KR20070041786A - 유방암을 억제하는 아가리쿠스 추출물 - Google Patents
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Abstract
유방암의 발생 또는 말기 유방암의 증식을 억제하는 식품소재를 제공한다. 유방암의 발생 또는 말기 유방암의 증식을 억제하는 성분을 포함하는 아가리쿠스 추출물이다. 상기 성분은 아가리쿠스 자실체를 열수 추출하는 단계, 얻어진 추출액을 투석 처리하는 단계, 및 얻어진 투석 외액을 크로마토그래피 처리하는 단계에 의해 수득된다. 분자량 100∼2000의 크로마토그래피 주용출 획분이 얻어진다. 또한 상기 성분은 아가리쿠스 자실체를 열수 추출하는 단계, 얻어진 추출액에 에탄올을 첨가하여 침전을 얻는 단계, 및 침전액을 물로 용해시켜 처리하는 단계로부터 얻어진 투석 외액이다.
유방암, 아가리쿠스, 추출물, 자실체, 크로마토그래피
Description
본 발명은 유방암을 억제하는 아가리쿠스(Agaricus blazei Murrill)의 추출물에 관한 것이다. 특히 유방암의 발생 또는 말기유방암의 증식도 억제하는 성분을 포함하는 아가리쿠스의 추출물에 관한 것이다. 더욱 상세하게는 본 발명은 메틸-N-니트로소우레아 로 유발되는 유방암의 발생 또는 메틸-N-니트로소우레아 로 유발되어 발생하는 유방암의 증식을 억제하는 아가리쿠스 추출물에 관한 것이다.
일반적으로 아가리쿠스로 칭하여지는 것은 학명을「Agaricus blazei Murrill」, 일본명으로는 「카와리하라다케」로 말하고 담자균류 하라타케과에 속하는 버섯인 것이다. 아가리쿠스(이후, 본 명세서에서는 일반적으로 카와리하라다케 또는 ABM 또는 아가리쿠스로로 칭함)는 브라질의 상파울로 주에 위치한 피에다데(Piedade)지방에서 전통적 의약으로서 사용되어지고 있다. 아가리쿠스는 종종 면역부활활성, 발암예방효과, 종양증식억제효과를 지니는 것으로 현재 건강식품으로서 폭발적으로 섭취하고 있다.
아가리쿠스에 포함된 다당류는 β-1, 6-글루코피라노실 잔기를 함유하고, 사르코마 180에 대하여 항종양활성을 지닌다(에비나 T 등(1986), Japan. J. cancer Res 77:1034―1042).
아가리쿠스 추출물은 (1→6)-β분지를 지닌 (1→4)-α-D-글루칸을 함유하고, 내츄럴킬러세포 활성화 및 아폽토시스를 유도를 매개하는 선택적 항종양활성을 지닌다(후지미야 Y 등 (1998), Cancer Immunol Immunother 46:147―159).
아가리쿠스에 함유된 펩타이드글리칸은 이중이식(double implanted) 종양계에 있어서 메스-에이(Meth-A) 종양세포에 대하여 직접적 세포살상작용을 지니고, 종양을 지닌 마우스에 대하여 간접적 면역증강작용을 지닌다(에비나 T 등(1998), Biotheraphy 11:259―265).
아가리쿠스에 함유된 다당류는 마우스의 T-세포 서브세트인 비장 Thy-1,2-, L3T4 양성세포의 분획량을 변경시킨다(미즈노 M 등(1998), Biosci. Biotechnol. Biochem. 62:434―437).
이와 같은 보고는 아가리쿠스를 포함하는 다당류가 면역조절활성을 통해 종양세포에 대한 세포살상작용을 지님을 시사하고 있다.
이와 같이 아가리쿠스 추출물의 면역증강활성 및 항종양활성에 관한 많은 보고가 있으나 이와 같은 보고는 시험관에서 행해진 시험 또는 이미 암에 이환된 동물을 대상으로 아가리쿠스 추출물의 영향을 시험하였던 것인 바, 유방암 등의 암이 유발되어 발생하는 과정에서 아가리쿠스 추출물의 영향을 검토한 사항은 없다. 또한 본 발명자가 알고 있는 한 말기암에 대한 아가리쿠스 추출물 및 그것을 포함하는 성분의 영향을 검토한 보고도 없다.
비특허문헌 1: 에비나 T 등(1986), Japan. J. Cancer Res 77:1034―1042
비특허문헌 2: 후지미야 Y 등(1998), Cancer Immunol Immunother 46:147―159
비특허문헌 3: 에비나 T 등(1998), Biotherapy 11:259―265
비특허문헌 4: 미즈노 M 등(1998), Biosci, Biotechnol, Biochem. 62:434―437
발명의 개시
발명이 해결하고자는 과제
유방암은 여성에 있어서 주요한 질환의 하나이다. 본 발명은 유방암을 억제하는 성분을 함유한 약품소재 및 식품소재를 제공하는 것을 목적으로 한다. 본 발명은 유방암의 발생 및 말기 유방암의 증식도 억제하는 약품소재 및 식품소재를 제공하는 것을 목적으로 한다.
