CZ136295A3

CZ136295A3 - Stabilized liquid enzyme mixtures

Info

Publication number: CZ136295A3
Application number: CZ951362A
Authority: CZ
Inventors: Percy A Jaquess
Original assignee: Buckman Labor Inc
Priority date: 1992-11-30
Filing date: 1993-10-29
Publication date: 1996-03-13
Also published as: EP0670894A1; ATE229568T1; SK70495A3; FI952610A; NO952120D0; PT670894E; JPH08505766A; DE69332565D1; CA2150465C; DE69332565T2; US5356800A; ES2188607T3; AU681609B2; ZA938655B; BR9307700A; WO1994012623A1; AU5539594A; CA2150465A1; JP2908879B2; NO952120L

Description

Předložený vynález se týká nových prostředků pro stabilizování jednoho nebo více enzymů obsažených v kapalných enzymových směsích. Tyto stabilizující prostředky mohou prodloužit skladovatelnost a životnost během skladování kapalných enzymových směsí. dokonce za vysokých a nízkých teplot. Vynález se také týká stabilizovaných kapalných enzymových směsí. Dále se vynález týká nových způsobů stabilizování kapalných enzymových směsí.

Dosavadní stav techniky

Použití enzymů a kapalných enzymových směsí v průmyslu a na obchodním trhu prudce vzrostl během několika posledních let. Jak je dobře známo, enzymy mohou být kyselé, alkalické nebo neutrální, v závislosti na rozsahu pH. ve kterém jsou aktivní. Bylo pozorováno, že všechny tyto typy enzymů jsou užitečné ve vztahu k předloženému vynálezu.

Mnoho enzymů a kapalných enzymových směsí je spojeno s kapalnými detergenty a používá se jako rozpouštěcí a čistící prostředky. Dále ve spojení s kapalnými detergenty se enzymy a kapalné enzymové směsi také používají v řadě různých komerčních a průmyslových oblastí. ve kterých jsou nyní používány různé druhy enzymových tříd.

Proteasy jsou dobře známou třídou enzymů často používané při různých průmyslových aplikacích, kde hydrolyzují peptidové vazby v proteinech a proteinových substrátech. Komerčně se nejvíce užívají proteasy v průmyslu čistírenských detergentů, kde pomáhají odstranit skvrny proteinového původu jako jsou skvrny od krve nebo vajec, a při výrobě sýra. kde pomáhají při sýření mléka. Proteasy se rovněž používají jako prostředky pro zkřehčení jídla, pro změkčování kůže. pro pozměňování potravinových složek a vývoj aromatických příchutí. Kapalné enzymové směsi obsahující alkalické proteasy jsou rovněž užitečné jako dispergační prostředky bakteriálních filmů a povlaků z řas a hub ve vodách chladících věží a v zadržovacích jezerech pro kapaliny z kovoprůmyslu.

Proteasy mohou být charakterizovány jako kyselé. neutrální nebo alkalické proteasy, v závislosti na rozsahu pH. ve kterém jsou aktivní. Kyselé proteasy zahrnují mikrobiální rennety, rennin Cchymosin), pepsin a kyselé proteasy hub. Neutrální proteasy zahrnují trypsin, papain, bromelain/ficin a bakteriální neutrální proteasu. Alkalické proteasy zahrnují subtilisin a podobné proteasy. Komerční kapalné enzymové směsi obsahující proteasy jsou dostupné pod názvy Rennilasé®, PTN (pankreatický tripsin NOVO), PEM (proteolytická enzymová směs). Neutrasé©, Alcalasé®, Esperas^© a Savinase™, které jsou všechny od firmy Novo Nordisk Bioindustrials, lne., Danbury, CT- Jiná komerční proteasa je dostupná pod názvem HT-Proteolytic od firmy Solvay Enzyme Products.

Amylasy, jiná třída enzymů, se rovněž používají v řadě průmyslových a komerčních postupů, ve kterých katalýzují nebo urychlují hydrolysu škrobu. Amylasy mají široké uplatnění v při průmyslovém zpracování kukuřičných sirupů pro výrobu sirupů glukosy, sirupů maltosy a celé řady jiných více čištěných konečných produktů hydrolýzy škrobu, jako například sirupů s vysokým obsahem fruktosy. Jako třída amylasy zahrnují cc-amylasu, B-amylasu, amyloglukosidasu (glukoamylasu), amylasu z hub a pullulanasu. Komerční kapalné enzymové směsi obsahující amylasy jsou dostupné pod názvy BAN, Termamyl©, AMG, Fungamyl® a Proraozyme™ od firmy Novo Nordisk, a Diazyme L-200, což je produkt firmy Solvay Enzyme Products.

Jinými komerčně hodnotnými třídami enzymů jsou takové, které způsobují hydrolysu vlákna. Tyto třídy zahrnují celulasy, hemicelulasy, pektinasy a β-glukanasy. Celulasy jsou enzymy, které odbourávají celulosu, lineární polymer glukosy, která se vyskytuje v buněčných stěnách rostlin. Hemicelulasy jsou zapojeny do hydrolysy hemicelulosy, která je obdobně jako celulosa polysacharid vyskytující se v rostlinách. Pektinasy jsou enzymy zapojené při odbourávání pektlnu, což je sacharid, jehož hlavní složkou je cukerná kyselina. B-glukanasy jsou enzymy zapojené do hydrolysy β-glukanů, které jsou rovněž podobné celulose v tom, že to jsou lineární polymery glukosy. Z komerčního hlediska jsou tyto enzymy použitelné ve větší nebo menší míře ve zpracovatel3 ských postupech založených na odbourávání vlákna.

Celulasy se používají při procesu odstranění tiskařské černi ze starého novinového odpadového papíru CONP), címz není nutné používat žádnou povrchově aktivní látku a alkalické chemikálie. Enzymy vytlačí tiskařskou čerň z povrchu vlákna a dispergují částice černi na konečnou velikost. S. Say-Kyoun Ov. Metody biologického odstranění tiskařské černi starého novinového odpadového papíru, Vorl Pulp and Paper Technology, str. 63, 64 ¢1992). Souhrnně, celulasy zahrnují endocelulasu. exocelulasu, exocelo-biohydrolasu a celobiasu. Komerční kapalné enzymové směsi obsahující celulasy jsou dostupné pod názvy Celuclast® a Novozym©188 obě od firmy Novo Nordisk.

Hemicelulasy se také používají při procesu odstranění tiskařské černi vytlačením částic černi z povrchu vlákna starého novinového odpadního papíru, D.¥. Prasad a spol.,Enzymatické odstranění tiskařské černi černých a bílých vytištěných písmen odpadního novinového papíru, Progress in Paper Recycling, květen 1992, str. 21. 22. Dále se hemicelulasy jako jsou xylanasy používají při bělení buničiny. Předběžné ošetření sulfátových buničin xylanasou způsobuje velké snížení spotřeby bělících chemikálií, jako je molekulární chlor, a také zlepšuje kvalitu buničiny projevující se v maximální jasnosti, D.J.Senior a spol., Snížení množství chloru během bělení sulfátové buničiny po působení xylanasy, Tappi Journal (připravená publikace; aspekty publikace byly uvedeny na mezinárodní konferenci o bělení buničiny ve Stokholmu, 1991). PULPZ¥M© je produkt firmy Novo Nordisk a ECOPULP® je produkt firmy Alko Biotechnology jsou dva příklady komerčně dostupných kapalných enzymových směsí, které obsahují bělící enzymy na bázi xylanasy.

