JP2003116539A - アスコルビン酸オキシダーゼの安定化法 - Google Patents
アスコルビン酸オキシダーゼの安定化法Info
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Abstract
(57)【要約】
【解決手段】アスコルビン酸オキシダーゼを含む溶液に
糖アルコールを添加することを特徴とするアスコルビン
酸オキシダーゼの安定化法及び糖アルコールがキシリト
ール、マンニトール、ソルビトール、アラビニトール、
エリスリトール、ガラクチトール、イノシトール及びリ
ビトールから選ばれた一種以上である前記のアスコルビ
ン酸オキシダーゼの安定化法。 【効果】本発明によれば、長期保存に優れた、ＡＳＯＤ
の溶液を得ることができる。生化学診断用試薬におい
て、液状化試薬が主流である現在、本発明のように液状
で安定な試薬は、極めて有用である。
糖アルコールを添加することを特徴とするアスコルビン
酸オキシダーゼの安定化法及び糖アルコールがキシリト
ール、マンニトール、ソルビトール、アラビニトール、
エリスリトール、ガラクチトール、イノシトール及びリ
ビトールから選ばれた一種以上である前記のアスコルビ
ン酸オキシダーゼの安定化法。 【効果】本発明によれば、長期保存に優れた、ＡＳＯＤ
の溶液を得ることができる。生化学診断用試薬におい
て、液状化試薬が主流である現在、本発明のように液状
で安定な試薬は、極めて有用である。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、アスコルビン酸オ
キシダーゼの安定化法に関する。
キシダーゼの安定化法に関する。
【０００２】
【従来の技術】アスコルビン酸オキシダーゼ（ＥＣ１．
１０．３．３、以下、ＡＳＯＤと略称する。）は、以下
の反応を触媒する酵素である。
１０．３．３、以下、ＡＳＯＤと略称する。）は、以下
の反応を触媒する酵素である。
【０００３】従来、ＡＳＯＤの安定化法としては、例え
ば、１）ＡＳＯＤを含有する溶液に、金属又は陽性の塩
基性基及び陰性の酸基からなる化合物、もしくは該化合
物とカタラーゼ及び／又はパーオキシダーゼと酸化性色
素カップラーを併用して添加することを特徴とするＡＳ
ＯＤの安定化法（特公平８−１５４３０号公報参照）、
２）ＡＳＯＤを０．１乃至１０００U／ｍｌ及びカルシ
ウムイオン又はヨウ素イオンを０．０１乃至１００ｍM
の範囲で含むことを特徴とするＡＳＯＤの安定化法（特
開平９−１９２９７号公報参照）等が知られている。
ば、１）ＡＳＯＤを含有する溶液に、金属又は陽性の塩
基性基及び陰性の酸基からなる化合物、もしくは該化合
物とカタラーゼ及び／又はパーオキシダーゼと酸化性色
素カップラーを併用して添加することを特徴とするＡＳ
ＯＤの安定化法（特公平８−１５４３０号公報参照）、
２）ＡＳＯＤを０．１乃至１０００U／ｍｌ及びカルシ
ウムイオン又はヨウ素イオンを０．０１乃至１００ｍM
の範囲で含むことを特徴とするＡＳＯＤの安定化法（特
開平９−１９２９７号公報参照）等が知られている。
【０００４】しかしながら、生化学診断に使用する試薬
において、試薬中に含まれる、金属又は陽性の塩基性基
及び陰性の酸基からなる化合物の濃度が高くなると、発
色反応への影響が大きくなり、測定の精度が低下し、又
測定の信頼性が低下する危険性があった。
において、試薬中に含まれる、金属又は陽性の塩基性基
及び陰性の酸基からなる化合物の濃度が高くなると、発
色反応への影響が大きくなり、測定の精度が低下し、又
測定の信頼性が低下する危険性があった。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】本発明は、ＡＳＯＤの
安定法を提供することを目的とするものである。
安定法を提供することを目的とするものである。
【０００６】
