ES2912987T3 - Una composición enzimática de liberación controlada y métodos de uso - Google Patents

Abstract

Una composición en gel que contiene enzimas que comprende al menos una enzima proteolítica que se obtiene del krill antártico, al menos un agente gelificante y al menos un diluyente que comprende un poliol para su uso como un medicamento, en donde la concentración enzimática de la enzima es de 0,01 U/ml a 10 U/ml, donde una unidad (U) de actividad provoca la liberación de 1 μmol de tirosina a partir de un estándar de tirosina, por minuto a 35 °C, en donde dicho poliol se selecciona del grupo que consiste en propilenglicol, etilenglicol, butilenglicol, glicerol y sus mezclas, en donde dicho agente gelificante se selecciona del grupo que consiste en polimetacrilato de glicerilo, acrilato de glicerilo y un copolímero de ácido acrílico de glicerilo, en donde dicho diluyente comprende hasta 5 % en peso de agua.

Description

DESCRIPCIÓN

Una composición enzimática de liberación controlada y métodos de uso

Antecedentes de la invención

1. Campo de la invención

La invención se refiere a composiciones en gel que contienen enzimas, con bajo contenido de agua, capaces de controlar la liberación enzimática y el nivel de actividad enzimática. Más específicamente, la invención se refiere a una composición en gel que contiene enzimas, con bajo contenido de agua, que incluye al menos una enzima proteolítica y el uso de dichas composiciones para el tratamiento de heridas, tratamiento de la piel y diversas aplicaciones de limpieza y antimicrobianas.

2. Descripción de la tecnología relacionada

Las enzimas de krill se conocen como un medio para el tratamiento de heridas, trastornos de la piel e infecciones virales, principalmente debido a su capacidad para degradar rápidamente los contaminantes biológicos en medios alcalinos, neutros o ácidos. Sin embargo, sigue sin describirse un método para suministrar efectivamente la composición enzimática, controlar la liberación enzimática o aumentar el nivel de actividad enzimática.

Las patentes de Estados Unidos núms. 4,801,451 y 4,963,491 y la publicación de solicitud de patente internacional núm.WO 00/49991, cada una describe una mezcla de exopeptidasas y endopeptidasas que se aíslan de una especie de krill antártico, Euphausia superba, para su uso como agente de limpieza y como medio para desbridar tejido necrótico. Estas patentes, sin embargo, no proporcionan un medio efectivo para controlar la liberación de enzimas, optimizar la eficiencia de las enzimas o maximizar la bioactividad enzimática.

Las patentes de Estados Unidos núms. 4,801,451 y 4,963,491; cada una describe que se puede incorporar una variedad de aditivos y portadores en composiciones que contienen enzimas de krill. Los portadores adecuados pueden ser soluciones salinas estériles, acuosas y fisiológicamente aceptables, materiales formadores de gel orgánicos e inorgánicos, por ejemplo, polímeros, aceites de silicona y otras sustancias, y sus mezclas, que proporcionen las propiedades físicas deseadas de la composición. Se mencionan aditivos tales como antimicrobianos, perfumes, diferentes surfactantes aniónicos, catiónicos, zwitteriónicos y neutros (tensioactivos y emulsionantes). Estas patentes también indican que dichos componentes se conocen por su uso en relación con otras composiciones enzimáticas para lavado o desbridamiento enzimático, véase, por ejemplo, la solicitud de patente alemana núm. 2 130833; las solicitudes de patentes británicas núms. 1,280,497; 1,296,901 y 1,573,964; y las patentes de Estados Unidos núms. 3,627,688; 3,855,142; 4,212,761; 4,243,546; 4,242,219; 4,287,082; 4,035,837 y 4,307,081.

Los aditivos de glicol y glicerol se mencionan, por ejemplo, en las patentes de Estados Unidos núms. 3,627,688; 3,855,142 y 4,242,219. Sin embargo, estas patentes no parecen describir que se puede usar glicol o glicerol para regular la actividad enzimática, controlar la liberación de enzimas o mejorar la biodisponibilidad de las enzimas. Las patentes de Estados Unidos núms. 6,030,612 y 6,524,814; y las publicaciones de solicitudes de patentes de Estados Unidos núms. 2006/0134641 y 2005/0025722; cada una describe composiciones que incluyen enzimas multifuncionales derivadas de krill y métodos para usar tales enzimas en el tratamiento de infecciones virales tales como VIH y herpes, infecciones fúngicas e infecciones bacterianas. Estas publicaciones describen la formulación de enzimas de krill en hidrogeles y ejemplifican varias composiciones de hidrogel. Estas publicaciones también mencionan que para la administración oral en forma de cápsula, los diluyentes útiles son la lactosa y los polietilenglicoles de alto peso molecular. También se mencionan los supositorios que son sólidos a temperatura ambiente y se derriten a la temperatura corporal, que pueden contener polietilenglicoles de alto peso molecular. Estas publicaciones también mencionan que los geles, análogos a la formulación de supositorios, se pueden usar por vía vaginal, uretral y rectal.

La buena cicatrización de la herida se caracteriza por una regeneración rápida y completa del tejido dañado. Se ha realizado un esfuerzo considerable en el estudio de los apósitos para heridas con el objetivo de encontrar cuáles son los más efectivos para promover la cicatrización de la herida. El objetivo principal del tratamiento de las heridas necróticas es reducir el tiempo de cicatrización. La primera etapa hacia este objetivo es la eliminación (desbridamiento) del tejido necrótico. El desbridamiento del tejido necrótico es importante porque el tejido necrótico alberga bacterias y evita la cicatrización. Es preferible el desbridamiento selectivo, ya que elimina selectivamente el tejido necrótico sin retirar el tejido sano.

En la actualidad, el desbridamiento selectivo incluye determinadas preparaciones tópicas de enzimas proteolíticas tales como estreptoquinasa-estreptodornasa, papaína, colagenasa, fibrinolisina-desoxirribonucleasa, que disuelven o digieren esfacelos y escaras necróticas. En general, los procedimientos de desbridamiento enzimático disuelven sólo los esfacelos necróticos muertos. Dado que los tejidos viables están protegidos de la degradación enzimática por inhibidores de proteasa; las células vivas en el lecho de la herida y alrededor del área de la úlcera no se ven afectadas.

Recientemente ha habido una tendencia a pasar de apósitos pasivos para heridas a apósitos activos para heridas que contienen sustancias que tienen un efecto tanto en la limpieza como en el proceso de cicatrización. Los avances en los polímeros producen los cambios más significativos en los apósitos para el cuidado de heridas, ya que factores tales como la permeabilidad al vapor de agua y al oxígeno, la impermeabilidad bacteriana y la absorción selectiva podían tenerse en cuenta en los nuevos apósitos, así como también poder abordar requisitos específicos tales como la adaptabilidad, la no adherencia y adhesividad. Esta familia de productos poliméricos incluye espumas, películas, hidrogeles e hidrocoloides. Los apósitos para heridas también se combinan con materiales portadores biodegradables tales como colágeno, queratina, gelatina, carbohidratos o derivados de la celulosa. Los apósitos también se combinan con numerosas composiciones farmacológicas y/o antibióticas.

