JPWO2006030750A1

JPWO2006030750A1 - 乳癌を抑制するカワリハラタケ抽出物

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Publication number: JPWO2006030750A1
Application number: JP2006535131A
Authority: JP
Inventors: 仁秀李
Original assignee: 株式会社Ｓ・Ｓ・Ｉ; 協和醗酵工業株式会社
Priority date: 2004-09-17
Filing date: 2005-09-12
Publication date: 2008-05-15
Anticipated expiration: 2025-09-12
Also published as: JP5034071B2; KR20070041786A; WO2006030750A1; US8034386B2; US20080260772A1

Abstract

乳癌の発生または末期乳癌の増殖をも抑制する食品素材を提供する。乳癌の発生または末期乳癌の増殖をも抑制する成分を含むカワリハラタケ抽出物。前記成分は、カワリハラタケの子実体を熱水抽出する工程、得られる抽出液を透析処理する工程、および得られる透析外液をクロマトグラフィー処理する工程によって得られる、分子量１００〜２０００のクロマトグラフィー主溶出画分であり得る。あるいは、前記成分は、カワリハラタケの子実体を熱水抽出する工程、得られる抽出液にエタノールを添加して沈殿を得る工程、および該沈殿を水に溶解して透析処理する工程によって得られる透析外液であり得る。

Description

本発明は、乳癌を抑制するカワリハラタケの抽出物に関する。より詳細には、特に、乳癌の発生または末期に乳癌の増殖をも抑制する成分を含むカワリハラタケの抽出物に関する。さらにより詳細には、本発明は、メチル−Ｎ−ニトロソウレアで誘発される乳癌の発生またはメチル−Ｎ−ニトロソウレアで誘発されて発生した乳癌の増殖を抑制するカワリハラタケ抽出物に関する。

一般に、カワリハラタケと呼ばれるものは、学名を「カワリハラタケ・ブラゼイ・ムリルＡｇａｒｉｃｕｓｂｌａｚｅｉＭｕｒｉｌｌ」和名を「カワリハラタケ」という担子菌類ハラタケ科に属するきのこである。カワリハラタケ（以後、本明細書では、一般に、カワリハラタケ、またはＡＢＭ、またはアガリクスと称する）は、ブラジルのサンパウロ州に位置するＰｉｅｄａｄｅ地方で伝統的に医薬として用いられている。カワリハラタケは、種々の免疫賦活活性、発癌予防効果、腫瘍増殖抑制効果をもつといわれ、現在、健康食品として幅広く内服されている。

カワリハラタケに含まれる多糖類は、β−１，６−グルコピラノシル残基を含み、ザルコーマ１８０に対して抗腫瘍活性を有する（ＥｂｉｎａＴら（１９８６）、Ｊｐｎ．Ｊ．ＣａｎｃｅｒＲｅｓ７７：１０３４−１０４２）。

カワリハラタケ抽出物は、（１→６）−β分岐をもつ（１→４）−α−Ｄ−グルカンを含み、ナチュラルキラー細胞活性化およびアポトーシスを経由して媒介される選択的抗腫瘍活性を有する（ＦｕｊｉｍｉｙａＹら（１９９８）、ＣａｎｃｅｒＩｍｍｕｎｏｌ
Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ４６：１４７−１５９）。

カワリハラタケに含まれるペプチドグリカンは、二重移植腫瘍系において、ＭｅｔｈＡ腫瘍細胞に対して直接的な細胞傷害性作用を有し、そして腫瘍をもつマウスに対して間接的な免疫増強作用を有する（ＥｂｉｎａＴら（１９９８）、Ｂｉｏｔｈｅｒａｐｙ１１：２５９−２６５）。

カワリハラタケに含まれる多糖類は、マウスにおけるＴ細胞サブセットにおける脾臓Ｔｈｙ１，２−、Ｌ３Ｔ４陽性細胞の割合を変えた（ＭｉｚｕｎｏＭら（１９９８）、Ｂｉｏｓｃｉ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．６２：４３４−４３７）。

