JPWO2006038520A1 - ヒドロキシイミノ酸からのアミノ酸誘導体製造方法 - Google Patents

Abstract

本発明は、工業的に有利なアミノ酸誘導体の製造方法を提供することを課題とする。すなわち、本発明は、下記一般式（Ｉ）【化１】（一般式（Ｉ）において、Ｒ1はそれぞれ置換基を有していてもよい所定の炭化水素基、Ｒ2は炭素数１〜３のアルキル基または水素原子を表し、ｎは０または１である。）で示されるヒドロキシイミノ酸から、下記一般式（ＩＩＩ）【化２】（一般式（ＩＩＩ）において、Ｒ1およびｎは、一般式（Ｉ）におけるＲ1、ｎと同義である。）で示されるアミノ酸誘導体を生成する反応を触媒する微生物および／または酵素の存在下で、当該反応を実施することにより、前記一般式（ＩＩＩ）のアミノ酸誘導体を生成することを特徴とするアミノ酸誘導体の製造方法を提供するものである。

Description

本発明はヒドロキシイミノ酸からアミノ酸誘導体を製造する方法に関し、詳しくは、ヒドロキシイミノ酸から酵素的還元によりアミノ酸誘導体を製造する方法に関する。

アミノ酸は医薬品、食品、試薬類、化学合成中間体等として、産業上極めて重要な成分である。アミノ酸の製造方法としては、抽出法、発酵法、酵素法、化学合成法の４つに大別される。このうち酵素法は、目的とするアミノ酸に構造の近い前駆体を原料として１〜数段階の酵素反応で一気にアミノ酸に転換させる方法である。酵素法は、一般的に副生物が少なく、高純度のアミノ酸を得ることができる。また、酵素法は、基質となる前駆物質が安価に入手できる場合には極めて効率的な製造法である。

アミノ酸誘導体の１種であるモナティン（Ｍｏｎａｔｉｎ）は、南アフリカの灌木の根から単離・抽出された天然の甘味アミノ酸である。モナティンは、ショ糖の数十倍から数千倍に相当する強い甘味を有し、甘味剤として利用が期待されている。

モナティンの製造方法に関し化学合成法としては、例えば、インドール酢酸誘導体とアスパラギン酸の酸ハロゲン化物を原材料としてケトン誘導体を合成し、さらにシアノヒドリン誘導体を得て、これを塩基性条件下で加水分解する方法がある（例えば特許文献１）。また酵素法としては、例えば、インドール−３−ピルビン酸（ＩＰＡ）から中間体として４−（インドール−３−イルメチル）−４−ヒドロキシ−２−オキソグルタル酸（４−（Ｉｎｄｏｌ−３−ｙｌｍｅｔｈｙｌ）−４−ｈｙｄｒｏｘｙ−２−ｏｘｏｇｌｕｔａｒａｔｅ；ＩＨＯＧともいう）を生成し、さらに酵素存在下でモナティンを生成する方法がある（例えば特許文献２）。さらに、上記ＩＨＯＧを酵素の存在下で生成する方法も知られている（例えば特許文献３）。

ＩＨＯＧからモナティンを生成する他の方法として、例えば、ＩＨＯＧから中間体としてＩＨＯＧ−オキシム（ＩＨＯＧ−ｏｘｉｍｅまたは４−ヒドロキシ−４−（３−インドリルメチル）−２−ヒドロキシイミノグルタル酸）を生成し、さらにロジウムなどの還元触媒の存在下でモナティンに変換する方法がある（例えば特許文献４）。しかし、ＩＨＯＧより安定性の高いＩＨＯＧ−オキシムから、微生物または酵素の存在下でモナティンを生成する方法については知られていない。

オキシム（ヒドロキシイミン）を微生物または酵素を用いて還元すること（酵素的還元）については、特許文献５、非特許文献１〜４などに記載がある。例えば、特許文献５には、アセトフェノンオキシムからα−メチルベンジルアミンを製造する方法が記載されている。しかし、ヒドロキシイミノ酸を微生物または酵素の存在下で還元し、アミノ酸を生成する方法については全く知られていない。

特開２００３−１７１３６５号公報 国際公開第２００３／０５６０２６号パンフレット 国際公開第２００４／０１８６７２号パンフレット 国際公開第２００３／０５９８６５号パンフレット 特開平４−２３４９９号公報 Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ， １３，２３４（１９７５） Ｃｌｅｍｅｎｔ ｅｔ ａｌ．， Ａｒｃｈ．ｄｅｒ Ｐａｒｍａｚｉｅ， ３２１，９５５（１９８８） Ｃｌｅｍｅｎｔ ｅｔ ａｌ．， ＪＢＣ， ２７２，１９６１５（１９９７） Ｇｉｂｂｓ ｅｔ ａｌ．， Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔ．， ３１，５５５（１９９０）

化学合成によるアミノ酸誘導体の製造方法は、単離・抽出が困難なアミノ酸誘導体である場合などに有用であるが、反面、設備費が高くなりやすいことや高価な触媒を用いなければならないなど、工業的生産レベルではコスト面で不利な場合も多い。これに対して、アミノ酸誘導体の製造にあっては微生物または酵素を用いた方法は工業的に有用な場合が多い。上記のような状況の下、本発明は、工業的に有利なアミノ酸誘導体の製造方法を提供することを課題とする。

本発明者らは、モナティン等のアミノ酸誘導体の新たな製法について鋭意研究を進めたところ、ヒドロキシイミノ酸を微生物および／または酵素を用いて還元し、アミノ酸誘導体を生成する方法を見出し、本発明を完成させた。すなわち、本発明は、下記アミノ酸誘導体の製造方法を提供するものである。

〔１〕下記一般式（Ｉ）

（一般式（Ｉ）において、Ｒ₁はそれぞれ置換基を有していてもよい炭素数２〜６のアルキル基、炭素数６〜１４のアリール基、炭素数６〜１０のシクロアルキル基、炭素数７〜１９のアラルキル基、炭素数２〜１０のアルコキシアルキル基、またはこれらの炭素骨格中にヘテロ原子を含む基、および下記一般式（ＩＩ）