Las enzimas proteolíticas se usan corrientemente en ungüentos y aerosoles. Típicamente, solo están activos durante un período de tiempo limitado y, por lo tanto, deben volver a aplicarse varias veces al día. Para el tratamiento de heridas, esto requeriría frecuentes cambios de vendaje, lo que no se desea en vista de la mano de obra que se requiere, la incomodidad del paciente y las frecuentes intrusiones en el paciente.

La patente de Estados Unidos núm. 3,296,094 describe soluciones acuosas de enzimas proteolíticas que retienen su actividad incluso después de períodos prolongados de almacenamiento. Estas composiciones se estabilizan con colágeno y glicerol parcialmente hidrolizados y solubilizados. La cantidad de glicerol que se requiere para la estabilización en esta composición es de 35 % a 60 % en peso de la composición total.

La patente de Estados Unidos núm. 5,830,449 describe una composición para aplicación tópica que contiene al menos una enzima y al menos un poliol, que se caracteriza porque el poliol está presente en una cantidad que varía de 30 a 99,99 % en peso, con relación al peso total de la composición. Opcionalmente, la composición comprende al menos un agente estructurante que se elige entre polímeros acrílicos, polímeros metacrílicos y aceites. Esta composición se propone con el fin de prevenir la pérdida de actividad de las enzimas proteolíticas cuando se exponen al agua durante un período prolongado.

Las enzimas derivadas de krill son inestables y susceptibles a la degradación en medios predominantemente a base de agua, lo que da como resultado una disminución de la actividad enzimática con el tiempo. Por lo tanto, existe la necesidad de reducir la descomposición enzimática de krill para proporcionar composiciones estables al almacenamiento que contengan enzimas de krill, así como también para mejorar la efectividad de las composiciones que contienen enzimas de krill.

Resumen de la invención

Una modalidad de la presente invención proporciona una composición en gel que contiene enzima y un diluyente que contiene poliol para proporcionar una liberación controlada de la actividad enzimática a lo largo del tiempo y/o una duración prolongada de la actividad enzimática en diversas aplicaciones de la composición enzimática. El componente diluyente puede contener opcionalmente hasta aproximadamente 5 % en peso de agua.

Otras modalidades de la invención proporcionan métodos para usar composiciones en gel que contienen enzimas en el cuidado de heridas, cuidado de la piel, tratamiento de enfermedades e infecciones virales, esterilización y asistencia en trasplantes.

Estos y otros objetos, ventajas y aspectos de la invención se harán evidentes a la luz de la siguiente descripción detallada de determinadas modalidades de la invención.

Breve descripción de las figuras

La Figura 1 es un gráfico de la actividad enzimática frente al tiempo para soluciones en gel de enzimas de krill.

Las Figuras 2(a)-(c) son gráficos de la actividad enzimática frente al contenido de agua en el día 0 para composiciones en gel que contienen uno de los glicoles de etileno, propileno y butileno.

Las Figuras 3(a)-(c) son gráficos de la actividad enzimática frente al contenido de agua en el día 7 para composiciones en gel enzimático que contienen uno de los glicoles de etileno, propileno y butileno.

Las Figuras 4(a)-(c) son gráficos de la actividad enzimática frente al contenido de agua en el día 14 para composiciones en gel enzimático que contienen uno de los glicoles de etileno, propileno y butileno.

Las Figuras 5(a)-(c) son gráficos de la actividad enzimática frente al contenido de agua en el día 48 para composiciones en gel enzimático que contienen uno de los glicoles de etileno, propileno y butileno.

Las Figuras 6(a)-(c) son gráficos de la actividad enzimática frente al contenido de agua en el día 56 para composiciones en gel enzimático que contienen uno de los glicoles de etileno, propileno y butileno.

Las Figuras 7(a)-(c) son tablas de actividad enzimática y contenido de agua para composiciones en gel que contienen uno de los glicoles de etileno, propileno y butileno en los días 0, 7, 14, 48 y 56.

Descripción detallada de las modalidades preferidas

Con fines ilustrativos, los principios de la presente invención se describen con referencia a varias modalidades ilustrativas de la misma. Aunque determinadas modalidades de la invención se describen específicamente en la presente descripción, un experto en la técnica reconocerá fácilmente que los mismos principios se aplican igualmente y pueden emplearse en otras composiciones y métodos. Antes de explicar en detalle las modalidades que se describen de la presente invención, debe entenderse que la invención no se limita en su aplicación a los detalles de cualquier modalidad particular que se muestra. La terminología usada en la presente descripción tiene fines de descripción y no de limitación. Además, aunque determinados métodos se describen con referencia a determinadas etapas que se presentan en la presente descripción en determinado orden, en muchos casos, estas etapas se pueden realizar en cualquier orden, como puede apreciar un experto en la técnica, y los métodos no se limitan al arreglo particular de las etapas que se describen en la presente descripción.

La invención se dirige a composiciones en gel que contienen enzimas y métodos para el tratamiento de heridas, cuidado de la piel, tratamiento de enfermedades, tratamiento de infecciones virales, esterilización y asistencia en trasplantes mediante el uso de composiciones en gel que contienen enzimas. La composición en gel que contiene enzimas se puede adaptar para proporcionar una liberación enzimática controlada y/o un nivel de actividad enzimática aumentado. La composición comprende al menos una enzima, al menos un agente gelificante o estructurante y al menos un componente diluyente. También se pueden incluir opcionalmente, aceleradores y/o conservantes convencionales.

Cualquier enzima, preferentemente al menos una enzima proteolítica, y con mayor preferencia al menos una enzima derivada de kril, puede encapsularse en la composición en gel. La composición en gel es compatible con todas las enzimas y funciona uniformemente para controlar la liberación enzimática y/o aumentar la actividad enzimática. En general, una concentración enzimática adecuada puede variar de aproximadamente 0,01 U/ml a aproximadamente 10 U/ml y, con mayor preferencia, puede variar de aproximadamente 0,1 U/ml a aproximadamente 6 U/ml. Una medida de una unidad de actividad es que una unidad (U) de actividad provoca la liberación de 1 pmol de tirosina a partir de un patrón de tirosina, por minuto a 35 °C. También pueden emplearse otras medidas convencionales de unidades de actividad para enzimas. La concentración de enzimas en la composición puede depender de la biodisponibilidad enzimática que se requiere de la composición en gel. La composición enzimática puede usarse en una cantidad correspondiente al nivel de actividad que se desea de la composición en gel para la aplicación particular. El nivel de actividad que se desea puede determinarse opcionalmente durante un período de tiempo que se selecciona, en dependencia de la aplicación particular de la composición en gel.

