JPS6379585A - 新規物質オバリシン - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明はミキソコッカス属の新菌種ミキソコッカス−フ
ラベセンス（Ｍｙｘｏｃｏｃｃｕｓ　ｆｌａｖ＋ｓａｃ
＊ｎｓ　）、この微生物によって生産されるマクロサイ
クリック・ラクタム・ラクトン系の新規物質オノくリシ
ン（１）、（ＩＩ）、（２）及びこれらの製造方法に関
する。

〔従来技術〕

従来、各種の抗生物質が知られているが、その１系列と
して、マクロサイクリック・ラクタム・ラクトン系抗生
物質がある。本抗生物質生産菌としてはミキソコッカス
・キサンタス（Ｍｙｘｏｅｏｅｃｕｓｘｉｎｔｈｕｓ　
）　、ミキンコツカス争ビレセンス（Ｍｙｘｏｃｏｅｅ
ｕｓ　ｖｉｒｅｓｃ＠ｎｍ　）が知られているが、本発
明の微生物は寒天培地中ならびに液体培地中に淡黄色の
菌体外色素を生成する点でこれらと異なる新規微生物で
ある。

また、マクロサイクリック・ラクタム・ラクトン系抗生
物質としては、アンチビオティックＴＡ（ＡｎｔＬｂｌ
ｏｔｉｃ　ＴＡ　、Ｊ、Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｍ　　３
５，７８８（１９８２））、ミキンビレシンＡ、Ｂ、Ｃ
，Ｄ、Ｅ日 （Ｍｙｘｏｖｉｒｅｓｃｌｎ　Ａ、Ｂ＋Ｃ＋ＤｓＬ特公
昭５８−５００６３７）、アンチビオティックＭ−２３
０Ｂ（Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃ　Ｍ−２３０Ｂ　、　Ｊ、
Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｅｓ　３７．１３（１９８４）　）
が知られているが、本物質は前記物質と分子量、化学構
造が異なり新規物質である。

〔発明が解決しようとする問題点〕

従来知られている抗生物質は薬剤耐性菌の出現などの問
題があシ、抗菌スペクトルの改善などを求めて、新しい
抗生物質の出現が望まれている。

また、マクロサイクリック・ラクタム・ラクトン系抗生
物質についてはミキソビレシンＡ１ならびにミキソビレ
シンＢの構造が明らかになっているに過ぎない。他の成
分については構造も明らかでなく、その上生物活性につ
いては純粋に単離された物質でまったく検討されていな
い点で医薬に応用する上で産業上問題がありた。

〔本発明が解決しようとする問題点〕

本発明が解決しようとする問題点は、新規微生物並びに
その微生物によって生産される抗菌作用。

毒性および抗菌スペクトルを改良し九新規マクロサイク
リック・ラクタム・ラクトン系抗生物質、これらの製造
方法およびこれらを有効成分とする新しい抗菌剤を提供
することにある。

本発明を概説すれば、本発明の第１の発明は新規微生物
ミキソコッカス・フラベセンスに関する発明であって、
本微生物は以下に記す性質を有する。

本面は天然界の土壌を採取しフルーティングメゾイーを
作る条件下で培養してフルーティングメゾイーを作らせ
たフルーティングボディーはストークを持たないもので
あった。このフルーティングメゾイーよりｍ類、カシト
ン等を含む培地上でコロニーを作る菌を分離してコロニ
ー分離法により純化した。

この菌は上記培地上でもフルーティングメゾイー様の形
態を示した。このことから本面はＭｙｘｏｂｏｃｔ＠ｒ
ｉａｌｅａのものと判定される。

本面の栄養細胞はダラム染色法では陽性の桿状の菌で培
養後期になるとミクロシストを形成シた栄養細胞の大き
さは幅０．５〜０．９μ、長さ５〜１０μであり、ミク
ロシストの大きさは２．５μ×２．５μのほぼ球形であ
った。本コロニーの色は淡黄色でフルーティングボディ
ー様のものの色は濃いオレンジ色であった。本面は寒天
培地中ならびに液体培地中に淡黄色の菌体外色素を生成
した。