で示される置換基Ｒ₃から選択される置換基を表す。ここに、Ｒ₄はそれぞれ置換基を有していてもよい炭素数２〜６のアルキル基、炭素数６〜１４のアリール基、炭素数６〜１０のシクロアルキル基、炭素数７〜１９のアラルキル基、炭素数２〜１０のアルコキシアルキル基、またはこれらの炭素骨格中にヘテロ原子を含む基から選択される置換基を表す。Ｘ₁およびＸ₂は相互に独立して水酸基またはカルボニル基を表す。Ｒ₂は炭素数１〜３のアルキル基または水素原子を表す。ｎは０または１である。）
で示されるヒドロキシイミノ酸から、
下記一般式（ＩＩＩ）

（一般式（ＩＩＩ）において、Ｒ₁およびｎは、一般式（Ｉ）におけるＲ₁、ｎと同義である。）
で示されるアミノ酸誘導体を生成する反応を触媒する微生物および／または酵素の存在下で、当該反応を実施することにより、前記一般式（ＩＩＩ）のアミノ酸誘導体を生成することを特徴とするアミノ酸誘導体の製造方法。
〔２〕前記ｎが０であり、生成するアミノ酸誘導体がα−アミノ酸誘導体である上記〔１〕に記載の製造方法。
〔３〕生成するアミノ酸誘導体が、α−Ｌ−アミノ酸である上記〔１〕または〔２〕に記載の製造方法。
〔４〕生成するアミノ酸誘導体が、α−Ｄ−アミノ酸である上記〔１〕または〔２〕に記載の製造方法。
〔５〕前記ｎが１であり、生成するアミノ酸誘導体がβ−アミノ酸誘導体である上記〔１〕に記載の製造方法。
〔６〕前記アリール基が、置換基を有していてもよいフェニル基またはナフチル基である、上記〔１〕から〔５〕のいずれか一項に記載の製造方法。
〔７〕前記アラルキル基が、置換基を有していてもよいフェニルアルキル基またはナフチルアルキル基である、上記〔１〕から〔５〕のいずれか一項に記載の製造方法。
〔８〕前記炭素骨格にヘテロ原子を含む基が、置換基を有していてもよいピリジル基またはインドイル基である、上記〔１〕から〔５〕のいずれか一項に記載の製造方法。
〔９〕下記一般式（ＩＶ）

で示されるＩＨＯＧ−オキシムから、
下記一般式（Ｖ）

で示されるモナティンを生成する反応を触媒する微生物および／または酵素の存在下で、当該反応を実施することによりモナティンを生成することを特徴とする、モナティンの製造方法。
〔１０〕下記一般式（ＶＩ）

で示されるＢＡＥ−オキシムからβ−フェニルアラニンを生成する反応を触媒する微生物および／または酵素の存在下で、当該反応を実施することによりβ−フェニルアラニンを生成することを特徴とする、β−フェニルアラニンの製造方法。
〔１１〕下記一般式（ＶＩＩ）

で示されるインドール−３−ピルビン酸−オキシムからトリプトファンを生成する反応を触媒する微生物および／または酵素の存在下で、当該反応を実施することによりトリプトファンを生成することを特徴とする、トリプトファンの製造方法。
〔１２〕微生物が、シトロバクター（Ｃｉｔｒｏｂａｃｔｅｒ）属、エシェリヒア（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ）属、およびロドコッカス（Ｒｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓ）属からなる群より選ばれるいずれかの属に属ずる細菌の１種または２種以上であることを特徴とする、上記〔１〕から〔１１〕のいずれか一項に記載の製造方法。
〔１３〕微生物が、Ｃｉｔｒｏｂａｃｔｅｒ ｆｒｅｕｎｄｉｉ（シトロバクター フルーンジ）、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｉｎｔｅｒｍｅｄｉａ（エシェリヒア インターメディア）、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ（エシェリヒア コリ）、およびＲｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓ ｍａｒｉｎｏｎａｓｃｅｎｓ（ロドコッカス マリノナシーンズ）からなる群から選ばれることを特徴とする、上記〔１〕から〔１２〕のいずれか一項に記載の製造方法。
〔１４〕一般式（Ｉ）で示される化合物から一般式（ＩＩＩ）で示される化合物を生成する反応を行う反応液中に、ＮＡＤＨ、ＮＡＤＰＨ、ピリドキサール−５’−リン酸、およびＭｇＣｌ₂からなる群から選ばれる化合物のうち、少なくとも一つを添加することを特徴とする上記〔１〕から〔１３〕のいずれか一項に記載の製造方法。

本発明によれば、簡便で、コスト的にも有利なアミノ酸の製造方法が提供される。

本発明のアミノ酸誘導体の製造方法は、所定の微生物および／または酵素の触媒作用により上記一般式（Ｉ）のヒドロキシイミノ酸を上記一般式（ＩＩＩ）の化合物に変換する。本明細書においてアミノ酸誘導体には、アミノ酸そのものおよびその誘導体を含む。

本発明で用いられるこの反応を触媒する能力を有する微生物としては、好ましくは、シトロバクター（Ｃｉｔｒｏｂａｃｔｅｒ）属、エシェリヒア（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ）属、コリネバクテリウム（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属、ロドコッカス（Ｒｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓ）属、サルモネラ（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ）属、およびアーウィニア（Ｅｒｗｉｎｉａ）属からなる群より選ばれるいずれかの属に属する細菌などが挙げられる。より具体的には好ましい微生物として、Ｃｉｔｒｏｂａｃｔｅｒ ｆｒｅｕｎｄｉｉ（シトロバクター フルーンジ）、Ｃｉｔｒｏｂａｃｔｅｒ ｉｎｔｅｒｍｅｄｉｕｓ（シトロバクター インターメディアス）、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｉｎｔｅｒｍｅｄｉａ（エシェリヒア インターメディア）、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ（エシェリヒア コリ）、Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｅｑｕｉ（コリネバクテリウム エクイ）、Ｒｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓ ｍａｒｉｎｏｎａｓｃｅｎｓ（ロドコッカス マリノナシーンズ）、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｓｐ．（サルモネラ エスピー．）、Ｅｒｗｉｎｉａ ａｍｙｌｏｖｏｒａ（アーウィニア アミロボラ）、およびＳａｌｍｏｎｅｌｌａ ｅｎｔｅｒｉｔｉｄｉｓ（サルモネラ エンテリチヂス）などが挙げられる。

