜の様子を示す生物の写真である。図１６は、比較群１０の大腸粘膜の様子を示す生物の写真である。図１７は、実験群１０の大腸粘膜の様子を示す生物の写真である。図１４から、比較群１０、実験群１０において下痢スコア改善効果が認められたことから、ＧＢＦ、調製試料１０に下痢スコア改善効果を有していることが確認できた。また、調製試料１０は食物繊維含量が高く、食物繊維含量３．０％になるように飼料を調製しているため、ＧＢＦ含量１０％の半分以下の含量で効果を示すことが判明した。図１５〜１７の大腸粘膜の様子を示した写真からも、比較群１０及び実験群１０において正常な粘膜像が観察された。以上の結果から、潰瘍性大腸炎誘発剤と同時に摂取しても、調製試料１０の不溶性食物繊維含有物質は有効に症状の改善を促すことが判明した。
〔調製例１１〕（米糠⇒澱粉分解＋ヘミセルラーゼ）
再度、調製例１０と同様の処理を行い、不溶性食物繊維含有物質を得た。これを調製試料１１とした。この分析値は下記表１１に示すとおりである。
〔調製例１２〕（米糠⇒澱粉分解＋ヘミセルラーゼ⇒脱脂処理）
米糠を原料とした。アミラーゼ製剤（新日本化学工業社製スミチームＡＳ）２．０％を５０ｍＭ酢酸緩衝液中（ｐＨ４．５、６５℃）で３時間反応させて、米糠中の澱粉を分解した。澱粉分解後、水中で２００メッシュ（ＡＳＴＭ規格：篩い目開き０．０７５ｍｍ）篩いを用いて篩い分けし、通過しない画分を回収した。次に、ヘミセルラーゼ製剤（新日本化学工業社製スミチームＮＸ）１．０％を５０ｍＭ酢酸緩衝液中（ｐＨ４．５、５０℃）で１晩反応させて、植物組織のアロイロン層を完全に分解した後、再び水中で２００メッシュ（ＡＳＴＭ規格：篩い目開き０．０７５ｍｍ）篩いを用いて篩い分けし、通過しない画分を回収した。回収した画分をエタノールにより脱脂処理を行い、凍結乾燥に供した後、不溶性食物繊維含有物質を得た。これを調製試料１２とした。この分析値は下記表１１に示すとおりである。
〔試験例６〕
調製例１１、１２で得られた不溶性食物繊維含有物質を用いて潰瘍性大腸炎の激しい下痢や大腸粘膜の異常を治療できるかについて実験した。
〔材料及び方法〕
供試動物や潰瘍性大腸炎の発症方法は、試験例１に従った。ただし、試験例６で用いた飼料は下記表１２に示すとおりである。
基本飼料はカゼインを用いてタンパク質を１４．６％、コーン油を用いて脂質を５．０％、ビタミン１．０％、ミネラル３．５％、塩化コリン０．２％を含む。コーンスターチを用いて重量を調整するものとする。
試験群は、以下のように設定した：
比較群１１：基本飼料にセルロースを３．０％添加し、潰瘍性大腸炎誘発の為にデキストラン硫酸ナトリウムを３．０％添加した群
比較群１２：基本飼料にＧＢＦ（キリンヤクルトネクストステージ社「発芽大麦食品」）を１０％添加し、タンパク質含量が１４．６％になるようにカゼインで調整し、潰瘍性大腸炎誘発の為にデキストラン硫酸ナトリウムを３．０％添加した群
実験群１１：基本飼料に食物繊維含量が３．０％になるように調製試料１１を添加し、タンパク質含量が１４．６％になるようにカゼインで調整し、潰瘍性大腸炎誘発の為にデキストラン硫酸ナトリウムを３．０％添加した群
実験群１２：基本飼料に食物センイ含量が３．０％になるように調製試料１２を添加し、タンパク質含量が１４．６％になるようにカゼインで調整し、潰瘍性大腸炎誘発の為にデキストラン硫酸ナトリウムを３．０％添加した群
〔試験例６の結果〕
結果を図１８に示す。図１８は、実験群１１、１２及び比較群１１、１２の下痢スコアを示す。実験群１１と実験群１２の両方において下痢スコア改善効果が確認されたことから、エタノールによる脱脂処理を行っても下痢スコア改善効果は失われないことが判明した。
〔調製例１３〕（ふすま⇒澱粉分解＋ヘミセルラーゼ）
ふすまを原料とした。アミラーゼ製剤（新日本化学工業社製スミチームＡＳ）２．０％を５０ｍＭ酢酸緩衝液中（ｐＨ４．５、６５℃）で３時間反応させて、ふすま中の澱粉を分解した。澱粉分解後、水中で２００メッシュ（ＡＳＴＭ規格：篩い目開き０．０７５ｍｍ）篩いを用いて篩い分けし、通過しない画分を回収した。次に、ヘミセルラーゼ製剤（新日本化学工業社製スミチームＮＸ）１．０％を５０ｍＭ酢酸緩衝液中（ｐＨ４．５、５０℃）で１晩反応させて、植物組織のアロイロン層を完全に分解した後、再び水中で２００メッシュ（ＡＳＴＭ規格：篩い目開き０．０７５ｍｍ）篩いを用いて篩い分けし、通過しない画分を回収して凍結乾燥に供した後、不溶性食物繊維含有物質を得た。これを調製試料１３とした。この分析値は下記表１３に示すとおりである。
〔試験例７〕
調製例１３で得られた不溶性食物繊維含有物質を用いて潰瘍性大腸炎の激しい下痢や大腸粘膜の異常を治療できるかについて実験した。
〔材料及び方法〕
供試動物や潰瘍性大腸炎の発症方法は、試験例１に従った。ただし、試験例７で用いた飼料は下記表１４に示すとおりである。
基本飼料はカゼインを用いてタンパク質を１４．６％、コーン油を用いて脂質を５．０％、ビタミン１．０％、ミネラル３．５％、塩化コリン０．２％を含む。コーンスターチを用いて重量を調整するものとする。
試験群は、以下のように設定した：
比較群１３：基本飼料にセルロースを３．０％添加し、潰瘍性大腸炎誘発の為にデキストラン硫酸ナトリウムを３．０％添加した群
比較群１４：基本飼料にＧＢＦ（キリンヤクルトネクストステージ社「発芽大麦食品」）を１０％添加し、タンパク質含量が１４．６％になるようにカゼインで調整し、潰瘍性大腸炎誘発の為にデキストラン硫酸ナトリウムを３．０％添加した群
実験群１３：基本飼料に食物繊維含量が３．０％になるように調製試料１３を添加し、タンパク質含量が１４．６％になるようにカゼインで調整し、潰瘍性大腸炎誘発の為にデキストラン硫酸ナトリウムを３．０％添加した群
〔試験例７の結果〕
結果を図１９に示す。図１９は、実験群１３及び比較群１３、１４の下痢スコアを示す。実験群１３において下痢スコア改善効果が確認されたことから、原料をふすまにした場合でも下痢スコア改善効果有していることが判明した。
なお、上記の試験例で、試験した物質以外にも、本発明の範囲内にある穀類植物の種子由来の物質が同様の効果を奏するであろうことは、当業者に容易に理解されよう。
〔調製例１４〕（米糠⇒澱粉分解＋ヘミセルラーゼ）
米糠を原料とした。アミラーゼ製剤（新日本化学工業社製スミチームＡＳ）２．０％を５０ｍＭ酢酸緩衝液中（ｐＨ４．５、６５℃）で３時間反応させて、米糠中の澱粉を分解した。澱粉分解後、水中で２００メッシュ（ＡＳＴＭ規格：篩い目開き０．０７５ｍｍ）篩いを用いて篩い分けし、通過しない画分を回収した。次に、ヘミセルラーゼ製剤（新日本化学工業社製スミチームＮＸ）１．０％を５０ｍＭ酢酸緩衝液中（ｐＨ４．５、５０℃）で１晩反応させて、植物組織のアロイロン層を完全に分解した後、再び水中で２００メッシュ（ＡＳＴＭ規格：篩い目開き０．０７５ｍｍ）篩いを用いて篩い分けし、通過しない画分を回収して凍結乾燥に供した後、不溶性食物繊維含有物質を得た。これを調製試料１４とした。この分析値は下記表１５に示すとおりである。また、調製試料１４に含まれるアロイロン層部分の走査型電子顕微鏡写真像を図２０に示す。
〔調製例１５〕（米糠⇒ホモジナイズ攪拌による澱粉除去）
米糠を原料として水に懸濁し、特殊機化工業株式会社製（現プライミクス株式会社）攪拌機Ｔ．ｋ．ロボミックスに常温で供した後（１０，０００ＲＰＭ、約２０分）、水中で２００メッシュ（ＡＳＴＭ規格：篩い目開き０．０７５ｍｍ）篩いを用いて篩い分けし、通過しない画分を回収することにより澱粉を除去した。この操作を２回繰り返し、澱粉の除去効率を高めた。また、２回目の操作時には、８０℃加温という殺菌工程を組み入れた。最後に、２００メッシュ（ＡＳＴＭ規格：篩い目開き０．０７５ｍｍ）篩いを用いて篩い分けし、回収した通過しない画分を凍結乾燥に供した後、不溶性食物繊維含有物質を得た。これを調製試料１５とした。この分析値は下記表１５に示すとおりである。また、調製試料１５に含まれるアロイロン層部分の走査型電子顕微鏡写真像を図２１に示す。
〔調製例１６〕（脱脂米糠⇒澱粉分解＋ヘミセルラーゼ）
脱脂米糠（築野食品工業株式会社製）を原料とした。アミラーゼ製剤（新日本化学工業社製スミチームＡＳ）２．０％を５０ｍＭ酢酸緩衝液中（ｐＨ４．５、６５℃）で３時間反応させて、米糠中の澱粉を分解した。澱粉分解後、水中で２００メッシュ（ＡＳＴＭ規格：篩い目開き０．０７５ｍｍ）篩いを用いて篩い分けし、通過しない画分を回収した。次に、ヘミセルラーゼ製剤（新日本化学工業社製スミチームＮＸ）１．０％を５０ｍＭ酢酸緩衝液中（ｐＨ４．５、５０℃）で１晩反応させて、植物組織のアロイロン層を完全に分解した後、再び水中で２００メッシュ（ＡＳＴＭ規格：篩い目開き０．０７５ｍｍ）篩いを用いて篩い分けし、通過しない画分を回収して凍結乾燥に供した後、不溶性食物繊維含有物質を得た。これを調製試料１６とした。この分析値は下記表１５に示すとおりである。
〔試験例８〕
調製例１４、１５、１６で得られた不溶性食物繊維含有物質を用いて潰瘍性大腸炎の激しい下痢や大腸粘膜の異常を治療できるかについて実験した。
〔材料及び方法〕
供試動物や潰瘍性大腸炎の発症方法は、試験例１に従った。ただし試験例８で用いた試料は下記表１６に示すとおりである。 基本飼料はカゼインを用いてタンパク質を１４．６％、コーン油を用いて脂質を５．０％、ビタミン１．０％、ミネラル３．５％、塩化コリン０．２％を含む。コーンスターチを用いて重量を調整するものとする。
試験群は、以下のように設定した：
比較群１５：基本飼料にセルロースを３．０％添加し、潰瘍性大腸炎誘発の為にデキストラン硫酸ナトリウムを３．０％添加した群
実験群１４：基本飼料に食物繊維含量が３．０％になるように調製試料１４を添加し、タンパク質含量が１４．６％になるようにカゼインで調整し、潰瘍性大腸炎誘発の為にデキストラン硫酸ナトリウムを３．０％添加した群
実験群１５：基本飼料に食物繊維含量が３．０％になるように調製試料１５を添加し、タンパク質含量が１４．６％になるようにカゼインで調整し、潰瘍性大腸炎誘発の為にデキストラン硫酸ナトリウムを３．０％添加した群
実験群１６：基本飼料に食物繊維含量が３．０％になるように調製試料１６を添加し、タンパク質含量が１４．６％になるようにカゼインで調整し、潰瘍性大腸炎誘発の為にデキストラン硫酸ナトリウムを３．０％添加した群
〔試験例８の結果〕
結果を図２２に示す。図２２は、実験群１４、１５、１６及び比較群１５の下痢スコアを示す。図２２から、実験群１４、実験群１５および実験群１６において下痢スコア改善効果が認められたことから、調製試料１４、調製試料１５及び調製試料１６に下痢スコア改善効果を有していることが確認できた。また、脱脂米糠を原料にしている調製試料１６は、脂質があらかじめ除去されているため、調製試料１４、調製試料１５に比べて食物繊維含量が高い。さらに、食物繊維含量３．０％になるように飼料を調製すると、実験群１４では調製試料１４を５．１％、実験群１５では調製試料１５を４．８％、実験群１６では調製試料１６を４．２％配合することになり、調製試料１６は最も低用量で効果を示すことが判明した。
実験群１５における調製試料１５は、酵素処理を全く行わずに攪拌処理のみで澱粉除去を行った試料であるが、酵素処理した調製試料１４、調製試料１６と同様に効果を有していることが判明した。
以上の結果から、潰瘍性大腸炎誘発剤と同時に摂取しても、アミラーゼ、ヘミセルラーゼ処理を行わずに澱粉除去のみ行った調製試料１５でも、脱脂米糠を原料にした場合の調製試料１６でも、それぞれの不溶性食物繊維含有物質は有効に症状の改善を促すことが判明した。
〔調製例１７〕（米糠⇒澱粉分解＋ヘミセルラーゼ⇒２００メッシュを通過しない画分）
米糠を原料とした。アミラーゼ製剤（新日本化学工業社製スミチームＡＳ）２．０％を５０ｍＭ酢酸緩衝液中（ｐＨ４．５、６５℃）で３時間反応させて、米糠中の澱粉を分解した。澱粉分解後、水中で２００メッシュ（ＡＳＴＭ規格：篩い目開き０．０７５ｍｍ）篩いを用いて篩い分けし、通過しない画分を回収した。次に、ヘミセルラーゼ製剤（新日本化学工業社製スミチームＮＸ）１．０％を５０ｍＭ酢酸緩衝液中（ｐＨ４．５、５０℃）で１晩反応させて、植物組織のアロイロン層を完全に分解した後、再び水中で２００メッシュ（ＡＳＴＭ規格：篩い目開き０．０７５ｍｍ）篩いを用いて篩い分けし、通過しない画分を回収して凍結乾燥して、不溶性食物繊維含有物質を得た。これを調製試料１７とした。この分析値は下記表１７に示すとおりである。
〔調製例１８〕（米糠⇒澱粉分解＋ヘミセルラーゼ⇒２００〜５００メッシュ画分）
米糠を原料とした。アミラーゼ製剤（新日本化学工業社製スミチームＡＳ）２．０％を５０ｍＭ酢酸緩衝液中（ｐＨ４．５、６５℃）で３時間反応させて、米糠中の澱粉を分解した。澱粉分解後、水中で２００メッシュ（ＡＳＴＭ規格：篩い目開き０．０７５ｍｍ）篩いを用いて篩い分けし、通過しない画分を回収した。次に、ヘミセルラーゼ製剤（新日本化学工業社製スミチームＮＸ）１．０％を５０ｍＭ酢酸緩衝液中（ｐＨ４．５、５０℃）で１晩反応させて、植物組織のアロイロン層を完全に分解した後、再び水中で２００メッシュ（ＡＳＴＭ規格：篩い目開き０．０７５ｍｍ）篩いを用いて篩い分けし、通過する画分を回収してそれをさらに５００メッシュ（ＡＳＴＭ規格：篩い目開き０．０２５ｍｍ）篩を用いて篩分けし、通過しない画分を回収して凍結乾燥して、不溶性食物繊維含有物質を得た。これを調製試料１８とした。この分析値は下記表１７に示すとおりである。
〔試験例９〕
調製例１７で得られた不溶性食物繊維含有物質を用いて潰瘍性大腸炎の激しい下痢や大腸粘膜の異常を治療できるかについて実験した。
〔材料及び方法〕
供試動物や潰瘍性大腸炎の発症方法は、試験例１に従った。ただし試験例９で用いた試料は下記表１８に示すとおりである。
基本飼料はカゼインを用いてタンパク質を１４．６％、コーン油を用いて脂質を５．０％、ビタミン１．０％、ミネラル３．５％、塩化コリン０．２％を含む。コーンスターチを用いて重量を調整するものとする。
試験群は、以下のように設定した：
比較群１６：基本飼料にセルロースを３．０％添加し、潰瘍性大腸炎誘発の為にデキストラン硫酸ナトリウムを３．０％添加した群