これらの報告は、カワリハラタケに含まれる多糖類が、免疫調節活性を通じて腫瘍細胞に対する細胞傷害性作用を有することを示唆している。

このように、カワリハラタケ抽出物の免疫増強活性および抗腫瘍活性に関する多くの報告があるが、これらはいずれも、インビトロで行われた試験またはすでに癌に罹患した動物を対象にカワリハラタケ抽出物の影響を試験しているものであって、乳癌などの癌が誘発されて発生する過程でカワリハラタケ抽出物の影響を検討したものではない。また、本発明者が知る限り、末期癌に対するカワリハラタケ抽出物およびそれに含まれる成分の影響を検討した報告もない。
ＥｂｉｎａＴら（１９８６）、Ｊｐｎ．Ｊ．ＣａｎｃｅｒＲｅｓ７７：１０３４−１０４２ＦｕｊｉｍｉｙａＹら（１９９８）、ＣａｎｃｅｒＩｍｍｕｎｏｌＩｍｍｕｎｏｔｈｅｒ４６：１４７−１５９ＥｂｉｎａＴら（１９９８）、Ｂｉｏｔｈｅｒａｐｙ１１：２５９−２６５ＭｉｚｕｎｏＭら（１９９８）、Ｂｉｏｓｃｉ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．６２：４３４−４３７

乳癌は、女性における主要な疾患の１つである。本発明は、乳癌を抑制する成分を含む薬品素材および食品素材を提供することを目的とする。本発明は、乳癌の発生および末期乳癌の増殖をも抑制する薬品素材および食品素材を提供することを目的とする。

本発明は、乳癌を抑制する成分を含む、カワリハラタケ抽出物に関する。

本発明はまた、乳癌の発生または末期乳癌の増殖を抑制する成分を含む、カワリハラタケ抽出物に関する。

好ましくは、上記カワリハラタケ抽出物は溶媒抽出して調製される。

好ましくは、上記カワリハラタケ抽出物は熱水抽出して調製される。

好ましくは、上記成分は、カワリハラタケの子実体を熱水抽出する工程、得られる抽出液を透析処理する工程、および得られる透析外液をクロマトグラフィー処理する工程によって得られる、分子量１００〜２０００のクロマトグラフィー主溶出画分である。

好ましくは、上記成分は、カワリハラタケの子実体を熱水抽出する工程、得られる抽出液にエタノールを添加して沈殿を得る工程、および該沈殿を水に溶解して透析処理する工程によって得られる透析外液である。

代表的には、上記乳癌は、メチル−Ｎ−ニトロソウレアで誘発される。

本発明はまた、乳癌を抑制する組成物であって、カワリハラタケ抽出物および薬学的に受容可能なキャリアを含む組成物に関する。

代表的には、上記組成物は、粉末、液体、錠剤、カプセル、およびペレットからなる群から選択される形態である。

本発明はまた、乳癌を抑制する方法に関し、この方法は、カワリハラタケ抽出物および薬学的に受容可能なキャリアを含む組成物を被験体に投与する工程を包含する。

本発明はまた、乳癌の発生または末期乳癌の増殖を抑制する方法に関し、この方法は、カワリハラタケ抽出物および薬学的に受容可能なキャリアを含む組成物を被験体に投与する工程を包含する。

好ましくは、上記抽出物は、カワリハラタケの子実体を熱水抽出する工程、得られる抽出液を透析処理する工程、および得られる透析外液をクロマトグラフィー処理する工程によって得られる、分子量１００〜２０００のクロマトグラフィー主溶出画分である。

好ましくは、前記抽出物は、カワリハラタケの子実体を熱水抽出する工程、得られる抽出液にエタノールを添加して沈殿を得る工程、およびこの沈殿を水に溶解して透析処理する工程によって得られる透析外液である。

本発明はまた、乳癌を抑制する組成物の調製のためのカワリハラタケ抽出物の使用に関する。

本発明はまた、乳癌の発生または末期乳癌の増殖を抑制する組成物の調製のためのカワリハラタケ抽出物の使用に関する。

好ましくは、上記抽出物は、カワリハラタケの子実体を熱水抽出する工程、得られる抽出液にエタノールを添加して沈殿を得る工程、および該沈殿を水に溶解して透析処理する工程によって得られる透析外液である。

カワリハラタケ抽出物は乳癌を抑制する成分を含む。カワリハラタケ抽出物は乳癌の発生または末期乳癌の増殖をも抑制する成分を含む。この成分は、癌（特に乳癌）が誘発される段階、および誘発された癌の末期増殖をも抑制するので、乳癌を抑制するのに有効な、薬品素材および食品素材が提供される。

本発明のカワリハラタケ抽出物（１ＳＹ１６）の乳癌発生を抑制する効果を示す図である。本発明のカワリハラタケ抽出物（１ＳＹ１６）の乳癌発生を抑制する効果を示す図である。本発明のカワリハラタケ抽出物（１ＳＹ１６）の乳癌増殖を抑制する効果を示す図である。本発明のカワリハラタケ抽出物（ＡＢＭＫ２２）の乳癌発生を抑制する効果を示す図である。本発明のカワリハラタケ抽出物（ＡＢＭＫ２２）の乳癌発生を抑制する効果を示す図である。本発明のカワリハラタケ抽出物（ＡＢＭＫ２２）の乳癌増殖を抑制する効果を示す図である。