さらに具体的には、好ましい微生物として次の菌株が例示される。下記に菌株名およびその寄託先等について示す。

（１）Ｃｉｔｒｏｂａｃｔｅｒ ｆｒｅｕｎｄｉｉ ＩＦＯ １３５４６
（ｉ）受託番号：ＩＦＯ １３５４６
（iii）寄託先（住所）：独立行政法人製品評価技術基盤機構バイオテクノロジー本部生物遺伝資源部門（〒２９２−０８１８ 日本国千葉県木更津市かずさ鎌足２−５−８）

（２）Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｉｎｔｅｒｍｅｄｉａ ＡＪ ２６０７
（ｉ）受託番号：ＦＥＲＭ ＢＰ−１０４０１（ＦＥＲＭ Ｐ−２０２１５より移管）
（ii）原寄託日：２００４年９月８日
（iii）寄託先（住所）：独立行政法人産業技術総合研究所 特許生物寄託センター
（〒３０５−８５６６ 日本国茨城県つくば市東１丁目１番地１ 中央第６）

（３）Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ ＡＴＣＣ １３０７０
（ｉ）受託番号：ＡＴＣＣ １３０７０
（iii）寄託先（住所）：アメリカン・タイプ・カルチャー・コレクション（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ， Ｐ．Ｏ．Ｂｏｘ １５４９ Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ ２０１１０，ＵＳＡ）

（４）Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ ＡＴＣＣ １２８１４
（ｉ）受託番号：ＡＴＣＣ １２８１４
（iii）寄託先（住所）：アメリカン・タイプ・カルチャー・コレクション（Ｐ．Ｏ．Ｂｏｘ １５４９ Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ ２０１１０，ＵＳＡ）

（５）Ｒｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓ ｍａｒｉｎｏｎａｓｃｅｎｓ ＡＪ１１０３５４
（ｉ）受託番号：ＦＥＲＭ ＢＰ−１０４００（ＦＥＲＭ Ｐ−２０２１３より移管）
（ii）原寄託日：２００４年９月８日
（iii）寄託先（住所）：独立行政法人産業技術総合研究所 特許生物寄託センター
（〒３０５−８５６６ 日本国茨城県つくば市東１丁目１番地１ 中央第６）

本発明で用いられる酵素は、上記微生物などから単離・精製することができる。また、「微生物および／または酵素の存在下で」とは、一般式（Ｉ）で示されるヒドロキシイミノ酸を一般式（ＩＩＩ）で示されるアミノ酸誘導体に変換する反応系に微生物および／または酵素を存在させることを意味する。「微生物および／または酵素」は、本発明の所望の活性を有する限り、その由来及び調製方法等に特に制限はない。微生物としては、前述した本発明の反応を媒介する微生物に加え、反応を媒介する酵素をコードする遺伝子（組み換え遺伝子を含む）により形質転換された宿主微生物、あるいは該宿主微生物が生産する酵素を使用することもできる。すなわち、一般式（Ｉ）で示されるヒドロキシイミノ酸を一般式（ＩＩＩ）で示されるアミノ酸誘導体に変換する限りいかなる形態で微生物および／または酵素を反応系に存在させてもよい。また、微生物および酵素はいずれか一方を単独で用いてもよいし、双方が混在してもよい。

本発明の製法で用いられる「微生物および／または酵素」としては次のような形態をとり得る。具体的形態としては、上記微生物の培養物、当該培養物から分離された微生物菌体、菌体処理物などが含まれる。微生物の培養物とは、微生物を培養して得られる物のことであり、より具体的には、微生物菌体、その微生物の培養に用いた培地および培養された微生物により生成された物質の混合物などのことをいう。また、微生物菌体は洗浄し、洗浄菌体として用いてもよい。また、菌体処理物には、菌体を破砕、溶菌、凍結乾燥したものなどが含まれ、さらに菌体などを処理して回収される粗精製酵素、さらに精製した精製酵素なども含まれる。精製処理された酵素としては、各種精製法によって得られる部分精製酵素等を使用してもよいし、これらを共有結合法、吸着法、包括法等によって固定化した固定化酵素を使用してもよい。また、使用する微生物によっては、培養中に一部、溶菌するものもあるので、この場合には培養液上清も上述の「微生物および／または酵素」として利用できる。

また、本発明の製法で用いられる「微生物および／または酵素」としては、上記一般式（Ｉ）で示されるヒドロキシイミノ酸を一般式（ＩＩＩ）で示されるアミノ酸誘導体に変換する酵素を発現した遺伝子組換え株を用いてもよいし、アセトン処理菌体、凍結乾燥菌体等の菌体処理物を使用してもよいし、これらを共有結合法、吸着法、包括法等によって固定化した固定化菌体、固定化菌体処理物を使用してもよい。

本発明の製造方法では、一般式（Ｉ）で示されるヒドロキシイミノ酸を出発物質とする反応を行う。一般式（Ｉ）おけるＲ₁はより具体的には下記のものが例示される。

Ｒ₁が炭素数が２〜６のアルキル基である場合とは、具体例を示すと、エチル基、ｎプロピル基、イソプロピル基、ｎブチル基、イソブチル基、secブチル基、tertブチル基、ｎペンチル基、イソペンチル基、ネオペンチル基、ｎヘキシル基、イソヘキシル基などが含まれる。

また、Ｒ₁が炭素数６〜１４のアリール基である場合とは、具体例を示すと、フェニル基、トリル基、キシリル基、ビフェニリル基、ナフチル基、アントリル基、フェナントリル基などが含まれ、好適なものとしてはフェニル基、ナフチル基などが挙げられる。

Ｒ₁が炭素数６〜１０のシクロアルキル基である場合とは、具体例を示すと、シクロヘキシル基、シクロヘプタニル基、シクロオクタニル基、シクロノナニル基、シクロデカニル基などが含まれる。

Ｒ₁が炭素数が７〜１９のアラルキル基である場合とは、具体例を示すと、ベンジル基、ベンズヒドリル基、フェネチル基、トリチル基などのフェニルアルキル基、シンナミル基、スチリル基、並びにナフチルアルキル基などが含まれ、好適なものとしてはフェニルアルキル基、ナフチルアルキル基などが挙げられる。