実験群１７：基本飼料に食物繊維含量が３．０％になるように調製試料１７を添加し、タンパク質含量が１４．６％になるようにカゼインで調整し、潰瘍性大腸炎誘発の為にデキストラン硫酸ナトリウムを３．０％添加した群
実験群１８：基本飼料に食物繊維含量が３．０％になるように調製試料１８を添加し、タンパク質含量が１４．６％になるようにカゼインで調整し、潰瘍性大腸炎誘発の為にデキストラン硫酸ナトリウムを３．０％添加した群
〔試験例９の結果〕
結果を図２３に示す。図２３は、実験群１７、実験群１８及び比較群１６の下痢スコアを示す。図２３において、実験群１７、実験群１８において下痢スコア改善効果が認められたことから、調製試料１７、調製試料１８に下痢スコア改善効果を有していることが確認できた。しかし、実験群１７と実験群１８との下痢スコア改善効果を比較したところ、実験群１７の方がより高い効果を示すことが判明した。
以上の結果から、粒度は、効果の度合いに影響を及ぼし、２００メッシュを通過できない画分は通過できる画分より効果が高かったことから、粒度が大きいものほど効果を示すと考えた。
〔調製例１９〕（米糠⇒澱粉分解＋ヘミセルラーゼ⇒２００メッシュを通過しない画分）
脱脂米糠（築野食品工業株式会社製）を原料とした。アミラーゼ製剤（新日本化学工業社製スミチームＡＳ）２．０％を５０ｍＭ酢酸緩衝液中（ｐＨ４．５、６５℃）で３時間反応させて、米糠中の澱粉を分解した。澱粉分解後、水中で２００メッシュ（ＡＳＴＭ規格：篩い目開き０．０７５ｍｍ）篩いを用いて篩い分けし、通過しない画分を回収した。次に、ヘミセルラーゼ製剤（新日本化学工業社製スミチームＮＸ）１．０％を５０ｍＭ酢酸緩衝液中（ｐＨ４．５、５０℃）で１晩反応させて、植物組織のアロイロン層を完全に分解した後、再び水中で２００メッシュ（ＡＳＴＭ規格：篩い目開き０．０７５ｍｍ）篩いを用いて篩い分けし、通過しない画分を回収して凍結乾燥に供した後、不溶性食物繊維含有物質を得た。これを調製試料１９とした。この分析値は下記表１９に示すとおりである。
〔調製例２０〕（調製例１９⇒微粉砕⇒５００メッシュを通過画分）
調製例１９において得られた不溶性食物繊維含有物質を微粉砕化（マイクロフーズジャパン株式会社加工）した後に、水に懸濁させ、水中で５００メッシュ（ＡＳＴＭ規格：篩い目開き０．０７５ｍｍ）篩いを用いて篩い分けし、通過する画分を回収後、凍結乾燥して不溶性食物繊維含有物質を得た。これを調製試料２０とした。この分析値は下記表１９に示すとおりである。
〔試験例１０〕
調製例１９、２０で得られた不溶性食物繊維含有物質を用いて潰瘍性大腸炎の激しい下痢や大腸粘膜の異常を治療できるかについて実験した。
〔材料及び方法〕
供試動物や潰瘍性大腸炎の発症方法は、試験例１に従った。ただし試験例１０で用いた試料は下記表２０に示すとおりである。
基本飼料はカゼインを用いてタンパク質を１４．６％、コーン油を用いて脂質を５．０％、ビタミン１．０％、ミネラル３．５％、塩化コリン０．２％を含む。コーンスターチを用いて重量を調整するものとする。
試験群は、以下のように設定した：
比較群１７：基本飼料にセルロースを３．０％添加し、潰瘍性大腸炎誘発の為にデキストラン硫酸ナトリウムを３．０％添加した群
実験群１９：基本飼料に食物繊維含量が３．０％になるように調製試料１９を添加し、タンパク質含量が１４．６％になるようにカゼインで調整し、潰瘍性大腸炎誘発の為にデキストラン硫酸ナトリウムを３．０％添加した群
実験群２０：基本飼料に食物繊維含量が３．０％になるように調製試料２０を添加し、タンパク質含量が１４．６％になるようにカゼインで調整し、潰瘍性大腸炎誘発の為にデキストラン硫酸ナトリウムを３．０％添加した群
〔試験例１０の結果〕
結果を図２４に示す。図２４は、実験群１９、２０及び比較群１７の下痢スコアを示す。図２４から、実験群１９は下痢スコア改善効果が認められたが、一方、５００メッシュを通過した画分である調製試料２０を供した実験群２０において下痢スコア改善効果が認められなかった。
以上の結果から、調製試料のうち５００メッシュを通過した粒度の小さい不溶性食物繊維含有物質には、効果がないことが判明した。
〔調製例２１〕（脱脂米糠⇒澱粉分解＋ヘミセルラーゼ）
脱脂米糠を原料として、アミラーゼ製剤（新日本化学工業社製スミチームＡＳ）１．０％で、乳酸を添加してｐＨを調製後（ｐＨ４．５、６５℃）、３時間反応させて、米糠中の澱粉を分解した。澱粉分解後、水中で２００メッシュ（ＡＳＴＭ規格：篩い目開き０．０７５ｍｍ）篩いを用いて篩い分けし、通過しない画分を回収した。次に、ヘミセルラーゼ製剤（新日本化学工業社製スミチームＮＸ）０．５％で、乳酸を添加してｐＨを調製後（ｐＨ４．５、５０℃）、１晩反応させて、植物組織のアロイロン層を分解した後、水中で２００メッシュ（ＡＳＴＭ規格：篩い目開き０．０７５ｍｍ）篩いを用いて篩い分けし、通過しない画分を回収して凍結乾燥に供した後、不溶性食物繊維含有物質を得た。これを調製試料２１とした。この分析値は下記表２１に示すとおりである。
また、調製試料２１に含まれるアロイロン層部分の走査型電子顕微鏡写真像を図２５に示す。
〔調製例２２〕（脱脂米糠⇒澱粉分解＋ヘミセルラーゼ、酵素量を調製例２１より低減化）
脱脂米糠を原料として、アミラーゼ製剤（新日本化学工業社製スミチームＡＳ）０．５％で、乳酸を添加してｐＨを調製後（ｐＨ４．５、６５℃）、３時間反応させて、米糠中の澱粉を分解した。澱粉分解後、水中で２００メッシュ（ＡＳＴＭ規格：篩い目開き０．０７５ｍｍ）篩いを用いて篩い分けし、通過しない画分を回収した。次に、ヘミセルラーゼ製剤（新日本化学工業社製スミチームＮＸ）０．２％で、乳酸を添加してｐＨを調製後（ｐＨ４．５、５０℃）、１晩反応させて、植物組織のアロイロン層を分解した後、水中で２００メッシュ（ＡＳＴＭ規格：篩い目開き０．０７５ｍｍ）篩いを用いて篩い分けし、通過しない画分を回収して凍結乾燥に供した後、不溶性食物繊維含有物質を得た。
これを調製試料２２とした。この分析値は下記表２１に示すとおりである。また、調製試料２２に含まれるアロイロン層部分の走査型電子顕微鏡写真像を図２６に示す。
〔試験例１１〕
調製試料２１、２２について、潰瘍性大腸炎の激しい下痢や大腸粘膜の異常を治療できるか評価した。
〔材料及び方法〕
供試動物や潰瘍性大腸炎の発症方法は、試験例１に従った。ただし試験例１１で用いた試料は下記表２２に示すとおりである。
基本飼料はカゼインを用いてタンパク質を１４．６％、コーン油を用いて脂質を５．０％、ビタミン１．０％、ミネラル３．５％、塩化コリン０．２％を含む。コーンスターチを用いて重量を調整するものとする。
試験群は、以下のように設定した：
比較群１８：基本飼料にセルロースを３．０％添加し、潰瘍性大腸炎誘発の為にデキストラン硫酸ナトリウムを３．０％添加した群
実験群２１：基本飼料に食物繊維含量が３．０％になるように調製試料２１を添加し、タンパク質含量が１４．６％になるようにカゼインで調整し、潰瘍性大腸炎誘発の為にデキストラン硫酸ナトリウムを３．０％添加した群
実験群２２：基本飼料に調製試料２２を４．０％になるように添加後、食物繊維含量が３．０％になるようにセルロースで調整し、タンパク質含量は、１４．６％になるようにカゼインで調整し、潰瘍性大腸炎誘発の為にデキストラン硫酸ナトリウムを３．０％添加した群
〔試験例１１の結果〕
結果を図２５〜図２７に示す。図２７は、実験群２１、２２及び比較群１８の下痢スコアを示す。図２７から、実験群２１および実験群２２において下痢スコア改善効果が認められたものの、その効果の度合いは、実験群２１の方が実験群２２より高いものであった。図２５、図２６を比較したところ、調製試料２２の方が、アロイロン層の残存度合いが大きいと観察できる。これは、調製試料２２の方が酵素によるアロイロン層の分解量が少なかったためと推察できる。
〔調製例２３〕（調製試料の再ヘミセルラーゼ処理）
再度、調製試料２２をヘミセルラーゼ製剤（新日本化学工業社製スミチームＮＸ）１．０％、乳酸を添加してｐＨを調整後（ｐＨ４．５、５０℃）、１晩反応させ、再び水中で２００メッシュ（ＡＳＴＭ規格：篩い目開き０．０７５ｍｍ）篩いを用いて篩い分けし、通過しない画分を回収して凍結乾燥に供し、不溶性食物繊維含有物質を得た。これを調製試料２３とした。調製試料２３の分析値は下記表２３に示すとおりである。また、調製試料２３に含まれるアロイロン層部分の走査型電子顕微鏡写真像を図２８に示す。
〔試験例１２〕
調製試料２２、２３について潰瘍性大腸炎の激しい下痢や大腸粘膜の異常を治療できるかを評価した。
〔材料及び方法〕
材料および実験方法は、すべて、上記の方法と同様に行った。また、試験例１２で用いた飼料は表２４に示すとおりである。
試験群は、以下のように設定した：
比較群１９：基本飼料にセルロースを３．０％添加し、潰瘍性大腸炎誘発の為にデキストラ
ン硫酸ナトリウムを３．０％添加した群
実験群２２：基本飼料に調製試料２２を４．０％になるように添加後、食物繊維含量が３．０％になるようにセルロースで調整し、タンパク質含量は、１４．６％になるようにカゼインで調整し、潰瘍性大腸炎誘発の為にデキストラン硫酸ナトリウムを３．０％添加した群
実験群２３：基本飼料に食物繊維含量が３．０％になるように調製試料２３を添加し、タンパク質含量が１４．６％になるようにカゼインで調整し、潰瘍性大腸炎誘発の為にデキストラン硫酸ナトリウムを３．０％添加した群
〔試験例１２の結果〕
結果を図２８〜図２９に示す。図２９は、実験群２２、２３及び比較群１９の下痢スコアを示す。図２９から、実験群２２および実験群２３において下痢スコア改善効果が認められたものの、その効果の度合いは、実験群２３の方が実験群２２より高いものであった。図２８から、調製試料２３のアロイロン層は、完全に分解除去されたと観察できる。これにより、調製試料２２の効果が調製試料２３の効果のように上昇したと推察した。
〔試験例１３〕
調製試料２１、２２を、再度、ヘミセルラーゼ製剤（新日本化学工業社製スミチームＮＸ）４．０％で、５０ｍＭ酢酸緩衝液中（ｐＨ４．５、５０℃）で１晩反応させ、再び水中で２００メッシュ（ＡＳＴＭ規格：篩い目開き０．０７５ｍｍ）篩いを用いて篩い分けし、通過しない画分を回収して凍結乾燥に供した後、回収率を算出した。また、ヘミセルラーゼ処理の際にアロイロン層を構成する主だった糖として、アラビノース、キシロースの遊離量も調査した。
〔試験例１３の結果〕
調製試料２１をヘミセルラーゼで再分解した際の回収率は７８％であり、調製試料２２を同様に分解した際の回収率は６９％であった（図３０）。また、各試料を分解した際の遊離のアラビノース、キシロース量を調査した結果、いずれも調製試料２２を分解した場合の方が遊離のアラビノース、キシロースが多いことが判明した（図３１）。アラビノース、キシロースは、アロイロン層を構成する主要な糖であり、ヘミセルラーゼ処理によりこれらの糖が遊離しているということは、ヘミセルラーゼ処理により、アロイロン層が分解されていると推察できる。以上の結果から、調製試料が効果を有するために必要な条件は、当該試験例と同様の条件下でのヘミセルラーゼ処理による再分解により、回収率が約７０％以上であること、好ましくは、約８０％以上であると考えられる。また、この指標をもって、アロイロン層の分解度合いを表現することができる。
本発明の不溶性食物繊維含有物質は、穀類植物、好ましくはイネ科植物の種子由来の不溶性食物繊維を含有することを特徴とする。
本発明に使用することができるイネ科植物として、植物分類表において、イネ科に分類される全ての植物が挙げられる。具体的には米、大麦、小麦、ライ麦、あわ、ひえ、とうもろこし等が例示されるが、これに限定されるものではない。このうち、米、大麦、ライ麦及び小麦などを使用することが好ましい。
本発明の不溶性食物繊維含有物質は、穀類植物、好ましくはイネ科植物の種子を原料にして、澱粉等を除去した澱粉除去画分を酵素処理することにより生じる不溶性画分を回収することにより製造することができる。
具体的には、（ａ）穀類植物の種子を、粉砕することによって、又は搗精により生じる種子外側画分を回収することによって、原料物質を調製するステップ；（ｂ）原料物質を澱粉除去処理して澱粉除去画分を調製するステップ；（ｃ）ステップ（ｂ）で調製した画分をヘミセルラーゼ活性を有する酵素によって酵素処理するステップ；及び（ｄ）酵素処理液から不溶性画分を回収するステップを含む処理により製造することができる。
ステップ（ａ）は、粉砕及び／又は搗精により、穀類植物の種子から本発明の不溶性食物繊維含有物質の原料物質を得るステップである。粉砕は、例えばロールミル、ディスクミル、ハンマーミル等によって行うことができる。また搗精は、穀類植物の種子から果皮、種皮、胚芽等を除去・分離することを意味し、これは例えば、精米機または石臼のように表面を削り取る原理を有している機器によって行うことができる。搗精を行う場合には、この処理により生じる果皮、種皮、胚芽を含む種子外側画分をステップ（ｂ）の原料物質とすることができる。このステップは、穀類植物の種子を粉砕及び／又は搗精の他、種子が穀皮を含むものである場合には脱穀処理を含んでもよい。また使用する穀類植物の種子は発芽又は未発芽のものいずれを用いてもよい。
ステップ（ａ）は、実質的に同等の処理が施されている材料を原料物質として使用する場合には、省略することができる。かかる材料の非限定的な例としては、小麦粉を製造した際に副次的に生成されるふすま、精米後に副次的に生成される米糠などが挙げられる。このような材料の使用は、既に穀類植物種子中の大部分の澱粉が除去されていること、及びステップの簡略化の観点から好ましい。原料物質として米糠を使用する場合には、米糠に脱脂処理を施した後に生じる脱脂米糠を使用することが好ましい。脱脂米糠は、米糠よりも安価な材料であり、香味的にも優れているからである。また等量の米糠を用いる場合に比較して、より多くの不溶性食物繊維含有物質を得ることができるという利点も有する。
ステップ（ｂ）は、ステップ（ａ）で調製した原料物質から澱粉を除去し、澱粉除去画分を調製するステップである。この澱粉除去処理は、原料物質から澱粉を除去できる方法であればどのような方法を用いてもよく、例えば酵素による澱粉分解処理、加熱による糊化と糊化後の篩いによる除去、物理的破壊による澱粉除去処理などにより行うことができる。