本明細書で用いる用語「カワリハラタケ」は、一般に、学名を「カワリハラタケ・ブラゼイ・ムリルＡｇａｒｉｃｕｓｂｌａｚｅｉＭｕｒｌｌ」和名を「カワリハラタケ」という担子菌類ハラタケ科に属するきのこの子実体、菌糸体、培養液などを含むカワリハラタケ原料を意味する。代表的には、用語「カワリハラタケ」は、カワリハラタケの子実体を意味する。なお、以後、本明細書では、「カワリハラタケ」、「ＡＢＭ」、および「アガリクス」は、交換可能に用いられ、同じカワリハラタケ原料を意味する用語として用いられる。

本発明のカワリハラタケ抽出物は、カワリハラタケ原料を、溶媒抽出して調製される。カワリハラタケ原料は、代表的には、天然または栽培されたカワリハラタケの子実体である。培養タンクなどで培養されたカワリハラタケの菌糸体を用いてもよい。通常、カワリハラタケは、洗浄された後、乾燥して用いられる。市販されている子実体の乾燥物もまた便利に利用できる。通常、乾燥されたカワリハラタケは常法に従って粉末とされ、抽出原料として用いられる。

本発明のカワリハラタケ抽出物は、上記子実体の乾燥物またはその粉末に種々の溶媒を添加して抽出操作を行うことによって得られ得る。一般に、上記溶媒は、上記乾燥子実体またはその粉末の重量に対して２〜１０倍の重量で添加されて抽出操作が行われる。上記溶媒としては、水、エタノール、プロパノール、ブタノール、アセトン、１，３−ブチレングリコール、酢酸エチル、ヘキサン、塩化メチレン、メタノールまたはそれらの混合物が用いられる。代表的には、水を用いてカワリハラタケ抽出物を調製する。

カワリハラタケ粉末と上記溶媒のいずれかとの混合物を、０℃〜１００℃の温度、好ましくは室温〜８０℃の温度で、１０分〜数日、好ましくは１〜２４時間の間、マグネティックスターラー（１００〜５００ｒｐｍでの回転数）などを用いて攪拌または振盪して抽出操作が行われる。代表的には、本発明のカワリハラタケ抽出物は、カワリハラタケ粉末に脱イオン水を添加し、７０℃で２４時間連続攪拌することによって得られ得る。得られる溶液から、遠心分離法、濾過などの常法に従って残渣を取り除いた後、凍結乾燥等により、乾燥物を得る。得られた粉末等の乾燥物をカワリハラタケ抽出物とする。

このように調製されたカワリハラタケ抽出物に含まれる、乳癌の発生または末期乳癌の増殖をも抑制する成分は、当業者に公知のＨＰＬＣ（高速液体クロマトグラフィー）などの手法を利用して得ることができる。得られた成分は、ＮＭＲ法（核磁気共鳴分析法）などの手法を用いてその構造が識別され得る。

以下は、本発明のカワリハラタケ抽出物の製法の一例である。

乾燥子実体に５から１０倍の重量の水を加え、１〜３時間好ましくは９５℃以上の温度で加熱抽出または加熱還流する。このカワリハラタケの熱水抽出は、必要に応じて、熱水抽出残渣についても繰り返して行われる。このようにして得られる熱水抽出液は、凍結乾燥、スプレードライなど、当業者に公知の方法によって乾燥物（以下乾燥物Ａという）とする。乾燥物Ａを、５〜２０倍の容量の水に懸濁または溶解した後、これを、透析チューブに入れ、数倍の容量の蒸留水に対して１０〜１５時間透析する。得られる透析外液を凍結乾燥して、乳癌の発生または末期乳癌の増殖をも抑制する成分を含む、乾燥物（以下乾燥物Ｃという）を得る。

次に、透析内液についても、さらに流水中で２０〜４０時間透析し、そして蒸留水で２回各数時間透析した後に得られる透析内液を、上記と同様に乾燥物とすることによっても、乳癌の発生または末期乳癌の増殖をも抑制する成分を含む、カワリハラタケの熱水抽出物の乾燥物（以下乾燥物Ｂという）が得られる。

次に、得られた上記乾燥物Ｃを、約１０倍重量の蒸留水に溶解し、蒸留水を流出溶媒としてゲル濾過クロマトグラフィーを行い、２０ｍＬずつ分取し、多くの画分を得る。得られた画分の中程の主溶出画分で、ゲル濾過法によって分子量１００〜２０００の画分が、本発明の乳癌の発生または末期乳癌の増殖をも抑制する成分として好適に用いられる。

