JPWO2007148451A1 - ポリアミンオキシダーゼの安定化方法と基質特異性の改良方法 - Google Patents
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Abstract
Description
(1)アルコール化合物及び/又はキレート試薬と、ポリアミンオキシダーゼを共存させることを特徴とする、ポリアミンオキシダーゼの安定化方法。
(2)ポリアミンオキシダーゼがジアセチルスペルミンオキシダーゼである、上記(1)に記載のポリアミンオキシダーゼの安定化方法。
(3)界面活性剤存在下にてポリアミンオキシダーゼを作用させることを特徴とする、ポリアミンオキシダーゼの基質特異性の改良方法。
(4)ポリアミンオキシダーゼをpH7.5未満で作用させることを特徴とする、ポリアミンオキシダーゼの基質特異性の改良方法。
(5)ポリアミンオキシダーゼがジアセチルスペルミンオキシダーゼである、上記(3)〜(4)のいずれかに記載のポリアミンオキシダーゼの基質特異性の改良方法。
(6)ポリアミンオキシダーゼを含有する試薬を試料に作用させて、ジアセチルポリアミンを測定することを特徴とする、ジアセチルポリアミンの測定方法。
(7)アルコール化合物及び/又はキレート試薬により安定化されたポリアミンオキシダーゼを用いることを特徴とする、上記(6)に記載の測定方法。
(8)界面活性剤により基質特異性が改良されたポリアミンオキシダーゼを用いることを特徴とする、上記(6)〜(7)のいずれかに記載の測定方法。
(9)ポリアミンオキシダーゼをpH7.5未満で作用させることを特徴とする、上記(6)〜(8)のいずれかに記載の測定方法。
(10)ポリアミンオキシダーゼがジアセチルスペルミンオキシダーゼである、上記(6)〜(9)のいずれかに記載のジアセチルポリアミンの測定方法。
(11)アルコール化合物及び/又はキレート試薬と、ポリアミンオキシダーゼを含有することを特徴とする、安定化されたポリアミンオキシダーゼ製剤。
(12)ポリアミンオキシダーゼがジアセチルスペルミンオキシダーゼである、上記16に記載の安定化されたポリアミンオキシダーゼ製剤。
(13)ポリアミンオキシダーゼを含有することを特徴とする、ジアセチルポリアミンの測定試薬。
(14)アルコール化合物及び/又はキレート試薬と、ポリアミンオキシダーゼを含有することを特徴とする上記(13)に記載のジアセチルポリアミンの測定試薬。
(15)界面活性剤とポリアミンオキシダーゼを含有することを特徴とする上記(13)又は(14)のいずれかに記載のジアセチルポリアミン測定試薬。
(16)ポリアミンオキシダーゼがジアセチルスペルミンオキシダーゼである、上記(13)〜(15)のいずれかに記載のジアセチルポリアミン測定試薬。
(17)上記(1)又は(2)記載のポリアミンオキシダーゼの安定化方法、及び/又は上記(3)〜(5)のいずれか一項に記載のポリアミンオキシダーゼの基質特異性の改良方法を利用することを特徴とする、ジアセチルポリアミンにポリアミンオキシダーゼを作用させてモノアセチルポリアミンを製造する方法。
(18)ポリアミンオキシダーゼがジアセチルスペルミンオキシダーゼである、上記(17)記載のモノアセチルポリアミンの製造方法。
(19)上記(1)又は(2)記載のポリアミンオキシダーゼの安定化方法を利用することを特徴とする、ポリアミンオキシダーゼの精製方法。
(20)ポリアミンオキシダーゼがジアセチルスペルミンオキシダーゼである、上記(19)記載のポリアミンオキシダーゼの精製方法。
(1b)基質特異性:ジアセチルスペルミン>N1−アセチルスペルミン,N1−アセチルスペルミジン,N8−アセチルスペルミジン
