JPH08505766A

JPH08505766A - 安定化液状酵素組成物

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Publication number: JPH08505766A
Application number: JP6513128A
Authority: JP
Inventors: ジャクス，パーシー・エイ
Original assignee: Buckman Laboratories International Inc
Current assignee: Buckman Laboratories International Inc
Priority date: 1992-11-30
Filing date: 1993-10-29
Publication date: 1996-06-25
Anticipated expiration: 2014-06-21
Also published as: EP0670894A1; ATE229568T1; CZ136295A3; SK70495A3; FI952610A; NO952120D0; PT670894E; DE69332565D1; CA2150465C; DE69332565T2; US5356800A; ES2188607T3; AU681609B2; ZA938655B; BR9307700A; WO1994012623A1; AU5539594A; CA2150465A1; JP2908879B2; NO952120L

Abstract

(57)【要約】液状酵素組成物の貯蔵期限および保存寿命を延ばすだけでなく、また工業処理水の分散助剤として働くことも可能な安定剤配合物。該安定剤配合物は、短鎖アルコールおよび短鎖グリコールから選ばれる少なくとも１種の水に可溶なカップリング剤、（ｉ）ポリエトキシル化アルキルジアミンおよび（ii）アミンオキシドの少なくとも１種、ならびに水を含有する。ポリエトキシル化アルキルジアミンおよび／またはアミンオキシドは、液状酵素組成物中に含有される１種以上の酵素を安定化させるのに有効な量で存在する。安定化液状酵素組成物は安定剤配合物の１種以上の成分および酵素を含有することができる。液状酵素組成物安定化法は１種以上の酵素を安定剤配合物に加える工程または安定剤配合物と１種以上の酵素を含有する液状酵素組成物との混合工程を含み、なお、ポリエトキシル化アルキルジアミンおよび／またはアミンオキシドは、添加後に、１種以上の酵素を安定化させるのに有効な量で存在する。

Description

【発明の詳細な説明】安定化液状酵素組成物技術分野本発明は、液状酵素組成物中に含有される１種以上の酵素を安定化させる新規配合物に関する。該安定剤配合物は高温や低温においてさえも、液状酵素組成物の貯蔵期限および保存寿命を延ばすことができる。また、本発明は安定化液状酵素組成物に関する。さらに、本発明は、液状酵素組成物の新規安定化法に関する。発明の背景最近数年間、工業界および商業界における酵素および液状酵素組成物の使用が急速に伸びてきた。周知のように、活性となるｐＨ範囲によって、酵素は酸性、アルカリ性または中性であることができる。これらすべての種類の酵素が、ここに開示する発明に関して有用と考えられる。酵素および液状酵素組成物の多くが液体洗剤と関連しており、可溶化および洗浄用配合物として用いられている。酵素および液状酵素組成物は、液体洗剤に関連がある以外に、また、多くの種々の工業的および商業的分野においても効用があり、現在、種々の酵素が使用されている。プロテアーゼは、種々の工業用途において、しばしば用いられる周知の種類の酵素であって、タンパク質やタンパク質含有物質中のペプチド結合を加水分解させる働きをする。工業的に、プロテアーゼの最大の用途は、血や卵のしみのようなタンパク質系の汚れを除去するのに役立つ洗濯洗剤業界や、ミルクの凝固を助けるチーズ製造業界における用途である。プロテアーゼは、また食肉軟化剤、皮革軟化用、食品成分改良用、やフレーバーの付与にも用いられる。アリカリプロテアーゼを含有する液状酵素組成物は、また、冷水塔の冷却水や金属加工液保持空間中の細菌のフィルムおよび藻やカビの塊の分離剤として有効なことも判明している。プロテアーゼは、活性になるｐＨ範囲によって、酸性、中性、またはアリカリ性プロテアーゼと呼ぶことができる。酸プロテアーゼには微生物性レンネット、レンニン（キモシン）、ペプシンや菌性酸プロテアーゼがある。中性プロテアーゼにはトリプシン、パパイン、ブロメライン／フィシンや細菌性中性プロテアーゼがある。アリカプロテアーゼにはサブチリジンや類似のプロテアーゼがある。ＴＮ」（ＰａｎｃｒｅａｔｉｃＴｒｉｐｓｉｎＮＯＶＯ），「ＰＥＭ」（Ｐ名で入手可能であり、これらは、すべて、コネクチカット州、ＤａｎｂｕｒｙのＮｏｖｏＮｏｒｄｉｓｋＢｉｏｉｎｄｕｓｔｒｉａｌｓ，Ｉｎｃ．から供給される。別の市販プロテアーゼはＨＴ−Ｐｒｏｔｅｏｌｙｔｉｃという商品名で入手可能であり、ＳｏｌｖａｙＥｎｚｙｍｅＰｒｏｄｕｃｔｓが供給している。別の種類の酵素であるアミラーゼも多くの工業的および商業的プロセスに用いられており、デンプンの加水分解を触媒するかまたは促進させるように働く。アミラーゼは、主として、コーンシロップ業界において、グルコースシロップ、マルトースシロップや高フルクトースシロップのようなデンプンの加水分解による他の種々のさらに精製した最終製品の製造に用いられる。アミラーゼの種類としては、α−アミラーゼ、β−アミラーゼ、アミログルコシダーゼ（グルコアミラーゼ）、菌性アミラーゼや、プルラナーゼがある。アミラーゼを含有する市販の液状酵素組成物にはＮｏｖｏＮｏｒｄｉｓｋから供給される。ＢＡＮ，Ｔｅいう商品名で入手可能なもの、およびＳｏｌｖａｙＥｎｚｙｍｅＰｒｏｄｕｃｔｓ製品のＤｉａｚｙｍｅＬ−２００がある。他の市販されている重要な酵素類には、繊維の加水分解に影響を及ぼすものがある。該酵素類には、セルラーゼ、ヘミセルラーゼ、ペクチナーゼやβ−グルカナーゼがある。セルラーゼは、植物の細胞壁内に存在するグルコースの線状ポリマーであるセルロースを分解する酵素である。ヘミセルラーゼは、セルロースに類似の、植物中に存在する多糖類の１種であるヘミセルロースの加水分解に関与する。ペクチナーゼは、主成分が糖酸である炭水化物の１種のペクチンの分解に関与する酵素である。β−グルカナーゼは、グルコースの線状ポリマーであるという点ではセルロースにも類似するβ−グルカンの加水分解に関与する酵素である。商業的な観点からは、これら酵素は、繊維の分解に依存する製造プロセスに大なり小なり用いられる。セルラーゼは、界面活性剤やアリカリ性薬品を必要としない古新聞紙（ＯＮＰ）の脱インキ法に用いられると報告されている。該酵素は繊維表面からインキを除去してインキ粒子を一定の大きさに分散させる。