JPS6016593A - 新規抗生物質ｓｓ９８１６ｂ - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は新規な抗生物質５ｓ９８１６Ｂ及びその製造法
に関する。

本発明者らは天然の土壌より敬多くの微生物を単離し、
その生産物について種々研究を行なった結果、千葉県鹿
野山の土壌から分離した菌株がダラム陽性菌及び真菌に
対し曖れた抗菌力を有し、かつ抗腫瘍作用を有する新規
な抗生物質５ｓ９８１６８に生産することを見出し本発
明を完成した。

すなわち、本発明は新規な抗生物質８８９８１６Ｂ及び
その製造法を提供するものである。

本発明の抗生物質５Ｂ９８１６８に産生ずる８９８１６
株は次のような菌学的性質を有する。

（１）形態 気菌糸の分枝は単純分枝で車軸分枝は認められない。気
菌糸の先端部はらせん状である、基生菌糸は通常分断し
ない。胞子のう及び鞭毛胞子は認められない。電子顕微
鏡観察によると、胞子の表面は平滑であり、形は円筒形
である。胞子の大きさＩ／′ｉ０．７〜０．９　Ｘ　Ｏ
，８〜１．５μｍであり、通′ホ１０個以上が連鎖して
いる。

（ｚ　＠種培地における生育状態 ８９８１６株の各種培地上での生育状態は次衣のとおり
である。観察は２７℃、１４日培養後に行なった。

色の記載には、日本色研事業（株）発行の「色名小辞典
」を用いその系統色名で嚢示した。

（３）　生理的性質 ■　生育温度範囲（イースト・スターチ寒天培地、１４
日培養） 生育可能温度　８〜３３℃ 生育至適温度　２４〜３０℃ ■　ゼラチンの液化　陽性 ■　スターチの加水分解　陽性 ■　脱脂乳の凝固　陽性 ■　脱脂乳のペプトン化　陽性 ■　メラニン様色素の生成　陰性 ■　硝酸塩の還元　陰性 ■　セルロースの分解　陰性 ■　耐塩性；７％Ｎａ０ｊｉ添加培地で生育するが１０
％では生育し々い。

１４７　炭素源の利用性（プリドハム・ゴドリープ寒天
培地、２７℃、１４日 培養） ■　Ｌ−アラヒ゛゛ノース　＋ ■　Ｄ−キシロース　＋ ■　Ｄ−グルコース　＋ ■　Ｄ−フラクトース　４− ■　シュクロース　＋ ■　イノシトール　− ■　Ｌ−ラムノース　＋ ■　ラフィノース　＋ ■　Ｄ−マンニット　− ４Φ　ガラクトース　＋ ０　サリシン　十 〇　ラクトース　＋ ＯＤ−マンノース　＋ （注）＋は利用する、−は利用しない。

（０細胞壁組成 細胞壁組成成分中のジアミノピメリン酸を分析した結果
■・Ｌ型でめった。

以上の菌学的性状から、本８９８１６株はストレプトミ
セス鴎に属すると判断される。更に該株は気菌糸の先端
はらせん形で１０個以上の胞子が連鎖し、胞子表面は平
滑でろる；気菌糸の色はグレイカラーシリーズないしは
グリーンカラーシリーズで裏面の色は無色〜う丁い黄〜
黄みのブラウン−灰みのオリーブである；可溶性色素は
うすい黄〜ブラウンみのオリーブ〜あさい赤みのブラウ
ン〜にぶい赤である；裏面の色及び可溶性色素はｐＨ指
示色でない及びメラニン様色素を生成しない等の特徴を
有する。

本発明者らは、以上の菌学的性状を有する８９８１６株
をストレプｌ、ミセス・エスピー８９８１６　（Ｓｔｒ
ｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　’ｏｐ、８９８１６　）と命名し
て、工業技術院微生物工桑技術研究所に微工研菌寄第６
８８６号（Ｆ口ｉＲＭ　Ｐ−６８８６）として寄託した
。