문제를 해결하기 위한 수단
본 발명은 유방암을 억제하는 성분을 함유하는 아가리쿠스 추출물에 관한 것이다.
또한 본 발명은 유방암의 발생 또는 말기 유방암의 증식을 억제하는 성분을 함유하는 아가리쿠스 추출물에 관한 것이다.
바람직하게는 상기 아가리쿠스 추출물은 용매로 추출하여 제조된다.
바람직하게는 상기 아가리쿠스 추출물은 열수로 추출하여 제조된다.
바람직하게는 상기 아가리쿠스의 자실체를 열수로 추출하는 공정, 얻어진 추출액을 투석 처리하는 공정 및 얻어진 투석 외액을 크로마토그래피 분리하는 공정에 의해 얻어진 분자량 100∼2000의 크로마토그래피 주용출 획분이다.
바람직하게는 상기 성분은 아가리쿠스의 자실체를 열수로 추출하는 공정, 얻어진 추출액에 에탄올을 첨가시켜 침전을 얻는 공정 및 그 침전을 물에 용해시켜 투석 처리하는 공정에 의해 얻어진 투석 외액이다.
대표적으로는 상기 유방암은 메틸-N-니트로소우레아 로 유발된다.
또한 본 발명은 유방암을 억제하는 조성물로서 아가리쿠스 추출물 및 약학적 수용 가능한 캐리어를 함유하는 조성물에 관한 것이다.
대표적으로는 상기 조성물은 분말, 액체, 정제, 캡슐 및 펠레트로 구성된 군으로부터 선택되는 형태이다.
또한 본 발명은 유방암을 억제하는 방법에 관한 것이고, 이 방법은 아가리쿠스 추출물 및 약학적 수용 가능한 캐리어를 함유하는 조성물을 피험체에 투여하는 단계를 포함한다.
또한 본 발명은 유방암의 발생 또는 말기 유방암의 증식을 억제하는 방법에 관한 것이고, 이 방법은 아가리쿠스 추출물 및 약학적 수용 가능한 캐리어를 포함하는 조성물을 피험체에 투여하는 단계를 포함한다.
바람직하게는 상기 추출물은 아가리쿠스의 자실체를 열수로 추출하는 공정, 얻어진 추출액을 투석 처리하는 공정 및 얻어진 투석처리 외액을 크로마토그래피 처리하는 공정에 의해 얻어진 분자량 100∼2000의 크로마토그래피 주용출 획분이다.
바람직하게는 상기 추출물은 아가리쿠스 자실체를 열수로 추출하는 공정, 얻어진 추출액에 에탄올을 첨가시켜 침전을 얻는 공정 및 그 침전을 물에 용해시켜 투석 처리하는 공정에 의해 얻어진 투석 외액이다.
또한 본 발명은 유방암을 억제하는 조성물의 제조를 위한 아가리쿠스 추출물의 용도에 관한 것이다.
또한 본 발명은 유방암의 발생 및 말기 유방암의 증식을 억제하는 조성물의 제조를 위한 아가리쿠스 추출물의 용도에 관한 것이다.
바람직하게는 상기 추출물은 아가리쿠스 자실체를 열수로 추출하는 공정, 얻어진 추출액을 투석 처리하는 공정 및 얻어진 투석처리 외액을 크로마토그래피 처리하는 공정에 의해 얻어진 분자량 100∼2000의 크로마토그래피 주용출 획분이다.
바람직하게는 상기 추출물은 아가리쿠스 자실체를 열수로 추출하는 공정, 얻어진 추출액에 에탄올을 첨가시켜 침전을 얻는 공정 및 그 침전을 물에 용해시켜 투석 처리하는 공정에 의해 얻어진 투석 외액이다.
발명의 효과
아가리쿠스 추출물은 유방암을 억제하는 성분을 함유한다. 아가리쿠스 추출물은 유방암의 발생 또는 말기 유방암의 증식도 억제하는 성분을 함유한다. 이 성분은 암(특히 유방암)이 유발되는 단계 및 유발된 암의 말기 증식도 억제하는 것으로써 유방암을 억제하는 것에 유효한 약품소재 및 식품소재가 제공된다.
도 1은 본 발명의 아가리쿠스 추출물(1SY16)의 유방암 발생을 억제하는 효과를 나타내는 도면이다.
도 2는 본 발명의 아가리쿠스 추출물(1SY16)의 유방암 발생을 억제하는 효과를 나타내는 도면이다.
도 3은 본 발명의 아가리쿠스 추출물(1SY16)의 유방암 발생을 억제하는 효과 를 나타내는 도면이다.
도 4는 본 발명의 아가리쿠스 추출물(ABMK22)의 유방암 발생을 억제하는 효과를 나타내는 도면이다.
도 5는 본 발명의 아가리쿠스 추출물(ABMK22)의 유방암 발생을 억제하는 효과를 나타내는 도면이다.
도 6은 본 발명의 아가리쿠스 추출물(ABMK22)의 유방암 발생을 억제하는 효과를 나타내는 도면이다.