Hemicelulasy jako třída zahrnují hemicelulasovou směs a galaktomananasu. Komerční kapalné enzymové směsi obsahující hemicelulasy jsou dostupné pod názvy PULPZYI¹® od firmy Novo, ECOPULP^a od Alko Biotechnology a Novozynť©280 a Gamanase™, obě jsou produkty firmy Novo Nordisk.

Pektinasy jsou komerčně používané k zeslabování buněčných stěn a ke zvýšení extrakce ovocné šťávy a rovněž ke snížení viskozity a k prevenci gelovatění v těchto extraktech. Pektinasy se skládají z endopolygalakturonasy, exopolygalakturonasy, endo4 pektát lyasy (transe1iminasy), exopektát lyasy (transeliminasy) a endopektin lyasy (transeliminasy). Komerční kapalné enzymové směsi obsahující pektinasy jsou dostupné pod názvy Pectinex™ Ultra SP a Pectinex™’*, obě od firmy Novo Nordisk.

β-glukanasy jsou důležité ve sladovnictví a pivovarnictví, kde je třeba upravovat buněčné stěny ječmene, které obsahují β-glukany. p-glukanasy zahrnují lichenasu, laminarinasu a exoglukanasu. Komerční kapalné enzymové směsi obsahující p-glukanasy jsou dostupné pod názvy Novozyirf®234, CereflóS, BAN, Finizymř© a CeremiJÍ©, všechny od firmy Novo Nordisk.

Dvě další třídy enzymů potřebných v průmyslu a obchodě jsou lipasy a fosfolipasy. Lipasy a fosfolipasy jsou esterasové enzymy, které hydrolysují tuky a oleje napadením esterových vazeb v těchto sloučeninách. Lipasy působí na triglyceridy, přičemž fosfolipasy působí na fosfolipidy. V průmyslu lipasy a fosfolipasy představují komerčně dostupné esterasy a oboje mají řadu použití v průmyslu a obchodě.

V papírenském průmyslu a při zpracování buničiny se kapalné enzymové přípravky obsahující lipasy osvědčily zvláště při snížení dehtových usazenin na válcích a jiném zařízení během výrobního procesu. Například bylo uvedeno, že zpracování nebělené sulfitové buničiny lipasou před bělením chlorem snižuje obsah chlorovaných triglyceridů, které jsou podle sdělení příčinou dehtových usazenin během výroby papíru, K. Fischer a K. Messner, Snížení houževnatého dehtu v drtičích buničiny 1ipolytickými enzymy. Tappi Journal, únor 1992, str. 130. Novo Nordisk obchoduje se dvěma kapalnými enzymovými přípravky pod názvy Resinase™ A a Resinase™ A 2X, oba za určitých podmínek podle sdělení značně snižují dehtové usazeniny odbouráním pryskyřic ze dřeva obsažených v buničině.

Dalším důležitým použitím lipas je při odmašťování kůží a holin při zpracování kůže. Alkalické lipasy se používají ve spojení se speciálními proteasami a emulgátory pro odmašťování a rovněž pro zlepšení námoku a loužení při výrobě kůží, J. Chrlstner. Použití lipas při postupech v mokrých dílnách 87 J.A.L.C.A. 128 (1992).

Lipasy se rovněž používají při vývoji aromatických příchutí sýrů a pro zlepšení chutnosti hovězího loje pro psy. V nevodných systémech se používají lipasy při syntese esterů z karboxylových kyselin a alkoholů.

Komerční kapalné enzymové směsí obsahující lipasy jsou dostupné pod názvy Lipolase 100, Greasex 50L, Palatase^THA, Palatase^THM a Lipozyme™, všechny od firmy Novo NordiskS ohledem na komerčně užitečné fosfolipasy, se používá pankreatlcká fosfolipasa ň2 pro přeměnu lecithinu na lysolecithln. Lysolecithin je výborný emulgátor při výrobě majonézy a pečení chleba. Komerčně je fosfolipasa A2 dostupná v kapalné enzymové směsi dodávané jako LECITASE™ firmou Novo Nordisk.

Jinou komerčně hodnotnou třídou enzymů jsou isomerasy, které katalyzují přeměnné reakce mezi isomery organických sloučenin. Isomerasy jsou zvlášt důležité při výrobě kukuřičných sirupů s vysokým obsahem fruktosy. Například isomerasová reakce aldosa-ketosa, která je katalysována glukosoisomerasou, zahrnuje přeměnu glukosy na fruktosu a je právě jednou ze tří klíčových enzymových reakcí v průmyslu. Pordukt Sweetzym^ je kapalná enzymová směs obsahující glukosoisomerasu, který je dodáván firmou Novo Nordisk.

Redoxenzymy jsou enzymy, které katalysují chemické oxidačně redukční reakce a tudíž jsou zahrnuty při odbourávání a synthese mnoha biochemických látek. Běžně však nezískalo mnoho redoxenzymů prominentní místo v průmyslu, protože většina redoxenzymů potřebuje kofaktor. Avšak tam, kde kofaktory jsou součástí enzymu nebo se nemusí dodávat, jsou redoxenzymy komerčně prospěšné, zvláště v potravinářském průmyslu.

Redoxenzym glukosoxidasa se používá k zabránění nežádoucích reakcí vedoucích ke zhědnutí a ovlivňujících barvu a chut potravin. Glukosoxidasa je rovněž používána jako odstraňovač kyslíku k zabránění rozvoje pachutí ve šťávách a pro ochranu barvy a stability v určitých citlivých potravinových složek. Redoxenzym katalasa se používá pro rozklad zbytkové peroxidu vodíku používaného jako sterilizační činidlo. Třetí redoxenzym lipoxidasa (1ipoxygenasa5, která se vyskytuje přirozeně v sojové mouce a obvykle se pro průmyslové využití nečistí, se používá při pečení nejen pro získání světlejšího chleba, ale také k odstrnění měknutí těsta způsobeného určitými přípravky. Jiné redoxenzymy je možné použít počínaje od enzymatických syntéz derivátů steroidů a konče u diagnostických testů. Tyto redoxenzymy zahrnují peroxidasu, superoxiddismutasu. alkoholoxidasu. polyfenoloxidasu, xantinoxidasu, sulfhydryloxidasu, hydroxylasy, cholesteroloxidasu, lakasu. alkoholdehydrogenasu a steroidní dehydrogenasu.

Když jsou enzymy, jako ty popsané výše, vyrobené nebo prodané pro použití v průmyslové výrobě, obvykle jsou ve formě kapalných enzymových směsí určených pro určitý postup- U těchto kapalných enzymových směsí však tradičně trápil problém chemické nestability, která může vyústit ve ztrátu enzymové aktivity, zvláště při skladování. Tento kritický problém ztráty enzymové aktivity při skladování ovlivnil zejména průmysl kapalných detergentů. Není neobvyklé skladovat průmyslové výrobky jako jsou kapalné enzymové směsi v obchodních domech po celém světě v různém klimatu, kdy je produkt vystaven po delší dobu teplotě od teploty mrazu až nad 50 °C. Po skladování při extrémních teplotách od 0 do 50 °C mnoho měsíců ztrácí většina kapalných enzymových směsí enzymovou aktivitu z důvodu nestability enzymu.