本発明の抗生物質５１３９８１６Ｂは上記菌株を栄養源
含有培地に接種し、好気的に培養することにｌり製造さ
れる。抗生物質８８９８１６Ｂ生産株としては上記８９
８１６株はもとより、その人工変異株あるいは自然変異
株であっても抗生物質８８９８１６Ｂを生産する能力を
有するものであれば、すべて本発明に使用することがで
きる。上記８９８１６株の人工変異株は、他の放線菌の
場合同様、例えば紫外線、コバルト６０照射、化学変異
誘起剤等により容易に得ることができる。

つぎに１抗生物質５ｓ９ｓ１６Ｂの製造における菌株の
培養について説明する。すなわち、ストレプトミセス桟
に搗する抗生物質 ８８９８１６Ｂ生産菌株の培養には通常の放線菌の培養
法が用いられる。

栄！培地としては、資化しうる炭素源、窒素源、無機物
などを適当に含有する限り、合成培地、半合成培地ある
いは天然培地のいずれでも使用可能でるる。

炭素源としては、例えば、グルコース、フラクトース、
シュクロース、アラビノース、澱粉、グリセリン、デキ
ストリン、糖蛋等が単独または組合せて用いられる。さ
らに菌の資化性によっては炭化水素、アルコール類、有
機酸等も用い得る。窒素源としては、無機もしくは有機
窒素化合物、例えば増化アンモニウム、硫酸アンモニウ
ム、硝醪アンモニウム、尿素、硝酸ソーダ、グルタミン
酸ソーダなど、または天然物、例えば大豆抽出物、大豆
粉、酵母エキス、乾燥酵母、綿実粕、ベジタブル・プロ
ティン、ノイトン等が単独または組合せて用いられる。

無機物としては例えば炭酸カルシウム、塩化ナトリウム
、硫酸銅、塩化マンガン、硫酸亜鉛、塩化コバルト等が
単独または組合せて用いられる。その他８９８１６株の
発育を助け５Ｓ９８１６Ｂの生産を促進する物質あるい
はシリコン油又はアデカノール（商品名）等の一般的消
泡剤を適宜培地に添加することもできる。

培養法としては一般の抗生物質の生産に用いられる方法
が採用されるが、液体培養法、％に振盪培養法が最も適
している。培養は好気的条件下で行われ、培養に適当な
温度は２４〜３０℃であるが、一般に２７℃付近で培養
するのが好ましい。抗生物質８８９８１６Ｂは振盪培養
、深部攪拌培養の何れの場合もその生産量Ｉｉ５〜８日
間の培養で最高に達する。

培養物中の抗生物質８１３９８１６Ｂの蓄積量が最高に
なった時に培養を停止し、培養液中から目的物質を単離
・精製する。培養液中からの抗生物質ＥＩ８９８１６Ｂ
の単離は、後記実施例に示す如く、本抗生物質の理化学
的性状を考慮して種々の方法を単独で、あるいは適宜組
合せることによって行なわれる。

すなわち、ｆＪｔ生物質ｓ　ｓ　９８．１６　Ｂは通常
菌体及び培養液中に存在するので、培養物を遠心分１’
Ｊｌ　％又は濾過等によって菌体ケ分離し、その菌体及
び培養Ｆ液から通常の分離手段、例えば沈澱法、溶媒抽
出法、イオン父換樹脂法、ゲル濾過法、吸着又は分配カ
ラムクロマト法、透析法などを単独で、あるいは適宜組
合せて抗生物質８８９８１６Ｂを分離精製する。

好ましい分離精製法の例としては、次の方法が挙けられ
る。醗酵を終了した培養物に希塩酸を加え、ｐＩ（２，
０とし、遠心分離により菌体を含めた沈澱物を得る。こ
の沈澱物にｉ４尚な溶媒例えばアセトンを加えよく混合
して抽出流過する。次いでν過残渣をり四ロホルムで抽
出し、枦液含合わせ、この抽出液に適当量の水を加え分
配し下層をとる。この下層を減圧留去し、残渣ｆｎ−ヘ
キサンで洗滌したのちシリカゲルカラムクロマトグラフ
ィーに付す。活性画分を集め、減圧濃縮後、残渣を適当
な溶媒例えばクロロホルム−酢酸混液で再結晶すると８
８９８１６Ｂの紫色針状晶が得られる。