Ｒ₁が炭素数２〜１１のアルコキシアルキル基である場合とは、具体例を示すと、炭素数１〜１０のアルキル基に、メトキシ基、エトキシ基、プロポキシ基、イソプロポキシ基、ブトキシ基、ペンチルオキシ基、フェノキシ基、ヘプトキシ基、オクトキシ基、ノナノキシ基、デカノキシ基、およびウンデコキシ基から選ばれる基が置換されたものを含む。

Ｒ₁が炭素骨格中にヘテロ原子を含む基の一形態には、複素環含有炭素水素基が含まれる。複素環含有炭化水素基とは、環式化合物の環にヘテロ原子を含む環系炭化水素基である。複素環含有炭化水素基としてはヘテロアリール基などが含まれ、芳香族性の有無には限定されず、また単環式であっても多環式であってもよい。複素環含有炭化水素基として具体的には、フリル基、チエニル基、ピリジル基、ピペリジル基、ピペリジノ基、モルホリノ基、インドリル基、さらには、これらの複素環基により置換されたアルキル基等が含まれ、好適なものとしてはピリジル基、インドイル基などが挙げられる。

上記Ｒ₁は、さらに、ハロゲン原子、水酸基、炭素数３までのアルキル基、炭素数３までのアルコキシル基、およびアミノ基から選ばれる少なくとも一種の置換基などにより置換されていてもよい。

Ｒ₂は、炭素数１〜３のアルキル基または水素原子を表し、炭素数１〜３のアルキル基にはエチル基、メチル基、ｎプロピル基、イソプロピル基が含まれる。

Ｒ₄のアルキル基、アリール基、シクロアルキル基、アラルキル基、アルコキシアルキル基、これらの炭素骨格中にヘテロ原子を含む基、およびさらにこれらが有していてもよい置換基は上記Ｒ₁の場合と同様である。

一般式（Ｉ）で示される化合物は、ヒドロキシイミノ基に対応するＣＯ基をＣＮＯＨ基に変換する各種のオキシム化反応等によって得られる。より具体的には、例えば、国際公開第２００３／０５６０２６号パンフレット、国際公開第２００４／０１８６７２号パンフレット、国際公開第２００３／０５９８６５号パンフレットなどに記載の方法によって得ることができる。

オキシム化（ヒドロキシイミノ化）の方法としては、中性又はアルカリ性条件下において、対応するケト体に対して、下記一般式（ＶIII）

（上記一般式（ＶIII）において、Ｒ₅は水素原子、アルキル基、アリール基又はアラルキル基を表す。）
に表されるアミン化合物又はその塩とを反応せしめることによって行う。ここに、Ｒ₅がアルキル基、アリール基又はアラルキル基である場合、Ｒ₅は炭素原子を１−３有するアルキル基、アリール基またはアラルキル基が好ましく、結晶化の観点からより好ましくは、Ｒ₅はメチル、ベンジル基から選択される。

より簡便には、一般式（ＶIII）においてＲ₅が水素原子であるヒドロキシアミンを用いてオキシム化反応を行うことができる。一例を挙げると、ヒドロキシルアミン塩酸塩を中性から弱アルカリ条件下でケト体を含む溶液に添加し、室温から10℃程度の条件で0.5〜60時間攪拌することにより、オキシム化することができる。オキシム化反応のpHは好ましくは6〜10、より好ましくはpH7〜9で行うことができる。ケト体のオキシム化反応の条件には特段の制限は無く、当該業者であれば簡単な予備検討によって、オキシム化反応条件を決定することができる。

本発明の製造方法においては、上記一般式（Ｉ）で示される化合物が変換されて上記一般式（ＩＩＩ）で示される化合物を得る。Ｒ₁等およびｎの定義は一般式（ＩＩＩ）についても上記一般式（Ｉ）と同様である。

一般式（Ｉ）において、ｎが０である場合には一般式（ＩＩＩ）の化合物としてα−アミノ酸誘導体が得られる。また、ｎが１である場合には、β−アミノ酸誘導体が得られる。また、一般式（Ｉ）の化合物についてＬ体またはＤ体を選択すること等の手法により、一般式（ＩＩＩ）の化合物についてもＬ体またはＤ体を生成し得る。またＬ体およびＤ体の混合物として得られる場合には、混合物からいずれか一方を単離・精製してもよい。

微生物および／または酵素を用いる反応系の条件は、用いる微生物、酵素および原材料の具体的な種類などによって適宜調整してよい。微生物および／または酵素の使用量は、目的とする効果を発揮する量（有効量）であればよく、この有効量は当業者であれば簡単な予備実験により容易に求められるが、例えば酵素を用いる場合には、０．０１から１００ユニット（Ｕ）程度、洗浄菌体を用いる場合は０．１〜５００ｇ／Ｌ程度が好適である。反応温度については、通常、利用する酵素が活性を有する範囲内、即ち好ましくは１０〜５０℃で行われるが、より好ましくは２０〜４０℃、更に好ましくは２５〜３７℃の範囲で行われる。酵素反応液のｐＨ値については、通常、２〜１２、好ましくは７〜１１、より好ましくは８〜９の範囲で調節される。

また、本発明の製造方法の好ましい一実施形態として、反応液中にＮＡＤＨ、ＮＡＤＰＨ、ピリドキサール−５’−リン酸（以下、ＰＬＰとも記す）、ＭｇＣｌ₂からなる群から選ばれる化合物のうち、少なくとも一つを添加することができる。これらの添加物を加えることにより、一般式（ＩＩＩ）で示されるアミノ酸誘導体の生成量を増加させることができる。

上記４種の添加物の組み合わせは微生物等の種類により適宜調整してよく、より好ましくは少なくともＮＡＤＨ、ＮＡＤＰＨおよびＰＬＰの３種を含む形態が挙げられ、さらに好ましくは上記の４種の添加物をすべて含む形態が挙げられる。また、反応液中における各添加物の好ましい配合量は次の通りである。ＮＡＤＨについては、好ましくは0.01〜200ｍＭ、より好ましくは0.1〜50ｍＭである。ＮＡＤＰＨについては、好ましくは0.01〜200ｍＭ、より好ましくは0.1〜50ｍＭである。ＭｇＣｌ₂については、好ましくは0.01〜10ｍＭ、より好ましくは0.1〜1ｍＭである。ＰＬＰについては、好ましくは0.01〜10ｍＭ、より好ましくは0.1〜1ｍＭである。