Las enzimas de krill adecuadas se describen, por ejemplo, en las patentes de Estados Unidos núms. 6,524,814 y 5,958,406, cuyas descripciones se incorporan en la presente como referencia para una descripción de enzimas de krill adecuadas. Las enzimas de krill también pueden derivarse del krill antártico mediante el uso del método estándar de separación y desorción, o se puede usar Krillase® como fuente de enzimas de krill. En general, una concentración enzimática krill adecuada puede variar de aproximadamente 0,01 U/ml a aproximadamente 10 U/ml y, con mayor preferencia, puede variar de aproximadamente 0,1 U/ml a aproximadamente 6 U/ml, donde una unidad (U) de actividad provoca la liberación de 1 pmol de tirosina a partir de un patrón de tirosina, por minuto a 35 °C. La concentración de enzimas de krill en la composición puede depender de la biodisponibilidad enzimática requerida de la composición en gel. La composición de enzima de krill puede usarse en una cantidad que corresponde al nivel de actividad que se desea de la composición en gel para la aplicación particular. El nivel de actividad que se desea puede determinarse opcionalmente durante un período de tiempo que se selecciona, en dependencia de la aplicación particular de la composición en gel.

La composición en gel que contiene enzima comprende un agente gelificante o estructurante, que puede incluir cualquier agente gelificante o estructurante farmacéuticamente aceptable, preferentemente polimetacrilato de glicerilo, acrilato de glicerilo y/o un copolímero de ácido acrílico.

El componente diluyente puede incluir uno o más polioles, tales como, por ejemplo, propilenglicol, etilenglicol, butilenglicol, glicerol y sus mezclas. El componente de poliol del diluyente funciona, al menos en parte, para controlar la liberación de actividad del compuesto enzimático. En los ejemplos más abajo, se muestra que un gel que contiene glicol que tiene hasta 5 % en peso de agua en peso en el componente diluyente muestra una liberación controlada de actividad enzimática.

El componente diluyente puede contener hasta 5 % en peso de agua. Con mayor preferencia, los diluyentes para las composiciones en gel contienen hasta 3 % en peso de agua y, con la máxima preferencia, hasta 2 % en peso de agua. El contenido máximo de agua de un componente diluyente particular dependerá del diluyente particular que se emplea, así como también del nivel de actividad enzimática que se desea y/o la duración que se desea de la actividad enzimática. La actividad enzimática puede medirse indirectamente determinando la degradación del sustrato (gelatina) a lo largo del tiempo a través de la perfilometría.

Debido al efecto que se proporciona por el diluyente que contiene poliol, no es necesario secar completamente la enzima durante la preparación enzimática. Por ejemplo, cuando se trabaja con enzimas de krill, el método convencional de liofilización puede reemplazarse con una técnica de reducción del contenido de agua de la enzima y luego diluirla con un poliol. La actividad atenuada tras la rehidratación es tanto sorprendente como significativa. Con el tiempo, las composiciones de enzimas de krill rehidratadas demuestran un nivel efectivo de actividad enzimática y el nivel de actividad depende, hasta cierto punto, de una o ambas de la concentración de enzima y la selección del poliol. Esto permite al formulador adaptar las composiciones enzimáticas a las necesidades específicas de aplicaciones particulares.

Para aumentar la potencia y la actividad enzimática, se pueden incluir en la composición enzimática aceleradores convencionales adecuados, tales como iones metálicos tales como zinc u otros aditivos. Por ejemplo, la adición de urea da como resultado un aumento significativo de la actividad enzimática, que varía entre 20-30 %.

Opcionalmente, la composición puede incluir al menos un conservante tal como un conservante estándar farmacéuticamente aceptable. Los conservantes adecuados incluyen metilparabeno, etilparabeno, propilparabeno y/o polihexametilenbiguanida.

La incorporación de diluyentes de polioles, tales como glicoles o gliceroles, funciona para controlar la liberación enzimática. El mecanismo de liberación controlada del diluyente que contiene poliol puede emplearse para suministrar una actividad enzimática sustancialmente constante durante un período de tiempo prolongado, siempre y cuando el contenido de agua del diluyente se mantenga a un nivel adecuadamente bajo. Si bien no deseamos limitarnos a una teoría particular, los experimentos sugieren que el glicol y/o el glicerol se asocian con los sitios activos de la enzima lo que hace que estos sitios activos se vuelvan inactivos ya sea por formación de complejos químicos o provocando cambios conformacionales reversibles en la proteína que inactiva la proteasa. Cuando se colocan en agua, el glicol y/o el glicerol parecen disociarse lentamente de la enzima o al menos disociarse parcialmente de la enzima, lo que proporciona actividad enzimática adicional disponible con el tiempo, de esta manera da como resultado una actividad enzimática atenuada.

Además de mantener la estabilidad enzimática y controlar la actividad, el mecanismo de liberación controlada puede usarse para aumentar el nivel global de actividad enzimática, cuando se integra con el tiempo, de esta manera se maximiza la eficiencia enzimática. El tipo de poliol que se incorpora en la composición enzimática puede usarse para controlar y aumentar el nivel de actividad enzimática. Los experimentos muestran que diferentes glicoles pueden influir en la liberación y duración de la actividad enzimática en diferentes grados. Por ejemplo, las Figuras 7(a)-7(c) muestran que la actividad enzimática de una composición que incluye etilenglicol es diferente a la del propilenglicol, que, a su vez, es diferente a la del butilenglicol. Al cambiar la composición de enzima-poliol, es posible lograr diferentes grados y/o duraciones de liberación enzimática. Por lo tanto, es posible personalizar las composiciones en gel de enzimas de krill al seleccionar cuidadosamente el componente de poliol del diluyente que se incorporará en la composición enzimática.

Las modalidades preferidas de la composición en gel, sin la enzima, incluyen de aproximadamente 1 a aproximadamente 50 por ciento en peso del agente gelificante y de aproximadamente 50 a aproximadamente 99 por ciento en peso del diluyente. Con mayor preferencia, las modalidades de la composición en gel, sin la enzima, contienen típicamente de aproximadamente 20-30 por ciento en peso de un agente gelificante y de aproximadamente 70 a aproximadamente 80 por ciento en peso del diluyente.

Opcionalmente, el gel que contiene la enzima se compone de aproximadamente 0,02 a aproximadamente 0,4 por ciento en peso de conservantes. La composición enzimática no se limita a los compuestos anteriores. Las formulaciones pueden incluir elementos adicionales tales como aceite mineral, aceite de almendras, emulsionantes y agentes capaces de gelificar un compuesto de glicol y/o glicerol, aceleradores y/o cualquier otro aditivo.

Las composiciones en gel que contienen enzimas de acuerdo con la presente invención se caracterizan por su capacidad para controlar la liberación enzimática y, de esta manera, mantener la actividad enzimática a lo largo del tiempo. De esta manera, en una modalidad, las composiciones en gel adecuadas mantienen al menos 65 % de la actividad enzimática inicial después de 56 días. Con mayor preferencia, las composiciones en gel adecuadas mantienen al menos 75 % de la actividad enzimática inicial después de 56 días. Con la máxima preferencia, las composiciones en gel adecuadas mantienen al menos 90 % de la actividad enzimática inicial después de 56 días. La actividad enzimática sostenida y la estabilidad también se pueden observar en composiciones en gel que incorporan otras enzimas proteolíticas o cualquier otra enzima.