例えば、pH7.5の条件下において、ジアセチルスペルミンを基質として用いたときの活性を100としたとき、N1−アセチルスペルミン、N1−アセチルスペルミジン、N8−アセチルスペルミジンを基質として用いたときの活性が90以下、好ましくは60以下、さらに好ましくは50以下、もっとも好ましくは40以下である理化学的性質を有する本発明酵素などが挙げられる。本評価におけるpHの条件や緩衝液の種類と濃度についてはなんら制限されない。
(1c)至適pH:6.5〜8.5
例えば、緩衝液として200mM 酢酸緩衝液(pH4.5〜6.0)、200mM リン酸カリウム緩衝液(pH6.0〜8.0)、200mM PIPES−NaOH(pH6.5〜7.5)、200mM トリス−塩酸緩衝液(pH7.5〜9.5)を用い、それぞれのpHにおいて、温度37℃にて酵素反応を行い、至適pHを求める。例えば、至適pHとしてpH6.5〜8.5、好ましくはpH7.0〜8.0の理化学的性質を有する本発明酵素などが挙げられる。
(1d)安定pH:6.0〜8.0
例えば、緩衝液として200mM 酢酸緩衝液(pH4.5〜6.0)、200mM リン酸カリウム緩衝液(pH6.0〜8.0)、200mM PIPES−NaOH(pH6.5〜7.5)、200mM トリス−塩酸緩衝液(pH7.5〜9.5)を用い、それぞれのpHにおいて、30℃で30分間処理した後、本発明酵素の残存活性を測定する。例えば、安定pHの範囲として、pH6.0〜8.0、好ましくはpH6.5〜7.5の理化学的性質を有する本発明酵素などが挙げられる。
(1e)至適温度:37〜55℃
例えば、後述の活性測定法における反応液と同一組成よりなる反応液を用い、種々の温度にて本酵素の活性測定を行い作用適温の範囲を求める。例えば、作用適温の範囲として37〜55℃の理化学的性質を有する本発明酵素などが挙げられる。
(1f)熱安定性:37℃以下
例えば、200mM リン酸カリウム緩衝液(pH7.0)を用い、それぞれの温度において30分間処理した後、本発明酵素の残存活性を測定する。このとき好ましくは90%以上の活性が残存している場合、その温度において酵素は安定であると言える。例えば、酵素が安定に存在できる範囲として、37℃以下の理化学的性質を有する本発明酵素などが挙げられる。
(1g)分子量:約92,000(ゲルろ過法)
分子量はゲルろ過法、Native PAGE法、SDS−PAGE法等を用いて測定することができる。本発明酵素の分子量については特に限定されないが、例えば、分子量の一例として、分子量約92,000(ゲルろ過法)の本発明酵素などが挙げられる。
(2a)作用:化3に示したとおり、酸素存在下にてジアセチルスペルミンの2級アミンのC−N結合を開裂して、N1−アセチルスペルミジン、3−アセトアミドプロパナール及び過酸化水素を生成する。
(2b)基質特異性:ジアセチルスペルミン>N1−アセチルスペルミン,N1−アセチルスペルミジン,N8−アセチルスペルミジン
例えば、pH7.5の条件下において、ジアセチルスペルミンを基質として用いたときの活性を100としたとき、N1−アセチルスペルミン、N1−アセチルスペルミジン、N8−アセチルスペルミジンを基質として用いたときの活性が90以下、好ましくは60以下、さらに好ましくは50以下である理化学的性質を有する本発明酵素などが挙げられる。本評価におけるpHの条件や緩衝液の種類と濃度についてはなんら制限されない。
(2c)至適pH:7.0〜8.5
例えば、緩衝液として200mM 酢酸緩衝液(pH4.5〜6.0)、200mM リン酸カリウム緩衝液(pH6.0〜8.0)、200mM PIPES−NaOH(pH6.5〜7.5)、200mM トリス−塩酸緩衝液(pH7.5〜9.5)を用い、それぞれのpHにおいて、温度37℃にて酵素反応を行い、至適pHを求める。例えば、至適pHとしてpH7.0〜8.5、好ましくはpH7.5〜8.0の理化学的性質を有する本発明酵素などが挙げられる。