Ｓ．Ｓａｙ−ＫｙｏｕｎＯＷのＢｉｏｌｏｇｉｃａｌＤｅ−ＩｎｋｉｎｇＭｅｔｈｏｄｓｏｆＮｅｗｓｐｒｉｎｔＷａｓｔｅｐａｐｅｒ，ＷｏｒｌｄＰｕｌｐａｎｄＰａｐｅｒＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，ｐｐ．６３．６４（１９９２）を参照されたい。セルラーゼには、総体的に、エンドセルラーゼ、エキソセルラーゼ、エキソセロ−ビオヒドラーゼおよびセロビアーゼがある。セルラーゼを含有する市販の液状名で入手可能であり、両者ともＮｏｖｏＮｏｒｄｉｓｋから供給される。ヘミセルラーゼもまた、古新聞紙の繊維表面からインキ粒子を除去する脱インキプロセスに用いられる。Ｄ．Ｙ．ＰｒａｓｒｄらのＥｎｚｙｍｅＤｅｉｎｋｉｎｇｏｆＢｌａｃｋａｎｄＷｈｉｔｅＬｅｔｔｅｒｐｒｅｓｓＰｒｉｎｔｅｄＮｅｗｓｐｒｉｎｔＷａｓｔｅ，ＰｒｏｇｒｅｓｓｉｎＰａｐｅｒＲｅｃｙｃｌｉｎｇ，１９９２年５月．ｐｐ．２１．２２を参照されたい。さらに、キシラナーゼのようなヘミセルラーゼはパルプの漂白工程に使用される。クラフトパルプのキシラナーゼ前処理は、分子状塩素のような漂白薬品の必要量に大幅の節減をもたらし、かつまた高光沢天井によって示されるようなすぐれた品質をも生じる。Ｄ．Ｊ．ＳｅｎｉｏｒらのＲｅｄｕｃｔｏｎｉｎＣｈｌｏｒｉｎｅＵｓｅＤｕｒｉｎｇＢｌｅａｃｈｉｎｇｏｆＫｒａｆｔＰｕｌｐＦｏｌｌｏｗｉｎｇＸｙｌａｎａｓｅＴｒｅａｔｍｅｎｔ，ＴａｐｐｉＪｏｕｒｎａｌ（近刊；１９９１年のストックホルムにおける国際パルプ漂白会議で出版状況が報告された）を参照されたい。ＮｏｖｏＮｏｒｄを含有する市販液状酵素組成物の２つの例である。ヘミセルラーゼの種類としては、ヘミセルラーゼ混合物およびガラクトマンナーゼがある。ヘミセルラーゼを含有する市販の液状酵素組成物はＮｏｖｏ製ＰＵ２者はいずれもＮｏｖｏＮｏｒｄｉｓｋ製品である。ペクチナーゼは細胞壁を軟弱にして果汁の抽出を増大させるだけでなく、また、該抽出物の粘度を低下させ、ゲル化を防ぐのを助けるために商業的に用いられる。ペクチナーゼはエンドポリガラクツロナーゼ、エキソポリガラクツロナーゼ、エンドペクタートリアーゼ（トランスエリミナーゼ）、エキソペクタートリアーゼ（トランスエリミナーゼ）およびエンドペクチンリアーゼ（トランスエリミナーゼ）より成る。ペクチナーゼを含有する市販の液状酵素組成物は、Ｐｅｃｔｉｎｅｘ^TM ＵｌｔｒａＳＰおよびＰｅｃｔｉｎｅｘ^TM*という商品名で入手可能であり、両者ともＮｏｖｏＮｏｒｄｉｓｋから供給される。 β−グルカナーゼは、β−グルカンを含有する大麦の細胞壁の改質が必要な麦芽製造および醸造業界で重要である。β−グルカナーゼはリケナーゼ、ラミナリナーゼおよびエキソグルカナーゼから成る。β−グルカナーゼを含有する市販のべてＮｏｖｏＮｏｒｄｉｓｋから供給される。工業的および商業的に有用な酵素の他の２種類はリパーゼおよびホスホリパーゼである。リパーゼおよびホスホリパーゼは油脂化合物中のエステル結合を攻撃することによって油脂を加水分解させるエステラーゼ酵素である。リパーゼはトリグリセリドに作用し、一方ホスホリパーゼはリン脂質に作用する。工業的観点からは、リパーゼおよびホスホリパーゼは市販のエステラーゼを代表し、現在両者とも多くの工業的および商業的用途を有している。パルプおよび製紙業界では、リパーゼを含有する液状酵素配合物が製造工程中、ロールや他の設備のピッチ付着物を減少させるのにとくに有効と判明している。たとえば、製紙工程中にピッチ付着の原因と報じられる塩素化トリグリセリドの含有量を低減させるために、塩素による漂白の前に、リパーゼによる未さらし亜硫酸パルプの処理が報告されている。Ｋ．ＦｉｓｃｈｅｒおよびＫ．ＭｅｓｓｎｅｒのＲｅｄｕｃｉｎｇＴｒｏｕｂｌｅｓｏｍｅＰｉｔｃｈｉｎＰｕｌｐＭｉｌｌｓＢｙＬｉｐｏｌｙｔｉｃＥｎｚyｍes ，ＴａｐｐｉＪｏｕｒｎａｌ，１９９２年２月，ｐ１３０を参照されたい。ＮｏｖｏＮｏｒｄｉｓｋはＲｅｓｉｎａｓｅ^TMＡおよびＲｅｓｉｎａｓｅ^TMＡ２Ｘという商品名の２種類の液状酵素配合物を市販しており、そのいずれもある条件の下ではパルプ中のウッドレンジを分解することによってピッチ付着物を著しく低減すると報じられている。リパーゼの別の重要な用途は、皮革製造プロセスにおける生皮および毛皮の脱脂である。皮革製造における脱脂を促進するだけでなく、また、水漬けや石灰漬け効果を高めるためにも、特殊なプロテアーゼおよび乳化システムとともにアルカリリパーゼが用いられる。Ｊ．ＣｈｒｉｓｔｎｅｒのＴｈｅＵｓｅｏｆＬｉｐａｓｅｓｉｎｔｈｅＢｅａｍｈｏｕｓｅＰｒｏｃｅｓｓｅｓ，８７Ｊ．Ａ．Ｌ．Ｃ．Ａ．１２８（１９９２）を参照されたい。リパーゼはまた、チーズにフレーバーを付与し、また牛脂を犬の口に合うようにするのにも用いられている。リパーゼは、非水系においては、カルボン酸とアルコール類とからエステルを合成するのに用いられている。リパーゼを含有する市販の液状酵素組成物は、Ｌｉｐａｓｅｓ１００、Ｇｒｅａｓｅｘ５０、Ｐａｌａｔａｓe^TMＡ，Ｐａｌａｔａｓe^TMＭおよびＬｉｐｏｚｙｍｅ^TMという商品名で入手可能であり、これらはいずれもＮｏｖｏＮｏｒｄｉｓｋから供給される。商業的に有用なホスホリパーゼに関しては、すい臓ホスホリパーゼＡ₂がレシチンをリソレシチンに転化させるのに用いられている。レソレシチンはマヨネーズの製造やパンを焼く場合のすぐれた乳化剤として報じられている。ホスホリパーゼＡ₂は、商業的には、ＮｏｖｏＮｏｒｄｉｓｋからＬＥＣＩＴＡＳＥ^TMという商品名で販売されている液状酵素組成物中にある。他の商業的に重要な種類の酵素は、有機化合物の異性体間の転化反応を触媒するイソメラーゼである。イソメラーゼは高フルクトースコーンシロップ業界ではとくに重要である。たとえば、グルコースイソメラーゼが触媒するアルドース− ケトースイソメラーゼ反応はグルコースのフルクトースへの転化を含み、産業界製品はグルコースイソメラーゼを含有する液状酵素組成物であって、ＮｏｖｏＮｏｒｄｉｓｋから供給される。レドックス酵素は化学的酸化／還元反応の触媒として働く酵素であり、したがって、多くの生化学物質の分解や合成に関与する。現在のところ、ほとんどのレドックス酵素は補足因子の存在を必要としているので、業界において、重要な地位をかち得ていないレドックス酵素が多い。しかし、補足因子が酵素の不可欠の部分であるか、または、補足因子を供給する必要がない場合には、レドックス酵素は、とりわけ食品加工業界において商業的に有用である。レドックス酵素のグルコースオキシダーゼは、食品の色やフレーバーに影響を及ぼす望ましくない褐変反応を阻止するのに用いられる。グルコースオキシダーゼは、また、ジュースのオフフレーバーの生成を防ぎ、かつ、ある種の敏感に反応する食品成分の色や安定性を保持する「酵素捕捉剤」としても使用される。