발명을 실시하기 위한 최선의 형태
본 명세서에 사용한 용어「아가리쿠스」는 일반적으로 학명을「Agaricus blazei Murrill」, 일본명으로는 「카와리하라다케」로 칭하고, 담자균류 하라타케과에 속하는 버섯의 자실체, 균사체, 배양액 등을 함유한 아가리쿠스 원료를 의미한다. 대표적으로는 용어 「아가리쿠스」는 아가리쿠스의 자실체를 의미한다. 또한 이후 본 명세서에는 「카와리하라타케」, 「ABM」 및 「아가리쿠스」는 상호 교환 가능하게 사용하나, 동일한 아가리쿠스 원료를 의미하는 용어로서 사용된다.
본 발명의 아가리쿠스 추출물은 아가리쿠스 원료를 용매로 추출시켜서 제조된 것이다. 아가리쿠스 원료는 대표적으로는 천연 또는 재배된 아가리쿠스의 자실체이다. 배양탱크 등에서 배양된 아가리쿠스 균사체를 이용하는 것도 좋다. 통상 아가리쿠스는 세정된 후 건조시켜 사용된다. 시판되고 있는 자실체의 건조물도 편리하게 이용할 수 있다. 통상 건조시킨 아가리쿠스는 통상의 방법에 따라서 분말화하여 추출원료로 사용된다.
본 발명의 아가리쿠스 추출물은 상기 자실체의 건조물 또는 그 분말에 각종 용매를 첨가시켜 추출 조작을 행하는 것에 의해 얻어진다. 일반적으로 상기 용매는 상기 건조 자실체 또는 그 분말의 중량에 대하여 2∼10 배의 중량에 첨가시켜 추출 조작이 행하여진다. 상기 용매로서는 물, 에탄올, 프로판올, 부탄올, 아세톤, 1,3-부틸렌글리콜, 에틸아세테이트, 헥산, 메틸렌클로라이드, 메탄올 또는 그의 혼합 용매가 사용된다. 대표적으로는 물을 사용하여 아가리쿠스 추출물을 제조한다.
아가리쿠스 분말과 상기 용매의 어느 하나의 혼합물을 0℃∼100℃의 온도, 바람직하게는 실온∼80℃의 온도에서 10분∼수 일간, 바람직하게는 1∼24시간 동안 마그네틱 스티러(100∼500 rpm의 회전수) 등을 이용하여 교반 또는 진탕시켜 추출조작을 행한다. 대표적으로는 본 발명의 아가리쿠스 추출물은 아가리쿠스 분말에 탈이온수를 첨가시켜, 70℃에서 24시간 연속 교반하는 것에 의해 얻어진다. 얻어진 용매로부터 원심분리법, 여과 등의 통상의 방법에 따라서 잔사를 제거한 후 동결 건조시켜 건조물을 제조한다. 얻어진 분말등의 건조물이 아가리쿠스 추출물 이다.
이와 같이 제조된 아가리쿠스 추출물에 함유된 유방암의 발생 또는 말기 유방암의 증식도 억제하는 성분을 당업자의 공지의 HPLC(고속액체 크로마토그래피) 등의 방법을 이용하여 얻어질 수 있다. 얻어진 성분은 NMR법(핵자기공명분석법) 등의 방법을 사용하여 그 구조의 식별이 가능하다.
이하, 본 발명의 아가리쿠스 추출물의 제법의 하나의 예를 설명한다.
건조 자실체에 5∼10배 중량의 물을 가하여 1∼3 시간 바람직하게는 95℃ 이상의 온도에서 가열 추출 또는 가열 환류한다. 이 아가리쿠스의 열수 추출은 필요에 따라 열수 추출 잔사에 관해서도 반복하여 행하여진다. 이와 같이 얻어진 열수 추출액은 동결건조, 스프레이-드라이 등 당업자에 공지의 방법에 의해 건조물(이하 건조물 A라 칭함)로 한다. 건조물 A를 5∼20배의 용량의 물에 현탁 또는 용해시킨 후 이를 투석 튜브에 넣고 수배의 용량의 증류수에 의해 10∼15 시간 투석시킨다. 얻어진 투석 외액을 동결 건조하여 유방암의 발생 또는 말기 유방암의 증식도 억제하는 성분을 함유한 건조물(이하 건조물 C라 칭함)을 얻는다.
다음에 투석 내액에 있어서도 흐르는 물 중에서 더욱 20∼40시간 투석시킨 후 여기에 증류수로 2회 수시간 투석시킨 후 얻어진 투석 내액을 상기와 동일한 방법으로 건조하는 것에 의해 유방암의 발생 또는 말기 유방암의 증식도 억제하는 성분을 포함하는 아가리쿠스 열수 추출물의 건조물(이하 건조물 B라 칭함)을 얻는다.