(2d)安定pH:5.5〜9.5
例えば、緩衝液として200mM 酢酸緩衝液(pH4.5〜6.0)、200mM リン酸カリウム緩衝液(pH6.0〜8.0)、200mM PIPES−NaOH(pH6.5〜7.5)、200mM トリス−塩酸緩衝液(pH7.5〜9.5)を用い、それぞれのpHにおいて、30℃で30分間処理した後、本発明酵素の残存活性を測定する。例えば、安定pHの範囲として、pH5.5〜9.5、好ましくはpH6.5〜9.0の理化学的性質を有する本発明酵素などが挙げられる。
(2e)至適温度:45〜55℃
例えば、後述の活性測定法における反応液と同一組成よりなる反応液を用い、種々の温度にて本酵素の活性測定を行い作用適温の範囲を求める。例えば、作用適温の範囲として45〜55℃の理化学的性質を有する本発明酵素などが挙げられる。
(2f)熱安定性:37℃以下
例えば、200mM リン酸カリウム緩衝液(pH7.0)を用い、それぞれの温度において30分間処理した後、本発明酵素の残存活性を測定する。このとき好ましくは90%以上の活性が残存している場合、その温度において酵素は安定であると言える。例えば、酵素が安定に存在できる範囲として、37℃以下の理化学的性質を有する本発明酵素などが挙げられる。
(2g)分子量:約90,000(ゲルろ過法)
分子量は、ゲルろ過法、Native PAGE法、SDS−PAGE法等を用いて測定することができる。本発明酵素の分子量については、特に限定されないが、例えば、分子量の一例として、分子量約90,000(ゲルろ過法)の本発明酵素などが挙げられる。
本発明において、ポリアミンオキシダーゼの安定性を向上させるために共存させるアルコール化合物とは、ヒドロキシル基(OH)を有する有機化合物であり、そのような官能基を有する化合物であれば当業者に公知の如何なる化合物でも本発明に用いることができる。特に脂肪族炭化水素の1個又は複数個の水素原子をヒドロキシル基で置換した有機化合物は、入手が容易であることから好ましく用いられる。より具体的には、例えば、メタノール、エタノール、1−プロパノール、2−プロパノール、エチレングリコール及びグリセロール等の脂肪族アルコール、並びにトレハロース、キシリトール、スクロース及びグルコース等の糖類が挙げられる。本発明においては、上記アルコール化合物は、それぞれ単独でも複数組み合わせても用いることができる。
この様にして、アルコール化合物及び/又はキレート試薬を共存させることにより、ポリアミンオキシダーゼ、特にジアセチルスペルミンオキシダーゼを安定化することができる。この安定化方法を用いて、アルコール化合物及び/又はキレート試薬と、ポリアミンオキシダーゼを含有する安定化されたポリアミンオキシダーゼ製剤を製造することができる。
また、この安定化方法を用いて、精製したポリアミンオキシダーゼを製造することができる。酵素の精製法としては、通常の酵素精製に用いられる方法が使用でき、例えば、硫安塩析法、有機溶媒沈殿法、イオン交換クロマトグラフ法、ゲル濾過クロマトグラフ法、疎水クロマトグラフ法、吸着クロマトグラフ法、電気泳動法等を適宜組み合わせて行うのが好ましい。例えば、これらの精製工程のいずれか1工程若しくは複数の工程において、アルコール化合物及び/又はキレート試薬を添加、共存させることによってポリアミンオキシダーゼを安定化した状態で単離精製することができる。これにより酵素を高い回収率で製造することが可能となる。