本発明の製造方法は、Ｒ₁が芳香環または複素環を含む基であるアミノ酸誘導体の製造に好適であり、より好ましくはモナティン、トリプトファン、フェニルアラニンなどの製造に適用される。モナティンの製造の場合、一般式（Ｉ）で示される化合物は、ＩＨＯＧ−オキシムである。トリプトファンの製造の場合、一般式（Ｉ）で示される化合物は、ＩＰＡ−オキシム（インドール−３−ピルビン酸−オキシム）である。また、フェニルアラニンの製造の場合、一般式（Ｉ）で示される化合物は、ＢＡＥ−オキシム（３−ヒドロキシイミノ−３−フェニルプロピオン酸メチルエステル、３−ｈｙｄｒｏｘｙｉｍｉｎｏ−３−ｐｈｅｎｙｌ−ｐｒｏｐｉｏｎｉｃ ａｃｉｄ ｍｅｔｈｙｌ ｅｓｔｅｒ）である。なお、ＢＡＥは、ベンゾイルアセタートエチルエステル（ｂｅｎｚｏｙｌ ａｃｅｔａｔｅ ｅｔｈｙｌ ｅｓｔｅｒ）の略称である。

以下、本発明の実施例について説明するが、本発明は下記実施例に限定されるものではない。
本実施例において、モナティンの定量は、ジーエルサイエンス社製「Ｉｎｅｒｔｓｉｌ
ＯＤＳ−８０Ａ」（５μｍ、６×１５０ｍｍ）を利用した高速液体クロマトグラフィーにより行った。分析条件は、以下に示す通りである。

移動相：１２％（ｖ／ｖ）アセトニトリル／０．０５％（ｖ／ｖ）トリフルオロ酢酸水溶液；
流速：１．５ｍｌ／ｍｉｎ；
カラム温度：３０℃；および
検出：ＵＶ２１０ｎｍ

本分析条件により、（２Ｓ，４Ｓ）−モナティンおよび（２Ｒ，４Ｒ）−モナティンは１２．１分に、（２Ｓ，４Ｒ）−モナティンおよび（２Ｒ，４Ｓ）−モナティンは９．７分のリテンションタイムにて分別定量ができる。

また、必要に応じて、ダイセル化学工業製光学分割カラム「ＣＲＯＷＮＰＡＫ ＣＲ（＋）」（４．６×１５０ｍｍ）を利用した高速液体クロマトグラフィーによる分析も行った。分析条件は以下に示す通りである。

移動相：過塩素酸水溶液（ｐＨ１．５）／１０％（ｖ／ｖ）メタノール；
流速：０．５ｍｌ／ｍｉｎ；
カラム温度：３０℃；および
検出：ＵＶ２１０ｎｍ

本条件によりモナティン光学異性体は（２Ｒ，４Ｓ）、（２Ｒ，４Ｒ）、（２Ｓ，４Ｒ）、および（２Ｓ，４Ｓ）の順に４２分、５７分、６４分、および１２５分のリテンションタイムにて分別定量ができる。

製造例１ ＩＨＯＧ−オキシム ２アンモニウム塩（４−ヒドロキシ−４−（３−インドリルメチル）−２−ヒドロキシイミノグルタル酸２アンモニウム塩）の製造
１．６ｗｔ％水酸化ナトリウム水溶液９１７ｇに、インドール−３−ピルビン酸７３．８ｇ（３５２ミリモル）を加えて溶解した。反応溶液を３５℃とし、３０％水酸化ナトリウム水溶液を用いてｐＨ値を１１．１に保ちながら、５０％ピルビン酸水溶液３１０．２ｇ（１７６１ミリモル）を２時間かけて滴下した。更に４．５時間反応させて、４−ヒドロキシ−４−（３−インドリルメチル）−２−ケトグルタル酸を含有する反応溶液を得た。これに、３０％水酸化ナトリウム水溶液にてｐＨ値を７に保ちながら、４０％ヒドロキシルアミン塩酸塩水溶液３６７．２ｇ（２１１４ミリモル）を加え、５℃にて１７．５時間攪拌した。濃塩酸を用いて反応液のｐＨ値を２にし、有機物を酢酸エチルで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄し、濃縮して残渣を得た。残渣に２８％アンモニア水６０ｍｌと２−プロパノール１３５０ｍｌから再結晶を行い、４−ヒドロキシ−４−（３−インドリルメチル）−２−ヒドロキシイミノグルタル酸の２アンモニウム塩４３．４ｇ（１４２ミリモル：収率４０％ 対インドール−３−ピルビン酸）を結晶として得た。

製造例２ ＩＨＯＧ−オキシム ２カリウム塩（４−ヒドロキシ−４−（３−インドリルメチル）−２−ヒドロキシイミノグルタル酸２カリウム塩）の製造
製造例１に従って製造した４−ヒドロキシ−４−（３−インドリルメチル）−２−ヒドロキシイミノグルタル酸２アンモニウム塩１０ｇを水２０ｍｌに溶解し、１００ｍｌの陽イオン交換樹脂 ＤＩＡＩＯＮ ＰＫ２２８（カリウム型、三菱化学製）を充填したカラムに通液して所望のイオンに交換した後、溶離液を２０ｇまで濃縮し４−ヒドロキシ−４−（３−インドリルメチル）−２−ヒドロキシイミノグルタル酸２カリウム塩水溶液を得た。

製造例３ インドールピルビン酸オキシムの製造
インドールピルビン酸４．０６ｇ（０．０２モル）及び８５％水酸化カリウム１．３２ｇ（０．０２モル）を水５０ｍｌに溶解し、これに塩酸ヒドルキシルアミン１．５３ｇ（０，０２２モル）を加えた。さらに８５％水酸化カリウム１．４５ｇ（０．０２２モル）を加え、室温下に１夜攪拌した。反応液に塩酸を加えｐＨ２に調整し、析出した結晶を濾取した。得られた湿結晶を乾燥しインドールピルビン酸オキシム３．３４ｇを得た。インドールピルビン酸に対する収率は７６．５％であり、ＥＳＩ−ＭＳ：２１９．１［Ｍ＋Ｈ］⁺のシグナルが得られた。