レドックス酵素のカタラーゼは、殺菌剤として用いられる過酸化水素の残留物を分解するのに用いられている。大豆粉中に天然に存在し、工業用としては通常、精製しない第３のレドックス酵素のリポキシダーゼ（リポオキシゲナーゼ）はパンを焼く場合に、白いパンを得るだけでなく、またある種の薬剤によってもたらされるドウの軟化効果を逆転させるためにも使用される。他のレドックス酵素にはステロイド誘導体の酵素合成から診断検査への採用にわたり考えられる用途がある。これらレドックス酵素にはペルオキシダーゼ、スーパーオキシドジスムターゼ、アルコールオキシダーゼ、ポリフェノールオキシダーゼ、キサンチンオキシダーゼ、スルフヒドリルオキシダーゼ、ヒドロキシダーゼ、コレステロールオキシダーゼ、ラッカーゼ、アルコールデヒドロゲナーゼ、およびステロイドデヒドロゲナーゼがある。前記のような酵素を工業的プロセスに用いるために調製するかまたは販売する場合には、通常、酵素を配合して、特定プロセス用に考案した液状酵素組成物とする。しかし、該液状酵素組成物は、歴史的に、とくに貯蔵すると、酵素活性の低下をもたらすことがある化学的不安定性のような問題で悩まされてきた。貯蔵による酵素活性の低下という重大な問題は、とりわけ液体洗剤業界に影響を及ぼしている。液状酵素組成物のような工業製品が、長期間凍結から５０℃を上回る温度にわたることがある温度に曝される世界中の種々の温度の倉庫に貯蔵されることは珍しいことではない。大抵の液状酵素組成物は、何ヵ月も０℃から５０℃ に及ぶ極端な温度で貯蔵された後では、酵素の不安定性によって酵素活性の２０ないし１００パーセントを失う。液状酵素組成物に含まれる酵素を安定化させる種々の試みが行われている。アルコール類、グリセロール類、ジアルキルグリコールエーテル類ならびに前記化合物と他の化合物との混合物を含有する配合物を用いて、液状酵素組成物の安定性を高めようとする試みは適度の貯蔵温度範囲においてさえも、かろうじて成功したにすぎなかった。米国特許第４，８０１，５４４号では、安定剤として、炭化水素溶剤中のエチレングリコールおよびエトキシル化線状アルコール含有非イオン界面活性剤系が用いられ、溶剤／界面活性剤混合物中のミセル状酵素のマイクロカプセル化が記載されている。しかし、組成物の含水量は５パーセント未満に保たれ、酵素の安定性は３５°、７０゜および１００°Ｆで検査された。ある種のエステルを用いる水性酵素配合物の安定化法が米国特許第４，５４８，７２７号に記載されている。安定剤として用いたエステルは化学式ＲＣＯＯＲ ’（式中、Ｒが炭素が１ないし３個のアルキルまたは水素、およびＲ’が炭素が１ないし６個のアルキル）を有している。該エステルは水性酵素配合物中に０．１ないし約２．５重量％の量で存在する。米国特許第４，３１８，８１８号は、カルシウムイオンおよび低分子量カルボン酸またはその塩を含む水性酵素組成物の安定化系を記載している。該安定化系のｐＨは約６．５ないし約１０である。米国特許第４，２３４，５４３号は液状タンパク分解酵素含有洗剤組成物の安定化法を教示している。該洗剤組成物は、該組成物に酸化防止剤および親水性ポリオールを加えると同時に組成物のｐＨの変動をなくすことによって安定化される。米国特許第４，１６９，８１７号は安定化酵素を含有する液状洗浄用組成物を教示している。該組成物は１０ないし５０重量％の固形分を含有し、洗浄剤ビルダー、界面活性剤、Ｂａｃｉｌｌｕｓｓｕｂｔｉｌｉｓから得られる酵素系および酵素安定剤を包含する水溶液である。該安定剤は極めて水に可溶なナトリウムもしくはカリウム塩および／または水に可溶のヒドロキシアルコール類を含み、酵素を不活性化させずに長期間溶液を貯蔵させることができる。欧州特許第０３５２２４４Ａ２には両性界面活性剤を用いる安定化液体洗剤組成物が記載されている。発明の開示本発明の１つの目的は、液状酵素組成物に含まれる１種以上の酵素を安定化させることができる配合物を提供することにある。本発明の第２の目的は、安定化液状酵素組成物を提供することにある。本発明の第３の目的は、液状酵素組成物の安定化法を提供することにある。これらの目的は、一部は、短鎖アルコールおよび短鎖グリコールから選ばれる少なくとも１種の水に可溶なカップリング剤、（ｉ）ポリエトキシル化アルキルジアミンおよび（ii）アミンオキシドの少なくとも１種、ならびに水を含む液状酵素組成物用安定剤配合物を使用することによって達成することができる。この水に可溶なカップリング剤は、ポリエトキシル化アルキルジアミンおよび／またはアミンオキシドの該水中の溶解度を高めるのに有効な量で存在し、かつ（ｉ）ポリエトキシル化アルキルジアミンおよび（ii）アミンオキシドの少なくとも１種は、液状酵素組成物に含まれる１種以上の酵素を安定化させるのに有効な量で存在する。この安定剤配合物は、種々の機能を行う液状酵素組成物中に用いられる種々の酵素とともに使用することができる。この安定剤配合物が共に使用することができる酵素種には、前記の酵素種が含まれるが、これに限定されるものではない。本発明は、また、短鎖アルコールおよび短鎖グリコールから選ばれる少なくとも１種の水に可溶なカップリング剤、（ｉ）ポリエトキシル化アルキルジアミンおよび（ii）アミンオキシドの少なくとも１種、水、ならびに少なくとも１種の酵素を含む安定化液状酵素組成物に関する。この水に可溶なカップリング剤は、ポリエトキシル化アルキルジアミンおよび／またはアミンオキシドの該水中の溶解度を高めるのに有効な量で存在し、かつ（ｉ）ポリエトキシル化アルキルジアミンおよび（ii）アミンオキシドの少なくとも１種は、この安定化液状酵素組成物に含まれる少なくとも１種の酵素を安定化させるのに有効な量で存在する。本発明は、さらに、（ａ）短鎖アルコールおよび短鎖グリコールから選ばれる少なくとも１種の水に可溶なカップリング剤を水に加え、（ｂ）（ｉ）ポリエトキシル化アルキルジアミンおよび（ii）アミンオキシドの少なくとも１種を、工程（ａ）から得られる前記カップリング剤を含有する水に加えて、水性配合物を生成させ、さらに、（ｃ）少なくとも１種の酵素を、工程（ｂ）から得られる水性配合物に加える諸工程を含む液状酵素組成物安定化法であって、該カップリング剤が、（ｉ）ポリエトキシル化アルキルジアミンおよび（ii）アミンオキシドの少なくとも１種の前記水中の溶解度を高めるのに有効な量で存在し、かつさらに、（ｉ）ポリエトキシル化アルキルジアミンおよび（ii）アミンオキシドの少なくとも１種が、少なくとも１種の酵素を安定化させるのに有効な量で存在する方法に関する。