これらの画分は、さらにＯＤＳ（オクタデシルシラン化シリカゲル）を用いる逆相クロマトグラフィー、ＤＥＡＥ−ＴＯＹＯＰＥＡＲＬ６５０を用いるイオン交換クロマトグラフィーなどを用いて分析すると、アルギニン、リジン、マンニトールの他、数種の成分を
含んでいることが確認されている。

また、上記の方法で得られる熱水抽出液に等量のエタノールを加えて混合し、遠心分離処理して沈殿と上澄液に分け、得られる上澄液にさらにその１〜３倍容量のエタノールを加えて混合し、さらに遠心分離処理して得られる沈殿を蒸留水に溶解し、得られる溶液を透析処理して得られる透析外液もまた、本発明の、乳癌の発生または末期乳癌の増殖をも抑制する成分である。

上記のように調製されたカワリハラタケ抽出物またはそれに含まれる乳癌の発生または末期乳癌の増殖をも抑制する成分は、そのまま、あるいは種々のキャリアとともに医薬製剤の製造に用いることができる。

上記のように調製されたカワリハラタケ抽出物またはそれに含まれる乳癌の発生または末期乳癌の増殖をも抑制する成分は、代表的には、生体適合性の薬学的キャリア（例えば、生理食塩水、緩衝化生理食塩水、デキストロース、および水など）とともに経口的に摂取され得る組成物として処方され得る。

上記薬学的に受容可能なキャリアは、当業者に公知であって、例えば、以下のものが挙げられる：リンゲル溶液、ハンクス溶液、または緩衝化生理食塩水などの緩衝液；ゴマ油などの脂肪酸、オレイン酸エチルまたはトリグリセリドなどの合成脂肪酸エステル；ラクトース、スクロース、マンニトール、ソルビトールなどの糖類；トウモロコシ、コムギ、イネ、ジャガイモなどの植物由来デンプン；メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウムなどのセルロース；アラビアゴム、トラガカントゴムなどのゴム；ゼラチン、コラーゲンなどのタンパク質；架橋ポリビニルピロリドン、寒天、アルギン酸またはその塩など。

上記のように調製されたカワリハラタケ抽出物またはそれに含まれる乳癌の発生または末期乳癌の増殖をも抑制する成分は、単独または他の薬剤もしくは食品素材と組み合わせて摂取され得る。

上記のように調製されたカワリハラタケ抽出物またはそれに含まれる乳癌の発生または末期乳癌の増殖をも抑制する成分およびそれを含む組成物は、経口的または非経口的に投与され得る。非経口送達は、静脈内、筋肉内、腹腔内、または鼻孔内への投与により達成され得る。本発明の薬学的組成物の処方および投与の詳細は、例えば、当該分野における教科書「ＲＥＭＩＮＧＴＯＮ’ＳＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬＳＣＩＥＮＣＥＳ」（ＭａａｃｋＰｕｂｌｉｓｈｉｎｇＣｏ．、Ｅａｓｔｏｎ、ＰＡ）の記載に従って行なわれ得る。

経口投与のためのカワリハラタケ抽出物またはそれに含まれる乳癌の発生または末期乳癌の増殖をも抑制する成分は、摂取に適した投与形態で当該分野で周知の薬学的に受容可能なキャリアを含む組成物として処方され得る。このようなキャリアは、得られる組成物が、患者による摂取に適した、錠剤、丸剤、糖衣剤、カプセル、液体、ゲル、シロップ、スラリー、懸濁物などに処方されることを可能とする。

本発明の組成物は、カワリハラタケ熱水抽出物またはそれに含まれる乳癌の発生または末期乳癌の増殖をも抑制する成分を、乳癌の発生または末期乳癌の増殖をも抑制するに有効な量で含む。当業者は、「乳癌の発生または末期乳癌の増殖をも抑制するに有効な量」を十分に理解および認識する。「乳癌の発生または末期乳癌の増殖をも抑制するに有効な量」は、まず、細胞培養によるインビトロアッセイまたは適切な動物モデルによって評価され得る。次に、このような情報を用いて、ヒトにおける摂取に有用な量を決定し得る。「乳癌の発生または末期乳癌の増殖をも抑制するに有効な量」は、例えば、本明細書に記載される発癌物質メチル−Ｎ−ニトロソウレアを投与することによって乳癌が誘発されるＳｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラットを用いるアッセイ系を用いて決定され得る。