澱粉除去処理を酵素による糖化処理により行う場合には、非限定的にアミラーゼ又はグルコアミラーゼを用いることにより行うことができる。本発明に使用することができるアミラーゼ及びグルコアミラーゼとして、これに限定されるものではないが、例えば商品名オリエンターゼ（エイチビィアイ社製）、商品名コクゲン（大和化成社製）、商品名スミチーム（新日本化学工業社製）、商品名ターマミル（ノボザイムズ社製）、商品名グルクザイム（天野エンザイム社製）などの市販の酵素製剤や、トリコデルマ属、テルモミセス属、オウレオバシヂウム属、ストレプトミセス属、アスペルギルス属、クロストリジウム属、バチルス属、テルモトガ属、テルモアスクス属、カルドセラム属、テルモモノスポラ属、フミコーラ属、リゾップス属、ペニシリウム属などの微生物により生産されるアミラーゼ、グルコアミラーゼが挙げられる。本発明で使用する上記酵素は、酵素活性を保持する限り、精製酵素、粗製酵素、固定化酵素などの任意の形態とすることができる。固定化酵素は、ポリマー、多糖類、無機物質などの担体に結合された酵素である。粗製酵素は、例えば酵素含有微生物からの酵素含有抽出物、乾燥物などの処理物を含む。また糖化処理は、一般的には、１０〜９０℃、好ましくは３０〜６０℃の温度、３〜１０、好ましくは５〜７のｐＨで行うが、使用するアミラーゼ、グルコアミラーゼの至適温度又は至適ｐＨ近位の値にて行うことが好ましい。また酵素処理時間は、３０分〜一晩、例えば３時間とすることができる。なお、酵素の添加量は、調製した原料物質の量に応じて当業者が設定することができる。
加熱による糊化は、澱粉を水中に懸濁し加熱することにより、澱粉粒が吸水して次第に膨張して最終的には粒子が崩壊し、溶解する現象を利用することによって行うことができる。その後、糊化した澱粉は篩いにより固液分離することによって除去することができる。
物理的破壊による澱粉除去処理は、例えばホモジナイザー、高速ミキサー、ホモミキサー、ホモジスターラーなどを用いた処理によって行うことができる。これらの物理的破壊による澱粉除去処理によって、澱粉の除去だけでなく、アロイロン層の一部除去を行うこともできる。
穀類植物の種子として発芽形態のものを使用する場合は、アミラーゼ又はグルコアミラーゼを外的に添加することなく、単に加熱することをもって澱粉除去処理を行うことができる。この場合には、発芽種子自身がアミラーゼを産生しているからである。
本発明の製造方法において、実質的にステップ（ａ）〜（ｂ）と同等の処理が施されている材料を澱粉除去画分として以降のステップに使用してもよい。かかる材料の非限定的な例としては、ビールを製造した際に生じる大麦麦芽であるビール仕込み粕を挙げることができる。このような材料の使用は、既に大部分の澱粉が除去されていること、及びステップの簡略化の観点からも好ましい。
ステップ（ｂ）により調製される澱粉除去画分には、アロイロン層、果皮、種皮の主要成分の他、穀皮、胚芽、その他タンパク質、脂質等が含まれていてもよい。麦芽のアロイロン層、果皮、種皮などの植物組織は、Ａｌｅｘａｎｄｅｒ Ｗ．ＭａｃＧｒｅｇｏｒら編集のＢａｒｌｅｙ：Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ｐ４６ Ｆｉｇ．８に示されている。またＪｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｅｒｅａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ ３６（２００２）２６１−２８４において、これらがイネ科植物の種子に共通して存在していることが示されている。
ステップ（ｂ）は、澱粉除去画分の圧扁剥離処理をさらに含むことができる。圧扁剥離処理とは、二つのロールの回転速度が微妙に異なるロールミルの適切な隙間に多層からなる組成物を通すことで、圧扁面に平行した力が加わり層の一部を剥離させる処理を指す。圧扁剥離処理には被処理原料に圧縮力を与える構造の粉砕機であればいかなる物でも使用可能である。例えば、圧扁剥離処理には、回転速度の異なるロールミル以外にも、隙間と回転速度が制御された臼状の圧扁処理装置なども使用することができる。特にロールミルを使用することが望ましい。その際、ロール間の間隙は０．１５〜０．０１ｍｍ、好ましくは０．０８〜０．０２ｍｍであるものとするが、剥離させる多層物に効率的な物理的破砕が施されるサイズを選択する。これにより、澱粉除去画分中に含まれるアロイロン層が露出し、ステップ（ｃ）のヘミセルラーゼ酵素処理によるアロイロン層の除去処理をより効率的なものとすることができる。特に、使用する原料物質、澱粉除去画分によっては、この圧扁剥離処理が、最終的に得られる本発明の不溶性食物繊維含有物質の炎症性腸疾患の改善効果に明らかに影響することがわかっており、そのような原料物質、澱粉除去画分を使用する場合には、ステップ（ｂ）においてこの処理を行うことが好ましい。圧扁剥離処理を行うことが好ましい原料物質、澱粉除去画分としては、例えば小麦ふすま、大麦搗精粕及びビール仕込み粕を挙げることができる。一方、圧扁剥離処理を行わなくても、最終的に得られる本発明の不溶性食物繊維含有物質が効果的な炎症性腸疾患改善効果を示す原料物質としては、例えば米糠、脱脂米糠、小麦麦芽及び大麦麦芽を挙げることができる。また、穀類植物種子として発芽種子を使用する場合にも、かかる圧扁剥離処理を省略できるとの示唆も存在する。
ステップ（ｂ）は、澱粉除去画分の水の存在下での篩い分け処理をさらに含むことができる。この篩い分け処理は、穀皮やその他澱粉除去画分中に大量に含まれる非標的物質を除去し、アロイロン層、果皮及び種皮を主成分とする画分（以下、果皮・種皮画分とも称する）を粗分画することを目的とするものである。この篩い分け処理は、例えば、澱粉除去画分を適切な篩い目のサイズを有するメッシュを通過させ、メッシュ上に残った画分を除去することによって行うことができる。この篩い分け処理にて使用するメッシュの篩い目のサイズは、使用する原料物質、澱粉除去画分に応じて変化する場合があるが、典型的には、ＡＳＴＭ（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｓｏｃｉｅｔｙ ｆｏｒ Ｔｅｓｔｉｎｇ ａｎｄ Ｍａｔｅｒｉａｌｓ）規格篩いの５〜２５メッシュ、例えば１２メッシュ、１６メッシュ、２０メッシュを使用する。この処理は、大量の非標的物質を除去することができるため、以降の操作のハンドリングの観点からも好ましい。
ステップ（ｂ）において、上記圧扁剥離処理と篩い分け処理とを併用することが好ましい。この場合、好ましくは、この処理の組合せを２〜５回繰り返して行う。これにより、アロイロン層、果皮及び種皮を主成分とする画分をより効率的に得ることができるからである。
上記したように、使用する穀類植物種子の種類及びその発芽状態並びに原料物質の種類などに応じて、圧扁剥離処理等の前処理の有無が、最終的に得られる本発明の不溶性食物繊維含有物質の炎症性腸疾患改善効果に影響する場合があることがわかっている。すなわち、上記ステップ（ａ）〜（ｂ）は、ステップ（ｃ）のヘミセルラーゼ酵素処理によるアロイロン層の分解をより効率的に行うための前処理ステップとして規定することができる。したがって、ステップ（ｃ）に供する澱粉除去画分に関し、ステップ（ｃ）の前に、ステップ（ａ）〜（ｂ）による前処理が最適になされているかを確認し、必要に応じて、圧扁剥離処理等の前処理を追加又は反復することが好ましいであろう。その際、例えばステップ（ａ）〜（ｂ）により調製した澱粉除去処理画分中の組織の顕微鏡観察等又はヨウ素澱粉反応を利用した分析により、前処理が最適になされているかを判断することが考えられる。
ステップ（ｃ）は、上記の通り、ステップ（ｂ）で調製した澱粉除去画分又は果皮・種皮画分に含まれるアロイロン層を除去するステップである。このステップは、ヘミセルラーゼ酵素活性を有する酵素による澱粉除去画分又は果皮・種皮画分の酵素処理を含む。このステップで使用することができるヘミセルラーゼ酵素活性を有する酵素として、これに限定されるものではないが、例えばβ−グルコシダーゼ、セルラーゼ、キシロシダーゼ、キシラナーゼ、マンノシダーゼ、マンナナーゼ、アラビノシダーゼ、アラバナーゼ、ペクチナーゼ、グルカナーゼなどを挙げることができる。特にキシラナーゼを含むキシラン分解酵素を使用することが好ましい。具体的に、本発明に使用することができるヘミセルラーゼとして、これに限定されるものではないが、例えば、商品名セルロシン（エイチビィアイ社製）、商品名マルチフェクト７２０（ジェンコア協和社製）、商品名スミチーム（新日本化学工業社製）、商品名ペントパン（ノボザイムズ社製）、商品名ヘミセルラーゼ「アマノ」９０（天野エンザイム社製）などの市販の酵素製剤や、トリコデルマ属、テルモミセス属、オウレオバシヂウム属、ストレプトミセス属、アスペルギルス属、クロストリジウム属、バチルス属、テルモトガ属、テルモアスクス属、カルドセラム属、テルモモノスポラ属、フミコーラ属、リゾップス属、ペニシリウム属などの微生物により生産されるキシラナーゼを挙げることができる。本発明で使用する上記酵素は、酵素活性を保持する限り、精製酵素、粗製酵素、固定化酵素などの任意の形態とすることができる。固定化酵素は、ポリマー、多糖類、無機物質などの担体に結合された酵素である。粗製酵素は、例えば酵素含有微生物からの酵素含有抽出物、乾燥物などの処理物を含む。ヘミセルラーゼ酵素処理は、一般的には、１０〜９０℃、好ましくは３０〜６０℃の温度、３〜１０、好ましくは５〜７のｐＨで行うが、使用するヘミセルラーゼ酵素の至適温度又は至適ｐＨ近位の値にて行うことが好ましい。また酵素処理時間は、３０分〜一晩とすることができる。なお、酵素の添加量は、調製した澱粉除去画分又は果皮・種皮画分の量に応じて当業者が設定することができる。ヘミセルラーゼ酵素処理後、澱粉除去画分又は果皮・種皮画分中のアロイロン層が部分的に又は完全に除去されていることを蛍光顕微鏡又は電子顕微鏡などで視覚的に確認することができる。蛍光顕微鏡での分析法としては、「ＰＬＡＮＴ ＭＩＣＲＯＴＥＣＨＮＩＱＵＥ ＡＮＤ ＭＩＣＲＯＳＣＯＰＹ」ＳＴＥＶＥＮ Ｅ．ＲＵＺＥＮ著 Ｃｈａｐｔｅｒ７（ｐ８７〜１１９）に記載されているような当業者に一般的な方法で確認することができる。また、電子顕微鏡での分析法としても、当業者が一般的に用いる方法で確認することができる。
ステップ（ｃ）の酵素処理において、プロテアーゼ処理を併用することが好ましい。これにより、アロイロン層を分解するために使用するヘミセルラーゼ酵素活性を有する酵素の量を、該酵素を単独で使用するよりも１／５〜１／１０倍量まで減らすことができ、コスト面で有利である。
ステップ（ｃ）は、ヘミセルラーゼ処理後の脱脂処理を含むことが好ましい。これにより、本発明の不溶性食物繊維含有物質の味質を改善及び品質を向上することができる。脱脂の方法は、特に限定されないが、例えばエタノール、アセトン、ヘキサンなどを用いた脱脂処理により行うことができる。これらの技術は当業者に自明である。なお、上記澱粉除去処理に供する原料物質として脱脂米糠を使用する場合には、かかる脱脂処理を行わなくても上記利点が得られる点に留意する。
ステップ（ｄ）は、ステップ（ｃ）の酵素処理液中の不溶性画分を回収するステップである。好ましくは、このステップで５〜２５メッシュのＡＳＴＭ規格篩いを通過するが、５００メッシュのＡＳＴＭ規格の篩いを通過しない不溶性画分が回収される。５００メッシュを通過する粒径分布（粒度）の画分は、後述する本発明の有利な効果を有しないため（〔試験例１０の結果〕参照）、このステップにおいて５００メッシュのＡＳＴＭ規格篩いを通過しない画分を得ることが、より高い効果を得るために特に重要である。具体的に、この篩い分け処理は、２段階方式により行うことができる。即ち、ヘミセルラーゼ処理液を第１のメッシュにて篩い分けし、篩いを通過した画分を第１のメッシュよりも篩い目の細かい第２のメッシュにて篩い分けし、篩い上に残った不溶性食物繊維に富む不溶性画分（すなわち、不溶性食物繊維含有物質）を回収する。この篩い分け処理にて使用する第１のメッシュと第２のメッシュの篩い目のサイズは、上記粒度を有する画分を回収できるような組合せであれば特に制限されない。例えば、第１のメッシュとしてＡＳＴＭ規格篩いの５〜２５メッシュ、例えば１２メッシュ、１６メッシュ、好ましくは２０〜２５メッシュを選択し、第２のメッシュとしてＡＳＴＭ規格篩いの５０〜５００メッシュを選択することができる。この篩い分け処理により、酵素処理液中の目的の画分を得ることができる。
ステップ（ｄ）で回収される不溶性画分は、２００メッシュのＡＳＴＭ規格篩いを通過しない画分であることがさらに好ましい。５００メッシュのＡＳＴＭ規格篩いを通過しない粒度の画分と、２００メッシュのＡＳＴＭ規格篩いを通過しない粒度の画分とでは、２００メッシュを通過しない粒度の画分の方がより高い効果を有することが立証されているからである（〔試験例９の結果〕参照）。
なお、ステップ（ｂ）において、既に果皮・種皮画分を粗分画している場合には、必ずしもステップ（ｄ）を２段階方式にて行う必要はなく、上記第２のメッシュを用いた篩い分け処理により、篩い上に残った画分を回収すればよい。
ステップ（ｄ）で取得した不溶性画分は、通常、凍結乾燥等により乾燥し、好ましくは微粉砕等の更なる加工を施すことなく、本発明の不溶性食物繊維含有物質として使用することができる。
このようにして製造される本発明の不溶性食物繊維含有物質は、ステップ（ｄ）の篩い分け処理に基づき、好ましくは実質的に５〜２５メッシュのＡＳＴＭ規格篩いを通過するが、５００メッシュのＡＳＴＭ規格篩いを通過しない画分からなる。本明細書で使用する「実質的に」とは、上記粒度範囲外の成分がわずかながら混入している不溶性食物繊維含有物質も本発明の範囲に含まれることを意図すべく使用される。したがって、実質的に５〜２５メッシュのＡＳＴＭ規格篩いを通過するが、５００メッシュのＡＳＴＭ規格篩いを通過しない画分からなる本発明の不溶性食物繊維含有物質は、上記粒度の画分を少なくとも９０％以上、好ましくは９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％、最も好ましくは１００％含んでいる。
