JPS60102190A - 新規抗生物質ｓｓ９８１６ｅ - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は新規な抗生物質５Ｓ９８１６Ｅ及びその製造法
に関する。

本発明者らは天然の土壌より数多くの微生物？単離し、
その生産物について種々病究を行なった結果、千葉県鹿
野山の土壌から分離した菌株が抗腫瘍作用を有する新規
な抗生物質５Ｓ９８１６Ｅ　’ｆｆｉ生産すること全見
出し本発明を完成した。

すなわち、本発明は新規な抗生物質５Ｓ９８１６Ｅ〕び
その製造法？提供するものである。

本発明の抗生物質５Ｓ９８１６　Ｅ　ｋ産生する８　９
８１６云は次のような菌学的性質に！する。

）形態 気菌糸の分枝は単純分枝で車軸分枝は認められない。気
菌糸の先端部はらせん状である。基生菌糸は通常分断し
ない。胞子のう及び鞭毛胞子は認められない。電子顕微
鏡観察によると、胞子の表面は平滑であり、形は円筒形
である。

胞子の大きさは０．７〜０．９　Ｘ　Ｏ，８〜１．５μ
ｎｔであり、通常１０個以上が連鎖している。

（２）　各種培地における生育状態 ８９８１６株の各種培地上での生育状態は次表のとおり
である。観察は２７℃、１４１ｄ培養後に行なった。

色の記載には、日本色新事業ｅ：４）発行の「色名小辞
典」を用いその系統色名で表示した。

以下余白 （３）生理的性質 ■　生育温度範囲（イースト拳スターチ寒天培地、１４
日培養） 生育可能温度　８〜３３℃ 生育至適温度　２４〜３０℃ ■　ゼラチンの液化　陽性 ■　スターチの加水分解　陽性 ■　脱脂乳の凝固　陽性 ■　脱脂乳のペプトン化　陽性 ■　メラニン様色素の生成　陰性 ■　硝酸塩の環元　陰性 ■　セルロースの分解　陰性 ■　剛塩性：７チＮａＣｔ添加培地で生育するが１０％
では生育しない。

（４）炭素源の利用性（ブリトノ・ム・ゴドリープ゛寒
天培地、２７℃、１４日培 養） ■　Ｌ−アラビノース　士 ■　Ｄ−キシロース　＋ ■　Ｄ−グルコース　＋ ■　Ｄ−フラクトース　＋ ■　シュクロース　＋ ■　イノシトール　− の　Ｌ−ラムノース　＋ ■　ラフィノース　＋ ■　Ｄ−マンニット　− Ｏガラクトース　＋ ０　サリシン　＋ ＠　ラクトース　＋ ＯＤ−マンノース　＋ （注）＋は利用する、−は利用しない。

（５）細胞壁組成 細胞壁組成成分中のジアミノピメリン酸を分析した結果
ＬＬ型であった。

以上の菌学的性状から、本８９８１６株はストレプトミ
セス属に属すると判断される。更に該株は気菌糸の先端
はらせん形で１０個以上の胞子が連鎖し、胞子表面は平
滑である：気菌子の色はグレイカラーシリーズないしは
グリーンカラーシリーズで裏面の色は無色〜うすい黄〜
黄みのブラウン−灰みのオリーブである：可溶性色素は
うすい黄〜ブラウンみのオリーブ〜あさい赤みのブラウ
ン〜にぶい赤である：裏面の色及び可溶性色素はｐｉｔ
指示色でない及びメラニン様色素を生成しない等の特徴
を有する。

本発明者らは、以上の菌学的性状金有する８９８１６株
をストレプトミセス−エスピー８９８１６（Ｓｔｒｅｐ
ｔｏｍｙｃｅｓ　８ｐ、　Ｓ　９８１６　）と命名して
＼工業技術院微生物工業技術研究所に微工研閑′Ｎ第６
８８６号（Ｆ’ＥＲＭ　Ｐ−６８８６）として寄ｉｉｅ
　した。