本発明は、さらに、（ａ）短鎖アルコールおよび短鎖グリコールから選ばれる少なくとも１種の水に可溶なカップリング剤を水に加え、（ｂ）（ｉ）ポリエトキシル化アルキルジアミンおよび（ii）アミンオキシドの少なくとも１種を、工程（ａ）から得られるカップリング剤を含有する水に加え、水性配合物を得、さらに（ｃ）該水性配合物と少なくとも１種の酵素を含有する液状酵素組成物とを混合する諸工程を含む液状酵素組成物安定化法であって、該カップリング剤が（ｉ）ポリエトキシル化アルキルジアミンおよび（ii）アミンオキシドの少なくとも１種の該水中の溶解度を高めるのに有効な量で存在し、かつさらに（ｉ）ポリエトキシル化アルキルジアミンおよび（ii）アミンオキシドの少なくとも１種が、前記液状酵素組成物中に含まれる少なくとも１種の酵素を安定化させるのに有効な量で存在する方法に関する。本発明は、さらに、（ａ）ポリエトキシル化アルキルジアミン、および（ｂ）少なくとも１種の酵素を含む安定化液状酵素組成物であって、成分（ａ）が少なくとも１種の酵素を安定化させるのに有効な量で存在する組成物に関する。本発明は、さらに、（ａ）アミンオキシド、および（ｂ）少なくとも１種の酵素を含む安定化液状酵素組成物であって、成分（ａ）が少なくとも１種の酵素を安定化させるのに有効な量で存在する組成物に関する。本発明は、さらに、（ａ）（ｉ）ポリエトキシル化アルキルジアミンおよび（ii）アミンオキシドの少なくとも１種、ならびに（ｂ）少なくとも１種の酵素を含む安定化液状酵素組成物であって、成分（ａ）が少なくとも１種の酵素を安定化させるのに有効な量で存在する組成物に関する。本発明に用いられる水に可溶なカップリング剤は、ポリエトキシル化アルキルジアミンおよび／またはアミンオキシドの水中の溶解度を高めるため、ならびに、安定化配合物中のポリエトキシル化アルキルジアミンおよび／またはアミンオキシドの最終濃度を、カップリング剤が存在しない場合に得られるであろう濃度以上に高めるために用いられる。しかし、予備配合した液状酵素組成物を安定化させる場合に、ポリエトキシル化アルキルジアミンまたはアミンオキシドを可溶化させるのに、水に可溶なカップリング剤を必要とする場合もあれば必要としない場合もある。該予備配合液状酵素組成物には水性組成物のみならず有機溶剤もしくは媒体中で配合されまたは使用される組成物もある。水に可溶なカップリング剤を使用する場合には、短鎖アルコールおよび短鎖グリコールの少なくとも１種から選ばれる。カップリング剤はＣ₁−Ｃ₆アルコールおよびＣ₂−Ｃ₆グリコールで、それぞれ炭素が最大６個の主鎖を有する者から選ぶのが好ましい。アルコールおよびグリコールはエタノール、プロパノール、ブチレングリコール、プロピレングリコールおよびヘキシレングリコールから選ぶのがもっとも好ましい。安定剤配合物中に長鎖ポリエトキシル化アルキルジアミンを使用する場合には、短鎖ポリエトキシル化アルキルジアミンが長鎖ポリエトキシル化アルキルジアミンのカップリング剤として働く場合がある。安定剤配合物は、また（ｉ）ポリエトキシル化アルキルジアミンおよび（ii）アミンオキシドの少なくとも１種をも含有する。安定剤配合物は、安定化させる酵素に依存して、（ｉ）少なくとも１種のポリエトキシル化アルキルジアミンか（ii）少なくとも１種のアミンオキシドのいずれか、または（ｉ）および（ii）の混合物を含有することができる。たとえば、アミンオキシドを除外して、ポリエトキシル化アルキルジアミンを前記カップリング剤とともに使用することができる。あるいはまた、ポリエトキシル化アルキルジアミンを除外して、カップリング剤とともにアミンオキシドを使用することができる。安定剤配合物中に（ｉ）ならびに（ii）の混合物を使用するのがもっとも好ましい。当業者は特定液状酵素組成物を安定化させるために適切な混合物を、容易、かつ日常的に求めることができる。本発明を実施するのに有効なポリエトキシル化アルキルジアミンは式：（式中、ｘ，ｙおよびｚの合計が２ないし２０、およびＲがＣ₃−Ｃ₂₂アルキルである。）の化合物を含むのが好ましい。該ポリエトキシル化アルキルジアミンは、通常、化合物（すなわち「カット」）の混合物として入手でき、当該カットはエトキシル化度を示し、かつアルキル部分および２２０から５１５にわたる分子量のような共通特性を有する。もっとも好ましいポリエトキシル化アルキルジアミンは、Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリス（２−ヒドロキシエチル）−Ｎ−牛脂アルキル− １，３−ジアミノプロパン、Ｎ，Ｎ，Ｎ−ポリオキシエチレン（１０）−Ｎ−牛脂アルキル−１，３−ジアミノプロパン、Ｎ，Ｎ，Ｎ−ポリオキシエチレン（１３）−Ｎ−牛脂アルキル−１，３−ジアミノプロパン、Ｎ，Ｎ，Ｎ−ポリオキシエチレン（１５）−Ｎ−牛脂アルキル−１，３−ジアミノプロパン、Ｎ，Ｎ，Ｎ −ポリオキシエチレン（２０）−Ｎ−牛脂アルキル−１，３−ジアミノプロパン、およびＮ，Ｎ，Ｎ−ポリオキシエチレン（２５）−Ｎ−牛脂アルキル−１，３ −ジアミノプロパンである。ポリエトキシル化アルキルジアミンはイリノイ州ＭｃＣｏｏＫのＡｋｚｏＣｈｅｍｉｃａｌＤｉｖｉｓｉｏｎのような商業源から得ることができる。該製品はＥｔｈｏｄｕｏｍｅｅｎという商品名で販売されている。本発明の安定剤配合物はアミンオキシドを含有することができる。使用されるアミンオキシドは式：（式中、Ｒ’がメチル、ヒドロキシメチル、エチルまたはヒドロキシエチルおよびＲ”がＣ₈−Ｃ₂₂アルキル）の第三級アミンオキシドが好ましい。とくに好ましいアミンオキシドは：ビス（２−ヒドロキシエチル）やし油アルキルアミンオキシド、ビス（２−ヒドロキシエチル）牛脂アルキルアミンオキシド、ジメチルやし油アルキルアミンオキシド、ジメチル牛脂アルキルアミンオキシド、およびジメチルヘキサデシルアミンオキシドである。アミンオキシドはＡｋｚｏＣｈ eｍiｃａｌs，Ｉｎｃ．，ＳｈｅｒｅｘＣｈｅｍｉｃａｌｓ，Ｓｔｅｐａｎ，Ｌｏｎｚａ，Ｐｒｏｃｔｏｒ＆ＧａｍｂｌｅおよびＪｏｒｄｏｎＣｈｅｍｉｃａｌＣｏ．のような多くの商業源から得ることができる。ＡｋｚｏＣｈｅｍｉｃａｌＩｎｃ．から入手可能なアミンオキシド製品はＡｒｏｍｏｘという商品名で市販されている。ここに記載する安定剤配合物は、種々の、酵素および工業的方法または工業製品とともに使用することができる。この安定剤配合物がともに使用可能な酵素工業的方法および工業製品には前記のものが含まれるが、それに限定するものではない。安定剤配合物を用いて酵素組成物を安定化させると、本発明の第２態様の安定化液状酵素組成物が生じる。このように本発明は、また、短鎖アルコールおよび短鎖グリコールから選ばれる少なくとも１種の水に可溶なカップリング剤、（ｉ）ポリエトキシル化アルキルジアミンおよび（ii）アミンオキシドの少なくとも１種、水、ならびに酵素を含む安定化液状酵素組成物に関する。この安定化液状酵素組成物中に存在する水に可溶なカップリング剤ポリエトキシル化アルキルジアミンおよびアミンオキシドに関する考えられる好ましい態様は本発明の安定剤配合物についてさきに述べた態様と同じである。