また本発明の不溶性食物繊維含有物質は、好ましくはタンパク質の含量が２０重量％以下で、不溶性食物繊維の含量が５５重量％以上であるという性質を有する。ここでいうタンパク質の含量とは、ケルダール法を用いて得られた窒素量に、タンパク質換算係数として６．２５を乗じて得た数値から求めたものである。また、食物繊維の含量は、ＡＯＡＣ法に基づいて求めたものである。
また本発明の不溶性食物繊維含有物質に含まれる不溶性食物繊維は、アロイロン層が部分的に又は完全に除去されている。ここでいう「部分的に」とは、不溶性食物繊維のアロイロン層の７０％以上、好ましくは８０％以上、より好ましくは９０％以上、より好ましくは９５％以上、最も好ましくは９９％以上が除去されていることをいう。前記不溶性食物繊維のアロイロン層は完全に除去されていることが好ましい。
不溶性食物繊維のアロイロン層が部分的に又は完全に除去されていることは、上記のように蛍光顕微鏡又は電子顕微鏡などで視覚的に確認することによる他、例えば、本発明の不溶性食物繊維含有物質をヘミセルラーゼ酵素処理に供し、当該処理後の回収率を評価することによって確認することができる。本発明の不溶性食物繊維含有物質は上記の通りアロイロン層の大部分が除去されている画分であるため、再度のヘミセルラーゼ酵素処理に供しても当該処理後の回収率が非常に高いものである。具体的に、本発明の不溶性食物繊維含有物質は、５０ｍＭ酢酸緩衝液中（ｐＨ４．５、５０℃）４．０％ヘミセルラーゼ製剤（新日本化学工業社製スミチームＮＸ）で一晩の再度のヘミセルラーゼ酵素処理に供した際に、少なくとも約７０％以上、好ましくは少なくとも約８０％以上の回収率を有することによって特徴付けることができる。なお、ここでいう「回収率」とは、取得された不溶性食物繊維含有物質の重量を１００％として、これに再度酵素処理（４．０％ヘミセルラーゼ、ｐＨ４．５、５０℃、一晩）を行った後に、凍結乾燥により得られた物質重量の相対的な値をいう。
本発明の不溶性食物繊維含有物質が有するその他の特徴として、膨潤能を挙げることができる。ここで膨潤能とは、不溶性食物繊維含有物質内（植物組織の間）に水分子を取り込み、粒子が膨らんで大きくなる特性をいう。本発明の不溶性食物繊維含有物質が膨潤能を有することは、例えば、不溶性食物繊維含有物質を一定量メスシリンダーに計り取り、それに一定量の水を入れて一定時間置き、メスシリンダーの目盛りにより膨らみを定量することによって確認することができる。本発明の不溶性食物繊維含有物質の膨潤能は、１ｇ当たり２０ｍｌ〜３５ｍｌの容積にまで膨らむことで特徴付けることができる。
以下、澱粉除去画分としてビール仕込み粕を、原料物質として小麦ふすま、米糠を使用した場合の本発明の不溶性食物繊維含有物質の製造について具体的に説明する。
本発明の不溶性食物繊維含有物質の製造は、上記の通り、ビールを製造した際に生じる大麦麦芽であるビール仕込み粕、小麦粉を製造した際に副次的に生成されるふすま、精米後に副次的に生成される米糠など利用することが経済的に好ましい。
本発明の不溶性食物繊維含有物質の製造にビール仕込み粕を使用する場合、本発明の不溶性食物繊維含有物質を得る具体的な方法の例として、特公平４−３１６６６号公報に記載された方法を用いることができる。すなわち、湿体状態にあるビール仕込み粕を圧扁粉砕処理し、得られた圧扁粉砕処理物を水の存在下において、篩い分け処理にて果皮・種皮及びアロイロン層を大量に含む画分を調製し、それをヘミセルラーゼにて処理すればよい。
より具体的には、大麦特有の穀皮を除去するために、湿体状態のビール仕込み粕を圧扁剥離処理する。ビール仕込み粕の圧扁剥離処理には被処理原料に圧縮力を与える構造の粉砕機であればいかなる物でも使用可能であるが、特にロールミルの使用が望ましい。ロール間の間隙は０．１５〜０．０１ｍｍ、好ましくは０．０８〜０．０２ｍｍであるものとするが、剥離させる多層物が効率的に物理的破砕が行われるサイズを選択する。ビール仕込み粕を圧扁剥離処理する際に、ビール仕込み粕中の水分を６５％以上に調整することが望ましい。次に、得られた圧扁剥離処理物を水の存在下において篩い分け処理する。この篩い分け処理により、穀皮画分が篩い上に残り、アロイロン層に富む果皮・種皮画分が篩いを通過する。篩い目の寸法はＡＳＴＭ規格篩いの５〜２０メッシュ、好ましくは１６〜２０メッシュとする。以上の作業により、大麦特有の穀皮を多量に含む画分を除去することができる。また、果皮・種皮画分を効率よく得るためには、更に、先の篩いより目の細かい篩いを用いて篩い分けを行う。その際に、果皮・種皮画分は篩いの上に残り、果皮・種皮画分を調製することができる。後者の篩い目の寸法は、ＡＳＴＭ規格篩いの５０〜２００メッシュとする。前記の圧扁剥離処理とこの篩い分け処理とを２〜５回繰り返して行うのが好ましい。上記のようにして得られた果皮・種皮画分にヘミセルラーゼ処理を行い、再度ＡＳＴＭ規格篩いの５０〜２００メッシュにて篩い分けし、ヘミセルラーゼによる分解物を除去し、篩いの上に残った不溶性画分が、目的の不溶性食物繊維含有物質である。こうして取得した不溶性食物繊維含有物質は、通常、乾燥させてから用いる。乾燥方法は特に限定されないが具体例としては、凍結乾燥による方法などが挙げられる。
本発明の不溶性食物繊維含有物質の製造に小麦ふすまを使用する場合、まず澱粉を除去するために、乾燥状態の小麦ふすまをアミラーゼ又はグルコアミラーゼを含んだ溶液に懸濁することにより、澱粉を分解させる処理を施す。長時間（例えば３０分〜一晩）アミラーゼ反応を施した後、ヘミセルラーゼ酵素処理の効率化のために、例えばロールミルによる圧扁剥離処理を行う。ロール間の間隙は、０．１５〜０．０１ｍｍ、好ましくは０．０８〜０．０２ｍｍであるものとするが、剥離させる多層物が効率的に物理的破砕が行われるサイズを選択する。次に、篩い目がＡＳＴＭ規格篩いの５０〜２００メッシュ、好ましくは２００メッシュにて篩い分けし、アミラーゼによる分解物を除去し、篩いの上に残った果皮・種皮画分を回収する。次に、本画分をヘミセルラーゼを含んだ溶液に懸濁し、長時間（例えば３０分〜一晩）反応後、同様に、篩い目がＡＳＴＭ規格篩いの５０〜２００メッシュ、好ましくは２００メッシュにて篩い分けし、ヘミセルラーゼによる分解物を除去し、篩いの上に残った不溶性画分を回収することにより、本発明の不溶性食物繊維含有物質を得ることができる。こうして取得した不溶性食物繊維含有物質は、通常、乾燥させてから用いられる。乾燥方法は特に限定されないが具体例としては、凍結乾燥による方法などが挙げられる。
本発明の不溶性食物繊維含有物質の製造に米糠を使用する場合、まず澱粉を除去するために、乾燥状態の米糠をアミラーゼ又はグルコアミラーゼを含んだ溶液に懸濁することにより、澱粉を分解させる処理を施す。長時間（例えば３０分〜一晩）アミラーゼ反応を施した後に、篩い目がＡＳＴＭ規格篩いの５０〜２００メッシュ、好ましくは２００メッシュにて篩い分けし、アミラーゼによる分解物を除去し、篩いの上に残った果皮・種皮画分を回収する。次に、本画分をヘミセルラーゼを含んだ溶液に懸濁し、長時間（例えば３０分〜一晩）反応後、同様に、篩い目がＡＳＴＭ規格篩いの５０〜２００メッシュ、好ましくは２００メッシュにて篩い分けし、ヘミセルラーゼによる分解物を除去し、篩いの上に残った画分を回収することにより本発明の不溶性食物繊維含有物質を得ることができる。この不溶性食物含有物質は、通常、乾燥させてから用いられる。乾燥方法は特に限定されないが、凍結乾燥による方法などが挙げられる。
以上、本発明の不溶性食物繊維含有物質及びその製造方法を説明してきたが、本発明の不溶性食物繊維含有物質の製造方法は上記方法に限定されるものではない。すなわち、穀類植物の種子から、以下の特徴（ｉ）〜（ｉｖ）を有する不溶性食物繊維含有物質を製造することができるものであれば、他の製造方法を採用してもよい：（ｉ）実質的に、５〜２５メッシュのＡＳＴＭ規格篩いを通過するが、５００メッシュのＡＳＴＭ規格篩いを通過しない粒度の画分からなり；（ｉｉ）タンパク質含量が２０重量％以下であり、かつ食物繊維含量が５５重量％以上であり；（ｉｉｉ）不溶性食物繊維のアロイロン層が部分的に又は完全に除去されており；かつ（ｉｖ）潰瘍性大腸炎の予防及び／又は改善効果を有する。なお、潰瘍性大腸炎の予防及び／又は改善効果については後述する。
上記特徴を有する本発明の不溶性食物繊維含有物質の代替的な製造方法の例として、以下のステップ：（ａ１）穀類植物の種子を、粉砕することによって、又は搗精することにより生じる種子外側画分を回収することによって、原料物質を調製するステップ；（ｂ１）原料物質を物理的破壊によって澱粉除去処理して澱粉除去画分を調製するステップ；（ｃ１）ステップ（ｂ１）で調製した画分から５〜２５メッシュのＡＳＴＭ規格篩いを通過するが、５００メッシュのＡＳＴＭ規格篩いを通過しない不溶性画分を回収するステップを含む方法が挙げられる。
この方法は、物理的破壊を含む澱粉除去処理に供する点、及びヘミセルラーゼ活性を有する酵素による酵素処理ステップを含まない点を除き、上記方法と同様にして行うことができる。
この方法において、物理的破壊による澱粉除去処理は、例えばホモジナイザー、高速ミキサー、ホモミキサー、ホモジスターラーなどを用いた処理によって行うことができる。これにより澱粉除去処理に併せてアロイロン層の除去を行うことができる。
上記澱粉除去処理は、上記方法のステップ（ｂ）で説明した篩い分け処理を併用して複数回、例えば２〜５回実施することが好ましい。これにより澱粉除去処理とこれに伴うアロイロン層の除去をより効率的に行うことができる。
上記澱粉除去処理は、物理的破壊以外の他の澱粉除去処理、例えば酵素による澱粉分解処理、加熱による糊化、糊化後の篩いによる除去を併用してもよい。
上記のようにして製造した本発明の不溶性食物繊維含有物質は、炎症性腸疾患、例えば潰瘍性大腸炎の治療、改善又は予防効果を有する。本明細書で使用する「潰瘍性大腸炎の治療」又は「潰瘍性大腸炎を治療する」という用語は、本発明の不溶性食物繊維含有物質の服用又は投与により、下痢状態のスコアを０〜１まで回復させること、又は大腸組織学的スコアを０〜１まで回復させること、の１つ以上を指す。本明細書で使用する「潰瘍性大腸炎の改善」又は「潰瘍性大腸炎を改善する」という用語は、本発明の不溶性食物繊維含有物質の服用又は投与により、下痢状態のスコアの低減、又は大腸組織学的スコアの低減、の１つ以上を指す。本明細書で使用する「潰瘍性大腸炎の予防」又は「潰瘍性大腸炎を予防する」という用語は、本発明の不溶性食物繊維含有物質の服用又は投与により、下痢状態のスコアを０〜１に維持すること、又は大腸組織学的スコアを０〜１に維持すること、の１つ以上を指す。なお、下痢状態のスコア及び大腸組織学的スコアについては下記の実施例にて定義される。
したがって、本発明の不溶性食物繊維含有物質を経口摂取することで、炎症性腸疾患（例えば潰瘍性大腸炎）に由来する激しい下痢を解消し、腸管における炎症を改善することができる。また、日常的に摂取することにより炎症性腸疾患に罹ることを予防することができる。この目的のために、本発明の不溶性食物繊維含有物質を１日あたり、１ｇ以上、好ましくは５ｇ以上摂取することが望ましい。本発明の不溶性食物繊維含有物質は、穀類植物の種子から食品用酵素により処理して得られた成分であるので、日常の食生活に取り入れることができる。また、投与ないしは摂取の時期は、食前、食間及び食後のいずれの時期でもよい。
本発明の不溶性食物繊維含有物質は、特定の組成物、例えば飲食品又は医薬品に配合して提供することができる。
本発明の不溶性食物繊維含有物質を飲食品に配合して提供する場合、あらゆる食品形態に加工することが可能である。本発明の不溶性食物繊維含有物質を配合することのできる飲食品としては、天然物及びその加工品を含む飲食物等を挙げることができる。またその配合量は、飲食品１０ｇに対し、本発明の不溶性食物繊維含有物質を１ｇ以上配合することができる。
飲食品の例としては、これに限定されるものではないが、錠剤形、粉末状、顆粒状、カプセル状、ゼリー状等の機能性食品、パン類、菓子類、クッキー、ビスケット等の穀類加工品、牛乳、ヨーグルト、アイスクリーム等の乳製品類、炭酸飲料、清涼飲料、果汁入り飲料、薬系ドリンク等の飲料、惣菜や加工食品等が挙げられる。
本発明の不溶性食物繊維含有物質を医薬品に配合して提供する場合には、潰瘍性大腸炎の治療、改善又は予防用の医薬として製剤化することができる。製剤の投与形態は特に限定されないが、例えば投与経路として、経口投与、経腸投与等を挙げることができる。経口投与又は経腸投与の場合、本発明の不溶性食物繊維含有物質をそのまま投与してもよいが、医薬的に許容できる賦形剤とともに、液剤、懸濁剤、散剤、顆粒剤、錠剤、カプセル剤などの形態で投与してもよい。
医薬的に許容できる賦形剤としては、これに限定されるものではないが、乳糖、ショ糖、ブドウ糖などの糖類、デンプン、炭酸カルシウム、硫酸カルシウム等の無機物、結晶セルロース、蒸留水、精製水、ゴマ油、ダイズ油、トウモロコシ油、オリーブ油、綿実油等の一般に使用されているものを例示することができる。また賦形剤の他、結合剤、滑沢剤、分散剤、懸濁剤、乳化剤、希釈剤、緩衝剤、抗酸化剤、細菌抑制剤などの添加剤を使用することができる。他の医薬品と混合、或いは併用することも可能である。なお、上記の製剤は殺菌処理を行なってもよい。
本発明の医薬を適用する対象は特に限定されず、健常者、潰瘍性大腸炎の患者、潰瘍性大腸炎の治療中の患者、潰瘍性大腸炎の予防を検討している健常者等のいずれであってもよい。またその対象はヒトに限らず、ヒト以外の動物に適用してもよい。
本発明の医薬品の投与量は、被験者の年齢、体重、性別、肥満の程度など、様々な要因に応じて変化するが、典型的には、本発明の不溶性食物含有物質を１日あたり、１ｇ以上、好ましくは５ｇ以上投与する量とし、投与間隔は特に制限されない。