実際に摂取されるカワリハラタケ抽出物の量は、適用される個体の健康状態などに依存し、所望の効果が達成されるように最適化され得る。薬学的または栄養学的に有効な量を決定することは、当業者にとっては慣用的な手順である。

上記のカワリハラタケ抽出物またはそれに含まれる乳癌の発生または末期乳癌の増殖をも抑制する成分は、その機能を発揮するに十分な量で、選択された１種またはそれ以上の食品素材と混合され得る。選択された１種またはそれ以上の食品素材は、当業者に公知の形態、通常粉末形態で、上記のカワリハラタケ抽出物またはそれに含まれる乳癌の発生または末期乳癌の増殖をも抑制する成分と混合される。そしてこれらは、用途または好みに応じて、液状の食品として供することができる。あるいはハードカプセル、ソフトカプセルなどのカプセル剤、錠剤もしくは丸剤としてか、または粉末状、顆粒状、茶状、ティーバック状もしくは、飴状などの形状に成形され得る。

上記のカワリハラタケ抽出物またはそれに含まれる乳癌の発生または末期乳癌の増殖をも抑制する成分は、メチル−Ｎ−ニトロソウレアによって誘発される乳癌の発生および発生した乳癌の増殖を抑制する。本発明は、発癌物質に対する種々の投与剤形におけるカワリハラタケ抽出物治療の研究に基づくものである。本明細書に開示される手法またはプロトコールを指針を参照すれば、その他の発癌物質で誘発される癌に対する上記のカワリハラタケ抽出物またはそれに含まれる乳癌の発生または末期乳癌の増殖をも抑制する成分の有効性は、容易に実証され得る。

すなわち、上記のカワリハラタケ抽出物またはそれに含まれる乳癌の発生または末期乳癌の増殖をも抑制する成分の濃度を変えて含有する食餌が、発癌物質を投与されたマウスにおける癌の発生または発生した癌の増殖の抑制を測定することにより容易に実証し得る。

以下、発癌物質としてメチル−Ｎ−ニトロソウレアを用いた実施例により本発明をより詳細に説明するが、以下の実施例は本発明の例示であり、本発明を制限するものではない。

以下、本願発明を、実施例を挙げて説明する。

カワリハラタケ抽出物の調製
（１）カワリハラタケの熱水抽出物として上記の乾燥物Ａを用いた。これは、カワリハラタケの乾燥子実体（協和アガリクス茸）を沸騰水で抽出し、１８００×ｇで１０分間遠心分離して残渣を取り除き、そして凍結乾燥したものである。これを、３．７ｍｇ／ｍｌの濃度で精製水に溶解したものを試料Ｉ、そして８ｍｇ／ｍｌの精製水に溶解したものを試料ＩＩとした。

（２）３００ｇの協和アガリクス茸に蒸留水２Ｌを加え、２時間９５℃以上で加熱還流を行った。得られた液を濾過して濾液（熱水抽出液）と残査とに分けた。残査には再び蒸留水２Ｌを加え、さらに２時間９５℃以上で加熱還流して熱水抽出を行い濾液を得た。さらに残った残査についてもう一度同様の熱水抽出を行った。得られた濾液を合わせて凍結乾燥し、乾燥物Ａ（１５３ｇ：抽出率５１％）を得た。

５０ｇの乾燥物Ａに５００ｍＬの蒸留水を加え、透析チューブ（Ｓｐｅｃｔｒａ／ＰｏｒＭｅｍｂｒａｎｅ５０×３１、８ｍｍ内径×３０ｃｍ長さ、ＦＥ−０５２６−６５）に入れた。これを３Ｌの蒸留水に対して１２時間透析した。得られた透析外液を凍結乾燥して乾燥物Ｃ（２７ｇ：抽出率５３％）を得た。透析内液についてはさらに流水中で３０時間透析し、その後蒸留水で２回（各４時間、合計８時間）透析した後、透析内液を凍結乾燥し、乾燥物Ｂ（１１ｇ：抽出率２２％）を得た。続いて、３ｇの乾燥物Ｃを３０ｍＬの蒸留水に溶かし、ＴＯＹＯＰＥＡＲＬＨＷ４０Ｃ（４０ｍｍ内径×４２０ｍｍ長さ）を用いるクロマトグラフィーを行った。流出溶媒はすべて蒸留水を用いた。各フラクションについてそれぞれ２０ｍＬずつ分取し、画分１〜３０を得た。それらのフラクションは薄層クロマトグラフィーを参考にして以下の５群に分けた。乾燥重量は次の通りであった。画分１〜１１（７５ｍｇ、２．５％）、画分１２〜１５（９２０ｍｇ、３０．７％）、画分１６〜１７(１５７０ｍｇ、５２．３％）、画分１８〜１９(２７０ｍｇ、９％）、画分２０〜２８（９７ｍｇ、３．２％）。