本発明の抗生物質８８９８１６Ｅは上記菌株を栄養源含
有培地に接種し、好気的に培養することにより製造され
る。抗生物質Ｓ　Ｓ　９８１６　Ｅ生産株としては上記
８９８１６株はもとより、その人工変異株あるいは自然
変異株であっても抗生物質５Ｓ９８１６Ｅｅ生産する能
力を有するものであれば、すべて本発明に使用すること
ができる。上記８９８１６株の人工変異株は、他の放＃
Ｊ！閑の場合同様、例えば紫外線、コバルト６０照射、
化学変異誘起剤等によｆ）容易に得ることができる。

つぎに、抗生物質ＳＳ９８１６Ｅの製造における菌株の
培養について説明する。すなわち、ストレプトミセス属
に属する抗生物質５Ｓ９８１６に生産菌株の培養には通
常の放線菌の培養法が用いられる。

栄養培地としては、資化しうる炭素源、窒素源、無機物
などを適当に含有する限り、合成培地、半合成培地ある
いは天然培地のいずれでも使用可能である。

炭素源としては、例えば、グルコース、フラクトース、
シュクロース、アラビノース、澱粉、グリセリン、デキ
ストリン、糖に等が単独捷たは組合せて用いられる。さ
らに菌の資化性によっては炭化水素、アルコール類、有
機酸等も用い得る。窒素源としては、無機もしくは有機
窒素化合物、゛例えば塩化アンモニウム、硫酸アンモニ
ウム、硝酸アンモニウム、尿素、硝酸ソーダ、グルタミ
ン酸ソーダなど、または天然物、例えば大豆抽出物、大
豆粉、酵母エキス、乾燥酵母、綿実粕、ベジタブル・プ
ロティン、ソイトン等が単独寸たは組合せて用いられる
。無機物としては例えば炭酸カルシウム、塩化ナトリウ
ム、硫酸銅、塩化マンガン、（ｉｉＥ酸亜鉛亜鉛化コバ
ルト等が単独または組合せて用いられる。

その他８９８１６株の発育を助け５８９８１６Ｅの生産
を促進する物質あるいはシリコン油又はアデカノール（
商品名）等の一般的消泡剤を適宜培地に添加することも
できる。

培養法としては一般の抗生物質の生ｐ′ｒに用いられる
方法が採用されるが、液体培養法、特に振盪培養法が最
も適している。培養１ｌ−ａｆ気的条件下で行われ、培
養に適当な温度は２４〜３０℃であるが、一般に２７℃
付近で培養するのが好ましい。抗生物質５Ｓ９８１６Ｅ
ｔＪ、振盪培養、深部攪拌培養の何れの場合もその生産
ｉ１ｉ、は５〜８日間の培養で最高に達する。培養物中
の抗生物質５Ｓ９８１６Ｅの蓄積量が最高になつ７Ｅ時
に培養を停止し、培養液中から目的物質を単離・精製す
る。培養液中からの抗生物質５Ｓ９８１６Ｅの単離は、
後記実施例に示す如く、本抗生物質の理化学的性状を考
慮して種々の方法を単独で、あるいは適宜組合せること
によって行なわれる。

すなわち、抗生物質５Ｓ９８１６Ｅは通常菌体及び培養
液中に存在するので、培養物を遠心分離、又は濾過等に
よって菌体を分離【７、その菌体及び培養ｔ５液から通
常の分離手段、例えば沈澱法、溶媒抽出法、イオン交換
樹脂法、ゲル１過法、吸着又は分配カラムクロマト法、
透析法など全単独で、あるいは適宜組合せて抗生物質Ｓ
　Ｓ　９８１６Ｅを分離精製する。