本発明において、「ポリアミンオキシダーゼの基質特異性の改良」とは、ポリアミンオキシダーゼの「ジアセチルスペルミンに対する反応性」の「その他のポリアミンに対する反応性」に対する比、すなわち、「ジアセチルスペルミンに対する反応性/その他のポリアミンに対する反応性」を向上させることをいう。ここでいう「その他のポリアミン」とは、例えば、N1−アセチルスペルミン、N1−アセチルスペルミジン、N8−アセチルスペルミジン、スペルミン、スペルミジンなどを指す。
さらに本発明は、ポリアミンオキシダーゼを含有する試薬を試料に作用させて、ジアセチルポリアミンを測定する方法も含む。測定検体は特に限定されないが、例えば、尿、血清、食品やその抽出物等が挙げられる。測定検体中に含まれるジアセチルポリアミンの濃度についても特に限定されないが、例えば、1mM以下が挙げられるし、検体は適宜希釈することができる。用いるポリアミンオキシダーゼの量は、特に制限されないが、例えば、終濃度が0.05〜1000 U/ml、好ましくは0.2〜100 U/mlとなるように添加すればよい。作用させるpHは特に限定されるものではないが、例えば、pH5〜10、好ましくはpH6〜9、特に好ましくはpH6.0以上7.5未満である。pHの調整法は、特に限定されず、例えば、汎用的なトリス緩衝液やリン酸緩衝液を挙げることもできるし、酢酸、クエン酸、シュウ酸等の有機酸系緩衝液、MES、BES、HEPES、TES、ビシン、トリシン等のグッドバッファー、グリシン−NaOHなどのアミノ酸系緩衝液、ホウ酸緩衝液、Bis−Tris propane緩衝液、イミダゾール緩衝液などを使用することができる。この際、ポリアミンオキシダーゼの安定化剤であるアルコール化合物やキレート試薬、基質特異性改良剤である界面活性剤が適宜存在していてもよい。作用時間は、例えば、30秒〜120分間、好ましくは1〜30分間である。作用温度は、例えば、20〜45℃であり、通常の酵素反応に用いられる温度を適宜選択することができる。
さらに本発明では、上記測定方法に使用されるジアセチルポリアミンの測定試薬を提供する。ジアセチルポリアミンの測定試薬は上述の各試薬を異なる容器に含むものとして調製すればよく、例えば、液状品、又は液状品の凍結物若しくは凍結乾燥品として提供できる。あるいは、アルコール化合物及び/又はキレート試薬、及び/又は界面活性剤とポリアミンオキシダーゼを含有する測定試薬を調製することも可能である。
さらに、これまで記載したポリアミンオキシダーゼの安定化方法、及び/又はポリアミンオキシダーゼの基質特異性の改良方法を用いて、ジアセチルポリアミンへポリアミンオキシダーゼを作用させてモノアセチルポリアミンを製造することが可能である。
0.2M Tris−HCl緩衝液(pH7.5)0.9ml、7.0mM ポリアミン(例えば、ジアセチルスペルミン)溶液 0.1ml、15mM TOOS溶液 0.04ml、150U/mlペルオキシダーゼ(キッコーマン社製)溶液 0.04ml、1.76%(w/v) 4−アミノアンチピリン溶液 0.02mlの混合液を37℃で5分間インキュベートした。酵素は希釈液A[1mMのEDTA及び0.2%(w/v)のウシ血清アルブミン(BSA、シグマ社製)を含有する50mMリン酸カリウム緩衝液(pH7.0)]若しくは希釈液B[1mMのEDTA及び5%(v/v)のエタノールを含有する50mMリン酸カリウム緩衝液(pH7.0)]にて適宜希釈した。酵素サンプル 0.05mlを反応液に添加、混合した。全容1.15mlを37℃で3分間反応させ、反応開始から3分間の、反応溶液の555nmにおける吸光度の変化を、分光光度計を用いて測定した。ジアセチルスペルミンオキシダーゼの酵素1Uは、上記測定条件下において、ジアセチルスペルミンを基質とするときに1分間あたり1μmolの過酸化水素を生成する酵素量とした。なお、本条件におけるミリモル分子吸光係数を1.57cm2/μmolとした。なお、本測定方法は一例を示したものであり、活性測定の試薬の種類や濃度、pHについては何ら制限するものではない。例えば、Tris−HCl緩衝液の代わりにリン酸緩衝液等を用いることもできる。