安定剤配合物の場合と同様に、本発明の液状酵素組成物は種々の酵素を用いて実施することができる。該酵素にはさきに述べた酵素種および特定酵素があるが、これに限定されるものではない。使用できる酵素は動物源、植物源、菌類源、微生物源や合成源から得られる。好ましい酵素は洗濯洗剤業界やチーズ製造業界で広く用いられている酸プロテアーゼ、アルカリプロテアーゼおよび中性プロテアーゼを含むプロテアーゼ；たとえばコーンシロップ業界で用いられている酸アミラーゼ、アルカリアミラーゼおよび中性アミラーゼを含むアミラーゼ；ならびにチーズのフレーバー付与やパルプおよび製紙業界ならびに皮革製造業界で用いられるリパーゼである。本発明の安定化液状酵素組成物において、カップリング剤は好ましくは組成物の０．１ないし３０重量％存在できるが、さらに好ましくは、１ないし２０重量％存在できる。ポリエトキシル化アルキルジアミンが存在する場合には、好ましくは、組成物の０．１ないし５０重量％存在できるがさらに好ましくは１ないし３０重量％存在できる。アミンオキシドが存在する場合には、好ましくは、組成物の０．１ないし５０重量％存在できるが、さらに好ましくは、１ないし３０重量％存在できる。存在する水の量は、好ましくは、組成物の１０重量％から８０重量％にわたることができる。濃縮酵素の希釈物の形で存在する酵素の量は、好ましくは、濃縮組成物の０．００１重量％から５０重量％に及ぶことができるが、さらに好ましくは、０．０１重量％から２５重量％に及ぶことができる。しかし、存在する酵素の量は、酵素の活性および目的とする最終用途に著しく左右される。最終の安定化液状酵素組成物のｐＨは、それが含有する酵素および意図する用途によって、好ましくは、４．０から１１．０にわたって変動するが、さらに好ましくは、５．０から１０．０にわたって変動する。業界で理解されているように、少量の酸またはアルカリ物質によるｐＨ調節が必要かもしれない。安定化液状酵素組成物は、組成物を、特定工業プロセスに用いる方向に誘導する他の添加剤を含有することができる。たとえば安定化液状酵素組成物は業界で公知の界面活性剤、消泡剤等のような添加剤を含有することができる。本発明の安定化液状酵素組成物を用いる場合に、安定剤配合物が、工業プロセス水中の酵素の分散助剤としても働くことができれば好都合である。本発明は、また、前記の諸工程を含む液状酵素組成物安定化法に関する。諸工程で用いられる例示的および好ましい諸成分のみならず諸成分の量も前記と同じである。安定化液状酵素組成物の諸成分が任意の順序か、または同時でも混合できることは当業者には理解できると思われる。しかしながら、（ａ）短鎖アルコールおよび短鎖グリコールから選ばれる少なくとも１種の水に可溶なカップリング剤を水に加え、（ｂ）（ｉ）ポリエトキシル化アルキルジアミンおよび（ii）アミンオキシドの少なくとも１種を、工程（ａ）から得られるカップリング剤を含有する水に加えて、水性配合物を生成させ、さらに（ｃ）少なくとも１種の酵素を、工程（ｂ）の水性配合物に加える順序が好ましい。安定化液状酵素組成物に他の添加剤を包含させようとする場合に、該添加剤は任意の時に加えることができるが、カップリング工程後、または酵素を加える工程とは別の工程で加えるのが好ましい。カップリング工程および（ｉ）ポリエトキシル化アルキルジアミンおよび（ii ）アミンオキシドの少なくとも１種のカップリングエ程で得られるカップル水への添加が、さきに述べた本発明の態様によって安定剤配合物をもたらすことも当業者には理解できると思われる。これらの工程は任意の順序または同時でさえも行うことができるが、さきに示した順序が好ましい。液状酵素組成物の別の安定化法は、（ａ）短鎖アルコールおよび短鎖グリコールから選ばれる少なくとも１種の水に可溶なカップリング剤を水に加え、（ｂ）（ｉ）ポリエトキシル化アルキルジアミンおよび（ii）アミンオキシドの少なくとも１種を、工程（ａ）から得られるカップリング剤を含有する水に加えて、水性配合物を生成させ、さらに（ｃ）該水性配合物と、少なくとも１種の酵素を含有する液状酵素組成物とを混合する諸工程を含む。下記の実施例は本発明を説明するために示すものである。しかし本発明を、該実施例に示す特定条件または細目に限定すべきではないことを理解する必要がある。実施例１本発明によって安定化液状酵素組成物を調製した。各成分の量を全組成物の重量％として表わし、表１に示す。諸成分の添加順序は前記の好ましい順序であった。表２に、種々の未安定化の本来の液状酵素濃縮物およびその９５％水希釈物を関連符号で示す。これら未安定化濃縮物を表１および表３の安定化液状酵素組成物の調製に使用した。実施例２安定化液状酵素組成物の酵素安定性を５０℃において、酵素濃縮物および水希釈物と比較した。表３に示した結果から、安定化液状酵素組成物の場合には５０ ℃で１２週間後に９５％以上の安定性を示し、一方、本来の酵素濃縮物および水希釈物は５０℃で２週間後に酵素活性が著しく低下したことがわかる。実施例３安定化液状酵素組成物、酵素濃縮物および水希釈物をいずれも凍結／融解サイクルに付し、次いで各サイクル後に残存する酵素活性度％の分析を行った。安定化液状酵素組成物は６サイクルを行った後でさえも９０％を上回る活性度の残存を示した。さらに、凍結／融解の１サイクルでさえも、濃縮物および該濃縮物の単純な水希釈物を著しく不活性にすることが認められた。結果を表４に示す。

【手続補正書】【提出日】１９９５年８月９日【補正内容】請求の範囲を下記の通り補正する。『１．本質的に、（ａ）短鎖アルコールおよび短鎖グリコールから選ばれる少なくとも１種の水に可溶なカップリング剤、（ｂ）（ｉ）ポリエトキシル化アルキルジアミンおよび（ii）アミンオキシドの少なくとも１種、ならびに（ｃ）水より構成される液状酵素組成物用安定剤配合物であって、成分（ａ）が成分（ｂ）の前記水中の溶解度を高めるのに有効な量で存在し、かつ前記成分（ｂ）が液状酵素組成物中に含有される１種以上の酵素を安定化させるのに有効な量で存在する安定剤配合物。２．本質的に、（ａ）短鎖アルコールおよび短鎖グリコールから選ばれる少なくとも１種の水に可溶なカップリング剤、（ｂ）（ｉ）ポリエトキシル化アルキルジアミンおよび（ii）アミンオキシドの少なくとも１種、（ｃ）水、ならびに（ｄ）少なくとも１種の酵素より構成される安定化液状酵素組成物であって、成分（ａ）が、成分（ｂ）の前記水中の溶解度を高めるのに有効な量で存在し、かつ前記成分（ｂ）が前記酵素を安定化させるのに有効な量で存在する前記組成物。３．