연이어 얻어진 상기 건조물 C를 약 10배 중량의 증류수에 용해시키고 증류수를 유출 용매로서 겔 여과 크로마토그래피를 행하고 20 mL 씩 분취하여 다수의 획분을 얻는다. 얻어진 획분의 주용출 획분으로서 겔 여과법에 의한 분자량이 100∼2000의 획분을 본 발명의 유방암의 발생 또는 말기 유방암의 증식을 억제하는 성분으로 사용하는 것이 바람직하다.
이와 같은 획분은 ODS(옥타데실 실라네이티드 실리카겔)을 사용하여 역상크로마토그래피, DEAE-TOYOPEARL 650을 사용한 이온교환 크로마토그래피 등을 사용하여 분석한다. 아르기닌, 라이신, 만니톨 등의 각 종의 성분을 함유하고 있는 것이 확인되었다.
한편 상기 방법으로 얻어진 열수 추출액에 동등한 양의 에탄올을 가하여 혼합시키고 원심분리하여 침전과 상등액을 분리시킨다. 얻어진 상등액에 대해 1∼3배 용량의 에탄올을 가하여 혼합하고 다시 원심분리처리시켜 얻어진 침전을 증류수에 용해시키고 얻어진 용액을 투석처리시켜 얻어지는 투석 외액도 본 발명의 유방암의 발생 또는 말기 유방암의 증식을 억제하는 성분이다.
상기한 바와 같이 제조된 아가리쿠스 추출물 또는 이것을 포함하는 유방암의 발생 또는 말기 유방암의 증식을 억제하는 성분은 그 자체로 또는 각종의 담체를 포함한 의약제재로 제조하여 사용하는 것이 가능하다.
상기한 바와 같이 제조된 아가리쿠스 추출물 또는 그것을 포함하는 유방암의 발생 또는 말기 유방암의 증식을 억제하는 성분은 대표적으로는 생체 적합성 약제학적 담체(예를 들면 생리식염수, 완충화 생리식염수, 덱스트로즈 및 물 등)를 포함시켜 경구적으로 섭취할 수 있는 조성물로서 처방시켜 제조할 수 있다.
상기 약제학적으로 허용 가능한 담체는 당업자에 공지되어 있으며 예를 들면 다음과 같은 것을 열거할 수 있다. 링거용액, 항크용액(Hank's balanced salt solution) 또는 완충화 생리식염수 등의 완충용액; 세사미 오일과 같은 지방산, 에틸올레이트, 트리글리세라이드와 같은 합성 지방산 에스테르; 락토오즈, 수크로즈, 만니톨, 솔비톨과 같은 당류; 옥수수, 밀, 쌀 및 감자 등의 식물로부터 유래된 전분; 메틸셀루로즈, 하이드로프로필메틸셀루로즈 및 소디움카르복실메틸셀루로즈와 같은 셀루로즈; 아라빅 검, 트라가칸트와 같은 고무; 젤라틴, 콜라겐과 같은 단백질; 가교화된 폴리비닐피롤리돈, 한천, 알긴산 또는 그의 염과 같은 담체 등이다.
상기한 바와 같이 제조된 아가리쿠스 추출물 또는 그것을 포함하는 유방암의 발생 또는 말기 유방암의 증식을 억제하는 성분은 단독 또는 다른 약제 및 식품소재와 조합시켜 섭취할 수 있다.
상기한 바와 같이 제조된 아가리쿠스 추출물 또는 그것을 포함하는 유방암의 발생 또는 말기 유방암의 증식을 억제하는 성분 및 그것을 포함하는 조성물은 경구적 또는 비경구적 투여하는 것이 가능하다. 비경구 전달은 정맥내, 근육내, 복강내 또는 비공내에 투여하는 것에 의해 달성될 수 있다. 본 발명의 약학적 조성물의 처방 및 투여의 명세는 예를 들면 해당 분야에 있어서의 교과서 'Remington's Pharmaceutical Sciences' (Maack Publishing Co.Easton, PA)에 기재된 방법에 따라 행할 수 있다.
경구투여를 위해 아가리쿠스 추출물 또는 그것을 포함하는 유방암의 발생 또는 말기 유방암의 증식을 억제하는 성분은 섭취에 적절한 투여의 형태를 해당분야에 주지된 약제학적으로 수용 가능한 담체를 포함하는 조성물로서 제조하는 것이 가능하다. 이와 같은 담체는 얻어지는 조성물이 환자에 의해 섭취하기에 적합한 정제, 환제, 당의제, 캅셀제, 액체, 겔, 시럽, 슬러리, 현탁액 등의 제형으로 처방이 가능하다.
본 발명의 조성물은 아가리쿠스 열수 추출물 또는 그것을 포함하는 유방암의 발생 또는 말기 유방암의 증식을 억제하는 성분을 유방암의 발생 또는 말기 유방암의 증식을 억제하기에 충분한 유효량을 함유한다. 당업자는 '유방암의 발생 또는 말기 유방암의 증식을 억제하기에 유효한 양'을 충분히 이해하고 인식한다. '유방암의 발생 또는 말기 유방암의 증식을 억제하기에 유효한 양'은 세포배양에 의해 시험관내 에세이 또는 적절한 동물 모델에 의해 평가함으로써 결정될 수 있다. 또한 이와 같은 정보를 사용하여 인간에 있어서 섭취에 유효한 양을 결정할 수 있다. '유방암의 발생 또는 말기 유방암의 증식을 억제하기에 유효한 양'은 예를 들면 본 명세서에 기재된 발암물질 메틸-N-니트로소우레아를 투여시켜 유방암을 유발시킨 스프레그-돌리(Sprague-Dawley) 래트를 사용한 에세이를 통해 결정할 수 있다.
