JP2000157203A - シイタケ菌糸体抽出物を含むγδＴ細胞免疫活性増強剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 （修正有） 【課題】シイタケ菌糸体抽出物の薬理作用をさらに詳し
く解明して、シイタケ菌糸体抽出物の新しい医薬、食
品、飲料、飼料等の用途を探索する。 【解決手段】シイタケ菌糸体抽出物がγδＴ細胞の活性
を顕著に増強する作用を有することを利用して、腫瘍若
しくは細菌またはウィルス性の感染症の治療および／ま
たは予防に使用するための、シイタケ菌糸体抽出物を含
むγδＴ細胞活性増強剤、ひいては免疫活性剤を開発・
提供する。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、シイタケ菌糸体抽
出物を含む、γδＴ細胞の活性増強剤の開発および提
供、ひいては、免疫活性剤の開発および提供に関する。

【０００２】本発明はさらに、シイタケ菌糸体抽出物を
含む、γδＴ細胞の活性増強作用、ひいては、免疫活性
作用を有する食品、飲料および飼料の開発および提供に
関する。

【０００３】本発明はさらに、シイタケ菌糸体抽出物を
含む、抗腫瘍剤、抗細菌感染治療剤および抗ウィルス感
染治療剤の開発および提供に関する。

【０００４】

【従来技術】γδＴ細胞の特徴 動物の血液中に存在する末梢Ｔ細胞は、その細胞表面抗
原であるＴ細胞受容体（TCR）の種類から、大きく分け
て二種類のＴ細胞が存在することが知られている。１種
類は、細胞表面にTCRα鎖およびβ鎖を有するαβＴ細
胞であり、もう１種類はTCRγ鎖およびδ鎖を有するγ
δＴ細胞である。ヒトにおいては、γδＴ細胞は、通常
の末梢血液およびリンパ組織においては数％〜10％程度
しか存在しない、αβＴ細胞とは全く異なる特徴を有す
る傷害キラー細胞である。

【０００５】γδＴ細胞は、ヒトにおいては腸管、皮膚
および末梢血液中等に存在して、局所免疫に働いてい
る。γδＴ細胞の機能としては、細菌またはウィルスに
対する感染防御活性、ガン細胞傷害活性などが現在まで
に報告されている。γδＴ細胞の感染防御活性 脾臓などに認められるγδＴ細胞の中には、感染の際に
IL-4やIFN-αなどのサイトカインを産生する細胞が存在
する。実験的にこれらの細胞が存在しない状況を作る
と、細菌感染に対する抵抗性が減弱することが知られて
いる。たとえば、γδ型TCR抗体を投与して一過性にγ
δＴ細胞の機能を抑制したマウスやTCRδ遺伝子欠損マ
ウスにおいて、Mycobacterium tuberculosisの感染に対
する抵抗性が低下したことが報告されている（Ladel C,
et al., Eur J Immunol, 1995, 25:2877-2881）。ま
た、Listeria monocytogenesの感染初期においてγδＴ
細胞が登場してくることも報告されている（Hiromatsu
K, et al.,J Exp Med, 1992, 175:49-56）。これらの知
見から、γδＴ細胞は、細菌感染に対する生体防御にお
いて重要な細胞であることが示唆された。

【０００６】さらに、B型肝炎ウィルスの慢性感染によ
り、肝臓および脾臓のγδＴ細胞が増殖誘導されること
が報告された（Ozaki S, et al.,J Med Invest, 1998,
44:215-217）。また、正常マウスと比較して、γδＴ細
胞を欠損するマウス体内では、ワクシニアウィルスが感
染初期において顕著に増加することも報告されている
（Welsh RM, et al., Immunol Rev, 1997, 159:79-9
3）。これらの知見から、γδＴ細胞は、上述した細菌
感染症に対する作用のみならず、ウィルス感染に対して
も作用していることが示唆された。γδＴ細胞のガン細胞傷害活性 γδＴ細胞は、自己ガン細胞を特異的に殺すことがで
き、しかも自己の正常リンパ球（たとえば、αβＴ細
胞）には全く傷害を示さないＴ細胞である。この点で、
活性化したγδＴ細胞を使用してガンの治療をする時に
は、副作用を生じる危険性が非常に少ないという効果が
ある。γδＴ細胞とは逆に、αβＴ細胞は、自己ガン細
胞を殺さず、自己白血球を殺すことが知られているた
め、ガンの治療においてαβＴ細胞を活性化することに
より大きな副作用を生じる危険がある。したがって、ガ
ンを治療するためには、活性化したγδＴ細胞を使用す
ることにより行うことが望ましいと考えられていた。