En otra modalidad, las nuevas composiciones en gel que contienen enzimas de acuerdo con la presente invención se caracterizan por su capacidad para controlar la liberación enzimática y alcanzar de esta manera un nivel deseado de actividad enzimática durante un período de tratamiento o uso. Por ejemplo, en las Figuras 7(a)-7(c) se puede ver que los geles que contienen enzimas de krill que se fabrican con 6 U de actividad de enzimas de krill se pueden personalizar para suministrar en cualquier parte de aproximadamente 0,5-6,0 unidades de actividad en un momento determinado, en dependencia de la composición diluyente particular que se emplea. Esto permite una adaptación simplificada de la actividad de las composiciones en gel, ya que las fuentes estándar de enzimas de krill se pueden diluir con diferentes diluyentes para proporcionar diferentes niveles de actividad enzimática, según se desee, sin necesidad de medir o determinar las unidades de actividad de la fuente de enzimas que se añaden a la composición.

Por lo tanto, el diluyente se puede seleccionar, por ejemplo, para suministrar de aproximadamente 10 % a aproximadamente 90 % de la actividad enzimática del material de origen, alternativamente, de aproximadamente 25 % a aproximadamente 85 % de la actividad enzimática del material de origen, y, opcionalmente, de aproximadamente 50 % a aproximadamente 80 % de la actividad enzimática del material de origen. Una ventaja de este aspecto de la invención, que se demuestra en las Figuras 7(a)-7(c) es que la actividad enzimática que se suministra típicamente permanece relativamente constante a lo largo del tiempo, de esta manera se reduce la variabilidad del tratamiento enzimático. La actividad enzimática constante y los niveles de actividad enzimática adaptados también se pueden observar en composiciones en gel que incorporan otras enzimas proteolíticas o cualquier otra enzima.

Cuando la nueva composición en gel que contiene enzima incorpora al menos una enzima derivada de krill, se puede lograr un desbridamiento rápido y eficiente de las necrosis y/u otros efectos enzimáticos beneficiosos. Las composiciones en gel enzimático que se derivan de krill pueden incorporarse en apósitos, geles, espumas u otros mecanismos de suministro terapéutico. La composición en gel enzimática también puede suministrarse en un sitio de tratamiento por medio de inyección, ingestión o aplicación transdérmica, tal como aplicación transmucosa o tópica. Cuando se requiere la penetración intradérmica, se pueden usar aceleradores, parches intradérmicos u otros potenciadores de la penetración, tales como la iontoforesis.

En una modalidad, la composición en gel que contiene enzimas de krill es para administrar enzimas de krill de liberación controlada al menos una vez al día. El gel también se puede aplicar cada dos días, especialmente durante la cicatrización de la herida. Como resultado del mecanismo de liberación enzimática controlada, los geles que contienen enzimas de krill tienen varias aplicaciones. Al incorporar enzimas de krill en un gel de liberación controlada, se puede mejorar el desbridamiento del tejido. Las composiciones en gel que contienen enzimas de krill de acuerdo con la presente invención son eficientes en la eliminación de tejido desvitalizado en diferentes tipos de úlceras necróticas (venosas/arteriales, traumáticas/quirúrgicas), decúbito, quemaduras, cirugía plástica y otras lesiones de tejidos profundos como abscesos, fístulas, pleuritis, empiema, hematotórax, osteomielitis, otitis, sinusitis, úlceras tópicas (lepra, leishmaniasis).

Se prevé que las composiciones en gel que contienen enzimas de krill de la presente invención también se pueden usar para tratar trastornos de la piel, heridas, determinadas enfermedades e infecciones virales. El tratamiento de los trastornos de la piel y la mejora de la apariencia de la piel puede incluir el tratamiento de trastornos dermatológicos como el acné o la psoriasis. El tratamiento de heridas, enfermedades e infecciones virales puede incluir el tratamiento de infecciones fúngicas, infecciones bacterianas, infecciones parasitarias, hemorroides, cicatrización de la córnea, placa dental, gingivitis, periodontitis, estomatitis fúngica, aftas o úlceras bucales, mucositis oral, leucoplasia, queilitis, fibrosis quística, coágulos de sangre, trastornos inmunológicos, enfermedades autoinmunitarias, cáncer, herpes y otras infecciones virales tales como el herpes zoster o la varicela. Como microbicida tópico, podría prevenir la transmisión rectal y vaginal del VIH y también proteger contra otros trastornos de transmisión sexual tales como la clamidia o la gonorrea. Adicionalmente, la composición también puede ser útil como agente de limpieza para esterilizar instrumentos médicos, tales como endoscopios, lentes de contacto y catéteres, y como un complemento de diversas soluciones de trasplante de órganos, tejidos o células antes de la implantación.

Un gel de enzimas de krill también es ventajoso en su capacidad para aplicarse tópicamente a la piel. A diferencia de los lavados abrasivos u otros métodos mecánicos/químicos, la exfoliación enzimática es una alternativa aceptable para aquellos pacientes que buscan una piel más suave y tersa. Esta metodología natural, efectiva y no irritante es beneficiosa para el rejuvenecimiento de la piel, la piel seca, el acné, la hiperpigmentación y la reducción de cicatrices. Las composiciones en gel que contienen enzimas de krill de la invención se pueden usar en una variedad de preparaciones tópicas (cremas, limpiadores, máscaras) para exfoliar suavemente la piel dejando una superficie lisa y tersa.

Una cuestión a considerar en relación con el tratamiento enzimático o peeling es la biodisponibilidad de la enzima. Un vehículo adecuado debe permitir una liberación suficiente de la enzima junto con una penetración suficiente de la enzima en la piel. También es importante que la actividad enzimática permanezca predecible y que se controle la liberación enzimática. Además, la biodegradabilidad, toxicidad o inmunogenicidad de tal vehículo no debería provocar problemas.

El presente poliol logra una formulación fisiológicamente compatible que asegura propiedades convenientes de liberación de enzimas en la piel. La combinación de enzimas de krill con dicho vehículo mejora su estabilidad y rendimiento al proporcionar un sistema seguro y efectivo para el suministro tópico.