画分１６（以後、１ＳＹ−１６という）の赤外線吸収スペクトル（ＩＲ）データは以下の通りであった。
画分１６：ＩＲ（ＫＢｒ）３３９０、３３２５、３２８５、２９４０、２９２０、１６４１、１６３４、１６２２、１６１５、１６００、１５９５、１４０５、１３９４、１０８４、１０２０：分子量（ゲル濾過法）１００〜２０００。

（３）上記（２）と同様の熱水抽出を実施して、合わせた濾液（熱水抽出液）６Ｌを得た。この濾液を減圧濃縮して１Ｌとし、これにエタノール１Ｌを加えて混合し、遠心分離して沈殿と上澄液を得た。この上澄液にさらにエタノール３Ｌを加えて混合し、遠心分離して得られる沈殿を蒸留水に溶解し、透析処理した。得られた透析外液を凍結乾燥して粉末を得た（以後、ＡＢＭＫ２２という）。

カワリハラタケ抽出物による、ＭＮＵで誘発される乳癌の予防
メチル−Ｎ−ニトロソウレア（ＭＮＵ：乳癌誘導物質）によって誘導されるラット乳癌モデルを用い、カワリハラタケ抽出物（１ＳＹ１６およびＡＢＭＫ２２）の乳癌予防効果を評価した。

ラットは、Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラット（雌、５０日齢）を用いた。ラットは、Ｈｙｌａｎｄ飼料栄養会社（Ｍａｄｉｓｏｎ、Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ州）から購入した研究用の４％標準Ｔｅｋｌａｄラット飼料を与えて飼育した。乳癌は、蒸留水に溶解しｐＨを５．０に調節したＭＮＵを、５０ｍｇ／ｋｇ体重の用量で１回静脈注射することによって誘導した。

ＭＮＵを注射した２時間後、以下のようにグルーピングした（グループ１〜４）乳癌誘導ラットに、カワリハラタケ抽出物（１ＳＹ１６またはＡＢＭＫ２２）を投与し、合計５ヶ月間飼育する試験を行った。

グループ１では、ラットを各群５匹で４群に分け、１ＳＹ１６を、それぞれの群のラットに、一日あたり０ｍｇ／ｋｇ体重（対照群）、１００ｍｇ／ｋｇ体重、２００ｍｇ／ｋｇ体重および４００ｍｇ／ｋｇ体重となるように投与量を変えて、２週間の間経口投与した(単回胃管栄養法（ｇａｖａｇｅ）；以後本明細書では、通常、この単回胃管栄養法を
経口投与という）。

グループ２では、ラットを各群５匹で４群に分け、各ラットに一日あたり２００ｍｇ／ｋｇ体重となるよう、第１群のラットには、ＭＮＵ静脈注射後１〜１５日の間１ＳＹ１６
を経口投与し、第２群のラットにはＭＮＵ静脈注射後３１〜６０日の間１ＳＹ１６を投与し、第３群のラットには、ＭＮＵ静脈注射後６１〜９０日の間１ＳＹ１６を経口投与し、そして、第４群のラットにはＭＮＵ静脈注射後９１〜１２０日の間１ＳＹ１６を投与した。第５群のラットには、対照として飲水を経口投与した。

グループ３では、ラットを各群５匹で５群に分け、第１群のラットには対照として飲水を、第２群〜第５群のラットには、カワリハラタケ抽出物（ＡＢＭＫ２２）を、一日あたり、それぞれ、５０ｍｇ／ｋｇ体重、１００ｍｇ／ｋｇ体重、２００ｍｇ／ｋｇ体重、および４００ｍｇ／ｋｇ体重となるように投与量を変えて１２０日間投与した。

グループ４では、ラットを各群５匹で５群に分け、第１群のラットには対照として飲水を、第２群〜第５群のラットには、カワリハラタケ抽出物（ＡＢＭＫ２２）を、一日あたり、それぞれ、４００ｍｇ／ｋｇ体重（１〜１２０日間）、８００ｍｇ／ｋｇ体重（３１〜６０日目）、１６００ｍｇ／ｋｇ体重（６１〜９０日目）、および３２００ｍｇ／ｋｇ体重（９１〜１２０日目）となるように投与量および投与期間を変えて投与した。