製造例４ ベンゾイル酢酸エチルエステルオキシムの製造
ベンゾイル酢酸エチルエステル３．８４ｇ（０．０２モル）をＭｅＯＨ５０ｍｌに溶解し、これに塩酸ヒドロキシルアミン１．５３ｇ（０．０２２モル）を加えた。トリエチルアミン２．２３ｇ（０．０２２モル）を加え、室温下に１夜攪拌した。反応液を減圧下に濃縮し、残渣に水を加え析出した結晶を濾取した。乾燥しベンゾイル酢酸エチルエステルオキシム３．２７ｇを得た。ベンゾイル酢酸エチルエステルに対する収率は７８．９％であり、ＥＳＩ−ＭＳ：２０８．２［Ｍ＋Ｈ］⁺のシグナルが得られた。

（分析条件）
ガードカラム：Ｓｈｏｄｅｘ ＩＣ ＹＫ−Ｇ（昭和電工製）
カラム ：Ｓｈｏｄｅｘ ＩＣ ＹＫ−４２１（昭和電工製）
検出 ：電気伝導度検出器
溶離液 ：４ｍＭ燐酸＋５ｍＭ１８−Ｃｒｏｗｎ−６
流速 ：０．６ｍｌ／ｍｉｎ
分析温度 ：４０℃

実施例１ ＩＨＯＧ−オキシム還元活性菌の採取
４−ヒドロキシ−４−（３−インドリルメチル）−２−ヒドロキシイミノグルタル酸（ＩＨＯＧ−オキシム：ＩＨＯＧ−ｏｘｉｍｅ）を基質としてモナティンを生成するＩＨＯＧ−オキシム還元活性菌株の採取を実施した。

ブイヨン平板培地（栄研化学製）に供試微生物（細菌または酵母）を接種し、３０℃で２４時間培養した。得られた培養物をグリセロール０．５ｇ／ｄｌ、フマル酸０．５ｇ／ｄｌ、酵母エキス０．３ｇ／ｄｌ、ペプトン０．２ｇ／ｄｌ、硫安０．５ｇ／ｄｌ、Ｋ₂ＨＰＯ₄ ０．３ｇ／ｄｌ、ＫＨ₂ＰＯ₄０．１ｇ／ｄｌ、ＭｇＳＯ₄・７Ｈ₂Ｏ ０．０５ｇ／ｄｌ、ＩＨＯＧ−オキシム・２アンモニウム塩 ０．２ｇ／ｄｌ、寒天末２ｇ／ｄｌ（ｐＨ６．５）を含むプレートに接種し、３０℃で２４時間培養した。得られた菌体を湿菌体重量で約１％（ｗ／ｖ）となるように、以下の２種類の反応液にそれぞれ接種し、３０℃で２４時間反応させた。

反応液１：１００ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ ８．０）、５０ｍＭ ＩＨＯＧ−オキシム・２アンモニウム塩、１ｍＭ ＭｇＣｌ₂、１ｍＭ ピリドキサール−５’−リン酸（ＰＬＰ）、２０ｍＭ ＮＡＤＨ、２０ｍＭ ＮＡＤＰＨ、１％（ｖ／ｖ） トルエン

ＴＬＣを用いて生成モナティンの定性分析を行った。反応液１μｌをＴＬＣプレートシリカゲル６０Ｆ２５４（Ｍｅｒｃｋ製）にスポットし、ｎ−ブタノール：酢酸：水＝４：１：２に混合した溶液を用いて展開後、ニンヒドリン発色を行った。モナティンはおおよそＲｆ＝０．３９の位置にピンク色のスポットとして検出できる。

モナティンの生成が認められた反応液をＨＰＬＣ分析に供して、生成モナティンを定量分析した。その結果、表１に示す菌株においてモナティンの生成が認められ、即ちＩＨＯＧ−オキシムから微生物変換にてモナティンを生成せしめることが出来た。

実施例２ ＩＨＯＧ−オキシム・２カリウム塩を基質としたモナティンの生成
表２に示す菌株を用いて、ＩＨＯＧ−オキシム・２カリウム塩を基質とした変換反応を実施した。菌体の調製方法は実施例１記載の方法と同様に行い、反応液は以下に示す反応液２および反応液３を用いた。３０℃で２４時間反応させた後にＨＰＬＣにて生成モナティン量を定量した。その結果、表２に示す通り、ＩＨＯＧ−オキシム・２カリウム塩からもモナティンが生成した。また、反応液３と４の比較から、反応液中にＮＡＤＨ、ＮＡＤＰＨ、ＭｇＣｌ₂、ピリドキサール−５’−リン酸（ＰＬＰ）などを添加することにより生成モナティン量が増加した。

反応液２：１００ｍＭ Ｇｌｙｃｉｎｅ−ＮａＯＨ（ｐＨ９．０）、５０ｍＭ ＩＨＯＧ−オキシム・２カリウム塩、１ｍＭ ＭｇＣｌ₂、１ｍＭ ピリドキサール−５’−リン酸（ＰＬＰ）、２５ｍＭ ＮＡＤＨ、２５ｍＭ ＮＡＤＰＨ、１％（ｖ／ｖ）トルエン

反応液３：１００ｍＭ Ｇｌｙｃｉｎｅ−ＮａＯＨ（ｐＨ９．０）、５０ｍＭ ＩＨＯＧ−オキシム・２カリウム塩、１％（ｖ／ｖ）トルエン

実施例３ ＰＬＰ、ＭｇＣｌ₂、ＮＡＤ（Ｐ）Ｈの添加効果
Ｃｉｔｒｏｂａｃｔｅｒ ｆｒｅｕｎｄｉｉ ＩＦＯ１３５４６、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｉｎｔｅｒｍｅｄｉａ ＡＪ２６０７によるＩＨＯＧ−オキシム還元反応におけるＰＬＰ、ＭｇＣｌ₂、ＮＡＤ（Ｐ）Ｈの添加効果を検討した。

表３に示す組成の反応液（反応液４〜９）をそれぞれ調製し、実施例１に示す方法と同様にＩＨＯＧ−オキシム還元反応を実施し、生成したモナティンを定量した。
その結果（表４）、それぞれの菌株において、ＰＬＰ、ＭｇＣｌ₂、あるいはＮＡＤ（Ｐ）Ｈを添加することにより生成モナティン量が増加した。