Byly učiněny různé pokusy ke stabilizaci enzymů obsažených v kapalných enzymových směsích. Pokusy ke zvýšení stability kapalných enzymových směsí použitím přípravků obsahujících alkoholy, glyceroly. dialkylglykoethery a směsi těchto a jiných sloučenin měly pouze okrajový úspěch, dokonce při mírných teplotách skladování.

V U.S. patentu 4,801,544 byl systém ethylenglykolu a ethoxylováného lineárnního alkoholického neiontového tenzidu s uhlovodíkovým rozpouštědlem použit jako stabilizátor. Byla popsána enkapsulace enzymů v micelách uvnitř směsi rozpouštědlo/tenzid. Avšak obsah vody ve směsi byl udržován na množství méně než 5 procent a enzymová stabilita byla zjištována při 1,1 °C, 21,1°C a 37,7°C.

Stabilizace vodného enzymového přípravku použitím určitých esterů je popsán v U.S. patentu 4,548,727. Ester používaný jako stabilizátor má vzorec

RCOOR' kde R je alkyl s 1 až 3 atomy uhlíku nebo atom vodíku a Rje alkyl s 1 až 6 atomy uhlíku.

Ester je přítomen ve vodném enzymovém přípravku v množství od

0.1 až asi 2.5 % hmotnostních.

U.S. patent 4,318.818 popisuje stabilizující systém pro vodné enzymové směsi, ve ketrém stabilizující systém obsahuje ionty vápníku a karboxylovou kyselinu nebo její sůl o nízké molekulové hmotnosti. pH stabilizujícího systému je od asi 6,5 do asi 10.

U.S. patent 4,243,543 popisuje stabilizaci kapalných detergentních směsí obsahujících proteolytické enzymy. Detergentní směsi se stabilizují přidáním antioxidantu a hydrofilního polyolu ke směsi. zatímco se stabilizuje pH směsi. U.S. patent 4,169,817 popisuje kapalnou čistící směs obsahující stabilizované enzymy. Směs je vodný roztok obsahující od 10 do 50 % hmotnostních pevných látek a zahrnující detergentní plnidla, povrchově aktivní činidla, enzymový systém odvozený od Bac i 1lus subtilis a enzymově-stabi1izační činidlo. Stabilizační činidla obsahují ve vodě vysoce rozpustné soli sodíku nebo draslíku a/nebo ve vodě rozpustné hydroxyalkoholy a umožňuje, aby roztok byl skladován delší dobu bez desaktivace enzymů.

Evropský patent 0 352 244 A2 popisuje stabilizované kapalné detergentové směsi za použití amfoterního tenzidu.

Podstata vynálezu

Předmětem předloženého vynálezu je poskytnout prostředek, který je schopný stabilizovat jeden nebo více enzymů obsažených v kapalné enzymové směsi.

Druhým předmět vynálezu je poskytnout stabilizovanou kapalnou enzymovou směs.

Třetím předmětem vynálezu je poskytnout způsob stabilizace kapalné enzymové směsi.

Tyto předměty vynálezu lze splnit užitím stabilizujícího prostředku pro kapalnou enzymovou směs. která obsahuje alespoň jedno ve vodě rozpustné kopulační (spojovací) činidlo, vybrané z alkoholu s krátkým řetězcem a glykolu s krátkým řetězcem, alespoň jeden z (i), polyethoxylováného alkyldiaminu a (ii) aminoxidu, a vodu. Ve vodě rozpustné kopulační činidlo je přítomno v množství účinném pro zvýšení rozpustnosti polyethoxylovaného alkyldiaminu a/nebo aminoxldu ve vodě, a alespoň jeden z (i) polyethoxylovaného alkyldiaminu a Cii) aminoxidu je přítomen v množství účinném pro stabilizování jednoho nebo více enzymů obsažených v kapalné enzymové směsi. Tento stabilizační prostředek lze použít s různými druhy enzymů používaných v kapalných enzymových směsích. které mají různé funkce. Třídy enzymů. se kterými může být tento prostředek použit, zahrnují třídy enzymů dříve uvedené, nejsou však jimi omezené.

Vynález se také týká stabilizované kapalné enzymové směsi, která obsahuje alespoň jedno ve vodě rozpustné kopulační činidlo. vybrané z alkoholu s krátkým řetězcem a glykolu s krátkým řetězcem. alespoň jeden z (i) polyethoxylovaného alkyldiaminu a Cii) aminoxidu. vodu a alespoň jeden enzym. Ve vodě rozpustné kopulační činidlo je přítomno v množství účinném pro zvýšení rozpustnosti polyethoxylovaného alkyldiaminu a/nebo aminoxidu ve vodě. a alespoň jeden z Ci) polyethoxylovaného alkyldiaminu a Cil) aminoxidu je přítomen v množství účinném pro stabilizování alespoň jednoho enzymu obsaženého v kapalné enzymové směsi.

Vynález se dále týká způsobu stabilizování kapalné enzymové směsi, který zahrnuje kroky:

Ca) přidání do vody alespoň jednoho ve vodě rozpustného kopulačního činidla, vybraného z alkoholu s krátkým řetězcem a glykolu s krátkým řetězcem.

Cb) přidání alespoň jednoho z (i) polyethoxylovaného alkyldiaminu a (i i) aminoxidu do vody, která obsahuje uvedené kopulační činidlo vzniklé v kroku Ca) za vytvoření vodného prostředku, a

Cc) přidání alespoň jednoho enzymu k vodnému prostředku vzniklého v kroku Cb), přičemž je kopulační činidlo přítomno v množství účinném pro zvýšení rozpustnosti alespoň jednoho z Ci) polyethoxylovaného alkyldiaminu a Cli) aminoxidu v uvedené vodě, a dále ve kterém alespoň jeden z Cl) polyethoxylovaného alkyldiaminu a Cii) aminoxidu je přítomen v množství účinném pro stabilizování alespoň jednoho enzymu.

Cb) přidání alespoň jednoho z (i) polyethoxylovaněho alkyldiaminu a (i i) aminoxidu do vody. která obsahuje uvedené kopulační činidlo vzniklé v kroku Ca) za vytvoření vodného prostředku a,

Cc) spojení vodného prostředku s kapalnou enzymovou směsí, která obsahuje alespoň jeden enzym.

přičemž je kopulační činidlo přítomno v množství účinném pro zvýšení rozpustnosti alespoň jednoho z Ci) polyethoxylovaněho a1kyldiaminu a Cil) aminoxidu ve vodě. a dále přičemž alespoň jeden z Ci) polyethoxylovaněho alkyldiaminu a Cil) aminoxidu je přítomen v množství účinném pro stabilizování alespoň jednoho enzymu, který je obsažen v uvedené kapalné enzymové směsi.

Vynález se dále týká stabilizované kapalné enzymové směsi, která obsahuje:

Ca) polyethoxylováný alkyldiamin, a

Cb) alespoň jeden enzym, přičemž složka Ca) je přítomná v množství účinném pro stabilizování alespoň toho jednoho enzymu.

Vynález se dále týká stabilizované kapalné enzymové směsi, která obsahuje ·

Ca) aminoxid, a

Cb) alespoň jeden enzym, přičemž složka Ca) je přítomná v množství účinném pro stabilizování alespoň jednoho enzymu.