실제적으로 섭취되는 아가리쿠스 추출물의 양은 적용되는 개체의 건강상태 등에 의존하고 소망하는 효과를 달성하기 위해서 최적화시킬 수 있다. 약학적 또는 영양학적으로 유효한 양을 결정하는 것은 당업자에 의해 관용적인 방법으로 이룩할 수 있다.
상기의 아가리쿠스 추출물 또는 그것을 포함하는 유방암의 발생 또는 말기 유방암의 증식을 억제하는 성분은 그 기능을 발휘하기에 충분한 양으로 선택된 1 종 또는 그 이상의 식품소재와 혼합하여 사용할 수 있다. 선택된 1종 또는 그 이상의 식품소재는 당업자의 공지된 형태, 통상분말 형태이고 상기 아가리쿠스 추출물 또는 그것을 포함하는 유방암의 발생 또는 말기 유방암의 증식을 억제하는 성분과 혼합시킨다. 그 후 용도 또는 선호도에 따라 액상의 식품으로써 제공하는 것이 가능하다. 예를 들면 하드캅셀, 소프트캅셀과 같은 캅셀제, 정제 또는 환제로 제조할 수 있으며 분말상, 과립상, 다상(tea-leaf), 티백상으로 제조하여 음용하는 것이 가능하다.
상기의 아가리쿠스 추출물 또는 그것을 포함하는 유방암의 발생 또는 말기 유방암의 증식을 억제하는 성분은 메틸-N-니트로소우레아에 의해 유발된 유방암의 발생 및 발생된 유방암의 증식을 억제한다. 본 발명은 발암물질에 각종의 투여제형을 사용하여 아가리쿠스 추출물의 치료 연구를 행한바 있다. 본 명세서에 개시된 방법 또는 프로토콜을 참조하면 기타의 발암물질로 유발된 암에 대한 상기 아가리쿠스 추출물 또는 그것을 포함하는 유방암 발생 또는 말기 유방암의 증식을 억제하는 성분의 유효성을 용이하게 실증할 수 있는 것이다.
즉 상기 아가리쿠스 추출물 또는 그것을 포함하는 유방암의 발생 또는 말기 유방암의 증식을 억제하는 성분의 농도를 변화시켜 섭취하면 발암물질이 투여된 마우스에 있어서 암 발생 또는 암의 증식의 억제를 측정하는 것에 의해 용이하게 실증할 수 있다.
이하 발암물질로서는 메틸-N-니트로소우레아를 사용한 실시예에 의해 본 발명을 더욱 상세히 설명한다. 그러나 다음 실시예들은 본 발명을 예시한 것으로 본 발명의 범위를 실시예로 한정하는 것은 아니다.
이하 본 발명을 실시예를 통하여 더욱 상세히 설명한다.
(실시예 1)
아가리쿠스 추출물의 제조
(1) 아가리쿠스의 열수 추출물로서 상기 건조물 A를 사용한다. 이것은 아가리쿠스의 건조 자실체(교와 아가리쿠스 버섯)를 끓는 물에서 추출하고 1800×g로 10분간 원심분리하여 잔사를 제거하고 동결 건조한 것이다. 이것을 3.7mg/ml의 농도로 정제수에 용해시킨 것을 시료 Ⅰ로 하고, 8mg/ml의 정제수에 용해시킨 것을 시료 Ⅱ라 한다.
(2) 300g의 교와 아가리쿠스 버섯에 증류수 2L를 가하여 2시간 동안 95℃이 상에서 가열 환류를 행한다. 얻어진 액을 여과시켜 여과액(열수추출액)과 잔사를 나눈다. 잔사에 다시 증류수 2L을 가하여 2시간 동안 95℃이상에서 가열 환류하여 열수로 추출을 행하여 여과액을 얻는다. 다시 남은 잔사에 한번 더 동일한 열수 추출을 행한다. 얻어진 여과액을 합하여 동결 건조하여 건조물 A(153g: 추출율 51%)를 얻는다.