Ejemplos 1-2

Las composiciones enzimáticas ilustrativas incluyen:

Composición enzimática 1

5 % de polimetacrilato de glicerilo

94 % de propilenglicol

0,13 % de metilparabeno

0,04 % de propilparabeno

enzimas que se derivan de krill que corresponden al nivel de actividad que se desea Composición enzimática 2

5 % de copolímero de acrilato de glicerilo/ácido acrílico

76 % de propilenglicol

15 % de glicerol

0,13 % de metilparabeno

0,04 % de propilparabeno

enzimas que se derivan de krill que corresponden al nivel de actividad que se desea

Métodos de producción

Para mantener la composición natural de las enzimas de krill durante la extracción y la purificación, la materia prima se desengrasa, se extrae mediante el uso de una separación de equilibrio de dos fases, se ultrafiltra y se excluye el tamaño mediante el uso de cromatografía en gel. A continuación, se reconstituye el polvo liofilizado estéril resultante. Los métodos ilustrativos para producir la composición enzimática incluyen:

Método de extracción y preparación de Krillase®

Los extractos de krill antártico (Euphausia superba) se preparan congelando primero el krill antártico a -30 °C. A continuación, el krill congelado se descongela, homogeneiza y desengrasa. La mezcla se centrifuga (5000 x g durante 30 min a 4 °C). El sobrenadante, un extracto crudo, se concentra en un concentrador Amicon™ de fibra hueca equipado con un filtro UM-10 y se filtra a través de un filtro de membrana Millipore de 0,45 |jm. A continuación, el extracto concentrado se aplica a una columna Sephadex G-75, que se equilibra con una solución de Tris-HCl 0,05 M que tiene un pH de 7,5. A lo largo de este proceso, la absorbancia se monitorea continuamente a 280 nm y las fracciones se recogen y analizan para determinar la actividad de tripsina, tal como la hidrólisis de TAME y el éster metílico de p-tolueno-sulfonil-L-arginina.

[0044] La actividad proteolítica se establece con caseína desnaturalizada como un sustrato. Después de 20 minutos, se detiene la reacción de Tris-HCl 0,1 M, pH 7,5 mediante la adición de 5 % de ácido tricloroacético. Después de una centrifugación a alta velocidad, se elimina el sedimento de la mezcla y se mide el sobrenadante resultante con un reactivo de fenol de Folin-Ciocalteau y un punto de referencia de tirosina.

Método para fabricar la composición enzimática 1

Mezcla A: Se combinan 5 g de polimetacrilato de glicerilo con 80 g de propilenglicol y se calientan a 80 °C con agitación rápida hasta que da como resultado una solución transparente. A continuación, la mezcla se enfrió a 50 °C. Mezcla B: Se combinan 0,13 g de metilparabeno con 0,04 g de propilparabeno en 14 g de solución de propilenglicol con agitación rápida a temperatura ambiente.

La Mezcla A y la Mezcla B se combinan con agitación rápida a temperatura ambiente. A continuación, la mezcla combinada se enfría a 30 °C con agitación constante. Se añaden enzimas de krill liofilizadas al gel anhidro en una cantidad suficiente para dar como resultado una actividad proteolítica de 6 U/g de gel terminado. A continuación, la mezcla de gel se agita eficientemente a temperatura ambiente y se deja reposar a temperatura ambiente durante al menos 24 horas.

Método para fabricar la composición enzimática Producción 2

Mezcla A: Se combinan 8 g de copolímero de acrilato de glicerilo/ácido acrílico con 76 g de propilenglicol y se calientan a 80 °C con agitación rápida hasta que da como resultado una solución transparente. La mezcla A se deja enfriar a 50 °C.

Mezcla B: Se combinan 0,13 g de metilparabeno con 0,04 g de propilparabeno en 15 g de glicerol con agitación rápida a temperatura ambiente.

Se añade la Mezcla B a la Mezcla A con agitación rápida. A continuación, la mezcla combinada se deja enfriar a 30 °C con agitación constante. Se añaden enzimas de krill liofilizadas al gel anhidro en una cantidad suficiente para dar como resultado una actividad proteolítica de 6 U/g de gel terminado. La mezcla de gel se agita eficientemente a temperatura ambiente y se deja reposar a temperatura ambiente durante al menos 24 horas.

Ejemplo 3

Para preparar enzimas de krill a partir de krill antártico, el krill congelado se homogeneiza en agua o tampón, preferentemente que contiene un agente antimicrobiano. El sobrenadante, que se puede diluir si es adecuado, se puede fraccionar luego mediante cromatografía de intercambio iónico (preferentemente cromatografía de intercambio aniónico), filtración en gel, cromatografía de cromatoenfoque u otros procesos de separación tradicionales. Preferentemente, sin embargo, alguna parte del proceso de separación incluirá cromatografía de afinidad mediante el uso de una matriz que tiene moléculas unidas de un inhibidor de tripsina, tal como un inhibidor de tripsina de soja. A continuación, las enzimas que se derivan de krill se desorben de dicha matriz mediante la aplicación de condiciones que desestabilizarán la interacción entre la enzima y el inhibidor. Tales condiciones incluyen un alto contenido de sal, un pH bajo o la presencia de desnaturalizantes tales como la urea. Para añadir otro proceso selectivo, la condición desestabilizadora se puede aplicar a la matriz de forma incremental, como en un gradiente. Cuando se usa la cromatografía de afinidad, preferentemente se sigue con una cromatografía que usa una matriz que tiene moléculas unidas a la enzima multifuncional usada en la invención. Esta etapa de afinidad enzimática sirve para eliminar moléculas del inhibidor de tripsina que se filtran de la primera matriz de afinidad. A continuación, se determina la actividad de la proteasa incubando una preparación enzimática con caseína (concentración: 1 % p/v) a 30 °C durante 20 horas y midiendo la liberación de aminoácidos o péptidos (que se puede medir por el aumento de grupos amino que se determina colorimétricamente). Las unidades de caseína se definen en Biochem. J., 173: 291-298, 1978 (mediante el uso de azocaseína como sustrato). Alternativamente, la actividad de proteasa tríptica se mide contra tirosina-arginina-metil-éster ("TAME"). O, la actividad tríptica puede medirse mediante el uso de Benzoil-Val-Gly-Arg-p-NO.sub.2-anilida como sustrato. La actividad quimotríptica se puede medir mediante el uso de Succinil-Ala-Ala-Pro-Phe-p-NO.sub.2-anilida como sustrato. La actividad de elastasa se puede medir mediante el uso de Boc-Ala-Ala-Pro-Ala-p-NO.sub.2-anilida como sustrato.

Ejemplo 4

La Krillase® puede prepararse de extractos congelados de krill antártico (Euphausia superba) a -30 °C. La materia prima de krill congelada se descongela, homogeneiza y desengrasa. La mezcla se centrifuga (5000 x g durante 30 min a 4 °C); El sobrenadante, un extracto crudo, se concentra en un concentrador Amicon™ de fibra hueca equipado con un filtro UM-10 y se filtra a través de un filtro de membrana Millipore de 0,45 pm. A continuación, el extracto concentrado se aplica a una columna Sephadex G-75, que se equilibra con una solución de Tris-HCl 0,05 M que tiene un pH de 7,5. A lo largo de este proceso, la absorbancia se monitorea continuamente a 280 nm y las fracciones se recogen y analizan para determinar la actividad de tripsina, por ejemplo, al determinar la hidrólisis de TAME y ptolueno-sulfonil-L-arginina metil éster.