Ca) alespoň jeden z Cl) polyethoxylovaněho alkyldiaminu a Cli) aminoxidu, a

Ve vodě rozpustné kopulační činidlo použité v předloženém vynálezu se používá pro zvýšení rozpustnosti polyethoxylovaněho alkyldiaminu a/nebo aminoxidu ve vodě, a pro zvýšení jejich konečných koncentrací ve stabilizačním prostředku nad ty, které lze dosáhnout při nepřítomnosti kopulačního činidla. Jestliže se však stabilizuje předem vytvořená kapalná enzymatická směs. ve hlavní řetězec do a glykol vybrány z ethanolu, lenglykolu.

vodě rozpustné kopulační činidlo je nebo není třeba pro rozpuštění polyethoxylováného alkyldiaminu nebo aminoxidu. Tyto předem vytvořené kapalné enzymatické směsi zahrnují obě možnosti, jak vodné směsi. tak vytvořené z nebo za použití organických rozpouštědel nebo médi iJestliže se použije ve vodě rozpustné kopulační činidlo, je vybrané z alespoň jednoho alkoholu s krátkým řetězcem a glykolu s krátkým řetězcem. Výhodně je kopulační činidlo vybráno z Ci-Cealkoholu a C2-Cďglykolu, každý mající šesti atomů uhlíku. Nejvýhodněji jsou alkohol propanolu, butylenglykolu, propylenglykolu a hexyJestliže se ve stabilizačním prostředku použije polyethoxylováný alkyldiamin s delším řetězcem, může jako kopulační činidlo pro polyethoxylováný alkyldiamin s delším řetězcem sloužit polyethoxylováný alkyldiamin s kratším řetězcem.

Stabilizační prostředek také obsahuje alespoň z Ci) polyethoxylováného alkyldiaminu a Cii) aminoxidu. V závislosti na enzymu, který má být stabilizován, stabilizační prostředek může obsahovat buď Ci) alespoň jeden polyethoxylováný alkyldiamin nebo Cii) alespoň jeden aminoxid, nebo směs (i) a Cii). Například polyethoxylováný alkyldiamin se může použít spolu se shora uvedeným kopulačním činidlem za vyloučení aminoxidu. Jiná možnost je použít aminoxid spolu s kopulačním činidlem za vyloučení polyethoxylovaného alkyldiaminu. Nejvýhodněji se ve stabilizačním prostředu používá směs obou látek Ci) a Cii). Odborník snadno a běžně zjistí vhodnou směs pro určitou kapalnou enzymovou směs, která má být stabilizována.

Výhodně obsahuje polyethoxylováný alkyldiamin pro provedení vynálezu sloučeninu vzorce 1=

RNCH2CH₂CH2H - CCH2CH20)x-H C CH2 CH2 0 ) y - H(tH2 CH2 0 ) z - H

Cl) kde součet x, y a z je od 2 do 20 a R je C3-C22alkyl.

Polyethoxy1ováný alkyldiamin je obecně ve formě směsi sloučenin nebo štěpů, představujících stupeň ethoxylace a majících společné znaky, jako jsou alkylová část a molekulové hmotnosti pohybující se od 220 do 515. Nejvýhodnější polyethoxy1ovane alkyldiaminy jsou:

N,N.N-tris<2-hydroxyethyl)-N-tallow-1.3-diaminopropan.

N,N,N-polyoxyethylen^O)-N-tallow-1.3-diaminopropan,

N,N.N-polyoxyethylen¢13)-N-tallow-1,3-diaminopropan,

N,N,N-polyoxyethylen<15)-N-tallow-1,3-diaminopropan.

N,N.N-polyoxyethylen¢20)-N-tallow-1.3-diaminopropan, a

N,N,N-polyoxyethylenC25)-N-ta1low-1.3-diaminopropan.

Polyethoxylovane alkyldiaminy lze získat z komerčního zdroje jako je Akzo Chemical Division of McCook, Illinois. Tyto produkty jsou na trhu pod obchodním označením Ethoduomeen.

Stabilizační prostředek podle tohoto vynálezu může obsahovat aminoxid. Výhodně se jako aminoxid používá terciární aminoxid vzorce 11=

R - N⁺ - 0¢11) kde R je methyl, hydroxymethy1, ethyl nebo hydroxyethyl a

R je C8-C22alkyl. Obzvláště výhodnými aminoxidy jsou= bis ¢2-hydΓOxyethy1)kokoarainoxid, bis ¢2-hydΓOxyethy1)tallovaminoxid, dimethylkokoaminoxid, dimethyItallowaminoxid a dimethylhexadecylaminoxid. Aminoxidy lze získat z řady komerčních zdrojů. jako jsou Akzo Chemicals. Inc., Sherex Chemicals. Stepán. Lonza, Proctor & Gamble a Jordon Chemicals Co. Produkty aminoxidu od Akzo Chemicals. Inc. jsou na trhu pod obchodním označením Aromox.

Stabilizační prostředek zde popsaný lze použít s různými druhy enzymů a při různých průmyslových postupech nebo v různých průmyslových produktech. Enzym. průmyslové postupy a průmyslové produkty, se kterými může být tento stabilizační prostředek použit. zahrnují ty, které byly dříve uvedené. nejsou vsak jimi omezené.

Použití stabilizačního prostředku pro stabilizování enzymové směsi vedlo k druhému předmětu předloženého vynálezu, k stabilizované kapalné enzymové směsi. Vynález se tedy týká také stabilizované kapalné enzymové směsi. která obsahuje alespoň jedno ve vodě rozpustné kopulační činidlo, vybrané z alkoholu s krátkým řetězcem a glykolu s krátkým řetězcem, alespoň jeden z <i) polyethoxylováného alkyldiaminu a Cli) aminoxidu, vodu a enzym.

Zamýšlená a výhodná provedení s ohledem na ve vodě rozpustné kopulační činidlo, polyethoxylováný alkyldiamin a aminoxid, které jsou v této stabilizované kapalné enzymové směsi, jsou stejné jako tyto látky probrané shora s ohledem na stabilizační prostředek podle tohoto vynálezu.

Stejně jako stabilizační prostředek, může se kapalná enzymová směs podle vynálezu použít s různými enzymy. Tyto enzymy zahrnují, ale nejsou jimi omezené, enzymové třídy a určité enzymy dříve popsané. Enzymy, které je možné použít jsou původu živočišného, rostlinného, z hub, původu bakteriálního a syntetického. Výhodné enzymy jsou proteasy, včetně kyselých, alkalických a neutrálních proteas, které mají široké uplatnění jako čistírenské detergenty a při průmyslové výrobě sýru: amylasy včetně kyselých, alkalických a neutrálních amylas se používají například při výrobě kukuřičných sirupů; a lipasy se používají pro vývoj aromatických příchutí v sýrech a při průmyslové výrobě buničiny a papíru a kůže.

Ve stabilizované kapalné enzymové směsi podle vynálezu může být kopulační činidlo výhodně v množství od 0,1 do 30 % hmotnostních směsi, avšak výhodněji od 1 do 20 Polyethoxylováný alkyldiamin, je-li přítomen, může být výhodně v množství od 0,1 do 50 % hmotnostních směsi, avšak výhodněji od 1 do 30

Aminoxid, je-li přítomen, může také být výhodně v množství od 0.1 do 50 % hmotnostních směsi, avšak výhodněji od 1 do 30 Množství přítomné vody se může výhodně měnit od 10 do 80 % hmotnostních směsi.