【課題を解決するための手段】そこで本発明者等は、上
記課題を解決するため、種々検討を行なった結果、ＡＳ
ＯＤの溶液中に糖アルコールを添加することにより、上
記欠点を解消し、かつ、ＡＳＯＤの安定性を向上させる
ことができること等を知見し、本発明を完成した。すな
わち本発明は、アスコルビン酸オキシダーゼを含む溶液
に糖アルコールを添加することを特徴とするアスコルビ
ン酸オキシダーゼの安定化法である。
記課題を解決するため、種々検討を行なった結果、ＡＳ
ＯＤの溶液中に糖アルコールを添加することにより、上
記欠点を解消し、かつ、ＡＳＯＤの安定性を向上させる
ことができること等を知見し、本発明を完成した。すな
わち本発明は、アスコルビン酸オキシダーゼを含む溶液
に糖アルコールを添加することを特徴とするアスコルビ
ン酸オキシダーゼの安定化法である。
【０００７】
【発明の実施の形態】本発明で用いるＡＳＯＤとして
は、例えば、植物、微生物等起源の任意のＡＳＯＤが挙
げられる。本発明のＡＳＯＤを含む溶液としては、ＡＳ
ＯＤを含有する溶液であれば、特に制限はなく如何なる
性状を有する溶液でも適用される。具体的には、ＡＳＯ
Ｄを水又は緩衝液に溶解して得られる液状ＡＳＯＤ及び
従来公知のＡＳＯＤを含有する液状の生化学診断用試薬
等が挙げられる。
は、例えば、植物、微生物等起源の任意のＡＳＯＤが挙
げられる。本発明のＡＳＯＤを含む溶液としては、ＡＳ
ＯＤを含有する溶液であれば、特に制限はなく如何なる
性状を有する溶液でも適用される。具体的には、ＡＳＯ
Ｄを水又は緩衝液に溶解して得られる液状ＡＳＯＤ及び
従来公知のＡＳＯＤを含有する液状の生化学診断用試薬
等が挙げられる。
【０００８】なお、生化学診断用試薬としては、体液中
のクレアチニンを測定するに当たり、体液中に含まれる
クレアチンに、クレアチンアミジノヒドラーゼ、ザルコ
シンオキシダーゼ、カタラーゼを作用させ、クレアチン
から生成した過酸化水素を消去した後、次いで、体液中
のクレアチニンに、クレアチニンアミドヒドラーゼ、ク
レアチンアミジノヒドラーゼ、ザルコシンオキシダー
ゼ、ペルオキシダーゼ及び色原体を作用させて、クレア
チニンからクレアチンを生成させ、クレアチンからザル
コシンを生成させ、ザルコシンから過酸化水素を生成さ
せ、該過酸化水素を発色させた後、その発色強度を測定
することを特徴とする体液中のクレアチニン測定試薬が
挙げられる。
のクレアチニンを測定するに当たり、体液中に含まれる
クレアチンに、クレアチンアミジノヒドラーゼ、ザルコ
シンオキシダーゼ、カタラーゼを作用させ、クレアチン
から生成した過酸化水素を消去した後、次いで、体液中
のクレアチニンに、クレアチニンアミドヒドラーゼ、ク
レアチンアミジノヒドラーゼ、ザルコシンオキシダー
ゼ、ペルオキシダーゼ及び色原体を作用させて、クレア
チニンからクレアチンを生成させ、クレアチンからザル
コシンを生成させ、ザルコシンから過酸化水素を生成さ
せ、該過酸化水素を発色させた後、その発色強度を測定
することを特徴とする体液中のクレアチニン測定試薬が
挙げられる。
【０００９】そして、アスコルビン酸オキシダーゼを含
む溶液に、例えば、キシリトール、マンニトール、ソル
ビトール、アラビニトール、エリスリトール、ガラクチ
トール、イノシトール及びリビトール等から選ばれた一
種以上の糖アルコールを添加、溶解し、均一化する。糖
アルコールの濃度は、例えば、０．０１〜２．０％（以
下、糖アルコールの濃度は、Ｗ／Ｖ％を意味する。）、
好ましくは、０．１〜１．０％程度である。
む溶液に、例えば、キシリトール、マンニトール、ソル
ビトール、アラビニトール、エリスリトール、ガラクチ
トール、イノシトール及びリビトール等から選ばれた一
種以上の糖アルコールを添加、溶解し、均一化する。糖
アルコールの濃度は、例えば、０．０１〜２．０％（以
下、糖アルコールの濃度は、Ｗ／Ｖ％を意味する。）、
好ましくは、０．１〜１．０％程度である。