本発明の不溶性食物繊維含有物質は、効率的に炎症性腸疾患を改善することができ、かつ、穀類植物の種子から食品用酵素により処理して得られた成分であるので、安全性が高く、飲食品又は医薬における使用に有用である。これに関連し、本発明の不溶性食物繊維含有物質は、食物繊維含量が高いため、比較的少量で炎症性腸疾患の改善効果を得ることができるという利点を有する。
さらに、本発明の不溶性食物繊維含有物質は、米糠や小麦ふすまといった、比較的安価な原料から製造することが可能であるため、コスト面にも優れている。
飲食品又は医薬品組成物に、本発明の不溶性食物繊維含有物質が含まれている場合は、以下の方法で検出することができる。すなわち、最初に飲食品又は医薬品組成物を水に懸濁した後、水中で２００メッシュ（ＡＳＴＭ規格：篩い目開き０．０７５ｍｍ）篩いを用いて篩い分けし、不溶性画分を回収する。そして、ナイルブルー又はその他の疎水性物質の染色等に適した染色試薬で前記不溶性画分を染色し、蛍光顕微鏡などで観察することにより、本発明の不溶性食物繊維含有物質を検出することができる。その際、本発明の不溶性食物繊維含有物質は、染色される層と染色されない層が重なっているという特徴により、他の不溶性組成物と区別することができる。染色に適したその他の試薬としては、ズダン ＩＩＩ、ズダンブラック、オイルレッド、フルオロルイエロー０８８などが挙げられる。
以下の実施例により、本発明をさらに具体的に説明する。但し、本発明の範囲はこれらの実施例により限定されるものではない。実施例中、特にことわらない限り、％表示は重量基準によるものとする。また、分析により求める各成分値について、粗タンパク質はケルダール法を（窒素のタンパク質換算係数は６．２５とした。）用いて、粗脂肪はジエチルエーテルを抽出溶媒としたソックスレー抽出法を用いて測定した。食物繊維の含量は、ＡＯＡＣ法に基づいて求めた。
〔調製例１〕（ビール仕込み粕⇒ロールミル）
湿体状態のビール仕込み粕（水分：７７．６重量％）をロールミル（ロール回転数：１００ｒｐｍ、ロール間隙：０．０８ｍｍ）で圧扁剥離処理後、水中で１６メッシュ篩い（ＡＳＴＭ規格：篩い目開き１．１８ｍｍ）を用いて篩い分けし、通過画分をさらに５０メッシュ（ＡＳＴＭ規格：篩い目開き０．３００ｍｍ）篩いを用いて篩い分けし、通過しない画分を回収して凍結乾燥に供した後、不溶性食物繊維含有物質を得た。これを調製試料１とした。この分析値は下記表１に示すとおりである。また、調製試料１に含まれるアロイロン層部分の走査型電子顕微鏡写真像を図１に示す。
〔調製例２〕（ビール仕込み粕⇒ロールミル＋ヘミセルラーゼ）
湿体状態のビール仕込み粕（水分：７７．６重量％）をロールミル（ロール回転数：１００ｒｐｍ、ロール間隙：０．０８ｍｍ）で圧扁剥離処理後、水中で１６メッシュ篩い（ＡＳＴＭ規格：篩い目開き１．１８ｍｍ）を用いて篩い分けし、通過画分をさらに５０メッシュ（ＡＳＴＭ規格：篩い目開き０．３００ｍｍ）篩いを用いて篩い分けし、通過しない画分を回収した。回収した画分にヘミセルラーゼ製剤（新日本化学工業社製スミチームＮＸ）１．０％を５０ｍＭ酢酸緩衝液中（ｐＨ４．５、５０℃）で１晩反応させて、植物組織のアロイロン層を完全に分解した後、水中で２００メッシュ（篩い目開き：０．０７５ｍｍ）篩いを用いて篩い分けし、通過しない画分を回収して凍結乾燥に供した後、不溶性食物繊維含有物質を得た。これを調製試料２とした。この分析値は下記表１に示すとおりである。また、調製試料２に含まれるアロイロン層部分の走査型電子顕微鏡写真像を図２に示す。
調製例１、２で得られた不溶性食物繊維含有物質を用いて潰瘍性大腸炎の激しい下痢や大腸粘膜の異常を治療できるかについて実験した。
〔材料及び方法〕
供試動物として、ＳＤ系雄ラット（５週令、１００ｇ前後）を１週間固形飼料（ＣＥ−２、日本クレア製）で予備飼育して実験環境に馴化したものを各群７匹ずつに区分けして使用した。試験例１で用いた飼料は下記表２に示すとおりである。
潰瘍性大腸炎はデキストラン硫酸ナトリウムを飼料に混合して与えることで実験的に発症させた。なお、この方法は金内らの方法に従った（Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ ３３、１７９−１８８、１９９８）。不溶性食物繊維含有物質も飼料に混合して与えるものとし、自由摂取とした。５日間飼育後、糞便及び肛門の様子を観察し、下痢の様子をスコア化して評価した。その後、大腸を摘出し、一部を１０％ホルマリン緩衝液で固定化後、粘膜の切片を作製し、粘膜像の観察を行い、組織学的スコア化を行った。
下痢の様子のスコア化とは、下痢の様子のスコア化とは、以下のように糞便やラットの状態に応じて設定したスコアに基づき、各ラットの下痢状態のスコアづけ行い、平均値を算出した。
スコア０：正常
スコア１：やや柔らかい
スコア２：かなり柔らかい
スコア３：採糞がほぼ不可能
スコア４：下痢だけでなく肛門に若干爛れがある
スコア５：肛門の爛れがかなりひどい下痢
粘膜像の観察による組織学的スコア化とは、金内らの報告に従い（Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ １４、８８０−８８８、１９９９）、以下に設定したスコアに基づいて、肛門側から観察して大腸下部の代表的な部位のスコアづけを行い、平均値を算出した。
スコア０：正常な陰窩
スコア１：陰窩の拡張
スコア２：３分の１の基底部陰窩の欠落
スコア３：３分の２の基底部陰窩の欠落
スコア４：基底部陰窩は全て欠落しているが上皮組織は正常
スコア５：全ての陰窩と上皮組織の欠落
基本飼料はカゼインを用いてタンパク質を１４．６％、コーン油を用いて脂質を５．０％、ビタミン１．０％、ミネラル３．５％、塩化コリン０．２％を含む。コーンスターチを用いて重量を調整するものとする。
比較群１：基本飼料にセルロースを３．０％添加し、潰瘍性大腸炎誘発の為にデキストラン硫酸ナトリウムを３．０％添加した群
比較群２：基本飼料にＧＢＦ（キリンヤクルトネクストステージ社「発芽大麦食品」）を１０％添加し、タンパク質含量が１４．６％になるようにカゼインで調整し、潰瘍性大腸炎誘発の為にデキストラン硫酸ナトリウムを３．０％添加した群
実験群１：基本飼料に食物繊維含量が３．０％になるように調製試料１を添加し、タンパク質含量が１４．６％になるようにカゼインで調整し、潰瘍性大腸炎誘発の為にデキストラン硫酸ナトリウムを３．０％添加した群
実験群２：基本飼料に食物繊維含量が３．０％になるように調製試料２を添加し、タンパク質含量が１４．６％になるようにカゼインで調整し、潰瘍性大腸炎誘発の為にデキストラン硫酸ナトリウムを３．０％添加した群
〔試験例１の結果〕
結果を図３〜図４に示す。図３は、実験群１、２及び比較群１、２の下痢スコアを示す。図４は、実験群１、２及び比較群１、２の組織学的スコアを示す。図３から、比較群２、実験群１及び実験群２において下痢スコア改善効果が認められたことから、ＧＢＦ、調製試料１及び調製試料２に下痢スコア改善効果を有していることが確認できた。また、調製試料１、調製試料２は食物繊維含量が高く、食物繊維含量３．０％になるように飼料を調製しているため、ＧＢＦ含量１０％の半分以下の含量で効果を示すことが判明した。実験群１、実験群２を比較した場合に、ヘミセルラーゼによりアロイロン層を分解除去した調製試料２は更に強い効果を有しており、図４の組織学的スコアからも大腸粘膜の損傷が防止されていることが確認された。以上の結果から、潰瘍性大腸炎誘発剤と同時に摂取しても、調製試料１、調製試料２の不溶性食物繊維含有物質は有効に症状の改善を促すことが判明した。
〔調製例３〕（裸麦芽⇒澱粉分解）
発芽した裸大麦（裸麦芽）を原料とした。佐竹製作所製の醸造用テスト精米機ＴＤＢ２Ａ（使用回転数５００ｒｐｍ）により穀皮を除去した後に、それをディスクミルにより粉砕した。その後、加水して６５℃で３時間保持して、裸麦芽の持つアミラーゼを利用して澱粉を分解した。澱粉分解後、水中で１２メッシュ篩い（ＡＳＴＭ規格：篩い目開き１．６８ｍｍ）を用いて篩い分けし、通過画分をさらに２００メッシュ（ＡＳＴＭ規格：篩い目開き０．０７５ｍｍ）篩いを用いて篩い分けし、通過しない画分を回収して凍結乾燥に供した後、不溶性食物繊維含有物質を得た。これを調製試料３とした。この分析値は下記表３に示すとおりである。また、調製試料３に含まれるアロイロン層部分の走査型電子顕微鏡写真像を図５に示す。ちなみにアミラーゼを６５℃で作用させず冷水で澱粉のみを除去した場合のアロイロン層は、図６のような状態となる。
〔調製例４〕（裸麦芽⇒澱粉分解＋ロールミル＋ヘミセルラーゼ）
発芽した裸大麦（裸麦芽）を原料とした。佐竹製作所製の醸造用テスト精米機ＴＤＢ２Ａ（使用回転数５００ｒｐｍ）により穀皮を除去した後に、それをディスクミルにより粉砕した。その後、加水して６５℃で３時間保持して、裸麦芽の持つアミラーゼを利用して澱粉を分解した。澱粉分解後、水中で１２メッシュ篩い（ＡＳＴＭ規格：篩い目開き１．６８ｍｍ）を用いて篩い分けし、通過画分をさらに２００メッシュ（ＡＳＴＭ規格：篩い目開き０．０７５ｍｍ）篩いを用いて篩い分けし、通過しない画分を回収した。次に、回収した画分を湿体状態でロールミル（ロール回転数：１００ｒｐｍ、ロール間隙：０．０８ｍｍ）で圧扁剥離処理後、水中で２００メッシュ（ＡＳＴＭ規格：篩い目開き０．０７５ｍｍ）篩いを用いて篩い分けし、通過しない画分を回収し、ヘミセルラーゼ製剤（新日本化学工業社製スミチームＮＸ）１．０％を５０ｍＭ酢酸緩衝液中（ｐＨ４．５、５０℃）で１晩反応させて、植物組織のアロイロン層を完全に分解した。再度、水中で２００メッシュ（ＡＳＴＭ規格：篩い目開き０．０７５ｍｍ）篩いを用いて篩い分けし、通過しない画分を回収して凍結乾燥に供した後、不溶性食物繊維含有物質を得た。これを調製試料４とした。この分析値は下記表３に示すとおりである。また、調製試料４に含まれるアロイロン層部分の走査型電子顕微鏡写真像を図７に示す。
調製例３、４で得られた不溶性食物繊維含有物質を用いて潰瘍性大腸炎の激しい下痢や大腸粘膜の異常を治療できるかについて実験した。
〔材料及び方法〕
供試動物や潰瘍性大腸炎の発症方法は、試験例１に従った。ただし、試験例２で用いた飼料は下記表４に示すとおりである。
基本飼料はカゼインを用いてタンパク質を１４．６％、コーン油を用いて脂質を５．０％、ビタミン１．０％、ミネラル３．５％、塩化コリン０．２％を含む。コーンスターチを用いて重量を調整するものとする。
比較群３：基本飼料にセルロースを３．０％添加し、潰瘍性大腸炎誘発の為にデキストラン硫酸ナトリウムを３．０％添加した群
比較群４：基本飼料にＧＢＦ（キリンヤクルトネクストステージ社「発芽大麦食品」）を１０％添加し、タンパク質含量が１４．６％になるようにカゼインで調整し、潰瘍性大腸炎誘発の為にデキストラン硫酸ナトリウムを３．０％添加した群
実験群３：基本飼料に食物繊維含量が３．０％になるように調製試料３を添加し、タンパク質含量が１４．６％になるようにカゼインで調整し、潰瘍性大腸炎誘発の為にデキストラン硫酸ナトリウムを３．０％添加した群
実験群４：基本飼料に食物繊維含量が３．０％になるように調製試料４を添加し、タンパク質含量が１４．６％になるようにカゼインで調整し、潰瘍性大腸炎誘発の為にデキストラン硫酸ナトリウムを３．０％添加した群
〔試験例２の結果〕
結果を図８に示す。図８は、実験群３、４及び比較群３、４の下痢スコアを示す。図８から、比較群４、実験群３及び実験群４において下痢スコア改善効果が認められたことから、ＧＢＦ、調製試料３及び調製試料４に下痢スコア改善効果を有していることが確認できた。また、調製試料３、調製試料４は食物繊維含量が高く、食物繊維含量３．０％になるように飼料を調製しているため、ＧＢＦ含量１０％の半分以下の含量で効果を示すことが判明した。実験群３、実験群４を比較した場合に、ロールミル処理後にヘミセルラーゼ処理を行い、アロイロン層を分解除去した調製試料４は更に強い下痢スコア改善効果を有していることが確認された。以上の結果から、潰瘍性大腸炎誘発剤と同時に摂取しても、調製試料３、調製試料４の不溶性食物繊維含有物質は有効に症状の改善を促すことが判明した。
〔調製例５〕（裸大麦⇒澱粉分解）
未発芽の裸大麦（裸大麦）を原料とした。佐竹製作所製の醸造用テスト精米機ＴＤＢ２Ａ（使用回転数８００ｒｐｍ）により穀皮を除去した後に、それをディスクミルにより粉砕した。その後、アミラーゼ製剤（新日本化学工業社製スミチームＡＳ）２．０％を５０ｍＭ酢酸緩衝液中（ｐＨ４．５、６５℃）で３時間反応させて、裸大麦中の澱粉を分解した。澱粉分解後、水中で１２メッシュ篩い（ＡＳＴＭ規格：篩い目開き１．６８ｍｍ）を用いて篩い分けし、通過画分をさらに２００メッシュ（ＡＳＴＭ規格：篩い目開き０．０７５ｍｍ）篩いを用いて篩い分けし、通過しない画分を回収して凍結乾燥に供した後、不溶性食物繊維含有物質を得た。これを調製試料５とした。この分析値は下記表５に示すとおりである。また、調製試料５に含まれるアロイロン層部分の走査型電子顕微鏡写真像を図９に示す。
〔調製例６〕（裸大麦⇒澱粉分解＋ロールミル＋ヘミセルラーゼ）
未発芽の裸大麦（裸大麦）を原料とした。佐竹製作所製の醸造用テスト精米機ＴＤＢ２Ａ（使用回転数８００ｒｐｍ）により穀皮を除去した後に、それをディスクミルにより粉砕した。その後、アミラーゼ製剤（新日本化学工業社製スミチームＡＳ）２．０％を５０ｍＭ酢酸緩衝液中（ｐＨ４．５、６５℃）で３時間反応させて、裸大麦中の澱粉を分解した。澱粉分解後、水中で１２メッシュ篩い（ＡＳＴＭ規格：篩い目開き１．６８ｍｍ）を用いて篩い分けし、通過画分をさらに２００メッシュ（ＡＳＴＭ規格：篩い目開き０．０７５ｍｍ）篩いを用いて篩い分けし、通過しない画分を回収した。回収した画分を湿体状態でロールミル（ロール回転数：１００ｒｐｍ、ロール間隙：０．０８ｍｍ）で圧扁剥離処理後、水中で２００メッシュ（ＡＳＴＭ規格：篩い目開き０．０７５ｍｍ）篩いを用いて篩い分けし、通過しない画分を回収した。次に、回収した画分にヘミセルラーゼ製剤（新日本化学工業社製スミチームＮＸ）１．０％を５０ｍＭ酢酸緩衝液中（ｐＨ４．５、５０℃）で１晩反応させて、植物組織のアロイロン層を完全に分解した。再度、水中で２００メッシュ（ＡＳＴＭ規格：篩い目開き０．０７５ｍｍ）篩いを用いて篩い分けし、通過しない画分を回収して凍結乾燥に供した後、不溶性食物繊維含有物質を得た。これを調製試料６とした。この分析値は下記表５に示すとおりである。また、調製試料６に含まれるアロイロン層部分の走査型電子顕微鏡写真像を図１０に示す。