50g의 건조물 A에 500mL의 증류수를 가하여 투석 튜브(Spectra/Por Mem brance 50×31, 8 mm 내경 ×30cm 길이, FE―0526―65)에 넣는다. 이것을 3L의 증류수로 12시간 동안 투석한다. 얻어진 투석 외액을 동결 건조하여 건조물 C(27g: 추출율 53%)를 얻는다. 투석 내액에 있어서도 흐르는 물 중에서 30시간 동안 더 투석시키고 그 후 증류수로 2회(각 4시간, 합계 8시간) 투석시킨 후, 투석 내액을 동결 건조하여 건조물 B(11g: 추출율 22%)를 얻는다. 연이어 3g의 건조물 C를 30mL의 증류수에 용해하고 TOYOPEARL HW 40C(40mm 내경×420mm 길이)를 사용하여 크로마토그래피를 행한다. 유출 용매로는 증류수를 사용한다. 각각의 플랙션을 20mL씩 분취하고 분획 1∼30을 얻는다. 이 분획을 박막 크로마토그래피 결과를 통해 하기 5군으로 나눈다. 획분 1∼11(75mg, 2.5%), 획분 12∼15(920mg, 30.7%), 획분 16∼17(1570mg, 52.3%), 획분 18∼19(270mg, 9%), 획분 20∼28(97mg, 3.2%)이다.
획분 16의 IR(KBr) 흡수 스펙트럼은 3390, 3325, 3285, 2940, 2920, 1641, 1634, 1622, 1615, 1600, 1595, 1405, 1394, 1084, 1020 이고 분자량(겔 여과법)은 100∼2000이다.
(3) 상기 (2)와 동일한 방법으로 열수 추출을 실시하여 합산한 여과액(열수 추출액) 6L를 얻었다. 이 여과액을 감압 농축시켜 1L로 하고 이것에 에탄올 1L를 첨가하여 혼합한 후 원심분리를 행하여 침전과 상등액을 얻는다. 이 상등액에 에탄올 3L를 다시 가하여 혼합시키고 원심분리하여 얻어진 침전을 증류수에 용해시켜 투석 처리시킨다. 얻어진 투석 외액을 동결 건조시켜 분말을 얻었다(이하 ABMK 22라 칭함).
(실시예 2)
아가리쿠스 추출물에 의한 MNU로 유발되는 유방암의 예방
메틸-N-니트로소우레아(MNU: 유방암 유도물질)에 의해 유도된 래트 유방암 모델을 사용하여 아가리쿠스 추출물(1SY16 및 ABMK22)의 유방암 예방 효과를 평가하였다.
래트는 스프레그-돌리(Sprague-Dawley) 래트(웅성, 50 일령)을 사용하였으며, 래트는 Hyland 사료 영양회사(Madison Wisconsin주)로부터 구입한 연구용의 4% 표준 Teklad 래트 사료를 급이하여 사육시켰다. 유방암은 증류수에 용해 pH 5.0으로 조절된 MNU를 50mg/kg·체중의 용량으로 1회 정맥 주사하는 것에 의해 유발시켰다.
MNU를 주사시킨 2시간 후 다음과 같이 군을 나누고(그룹 1∼4) 유방암 유도 래트에 아가리쿠스 추출물(1SY16 또는 ABMK22)을 투여하여 합계 5개월 동안 사육하여 시험을 행했다.
그룹 1에는 래트를 각 군 5마리씩 4군으로 나누고 1SY16을 각각의 군의 래트에 0mg/kg·체중(대조군)/일, 100mg/kg·체중, 200mg/kg·체중 및 400mg/kg·체중 등과 같이 투여량을 변경하여 2주 동안 경구 투여한다. 이때 경구투여란 gavage법에 의한 단회위관영양법을 의미하는 것이다.
그룹 2에는 래트를 각 군 5마리씩 4군으로 나누고 각 래트에 200mg/kg·체중/일의 용량으로 1SY16을 제 1군의 래트에는 NMU 정맥주사 후 1∼15일간 경구투여하고, 제 2군의 래트에는 NMU 정맥주사 후 31∼60일간 경구투여하며, 제 3군의 래트에는 NMU 정맥주사 후 61∼90일간 경구투여하고, 제 4군의 래트에는 NMU 정맥주사 후 91∼120일간 경구투여하고, 제 5군의 래트에는 대조군으로서 음용수만을 경구 투여하였다.
그룹 3에는 래트를 각 군 5마리씩 5군으로 나누고 제 1군의 래트에는 대조군으로 음용수만을, 제 2군∼제 5군의 래트에는 아가리쿠스 추출물(ABMK22)을 1일 당 각각 50mg/kg·체중, 100mg/kg·체중, 200mg/kg·체중 및 400mg/kg·체중 등과 같이 투여량을 변경하여 120일 동안 투여하였다.
그룹 4에는 래트를 각 군 5마리씩 5군으로 나누고 제 1군의 래트에는 대조군으로 음용수만을, 제 2군∼제 5군의 래트에는 아가리쿠스 추출물(ABMK22)을 1일 당 각각 400mg/kg·체중(1∼120일간), 800mg/kg·체중(31∼60일간), 1600mg/kg·체중(61∼90일간) 및 3200mg/kg·체중(91∼120일간) 등과 같이 투여량 및 투여기간을 변경하여 투여하였다.
5개월간의 실험기간 후 래트를 희생시켜 각 군의 래트에 대한 유방암의 발생수와 발생한 개개의 유방암의 중량을 측정하였다.
그 결과를 도 1 내지 도 6에 나타내었다.