【００１０】
【実施例】以下、実施例を挙げて本発明をより具体的に
説明する。
説明する。
【００１１】実施例１
（保存安定性の高いＡＳＯＤ溶液の調製例）５０ｍMリ
ン酸二水素カリウム−リン酸水素二カリウム（ｐH７．
０）にＡＳＯＤ （東洋紡績・社・製、ＡＳＯ−３１
２、カボチャ由来）２０U/mLを含有する溶液を調製し
た。この溶液に安定化剤として、キシリトールを、無添
加（０．００％）（比較例）、０．０１％、０．０５
％、０．１％、０．５％、１．０％及び２．０％（Ｗ／
Ｖ）となる如く添加した。これらの溶液を、品温４２℃
で保存し、２、４及び７日目にＡＳＯＤの残存活性を測
定した。その結果を図１に示した。図１において、キシ
リトールを添加しない場合（比較例）、４２℃、７日間
の保存で（このような過酷な条件は、冷蔵庫で、１年間
保存した場合に相当する。）、４１％の残存活性を示す
のに対して、キシリトールを０．０１％から２．０％ま
で添加した場合、６０％以上の残存活性を示した。キシ
リトール添加による、ＡＳＯＤの試薬溶液中での安定性
が示された。
ン酸二水素カリウム−リン酸水素二カリウム（ｐH７．
０）にＡＳＯＤ （東洋紡績・社・製、ＡＳＯ−３１
２、カボチャ由来）２０U/mLを含有する溶液を調製し
た。この溶液に安定化剤として、キシリトールを、無添
加（０．００％）（比較例）、０．０１％、０．０５
％、０．１％、０．５％、１．０％及び２．０％（Ｗ／
Ｖ）となる如く添加した。これらの溶液を、品温４２℃
で保存し、２、４及び７日目にＡＳＯＤの残存活性を測
定した。その結果を図１に示した。図１において、キシ
リトールを添加しない場合（比較例）、４２℃、７日間
の保存で（このような過酷な条件は、冷蔵庫で、１年間
保存した場合に相当する。）、４１％の残存活性を示す
のに対して、キシリトールを０．０１％から２．０％ま
で添加した場合、６０％以上の残存活性を示した。キシ
リトール添加による、ＡＳＯＤの試薬溶液中での安定性
が示された。
【００１２】実施例２
（ＡＳＯＤを含有する液状のクレアチニン測定試薬の調
製例）体液中のクレアチニンを測定するための、下記第
１試薬及び第２試薬から構成されるクレアチニン測定試
薬を調製した。
製例）体液中のクレアチニンを測定するための、下記第
１試薬及び第２試薬から構成されるクレアチニン測定試
薬を調製した。
【００１３】
第１試薬（以下、ＡＳＯＤを含有する液状のクレアチニン測定試薬という場合
がある。）
ＡＳＯＤ ２０ U/mL
カタラーゼ ５００ U/mL
クレアチナーゼ ３０ U/mL
ザルコシンオキシダーゼ １０ U/mL
TESバッファー ０．１ M、ｐH ７．０
N−エチル−N−（２−ヒドロキシ
−３−スルホプロピル）
−ｍ−トルイジン（TOOS） ３．０ ｍM
トリトンX−１００ ０．１ ％
塩化カリウム ５０ｍM
【００１４】
第２試薬
４−アミノアンチピリン ４．０ ｍM
クレアチニナーゼ ２５０ U/mL
ペルオキシダーゼ １０ U/mL
TESバッファー ０．１ M、ｐH ７．０
トリトンX−１００ ０．１ ％
塩化カリウム ５０ｍM
【００１５】次いで、上記第１試薬（ＡＳＯＤを含有す
る液状のクレアチニン測定試薬）にキシリトールを、無
添加（０．００％）（比較例）、０．０１％、０．０５
％、０．１％、０．５％、１．０％及び２．０％（Ｗ／
Ｖ）となる如く添加し、本発明の「ＡＳＯＤを含有する
液状のクレアチニン測定試薬」を得た。
る液状のクレアチニン測定試薬）にキシリトールを、無
添加（０．００％）（比較例）、０．０１％、０．０５
％、０．１％、０．５％、１．０％及び２．０％（Ｗ／
Ｖ）となる如く添加し、本発明の「ＡＳＯＤを含有する
液状のクレアチニン測定試薬」を得た。
【００１６】次いで、得られた第１試薬（ＡＳＯＤを含
有する液状のクレアチニン測定試薬）を、４２℃で保存