ポリアミンオキシダーゼの安定性試験は、各種試薬を添加した50mMリン酸カリウム緩衝液(pH7.0)で酵素サンプルを希釈し、30℃保存による加速試験後の残存活性を比較して行った。加速試験を行った後の該酵素溶液の残存活性は、該酵素溶液調製時における吸光度変化量を100%としたときの相対量(%)として表した。
5%若しくは10%の各種アルコール化合物を含有する50mMのリン酸緩衝液(pH7.0)をそれぞれ調製した。これらの各種試薬を含有する緩衝液を用いて、PCT/JP2006/310648に記載のデバリオミセス・ハンセニイ Tsukuba42(FERM BP−10603)由来ジアセチルスペルミンオキシダーゼ溶液0.1U/mlをそれぞれ調製した。なお、比較例として、アルコール化合物を含有しない50mMのリン酸緩衝液(pH7.0)で、上記酵素溶液0.1U/mlを調製した。各酵素溶液について30℃、6時間の加速試験を行い、その結果を表1に示した。このように各種アルコール化合物について安定化効果が認められた。特開平5−211869に記載のように、エタノール等の有機溶媒の添加は酵素を失活させやすいと考えるのが一般的であるが、今回、エタノール、メタノール、1−プロパノール、2−プロパノールのような有機溶媒も本酵素の安定化剤として利用可能であることが示された。
1mM若しくは5mMの各種キレート試薬を含有する50mMのリン酸緩衝液(pH7.0)をそれぞれ調製した。これらの各種試薬を含有する緩衝液を用いて、PCT/JP2006/310648に記載のデバリオミセス・ハンセニイ Tsukuba42(FERM BP−10603)由来ジアセチルスペルミンオキシダーゼ溶液、キャンディダ・グラブラタ Noda162(FERM BP−10602)由来ジアセチルスペルミンオキシダーゼ溶液、及び「FEBS Letters」,(英国),2000年,476巻,p.150−154に記載のキャンディダ・ボイディニイ NBRC 10574由来ポリアミンオキシダーゼ溶液を0.1U/mlとしてそれぞれ調製した。
アルコール化合物である10%(v/v)エタノール、及び/又はキレート試薬である5mM EDTAを含有する、50mMのリン酸緩衝液(pH7.0)をそれぞれ調製した。これらの各種試薬を含有する緩衝液を用いて、PCT/JP2006/310648に記載のデバリオミセス・ハンセニイ Tsukuba42(FERM BP−10603)由来ジアセチルスペルミンオキシダーゼ溶液0.1U/mlをそれぞれ調製した。なお、比較例として、試薬を含有しない50mMのリン酸緩衝液(pH7.0)で、上記酵素溶液0.1U/mlを調製した。各酵素溶液について30℃、6時間の加速試験を行い、加速試験後の酵素活性を測定した。加速試験前の酵素活性と比較して、加速試験後の安定性を評価し、その結果を図1に示した。アルコール化合物であるエタノール、及びキレート試薬であるEDTAを共存させることによりジアセチルスペルミンオキシダーゼがさらに安定に保持された。
10%(v/v) エタノール及び1mM EDTAを含有する0.2M リン酸緩衝液(pH7.0) 9ml、15mM TOOS溶液 0.4ml、150U/ml ペルオキシダーゼ(キッコーマン社製)溶液 0.4ml、1.76%(w/v) 4−アミノアンチピリン溶液 0.2ml、0.5U/ml ジアセチルスペルミンオキシダーゼ[デバリオミセス・ハンセニイ Tsukuba42(FERM BP−10603)由来、PCT/JP2006/310648記載のとおり]0.5mlを混合し、よく撹拌して、ポリアミンオキシダーゼ製剤(溶液)を製造した。対照製剤として、安定化剤を除いたポリアミンオキシダーゼ製剤を調製した。本発明製剤と対照製剤について、30℃、24時間の虐待試験を行い、その結果を図2に示した。対照製剤は、酵素活性がほとんど失われているのに対して、本発明製剤は、酵素活性が安定に保持されていた。