Ejemplo 5

Se estudiaron los niveles de actividad de Krillase® que se incorporan en varios geles en combinación con diluyentes que contienen glicol. Los diluyentes incluyen etilenglicol, propilenglicol y butilenglicol que contienen 0 %, 1 %, 2 %, 5 % y 10 % en peso de agua. Los geles se mantienen en una cámara a 35 °C durante un período de 2 semanas durante las cuales se mide la actividad enzimática a intervalos regulares. La Figura 1 muestra que los geles que tienen hasta un 5 % en peso de agua mantienen consistentemente niveles de actividad de 1,75-2,5 U/ml en comparación con niveles de actividad decrecientes medidos en geles que tienen más de un 5 % en peso de agua. Ejemplo 6

Se estudia la estabilidad enzimática y se encuentra que mejora en geles de glicol que contienen hasta un 5 % en peso de agua. Este experimento estableció además la viabilidad de un vehículo de suministro de glicol para Krillase® y demuestra que Krillase® no se ajusta a las propiedades de proteasa generalmente esperadas. Todos los porcentajes en este ejemplo se dan como porcentajes en peso.

En este experimento, un conjunto de 6 U/ml de muestras de Krillase®, que contienen 60 unidades de actividad (AU)/10 ml de Krillase® se disuelven en 15 diluyentes diferentes y se mantienen en una cámara a 35±0,5 °C. Los 15 diluyentes incluyen etilenglicol, propilenglicol y butilenglicol, que contienen por separado 0 %, 1 %, 2 %, 5 % y 10 % en peso de agua. Los ensayos de actividad enzimática se miden regularmente durante un período de 8 semanas, tiempo durante el cual se establece que la actividad enzimática está relacionada con la cantidad de agua en el diluyente.

Las soluciones de Krillase® se preparan el día 0 y subsecuentemente se colocan en una cámara de estabilidad a 35 °C. En el día 0, se analiza la actividad enzimática de las soluciones mediante perfilometría mediante el uso de caseína como sustrato proteico. Una alícuota de solución de glicol de Krillase® se diluye con una solución acuosa de tampón TRIS 0,1 M. Aunque se espera que la dilución liberaría el Krillase® de la solución de glicol, la actividad Krillase®, sin embargo, permanece sustancialmente proporcional al contenido de agua de la solución original. Las Figuras 2(a)-2(c) muestran que todas las soluciones de prueba demuestran una activación/liberación completa de la enzima cuando se diluyen al 10 % del contenido de agua. Esto sugiere que los glicoles pueden unirse fuertemente a Krillase® y formar un complejo que no se solvata ni se disocia fácilmente simplemente por dilución con agua.

Los resultados sugieren que la liberación de Krillase® se relaciona con la naturaleza del glicol. La relación no lineal entre AU/ml y el contenido de agua en las Figuras 2(a)-2(c) demuestra que la actividad enzimática no es simplemente una función de la concentración de agua en la solución. Además, estas figuras muestran que las curvas de datos dependen sigmoidalmente de dos variables independientes, lo que sugiere quizás que, a niveles bajos de agua, se forma un complejo único entre el glicol y la Krillase® que es más estable y menos soluble que un complejo que se forma con mayor contenido de agua. La porción plana inicial de cada curva en las Figuras 2(a)-2(c), que representa el complejo más estable, no muestra relación entre la concentración de agua y la actividad enzimática.

Las Figuras 2(a)-2(c) también muestran que el "punto de ruptura", el punto en el que la actividad proteolítica comienza a aumentar rápidamente en relación con el contenido de agua, varía inversamente con el peso molecular del glicol. Cuanto menor sea el peso molecular del glicol, mayor será la concentración de agua necesaria para evitar la formación del complejo más estable. Entonces, la actividad enzimática puede maximizarse al manipular el peso molecular del glicol. La Tabla 1 muestra los puntos de ruptura en el día 0. Cada uno de los glicoles reduce la actividad o atenúa la actividad enzimática en un grado inversamente proporcional a la longitud de su cadena de carbono.

Tabla 1: Puntos de ruptura para las diversas soluciones de glicol

El día 7, todas las soluciones se prueban de nuevo en cuanto a actividad proteolítica y subsecuentemente se devuelven a la cámara de estabilidad. Las Figuras 3(a)-3(b) muestran los resultados del día 7, con las soluciones de etilenglicol y propilenglicol que tienen un contenido de agua de 5 % o 10 %, pierden una actividad enzimática considerable, en comparación con el día 0. La actividad enzimática de las soluciones de butilenglicol permanece relativamente estable.

Aunque los datos de actividad de las soluciones de etilenglicol y propilenglicol ya no muestran una relación sigmoidea con el contenido de agua, la porción inicial plana de las curvas de actividad aún sugiere la formación de un complejo de glicol-krillasa compacto. Los puntos de ruptura que se observan para estos complejos compactos se enumeran en la Tabla 1. Si bien no se desea limitar a la teoría, la pérdida de actividad enzimática puede deberse a la autodestrucción de la enzima de krill en la solución de glicol. Por lo tanto, se plantea la hipótesis de que las soluciones que pierden una actividad proteolítica significativa con el tiempo no parecen contener enzima que se estabiliza con glicol.

Después de 14 días, se analiza la actividad proteolítica de las soluciones y se devuelven a la cámara de estabilidad. Las Figuras 4(a)-4(c) resumen los resultados. Las soluciones de etilenglicol y propilenglicol pierden toda actividad enzimática cuando la solución se diluye hasta un contenido de agua de 10 %; las soluciones restantes de etilenglicol y propilenglicol permanecen esencialmente sin cambios desde el día 7. Las soluciones de butilenglicol permanecen relativamente estables. La Tabla 1 muestra los puntos de ruptura para estos complejos.

Después de 28 días, se analiza la actividad proteolítica de las soluciones y se devuelven a la cámara de estabilidad. Las Figuras 5(a)-5(c) muestran que las soluciones de etilenglicol y propilenglicol pierden toda actividad enzimática cuando se diluyen a un contenido de agua de 5 % o 10 %, mientras que las soluciones de butilenglicol permanecen relativamente estables. La Tabla 1 muestra los puntos de ruptura y la Figura 10(c) muestra la degradación del complejo de butilenglicol.

Después de 56 días, se analiza la actividad proteolítica de las soluciones y se devuelven a la cámara de estabilidad. Las Figuras 6(a)-6(c) muestran que excepto por lo que podrían ser complejos, todas las soluciones de etilenglicol y propilenglicol pierden toda actividad enzimática. Las soluciones de etilenglicol y propilenglicol adicionales, que tienen un contenido de agua de 2 % o más, pierden toda actividad enzimática; las soluciones de butilenglicol que tienen un contenido de agua de aproximadamente 10 % también pierden toda la actividad enzimática. Las soluciones de butilenglicol, que tienen un contenido de agua de 5 %, también pierden actividad enzimática. Además, todas las soluciones de butilenglicol con un contenido de agua de 2 % o menos permanecen relativamente estables. Los puntos de ruptura correspondientes se muestran en la Tabla 1.