【０００７】さらにγδＴ細胞は、MHC非拘束性にガン
細胞を殺し、NK細胞と似た性格を有している。γδＴ細
胞は、小児末梢血液中においては10％程度存在するが、
加齢とともにその数が減少する。そのため加齢とともに
ガンが多くなっていく原因として、このような体内にお
けるγδＴ細胞の減少が関与していることが示唆されて
いる。また、ニワトリ、ヒツジ、ウシなどでは、末梢血
中に15〜50％ものγδＴ細胞が存在している。これらの
動物では腫瘍の発生が少ないことから、末梢γδＴ細胞
の存在がガンの抑制に大きく関与していることが示唆さ
れる。シイタケの薬理効果 シイタケ（Lentinus edodes）は日本、中国の代表的な
食用キノコであり、日本では約300年前から人工栽培が
行われてきた。日常食用にしているキノコは子実体と呼
ばれ、菌類が子孫を残すために胞子を生じる生殖体であ
り、栄養体である菌糸細胞は地中や原木中で長い時間を
かけて成長する。

【０００８】シイタケは古くからさまざまな病気や症状
に効果があると言われてきたが、その薬理作用が解明さ
れてきたのは比較的最近である。シイタケ菌糸体抽出物
については、ラット、マウスでの発ガン実験において、
動物の大腸、肝臓などの腫瘍形成および移植腫瘍細胞の
増殖を抑制し、動物の生存率を上昇させたこと（N.Suga
no et al., Cancer Letter, 27:1, 1985；鈴木康将ら、
日本大腸肛門病会誌、43:178, 1990など）、マイトジェ
ン活性を示したこと（T. Tabata et al.,Immunopharmac
ology, 24:57, 1992；Y. Hibino et al., Immunopharma
cology, 28:77, 1994など）、抗体産生を増強し、抗体
を介するADCC（antibody-dependentcell-mediated cyto
toxicity）による免疫学的肝細胞障害に抑制効果を示し
たこと（溝口靖紘ら、肝胆膵、15:127, 1987）などの種
々な報告がなされている。

【０００９】これらの知見をきっかけにシイタケの成分
の薬理作用の研究が、医学薬学の分野で集中的に進めら
れてきた。その結果、シイタケの成分の一部が、ヒトの
免疫能力を回復することによりガンなどの治療に使用す
ることができ、またガンの発病を抑制する可能性がある
ことがわかってきた。

【００１０】

【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、シイ
タケ菌糸体抽出物の薬理作用をさらに詳しく解明して、
シイタケ菌糸体抽出物の新しい医薬、食品、飲料、飼料
等の用途を探索することである。

【００１１】

【課題を解決するための手段】本発明者らは上記課題を
解決するために鋭意研究した結果、シイタケ菌糸体抽出
物がγδＴ細胞の活性を顕著に増強する作用を示すこと
を発見して、本発明を完成した。

【００１２】すなわち、本発明は、シイタケ菌糸体抽出
物を含むγδＴ細胞活性増強剤を開発・提供し、ひいて
は免疫活性剤を開発・提供する。

【００１３】本発明のγδＴ細胞活性増強剤または免疫
活性剤は、シイタケ菌糸体抽出物および任意成分として
薬剤的に許容できる担体を含む、医薬組成物の形であっ
てよい。

【００１４】また、本発明のγδＴ細胞活性増強剤また
は免疫活性剤は、経口投与用、注射用、または経皮投与
用のいずれであってもよい。

【００１５】また、本発明のγδＴ細胞活性増強剤また
は免疫活性剤は、食品、飲料、または飼料のいずれの形
であってもよい。

【００１６】

【発明の実施の形態】本発明のγδＴ細胞活性増強に使
用するシイタケ菌糸体抽出物とは、シイタケ菌を固体培
地上で培養して得られる菌糸体、好ましくは菌糸体を含
む固体培地を水および酵素の存在下に粉砕、分解して得
られる抽出物を言う。