好ましい分離精製法の例としては、仄の方法が挙げられ
る。醗酵を終了し几培養物Ｖこ希塩酸を加え、ｐＨ２，
０とし、遠心分離により１貞体を営めた沈澱物金得る。

この沈澱物に適当な溶媒例えばアセトンを加えよく混合
して抽出ンｊＪ過する。

次いで１４過残壱をクロロホルムで佃出し、ｔｊｔ（Ｉ
Ｉ。

を合わせ、この抽出液に適当Ｍの水葡加え分配し下層を
とる。この下Ｊｆ４を減圧留去し、残７に、　’ｆｃｎ
−ヘキサンで洗滌したのちシリカゲルカラムクロマトグ
ラフィーに付す。次いで、例えば酢酸−クロロホルム−
メチルアルコール混液で溶出して活性画分を集め、減圧
濃縮後、９３．渣をセファデックスＬＨ２０カラムクロ
マトグラフィーに付す。活性画分を集め、減圧濃縮後、
残治る０ 以上の如くして得られた５Ｓ９８１６には次のような理
化学的性質及び生物学的性質を有する。

（１）　理化学的性質 ０）　元素分析 ＣＨＮ 実験値（％）　６４．９５　３，７６　２．４８理論値
（％）　６４．８７　３．８１　２．５２■　分子量 ５５５．５０ ■融点 ３００℃以上 ■　紫外線吸収スペクトル 第１図 λ：Ｌｆ　＃７Ａ−″−”（ＥＰ）　：　２３２　ｎｍ
（６４０）、ａ　ｘ ２６３ｎｍ（８００）、３０４ｎｍ（４５８）、３１９
ｎｍ（４５０）、３３３ｎｍ（４０３）、３５９ｎｍ（
４０２）、３７６ｎｍ（４７７）、３９４ｎｍ（４８０
）、５０８　ｎｍ（１６０） ■　赤外線吸収スペクトル（ＫＢｒ法）第２図 ■　’Ｈ−ＮＭＲスペクトル（９０ＭＨ７’）重クロロ
ホルム／ｆ３．トリフルオロｆ！ｉｌ：１ｉｔ（１０：
１）混合溶液中ＴＭＳ全基準物質として測定した。

第３図 ■　クロロホルム、テトラヒドロフラン、ジオキサン、
アセトン、ジメチルスルホキシド、クロロホルム−酢酸
混液、クロロホルム−メチルアルコール混液に可溶。ｎ
−ヘキサン、水に難溶。

■　塩基性、酸性、中性の区別 酸性 ■　物質の色及び性状 赤紫色針状晶（クロロホルム−酢酸混液より再結晶） ０　薄層クロマトグラフィー 担体ニジリカゲルプレートＦｚｓ４（メルク社製）■　
分子式 ％式％ 抗生物質５ｓ９ｓｉ６Ｅのエールリッヒ・カルシノーマ
（Ｅｈｒｌｉｃｈ　）に対する治療効果を下記方法によ
り試験した。結果は第１表に示す。なお表中の延命効果
は無感理解の生存日数（Ｃ）に対する治療群の生存日数
（Ｔ）の比を６分率ケ以って表わした。

実験方法 ５　Ｘ　１０６個の腫瘍細胞’ｋＩｃＲマウス（♀２日
本タレア）の腹腔内に移植し７．２４時間後より抗生物
質５Ｓ９８１６Ｅ’ｋ　１日１間計１Ｏ回腹腔内に投与
した。

第１表 以上述べ九諸性質を本発明化合物に類似する既知抗生物
質のそれと比較したが該当する物質はなく　５５９８１
６ｇは新規な抗生物質と判断された。

これらの結果から明らかな様に抗生物質５Ｓ９８１６Ｅ
はエールリッヒ・カルシノーマ腹水癌に対して顕著な治
療効果を示している。この抗＋ｐ＝　ｍ活性からみて抗
生物質５Ｓ９８１６ＦＪは抗１１Ｉｉｉ瘍剤として有用
な物質である。