本質的に、（ａ）短炭素鎖アルコールおよび短炭素鎖グリコールから選ばれる少なくとも１種の水に可溶なカップリング剤を水に加え、（ｂ）（ｉ）ポリエトキシル化アルキルジアミンおよび（ii）アミンオキシドの少なくとも１種を、工程（ａ）から得られる前記カップリング剤を含有する水に加えて、水性配合物を生成させ、さらに（ｃ）工程（ｂ）から得られる水性配合物に、少なくとも１種の酵素を加える諸工程より構成される安定化液状酵素組成物調製法であって、前記カップリング剤が、（ｉ）ポリエトキシル化アルキルジアミンおよび（ii）アミンオキシドの少なくとも１種の前記水中の溶解度を高めるのに有効な量で存在し、さらに（ｉ）ポリエトキシル化アルキルジアミンおよび（ii）アミンオキシドの前記の少なくとも１種が、少なくとも１種の酵素を安定化させるのに有効な量で存在する前記方法。４．本質的に、（ａ）短炭素鎖アルコールおよび短炭素鎖グリコールから選ばれる少なくとも１種の水に可溶なカップリング剤を水に加え、（ｂ）（ｉ）ポリエトキシル化アルキルジアミンおよび（ii）アミンオキシドの少なくとも１種を、工程（ａ）から得られる前記カップリング剤を含有する水に加えて、水性配合物を生成させ、さらに（ｃ）前記水性配合物と少なくとも１種の酵素を含有する液状酵素組成物とを混合する諸工程より構成される液状酵素組成物安定化法であって、前記カップリング剤が、（ｉ）ポリエトキシル化アルキルジアミンおよび（ii）アミンオキシドの前記少なくとも１種の前記水中の溶解度を高めるのに有効な量で存在し、かつ（ｉ）ポリエトキシル化アルキルジアミンおよび（ii）アミンオキシドの前記少なくとも１種が、前記液状酵素組成物中に含有される前記少なくとも１種の酵素を安定化させるのに有効な量で存在する前記方法。５．本質的に、（ａ）ポリエトキシル化アルキルジアミン、および（ｂ）少なくとも１種の酵素より構成される安定化液状酵素組成物であって、成分（ａ）が、前記すくとなくも１種の酵素を安定化させるのに有効な量で存在する前記組成物。６．本質的に、（ａ）アミンオキシド、および（ｂ）少なくとも１種の酵素より構成される安定化液状酵素組成物であって、成分（ａ）が、前記すくとなくも１種の酵素を安定化させるのに有効な量で存在する前記組成物。７．本質的に、（ａ）（ｉ）ポリエトキシル化アルキルジアミンおよび（ii）アミンオキシドの少なくとも１種、ならびに（ｂ）少なくとも１種の酵素より構成される安定化液状酵素組成物であって、成分（ａ）が、前記少なくとも１種の酵素を安定化させるのに有効な量で存在する前記組成物。』

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＴ，ＡＵ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＨＵ，ＪＰ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＫ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＧ，ＭＮ，ＭＷ，ＮＬ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＫ，ＵＡ，ＵＺ，ＶＮ

Claims

【特許請求の範囲】１．本質的に、（ａ）短鎖アルコールおよび短鎖グリコールから選ばれる少なくとも１種の水に可溶なカップリング剤、（ｂ）（ｉ）ポリエトキシル化アルキルジアミンおよび（ii）アミンオキシドの少なくとも１種、ならびに（ｃ）水より構成される液状酵素組成物用安定剤配合物であって、成分（ａ）が成分（ｂ）の前記水中の溶解度を高めるのに有効な量で存在し、かつ前記成分（ｂ）が液状酵素組成物中に含有される１種以上の酵素を安定化させるのに有効な量で存在する安定剤配合物。２．前記ポリエトキシル化アルキルジアミンが式：（式中、ｘ，ｙおよびｚの合計が２ないし２０であり、ＲがＣ₃−Ｃ₂₂アルキル基である。）の少なくとも１種の化合物である請求項１の安定剤配合物。３．前記ポリエトキシル化アルキルジアミンがＮ，Ｎ，Ｎ−トリス（２−ヒドロキシエチル）−Ｎ−牛脂アルキル−１，３−ジアミノプロパン、Ｎ，Ｎ，Ｎ− ポリオキシエチレン（１０）−Ｎ−牛脂アルキル−１，３−ジアミノプロパン、およびＮ，Ｎ，Ｎ−ポリオキシエチレン（１５）−Ｎ−牛脂アルキル-１，３− ジアミノプロパンから選ばれる少なくとも１種の化合物である請求項２の安定剤配合物。４．前記アミンオキシドは式：（式中、Ｒ’がメチル、ヒドロキシメチル、エチルまたはヒドロキシエチルであり、そしてＲ”がＣ₈−Ｃ₂₂アルキル基である。）の少なくとも１種の第三級アミンオキシドである請求項１の安定剤配合物。５．前記アミンオキシドがビス（２−ヒドロキシエチル）やし油アルキルオキシド、ビス（２−ヒドロキシエチル）牛脂アルキルアミンオキシド、ジメチルやし油アルキルアミンオキシド、ジメチル牛脂アルキルアミンオキシド、およびジメチルヘキサデシルアミンオキシドから選ばれる少なくとも１種の化合物である請求項４の安定剤配合物。６．前記カップリング剤がＣ₁−Ｃ₆アルコールおよびＣ₂−Ｃ₆グリコールから選ばれる請求項１の安定剤配合物。７．前記カップリング剤がエタノール、プロパノール、ブチレングリコール、プロピレングリコール、およびヘキシレングリコールから選ばれる請求項６の安定剤配合物。８．本質的に、（ａ）短鎖アルコールおよび短鎖グリコールから選ばれる少なくとも１種の水に可溶なカップリング剤、（ｂ）（ｉ）ポリエトキシル化アルキルジアミンおよび（ii）アミンオキシドの少なくとも１種、（ｃ）水、ならびに（ｄ）少なくとも１種の酵素より構成される安定化液状酵素組成物であって、成分（ａ）が、成分（ｂ）の前記水中の溶解度を高めるのに有効な量で存在し、かつ前記成分（ｂ）が前記酵素を安定化させるのに有効な量で存在する前記組成物。９．前記ポリエトキシル化アルキルジアミンが式：（式中、ｘ，ｙおよびｚの合計が２ないし２０であり、そしてＲがＣ₃−Ｃ₂₂アルキル基である。）の少なくとも１種の化合物である請求項８の組成物。１０．前記ポリエトキシル化アルキルジアミンがＮ，Ｎ，Ｎ−トリス（２−ヒドロキシエチル）−Ｎ−牛脂アルキル−１，３−ジアミノプロパン、Ｎ，Ｎ，Ｎ −ポリオキシエチレン（１０）−Ｎ−牛脂アルキル−１，３−ジアミノプロパン、およびＮ，Ｎ，Ｎ−ポリオキシエチレン（１５）−Ｎ−牛脂アルキル−１，３ −ジアミノプロパンから選ばれる少なくとも１種の化合物である請求項９の組成物。１１．前記アミンオキシドが式（式中、Ｒ’がメチル、ヒドロキシメチル、エチルまたはヒドロキシエチルであり、そしてＲ”がＣ₈−Ｃ₂₂アルキル基である。）の少なくとも１種の第三級アミンオキシドである請求項８の組成物。１２．前記アミンオキシドがビス（２−ヒドロキシエチル）やし油アルキルアミンオキシド、ビス（２−ヒドロキシエチル）牛脂アルキルアミンオキシド、ジメチルやし油アルキルアミンオキシド、ジメチル牛脂アルキルアミンオキシド、およびジメチルヘキサデシルアミンオキシドから選ばれる少なくとも１種の化合物である請求項１１の組成物。１３．前記カップリング剤がＣ₁−Ｃ₆アルコールおよびＣ₂−Ｃ₆グリコールから選ばれる請求項８の組成物。