Množství enzymu přítomného ve formě zředěného koncentrovaného enzymu může být výhodně v rozmezí od 0,001 do 50 % hmotnosti koncentrované směsi, avšak výhodněji od 0,01 do 25 % hmotnostních. Množství přítomného enzymu však velmi závisí na aktivitě enzymu a na požadovaném konečném použití.

pH konečné stabilizované kapalné enzymové směsi, závisející na enzymu, který obsahuje a na jejím zamýšleném použití, se výhodně mění od 4.0 do 11,0, avšak výhodněji od 5.0 do 10,0. Jak je zřejmé v oboru, pro nastavení pH může být nutné malé množství kyselé nebo alkalické látky.

Stabilizovaná kapalná enzymová směs může obsahovat jiné přídavné látky zaměřené na použití směsi v určitém průmyslovém procesu. Například stabilizovaná kapalná enzymová směs může obsahovat přídavné látky jako povrchově aktivní látky, odpěňovače a jiné, které jsou známé v oboru. Jestliže se použije stabilizovaná kapalná enzymová směs podle vynálezu, výhodně může stabilizující prostředek také působit jako dispergační prostředek pro enzym ve vodě z průmyslu.

Předložený vynález se také týká způsobu stabilizování kapalné enzymové směsi, který zahrnuje výše popsané kroky. Ilustrativní a výhodné složky a také množství složek použitých v krocích jsou stejné jak bylo výše popsáno.

Průměrný odborník rozumí, že lze komponenty stabilizované kapalné enzymové směsi míchat v jakémkoli pořadí nebo dokonce současně.

Avšak výhodné je poradí:

Cb) přidání alespoň jednoho z Ci) polyethoxylováného alkyldiaminu a <i i> aminoxidu do vody, která obsahuje kopulační činidlo vzniklé v kroku Ca) za vytvoření vodného prostředku, a <c) přidání alespoň jednoho enzymu k vodnému prostředku vzniklého v kroku Cb). Jestliže mají být obsaženy jiné aditivní látky ve stabilizované kapalné enzymové směsi, taková aditiva se mohou přidat v jakékoli době, avšak výhodně po kopulačním stupni, nebo ve stupni odděleném od stupně, ve kterém je přidáván enzym.

Průměrný odborník by rovněž zjistil, že kopulační stupeň a přidání alespoň jednoho z <i) polyethoxylováného alkyldiaminu a Cli) aminoxidu do kopulované vody vzniklé z kopulačního stupně, vytvoří stabilizační prostředek podle výše uvedeného provedení podle vynálezu. Tyto kroky se mohou provést v jakémkoli poradí nebo dokonce současně, avšak výše uvedený pořádek je výhodný.

Jiná metoda pro stabilizování kapalné enzymové směsi zahrnuje kroky:

Cb) přidání alespoň jednoho z Ci) polyethoxylováného alkyldiaminu a Cii) aminoxidu do vody, která obsahuje kopulační činidlo vzniklé v kroku Ca) za vytvoření vodného prostředku a.

Následující příklady jsou uvedeny proto, aby ozřejmily vynález. Je však třeba upozornit na to, že vynález není omezen na určité podmínky nebo podrobnosti uvedené v těchto příkladech.

Příklady provedení vynálezu

Příklad 1

Stabilizované kapalné enzymové směsi byly připraveny podle vynálezu. Množství každé složky je vyjádřeno jako % hmotnostní celkové směsi a je uvedeno v tabulce 1. Pořadí přidání složek bylo výhodné pořadí popsané výše. Tabulka 2 uvádí s odpovídajícími kódy rflzné nestabi1izované přirozené kapalné enzymové koncentráty a jejich zředění s 95 % vody. Tyto nestabi1izované koncentráty byly použity při přípravě stabilizovaných kapalných enzymových směsí v tabulkách 1 a 3.

TABULKA 1

STABILIZOVANÉ ENZYMOVÉ SMĚSI

	A	B	C	D
HT-Proteolytic®	< enzym)	10	0	0	0
Diazyme L-200®	< enzym)	0	10	0	0
L i po1asé®100	(enzym)	0	0	5	0
Lipase	< enzym)	0	0	0	5
aminoxid^1/		1	20	10	10
po1yethoxy1ováný		15	2	1	1
alkyldiamin^2Z
hexy1eng1yko1		10	10	5	5
ethanol		10	5	2	2
voda		54	53	77	77

1/ produkt Aromox C-12, bis 2-hydroxyethylkokoaminoxid, od firmy Akzo Chemicals, lne.

2/ product Ethoduomeen T-13. 13-ethoxylovaný tallowalkyl

CN,N,N-polyoxyethylenC13)-N-tallow-1,3-diaminopropan), od firmy Akzo Chemicals, lne. ’

TABULKA 2 ENZYMOVÉ SMĚSI

	100 % koncentrace	95 % vodné zředění
HT-Proteolytic®	Aa	Aal
Diazyme L-20C®	Bb	Bbl
Lipolase®100	Cc	Cel
Lipase	Dd	Ddl

Příklad 2

Enzymová stabilita stabilizovaných kapalných enzymových směsí byla srovnávána se stabilitou enzymových koncentrátů a vodných zředění při 50 °C. Výsledky uvedené v tabulce 3 ukazují 95 % nebo vyšší stabilitu po 12 týdnech při 50 °C u stabilizovaných kapalných enzymových směsí, přičemž přirozené enzymové koncentráty a vodná zředění významně ztratily enzymovou aktivitu po 2 týdnech při 50 °C.

TABULKA 3

ENZYMOVÁ STABILITA PŘI 50 °C % současné aktivity začátek po počtu týdnů

Prostředky	2	4	8	12
A	100	100	100	100	100
Aa	100	27	0	0	0
Aal	100	16	0	0	0
B	100	100	100	100	96
Bb	100	33	0	0	0
Bbl	100	24	0	0	0
C	100	100	100	98	95
Cc	100	49	4	0	0
Cel	100	21	0	0	0
D	100	100	100	95	95
Dd	100	54	7	0	0
Ddl	100	36	3	0	0

Příklad 3

Stabilizované kapalné enzymové směsi, enzymové koncentráty a vodná zředění byly všechny podrobeny cyklům zmrazení/roztáni s následujícím testováním % enzymové aktivity zbylé po každém cyklu. Stabilizované kapalné enzymové směsi ukázaly více než 90 % aktivity zbylé dokonce po šesti provedených cyklech. Dále bylo pozorováno, inaktivoval koncentrátů že dokonce jeden cyklus zmrazení/roztání výrazně koncentráty a jednoduchá vodná zředění těchto Výsledky jsou uvedny v tabulce 4.