以上の如くして得られた８８９８１６Ｂは次のような理
化学的性質及び生物学的性質を有する。

（１）理化学的性質 ■　元素分析 ｃ　ＨＮ 実験値（吻　６７．１７　４．１８　２．５４理論値（
→　６７．２７　４．１９　２．５３■　分子分 マススペクトル（町７０ｅＶ）による実測値５３ 分子式Ｃ□Ｈ，，Ｎｏ、としての計算値５５３．５２ ■融点 ３００℃以上 ■　紫外腺吸収スペクトル 第１図 ３３０ｎｆｆｌ（８ｈ）３４９ｎｍ（２３２）３７３ｎ
ｍ（８ｈ）３９０ｎｍ（３１２）　４１０ｎｍ（θｈ）
５１４　（ｓ　ｈ　）　５５６　ｎｍ（３２４）０ｍ ５９６ｎｒｎ（３５０） ■　赤外線吸収スペクトル（ＫＢｒ法）第２図 ■　’Ｈ−ＮＭＲスペクトル（９０ＭＨ２）重クロロホ
ルム／重トリフルオロ酢ｍ （１：１）混合溶液中ＴＭＳ　’ｉ基準物質として測定
した 第３図 ■　クロロホルム、テトラヒドロフラン、ジオキサン、
ピリジン、ジメチルスルホキシド、クロロホルム−酢酸
混液に可溶。ｎ−ヘキサン、水に難溶。

［有］　塩基性、酸性、中性の区別 酸性 ■　物質の色及び性状 紫色針状晶（クロロホルム−酢酸混液より再結晶） ［相］　薄層クロマトグラフィー 担体ニジリカゲルプレー１−ＩＦｔｌ１４（メルク社製
） ０　分子式 ％式％ 抗生物質５Ｓ９８１６Ｂの８ｍ微生物に対する最小発育
阻止濃度（ｙｘｃ　）を第１表に示す。

以下余白 試験菌培養条件：イノキュラムサイズ １０”ｃ　ｅ　１１　ｓ／ｍｌバクテリアの場合はミュ
ーラー・ヒントン・アガー（Ｄｉｆｃｏ　）で３７℃に
て１８〜２０時間培養。

酵母・カビの場合はグルコース・ペプトン培地で２８℃
にて１２０時間培養。

（２）抗腫瘍作用 抗生物質Ｂ５９８１６Ｂのマウス白血病Ｐ−３８８およ
びエールリッヒ・カルシノーマ（ｍｈｒｌｉｃｈ　）に
対する治療効果全下記方法により試験した。結果は第２
表に示す。なお表中の延命効果は無処理群の生存日数（
Ｃ）に対する治療群の生存日数（Ｔ＞の比を百分率を以
って表わした。

実験方法 ｉ）　Ｐ−３８８二１０’個（７）Ｐ−３８８１１’ｌ
ＴＩ胞を０ＤＦ（♂２日本チャールズリバー）の腹腔内
に移植し、２４時間後より抗生物％ｓ日９８１６Ｂを１
日１回計１ｏ回腹腔内に投与した。

ｉｉ）　Ｂｊｈｒｌｉｃｈ　： ５　Ｘ　１０”個の腫瘍細胞’ｉ　ｉＯＲマヮス（♀。

日本フレア）の腹腔内に移植し、２４時間後より抗生物
質５Ｓ９８１６Ｂｋ１日１回計１０回腹腔内に投与した
。

第２表 以上述べた諸性質を本発明化合物に類似する既知抗生物
質のそれと比較したが該当する物質はなく　８８９８１
６Ｂは新規な抗生物質と判断された。

これらの結果から明らかな機知抗生物質８Ｅ＋９８１６
はクラム陽性細菌及び真菌に強い抗菌力を有している。

またマワス白血病ｐ−３８８およびエールリッヒ・カル
シノーマ腹水＠ｉＫ対しても顕著な治療効果を示してい
る。これらの抗菌活性および抗腫瘍活性からみて抗生物
質８８９８１６Ｂは医療用の抗生物質として有用な物質
である。