El estudio demuestra que los glicoles de bajo peso molecular no estabilizan significativamente a Krillase® a concentraciones de agua por encima de 2 %, que Krillase® parece formar complejos de glicol-enzima en soluciones que contienen 2 % de agua o menos, que la facilidad de formación y estabilidad de los complejos de glicol-enzima parece ser inversamente proporcional al peso molecular de los glicoles, y que la actividad proteolítica máxima y la duración de la actividad de las formulaciones de Krillase® se pueden ajustar al variar el contenido y el tipo de ingredientes de glicol. Debido a estas propiedades inusuales de Krillase® formulada con varios glicoles, puede ser posible controlar la liberación de enzimas que se derivan de krill con un amplio intervalo de fases líquidas y mezclas. Ejemplo 7 y Ejemplos comparativos A-B

Los experimentos muestran que los glicoles elevan la biodisponibilidad de la enzima de krill. Como se muestra en la Figura 3, una concentración de 3 U/ml de Krillase® se incorpora en una solución salina (Ejemplo Comparativo A), un hidrogel (Ejemplo Comparativo B) y un gel que se formula de acuerdo con esta invención (Ejemplo 5) con un sustrato de película de gelatina delgada estandarizada. La actividad enzimática se cuantifica mediante la descomposición enzimática gradual de la gelatina mediante el uso de la tecnología perfilométrica avanzada, que usa sistemas de medición de superficies ópticas asistidas por computadora para medir perfiles 2D y 3D en base a proyecciones de microespejos digitales. La Figura 3 ilustra que aunque la liberación de enzima más rápida se observa inicialmente en la solución salina y las composiciones que contienen hidrogel, la actividad de la enzima se agota dentro de unas pocas horas. El gel de glicol del Ejemplo 5, en comparación, continúa siendo activo durante al menos 10 horas. Estos hallazgos corroboran además las excelentes propiedades de liberación controlada y sostenida del gel de la presente invención. Por lo tanto, al incorporar Krillase® en un gel de glicol y/o glicerol, la dosis terapéutica de Krillase® puede disminuir sustancialmente mientras se mantiene un nivel conveniente de eficacia durante un período de tiempo.

Ejemplos 8-10 y Ejemplos comparativos C-D

El Ejemplo 21 de la patente de Estados Unidos núm. 6,030,612, (Ejemplo comparativo C), emplea una solución salina que contiene enzima de krill para tratar infecciones dentales. Se tratan 22 pacientes con infecciones/inflamaciones agudas o crónicas de las encías 3 veces al día con una dosis de 5 U/ml de caseína (5 U/ml de solución de enzima de krill). El dolor disminuye después de 20 minutos a 12 horas y las infecciones e inflamaciones se curan dentro de 4 días. Conforme a este plan de tratamiento, es necesario un total de 180 U de solución para el tratamiento (3 ml de solución a 45 U/ml/día x 4 días).

En un experimento separado, Ejemplo comparativo D, se obtienen resultados análogos al tratar a una paciente sana de 40 años con estomatitis aftosa recurrente. Se aplica directamente sobre la lesión 1 cm2 de gasa que se satura con una solución salina que contiene enzima de krill 6 U/ml durante 10 minutos. Durante los primeros 5 minutos, se coloca la mejilla y se mantiene la boca abierta para reducir el contacto con la saliva y la rápida dilución del componente activo. Este procedimiento se repite 3 veces al día durante 7 días hasta la cicatrización. El tratamiento con enzimas de krill resulta en un período de cicatrización más rápido de 7 días en comparación con el tratamiento con placebo de 9 días de una lesión similar en el mismo paciente. Además, el dolor y la incomodidad, que se miden en una escala VAS, se reducen drásticamente dentro de unas pocas horas con el tratamiento con enzimas de krill y se eliminan por completo dentro de tres días. En este estudio clínico, es necesario un total de 378 U de solución para el tratamiento (3 ml/tratamiento a 54 U/día x 7 días).

Los Ejemplos 6-8 emplean un gel de glicol de Krillase® en varios pacientes. En base a estos experimentos, la cantidad total de Krillase®, cuando se usa en forma de gel, puede reducirse al menos por un factor de 10 en comparación con Krillase® en solución salina. Se encuentra que la formulación en gel de Krillase® es más eficiente y efectiva, en comparación con las formulaciones salinas de Krillase®, en el tratamiento de las mismas enfermedades, probablemente debido a un aumento de la biodisponibilidad enzimática en el sitio de tratamiento. Además, las formulaciones de gel son fáciles de aplicar y reducen la incomodidad del paciente con relación a las aplicaciones con gasa de las soluciones de Krillase®.

En el Ejemplo 6, una paciente sana de 18 años con estomatitis aftosa se trata con un gel que contiene 3 U/g de Krillase® tres veces al día y se obtienen resultados que se comparan a los del Ejemplo comparativo D. El dolor se reduce en una escala VAS de 9 a 3 después de 6 horas. El día 2, el dolor se reduce a una puntuación VAS de 3, y el día 3, la puntuación VAS disminuye a 2. Dentro de 7 días, la puntuación VAS se reduce a 1 y la lesión cicatriza por completo. No se observan reacciones adversas. En este estudio, es necesario para el tratamiento 0,5 g/tratamiento a 3 U/día x 3 días, solo un total de 9 U de Krillase®.

En el Ejemplo 7, se trata un paciente varón sano con lesión aftosa recurrente de 2 días de evolución en la mucosa del labio inferior con gel de Krillase®. Se aplica 0,5 g de gel de Krillase®, compuesto por 6 U/g de la composición enzimática 1, 3 veces al día durante 8 días. La puntuación VAS del paciente disminuye de 9 a 5 en menos de un día y disminuye aún más a 2 después de aproximadamente un día. Adicionalmente, el intenso dolor que se asocia con la comida se reduce drásticamente dentro de las 24 horas posteriores al tratamiento. También se observa una marcada reducción clínica del halo de enrojecimiento alrededor de las lesiones y una reducción de la capa de fibrina, un indicador de la cicatrización de la herida. Para el día 3, la puntuación VAS disminuye a menos de 2; el día 5, la puntuación VAS permanece en 0 hasta que la lesión cicatriza completamente. No se observan reacciones adversas. En el Ejemplo 8, se trata un paciente varón joven con lesiones aftosas recientes que se habían formado dentro de las 12 horas en el lado izquierdo del labio inferior con 0,5 g de gel de Krillase®, compuesto por 6 U/g de la composición enzimática 1, definida anteriormente, 3 veces al día durante 5 días. Dentro de los 10 minutos posteriores a la aplicación, el paciente describe un efecto calmante inmediato y casi anestésico. Adicionalmente, dentro de horas de tratamiento, el paciente experimenta una marcada reducción del dolor, pasando de una puntuación VAS de 6 a 4 dentro de 3 horas. El día 4, la puntuación VAS disminuye a 2. Para el día 5, la puntuación VAS se mantiene en 0 hasta que cicatriza por completo; durante ese período, la lesión aún estaba presente en el labio pero estaba recubierta con una superficie epitelial. No se observan reacciones adversas.