５ヶ月の実験期間後、ラットを屠殺し、各群のラットについて乳癌の発生数と、発生した個々の乳癌の重量を測定した。

結果を、図１〜図６に示す。

図１は、グループ１の試験結果を示す。図１の横軸は、左から、それぞれ、対照群、１ＳＹ１６の１００ｍｇ／ｋｇ体重投与群、同２００ｍｇ／ｋｇ体重投与群および同４００ｍｇ／ｋｇ体重投与群を示す。図１の縦軸は、各群の乳癌発生率を、対照群の乳癌発生率を１００％として示している。図１の上の矢印は、１ＳＹ１６の投与を２週間経口投与したことをイメージ的に示している。

図１に示されるように、１ＳＹ１６では、投与量に依存して乳癌の発生を減少させ、１００ｍｇ／ｋｇ体重投与群で約２２％、２００ｍｇ／ｋｇ体重投与群で約４３％、そして４００ｍｇ／ｋｇ体重投与群で約５５％乳癌発生率を減少させた。

図１において、＊は、対照群の癌発生率と比較して、統計処理でｐ＜０．０５で有意差があり、＊＊はｐ＜０．０１で、そして＊＊＊はｐ＜０．００１でそれぞれ有意差があることを示している。

図２は、グループ２の試験結果を示す。図２の横軸は、１ＳＹ１６を、それぞれ、１〜１５日の間、３１〜６０日の間、６１〜９０日の間、および９１〜１２０日の間経口投与した群を示している。ＭＮＵ静脈注射後１ＳＹ１６を１〜１５日の間投与した群は１Ｍ（１ヶ月）で、３１〜６０日の間投与した群は２Ｍ（２ヶ月）で、６１〜９０日の間投与した群は３Ｍ（３ヶ月）で、そして９１〜１２０日の間投与した群は４Ｍ（４ヶ月）で示す。図２の上の矢印は、１ＳＹ１６を投与した期間をイメージ的に示している。図２の縦軸は、図１と同様に、各群の乳癌発生率を、対照群の乳癌発生率を１００％として示している。

図２に示されるように、１ＳＹ１６投与群では、投与時期にほぼ依存して乳癌の発生を減少させ、１ヶ月投与群で約４０％、２ヶ月投与群で約３５％、３ヶ月投与群で約４６％、そして４ヶ月投与群で約７２％乳癌発生率を減少させた。図２における＊および＊＊は、図１と同様に、対照群に対し統計処理で有意差があることを示している。

図３は、図２に示される試験における各群の乳癌の平均重量を示したものである。図３から明らかなように、各群の乳癌の平均重量は、それぞれ、対照群の乳癌重量の約２６％、４６％、５４％および１７％であって、乳癌発生率と同様に、投与時期にほぼ依存して少なかった。図３における＊は、図１および２と同様に、対照群に対し統計処理で有意差があることを示している。

図２および図３に示される結果から、カワリハラタケ抽出物（１ＳＹ１６）の投与によって、乳癌の発生が抑制されるのみならず、発生した特に末期における乳癌の増殖も抑制されることが示された。また図２および図３に示される結果から、乳癌の増殖の抑制効果は、乳癌の誘発後９１〜１２０日の投与においても確認され、対照群と比較して顕著な乳癌の増殖抑制効果が確認された。

図４は、グループ３の試験結果を示す。図４の横軸は、左から、それぞれ、対照群、ＡＢＭＫ２２の５０ｍｇ／ｋｇ体重投与群、同１００ｍｇ／ｋｇ体重投与群、同２００ｍｇ／ｋｇ体重投与群、および同４００ｍｇ／ｋｇ体重投与群を示す。図４の縦軸は、図１および２と同様に、各群の乳癌発生率を、対照群の乳癌発生率を１００％として示している。

図４に示されるように、ＡＢＭＫ２２投与群では、投与量に依存して乳癌の発生を減少させ、５０ｍｇ／ｋｇ体重投与群で対照群の乳癌発生率の約８２％、１００ｍｇ／ｋｇ体重投与群で対照群の乳癌発生率の約８５％、２００ｍｇ／ｋｇ体重投与群で対照群の乳癌発生率の約７３％、そして４００ｍｇ／ｋｇ体重投与群で対照群の乳癌発生率の約７０％と乳癌の発生が抑制される結果が得られた。乳癌の阻害率で表せば、上記各群で、それぞれ、約１８％、約１５％、約２７％および約３０％の阻害率である。図４における＊、＊＊および＊＊＊は、図１〜３と同様に、対照群に対し統計処理で有意差があることを示している。