10%(v/v)エタノール、1mM EDTA、0.5U/ml カタラーゼ(Sigma社製)及び7mM ジアセチルスペルミン・2塩酸塩(150mg)を含有する60mlの20mM リン酸緩衝液(pH7.5)に、ジアセチルスペルミンオキシダーゼ[デバリオミセス・ハンセニイ Tsukuba42(FERM BP−10603)由来、PCT/JP2006/310648に記載のとおり]を1U/mlとなるように添加した。30℃で2日間インキュベートし、TLCでN1−アセチルスペルミジンの生成を確認した(クロロホルム:メタノール:アンモニア水:水=2:4:1:1、ニンヒドリン発色)。
0.3%の各種界面活性剤を含有する0.2M リン酸緩衝液(pH7.5)をそれぞれ調製した。これらの各種界面活性剤を含有する緩衝液を用いて、前記のポリアミンオキシダーゼの活性測定法にて、PCT/JP2006/310648に記載のデバリオミセス・ハンセニイ Tsukuba42(FERM BP−10603)由来ジアセチルスペルミンオキシダーゼ溶液及びキャンディダ・グラブラタ Noda162(FERM BP−10602)由来ジアセチルスペルミンオキシダーゼについて、ジアセチルスペルミン及びN1−アセチルスペルミジンに対する酵素活性を測定、比較した。その結果を表3に示した。このように各種界面活性剤、特に非イオン性界面活性剤と両性界面活性剤を添加することにより、基質特異性の改善効果が認められた。
pH6.5〜7.5の0.2M リン酸緩衝液をそれぞれ調製した。これらの緩衝液を用いて、前記のポリアミンオキシダーゼの活性測定法にて、PCT/JP2006/310648に記載のデバリオミセス・ハンセニイ Tsukuba42(FERM BP−10603)由来ジアセチルスペルミンオキシダーゼ溶液及びキャンディダ・グラブラタ Noda162(FERM BP−10602)由来ジアセチルスペルミンオキシダーゼについて、各種ポリアミンに対する酵素活性を測定、比較した。その結果を表4に示した。このようにpHを7.5未満にすることにより、基質特異性の改善効果が認められた。
0.3%のTritonX−100を含有する0.2M リン酸緩衝液(pH6.5〜7.5)を調製し、前記のポリアミンオキシダーゼの活性測定法にて、PCT/JP2006/310648に記載のデバリオミセス・ハンセニイ Tsukuba42(FERM BP−10603)由来ジアセチルスペルミンオキシダーゼ溶液について、各種ポリアミンに対する酵素活性を測定、比較した。その結果を表5に示した。このようにTritonX−100を添加し、かつpHを7.5未満とすることにより、さらなる基質特異性の改善効果が認められた。なお、いずれの条件においてもプトレッシンには反応しなかった。
第1試薬
MES緩衝液(pH7.0) 50mM
DA−67 0.05mM
TritonX−100 0.04%
アジ化ナトリウム 0.09%
第2試薬
MES緩衝液(pH7.0) 50mM
ジアセチルスペルミンオキシダーゼ(デバリオミセス由来) 24U/mL
ペルオキシダーゼ(西洋ワサビ由来) 15U/mL
第1試薬
TES緩衝液(pH7.7) 50mM
TOOS 1mM
TritonX−100 1.5%
KCl 70mM
カタラーゼ 300U/mL