生化学的性質としては本面はセルロースの分解能をもた
ないが細菌、酵素等の微生物を溶解する作用を示した。

以上の形態的、生化学的知見から本面はミクソコツカス
属のものと考えられる。（Ｂｅｒｇｅｙ’ｓＭａｎｕａ
ｌ　ｏｆ　Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｖｅ　Ｂａｃｔｅｒ
ｌｏｌｏｇｙ第８版及び５ｔｕｄｌｅｓ　ｏｎ　ｔｈｅ
　Ｔａｘｏｎｏｍｙ　ｏｆ　ｔｈｅＭｙｘｏｂａｃｔ＠
ｒｉａｌｅａ　、　Ｃａｎａｄｉａｎ　Ｊｏｕｒｎａｌ
　ｏｆＭｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ　（１５巻１４５３頁
〜、１９６９年）に皐拠） 種としてはミクソコツカス・グイレッセンスＴｈａｘｔ
ｓｒ　１８９２＋又ミクソコツカスφキサンタスＢ・・
ｋｅ１９４１．　　に類似点を持つが本分離菌が菌体外
色素を産生ずることからミクソコツカス・キサンタスは
除去される。又重曹は淡黄色の菌体外色素を産生ずるが
ミクソコツカス・ヴイレッセンスは緑色の色素を産生ず
る。

以上の特徴を考えると本菌はミクソコツカス・グイレッ
センスのものではなくて新規な微生物と判断される。

重曹を以上の知見を総合してミキソコッカス・フラベセ
ンスＦＥＲＭ　Ｐ−８９２６（Ｍｙｘｏｃｏａｃｕｓｆ
ｌａｖｅｓｅｅメーｎｏｖＩｐυと命名した。

第２の発明は新規抗生物質オバリシン（Ｉ）に関する。

第３の発明は新規抗生物質オパリシン（ｎ）に関するも
のである。

第４の発明は新規抗生物質オパリシン（Ｉ［Ｄに関する
ものである。

ものである。

オバリシン（Ｉ）　、　（［１並びにオバリシン（２）
を製造する方法は本発明の第１の発明であるミキソコッ
カス属に属しオバリシン（Ｉ）　、　（１０並びに但を
生産する能力を有する微生物を培養し生成蓄積されたオ
バリシン（Ｉ）　、　（Ｉｌｌ並びに（ｌを培養液及び
菌体よシ採取すれば良い。

これら微生物を用いてオパリシン（Ｉ）　、　（Ｉｌｌ
並びに（ＩＩＩを培養液中に生成蓄積せしめるには炭素
源、９檻 素源、無ディオン等を含有する通常の培地を用い常法に
よシ培養すれば良い。炭素源としてはグルコース、フラ
クトース、マルトース、ラフィノース、ラムノース、グ
リセロール、キシロース、ラクトース、シェークロース
、スターチ等の糖類、エタノール、ソルビトール等のア
ルコール、酢酸等の有機酸が使用できる。窒素源として
はアンモニウムイオンのほか、アミノ酸、蛋白質、及び
これらを含有する酵母エキス、カゼイン加水分解物等が
使用できる。培地には必要によシカリイオン。

リン酸イオン、カルシウムイオン、マグネシウムイオン
、銅イオン、亜鉛イオン、マンガンイオン。

鉄イオン等の無機イオンを添加する。

培養は好気的条件下で行うのが良く−４から９の範囲の
適当な−Ｉに調節しつつ培養すればよシ好ましい結果が
得られる。培養温度は２５℃から３８℃の範囲が好まし
い。

オパリシンを単離精製する方法は培養液より水に混和し
ないブタノール、酢酸エチル等の有機溶媒による溶媒抽
出法、培養液より遠心分離にょシ回収した菌体よジメタ
ツール、エタノール、アセトン等の有機溶媒による抽出
法、シリカゲル、ダイヤイオンＨＰ−２０等の吸着クロ
マトグラフィー。

トヨノや−ルＨＷ−４０クロマトグラフィー、マイクロ
ボンダパックＣ１８，リクロンルプＲＰ−８等の逆相分
配クロマトグラフィー等の通常の抗生物質の分離、精製
に使用できる方法が適用できる。

かくして得られたオパリシン（Ｊ）　、　（ＩＤ並びに
（２）は８０％アセトニトリルを展開溶媒としてワット
マンＫＣ，８Ｆ’逆相分配薄局クロマトグラフィーを行
うとＲｆ値０．１８と０．４４並びに０．１６にそれぞ
れ単−紫外部吸収を有するスイットを与える。以下にオ
パリシン（Ｉ）　、　（Ｉｌｌ並びＫ（［０の性質を示
す。