【００１７】シイタケ菌糸体抽出物は好ましくは以下の
方法により得られたものを使用するが、これに限定され
ない。すなわち、バガス（サトウキビのしぼりかす）と
脱脂米糠を基材とする固体培地上にシイタケ菌を接種
し、次いで菌糸体を増殖して得られる菌糸体を含む固体
培地を12メッシュ通過分が30重量％以下となるよう解束
する。この解束された固体培地に水およびセルラーゼ、
プロテアーゼまたはグルコシターゼから選ばれる酵素の
1種またはそれ以上を、前記固体培地を30〜55℃の温度
に保ちながら添加するとともに、前記固体培地を前記酵
素の存在下に粉砕し、すりつぶしてバガス繊維の少なく
とも70重量％以上が12メッシュ通過分であるようにす
る。次いで95℃までの温度に加熱することにより酵素を
失活させるとともに滅菌し、得られた懸濁状液を濾過す
ることによってシイタケ菌糸体抽出物を得る。シイタケ
菌糸体抽出物はそのまま本発明のγδＴ細胞活性増強剤
に用いてもよいが、これを濃縮、凍結乾燥して粉末とし
て保存し、使用時に種々の形態で使用するのが便宜的で
ある。凍結乾燥して得られる粉末は褐色粉末で、吸湿性
があり、特異な味と臭いをもつ。

【００１８】このようにして得られるシイタケ菌糸体抽
出物はフェノール硫酸法による糖質分析により糖質を2
5.3％（w/w）、Lowry法によるタンパク質分析によりタ
ンパク質を19.7％（w/w）、没食子酸を標準とするFolon
-Denis法によりポリフェノールを2.6％（w/w）含んでい
た。シイタケ菌糸体抽出物にはそのほかに粗脂肪8％、
粗灰分22％、糖質以外の可溶性無窒素物を約20％含む。

【００１９】また、シイタケ菌糸体抽出物の構成糖組成
（％）は以下の通りであった：Xyl：15.2；Ara：8.2；M
an：8.4；Gul：39.4；Gal：5.4；GlcN：12.0；GLuUA：1
1.3。

【００２０】シイタケ菌糸体抽出物のin vivoにおける
γδＴ細胞活性増強効果を以下の方法により試験したと
ころ、顕著なγδＴ細胞活性増強効果が観察された。

【００２１】本発明のγδＴ細胞活性増強剤は、γδＴ
細胞により傷害される腫瘍細胞によって引き起こされる
腫瘍の治療および／または予防に有効である。本発明の
γδＴ細胞活性増強剤は、特定の腫瘍細胞を特異的に治
療するのではなく、γδＴ細胞の活性を高め、活性化さ
れたγδＴ細胞により結果として腫瘍細胞を破壊するこ
とを目的とするという特徴を有する。すなわち、本発明
のγδＴ細胞活性増強剤を用いた治療の対象となる腫瘍
細胞は、悪性腫瘍細胞だけでなく、良性腫瘍細胞であっ
てもよく、特定の腫瘍細胞に限定されるものではない。
従って、シイタケ菌糸体抽出物および任意成分として薬
剤的に許容できる担体を含むγδＴ細胞活性増強剤は、
いずれかの腫瘍の治療用および／または予防用組成物と
して使用することができる。

【００２２】本発明のγδＴ細胞活性増強剤は、細菌感
染またはウィルス感染の治療用および／または予防用組
成物としても使用することができる。本発明のγδＴ細
胞活性増強剤は、特定の細菌またはウィルスに対して特
異的に作用するのではなく、γδＴ細胞の活性を高め、
結果として感染した細菌またはウィルスを体内から排除
することを目的とする。本発明のγδＴ細胞活性増強剤
により治療可能な細菌性またはウィルス性疾患には、た
とえば結核菌（Mycobacterium sp.）、リステリア菌(Li
steria monocytogenes)、肝炎ウィルス（A型、B型、C
型）、ヒト免疫不全ウィルス（Human Immunodeficiency
Virus）、ワクシニアウィルス（Vaccinia virus）など
があるが、これらに限定されない。

【００２３】治療用および／または予防用組成物として
の投与経路は、経口投与が最も好ましいが、静脈内投
与、腹腔内投与、皮下投与、筋肉内投与、経鼻投与、経
皮投与などであってもよい。経口投与に適した製剤に
は、錠剤、カプセル剤、散剤、顆粒剤、溶液剤、シロッ
プ剤などが含まれるが、これに限定されない。経鼻投与
または経皮投与に適した製剤には、パップ剤、貼布剤な
どが含まれるが、これに限定されない。

【００２４】薬剤的に許容できる担体には、当業界で公
知の適当な賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、着香料、
着色剤、溶解補助剤、懸濁剤、コーティング剤などを含
むが、これに限定されない。