도 1에 나타난 바와 같이 1SY16은 투여량에 의존적으로 유방암의 발생을 감소시켰다. 100mg/kg·체중 투여군은 약 22%, 200mg/kg·체중 투여군은 약 43%, 400mg/kg·체중 투여군은 약 55%의 유방암 발생율을 감소시켰다.
도 1에 있어서 *는 대조군의 암 발생율과 비교하여 통계처리시 p＜0.05의 유의성을 지닌 것이고, **는 p＜0.01의 유의성을 ***는 p＜0.001의 유의성을 지닌 것을 나타낸다.
도 2는 그룹 2의 시험결과를 나타낸 것이다. 도 2의 가로축은 1SY16을 각각 1∼15일간, 31∼60일간, 61∼90일간 및 91∼120일간 경구 투여한 군을 나타내고 있다. MNU 정맥 투여 후 1SY16을 1∼15일간 경구 투여한 군은 1M(1개월)이고, 31∼60일간 경구 투여한 군은 2M(2개월)이고, 61∼90일간 경구 투여한 군은 3M(3개월)이고, 91∼120일간 경구 투여한 군은 4M(4개월)이다. 도 2의 상단의 화살표는 1SY16을 투여시킨 기간을 이미지적으로 나타낸 것이다. 도 2의 세로축은 도 1과 같은 방법으로 각 군의 유방암 발생율을 대조군의 유방암 발생율 100%와 비교하여 나타낸 것이다.
도 2에 나타난 바와 같이 1SY16 투여 군에는 투여 시간에 의존하여 유방암의 발생이 감소되고 1개월 투여군은 약 40%, 2개월 투여군은 약 35%, 3개월 투여군은 약 46%, 4개월 투여군은 약 72%의 유방암 발생율이 감소하고 있다. 도 2에 있어서 * 및 **는 도 1과 동일한 의미를 나타내고 대조군에 대한 통계처리로서 유의성을 지닌 차이를 나타내는 것이다.
도 3은 도 2에 나타난 시험에 있어서 각 군의 유방암의 평균 중량을 나타내 는 것이다. 도 3에 나타난 바와 같이 각 군의 유방암 평균 중량은 각각 대조군의 유방암 중량에 비해 약 26%, 46%, 54% 및 17%이고 유방암 발생율과 동일하게 투여기간에 의존적으로 감소하고 있는 것이다. 도 3에서 *는 도 1 및 도 2와 동일한 의미를 지니고 대조군에 대한 통계처리시 유의적인 차이를 지님을 나타내는 것이다.
도 4는 그룹 3의 시험결과를 나타낸 것이다. 도 4의 가로축은 좌측으로부터 각각 대조군, ABMK 22의 50mg/kg·체중 투여군, 100mg/kg·체중 투여군, 200mg/kg·체중 투여군 및 400mg/kg·체중 투여군을 나타낸다. 도 4에 세로축은 도 1 및 도 2와 동일하게 각 군의 유방암 발생율을 대조군의 유방암 발생률 100%와 비교하여 나타낸 것이다.
도 4에 나타난 바와 같이 ABMK 22 투여군은 투여량에 의존적으로 유방암의 발생을 감소시킨다. 50mg/kg·체중 투여군은 대조군에 비해 유방암 발생율이 약 82%이었고, 100mg/kg·체중 투여군은 유방암 발생율이 약 85%, 200mg/kg·체중 투여군은 유방암 발생율이 약 73% 및 400mg/kg·체중 투여군은 유방암 발생율이 약 70%의 유방암 발생율을 나타내어 발생억제 효과를 나타내는 것이다. 유방암의 저해율은 표에 나타내지 않았지만 상기 각 군은 각각 약 18%, 약 15%, 약 27% 및 약 30%의 저해율을 지닌다. 도 4에 있어서 *, ** 및 ***는 도 1 내지 도 3에 나타난 것과 동일한 것을 의미하며 대조군에 대한 통계처리시 유의적인 차이를 지님을 나 타내는 것이다.
도 5는 그룹 4의 시험결과를 나타난 것이다. 도 5의 가로축에는 각각 대조군 ABMK 22의 400mg/kg·체중 투여군, 800mg/kg·체중 투여군, 1600mg/kg·체중 투여군 및 3200mg/kg·체중 투여군을 나타낸다. 도 5의 세로축은 도 1, 도 2 및 도 4와 동일한 것을 나타내고 각 군의 유방암 발생율을 대조군의 유방암 발생율 100%와 비교하여 나타낸 것이다. 도 5의 화살표는 각 군의 ABMK 22 투여기간을 이미지로 표시한 것이다.
도 5에 나타난 바와 같이 ABMK 22 투여군은 투여량에 의존적으로 유방암의 발생을 감소시키고 400mg/kg·체중 투여군은 대조군에 비해 약 68%, 800mg/kg·체중 투여군은 대조군에 비해 약 66%, 1600mg/kg·체중 투여군은 대조군에 비해 약 62% 및 3200mg/kg·체중 투여군은 대조군에 비해 약 63%의 유방암 발생율을 나타낸다. 유방암 저해율은 표에 나타나지 않았지만 상기 각 군으로부터 각각 32%, 34%, 38% 및 37% 저해율을 나타내는 것이다. 한편 도 5에 있어서 ***는 도 1내지 도 4에 나타난 것과 동일한 것을 의미하며 대조군에 대해 통계적으로 유의성을 지닌 차이를 지님을 나타내는 것이다.