（イ）形　状：オパシリン（Ｉ）無色針状結晶オバシリ
ン（ｍｌ白色粉末 オパシリン（Ｉ［Ｄ白色粉末 （ロ）分子量；オパシリン（１）　６０７　（ＦＡＢＭ
Ｓ法てよった。）第１図に示す。

オパシリン（ＩＤ　５９３（ＦＡＢＭＳ法てよった。）
第２図に示す。

オパシリｙ（ＩＩＤ　６０９ＣＦＡＢＭＳ法Ｋｊッ７’
ｃ。）第３図に示す。

（ハ）紫外線吸収スペクトル ：オパシリン（１）第４図に示す通り。

オパシリン（■）第５図に示す通り。

オパシリン（１！Ｄ第６図に示す通り。

（に）Ｈ−ＮＭＲスペクトル ：オパシリン（１）第７図に示す通シウオバシリン（ｍ
ｌ第８図に示す通り。

オパシリン（ＩＩＤ第９図に示す通り。

（泗１３ｃｍ犯電スペクトル ：オパシリン（１）第１表に示す通シ。

オバシリン（Ｉｔ）第２表に示す通シ。

オバシリン（ｍ第３表に示す通シ。

（へ）溶解性：オパシリン（１）　、　（ｕ）並びに（
２）ともにメ２７−斌招ν′−′。ｆｉ１７．ｌ。。

ホルムに可溶。水、ヘキサンに難溶。

（ト）オパリシン（Ｉｌ　、　（ＩＯ並びに（至）とも
に抗菌活性を有する。

第１表 第　　２　　表 第　　３　　表 第１表、第２表および第３表はオパリシン（Ｉ）。

（Ｉｌｌおよびオパリシン（２）の１３０−ＮＭＲスペ
クトル（重クロロホルム中）である。Ｓ（−重線）、ｄ
（二重線）、ｔ（三重線）、ｑ（四重線）はオフレゾナ
ンスデカップリング法における各シグナルの多重度を示
している。

実施例１ （１）オパリシン（Ｉｌ　、　（ｕ）およびオパリシン
（Ｉ［Ｄの製造例第ｘ表に示した培地人の２００ｍを５
００ｒＩＬｌ容肩付フラスコに入れ殺菌した。ミキソコ
ッカス・フラベセンスＦＥＲＭＰ−８９２６（ＡＪ　１
２２９８　）を接種し２７℃で５日間培養し、−犬種母
液を得た。一方第メ表の培地０．９１を５ノ容フラスコ
に入れ殺菌した。これに−犬種母液０．１１を接種し２
７℃で５日間培養し二次種母液を得た。次いで第４表に
示した培地のＩＯＪを５０１容発酵槽に入れ殺菌した。

これに二次種母液１１を接種し２７℃で４８時間培養し
、三次種母液を得た。

第　　４　　表 培地人 ０．１％　ラフィノース ０、１　％　　シェークロス ０．１％　ガラクトース ０．５％　可溶性澱粉 ０、２５　％　　カシトン（ディフコ社製品、カゼイン
分解物） ０、１　％　　酵母エキス ０．０５％　ＭｇＳＯ４・７Ｈ２０ ０，０２５％　　Ｋ２ＨＰＯ４ −７，４ 第１表に示した培地Ａ１００／を３００１！容発酵槽に
入れ殺菌した。これに三次種母液１０１を接種し、２７
℃、４８時間培養し第四次種母液を得た。次いで培地Ａ
１に！！を１ｋｌ容発酵槽に入れ殺菌した。これに四次
種母液１００１を加え２７℃で４８時間培養した。得ら
れた培養液を遠心分離して２．６　ｋｇの菌体を得た。