さらに、反応液４を用いて生成したモナティンについて、光学分割カラム「ＣＲＯＷＮＰＡＫ ＣＲ（＋）」を用いて光学異性体を同定したところ、これらのモナティンは（２Ｓ，４Ｓ）体であることが明らかとなった。

実施例４ ＩＰＡ−オキシム（インドール−３−ピルビン酸−オキシム）からのトリプトファン（Ｔｒｐ）の生成
ブイヨン平板培地（栄研化学）にＣｉｔｒｏｂａｃｔｅｒ ｆｒｅｕｎｄｉｉ ＩＦＯ
１３５４６、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｉｎｔｅｒｍｅｄｉａ ＡＪ ２６０７を接種し、３０℃で２４時間培養した。これをグリセロール０．５ｇ／ｄｌ、フマル酸０．５ｇ／ｄｌ、酵母エキス０．３ｇ／ｄｌ、ペプトン０．２ｇ／ｄｌ、硫安０．５ｇ／ｄｌ、Ｋ₂ＨＰＯ₄ ０．３ｇ／ｄｌ、ＫＨ₂ＰＯ₄０．１ｇ／ｄｌ、ＭｇＳＯ₄・７Ｈ₂Ｏ ０．０５ｇ／ｄｌ、ＩＨＯＧ−オキシム・２アンモニウム塩 ０．２ｇ／ｄｌ、寒天末２ｇ／ｄｌ（ｐＨ６．５）を含むプレートに接種し、３０℃で２４時間培養した。得られた菌体を湿菌体重量で約１％（ｗ／ｖ）となるように、以下の反応液１０に接種し、３０℃で２４時間反応させた。

反応液１０：１００ｍＭ Ｇｌｙｃｉｎｅ−ＮａＯＨ（ｐＨ９．０）、５０ｍＭ ＩＰＡ−オキシム、１ｍＭ ＭｇＣｌ₂、１ｍＭ ピリドキサール−５’−リン酸（ＰＬＰ）、２５ｍＭ ＮＡＤＨ、２５ｍＭ ＮＡＤＰＨ、１％（ｖ／ｖ）トルエン

ＴＬＣを用いて生成トリプトファンの定性分析を行った。反応液１μｌをＴＬＣプレートシリカゲル６０Ｆ２５４（Ｍｅｒｃｋ製）にスポットし、ｎ−ブタノール：酢酸：水＝４：１：２に混合した溶液を用いて展開後、ニンヒドリン発色を行った。トリプトファンはおおよそＲｆ＝０．５２の位置に紫色のスポットとして検出できる。

トリプトファンの生成が認められた反応液をＨＰＬＣ分析に供して、生成トリプトファンを定量分析した。その結果、トリプトファンの生成が認められ、即ちＩＰＡ−オキシムから微生物変換にてトリプトファンを生成せしめることが出来た。

（分析条件）
カラム ：Ｉｎｅｒｔｓｉｌ ＯＤＳ−８０Ａ（ジーエルサイエンス製）
検出 ：ＵＶ２１０ｎｍ
溶離液 ：１２％（ｖ／ｖ）アセトニトリル／０．０５％ トリフルオロ酢酸水溶液
流速 ：１．５ｍｌ／ｍｉｎ
分析温度：３０℃

実施例５ ＢＡＥ−オキシムからのβ−フェニルアラニン（β−Ｐｈｅ）の生成
Ｃｉｔｒｏｂａｃｔｅｒ ｆｒｅｕｎｄｉｉ ＩＦＯ １３５４６、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｉｎｔｅｒｍｅｄｉａ ＡＪ２６０７を供試菌株とし、実施例４と同様に培養して得られた菌体を湿菌体重量で約１％（ｗ／ｖ）となるように、以下の反応液１１に接種し、３０℃で２４時間反応させた。

反応液１１：１００ｍＭ Ｇｌｙｃｉｎｅ−ＮａＯＨ（ｐＨ９．０）、５０ｍＭ ＢＡＥ−オキシム、１ｍＭ ＭｇＣｌ₂、１ｍＭ ピリドキサール−５’−リン酸（ＰＬＰ）、２５ｍＭ ＮＡＤＨ、２５ｍＭ ＮＡＤＰＨ、１％（ｖ／ｖ） トルエン

ＴＬＣを用いて生成物の定性分析を行った。反応液１μｌをＴＬＣプレートシリカゲル６０Ｆ２５４（Ｍｅｒｃｋ製）にスポットし、ｎ−ブタノール：酢酸：水＝４：１：２に混合した溶液を用いて展開後、ニンヒドリン発色を行った。β−フェニルアラニンエチルエステルはおおよそＲｆ＝０．７２の位置に黄色のスポットとして、β−フェニルアラニンはおおよそＲｆ＝０．５１の位置に茶色のスポットとして、それぞれ検出できる。その結果、これら反応液においてはβ−フェニルアラニンと同一のＲｆ付近にスポットの生成を認めた。

β−フェニルアラニンスポットの生成が認められた反応液をＨＰＬＣ分析に供して分析した。その結果、β−フェニルアラニンの生成が認められ、即ちＢＡＥオキシムから微生物変換にてβ−フェニルアラニンを生成せしめることが出来た。

（分析条件）
カラム ：Ｉｎｅｒｔｓｉｌ ＯＤＳ−８０Ａ（ジーエルサイエンス製）
検出 ：ＵＶ２１０ｎｍ
溶離液 ：１２％（ｖ／ｖ）アセトニトリル／０．０５％ トリフルオロ酢酸水溶液
流速 ：１．５ｍｌ／ｍｉｎ
分析温度：３０℃

実施例６ ¹⁵ＮラベルＩＰＡ−オキシム（¹⁵Ｎ同位体でラベルしたインドール−３−ピルビン酸オキシム）からのトリプトファン（Ｔｒｐ）の生成
実施例４と同様の方法によりＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｉｎｔｅｒｍｅｄｉａ ＡＪ ２６０７を培養し、湿菌体を得た。得られた菌体を湿菌体重量で約１％（ｗ／ｖ）となるように、以下の反応液１２に接種し、３０℃で２４時間反応させた。