し、２、４及び７日目にＡＳＯＤの残存活性を測定し
た。その結果を図２に示した。
有する液状のクレアチニン測定試薬）を、４２℃で保存
し、２、４及び７日目にＡＳＯＤの残存活性を測定し
た。その結果を図２に示した。
【００１７】図２の結果から、キシリトールを添加しな
い場合（比較例）、４２℃、７日間の保存で、８．５％
の残存活性を示すのに対して、キシリトールを０．０１
％から２．０％まで添加した場合、３０％以上の残存活
性を示した。この結果から、本発明によれば保存安定性
の高い「ＡＳＯＤを含有する液状のクレアチニン測定試
薬」が得られることが判る。
い場合（比較例）、４２℃、７日間の保存で、８．５％
の残存活性を示すのに対して、キシリトールを０．０１
％から２．０％まで添加した場合、３０％以上の残存活
性を示した。この結果から、本発明によれば保存安定性
の高い「ＡＳＯＤを含有する液状のクレアチニン測定試
薬」が得られることが判る。
【００１８】実施例３
実施例２の第１試薬（ＡＳＯＤを含有する液状のクレア
チニン測定試薬）にマンニトール、ソルビトール及びキ
シリトールを、無添加（０．００％）（比較例）と０．
１％（Ｗ／Ｖ）となる如く添加し、本発明の「ＡＳＯＤ
を含有する液状のクレアチニン測定試薬」を得た。
チニン測定試薬）にマンニトール、ソルビトール及びキ
シリトールを、無添加（０．００％）（比較例）と０．
１％（Ｗ／Ｖ）となる如く添加し、本発明の「ＡＳＯＤ
を含有する液状のクレアチニン測定試薬」を得た。
【００１９】次いで、本実施例で得られた第１試薬（Ａ
ＳＯＤを含有する液状のクレアチニン測定試薬）を、４
２℃で保存し７日目にＡＳＯＤの残存活性を測定した。
ＳＯＤを含有する液状のクレアチニン測定試薬）を、４
２℃で保存し７日目にＡＳＯＤの残存活性を測定した。
【００２０】その結果、糖アルコールを添加しない場合
（比較例）、４２℃、７日間の保存で、９．７％の残存
活性を示すのに対し、マンニトールを０．１％添加した
場合、３８．７％、ソルビトールを０．１％添加した場
合、３９．６％、キシリトールを０．１％添加した場
合、４１．９％の残存活性を示した。
（比較例）、４２℃、７日間の保存で、９．７％の残存
活性を示すのに対し、マンニトールを０．１％添加した
場合、３８．７％、ソルビトールを０．１％添加した場
合、３９．６％、キシリトールを０．１％添加した場
合、４１．９％の残存活性を示した。
【００２１】
【発明の効果】本発明によれば、長期保存に優れた、Ａ
ＳＯＤの溶液を得ることができる。生化学診断用試薬に
おいて、液状化試薬が主流である現在、本発明のように
液状で安定な試薬は、極めて有用である。
ＳＯＤの溶液を得ることができる。生化学診断用試薬に
おいて、液状化試薬が主流である現在、本発明のように
液状で安定な試薬は、極めて有用である。
【図１】実施例１で得られたＡＳＯＤ溶液の４２℃にお
けるＡＳＯＤ保存安定性を示す図である。
けるＡＳＯＤ保存安定性を示す図である。
【図２】実施例２で得られた、「ＡＳＯＤを含有する液
状のクレアチニン測定試薬」の４２℃におけるＡＳＯＤ
保存安定性を示す図である。
状のクレアチニン測定試薬」の４２℃におけるＡＳＯＤ
保存安定性を示す図である。
Claims (2)
- 【請求項１】 アスコルビン酸オキシダーゼを含む溶液
に糖アルコールを添加することを特徴とするアスコルビ
ン酸オキシダーゼの安定化法。 - 【請求項２】 糖アルコールがキシリトール、マンニト
ール、ソルビトール、アラビニトール、エリスリトー
ル、ガラクチトール、イノシトール及びリビトールから
選ばれた一種以上である請求項１記載のアスコルビン酸