次に実施例ケ挙げて本発明會説明する、。

実施例１゜ ８Ｂ９８１６Ｂの生産菌ストレグトミセス昏エスヒー−
８９８１６（微工研菌寄第６８８６号）を可溶性澱粉４
．０％、グルコース４゜０チ、ソイトン１．０％、酵母
エキス１．０％、塩化ナトリウム０．２５％、炭酸カル
シウム０．３２％、硫酸銅０．０００５％、塩化マンガ
ン０．０００５％、硫酸鉛（１，００５％（ｐＨ７，０
）の液体培地に接種し、２７℃で２日間振器培養して種
培養液を調製する。同じ培地組成からなる液体培地１２
０ｍｌ’ｃ　５００ｍｅ容坂ロフラスコに仕込み、これ
に前記の種培養液９．５　ｍｌを接種し、往復式振盪培
養機にて振巾９６ｎ回転数１１０　ｒ、ｐ、ｍ＋培養温
度２７℃の条件下で培養し、その４日目に２％塩化コバ
ルト水溶液’ｉ　ｉ、　２　ｒｔｔｔづつ各坂ロフラス
コに加え、更に３日間培養する。

培養終了後、培養液１０Ａ’に希塩酸を加え、ｐＨ２，
０とし、遠心分離により菌体を含めた沈澱物を得た。こ
の沈澱物にア七トン１１を加え、よく攪拌して抽出して
４ｈｔｐＦ液残液とに分けた。Ｐ液残渣にクロロホルム
１１を加え、よく攪拌して抽出し、濾過し、ｐ液を得る
。この操作を数回繰り返し、ｐ液を合わせた。この抽出
液罠水２！を加えて分配し、下層を分取した。この下層
を減圧下濃縮乾固し、少量のｎ−ヘキサノで洗浄し乾燥
すると、赤紫色粉末６００１１ｇが得られた。上記赤紫
色粉末ｔ−１％酢酸含有クロロホルムＩｃ溶解し、めら
かしめ１％酢酸含有クりロホルム゛で充填したキーゼル
ゲル６０（メルク社＃）ｌｏｏｔＯカラムに通導し、同
溶媒で溶出する。抗生物質８８９８１６Ｂの含まｎる画
分を集め減圧濃縮した。濃縮物を冷所に放置し、析出し
た結晶’ｔＦ取した。（１２０ＦＩ？）これをクロロホ
ルム−酢酸混液により再結晶し、５ｓ９８１６Ｂの紫色
針状晶９　（ｌ　ＴＢＧを得た。