１４．前記カップリング剤がエタノール、プロパノール、ブチレングリコール、プロピレングリコール、およびヘキシレングリコールから選ばれる請求項１３の組成物。１５．前記酵素がプロテアーゼ、アミラーゼおよびリパーゼから選ばれる請求項８の組成物。１６．前記カップリング剤が組成物の０．１〜３０重量％存在し、前記ポリエトキシル化アルキルジアミンが組成物の０．１〜５０重量％存在し、かつ前記アミンオキシドが組成物の０．１〜５０重量％存在する請求項８の組成物。１７．本質的に、（ａ）短炭素鎖アルコールおよび短炭素鎖グリコールから選ばれる少なくとも１種の水に可溶なカップリング剤を水に加え、（ｂ）（ｉ）ポリエトキシル化アルキルジアミンおよび（ii）アミンオキシドの少なくとも１種を、工程（ａ）から得られる前記カップリング剤を含有する水に加えて、水性配合物を生成させ、さらに（ｃ）工程（ｂ）から得られる水性配合物に、少なくとも１種の酵素を加える諸工程より構成される安定化液状酵素組成物調製法であって、前記カップリング剤が、（ｉ）ポリエトキシル化アルキルジアミンおよび（ii）アミンオキシドの少なくとも１種の前記水中の溶解度を高めるのに有効な量で存在し、さらに（ｉ）ポリエトキシル化アルキルジアミンおよび（ii）アミンオキシドの前記の少なくとも１種が、少なくとも１種の酵素を安定化させるのに有効な量で存在する前記方法。１８．前記ポリエトキシル化アルキルジアミンが式：（式中、ｘ，ｙおよびＺの合計が２ないし２０であり、そしてＲがＣ₃−Ｃ₂₂アルキル基である。）の少なくとも１種の化合物である請求項１７の方法。１９．前記ポリエトキシル化アルキルジアミンがＮ，Ｎ，Ｎ−トリス（２−ヒドロキシエチル）−Ｎ−牛脂アルキル−１，３−ジアミノプロパン、Ｎ，Ｎ，Ｎ −ポリオキシエチレン（１０）−Ｎ−牛脂アルキル−１，３−ジアミノプロパン、およびＮ，Ｎ，Ｎ−ポリオキシエチレン（１５）−Ｎ−牛脂アルキル−１，３ −ジアミノプロパンから選ばれる少なくとも１種の化合物である請求項１８の方法。２０．前記アミンオキシドは式：（式中、Ｒ’がメチル、ヒドロキシメチル、エチルまたはヒドロキシエチルであり、そしてＲ”がＣ₁₀−Ｃ₂₂アルキル基である。）の少なくとも１種の第三級アミンオキシドである請求項１７の方法。２１．前記アミンオキシドがビス（２−ヒドロキシエチル）やし油アルキルアミンオキシド、ビス（２−ヒドロキシエチル）牛脂アルキルアミンオキシド、ジメチルやし油アルキルアミンオキシド、ジメチル牛脂アルキルアミンオキシド、およびジメチルヘキサデシルアミンオキシドから選ばれる少なくとも１種の化合物である請求項２０の方法。２２．前記カップリング剤がＣ₁−Ｃ₆アルコールおよびＣ₂−Ｃ₆グリコールから選ばれる請求項１７の方法。２３．前記カップリング剤がエタノール、プロパノール、ブチレングリコール、プロピレングリコール、およびヘキシレングリコールから選ばれる請求項２２の方法。２４．前記酵素がプロテアーゼ、アミラーゼおよびリパーゼから選ばれる請求項１７の方法。２５．本質的に、（ａ）短炭素鎖アルコールおよび短炭素鎖グリコールから選ばれる少なくとも１種の水に可溶なカップリング剤を水に加え、（ｂ）（ｉ）ポリエトキシル化アルキルジアミンおよび（ii）アミンオキシドの少なくとも１種を工程（ａ）から得られる前記カップリング剤を含有する水に加えて水性配合物を生成させ、さらに（ｃ）前記水性配合物と少なくとも１種の酵素を含有する液状酵素組成物とを混合する諸工程より構成される液状酵素組成物安定化法であって、前記カップリング剤が、（ｉ）ポリエトキシル化アルキルジアミンおよび（ii）アミンオキシドの前記少なくとも１種の前記水中の溶解度を高めるのに有効な量で存在し、かつ（ｉ）ポリエトキシル化アルキルジアミンおよび（ii）アミンオキシドの前記少なくとも１種が、前記液状酵素組成物中に含有される前記少なくとも１種の酵素を安定化させるの有効な量で存在する前記方法。２６．前記ポリエトキシル化アルキルジアミンが式：（式中、ｘ，ｙおよびｚの合計が２ないし２０であり、そしてＲがＣ₃−Ｃ₂₂アルキル基である。）の少なくとも１種の化合物である請求項２５の方法。２７．前記ポリエトキシル化アルキルジアミンがＮ，Ｎ，Ｎ−トリス（２−ヒドロキシエチル）−Ｎ−牛脂アルキル−１，３−ジアミノプロパン、Ｎ，Ｎ，Ｎ −ポリオキシエチレン（１０）−Ｎ−牛脂アルキル−１，３−ジアミノプロパン、およびＮ，Ｎ，Ｎ−ポリオキシエチレン（１５）−Ｎ−牛脂アルキル−１，３ −ジアミノプロパンから選ばれる少なくとも１種の化合物である請求項２６の方法。２８．前記アミンオキシドが式（式中、Ｒ’がメチル、ヒドロキシメチル、エチルまたはヒドロキシエチルであり、そしてＲ”がＣ₁₀−Ｃ₂₂アルキル基である。）の少なくとも１種の第三級アミンオキシドである請求項２５の方法。２９．前記アミンオキシドがビス（２−ヒドロキシエチル）やし油アルキルアミンオキシド、ビス（２−ヒドロキシエチル）牛脂アルキルアミンオキシド、ジメチルやし油アルキルアミンオキシド、ジメチル牛脂アルキルアミンオキシド、およびジメチルヘキサデシルアミンオキシドから選ばれる少なくとも１種の化合物である請求項２８の方法。３０．前記カップリング剤がＣ₁−Ｃ₆アルコールおよびＣ₂−Ｃ₆グリコールから選ばれる請求項２５の方法。３１．前記カップリング剤がエタノール、プロパノール、ブチレングリコール、プロピレングリコール、およびヘキシレングリコールから選ばれる請求項３０の方法。３２．前記酵素がプロテアーゼ、アミラーゼおよびリパーゼから選ばれる請求項２５の組成物。３３．本質的に、（ａ）ポリエトキシル化アルキルジアミン、および（ｂ）少なくとも１種の酵素より構成される安定化液状酵素組成物であって、成分（ａ）が、前記少なくとも１種の酵素を安定化させるのに有効な量で存在する前記組成物。３４．さらに水を含む請求項３３の組成物。３５．本質的に、（ａ）アミンオキシド、および（ｂ）少なくとも１種の酵素より構成される安定化液状酵素組成物であって、成分（ａ）が、前記少なくとも１種の酵素を安定化させるのに有効な量で存在する組成物。３６．さらに水を含む請求項３５の組成物。３７．本質的に、（ａ）（ｉ）ポリエトキシル化アルキルジアミンおよび（ii）アミンオキシドの少なくとも１種、ならびに（ｂ）少なくとも１種の酵素より構成される安定化液状酵素組成物であって、成分（ａ）が、前記少なくとも１種の酵素を安定化させるのに有効な量で存在する前記組成物。３８．さらに、水を含む請求項３７の組成物。３９．本質的に、（ａ）（ｉ）ポリエトキシル化アルキルジアミン、（ii）アミンオキシド、および（ｂ）酵素より構成され、成分（ａ）が、前記酵素を安定化させるのに有効な量で存在する請求項３７の組成物。４０．