調製例５、６で得られた不溶性食物繊維含有物質を用いて潰瘍性大腸炎の激しい下痢や大腸粘膜の異常を治療できるかについて実験した。
〔材料及び方法〕
供試動物や潰瘍性大腸炎の発症方法は、試験例１に従った。ただし、試験例３で用いた飼料は下記表６に示すとおりである。
基本飼料はカゼインを用いてタンパク質を１４．６％、コーン油を用いて脂質を５．０％、ビタミン１．０％、ミネラル３．５％、塩化コリン０．２％を含む。コーンスターチを用いて重量を調整するものとする。
比較群５：基本飼料にセルロースを３．０％添加し、潰瘍性大腸炎誘発の為にデキストラン硫酸ナトリウムを３．０％添加した群
比較群６：基本飼料にＧＢＦ（キリンヤクルトネクストステージ社「発芽大麦食品」）を１０％添加し、タンパク質含量が１４．６％になるようにカゼインで調整し、潰瘍性大腸炎誘発の為にデキストラン硫酸ナトリウムを３．０％添加した群
実験群５：基本飼料に食物センイ含量が３．０％になるように調製試料５を添加し、タンパク質含量が１４．６％になるようにカゼインで調整し、潰瘍性大腸炎誘発の為にデキストラン硫酸ナトリウムを３．０％添加した群
実験群６：基本飼料に食物繊維含量が３．０％になるように調製試料６を添加し、タンパク質含量が１４．６％になるようにカゼインで調整し、潰瘍性大腸炎誘発の為にデキストラン硫酸ナトリウムを３．０％添加した群
〔試験例３の結果〕
結果を図１１に示す。図１１は、実験群５、６及び比較群５、６の下痢スコアを示す。図１１から、比較群６、実験群５及び実験群６において下痢スコア改善効果が認められたことから、ＧＢＦ、調製試料５及び調製試料６に下痢スコア改善効果を有していることが確認できた。また、調製試料５、調製試料６は食物繊維含量が高く、食物繊維含量３．０％になるように飼料を調製しているため、ＧＢＦ含量１０％の半分以下の含量で効果を示すことが判明した。実験群５、実験群６を比較した場合に、ロールミル処理後にヘミセルラーゼ処理を行い、アロイロン層を分解除去した調製試料６は更に強い下痢スコア改善効果を有していることが確認された。以上の結果から、潰瘍性大腸炎誘発剤と同時に摂取しても、調製試料５、調製試料６の不溶性食物繊維含有物質は有効に症状の改善を促すことが判明した。更に、発芽していない種子によるものであっても、ロールミル処理とヘミセルラーゼ処理の併用により、未発芽種子由来の食物繊維含有物質においても下痢スコア改善及び抗炎症作用を有していることが判明した。
〔調製例７〕（裸麦芽⇒澱粉分解＋ロールミル）
発芽した裸大麦（裸麦芽）を原料とした。佐竹製作所製の醸造用テスト精米機ＴＤＢ２Ａ（使用回転数５００ｒｐｍ）により穀皮を除去した後に、それをディスクミルにより粉砕した。その後、加水して６５℃で３時間保持して、裸麦芽の持つアミラーゼを利用して澱粉を分解した。澱粉分解後、水中で１２メッシュ篩い（ＡＳＴＭ規格：篩い目開き１．６８ｍｍ）を用いて篩い分けし、通過画分をさらに２００メッシュ（ＡＳＴＭ規格：篩い目開き０．０７５ｍｍ）篩いを用いて篩い分けし、通過しない画分を回収した。回収した画分を湿体状態でロールミル（ロール回転数：１００ｒｐｍ、ロール間隙：０．０８ｍｍ）で圧扁剥離処理後、水中で２００メッシュ（ＡＳＴＭ規格：篩い目開き０．０７５ｍｍ）篩いを用いて篩い分けし、通過しない画分を回収して凍結乾燥に供した後、不溶性食物繊維含有物質を得た。これを調製試料７とした。この分析値は下記表７に示すとおりである。
〔調製例８〕（（裸麦芽⇒澱粉分解＋ヘミセルラーゼ）
発芽した裸大麦（裸麦芽）を原料とした。佐竹製作所製の醸造用テスト精米機ＴＤＢ２Ａ（使用回転数５００ｒｐｍ）により穀皮を除去した後に、それをディスクミルにより粉砕した。その後、加水して６５℃で３時間保持して、裸麦芽の持つアミラーゼを利用して澱粉を分解した。澱粉分解後に、ヘミセルラーゼ製剤（新日本化学工業社製スミチームＮＸ）１．０％を５０ｍＭ酢酸緩衝液中（ｐＨ４．５、５０℃）で１晩反応させて、植物組織のアロイロン層を完全に分解した後、水中で２００メッシュ（ＡＳＴＭ規格：篩い目開き０．０７５ｍｍ）篩いを用いて篩い分けし、通過しない画分を回収して凍結乾燥に供した後、不溶性食物繊維含有物質を得た。これを調製試料８とした。この分析値は下記表７に示すとおりである。
〔調製例９〕（裸麦芽⇒澱粉分解＋ロールミル＋ヘミセルラーゼ）
再度、調製例４と同様の処理を行い、不溶性食物繊維含有物質を得た。これを調製試料９とした。この分析値は下記表７に示すとおりである。
調製例７、８、９で得られた不溶性食物繊維含有物質を用いて潰瘍性大腸炎の激しい下痢や大腸粘膜の異常を治療できるかについて実験した。
〔材料及び方法〕
供試動物や潰瘍性大腸炎の発症方法は、試験例１に従った。ただし、試験例４で用いた飼料は下記表８に示すとおりである。
基本飼料はカゼインを用いてタンパク質を１４．６％、コーン油を用いて脂質を５．０％、ビタミン１．０％、ミネラル３．５％、塩化コリン０．２％を含む。コーンスターチを用いて重量を調整するものとする。
比較群７：基本飼料にセルロースを３．０％添加し、潰瘍性大腸炎誘発の為にデキストラン硫酸ナトリウムを３．０％添加した群
比較群８：基本飼料にＧＢＦ（キリンヤクルトネクストステージ社「発芽大麦食品」）を１０％添加し、タンパク質含量が１４．６％になるようにカゼインで調整し、潰瘍性大腸炎誘発の為にデキストラン硫酸ナトリウムを３．０％添加した群
実験群７：基本飼料に食物繊維含量が３．０％になるように調製試料７を添加し、タンパク質含量が１４．６％になるようにカゼインで調整し、潰瘍性大腸炎誘発の為にデキストラン硫酸ナトリウムを３．０％添加した群
実験群８：基本飼料に食物繊維含量が３．０％になるように調製試料８を添加し、タンパク質含量が１４．６％になるようにカゼインで調整し、潰瘍性大腸炎誘発の為にデキストラン硫酸ナトリウムを３．０％添加した群
実験群９：基本飼料に食物繊維含量が３．０％になるように調製試料９を添加し、タンパク質含量が１４．６％になるようにカゼインで調整し、潰瘍性大腸炎誘発の為にデキストラン硫酸ナトリウムを３．０％添加した群
〔試験例４の結果〕
結果を図１２〜図１３に示す。図１２は、実験群７、８、９及び比較群７、８の下痢スコアを示す。図１３は、実験群７、８、９及び比較群７、８の組織学的スコアを示す。図１２から、比較群８、実験群７、実験群８及び実験群９において下痢スコア改善効果が認められたことから、ＧＢＦ、調製試料７、調製試料８及び調製試料９に下痢スコア改善効果を有していることが確認できた。また、調製試料７、調製試料８及び調製試料９は食物繊維含量が高く、食物繊維含量３．０％になるように飼料を調製しているため、ＧＢＦ含量１０％の半分以下の含量で効果を示すことが判明した。実験群７、実験群８及び実験群９を比較した場合に、ヘミセルラーゼ処理によりアロイロン層を分解除去した調製試料８、または、ロールミル処理後にヘミセルラーゼ処理によりアロイロン層を分解除去した調製試料９はいずれもアロイロン層を完全に分解していない調製試料７よりも強い下痢スコア改善効果を有していることが確認された。図１３の組織学的スコアからも調製試料７、調製試料８、調製試料９は、大腸粘膜の損傷が防止されていることが確認された。また、下痢スコアと同様に、調製試料８及び調製試料９はいずれも調製試料７よりも強い効果が確認された。以上の結果から、潰瘍性大腸炎誘発剤と同時に摂取しても、調製試料７、調製試料８、調製試料９の不溶性食物センイ含有物質は有効に症状の改善を促すことが判明した。
〔調製例１０〕（米糠⇒澱粉分解＋ヘミセルラーゼ）
米糠を原料とした。アミラーゼ製剤（新日本化学工業社製スミチームＡＳ）２．０％を５０ｍＭ酢酸緩衝液中（ｐＨ４．５、６５℃）で３時間反応させて、米糠中の澱粉を分解した。澱粉分解後、水中で２００メッシュ（ＡＳＴＭ規格：篩い目開き０．０７５ｍｍ）篩いを用いて篩い分けし、通過しない画分を回収した。次に、ヘミセルラーゼ製剤（新日本化学工業社製スミチームＮＸ）１．０％を５０ｍＭ酢酸緩衝液中（ｐＨ４．５、５０℃）で１晩反応させて、植物組織のアロイロン層を完全に分解した後、再び水中で２００メッシュ（ＡＳＴＭ規格：篩い目開き０．０７５ｍｍ）篩いを用いて篩い分けし、通過しない画分を回収して凍結乾燥に供した後、不溶性食物繊維含有物質を得た。これを調製試料１０とした。この分析値は下記表９に示すとおりである。
調製例１０で得られた不溶性食物繊維含有物質を用いて潰瘍性大腸炎の激しい下痢や大腸粘膜の異常を治療できるかについて実験した。
〔材料及び方法〕
供試動物や潰瘍性大腸炎の発症方法は、試験例１に従った。ただし、試験例５で用いた飼料は下記表１０に示すとおりである。
基本飼料はカゼインを用いてタンパク質を１４．６％、コーン油を用いて脂質を５．０％、ビタミン１．０％、ミネラル３．５％、塩化コリン０．２％を含む。コーンスターチを用いて重量を調整するものとする。
比較群９：基本飼料にセルロースを３．０％添加し、潰瘍性大腸炎誘発の為にデキストラン硫酸ナトリウムを３．０％添加した群
比較群１０：基本飼料にＧＢＦ（キリンヤクルトネクストステージ社「発芽大麦食品」）を１０％添加し、タンパク質含量が１４．６％になるようにカゼインで調整し、潰瘍性大腸炎誘発の為にデキストラン硫酸ナトリウムを３．０％添加した群
実験群１０：基本飼料に食物繊維含量が３．０％になるように調製試料１０を添加し、タンパク質含量が１４．６％になるようにカゼインで調整し、潰瘍性大腸炎誘発の為にデキストラン硫酸ナトリウムを３．０％添加した群
〔試験例５の結果〕
結果を図１４〜１７に示す。図１４は、実験群１０及び比較群９、１０の下痢スコアを示す。図１５は、比較群９の大腸粘膜の様子を示す生物の写真である。図１６は、比較群１０の大腸粘膜の様子を示す生物の写真である。図１７は、実験群１０の大腸粘膜の様子を示す生物の写真である。図１４から、比較群１０、実験群１０において下痢スコア改善効果が認められたことから、ＧＢＦ、調製試料１０に下痢スコア改善効果を有していることが確認できた。また、調製試料１０は食物繊維含量が高く、食物繊維含量３．０％になるように飼料を調製しているため、ＧＢＦ含量１０％の半分以下の含量で効果を示すことが判明した。図１５〜１７の大腸粘膜の様子を示した写真からも、比較群１０及び実験群１０において正常な粘膜像が観察された。以上の結果から、潰瘍性大腸炎誘発剤と同時に摂取しても、調製試料１０の不溶性食物繊維含有物質は有効に症状の改善を促すことが判明した。
〔調製例１１〕（米糠⇒澱粉分解＋ヘミセルラーゼ）
再度、調製例１０と同様の処理を行い、不溶性食物繊維含有物質を得た。これを調製試料１１とした。この分析値は下記表１１に示すとおりである。
〔調製例１２〕（米糠⇒澱粉分解＋ヘミセルラーゼ⇒脱脂処理）
米糠を原料とした。アミラーゼ製剤（新日本化学工業社製スミチームＡＳ）２．０％を５０ｍＭ酢酸緩衝液中（ｐＨ４．５、６５℃）で３時間反応させて、米糠中の澱粉を分解した。澱粉分解後、水中で２００メッシュ（ＡＳＴＭ規格：篩い目開き０．０７５ｍｍ）篩いを用いて篩い分けし、通過しない画分を回収した。次に、ヘミセルラーゼ製剤（新日本化学工業社製スミチームＮＸ）１．０％を５０ｍＭ酢酸緩衝液中（ｐＨ４．５、５０℃）で１晩反応させて、植物組織のアロイロン層を完全に分解した後、再び水中で２００メッシュ（ＡＳＴＭ規格：篩い目開き０．０７５ｍｍ）篩いを用いて篩い分けし、通過しない画分を回収した。回収した画分をエタノールにより脱脂処理を行い、凍結乾燥に供した後、不溶性食物繊維含有物質を得た。これを調製試料１２とした。この分析値は下記表１１に示すとおりである。
調製例１１、１２で得られた不溶性食物繊維含有物質を用いて潰瘍性大腸炎の激しい下痢や大腸粘膜の異常を治療できるかについて実験した。
〔材料及び方法〕
供試動物や潰瘍性大腸炎の発症方法は、試験例１に従った。ただし、試験例６で用いた飼料は下記表１２に示すとおりである。
基本飼料はカゼインを用いてタンパク質を１４．６％、コーン油を用いて脂質を５．０％、ビタミン１．０％、ミネラル３．５％、塩化コリン０．２％を含む。コーンスターチを用いて重量を調整するものとする。
比較群１１：基本飼料にセルロースを３．０％添加し、潰瘍性大腸炎誘発の為にデキストラン硫酸ナトリウムを３．０％添加した群
比較群１２：基本飼料にＧＢＦ（キリンヤクルトネクストステージ社「発芽大麦食品」）を１０％添加し、タンパク質含量が１４．６％になるようにカゼインで調整し、潰瘍性大腸炎誘発の為にデキストラン硫酸ナトリウムを３．０％添加した群
実験群１１：基本飼料に食物繊維含量が３．０％になるように調製試料１１を添加し、タンパク質含量が１４．６％になるようにカゼインで調整し、潰瘍性大腸炎誘発の為にデキストラン硫酸ナトリウムを３．０％添加した群
実験群１２：基本飼料に食物センイ含量が３．０％になるように調製試料１２を添加し、タンパク質含量が１４．６％になるようにカゼインで調整し、潰瘍性大腸炎誘発の為にデキストラン硫酸ナトリウムを３．０％添加した群
〔試験例６の結果〕
結果を図１８に示す。図１８は、実験群１１、１２及び比較群１１、１２の下痢スコアを示す。実験群１１と実験群１２の両方において下痢スコア改善効果が確認されたことから、エタノールによる脱脂処理を行っても下痢スコア改善効果は失われないことが判明した。
〔調製例１３〕（ふすま⇒澱粉分解＋ヘミセルラーゼ）
ふすまを原料とした。アミラーゼ製剤（新日本化学工業社製スミチームＡＳ）２．０％を５０ｍＭ酢酸緩衝液中（ｐＨ４．５、６５℃）で３時間反応させて、ふすま中の澱粉を分解した。澱粉分解後、水中で２００メッシュ（ＡＳＴＭ規格：篩い目開き０．０７５ｍｍ）篩いを用いて篩い分けし、通過しない画分を回収した。次に、ヘミセルラーゼ製剤（新日本化学工業社製スミチームＮＸ）１．０％を５０ｍＭ酢酸緩衝液中（ｐＨ４．５、５０℃）で１晩反応させて、植物組織のアロイロン層を完全に分解した後、再び水中で２００メッシュ（ＡＳＴＭ規格：篩い目開き０．０７５ｍｍ）篩いを用いて篩い分けし、通過しない画分を回収して凍結乾燥に供した後、不溶性食物繊維含有物質を得た。これを調製試料１３とした。この分析値は下記表１３に示すとおりである。