TABULKA 4 % AKTIVITY PO CYKLU ZMRAZENÍ/ROZTÁNf % aktivity začátek počet cyklů zmrazení/roztáni

Prostředky	1	2	3	4	5	6
A	100	100	100	100	100	100	100
Aa	100	56	0	0	0	0	0
Aal	100	11	0	0	0	0	0
B	100	100	100	100	100	100	94
Bb	100	73	18	0	0	0	0
Bbl	100	14	0	0	0	0	0
C	100	100	100	100	100	98	93
Cc	100	28	0	0	0	0	0
Cel	100	5	0	0	0	0	0
D	100	100	100	100	100	95	91
Dd	100	15	0	0	0	0	0
Ddl	100	3	0	0	0	0	0

Anotace

Název vynálezu: Stabilizované kapalné enzymové směsi

Stabilizační prostředek sestává z alespoň jednoho ve vodě rozpustného kopulačního činidla, vybraného z krátkořetězcového alkoholu a glykolu, alespoň jednoho z polyethoxylovaného alkyldiaminu a aminoxidu, a vody. Diamin a/nebo aminoxid je v množství účinném pro stabilizování jednoho nebo více enzymů v kapalné enzymové směsi. Prostředek prodlužuje skladovatelnost a životnost během skladování kapalných enzymových směsí. je také dispergátorem pro průmyslovou vodu.

Stabilizovaná kapalná enzymová směs mflže obsahovat jednu nebo více složek stabilizačního prostředku a enzym.

Způsoby stabilizování kapalné enzymové směsi zahrnují přidání jednoho nebo více enzymů ke stabilizačnímu prostředku, nebo spojení stabilizačního prostředku s kapalnou enzymovou směsí obsahující jeden nebo více enzymů. Po přidáni je diamin a/nebo aminoxid v množství účinném pro stabilizování jednoho nebo více enzymů.

Claims

1. Prostředek pro stabilizování kapalné enzymové směsi, vyznačující se tím, že v podstatě sestává z=

Ca) alespoň jednoho ve vodě rozpustného kopulačního činidla, vybraného z alkoholu s krátkým uhlíkovým řetězcem a glykolu s krátkým uhlíkový řetězcem,

Cb) alespoň jednoho z Ci) polyethoxylovaného alkyldiaminu a Cii) aminoxidu, a

Cc) vody přičemž složka Ca) je přítomná v množství účinném pro zvýšení rozpustnosti složky Cb) v uvedené vodě, a uvedená složka Cb) je přítomna v množství účinném pro stabilizování jednoho nebo více enzymů obsažených v kapalné enzymové směsi.

2. Prostředek podle nároku 1, vyznačující se tím, že uvedený polyethoxy1ováný alkyldiamln je alespoň jedna sloučenina vzorce I

Cl) kde součet x, y a z je od 2 do 20 a R je C3-Caaalkylový radikál.

3. Prostředek podle nároku 2, vyznačující se tím. že uvedený polyethoxylovaný alkyldiamin je alespoň jedna sloučenina vybraná z

N,N,N-trisC2-hydroxyethyl)-N-tallow-1,3-diaminopropan.

N,N,N-polyoxyethylenC10)-N-ta1low-1,3-diaminopropan a

N,N,N-polyoxyethylenC15)-N-tallow-l,3-diaminopropan.

4. Prostředek podle nároku 1, vyznačující se tím, že uvedený aminoxid je alespoň jeden terciární amlnoxid vzorce II

R - N* - 0“

CII) kde R je methyl, hydroxymethy1, ethyl nebo hydroxyethyl a R je C₈-C22alkylovy radikál.

5. Prostředek podle nároku 4, vyznačující se tím, že uvedený aminoxid je alespoň jedna sloučenina vybraná z bisC2-hydroxyethy1)kokoaminoxid, bisC2-hydroxyethyl)tallovamínoxid, dimethyIkokoaminoxid, dimethyltallowaminoxid a dimethylhexadecy1aminoxid.

6. Prostředek podle nároku 1, vyznačující se tím. že uvedené kopulační činidlo je vybráno z Ci-Cealkoholu a C2-C6glykolu.

7. Prostředek podle nároku 6, vyznačující se tím, že uvedené kopulační činidlo je vybráno z ethanolu, propanolu, butylenglykolu, propylenglykolu a hexylenglykolu.

8. Stabilizovaná kapalná enzymová směs, vyznačující se tím, že v podstatě sestává z=

Ca) alespoň jednoho ve vodě rozpustného kopulačního činidla, vybraného z alkoholu s krátkým uhlíkovým řetězcem a glykolu s krátkým uhlíkový řetězcem, polyethoxylovaného alkyldiaminu a

Cb) alespoň jednoho z C i ) Cii) aminoxidu, Cc) vody, a Cd) alespoň jednoho enzymu

přičemž složka Ca) je přítomná v množství účinném pro zvýšení rozpustnosti složky Cb) v uvedené vodě, a uvedená složka Cb) je přítomna v množství účinném pro stabilizování uvedeného enzymu.

9. Směs podle nároku 8, vyznačující se tím, že uvedený polyethoxy1ováný alkyldiamin je alespoň jedna sloučenina vzorce I

RNCH2CH2CH2N - CCH₂CH₂0)x-H 7cH₂ CH₂ □ ) CH₂ 0 ) z - H CI) kde součet x, y a z je od 2 do 20 a R je C3-C22alkylový radikál..

10. Směs podle nároku 9, vyznačující se tím, že uvedený polyethoxylováný alkyldiamin je alespoň jedna sloučenina vybraná z

N,N,N-trisC2-hydroxyethyl)-N-tallow-1,3-diaminopropan,

N,N,N-polyoxyethylenCIO)-N-tallow-1,3-diaminopropan a

N,N,N-polyoxyethylen<15)-N-tallow-1,3-diaminopropan.

11. Směs podle nároku 8, vyznačující se tím, že uvedený aminoxid je alespoň jeden terciární aminoxid vzorce II

R - N⁺ - 0CII)

R kde R je methyl, hydroxymethy1, ethyl nebo hydroxyethyl a R je C₈-C22a1kýlový radikál.

12. Směs podle nároku 11, vyznačující se tím, že uvedený aminoxid je alespoň jedna sloučenina vybraná z bisC2-hydroxyethyljkokoaminoxid, bisC2-hydroxyethy1)tallowaminoxid, dimethylkokoaminoxid, dimethyltallowaminoxid a d i methy1hexadecy1arainox i d.

13. Směs podle nároku 8, vyznačující se tím, že uvedené kopulační činidlo je vybráno z Ci-Cealkoholu a Cž-Ceglykolu.

14. Směs podle nároku 13, vyznačující se tím. že uvedené kopulační činidlo je vybráno z ethanolu, propanolu, butylenglykolu, propylenglykolu a hexylenglykolu.

15. Směs podle nároku 8, vyznačující se tím. že uvedený enzym je vybrán z proteasy, amylasy a lipasy.

16. Směs podle nároku 8, vyznačující se tím, že uvedené kopulační činidlo je přítomno od 0,1 do 30 % hmotnostních směsi, uvedený polyethoxylováný alkyldiamin je přítomen od 0,1 do 50 % hmotnostních směsi, a uvedený aminoxid je přítomen od 0,1 do 50 % hmotnostních směsi.

17. Způsob výroby stabilizované kapalné enzymové směsi, vyznačující se tím, že v podstatě sestává z kroků =

Ca) přidání do vody alespoň jednoho ve vodě rozpustného kopulačního činidla, vybraného z alkoholu s krátkým uhlíkovým řetězcem a glykolu s krátkým uhlíkový řetězcem,

Cb) přidání alespoň jednoho z Ci) polyethoxylováného alkyldlarainu a Cil) aminoxidu do vody, která obsahuje uvedené kopulační činidlo vzniklé v kroku Ca), za vytvoření vodného prostředku, a

Cc) přidání alespoň jednoho enzymu do vodného prostředku vzniklého v kroku Cb) přičemž uvedené kopulační činidlo je přítomno v množství účinném pro zvýšení rozpustnosti uvedeného alespoň jednoho z Ci) polyethoxylováného alkyldiaminu a Cii) aminoxidu v uvedené vodě, a dále přičemž uvedený alespoň jeden z Ci) polyethoxylováného alkyldiaminu a Cii) aminoxidu je přítomen v množství účinném pro stabilizování uvedeného alespoň jednoho enzymu.