En todos los casos, los pacientes informan una reducción drástica del dolor inmediatamente después o durante el primer día de la aplicación de gel de Krillase®. Dicha reducción del dolor se aplica tanto al tratamiento con concentraciones de gel de Krillase® bajas, por ejemplo, 3 U/g, y a concentración de gel Krillase® alta, por ejemplo, 6 U/g. El efecto del gel de Krillase® es más pronunciado en el paciente del Ejemplo 7, que presenta las lesiones aftosas más graves. Generalmente, tales lesiones provocan varios días de dolor. El Ejemplo 6, sin embargo, demuestra que la liberación sostenida de una alta concentración de enzima de krill es capaz de aliviar sustancialmente el dolor, especialmente al comer, en un día. Por lo tanto, los resultados más efectivos se obtienen con geles de Krillase®, en comparación con el enjuague con soluciones de Krillasa. Además, estos estudios también sugieren que los geles que contienen altas concentraciones de enzima, por ejemplo, 6 U/g de la composición enzimática 1, producen un alivio del dolor más rápido.

Ejemplo 11 y Ejemplos comparativos E-F

Los Ejemplos 26-28 de la patente de Estados Unidos núm. 6,030,612, Ejemplo comparativo E, emplea una solución salina que contiene enzima de krill para tratar el herpes genital/labial así como también el zoster. Ocho pacientes con herpes labial se tratan con 3 ml de una enzima de krill de 5 U/ml que contiene solución salina dos veces al día. Después de cinco días, los pacientes están libres de síntomas y el dolor se reduce entre 2 horas y 2 días. Se necesita un total de 150 U de solución salina que contiene enzima de krill para el tratamiento (30 U/día x 5 días). En otro experimento, Ejemplo comparativo F, se trata dos veces al día con una solución de enzimas kril a un paciente varón sano de 62 años con herpes labial recurrente doloroso. Se reconstituye un vial que contiene 60 U/ml con 10 ml de solución salina dando como resultado una concentración final de 6 U/ml. Se aplica una gasa que se satura con dicha solución sobre la lesión durante 10 min. Poco después del primer tratamiento se reduce el dolor. Al día siguiente, el eritema y la inflamación también disminuyen, y después de 3 días, el paciente está libre de síntomas. Se requiere un total de 108 U de solución salina que contiene krill para el tratamiento (6 ml/tratamiento a 36 U/día x 3 días).

En comparación con la solución salina de krill, se encuentra que el gel de glicol de Krillase® es más efectivo en el tratamiento del herpes. En un estudio clínico, Ejemplo 9, se aplican 3 U/g de Krillase® en gel de glicol 3 veces al día a pacientes que padecen herpes. Dentro de 3 días, los pacientes están sin síntomas. Es necesario para el tratamiento 0,5 g gel/tratamiento y 4,5 U/día x 3 días, un total de 13,5 U de Krillase® en gel de glicol. Esto demuestra que la cantidad total/tratamiento con Krillase® cuando se usa en forma de gel puede reducirse al menos en un factor de 10 en comparación con Krillase® en solución salina. Además, se puede usar una liberación sostenida de enzimas para optimizar la biodisponibilidad del fármaco en el sitio de la infección.

Al describir modalidades preferidas de la invención que pretenden ser ilustrativas y no limitativas, se observa que las personas expertas en la técnica pueden realizar modificaciones y variaciones a la luz de las enseñanzas anteriores. Por lo tanto, debe entenderse que se pueden realizar cambios en las modalidades particulares de la invención que se describen que están dentro del alcance y el espíritu de la invención como se describe en las reivindicaciones adjuntas. De esta manera se describe la invención con los detalles y particularidades que requieren las leyes de patentes, el alcance de protección que se pretende se establece en las reivindicaciones adjuntas.

Claims (8)

1. REIVINDICACIONES

   i. Una composición en gel que contiene enzimas que comprende al menos una enzima proteolítica que se obtiene del krill antártico, al menos un agente gelificante y al menos un diluyente que comprende un poliol para su uso como un medicamento, en donde la concentración enzimática de la enzima es de 0,01 U/ml a 10 U/ml, donde una unidad (U) de actividad provoca la liberación de 1 pmol de tirosina a partir de un estándar de tirosina, por minuto a 35 °C, en donde dicho poliol se selecciona del grupo que consiste en propilenglicol, etilenglicol, butilenglicol, glicerol y sus mezclas, en donde dicho agente gelificante se selecciona del grupo que consiste en polimetacrilato de glicerilo, acrilato de glicerilo y un copolímero de ácido acrílico de glicerilo, en donde dicho diluyente comprende hasta 5 % en peso de agua.
2. 2. La composición de conformidad con la reivindicación 1, en donde la composición en gel contiene de aproximadamente 0,1 U/ml a aproximadamente 6 U/ml de dicha enzima de krill.
3. 3. La composición de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones anteriores, que comprende además una cantidad efectiva de un compuesto seleccionado del grupo que consiste en al menos un acelerador, en particular urea, al menos un ion metálico y una mezcla de los mismos para potenciar la actividad enzimática de la composición.
4. 4. La composición de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde dicho diluyente comprende hasta un 3 %, en particular hasta un 2 % en peso de agua.
5. 5. La composición de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones anteriores, que comprende además un conservante, en particular metilparabeno, etilparabeno, propilparabeno y/o polihexametilenbiguanida.
6. 6. La composición de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones anteriores para su uso con un mamífero como microbiocida tópico, en la prevención de la transmisión rectal o vaginal del VIH, en la protección contra otros trastornos de transmisión sexual, en particular contra la clamidia o la gonorrea, en el desbridamiento de tejidos, en la eliminación de tejidos desvitalizados en úlcera necrótica, decúbito, quemadura, cirugía plástica u otras lesiones de tejidos profundos, en particular abscesos, fístulas, pleuritis, empiema, hematotórax, osteomielitis, otitis, sinusitis, o úlceras tópicas, en particular en la lepra o leishmaniasis, en la reducción de cicatrices, en esterilización, o para asistencia a los trasplantes, o para su uso en el tratamiento de la hiperpigmentación, una herida, una infección, una herida necrótica, un trastorno de la piel, en particular acné o psoriasis, una infección fúngica, una infección bacteriana, una infección viral, una infección parasitaria, una hemorroide, cicatrización de la córnea, placa dental, gingivitis, periodontitis, estomatitis fúngica, aftas, llaga ulcerosa, mucositis oral, leucoplasia, queilitis, fibrosis quística, coágulos de sangre, trastornos inmunológicos, una enfermedad autoinmunitaria, cáncer, herpes, herpes zoster o varicela de un mamífero.
7. 7. La composición de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde la composición es una composición para aplicarse por medio de inyección, ingestión o penetración intradérmica o por aplicación transdérmica, transmucosa o tópica.
8. 8. La composición de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde la composición se incorpora en un apósito, un gel, una espuma o un parche intradérmico.