前記ポリエトキシル化アルキルジアミンがＮ，Ｎ，Ｎ−トリス（２−ヒドロキシエチル）−Ｎ−牛脂アルキル−１，３−ジアミノプロパン、Ｎ，Ｎ，Ｎ −ポリオキシエチレン（１０）−Ｎ−牛脂アルキル-１，３−ジアミノプロパン、およびＮ，Ｎ，Ｎ−ポリオキシエチレン（１５）−Ｎ−牛脂アルキル−１，３ −ジアミノプロパンから選ばれ、前記アミンオキシドがビス（２−ヒドロキシエチル）やし油アルキルアミンオキシド、ビス（２−ヒドロキシエチル）牛脂アルキルアミンオキシド、ジメチルやし油アルキルアミンオキシド、ジメチル牛脂アルキルアミンオキシドおよびジメチルヘキサデシルアミンオキシドから選ばれ、かつ前記酵素がプロテアーゼ、アミラーゼ、およびリパーゼから選ばれる請求項３９の組成物。４１．本質的に、（ａ）短炭素鎖アルコールおよび短炭素鎖グリコールから選ばれる少なくとも１種の水に可溶なカップリング剤を水に加え、（ｂ）ポリエトキシル化アルキルジアミンおよびアミンオキシドを、工程（ａ）から得られる前記カップリング剤を含有する水に加えて水性配合物を生成させ、さらに（ｃ）前記水性配合物と酵素を含有する液状酵素組成物とを混合する諸工程より構成され、前記カップリング剤が、前記ポリエトキシル化アルキルジアミンおよび前記アミンオキシドの前記水中の溶解度を高めるのに有効な量で存在し、かつさらに前記ポリエトキシル化アルキルジアミンおよび前記アミンオキシドが、前記液状酵素配合物中に含有される前記酵素を安定化させるのに有効な合計量で存在する請求項２５の方法。４２．前記水に可溶なカップリング剤がエタノール、プロパノール、ブチレングリコール、プロピレングリコールおよびヘキシレングリコールから選ばれ、前記ポリエトキシル化アルキルジアミンがＮ，Ｎ，Ｎ−トリス（２−ヒドロキシエチル）−Ｎ−牛脂アルキル−１，３−ジアミノプロパン、Ｎ，Ｎ，Ｎ−ポリオキシエチレン（１０）−Ｎ−牛脂アルキル−１，３−ジアミノプロパン、およびＮ，Ｎ，Ｎ−ポリオキシエチレン（１５）−Ｎ−牛脂アルキル−１，３−ジアミノプロパンから選ばれ、かつ前記アミンオキシドがビス（２−ヒドロキシエチル）やし油アルキルアミンオキシド、ビス（２−ヒドロキシエチル）牛脂アルキルアミンオキシド、ジメチルやし油アルキルアミンオキシド、ジメチル牛脂アルキルアミンオキシド、およびジメチルヘキサデシルアミンオキシドから選ばれる請求項４１の方法。４３．本質的に、（ａ）短炭素鎖アルコールおよび短炭素鎖グリコールから選ばれる少なくとも１種の水に可溶なカップリング剤を水に加え、（ｂ）ポリエトキシル化アルキルジアミンおよびアミンオキシドを、工程（ａ）から得られる前記カップリング剤を含有する水に加えて、水性配合物を生成させ、さらに（ｃ）工程（ｂ）から得られる水性配合物に酵素を加える諸工程より構成され前記カップリング剤が、前記ポリエトキシル化アルキルジアミンおよび前記アミンオキシドの前記水中の溶解度を高めるのに有効な量で存在し、かつさらに前前記ポリエトキシル化アルキルジアミンおよび前記アミンオキシドが、前記酵素を安定化させるのに有効な合計量で存在する請求項１７の方法。４４．前記水に可溶なカップリング剤がエタノール、プロパノール、ブチレングリコール、プロピレングリコールおよびヘキシレングリコールから選ばれ、前記ポリエトキシル化アルキルジアミンがＮ，Ｎ，Ｎ−トリス（２−ヒドロキシエチル）−Ｎ−牛脂アルキル−１，３−ジアミノプロパン、Ｎ，Ｎ，Ｎ−ポリオキシエチレン（１０）−Ｎ−牛脂アルキル−１，３−ジアミノプロパン、およびＮ，Ｎ，Ｎ−ポリオキシエチレン（１５）−Ｎ−牛脂アルキル−１，３−ジアミノプロパンから選ばれ、かつ前記アミンオキシドがビス（２−ヒドロキシエチル）やし油アルキルアミンオキシド、ビス（２−ヒドロキシエチル）牛脂アルキルアミンオキシド、ジメチルやし油アルキルアミンオキシド、ジメチル牛脂アルキルアミンオキシド、およびジメチルヘキサデシルアミンオキシドから選ばれる請求項４３の方法。４５．本質的に、（ａ）短炭素鎖アルコールおよび短炭素鎖グリコールから選ばれる水に可溶なカップリング剤、（ｂ）（ｉ）ポリエトキシル化アルキルジアミン、（ii）アミンオキシド、（ｃ）水ならびに（ｄ）酵素より構成され、成分（ａ）が成分（ｂ）の前記水中の溶解度を高めるのに有効な量で存在し、かつさらに成分（ｂ）が、前記酵素を安定化させるのに有効な量で存在する請求項８の組成物。４６．前記水に可溶なカップリング剤がエタノール、プロパノール、ブチレングリコール、プロピレングリコール、およびヘキシレングリコールから選ばれ、前記ポリエトキシル化アルキルジアミンがＮ，Ｎ，Ｎ−トリス（２−ヒドロキシエチル）−Ｎ−牛脂アルキル−１，３−ジアミノプロパン、Ｎ，Ｎ，Ｎ−ポリオキシエチレン（１０）−Ｎ−牛脂アルキル−１，３−ジアミノプロパン、およびＮ，Ｎ，Ｎ−ポリオキシエチレン（１５）−Ｎ−牛脂アルキル−１，３−ジアミノプロパンから選ばれ、前記アミンオキシドがビス（２−ヒドロキシエチル）やし油アルキルアミンオキシド、ビス（２−ヒドロキシエチル）牛脂アルキルアミンオキシド、ジメチルやし油アルキルアミンオキシド、ジメチル牛脂アルキルアミンオキシド、およびジメチルヘキサデシルアミンオキシドから選ばれ、かつ前記酵素がプロテアーゼ、アミラーゼ、およびリパーゼから選ばれる請求項４５の組成物。４７．本質的に、（ａ）短炭素鎖アルコールおよび短炭素鎖グリコールから選ばれる水に可溶なカップリング剤、（ｂ）（ｉ）ポリエトキシル化アルキルジアミン、（ii）アミンオキシド、ならびに（ｃ）水より構成され、成分（ａ）が、成分（ｂ）の前記水中の溶解度を高めるのに有効な量で存在し、かつさらに成分（ｂ）が、液状酵素組成物中に含有される酵素を安定化させるのに有効な量で存在する請求項１の安定剤配合物。４８．前記水に可溶なカップリング剤がエタノール、プロパノール、ブチレングリコール、プロピレングリコール、およびヘキシレングリコールから選ばれ、前記ポリエトキシル化アルキルジアミンがＮ，Ｎ，Ｎ−トリス（２−ヒドロキシエチル）−Ｎ−牛脂アルキル−１，３−ジアミノプロパン、Ｎ，Ｎ，Ｎ−ポリオキシエチレン（１０）−Ｎ−牛脂アルキル−１，３−ジアミノプロパン、およびＮ，Ｎ，Ｎ−ポリオキシエチレン（１５）−Ｎ−牛脂アルキル−１，３−ジアミノプロパンから選ばれ、かつ前記アミンオキシドがビス（２−ヒドロキシエチル）やし油アルキルアミンオキシド、ビス（２−ヒドロキシエチル）牛脂アルキルアミンオキシド、ジメチルやし油アルキルアミンオキシド、ジメチル牛脂アルキルアミンオキシド、およびジメチルヘキサデシルアミンオキシドから選ばれる請求項４７の安定剤配合物。４９．前記水に可溶なカップリング剤がエタノール、ヘキシレングリコールまたはそれらの混合物であり、前記ポリエトキシル化アルキルジアミンが牛脂アルキルの（Ｎ，Ｎ，Ｎ−ポリオキシエチレン（１３）−Ｎ−牛脂アルキル−１，３−ジアミノプロパン）であり、かつ前記アミンオキシドがビス（２−ヒドロキシエチル）やし油アルキルアミンオキシドである請求項４７の安定剤配合物。