18. Způsob podle nároku 17,vyznačující se tím. že uvedený polyethoxylováný alkyldiamin je alespoň jedna sloučenina vzorce I

RNCH2CH2CH2N - CCH₂CH2 0)x-H 'cCH2CH₂0)i^Ir~TCH2CH2 0)z-H CI) kde součet x, y a z je od 2 do 20 a R je C3-C22alkylový radikál.

19. Způsob podle nároku 18,vyznačující se tím, že uvedený polyethoxylováný alkyldiamin je alespoň jedna sloučenina vybraná z

N, N,N-trisC2-hydroxyethy1)-N-tallov-1,3-diaminopropan,

N,N,N-polyoxyethylenC10)-N-tallow-1,3-diarainopropan a

N,N,N-polyoxyethylenC15)-N-ta1lov-1,3-diaminopropan.

20. Způsob podle nároku 17,vyznačuj ící se tím, že uvedený amlnoxid je alespoň jeden terciární amlnoxid vzorce II

R' /

r- n⁺ - a- ciď \

r' kde R je methyl, hydroxymethyl. ethyl nebo hydroxyethyl a R je Cio-C22alkylový radikál.

21. Způsob podle nároku 20,vyznačující se tím, že uvedený amlnoxid je alespoň jedna sloučenina vybraná z bis(2-hydroxyethyl)kokoaminoxid, bis(2-hydroxyethy1)tallovamlnoxid. dlmethyIkokoaminoxid, dimethyltallowaminoxid a dimethylhexadecy1arainoxid.

22. Způsob podle nároku 17, vyznačující se tím, že uvedené kopulační činidlo je vybráno z Ci-Cealkoholu a C2-Ceglýko1u.

23. Způsob podle nároku 22,vyznačující se tím, že uvedené kopulační činidlo je vybráno z ethanolu, propanolu, butylenglykolu, propylenglykolu a hexylenglykolu.

24. Způsob podle nároku 17.vyznačující se tím, že uvedený enzym je vybrán z proteasy, amylasy a lipasy.

25. Způsob stabilizování kapalné enzymové směsi, vyznačující se tím, že v podstatě sestává z kroků (a) přidání do vody alespoň jednoho ve vodě rozpustného kopulačního činidla, vybraného z alkoholu s krátkým uhlíkovým řetězcem a glykolu s krátkým uhlíkový řetězcem,

Cb) přidání alespoň jednoho z (1) polyethoxylovaného alkyldiamlnu a <ii) aminoxidu do vody, která obsahuje uvedené kopulační činidlo vzniklé v kroku <a), za vytvoření vodného prostředku, a

Cc) spojení uvedeného vodného prostředku s kapalnou enzymovou směsí, která obsahuje alespoň jeden enzym, přičemž uvedené kopulační činidlo je přítomno v množství účinném pro zvýšení rozpustnosti uvedeného alespoň jednoho z Ci) polyethoxyloveného alkyldiaminu a Cii) aminoxidu v uvedené vodě, a dále přičemž uvedený alespoň jeden z Ci) polyethoxylováného alkyldiaminu a Cii) aminoxidu je přítomen v množství účinném pro stabilizování uvedeného alespoň jednoho enzymu obsaženého v uvedeném kapalném enzymovém prostředku.

26. Zpflsob podle nároku 25,vyznačující se tím, že uvedený polyethoxylováný alkyldiamin je alespoň jedna sloučenina vzorce I

RNCH2CH2CH2N - CCH2CH2CDX-H ^CH2CH2 0)y-ÍT^Ct:H2CH2 0)z-H CI) kde součet x, y a z je od 2 do 20 a R je C3-C22alkylový radikál.

27. Zpflsob podle nároku 26,vyznačující se tím, že uvedený polyethoxylováný alkyldiamin je alespoň jedna sloučenina vybraná z

N,N,N-trisC2-hydroxyethyl)-N-tallow-1,3-diaminopropan,

N. N,N-polyoxyethylenCIO)-N-tallow-1,3-diaminopropan a

N, N,N-polyoxyethylenC15)-N-ta1low-1,3-diaminopropan.

23. Zpflsob podle nároku 25,vyznačující se tím, že uvedený aminoxid je alespoň jeden terciární aminoxid vzorce II

R'

R kde R je methyl, hydroxymethy1, ethyl nebo hydroxyethyl a R^je C10-C22alkylový radikál.

29. Způsob podle nároku 28,vyznačující se tím. že uvedený aminoxid je alespoň jedna sloučenina vybraná z bisC2-hydroxyethy1)kokoaminoxid. bisC2-hydroxyethy1)tallovaminoxld. dimethylkokoaminoxid, dimethyItallowaminoxid a d imethy1hexadecylamínox i d.

30. Způsob podle nároku 25.vyznačující se tím. že uvedené kopulační činidlo je vybráno z Ci-Cealkoholu a C2-Ceglykolu.

31. Způsob podle nároku 30,vyznačující se tím, že uvedené kopulační činidlo je vybráno z ethanolu, propanolu, butylenglykolu, propylenglykolu a hexylenglykolu.

32. Způsob podle nároku 25,vyznačující se tím, že uvedený enzym je vybrán z proteasy, amylasy a lipasy.

33. Stabilizovaná kapalná enzymová směs, vyznačující se tím, že v podstatě sestává z=

Ca) polyethoxylovaného alkyldiaminu, a Cb) alespoň jednoho enzymu přičemž složka Ca) je přítomná v množství účinném pro stabilizování uvedeného alespoň jednoho enzymu.

34. Směs podle nároku 33, vyznačující se tím. že dále obsahuje vodu.

35. Stabilizovaná kapalná enzymová směs. vyznačující se tím, že v podstatě sestává z^:

Ca) aminoxidu, a

Cb) alespoň jednoho enzymu přičemž složka Ca) je přítomná v množství účinném pro stabilizování uvedeného alespoň jednoho enzymu.

36. Směs podle nároku 35, vyznačující se tím, že dále obsahuje vodu.

37. Stabilizovaná kapalná enzymová směs, jící se tím, že v podstatě sestává z:

Ca) alespoň jednoho z Ci) polyethoxylováného alkyldiaminu, a Cii) aminoxidu, a

38. Směs podle nároku 37, vyznačující se tím, že dále obsahuje vodu.

38. Směs podle nároku 37, vyznačující se tím, že v podstatě sestává z =

Ca) Ci) polyethoxylováného alkyldiaminu,

Cii) aminoxidu, a

Cb) enzymu přičemž složka Ca) je přítomná v množství účinném pro stabilizování uvedeného enzymu.