オキシダーゼの安定化法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2001315396A JP2003116539A (ja) | 2001-10-12 | 2001-10-12 | アスコルビン酸オキシダーゼの安定化法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2001315396A JP2003116539A (ja) | 2001-10-12 | 2001-10-12 | アスコルビン酸オキシダーゼの安定化法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2003116539A true JP2003116539A (ja) | 2003-04-22 |
Family
ID=19133569
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2001315396A Pending JP2003116539A (ja) | 2001-10-12 | 2001-10-12 | アスコルビン酸オキシダーゼの安定化法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2003116539A (ja) |
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2006325547A (ja) * | 2005-05-30 | 2006-12-07 | Kikkoman Corp | フルクトシルペプチドオキシダ−ゼの安定化方法 |
| WO2007148451A1 (ja) * | 2006-06-22 | 2007-12-27 | Kikkoman Corporation | ポリアミンオキシダーゼの安定化方法と基質特異性の改良方法 |
| JP2008206491A (ja) * | 2007-02-28 | 2008-09-11 | Toyobo Co Ltd | ｐ−ヒドロキシ安息香酸水酸化酵素の安定化方法 |
| WO2013176225A1 (ja) | 2012-05-25 | 2013-11-28 | 協和メデックス株式会社 | アスコルビン酸オキシダーゼの安定化方法 |
| JP2019165680A (ja) * | 2018-03-23 | 2019-10-03 | 東洋紡株式会社 | アスコルビン酸オキシダーゼの安定化方法 |
-
2001
- 2001-10-12 JP JP2001315396A patent/JP2003116539A/ja active Pending
Cited By (13)
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| JPWO2007148451A1 (ja) * | 2006-06-22 | 2009-11-12 | キッコーマン株式会社 | ポリアミンオキシダーゼの安定化方法と基質特異性の改良方法 |
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| WO2013176225A1 (ja) | 2012-05-25 | 2013-11-28 | 協和メデックス株式会社 | アスコルビン酸オキシダーゼの安定化方法 |
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| JP2019165680A (ja) * | 2018-03-23 | 2019-10-03 | 東洋紡株式会社 | アスコルビン酸オキシダーゼの安定化方法 |
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20040915 |
|
| A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20061115 |
|
| A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20070315 |