調製例１３で得られた不溶性食物繊維含有物質を用いて潰瘍性大腸炎の激しい下痢や大腸粘膜の異常を治療できるかについて実験した。
〔材料及び方法〕
供試動物や潰瘍性大腸炎の発症方法は、試験例１に従った。ただし、試験例７で用いた飼料は下記表１４に示すとおりである。
基本飼料はカゼインを用いてタンパク質を１４．６％、コーン油を用いて脂質を５．０％、ビタミン１．０％、ミネラル３．５％、塩化コリン０．２％を含む。コーンスターチを用いて重量を調整するものとする。
比較群１３：基本飼料にセルロースを３．０％添加し、潰瘍性大腸炎誘発の為にデキストラン硫酸ナトリウムを３．０％添加した群
比較群１４：基本飼料にＧＢＦ（キリンヤクルトネクストステージ社「発芽大麦食品」）を１０％添加し、タンパク質含量が１４．６％になるようにカゼインで調整し、潰瘍性大腸炎誘発の為にデキストラン硫酸ナトリウムを３．０％添加した群
実験群１３：基本飼料に食物繊維含量が３．０％になるように調製試料１３を添加し、タンパク質含量が１４．６％になるようにカゼインで調整し、潰瘍性大腸炎誘発の為にデキストラン硫酸ナトリウムを３．０％添加した群
〔試験例７の結果〕
結果を図１９に示す。図１９は、実験群１３及び比較群１３、１４の下痢スコアを示す。実験群１３において下痢スコア改善効果が確認されたことから、原料をふすまにした場合でも下痢スコア改善効果有していることが判明した。
なお、上記の試験例で、試験した物質以外にも、本発明の範囲内にある穀類植物の種子由来の物質が同様の効果を奏するであろうことは、当業者に容易に理解されよう。
〔調製例１４〕（米糠⇒澱粉分解＋ヘミセルラーゼ）
米糠を原料とした。アミラーゼ製剤（新日本化学工業社製スミチームＡＳ）２．０％を５０ｍＭ酢酸緩衝液中（ｐＨ４．５、６５℃）で３時間反応させて、米糠中の澱粉を分解した。澱粉分解後、水中で２００メッシュ（ＡＳＴＭ規格：篩い目開き０．０７５ｍｍ）篩いを用いて篩い分けし、通過しない画分を回収した。次に、ヘミセルラーゼ製剤（新日本化学工業社製スミチームＮＸ）１．０％を５０ｍＭ酢酸緩衝液中（ｐＨ４．５、５０℃）で１晩反応させて、植物組織のアロイロン層を完全に分解した後、再び水中で２００メッシュ（ＡＳＴＭ規格：篩い目開き０．０７５ｍｍ）篩いを用いて篩い分けし、通過しない画分を回収して凍結乾燥に供した後、不溶性食物繊維含有物質を得た。これを調製試料１４とした。この分析値は下記表１５に示すとおりである。また、調製試料１４に含まれるアロイロン層部分の走査型電子顕微鏡写真像を図２０に示す。
〔調製例１５〕（米糠⇒ホモジナイズ攪拌による澱粉除去）
米糠を原料として水に懸濁し、特殊機化工業株式会社製（現プライミクス株式会社）攪拌機Ｔ．ｋ．ロボミックスに常温で供した後（１０，０００ＲＰＭ、約２０分）、水中で２００メッシュ（ＡＳＴＭ規格：篩い目開き０．０７５ｍｍ）篩いを用いて篩い分けし、通過しない画分を回収することにより澱粉を除去した。この操作を２回繰り返し、澱粉の除去効率を高めた。また、２回目の操作時には、８０℃加温という殺菌工程を組み入れた。最後に、２００メッシュ（ＡＳＴＭ規格：篩い目開き０．０７５ｍｍ）篩いを用いて篩い分けし、回収した通過しない画分を凍結乾燥に供した後、不溶性食物繊維含有物質を得た。これを調製試料１５とした。この分析値は下記表１５に示すとおりである。また、調製試料１５に含まれるアロイロン層部分の走査型電子顕微鏡写真像を図２１に示す。
〔調製例１６〕（脱脂米糠⇒澱粉分解＋ヘミセルラーゼ）
脱脂米糠（築野食品工業株式会社製）を原料とした。アミラーゼ製剤（新日本化学工業社製スミチームＡＳ）２．０％を５０ｍＭ酢酸緩衝液中（ｐＨ４．５、６５℃）で３時間反応させて、米糠中の澱粉を分解した。澱粉分解後、水中で２００メッシュ（ＡＳＴＭ規格：篩い目開き０．０７５ｍｍ）篩いを用いて篩い分けし、通過しない画分を回収した。次に、ヘミセルラーゼ製剤（新日本化学工業社製スミチームＮＸ）１．０％を５０ｍＭ酢酸緩衝液中（ｐＨ４．５、５０℃）で１晩反応させて、植物組織のアロイロン層を完全に分解した後、再び水中で２００メッシュ（ＡＳＴＭ規格：篩い目開き０．０７５ｍｍ）篩いを用いて篩い分けし、通過しない画分を回収して凍結乾燥に供した後、不溶性食物繊維含有物質を得た。これを調製試料１６とした。この分析値は下記表１５に示すとおりである。
調製例１４、１５、１６で得られた不溶性食物繊維含有物質を用いて潰瘍性大腸炎の激しい下痢や大腸粘膜の異常を治療できるかについて実験した。
〔材料及び方法〕
供試動物や潰瘍性大腸炎の発症方法は、試験例１に従った。ただし試験例８で用いた試料は下記表１６に示すとおりである。 基本飼料はカゼインを用いてタンパク質を１４．６％、コーン油を用いて脂質を５．０％、ビタミン１．０％、ミネラル３．５％、塩化コリン０．２％を含む。コーンスターチを用いて重量を調整するものとする。
比較群１５：基本飼料にセルロースを３．０％添加し、潰瘍性大腸炎誘発の為にデキストラン硫酸ナトリウムを３．０％添加した群
実験群１４：基本飼料に食物繊維含量が３．０％になるように調製試料１４を添加し、タンパク質含量が１４．６％になるようにカゼインで調整し、潰瘍性大腸炎誘発の為にデキストラン硫酸ナトリウムを３．０％添加した群
実験群１５：基本飼料に食物繊維含量が３．０％になるように調製試料１５を添加し、タンパク質含量が１４．６％になるようにカゼインで調整し、潰瘍性大腸炎誘発の為にデキストラン硫酸ナトリウムを３．０％添加した群
実験群１６：基本飼料に食物繊維含量が３．０％になるように調製試料１６を添加し、タンパク質含量が１４．６％になるようにカゼインで調整し、潰瘍性大腸炎誘発の為にデキストラン硫酸ナトリウムを３．０％添加した群
〔試験例８の結果〕
結果を図２２に示す。図２２は、実験群１４、１５、１６及び比較群１５の下痢スコアを示す。図２２から、実験群１４、実験群１５および実験群１６において下痢スコア改善効果が認められたことから、調製試料１４、調製試料１５及び調製試料１６に下痢スコア改善効果を有していることが確認できた。また、脱脂米糠を原料にしている調製試料１６は、脂質があらかじめ除去されているため、調製試料１４、調製試料１５に比べて食物繊維含量が高い。さらに、食物繊維含量３．０％になるように飼料を調製すると、実験群１４では調製試料１４を５．１％、実験群１５では調製試料１５を４．８％、実験群１６では調製試料１６を４．２％配合することになり、調製試料１６は最も低用量で効果を示すことが判明した。
実験群１５における調製試料１５は、酵素処理を全く行わずに攪拌処理のみで澱粉除去を行った試料であるが、酵素処理した調製試料１４、調製試料１６と同様に効果を有していることが判明した。
以上の結果から、潰瘍性大腸炎誘発剤と同時に摂取しても、アミラーゼ、ヘミセルラーゼ処理を行わずに澱粉除去のみ行った調製試料１５でも、脱脂米糠を原料にした場合の調製試料１６でも、それぞれの不溶性食物繊維含有物質は有効に症状の改善を促すことが判明した。
〔調製例１７〕（米糠⇒澱粉分解＋ヘミセルラーゼ⇒２００メッシュを通過しない画分）
米糠を原料とした。アミラーゼ製剤（新日本化学工業社製スミチームＡＳ）２．０％を５０ｍＭ酢酸緩衝液中（ｐＨ４．５、６５℃）で３時間反応させて、米糠中の澱粉を分解した。澱粉分解後、水中で２００メッシュ（ＡＳＴＭ規格：篩い目開き０．０７５ｍｍ）篩いを用いて篩い分けし、通過しない画分を回収した。次に、ヘミセルラーゼ製剤（新日本化学工業社製スミチームＮＸ）１．０％を５０ｍＭ酢酸緩衝液中（ｐＨ４．５、５０℃）で１晩反応させて、植物組織のアロイロン層を完全に分解した後、再び水中で２００メッシュ（ＡＳＴＭ規格：篩い目開き０．０７５ｍｍ）篩いを用いて篩い分けし、通過しない画分を回収して凍結乾燥して、不溶性食物繊維含有物質を得た。これを調製試料１７とした。この分析値は下記表１７に示すとおりである。
〔調製例１８〕（米糠⇒澱粉分解＋ヘミセルラーゼ⇒２００〜５００メッシュ画分）
米糠を原料とした。アミラーゼ製剤（新日本化学工業社製スミチームＡＳ）２．０％を５０ｍＭ酢酸緩衝液中（ｐＨ４．５、６５℃）で３時間反応させて、米糠中の澱粉を分解した。澱粉分解後、水中で２００メッシュ（ＡＳＴＭ規格：篩い目開き０．０７５ｍｍ）篩いを用いて篩い分けし、通過しない画分を回収した。次に、ヘミセルラーゼ製剤（新日本化学工業社製スミチームＮＸ）１．０％を５０ｍＭ酢酸緩衝液中（ｐＨ４．５、５０℃）で１晩反応させて、植物組織のアロイロン層を完全に分解した後、再び水中で２００メッシュ（ＡＳＴＭ規格：篩い目開き０．０７５ｍｍ）篩いを用いて篩い分けし、通過する画分を回収してそれをさらに５００メッシュ（ＡＳＴＭ規格：篩い目開き０．０２５ｍｍ）篩を用いて篩分けし、通過しない画分を回収して凍結乾燥して、不溶性食物繊維含有物質を得た。これを調製試料１８とした。この分析値は下記表１７に示すとおりである。
調製例１７で得られた不溶性食物繊維含有物質を用いて潰瘍性大腸炎の激しい下痢や大腸粘膜の異常を治療できるかについて実験した。
〔材料及び方法〕
供試動物や潰瘍性大腸炎の発症方法は、試験例１に従った。ただし試験例９で用いた試料は下記表１８に示すとおりである。
基本飼料はカゼインを用いてタンパク質を１４．６％、コーン油を用いて脂質を５．０％、ビタミン１．０％、ミネラル３．５％、塩化コリン０．２％を含む。コーンスターチを用いて重量を調整するものとする。
比較群１６：基本飼料にセルロースを３．０％添加し、潰瘍性大腸炎誘発の為にデキストラン硫酸ナトリウムを３．０％添加した群
実験群１７：基本飼料に食物繊維含量が３．０％になるように調製試料１７を添加し、タンパク質含量が１４．６％になるようにカゼインで調整し、潰瘍性大腸炎誘発の為にデキストラン硫酸ナトリウムを３．０％添加した群
実験群１８：基本飼料に食物繊維含量が３．０％になるように調製試料１８を添加し、タンパク質含量が１４．６％になるようにカゼインで調整し、潰瘍性大腸炎誘発の為にデキストラン硫酸ナトリウムを３．０％添加した群
〔試験例９の結果〕
結果を図２３に示す。図２３は、実験群１７、実験群１８及び比較群１６の下痢スコアを示す。図２３において、実験群１７、実験群１８において下痢スコア改善効果が認められたことから、調製試料１７、調製試料１８に下痢スコア改善効果を有していることが確認できた。しかし、実験群１７と実験群１８との下痢スコア改善効果を比較したところ、実験群１７の方がより高い効果を示すことが判明した。
以上の結果から、粒度は、効果の度合いに影響を及ぼし、２００メッシュを通過できない画分は通過できる画分より効果が高かったことから、粒度が大きいものほど効果を示すと考えた。
〔調製例１９〕（米糠⇒澱粉分解＋ヘミセルラーゼ⇒２００メッシュを通過しない画分）
脱脂米糠（築野食品工業株式会社製）を原料とした。アミラーゼ製剤（新日本化学工業社製スミチームＡＳ）２．０％を５０ｍＭ酢酸緩衝液中（ｐＨ４．５、６５℃）で３時間反応させて、米糠中の澱粉を分解した。澱粉分解後、水中で２００メッシュ（ＡＳＴＭ規格：篩い目開き０．０７５ｍｍ）篩いを用いて篩い分けし、通過しない画分を回収した。次に、ヘミセルラーゼ製剤（新日本化学工業社製スミチームＮＸ）１．０％を５０ｍＭ酢酸緩衝液中（ｐＨ４．５、５０℃）で１晩反応させて、植物組織のアロイロン層を完全に分解した後、再び水中で２００メッシュ（ＡＳＴＭ規格：篩い目開き０．０７５ｍｍ）篩いを用いて篩い分けし、通過しない画分を回収して凍結乾燥に供した後、不溶性食物繊維含有物質を得た。これを調製試料１９とした。この分析値は下記表１９に示すとおりである。
〔調製例２０〕（調製例１９⇒微粉砕⇒５００メッシュを通過画分）
調製例１９において得られた不溶性食物繊維含有物質を微粉砕化（マイクロフーズジャパン株式会社加工）した後に、水に懸濁させ、水中で５００メッシュ（ＡＳＴＭ規格：篩い目開き０．０７５ｍｍ）篩いを用いて篩い分けし、通過する画分を回収後、凍結乾燥して不溶性食物繊維含有物質を得た。これを調製試料２０とした。この分析値は下記表１９に示すとおりである。
調製例１９、２０で得られた不溶性食物繊維含有物質を用いて潰瘍性大腸炎の激しい下痢や大腸粘膜の異常を治療できるかについて実験した。
〔材料及び方法〕
供試動物や潰瘍性大腸炎の発症方法は、試験例１に従った。ただし試験例１０で用いた試料は下記表２０に示すとおりである。
基本飼料はカゼインを用いてタンパク質を１４．６％、コーン油を用いて脂質を５．０％、ビタミン１．０％、ミネラル３．５％、塩化コリン０．２％を含む。コーンスターチを用いて重量を調整するものとする。
比較群１７：基本飼料にセルロースを３．０％添加し、潰瘍性大腸炎誘発の為にデキストラン硫酸ナトリウムを３．０％添加した群
実験群１９：基本飼料に食物繊維含量が３．０％になるように調製試料１９を添加し、タンパク質含量が１４．６％になるようにカゼインで調整し、潰瘍性大腸炎誘発の為にデキストラン硫酸ナトリウムを３．０％添加した群
実験群２０：基本飼料に食物繊維含量が３．０％になるように調製試料２０を添加し、タンパク質含量が１４．６％になるようにカゼインで調整し、潰瘍性大腸炎誘発の為にデキストラン硫酸ナトリウムを３．０％添加した群
〔試験例１０の結果〕
結果を図２４に示す。図２４は、実験群１９、２０及び比較群１７の下痢スコアを示す。図２４から、実験群１９は下痢スコア改善効果が認められたが、一方、５００メッシュを通過した画分である調製試料２０を供した実験群２０において下痢スコア改善効果が認められなかった。
以上の結果から、調製試料のうち５００メッシュを通過した粒度の小さい不溶性食物繊維含有物質には、効果がないことが判明した。
〔調製例２１〕（脱脂米糠⇒澱粉分解＋ヘミセルラーゼ）