도 6은 도 4에 나타난 시험에 있어서 각 군의 유방암 평균 중량을 나타낸 것이다. 도 6에 명백히 나타난 바와 같이 ABMK 22를 200mg/kg·체중 투여군의 래트 는 유방암의 평균 중량이 대조군 유방암 중량의 약 10%이고 통계적으로 유의적인 차이를 나타내고 있다.
유방암의 발생 또는 말기 유방암의 증식을 예방하고 약품소재 및 식품소재가 제공된다.
Claims (17)
- 유방암을 억제하는 성분을 함유하는 아가리쿠스 추출물
- 유방암의 발생 또는 말기 유방암의 증식을 억제하는 성분을 함유하는 아가리쿠스 추출물
- 제 1항 또는 제 2항에 있어서, 상기 아가리쿠스 추출물은 용매로 추출하여 제조된 것임을 특징으로 하는 추출물
- 제 3항에 있어서, 상기 아가리쿠스 추출물은 열수로 추출하여 제조된 것임을 특징으로 하는 추출물
- 제 1항 또는 제 2항에 있어서, 상기 아가리쿠스 추출물은 아가리쿠스의 자실체를 열수로 추출하는 단계, 얻어진 추출액을 투석 처리하는 단계, 및 얻어진 투석 외액을 크로마토그래피 분리하는 단계에 의해 수득된 분자량 100∼2000의 크로마토 그래피 주용출 획분(main elute fraction)임을 특징으로 하는 추출물
- 제 1항 또는 제 2항에 있어서, 상기 아가리쿠스 추출물은 아가리쿠스의 자실체를 열수로 추출하는 단계, 얻어진 추출액에 에탄올을 첨가시켜 침전을 얻는 단계, 및 상기 침전을 물에 용해시켜 투석 처리하는 단계에 의해 얻어진 투석 외액(dialysis external fluid)임을 특징으로 하는 추출물
- 제 1항 또는 제 2항에 있어서, 상기 유방암은 메틸-N-니트로소우레아로 유발 됨을 특징으로 하는 추출물
- 아가리쿠스 추출물 및 약학적 수용 가능한 캐리어를 함유하는 유방암을 억제하는 조성물
- 제 8항에 있어서, 상기 조성물은 분말, 액체, 정제, 캡슐 및 펠레트로 구성된 군에서 선택된 형태임을 특징으로 하는 조성물
- 아가리쿠스 추출물 및 약학적 수용 가능한 캐리어를 함유하는 조성물을 피험체에 투여하는 단계를 포함하는 유방암의 억제 방법
- 아가리쿠스 추출물 및 약학적 수용 가능한 캐리어를 포함하는 조성물을 피험체에 투여하는 단계를 포함하는 유방암의 발생 또는 말기 유방암의 증식을 억제하는 방법
- 제 10항 또는 제 11항에 있어서, 상기 아가리쿠스 추출물은 아가리쿠스의 자실체를 열수로 추출하는 단계, 얻어진 추출액을 투석 처리하는 단계, 및 얻어진 투석처리 외액을 크로마토그래피 처리하는 단계에 의해 얻어진 분자량 100∼2000의 크로마토그래피 주용출 획분임을 특징으로 하는 방법
- 제 10항 또는 제 11항에 있어서, 상기 아가리쿠스 추출물은 아가리쿠스 자실체를 열수로 추출하는 단계, 얻어진 추출액에 에탄올을 첨가시켜 침전을 얻는 단계, 및 그 침전을 물에 용해시켜 투석 처리하는 단계에 의해 얻어진 투석 외액임을 특징으로 하는 방법
- 유방암을 억제하는 조성물의 제조를 위한 아가리쿠스 추출물의 용도
- 유방암의 발생 및 말기 유방암의 증식을 억제하는 조성물의 제조를 위한 아가리쿠스 추출물의 용도
- 제 14항 또는 제 15항에 있어서, 상기 아가리쿠스 추출물은 아가리쿠스 자실체를 열수로 추출하는 단계, 얻어진 추출액을 투석 처리하는 단계, 및 얻어진 투석처리 외액을 크로마토그래피 처리하는 단계에 의해 얻어진 분자량 100∼2000의 크로마토그래피 주용출 획분임을 특징으로 하는 용도
- 제 14항 또는 제 15항에 있어서, 상기 아가리쿠스 추출물은 아가리쿠스 자실체를 열수로 추출하는 단계, 얻어진 추출액에 에탄올을 첨가시켜 침전을 얻는 단계, 및 그 침전을 물에 용해시켜 투석 처리하는 단계에 의해 얻어진 투석 외액임을 특징으로 하는 용도
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