アスコルビン酸オキシダーゼ 3U/mL
第2試薬
TES緩衝液(pH7.7) 50mM
TritonX−100 1.5%
KCl 70mM
4−アミノアンチピリン 4mM
ジアセチルスペルミンオキシダーゼ(デバリオミセス由来) 24U/mL
ペルオキシダーゼ(西洋ワサビ由来) 15U/mL
アジ化ナトリウム 0.09%
かくして、ジアセチルスペルミンオキシダーゼを用いた試薬で尿試料中のジアセチルスペルミンを測定することができることがわかった。
Claims (20)
- アルコール化合物及び/又はキレート試薬と、ポリアミンオキシダーゼを共存させることを特徴とする、ポリアミンオキシダーゼの安定化方法。
- ポリアミンオキシダーゼがジアセチルスペルミンオキシダーゼである、請求項1に記載のポリアミンオキシダーゼの安定化方法。
- 界面活性剤存在下にてポリアミンオキシダーゼを作用させることを特徴とする、ポリアミンオキシダーゼの基質特異性の改良方法。
- ポリアミンオキシダーゼをpH7.5未満で作用させることを特徴とする、ポリアミンオキシダーゼの基質特異性の改良方法。
- ポリアミンオキシダーゼがジアセチルスペルミンオキシダーゼである、請求項3〜4のいずれかに記載のポリアミンオキシダーゼの基質特異性の改良方法。
- ポリアミンオキシダーゼを含有する試薬を試料に作用させて、ジアセチルポリアミンを測定することを特徴とする、ジアセチルポリアミンの測定方法。
- アルコール化合物及び/又はキレート試薬により安定化されたポリアミンオキシダーゼを用いることを特徴とする、請求項6に記載の測定方法。
- 界面活性剤により基質特異性が改良されたポリアミンオキシダーゼを用いることを特徴とする、請求項6〜7のいずれかに記載の測定方法。
- ポリアミンオキシダーゼをpH7.5未満で作用させることを特徴とする、請求項6〜8のいずれかに記載の測定方法。
- ポリアミンオキシダーゼがジアセチルスペルミンオキシダーゼである、請求項6〜9のいずれかに記載のジアセチルポリアミンの測定方法。
- アルコール化合物及び/又はキレート試薬と、ポリアミンオキシダーゼを含有することを特徴とする、安定化されたポリアミンオキシダーゼ製剤。
- ポリアミンオキシダーゼがジアセチルスペルミンオキシダーゼである、請求項11に記載の安定化されたポリアミンオキシダーゼ製剤。
- ポリアミンオキシダーゼを含有することを特徴とする、ジアセチルポリアミンの測定試薬。
- アルコール化合物及び/又はキレート試薬と、ポリアミンオキシダーゼを含有することを特徴とする請求項13に記載のジアセチルポリアミンの測定試薬。
- 界面活性剤とポリアミンオキシダーゼを含有することを特徴とする請求項13又は14のいずれかに記載のジアセチルポリアミン測定試薬。
- ポリアミンオキシダーゼがジアセチルスペルミンオキシダーゼである、請求項13〜15のいずれかに記載のジアセチルポリアミン測定試薬。
- 請求項1又は2記載のポリアミンオキシダーゼの安定化方法、及び/又は請求項3〜5のいずれか一項に記載のポリアミンオキシダーゼの基質特異性の改良方法を用いることを特徴とする、ジアセチルポリアミンへポリアミンオキシダーゼを作用させてモノアセチルポリアミンを製造する方法。
- ポリアミンオキシダーゼがジアセチルスペルミンオキシダーゼである、請求項17記載のモノアセチルポリアミンの製造方法。
- 請求項1又は2記載のポリアミンオキシダーゼの安定化方法を利用することを特徴とする、ポリアミンオキシダーゼの精製方法。
- ポリアミンオキシダーゼがジアセチルスペルミンオキシダーゼである、請求項19記載のポリアミンオキシダーゼの精製方法。
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