【図面の簡単な説明】

第１図は抗生物質５ｓ９Ｂ１６Ｂの紫外線吸収スペクト
ル（テトラヒドロフラン溶液中）全示す。第２図は抗生
物質５Ｓ９８１６Ｂの赤外線吸収スペクトル（ＫＢｒ錠
剤）を示す。第３図は抗生物質５Ｓ９８１６Ｂの”Ｈ−
ＮＭＲスペクトル〔重クロロホルム／車トリフルオロ酢
酸（１：　１）混合溶液中〕を示す。 以上 千Ｓ売　？１１ｉ　正　；（：（自発）１　事件の表示 昭和５８年　特　許　１，９ｒｉ第１２４１１１　号２
　発明の名称 新規抗生物質８８９８１６Ｂ及びその７造法３　補正を
する者 事件との関係　出１９ｆ１人 作　ｉ’ｌｉ　東京都中央区日本橋浜町２丁目１２番４
号名称　ニスニス製薬株式会社 氏　名　（８６３２）弁理士　、Ｊ゛ｍｆ　（言　大ｌ
ニー゛、・−１，；６、補正の対象 ＥＪＩＪ細書の「発明の詳細な説明」の欄７、　補正の
内容 （１）　明釉ｊ書中、第１５頁、第１５行、「糖蛋」と
あるを、 「糖蜜」と訂正する。 （２）同、第２５頁、第２行、 ｒ　１０”　０８１１８７ｍＡ　Ｊとあるを、ｒ　１０
＠ｃｅｌｌｓ／ｍ６　ＪとＨＪ正スル。 Ｃ３）　同、第２６頁、第１行、 「１０８個」とあるを、 「１０６個ｊと訂正する。 （４）同、同、第６行 ｒ　５Ｘ　１０”（ＩＬＪ　ｕｌ’＆：。 ｒ５Ｘ１ｇｓ個」と訂正する。 （５）　同、第２７頁、第５行、 ｒｓｓ９８１６　Ｊとちるを、 ｒ８８９８１６Ｂ　Ｊと訂正する。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １　下記の理化学的性質を有する新規抗生物質５ｓ９８
   １６Ｂ ■　元素分析 ＣＨＮ 実験値（％）　６７．１７　４．１８　２．５４理論値
   （％）　６７．２７　４．１９　２．５３０　分子量 マススペクトル（■エフｏｅｖ）による実測値５３ 分子式　ＣｊｌＨ１ａＮＯ６としての計算値５５３．５
   ２ ■融点 ３００℃以上 ■　紫外線吸収スペクトル 第１図 ＴＨＦ　１％ λ　（招□ｃｍ）２５９．。（４９２）ａｘ ３３０ｎｍ（ＩＩＩｂ）３４９ｎｍ（２３２）３７３ｎ
   ｍ（８ｈ）３９０ｎｍ（３１２）４１０□（日ｈ）５１
   ４゜（８ｈ） ５５６　（３２４）　５９６□（３５０）９ｍ ■　赤外線吸収スペクトル（ＫＢｒ法）第２図 ■　”Ｈ−ＮＭＲスペクトル（９０ＭＨｚ）重クロロホ
   ルム／重トリフルオロ酢酸 （１：１）混合溶液中ＴＭＳ全基準物質として測定した
   。 第３図 の　溶剤に対する溶解性 クロロホルム、テトラヒドロンラン、ジオキサン、ピリ
   ジン、ジメチルスルホキシド、クロ四ホルムー酢酸混液
   に可溶。ｎ−ヘキサン、水に離溶。 ■　塩基性、酸性、中性の区別 酸性 ■　物質の色及び性状 紫色針状晶（クロロホルム−酢酸混液より再結晶） ［相］　薄層クロマトグラフィー 担体ニジリカゲルプレートＦ□４（メルク社製） ０　分子式 ％式％ ２　ストレプトミセス机に恍する抗生物質８８９８１６
   Ｂ生産菌を培養し、その培養物から下記の理化学的性質
   、 ■　元素分析 ｃ　Ｈ，Ｎ 実験値（均　６７．１７　４．１８　２．５４理論値（
   ％）　６７．２７　４．１９　２．５３■　分子量 マススペクトル（［ｌｉｌ　７ＱｅＶ　）による実測鎖
   ５３ 分子式Ｃ□Ｈ，，Ｎｏ。とじての計算値５５３．５２ ■融点 ３００℃以上 ■　紫外線吸収スペクトル 第１図 ３３０ｎｍ（ｓｈ）３４９ｎｍ（２３２）３７３　（ｔ
   ｉ＋ｂ）３９０ｎｒｎ（３１２）９ｍ ４１０ｎｍ（６ｈ）　５１４ｎｍ（日ｈ）５５６ｎｍ（
   ３２４）　５９６ｎｒｎ（３５０）■　赤外線吸収スペ
   クトル（ＫＢｒ法）第２図 ■　”Ｈ−ＮＭＲ７，ベクトル（９０ＭＨｚ）重クロロ
   ホルム／重トリフルオロ酢酸 （１：１）混合溶液中ＴＭＳを基準物質とて測定した。 第３図 ■　溶剤に対する溶解性 クロロホルム、テトラヒドロフラン、ジオキサン、ピリ
   ジン、ジメチルスルホキシド。 クロロホルム−酢酸混液に可溶。ｎ−ヘキサン、水に離
   溶。 ■　塩基性、酸性、中性の区別 酸性 ■　物質の色及び性状 紫色針状晶（クロロボルム−酢酸混液より再結晶） ［相］　薄層クロマトグラフィー 担体ニジリカゲルプレー）Ｆｚ＊＋（メルク社製） ■　分子式 ％式％ を有する抗生物質５Ｓ９８１６Ｂｙ採取することを特徴
   とする抗生物質８８９８１６Ｂの製造法。 ３　５ｓ９８１６Ｂ物質生産菌がストレプトミセス・エ
   スピー８９８１６株である特許請求の範囲第２項記載の
   製造法。