図５は、グループ４の試験結果を示す。図５の横軸は、それぞれ、対照群、ＡＢＭＫ２２の４００ｍｇ／ｋｇ体重投与群、同８００ｍｇ／ｋｇ体重投与群、同１６００ｍｇ／ｋｇ体重投与群、および同３２００ｍｇ／ｋｇ体重投与群を示す。図５の縦軸は、図１、２および４と同様に、各群の乳癌発生率を、対照群の乳癌発生率を１００％として示している。図５の矢印は、各群のＡＢＭＫ２２の投与期間をイメージで表している。

図５に示されるように、ＡＢＭＫ２２投与群では、投与量に依存して乳癌の発生を減少させ、４００ｍｇ／ｋｇ体重投与群で対照群の乳癌発生率の約６８％、８００ｍｇ／ｋｇ体重投与群で対照群の乳癌発生率の約６６％、１６００ｍｇ／ｋｇ体重投与群で対照群の乳癌発生率の約６２％、そして３２００ｍｇ／ｋｇ体重投与群で対照群の乳癌発生率の約６３％と乳癌の発生が抑制される結果が得られた。乳癌の阻害率で表せば、上記各群で、それぞれ、約３２％、約３４％、約３８％および約３７％の阻害率である。また、図５における＊＊＊は、図１〜４と同様に、対照群に対し統計処理で有意差があることを示している。

図６は、図４に示される試験における各群の乳癌の平均重量を示したものである。図６から明らかなように、ＡＢＭＫ２２を２００ｍｇ／ｋｇ体重投与した群のラットでは、癌の平均重量は、対照群の乳癌重量の約１０％であって、統計的に有意な差異を示した。

乳癌の発生または末期乳癌の増殖をも予防する、薬品素材および食品素材が提供される。

Claims

乳癌を抑制する成分を含む、カワリハラタケ抽出物。
乳癌の発生または末期乳癌の増殖を抑制する成分を含む、カワリハラタケ抽出物。
溶媒抽出して調製される、請求項１または２に記載の抽出物。
熱水抽出して調製される、請求項３に記載の抽出物。
前記成分が、カワリハラタケの子実体を熱水抽出する工程、得られる抽出液を透析処理する工程、および得られる透析外液をクロマトグラフィー処理する工程によって得られる、分子量１００〜２０００のクロマトグラフィー主溶出画分である、請求項１または２に記載の抽出物。
前記成分が、カワリハラタケの子実体を熱水抽出する工程、得られる抽出液にエタノールを添加して沈殿を得る工程、および該沈殿を水に溶解して透析処理する工程によって得られる透析外液である、請求項１または２に記載の抽出物。
前記乳癌が、メチル−Ｎ−ニトロソウレアで誘発される、請求項１または２に記載の抽出物。
乳癌を抑制する組成物であって、カワリハラタケ抽出物および薬学的に受容可能なキャリアを含む、組成物。
粉末、液体、錠剤、カプセル、およびペレットからなる群から選択される形態の、請求項８に記載の組成物。
乳癌を抑制する方法であって、カワリハラタケ抽出物および薬学的に受容可能なキャリアを含む組成物を被験体に投与する工程を包含する方法。
乳癌の発生または末期乳癌の増殖を抑制する方法であって、カワリハラタケ抽出物および薬学的に受容可能なキャリアを含む組成物を被験体に投与する工程を包含する方法。
前記抽出物が、カワリハラタケの子実体を熱水抽出する工程、得られる抽出液を透析処理する工程、および得られる透析外液をクロマトグラフィー処理する工程によって得られる、分子量１００〜２０００のクロマトグラフィー主溶出画分である、請求項１０または１１に記載の方法。
前記抽出物が、カワリハラタケの子実体を熱水抽出する工程、得られる抽出液にエタノールを添加して沈殿を得る工程、および該沈殿を水に溶解して透析処理する工程によって得られる透析外液である、請求項１０または１１に記載の方法。
乳癌を抑制する組成物の調製のための、カワリハラタケ抽出物の使用。
乳癌の発生または末期乳癌の増殖を抑制する組成物の調製のためのカワリハラタケ抽出物の使用。
前記抽出物が、カワリハラタケの子実体を熱水抽出する工程、得られる抽出液を透析処理する工程、および得られる透析外液をクロマトグラフィー処理する工程によって得られる、分子量１００〜２０００のクロマトグラフィー主溶出画分である、請求項１４または１５に記載の使用。
前記抽出物が、カワリハラタケの子実体を熱水抽出する工程、得られる抽出液にエタノールを添加して沈殿を得る工程、および該沈殿を水に溶解して透析処理する工程によって得られる透析外液である、請求項１４または１５に記載の使用。