反応液１２：１００ｍＭ Ｇｌｙｃｉｎｅ−ＮａＯＨ（ｐＨ９．０）、５０ｍＭ ¹⁵ＮラベルＩＰＡ−オキシム、１ｍＭ ＭｇＣｌ₂、１ｍＭ ピリドキサール−５’−リン酸（ＰＬＰ）、２５ｍＭ ＮＡＤＨ、２５ｍＭ ＮＡＤＰＨ、１％（ｖ／ｖ）トルエン

¹⁵ＮラベルＩＰＡ−オキシムは、以下のようにして調製した。アルゴン気流下、２５℃で水６０ｍｌにインドールピルビン酸１．４１３ｇ（６．９５ミリモル）及び８ＮＮａＯＨ０．９１３ｍｌを加えて溶解した。その溶解液に¹⁵ＮＨ₂ＯＨ塩酸塩０．５ｇ（７．０９ミリモル）及び８Ｎ ＮａＯＨ０．９１３ｍｌを添加し、２５℃で一時間攪拌した。１Ｎ塩酸４．９ｍｌで反応液のｐＨを３に調整し２５℃で一晩攪拌した。析出結晶を濾別し、湿結晶２．０７ｇを４０℃で減圧乾燥することにより、¹⁵ＮラベルＩＰＡ−オキシム０．８１ｇ（３．５８ミリモル エリア純度９７．５％）を得た。

反応液をＬＣ−ＭＳで分析した結果、¹⁵Ｎラベル区では＋２０６（¹⁵Ｎ相当）のピークが検出され、オキシムが酵素的に還元されていることが示された。

本発明は、各種アミノ酸誘導体の生産において有用である。

Claims (14)

1. 下記一般式（Ｉ）
   

   

   （一般式（Ｉ）において、Ｒ₁はそれぞれ置換基を有していてもよい炭素数２〜６のアルキル基、炭素数６〜１４のアリール基、炭素数６〜１０のシクロアルキル基、炭素数７〜１９のアラルキル基、炭素数２〜１０のアルコキシアルキル基、またはこれらの炭素骨格中にヘテロ原子を含む基、および下記一般式（ＩＩ）
   

   

   で示される置換基Ｒ₃から選択される置換基を表す。ここに、Ｒ₄はそれぞれ置換基を有していてもよい炭素数２〜６のアルキル基、炭素数６〜１４のアリール基、炭素数６〜１０のシクロアルキル基、炭素数７〜１９のアラルキル基、炭素数２〜１０のアルコキシアルキル基、またはこれらの炭素骨格中にヘテロ原子を含む基から選択される置換基を表す。Ｘ₁およびＸ₂は相互に独立して水酸基またはカルボニル基を表す。Ｒ₂は炭素数１〜３のアルキル基または水素原子を表す。ｎは０または１である。）
   で示されるヒドロキシイミノ酸から、
   下記一般式（ＩＩＩ）
   

   

   （一般式（ＩＩＩ）において、Ｒ₁およびｎは、一般式（Ｉ）におけるＲ₁、ｎと同義である。）
   で示されるアミノ酸誘導体を生成する反応を触媒する微生物および／または酵素の存在下で、当該反応を実施することにより、前記一般式（ＩＩＩ）のアミノ酸誘導体を生成することを特徴とするアミノ酸誘導体の製造方法。
2. 前記ｎが０であり、生成するアミノ酸誘導体がα−アミノ酸誘導体である請求項１に記載の製造方法。
3. 生成するアミノ酸誘導体が、α−Ｌ−アミノ酸である請求項１に記載の製造方法。
4. 生成するアミノ酸誘導体が、α−Ｄ−アミノ酸である請求項１に記載の製造方法。
5. 前記ｎが１であり、生成するアミノ酸誘導体がβ−アミノ酸誘導体である請求項１に記載の製造方法。
6. 前記アリール基が、置換基を有していてもよいフェニル基またはナフチル基である、請求項１に記載の製造方法。
7. 前記アラルキル基が、置換基を有していてもよいフェニルアルキル基またはナフチルアルキル基である、請求項１に記載の製造方法。
8. 前記炭素骨格にヘテロ原子を含む基が、置換基を有していてもよいピリジル基またはインドイル基である、請求項１に記載の製造方法。
9. 下記一般式（ＩＶ）
   

   

   で示されるＩＨＯＧ−オキシムから、
   下記一般式（Ｖ）
   

   

   で示されるモナティンを生成する反応を触媒する微生物および／または酵素の存在下で、当該反応を実施することによりモナティンを生成することを特徴とする、モナティンの製造方法。
10. 下記一般式（ＶＩ）
    

    

    で示されるＢＡＥ−オキシムからβ−フェニルアラニンを生成する反応を触媒する微生物および／または酵素の存在下で、当該反応を実施することによりβ−フェニルアラニンを生成することを特徴とする、β−フェニルアラニンの製造方法。
11. 下記一般式（ＶＩＩ）
    

    

    で示されるインドール−３−ピルビン酸−オキシムからトリプトファンを生成する反応を触媒する微生物および／または酵素の存在下で、当該反応を実施することによりトリプトファンを生成することを特徴とする、トリプトファンの製造方法。
12. 微生物が、シトロバクター（Ｃｉｔｒｏｂａｃｔｅｒ）属、エシェリヒア（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ）属、およびロドコッカス（Ｒｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓ）属からなる群より選ばれるいずれかの属に属ずる細菌の１種または２種以上であることを特徴とする、請求項１，９，１０または１１に記載の製造方法。
13. 微生物が、Ｃｉｔｒｏｂａｃｔｅｒ ｆｒｅｕｎｄｉｉ（シトロバクター フルーンジ）、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｉｎｔｅｒｍｅｄｉａ（エシェリヒア インターメディア）、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ（エシェリヒア コリ）、およびＲｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓ ｍａｒｉｎｏｎａｓｃｅｎｓ（ロドコッカス マリノナシーンズ）からなる群から選ばれることを特徴とする、請求項１，９，１０または１１に記載の製造方法。
14. 一般式（Ｉ）で示される化合物から一般式（ＩＩＩ）で示される化合物を生成する反応を行う反応液中に、ＮＡＤＨ、ＮＡＤＰＨ、ピリドキサール−５’−リン酸、およびＭｇＣｌ₂からなる群から選ばれる化合物のうち、少なくとも一つを添加することを特徴とする請求項１，９，１０または１１に記載の製造方法。