得られた菌体のうち２．　Ｏｌ＃に対し、メタノール２
１ノを加え攪拌しながら室温で２時間抽出した。

吸引濾過により、抽出液と菌体を分離した後菌体にメタ
ノール１６ノを加え再び室温で１時間抽出し濾過した。

得られたメタノール抽出液を合わせと これに水１５１を加えた後、ダイヤイオンｖ−２０カラ
ム（カラム体積！／）に通し吸着させた。カラムを６７
％メタノール１０１，８０％メタノール−５ノで順次洗
浄した後１００チメタノールで浴出した。メタノール溶
出液を１００１ｎｌに減圧濃縮した後、水を１１加え、
ジクロロメタン４１で２回、酢酸エチル２１で２回溶媒
抽出した。有機溶媒層をすべて合せ約１７に減圧濃縮し
、不溶物を遠心分離にて除去した後、無水硫酸す）　Ｉ
Ｊウムによυ乾燥した。これを減圧濃縮乾固後、ジクロ
ロメタン：メタノール（１５：１）を展開溶媒としてシ
リカダルカラムクロマトグラフィー（カラム体積１りを
行った。活性画分を減圧濃縮乾固後、ローバーカラムリ
クロプレップ５ｔｓＯ（サイズＣ）によるカラムクロマ
トグラフィー（展開溶媒：ジクｏｏメタン：メタノール
（３０：１））を行った。活性画分を減圧濃縮乾固後、
逆相シリカゲルＬＲＰ　−１を用いた逆相分配カラムク
ロマトグラフィー（カラム体積１！、展開溶媒ニアセト
ニトリル−水系）を行りた。展開溶媒中のアセトニトリ
ル濃度を５５％、６０％、７０チ、８０％と順次上げて
溶出したところ、オパリシン（ＩＩ）は７０チアセトニ
トリル区分に、オパリシン（Ｉ）　（Ｉ［）は８０％ア
セトニトリル区分に各々紫外吸収（２４０ｎｍ）を有す
る鋭いピークとして溶出した。これらの両分’を各々ト
ヨパールＨＷ−４０Ｓカラム（カラム体積５０ｄ）によ
るダル濾過クロマトグラフィー（展開溶媒８０％メタノ
ール）に付した後、減圧濃縮乾固してｏ、　ｓ　Ｔｎ９
のオバクノン（ｎ）と１２．０■のオバクノン（Ｉ）　
３０　ｍ９のオバクノン（至）を得た。オバクノン＋１
１は、さらに水−エタノールの系で再結を行ない７．５
■のオバクノン（りの結晶を得た。オバクノン（１）　
、　（ｎ）およびオバクノン（２）は８０％アセトニト
リルを展開溶媒としてワットマンＫＣ，８Ｆ逆相分配薄
層クロマトグラフィーを行うとＲｆ値各々０．１８．０
．４４および０．１６に単一の紫外吸収を有するスポッ
トを与えた。

実施例２ オバクノン（１）　、　（ｎ）　、　（Ｉ［Ｄの各種微
生物の最少生育阻止濃度（ＭＩＣ，μＶＬＩ　）は第５
表の通シであった。

第５表 第１図、第２図および第３図は、オバクノン（Ｉ）。

（Ｉ［）およびオバクノン（［０のＦＡＢＭＳスペクト
ル（グリセリンマトリックス）である。

第４図、第５図および第６図は、オバクノン（１）。

（ｍｌおよびオバクノン面の紫外吸収スペクトル（メタ
ノール中）である。

第７図、第８図およびＭ９図はオバクノン（Ｉ）。

＋ＩＯおよびオバクノン面の’　Ｈ−ＮＭＲスペクトル
（重クロロホルム中）である。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、新菌種ミキソコッカス・フラベセンス （Ｍｙｘｏｃｏｃｃｕａ　ｆｌａｖｅｓｃｅｎｓ）２、
   新規物質オバリシン（ I ） ▲数式、化学式、表等があります▼ ３、新規物質オバリシン（II） ▲数式、化学式、表等があります▼ ４、新規物質オバリシン（III） ▲数式、化学式、表等があります▼ ５、ミキソコッカス属に属しオバリシン（ I ）、オバ
   リシン（II）又はオバリシン（III）生産能を有する微
   生物を培地中で培養し、培地中又は菌体中にオバリシン
   （ I ）、オバリシン（II）又はオバリシン（III）を生
   成、蓄積せしめ、オバリシン（ I ）、オバリシン（II
   ）又はオバリシン（III）を採取することを特徴とする
   オバリシン（ I ）、オバリシン（II）又はオバリシン
   （III）の製造方法。