脱脂米糠を原料として、アミラーゼ製剤（新日本化学工業社製スミチームＡＳ）１．０％で、乳酸を添加してｐＨを調製後（ｐＨ４．５、６５℃）、３時間反応させて、米糠中の澱粉を分解した。澱粉分解後、水中で２００メッシュ（ＡＳＴＭ規格：篩い目開き０．０７５ｍｍ）篩いを用いて篩い分けし、通過しない画分を回収した。次に、ヘミセルラーゼ製剤（新日本化学工業社製スミチームＮＸ）０．５％で、乳酸を添加してｐＨを調製後（ｐＨ４．５、５０℃）、１晩反応させて、植物組織のアロイロン層を分解した後、水中で２００メッシュ（ＡＳＴＭ規格：篩い目開き０．０７５ｍｍ）篩いを用いて篩い分けし、通過しない画分を回収して凍結乾燥に供した後、不溶性食物繊維含有物質を得た。これを調製試料２１とした。この分析値は下記表２１に示すとおりである。
また、調製試料２１に含まれるアロイロン層部分の走査型電子顕微鏡写真像を図２５に示す。
〔調製例２２〕（脱脂米糠⇒澱粉分解＋ヘミセルラーゼ、酵素量を調製例２１より低減化）
脱脂米糠を原料として、アミラーゼ製剤（新日本化学工業社製スミチームＡＳ）０．５％で、乳酸を添加してｐＨを調製後（ｐＨ４．５、６５℃）、３時間反応させて、米糠中の澱粉を分解した。澱粉分解後、水中で２００メッシュ（ＡＳＴＭ規格：篩い目開き０．０７５ｍｍ）篩いを用いて篩い分けし、通過しない画分を回収した。次に、ヘミセルラーゼ製剤（新日本化学工業社製スミチームＮＸ）０．２％で、乳酸を添加してｐＨを調製後（ｐＨ４．５、５０℃）、１晩反応させて、植物組織のアロイロン層を分解した後、水中で２００メッシュ（ＡＳＴＭ規格：篩い目開き０．０７５ｍｍ）篩いを用いて篩い分けし、通過しない画分を回収して凍結乾燥に供した後、不溶性食物繊維含有物質を得た。
これを調製試料２２とした。この分析値は下記表２１に示すとおりである。また、調製試料２２に含まれるアロイロン層部分の走査型電子顕微鏡写真像を図２６に示す。
調製試料２１、２２について、潰瘍性大腸炎の激しい下痢や大腸粘膜の異常を治療できるか評価した。
〔材料及び方法〕
供試動物や潰瘍性大腸炎の発症方法は、試験例１に従った。ただし試験例１１で用いた試料は下記表２２に示すとおりである。
基本飼料はカゼインを用いてタンパク質を１４．６％、コーン油を用いて脂質を５．０％、ビタミン１．０％、ミネラル３．５％、塩化コリン０．２％を含む。コーンスターチを用いて重量を調整するものとする。
比較群１８：基本飼料にセルロースを３．０％添加し、潰瘍性大腸炎誘発の為にデキストラン硫酸ナトリウムを３．０％添加した群
実験群２１：基本飼料に食物繊維含量が３．０％になるように調製試料２１を添加し、タンパク質含量が１４．６％になるようにカゼインで調整し、潰瘍性大腸炎誘発の為にデキストラン硫酸ナトリウムを３．０％添加した群
実験群２２：基本飼料に調製試料２２を４．０％になるように添加後、食物繊維含量が３．０％になるようにセルロースで調整し、タンパク質含量は、１４．６％になるようにカゼインで調整し、潰瘍性大腸炎誘発の為にデキストラン硫酸ナトリウムを３．０％添加した群
〔試験例１１の結果〕
結果を図２５〜図２７に示す。図２７は、実験群２１、２２及び比較群１８の下痢スコアを示す。図２７から、実験群２１および実験群２２において下痢スコア改善効果が認められたものの、その効果の度合いは、実験群２１の方が実験群２２より高いものであった。図２５、図２６を比較したところ、調製試料２２の方が、アロイロン層の残存度合いが大きいと観察できる。これは、調製試料２２の方が酵素によるアロイロン層の分解量が少なかったためと推察できる。
〔調製例２３〕（調製試料の再ヘミセルラーゼ処理）
再度、調製試料２２をヘミセルラーゼ製剤（新日本化学工業社製スミチームＮＸ）１．０％、乳酸を添加してｐＨを調整後（ｐＨ４．５、５０℃）、１晩反応させ、再び水中で２００メッシュ（ＡＳＴＭ規格：篩い目開き０．０７５ｍｍ）篩いを用いて篩い分けし、通過しない画分を回収して凍結乾燥に供し、不溶性食物繊維含有物質を得た。これを調製試料２３とした。調製試料２３の分析値は下記表２３に示すとおりである。また、調製試料２３に含まれるアロイロン層部分の走査型電子顕微鏡写真像を図２８に示す。
調製試料２２、２３について潰瘍性大腸炎の激しい下痢や大腸粘膜の異常を治療できるかを評価した。
〔材料及び方法〕
材料および実験方法は、すべて、上記の方法と同様に行った。また、試験例１２で用いた飼料は表２４に示すとおりである。
比較群１９：基本飼料にセルロースを３．０％添加し、潰瘍性大腸炎誘発の為にデキストラ
ン硫酸ナトリウムを３．０％添加した群
実験群２２：基本飼料に調製試料２２を４．０％になるように添加後、食物繊維含量が３．０％になるようにセルロースで調整し、タンパク質含量は、１４．６％になるようにカゼインで調整し、潰瘍性大腸炎誘発の為にデキストラン硫酸ナトリウムを３．０％添加した群
実験群２３：基本飼料に食物繊維含量が３．０％になるように調製試料２３を添加し、タンパク質含量が１４．６％になるようにカゼインで調整し、潰瘍性大腸炎誘発の為にデキストラン硫酸ナトリウムを３．０％添加した群
〔試験例１２の結果〕
結果を図２８〜図２９に示す。図２９は、実験群２２、２３及び比較群１９の下痢スコアを示す。図２９から、実験群２２および実験群２３において下痢スコア改善効果が認められたものの、その効果の度合いは、実験群２３の方が実験群２２より高いものであった。図２８から、調製試料２３のアロイロン層は、完全に分解除去されたと観察できる。これにより、調製試料２２の効果が調製試料２３の効果のように上昇したと推察した。
〔試験例１３〕
調製試料２１、２２を、再度、ヘミセルラーゼ製剤（新日本化学工業社製スミチームＮＸ）４．０％で、５０ｍＭ酢酸緩衝液中（ｐＨ４．５、５０℃）で１晩反応させ、再び水中で２００メッシュ（ＡＳＴＭ規格：篩い目開き０．０７５ｍｍ）篩いを用いて篩い分けし、通過しない画分を回収して凍結乾燥に供した後、回収率を算出した。また、ヘミセルラーゼ処理の際にアロイロン層を構成する主だった糖として、アラビノース、キシロースの遊離量も調査した。
〔試験例１３の結果〕
調製試料２１をヘミセルラーゼで再分解した際の回収率は７８％であり、調製試料２２を同様に分解した際の回収率は６９％であった（図３０）。また、各試料を分解した際の遊離のアラビノース、キシロース量を調査した結果、いずれも調製試料２２を分解した場合の方が遊離のアラビノース、キシロースが多いことが判明した（図３１）。アラビノース、キシロースは、アロイロン層を構成する主要な糖であり、ヘミセルラーゼ処理によりこれらの糖が遊離しているということは、ヘミセルラーゼ処理により、アロイロン層が分解されていると推察できる。以上の結果から、調製試料が効果を有するために必要な条件は、当該試験例と同様の条件下でのヘミセルラーゼ処理による再分解により、回収率が約７０％以上であること、好ましくは、約８０％以上であると考えられる。また、この指標をもって、アロイロン層の分解度合いを表現することができる。
本発明によれば、潰瘍性大腸炎等の炎症性腸疾患の治療、改善又は予防効果を有する新規な物質が提供される。
本発明の物質は、穀類植物、好ましくはイネ科植物の種子由来の不溶性食物繊維を豊富に含み、副作用がないという利点を有するため、飲食品又は医薬における使用に有用である。
本発明の穀類植物、好ましくはイネ科植物の種子由来の不溶性食物繊維を含有する物質は、炎症性腸疾患の改善に有効であり、例えば抗癌剤摂取時の重篤な副作用である腸粘膜の損傷防止とそれに伴う下痢の発生を有効に抑制できる。さらに、本発明の不溶性食物繊維含有物質は、腸管切除患者や人工肛門設置患者の排便を有効に改善することができる。なお、本発明の不溶性食物繊維含有物質は副作用がない。
本明細書で引用した全ての刊行物、特許および特許出願をそのまま参考として本明細書にとり入れるものとする。
本発明の物質は、穀類植物、好ましくはイネ科植物の種子由来の不溶性食物繊維を豊富に含み、副作用がないという利点を有するため、飲食品又は医薬における使用に有用である。
本発明の穀類植物、好ましくはイネ科植物の種子由来の不溶性食物繊維を含有する物質は、炎症性腸疾患の改善に有効であり、例えば抗癌剤摂取時の重篤な副作用である腸粘膜の損傷防止とそれに伴う下痢の発生を有効に抑制できる。さらに、本発明の不溶性食物繊維含有物質は、腸管切除患者や人工肛門設置患者の排便を有効に改善することができる。なお、本発明の不溶性食物繊維含有物質は副作用がない。
本明細書で引用した全ての刊行物、特許および特許出願をそのまま参考として本明細書にとり入れるものとする。
Claims (28)
- 穀類植物の種子由来の不溶性食物繊維含有物質であって、以下のステップ：
（ａ）穀類植物の種子を、粉砕することによって、又は搗精することにより生じる種子外側画分を回収することによって、原料物質を調製するステップ；
（ｂ）原料物質を澱粉除去処理して澱粉除去画分を調製するステップ；
（ｃ）ステップ（ｂ）で調製した画分をヘミセルラーゼ活性を有する酵素によって酵素処理するステップ；及び
（ｄ）酵素処理液から不溶性画分を回収するステップ
を含む処理により製造されることを特徴とする、前記物質。 - 穀類植物はイネ科植物であることを特徴とする請求項１記載の物質。
- イネ科植物は、米、大麦、ライ麦又は小麦であることを特徴とする請求項２記載の物質。
- ステップ（ｂ）において、澱粉除去処理をアミラーゼ又はグルコアミラーゼを用いた酵素処理により実施することを特徴とする請求項１記載の物質。
- ステップ（ｂ）において、澱粉除去処理を加熱による糊化処理により実施することを特徴とする請求項１記載の物質。
- ステップ（ｂ）において、澱粉除去処理を物理的破壊処理により実施することを特徴とする請求項１記載の物質。
- 物理的破壊処理をホモジナイザーにより実施することを特徴とする請求項６記載の物質。
- ステップ（ｂ）において、澱粉除去画分をさらに圧扁剥離処理に供することを特徴とする、請求項１記載の物質。
- 前記澱粉除去処理に供する原料物質は米糠、小麦麦芽又は大麦麦芽であることを特徴とする請求項１記載の物質。
- 前記澱粉除去処理に供する原料物質は脱脂米糠であることを特徴とする請求項１記載の物質。
- 前記澱粉除去処理に供する原料物質は小麦ふすま又は大麦搗精粕であることを特徴とする請求項８記載の物質。
- 前記澱粉除去画分はビール仕込み粕であることを特徴とする請求項８記載の物質。
- ヘミセルラーゼ活性を有する酵素がキシラナーゼであることを特徴とする請求項１〜１２のいずれか１項記載の物質。
- ステップ（ｃ）において、さらにプロテアーゼを併用することを特徴とする請求項１〜１３のいずれか１項記載の物質。
- ステップ（ｃ）後に脱脂処理をさらに含むことを特徴とする請求項１〜１４のいずれか１項記載の物質。
- ステップ（ｄ）の不溶性画分は、実質的に、５〜２５メッシュのＡＳＴＭ（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｓｏｃｉｅｔｙ ｆｏｒ Ｔｅｓｔｉｎｇ ａｎｄ Ｍａｔｅｒｉａｌｓ）規格篩いを通過するが、５００メッシュのＡＳＴＭ規格篩いを通過しない粒度の画分からなることを特徴とする請求項１〜１５のいずれか１項記載の物質。
- ステップ（ｄ）の不溶性画分は、実質的に２００メッシュのＡＳＴＭ規格篩いを通過しない粒度の画分からなることを特徴とする請求項１６記載の物質。
- タンパク質含量が２０重量％以下であり、かつ食物繊維含量が５５重量％以上であることを特徴とする請求項１〜１７のいずれか１項記載の物質。
- 不溶性食物繊維はアロイロン層が部分的に又は完全に除去されている、請求項１〜１８のいずれか１項記載の物質。
- 以下の特徴を有する、穀類植物の種子由来の不溶性食物繊維含有物質：
（ｉ）実質的に５〜２５メッシュのＡＳＴＭ（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｓｏｃｉｅｔｙ ｆｏｒ Ｔｅｓｔｉｎｇ ａｎｄ Ｍａｔｅｒｉａｌｓ）規格篩いを通過するが、５００メッシュのＡＳＴＭ規格篩いを通過しない粒度の画分からなる；
（ｉｉ）タンパク質含量が２０重量％以下であり、かつ食物繊維含量が５５重量％以上である；
（ｉｉｉ）不溶性食物繊維のアロイロン層が部分的に又は完全に除去されている；及び
（ｉｖ）潰瘍性大腸炎の予防及び／又は改善効果を有する。 - 実質的に２００メッシュのＡＳＴＭ規格篩いを通過しない粒度の画分からなることを特徴とする請求項２０記載の物質。
- 炎症性腸疾患の改善、治療又は予防効果を有することを特徴とする請求項１〜２１のいずれか１項記載の物質。
- 炎症性腸疾患は潰瘍性大腸炎であることを特徴とする請求項２２記載の物質。
- 飲食品又は医薬に配合されている請求項１〜２３のいずれか１項記載の物質。
- 機能性食品に配合されている請求項２４記載の物質。
- 炎症性腸疾患を治療、改善又は予防するための飲食品又は医薬を製造するための、請求項１〜２５のいずれか１項記載の物質の使用。
- 穀類植物の種子由来の不溶性食物繊維含有物質の製造方法であって、以下のステップ：
（ａ）穀類植物の種子を、粉砕することによって、又は搗精することにより生じる種子外側画分を回収することによって、原料物質を調製するステップ；
（ｂ）原料物質を澱粉除去処理して澱粉除去画分を調製するステップ；
（ｃ）ステップ（ｂ）で調製した画分をヘミセルラーゼ活性を有する酵素によって酵素処理するステップ；及び
（ｄ）酵素処理液から不溶性画分を回収するステップ
を含む処理により製造されることを特徴とする、前記方法。 - 請求項２０に記載の物質を製造する方法であって、以下のステップ：
（ａ１）穀類植物の種子を、粉砕することによって、又は搗精することにより生じる種子外側画分を回収することによって、原料物質を調製するステップ；
（ｂ１）原料物質を物理的破壊によって澱粉除去処理して澱粉除去画分を調製するステップ；
（ｃ１）ステップ（ｂ１）で調製した画分から５〜２５メッシュのＡＳＴＭ（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｓｏｃｉｅｔｙ ｆｏｒ Ｔｅｓｔｉｎｇ ａｎｄ Ｍａｔｅｒｉａｌｓ）規格篩いを通過するが、５００メッシュのＡＳＴＭ規格篩いを通過しない不溶性画分を回収するステップ
を含む、前記方法。
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