JP4405611B2 - 肝障害防御剤 - Google Patents
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Description
【発明の属する技術分野】
本発明は肝障害防御剤に関する。さらに詳しくはシイタケ菌糸体抽出物を含む肝障害防御剤に関する。
【0002】
【従来の技術】
シイタケ(Lentinus edodes)は日本、中国の代表的な食用キノコであり、日本では約300年前から人工栽培が行われてきた。日常食用にしているキノコは子実体と呼ばれ、菌類が子孫を残すために胞子を生じる生殖体であり、栄養体である菌糸細胞は地中や原木中で長い時間をかけて菌糸体を形成する。
【0003】
シイタケは古くからさまざまな病気や症状に効果があると言われてきたが、その薬理作用が解明されてきたのは比較的最近である。シイタケ菌糸体抽出物については、ラット、マウスでの発癌実験において、動物の大腸、肝臓などの腫瘍形成及び移植腫瘍細胞の増殖を抑制し、動物の生存率を上昇させた(N. Sugano et al., Cancer Letter,17:109, 1982;鈴木康将ら、日本大腸肛門病会誌、43:178, 1990など)、マイトジェン活性を示した(T. Tabata et al., Immunopharmacology, 24:57, 1992; Y. Hibino et al., Immunopharmacology, 28:77, 1994など)、抗体産生を増強し、抗体を介するADCC(antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity)による免疫学的肝細胞障害に抑制効果を示した(溝口靖紘ら、肝胆膵、15:127, 1987)などの種々な報告がなされている。この他にもシイタケ菌糸体抽出物には発根促進、農作物の成長促進などの植物ホルモン作用(M. Mitsuhashi-Kato et al., Plant Cell Physiol. 26:221, 1985)や抗植物ウイルス作用(小室康雄:農林水産省植物ウイルス研報告, 1977)があることが報告されている。
【0004】
【発明が解決すべき課題】
本発明の目的は、シイタケ菌糸体抽出物の薬理作用をさらに詳しく解明して、シイタケ菌糸体抽出物の新しい医薬用途及び/又は保健用途を探索することである。
【0005】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは上記課題を解決するため、鋭意研究した結果、シイタケ菌糸体抽出物が薬物による肝障害に対して顕著な防御効果を示すことを発見して本発明を完成した。
【0006】
すなわち、本発明は、シイタケ菌糸体抽出物を含む薬物による肝障害の防御剤を提供する。
【0007】
本発明の薬物による肝障害の防御剤は、シイタケ菌糸体抽出物及び任意成分として薬剤的に許容できる担体を含む、薬物による肝障害の治療用及び/又は予防用組成物の形であってよい。
【0008】
また、本発明の薬物による肝障害の防御剤は、食品の形であってよく、飲料の形であって良い。さらに、これらの形態に何ら限定されるものではない。
【0009】
【発明の実施の形態】
本発明の薬物による肝障害の防御剤に使用するシイタケ菌糸体抽出物とは、シイタケ菌を固体培地上で培養して得られる菌糸体、好ましくは菌糸体を含む固体培地を水及び酵素の存在下に粉砕、分解して得られる抽出物を言う。
【0010】
シイタケ菌糸体抽出物は好ましくは以下の方法により得られたものを使用するが、これに限定されない。すなわち、バガス(サトウキビのしぼりかす)と脱脂米糠を基材とする固体培地上にシイタケ菌を接種し、次いで菌糸体を増殖して得られる菌糸体を含む固体培地を12メッシュ通過分が30重量%以下となるよう解束し、この解束された固体培地に水およびセルラーゼ、プロテアーゼまたはグルコシダーゼから選ばれる酵素の1種またはそれ以上を、前記固体培地を30〜55℃の温度に保ちながら添加するとともに、前記固体培地を前記酵素の存在下に粉砕、すりつぶしてバガス繊維の少なくとも70重量%以上が12メッシュ通過分であるようにし、次いで95℃までの温度に加熱することにより酵素を失活させるとともに滅菌し、得られた懸濁状液をろ過することによってシイタケ菌糸体抽出物を得る。シイタケ菌糸体抽出物はそのまま本発明の防御剤に用いてもよいが、これを濃縮、凍結乾燥して粉末として保存し、使用時に種々の形態で使用するのが便宜的である。凍結乾燥して得られる粉末は褐色粉末で、吸湿性があり、特異な味と臭いをもつ。
【0011】