【００２５】本発明のγδＴ細胞活性増強剤の投与量は
患者の年齢、体重、症状、投与経路などを考慮して医師
により決定される。本発明のγδＴ細胞活性増強剤に含
まれるシイタケ菌糸体抽出物は元来食品として使用され
てきたものであり、極めて安全であるところから、投与
量を厳しく限定する必要はないが、通常シイタケ菌糸体
抽出物を、好ましくは1日数回（2〜3回程度）、1回100m
g-10000mg（総投与量にして1日あたり200mg-30000m
g）、さらに好ましくは1日3回、1回あたり500mg-5000mg
（総投与量にして1日あたり1500mg-15000mg）、さらに
好ましくは1日3回、1回あたり1000mg-1500mg（総投与量
にして1日あたり3000mg-4500mg）である。さらに、他の
抗腫瘍剤と併用して投与しても支障はない。

【００２６】本発明のγδＴ細胞活性増強剤は、養子免
疫療法においても使用する製剤として提供することがで
きる。養子免疫療法とは、感作された細胞、通常はリン
パ球を生体内に移入することにより、腫瘍細胞を殺すこ
とを目的とした腫瘍の治療方法をいう。本発明の場合、
まず患者由来の末梢血中からγδＴ細胞を分離し、分離
したγδＴ細胞をin vitroにおいて本発明のγδＴ細胞
活性増強剤により活性化した後、活性化されたγδＴ細
胞を再び患者体内に戻す。その結果、活性化されたγδ
Ｔ細胞の作用により、体内の腫瘍細胞を破壊することが
できる。

【００２７】本発明のγδＴ細胞活性増強剤は、食品の
形で提供することもできる。好ましい食品の形態として
は粉末、顆粒、ペースト状、ゼリー状などが挙げられ
る。さらに顆粒等にする場合は、甘味を加えるため、乳
糖などの糖類を加えることが望ましい。また、本発明の
γδＴ細胞活性増強剤は、飲料の形で提供することもで
きる。このような食品または飲料には、シイタケ菌糸体
抽出物の他に、ビタミン剤、カルシウムなどの無機成
分、アルコール類、ポリフェノールなどの消臭成分など
を追加してもよい。この食品または飲料には、特定保健
用食品、病者用食品等の範疇にあるものも含まれる。

【００２８】本発明のγδＴ細胞活性増強剤は、飼料と
してまたは飼料への添加剤の形で提供することもでき
る。家畜の飼料としてまたは飼料への添加剤として本発
明のγδＴ細胞活性増強剤を使用することにより、家畜
に発生する腫瘍を治療および／または予防し、あるいは
家畜に対する細菌またはウィルス性の感染症を治療およ
び／または予防することができる。その結果、家畜につ
いて現在使用されている治療薬、たとえば抗生物質など
の使用量を減少することができ、それに伴って飼育コス
トを低下することができる。さらに、抗生物質を投与し
たために生産物を出荷できない期間をより短くすること
ができるというさらなる効果もある。

【００２９】ヒト被検者における、in vivoでのγδＴ
細胞活性増強効果試験法は以下の通り行った。まずヒト
被検者にシイタケ菌糸体抽出物原末3.6gを7日間にわた
り毎日接種させた（全量25.2g）。次いでシイタケ菌糸
体抽出物服用後の末梢血中γδＴ細胞頻度を、服用前の
細胞頻度との比較においてフローサイトメトリーを用い
て測定した。

【００３０】本発明を以下の実施例によりさらに詳しく
説明するが、これにより本発明の範囲を限定するもので
はない。本発明の方法を種々変更、修飾して使用するこ
とが当業者には可能であり、これらも本発明の範囲に含
まれる。

【００３１】

【実施例】実施例１：シイタケ菌糸体抽出物の調製法 バガス90重量部、米糠10重量部からなる固体培地に純水
を適度に含ませた後に、シイタケ種菌を接種し、温度お
よび湿度を調節した培養室内に放置し、菌糸体を増殖さ
せた。菌糸体が固体培地に蔓延した後、バガス基材の繊
維素を解束し、12メッシュ通過分が24重量％以下となる
ようにした。この解束された培地1.0kgに、純水3.5Lお
よび精製シルラーゼ2.0gを固体培地を40℃に保ちながら
加えて培地含有混合物とした。