40. Směs podle nároku 39, vyznačující se tím. že uvedený polyethoxylováný alkyldiamin je vybrán z N,N,N-tris C2-hydroxyethy1)-N-tallow-l,3-diaminopropanu,

N, N,N-polyoxyethylenC10)-N-tallow-1,3-diaminopropanu a

N, N,N-polyoxyethylenC15)-N-tallow-1,3-diaminopropanu, uvedený aminoxid je vybrán z bisC2-hydroxyethyl)kokoaminoxidu, bisC2-hydroxyethy1)tallowaminoxidu. dimethylkokoaminoxidu, dimethy1 ta1lowaminoxidu a dimethylhexadecylaminoxidu, a uvedený enzym je vybrán z proteasy, amylasy a lipasy.

41. Způsob podle nároku 25, vyznačující se tím. že v podstatě sestává z kroků:

Cb) přidání polyethoxylováného alkyldiaminu a aminoxidu do vody, která obsahuje uvedené kopulační činidlo vzniklé v kroku Ca), za vytvoření vodného prostředku, a vyznaču27

Cc) spojení uvedeného vodného prostředku s kapalnou enzymovou směsí, která obsahuje enzym_t přičemž uvedené kopulační činidlo je přítomno v množství účinném pro zvýšení rozpustnosti uvedeného polyethoxylováného alkyldiaminu a uvedeného aminoxidu v uvedené vodě, a dále přičemž uvedený polyethoxylováný alkyldiaminu a uvedený aminoxid jsou přítomny ve spojeném množství účinném pro stabilizování uvedeného enzymu obsaženého v uvedeném kapalném enzymovém prostředku.

42. Způsob podle nároku 41,vyznačující se tím. že uvedené ve vodě rozpustné kopulační činidlo je vybráno z ethanolu, propanolu. butylenglykolu, propylenglykolu a hexylenglykolu, uvedený polyethoxylováný alkyldiamin je vybrán z N,N,N-trisC2-hydroxyethyl)-N-tallow-1,3-dlaminopropanu,

N,N,N-polyoxyethylenC10)-N-tallow-1,3-diaminopropanu a N,N,N-polyoxyethylenC15)-N-tallow-1,3-diaminopropanu, a uvedený aminoxid je vybrán z bisC2-hydroxyethyl)kokoaminoxidu, bis(2-hydroxyethy1)tallowaminoxidu, dimethylkokoaminoxidu, dimethyItallowaminoxidu a dimethylhexadecylaminox i du.

43. Způsob nároku 17, vyznačující se t í m, že v podstatě sestává z kroků;

Ca) přidání do vody alespoň jednoho ve vodě rozpustného kopulačního činidla, vybraného z alkoholu s krátkým uhlíkovým řetězcem a glykolu s krátkým uhlíkový řetězcem.

Cb) přidání polyethoxylovaného alkyldiaminu a aminoxidu do vody, která obsahuje uvedené kopulační činidlo vzniklé v kroku Ca), za vytvoření vodného prostředku, a

Cc) přidání enzymu do vodného prostředku vzniklého v kroku Cb), přičemž uvedené kopulační činidlo je přítomno v množství účinném pro zvýšení rozpustnosti uvedeného polyethoxylovaného alkyldiaminu a uvedebého aminoxidu v uvedené vodě, a dále přičemž uvedený polyethoxy1ováný alkyldiamin a aminoxid je přítomen ve společném množství účinném pro stabilizování uvedeného enzymu.

44. Způsob podle nároku 43,vyznačující se tím, že uvedené ve vodě rozpustné kopulační činidlo je vybráno z ethanolu, propanolu, butylenglykolu, propylenglykolu a hexylenglykolu, uvedený polyethoxylovaný alkyldiamin je vybrán z N,N,N-trisC2-hydroxyethyl)-N-tallov-1,3-diaminopropanu,

N.N.N-polyoxyethylenC10)-N-tallow-1,3-diaminopropanu a N,N,N-polyoxyethylenC15)-N-tallov-1,3-diaminopropanu, a uvedený aminoxid je vybrán z blsC2-hydroxyethy1)kokoaminoxidu. blsC2-hydroxyethyl)tal1ovaminoxidu, dimethylkokoaminoxidu, dimethyItal1ovaminoxidu a dimethylhexadecy1aminoxidu. V

45. Směs podle nároku 8, vyznačujíc í s e tím. že v podstatě sestává z= Ca) ve vodě rozpustného kopulačního činidla, vybraného z alkoholu s krátkým uhlíkovým řetězcem a glykolu i s krátkým uhlíkový řetězcem, Cb) Ci) polyethoxylovaného alkyldiaminu, Cii) aminoxidu. Cc) vody, a Cd) enzymu přičemž : složka Ca) je přítomná v množství účinném pro zvýšení

rozpustnosti složky Cb) v uvedené vodě, a přičemž složka Cb) je přítomna v množství účinném pro stabilizování uvedeného enzymu.

46. Směs podle nároku 45, vyznačující se tím. že uvedené ve vodě rozpustné kopulační činidlo je vybráno z ethanolu, propanolu, butylenglykolu, propylenglykolu a hexylenglykolu, uvedený polyethoxylovaný alkyldiamin je vybrán z N, N.N-trisC2-hydroxyethy1)-N-tallow-1,3-diaminopropanu,

N,N,N-polyoxyethylenC10)-N-tallow-1.3-diarainopropanu a N,N,N-polyoxyethylenC15)-N-tallow-1,3-dlaminopropanu, a uvedený aminoxid je vybrán z bisC2-hydroxyethyl)~ kokoaminoxidu. bisC2-hydroxyethy1)ta1lowaminoxidu, dimethylkokoaminoxidu, dimethyItallowamlnoxidu a dimethylhexadecy1aminoxidu, a uvedený enzym je vybrán z proteasy, amylasy a lipasy.

47. Prostředek podle nároku í. vyznačující se tím. že v podstatě sestává zCa) ve vodě rozpustného kopulačního činidla, vybraného z alkoholu s krátkým uhlíkovým řetězcem a glykolu s krátkým uhlíkový řetězcem.

Cb) Ci) polyethoxyloveného alkyldiamlnu (lij aroinoxldu, a

Cc) vody přičemž složka Ca) je přítomná v množství účinném pro zvýšení rozpustnosti složky Cb) v uvedené vodě. a přičemž složka (b) je přítomna v množství účinném pro stabilizování enzymu obsaženého v kapalné enzymové směsi.

48. Prostředek podle nároku 47. vyznačující se tím. že uvedené ve vodě rozpustné kopulační činidlo je vybráno z ethanolu. propanolu. butylenglykolu, propylenglykolu a hexylenglykolu.

uvedený polyethoxylováný alkyldiamin je vybrán z N,N.N-trisC2-hydroxyethy1)-N-tallov-1,3-diaminopropanu,

N,N,N-polyoxyethylenC10)-N-tallov-1.3-diaminopropanu a N.N.N-polyoxyethylenC15)-N-tallow-l.3-diaminopropanu. a uvedený arainoxid je vybrán z bisC2-hydroxyethyl)kokoamlnoxIdu. blsC2-hydroxyethyl)tallovaralnoxidu. dimethylkokoaminoxidu. dimethy1ta1 lávaminoxidu a dimethylhexadecylaminoxldu.

49. Prostředek podle nároku 47, vyznačující se tím. že uvedené ve vodě rozpustné kopulační činidlo je ethanol. hexylenglykol nebo jejich směs uvedený polyethoxylováný alkyldiamin je tallowalkyl CN.N,N-polyoxyethylenC13)-N-tallov-1.3-diaminopropanu). a uvedený aminoxid je bisC2-hydroxyethy1)kokoaminoxid.