このようにして得られるシイタケ菌糸体抽出物はフェノール-硫酸法による糖質分析により糖質を15−50%、好ましくは20−40%(w/w)、Lowry法によるタンパク質分析によりタンパク質を10−40%、好ましくは13−30%(w/w)、没食子酸を標準とするFolin-Denis法によりポリフェノールを1−5%、好ましくは2.5−3.5%(w/w)含む。シイタケ菌糸体抽出物にはそのほかに脂質約0.1%、繊維約0.4%、灰分約20%を含む。
【0012】
また、シイタケ菌糸体抽出物の構成糖組成(%)は以下の通りであった:
キシロース:15.2;アラビノース:8.2;マンノース:8.4;グルコース:39.4;ガラクトース:5.4;アミノ糖:12.0;ウロン酸:11.3。
【0013】
シイタケ菌糸体抽出物の薬物による肝障害に対する防御効果を以下の方法により試験したところ、ラット肝細胞を用いるin vitro試験、CCl4で誘導したラット肝障害モデルを用いるin vivo試験、及び薬剤性肝障害のヒト患者に対する試験において、いずれも顕著な防御効果が観察された。
【0014】
本発明の防御剤は、治療剤及び/又は予防剤及び/又は保健用剤である。
本発明の防御剤は、セフロキサジン・セフロキシムナトリウム、ラタモキセフナトリウムなどのセフェム系、硫酸アミカシンなどのアミノ配糖体系、アクラルビシンなどの抗腫瘍系、リファンピシンなどの抗酸菌抗生物質系、テトラサイクリン系、マクロライド系、ペニシリン系などの抗生物質、中枢神経用薬である、アスピリンなどの解熱鎮痛消炎系、クロキサゾラムなどの精神神経系、バルプロ酸ナトリウムなどの抗てんかん剤系、ハロタンなどの全身麻酔剤系、フェノバルビタールなどの催眠鎮静系、総合感冒薬系などの薬剤の投与によって引き起こされる肝障害、またこれらの他に、ピンドロールなどの不整脈用系、トラビジルなどの血管拡張剤系、塩酸ニカルジピンなどの循環器官用系、塩酸ラベタロールなどの降圧剤系、クロフィブラートなどの動脈硬化用系で知られる循環器用薬、さらにテガフールなどの代謝拮抗剤系やエストラサイトなどのホルモン剤やスルファメトキサゾールなどのサルファ剤、イソニアジドなどの抗結核剤、ノルフロキサシンなどの合成抗菌剤などの薬剤の投与により引き起こされる肝障害、さらには、生活環境中に存在するビスフェノール、フタル酸エステル、塩化化合物、アルキルフェノール、アルコール類などの環境有害物質によって引き起こされる肝障害に有用である。従って、シイタケ菌糸体抽出物及び任意成分として薬剤的に許容できる担体を含む、薬物による肝障害の治療用及び/又は予防用組成物として使用することができる。
【0015】
投与経路は経口投与が最も好ましいが、静脈内投与、皮下投与などであってもよい。経口投与に適した製剤には、錠剤、カプセル剤、散剤、顆粒剤、溶液剤、シロップ剤などが含まれるが、これに限定されない。
【0016】
薬剤的に許容できる担体には、当業界で公知の適当な賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、着香料、着色剤、溶解補助剤、懸濁剤、コーティング剤などを含むが、これに限定されない。
【0017】
本発明の防御剤の投与量は患者の年齢、体重、症状、投与経路などを考慮して医師、薬剤師、栄養士などにより決定される。本発明の防御剤に含まれるシイタケ菌糸体は食品として使用されてきたものであり、極めて安全であるところから、投与量を厳しく限定する必要はないが、通常シイタケ菌糸体抽出物粉末に換算して1日あたり40mg−6g、好ましくは400mg−1.8gである。さらに、肝障害の原因となる薬剤と併用して投与しても支障はない。
【0018】
本発明の防御剤は、食品の形で提供することもできる。好ましい食品としては顆粒、麺類、キャンディー、ゼリー、クッキーなどが挙げられる。さらに、本発明の防御剤は、飲料の形で提供することもできる。このような食品、飲料にはシイタケ菌糸体抽出物の他に、ビタミン剤、カルシウムなどの無機成分、キトサンなどの食物繊維、大豆抽出物などの蛋白質、レシチンなどの脂質、乳糖などの糖類などを追加してもよい。
【0019】
本発明を以下の実施例によりさらに詳しく説明するが、本発明の範囲はこれに限定されない。本発明の方法を種々変更、修飾して使用することが当業者には可能であり、これらも本発明の範囲に含まれる。
【0020】
【実施例】
実施例1:シイタケ菌糸体抽出物の調製法