【００３２】次いで培地含有混合物を変速付ギヤーポン
プにより循環させながら、固体培地にギヤー部分におい
て粉砕およびすりつぶし作用を200分間程度加え、バガ
ス繊維の約80重量％が12メッシュ通過分となるようにし
た。培地含有混合物の粉砕およびすりつぶしは、該混合
物の温度を徐々に上昇させながら行った。その後培地含
有混合物をさらに加熱して、90℃として30分間放置し
た。90℃への加熱により、酵素を失活せしめ、かつ殺菌
を施した。得られた培地含有混合液を60メッシュ濾布を
用いて濾過してシイタケ菌糸体抽出液を得た。これを濃
縮した後、凍結乾燥し、シイタケ菌糸体抽出物原末を得
た。実施例２：シイタケ菌糸体抽出物のγδＴ細胞活性増強
in vivo試験 ヒト被検者３名（被験者Ａ〜Ｃ）にシイタケ菌糸体抽出
物原末3.6g／日を7日間にわたり毎日経口的に服用させ
た（全量25.2g）。シイタケ菌糸体抽出物服用期間経過
後、ヒト被検者から末梢血を採取した。服用後に採取し
た末梢血中のγδＴ細胞頻度を、服用前に採取した末梢
血中の細胞頻度と比較して、フローサイトメトリーによ
り測定した。得られた結果を図１および図２に示す。

【００３３】３名全員とも、シイタケ菌糸体抽出物の服
用前と比較して、服用後には末梢血中のγδＴ細胞の比
率が、平均して40％以上上昇した。表１：服用前後における、末梢血γδＴ細胞比率の増加率 被検者Ａ 被検者Ｂ 被検者Ｃ 平均±SEM増加率 124.39％ 146.15％ 150.00％ 140.18％±7.97％ 一方、同一の被検者から採取した服用前後の末梢血液に
ついて、γδＴ細胞以外のマーカーについて調べた。そ
の結果、シイタケ菌糸体抽出物にはαβＴ細胞に対する
増殖活性は見られず、平均すると細胞比率の減少が見ら
れた（図３）。

【００３４】

【発明の効果】本発明のシイタケ菌糸体抽出物を含むγ
δＴ細胞活性増強剤は、γδＴ細胞がガン細胞傷害活性
を有することにより、生体を腫瘍から防御する効果を有
しており、腫瘍の予防、治療に使用できる。本発明のγ
δＴ細胞活性増強剤は、副作用がないことから、安全に
使用でき、大きな産業上の利用可能性が期待できる。

【図面の簡単な説明】

【図１】 図１は、本発明のシイタケ菌糸体抽出物の
服用によりγδＴ細胞の末梢血中比率が上昇することを
示す。

【図２】 図２は、シイタケ菌糸体抽出物の服用前後
における、γδＴ細胞のフローサイトメトリー解析の結
果を示す。

【図３】 図３は、本発明のシイタケ菌糸体抽出物の
服用によりαβＴ細胞の末梢血中比率がむしろ減少する
ことを示す対照である。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ａ６１Ｋ 31/00 ６３５ Ａ６１Ｋ 31/00 ６３５ ６３７ ６３７Ｃ 35/84 35/84 Ａ Ｃ１２Ｎ 1/14 Ｃ１２Ｎ 1/14 Ｅ (72)発明者 松田 由紀子 大阪府大阪市淀川区三津屋南３−13−35 小林製薬株式会社内 (72)発明者 田島 裕 佐賀県佐賀市八戸溝３丁目10番511号 Ｆターム(参考） 2B150 AA01 AB10 DD31 DD42 DD57 4B018 LB08 MD83 ME07 ME08 4B065 AA71X BC39 CA02 CA41 CA43 CA44 4C088 AA08 AC16 BA05 MA32 MA52 MA63 MA66 ZB02 ZB09 ZB26 ZB33 ZB35

Claims (10)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 シイタケ菌糸体抽出物を含む、γδＴ細
   胞活性増強剤。
2. 【請求項２】 シイタケ菌糸体抽出物、および薬剤的に
   許容できる担体を含む、医薬または獣医薬用のγδＴ細
   胞活性増強剤。
3. 【請求項３】 経口投与用である、請求項１または２の
   γδＴ細胞活性増強剤。
4. 【請求項４】 食品である、請求項１のγδＴ細胞活性
   増強剤。
5. 【請求項５】 飲料である、請求項１のγδＴ細胞活性
   増強剤。
6. 【請求項６】 飼料である、請求項１のγδＴ細胞活性
   増強剤。
7. 【請求項７】 注射用または経皮吸収用である、請求項
   １または２のγδＴ細胞活性増強剤。
8. 【請求項８】 患者から採取したγδＴ細胞をin vitro
   において活性化するための、請求項１のγδＴ細胞活性
   増強剤。
9. 【請求項９】 腫瘍の治療に用いる、請求項１〜８のい
   ずれか１項のγδＴ細胞活性増強剤。
10. 【請求項１０】 細菌感染またはウィルス感染の予防ま
    たは治療に用いる、請求項１〜８のいずれか１項のγδ
    Ｔ細胞活性増強剤。