バガス90重量部、米糖10重量部からなる固体培地に純水を適度に含ませた後に、シイタケ種菌を接種し、温度および湿度を調節した培養室内に放置し、菌糸体を増殖させた。菌糸体が固体培地に蔓延した後、バガス基材の繊維素を解束し、12メッシュ通過分が24重量%以下となるようにした。この解束された培地1.0kgに、純水3.5Lを加え、40℃に保ちながら精製セルラーゼ2.0gを加え培地含有混合物とした。
【0021】
次いで培地含有混合物を変速付ギヤーポンプにより循環させながら、固体培地にギヤー部分において粉砕およびすりつぶし作用を200分間程度加えバカス繊維の約80重量%が12メッシュ通過分となるようにした。培地含有混合物の粉砕およびすりつぶしは、該混合物の温度を徐々に上昇させながら行った。その後培地含有混合物をさらに加熱して、90℃として30分間放置した。90℃への加熱により、酵素を失活せしめ、かつ殺菌を施した。得られた培地含有混合物を60メッシュろ布を用いてろ過してシイタケ菌糸体抽出物とし、濃縮した後、凍結乾燥粉末を得た。
【0022】
実施例2:初代培養肝細胞を用いるin vitro試験
1)ラット肝細胞の分離及び初代培養
ラット(Wistar、雄、6−8週齢)の肝細胞を分離し、37℃、5%CO2条件下で一晩培養した。
2)肝細胞のCCl4及び被験物質による処理
1)で調製した肝細胞に、CCl4(DMSO溶液:肝障害誘導物質)及び被験物質(シイタケ菌糸体抽出物)を種々の濃度で調整した無血清培地を500μl加え、24時間インキュベートした。
3)GOT活性測定
培養液上清をエッペンドルフチューブに移し、10000rpm、5分間、室温にて遠心した。この上清中のGOT活性をGOT測定試薬(リキテックGOTIFCC:ベーリンガーマンハイム社製)を用い、測定した。被験物質を加えていない培養液上清のGOT活性の平均値を100としたときの各培養液上清のGOT活性の割合を求め、肝障害強度とした。結果を図1に示す。図から明らかなように、シイタケ菌糸体抽出物は、肝障害防御効果が観察された。
【0023】
実施例3:CCl4で誘導したラット肝障害モデルを用いるin vivo試験
シイタケ菌糸体抽出物粉末を20%含む(残余は乳糖)シイタケ菌糸体抽出物顆粒を調製してラットに7日間経口投与し、CCl4誘導の肝障害防御効果を検討した。投与終了後、CCl4を腹腔内投与し、肝障害を引き起こした後、下大静脈から採血し、血清中のGOT活性、GPT活性を測定した。得られた結果を図2に示す。
【0024】
図から明らかなように、シイタケ菌糸体抽出物は、肝障害防御効果が観察された。
【0025】
実施例4:薬剤性肝障害のヒト患者に対する試験
薬剤治療により薬剤性肝障害を発症しているヒト患者2名(いずれも合併症として肺結核を発症している)に、シイタケ菌糸体抽出物顆粒(シイタケ菌糸体抽出物粉末を20%含み、残余は乳糖)6gを4週間にわたり毎日摂取させた。肝障害の原因薬剤は継続して服用させた。肝障害の原因薬剤(エタンブトール、イソニアジド、リファンピシン)は継続して服用させた。4週間後に患者の末梢血からGOT活性、GPT活性を測定した。得られた結果を図3に示す。2例全員のGOT活性、GPT活性が基準値内に低下した。また、副作用は認められなかった。
【0026】
【発明の効果】
本発明のシイタケ菌糸体抽出物を含む薬物による肝障害の防御剤は、薬剤投与により引き起こされる肝障害を防御する効果を有しており、薬剤投与により引き起こされる肝障害の予防、治療に使用できる。本発明の防御剤は、肝障害の原因となる薬剤の投与と併用することができ、また副作用がないことから、安全に使用でき、大きな産業上の利用可能性が期待できる。
【図面の簡単な説明】
【図1】ラット初代培養肝細胞を用いるin vitro試験におけるシイタケ菌糸体抽出物の肝障害防御試験の結果を示すグラフである。
【図2】 CCl4で誘導したラット肝障害モデルを用いるin vivo試験におけるシイタケ菌糸体抽出物の肝障害防御試験の結果を示すグラフである。
【図3】薬剤性肝障害のヒト患者に対してシイタケ菌糸体抽出物を投与したときの血清GOT活性、GPT活性の推移を示すグラフである。
Claims (3)
- シイタケ菌をバガスを含む固体培地上で培養して得られる菌糸体を、前記固体培地を含んだ状態で、水及びセルラーゼ、プロテアーゼ及びグルコシダーゼからなる群から選択される1種以上の酵素の存在下に粉砕、分解して得られるシイタケ菌糸体抽出物を含む、薬物による肝障害の防御剤。
- シイタケ菌糸体抽出物及び任意成分として薬剤的に許容できる担体を含む、薬物による肝障害の治療用及び/又は予防用組成物である請求項1記載の防御剤。
- 経口で投与する請求項1又は2記載の防御剤。
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