次に実施例を挙げて本発明を説明する。

実施例１゜ ５Ｓ９８１６Ｅの生産菌ストレプトミセス・エスピー−
８９８１６（グ・エイ−１菌寄第６８８６号）ン＝ｉＩ
溶性澱粉４．０チ、グルコース４．０％、ソイトン１．
０チ、酵母エキス１．０チ、塩化ナトリウム０．２５チ
、炭酸カルシウム０．３２％、硫酸銅０．０００５％、
塩化マンガン０．０００５％、硫酸鉛０．００５チ（ｐ
Ｈ７，０）の液体培地に接種し、２７℃で２日間振盪培
養して種培養液を調製する。同じ培地組成からなる液体
培地１２０ｍｌ：５００−容坂ロフラスコに仕込み、こ
れに前記の種培養液０．６−を接種し、往復式振盪培−
４機にて振巾９ｃｒｎ回転数１１　Ｏｒ−ｐ−ｘｎ−培
養温度２７℃の粂件下で７日間培養する。培養終了後、
培養液１０ｔに希塩酸を加え、ｐｌｉ２．０とし、遠心
分離により菌体を含めた沈澱物を得た。この沈澱物にア
セトン１ｔを加え、よく攪拌して抽出し、ｆ過によりｆ
液とｆ液残渣とに分けた。Ｉ’ｒｌ妃残（ｔｒにクロロ
ホルム１ｔを加え、よく攪拌して抽出し、を過し、１′
ｅ、を得る。この操作を数回繰り返し、Ｐ液を合わせた
。この抽出液に水２ｔｆ加えて分配し、下層全分取した
。この下層を減圧下濃縮乾固し、少量のｎ−へキサンで
洗浄し乾燥すると、赤色粉末５−ｏｏｑが得られ念。上
記赤色粉末を１％酢酸含有クロロホルムに溶解し、あら
かじめ１チ酢酸含有クロロホルムで充填したキーゼルゲ
ル６０（メルク社製）１００Ｆのカラムに通導し、酢酸
−クロロホルム−メチルアルコール（１：１００：２）
混液で溶出し、溶出される両分を除去した後、酢［−ク
ロロホルム−メチルアルコール（［１００：５）混液で
溶出する。溶出画分のうち抗生物質５５９８１６ｇの含
まれる両分を集め減圧濃縮した。濃出物をあらかじめ酢
酸−クロロホルム−メチルアルコール混液（１：　５０
　：　１　）で充填したセファデックス」２０（ファル
マシア社製）のカラム（直径２．２ｍ、長さ３０ｍ）に
通導し、同溶媒で溶出する。溶出画分のうち抗生物質５
Ｓ９８１６Ｅの含せれる画分ヲ集め減圧濃縮した。濃縮
物を冷所に放置し、析出した結晶をＰ取しｆＣ（４０ｖ
）これをクロロホルム−酢酸混液により再結晶し、５Ｓ
９８１６Ｈの赤紫色針状晶２５キを得た。

【図面の簡単な説明】

第１図は抗生物質５５９８１６ｇの紫外線吸収スペクト
ル（ニブルアルゴール溶液中）を示す。第２図は抗生物
質５Ｓ９８１６にの赤外線吸収スペクトル（ＫＢｒ錠剤
）を示す。第３図は抗生物ｓｔｓｓ９８１６ｚ（７）ｉ
ｆ（−ＮＭＲスベクトル〔重クロロホルム／重トリフル
オロ酢ｐ（１０：１）混合溶液中〕を示す〇以　上 出願人　ニスニス製県株式会社 ・　′□−１ 代理人　弁理士有　賀　三　幸゛；□ 、、：　、：　、１　ｊ ；　− 弁理士　高　野　登志雄 ：ズ：７゜ ；゛・・：・。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １　下記の理化学的性質？有する新規抗生物質５Ｓ９８
   １６Ｅ。 ■　元素分析 ＣＨＮ 実験値（％）　６４．９５　３．７６　２．４８理論値
   （チ）　６４．８７　’３．８１　２．５２［Ｆ］）分
   子量 ５５５．５０ Ｇ）　融　点 ３００℃以上 ■　紫外線吸収スペクトル 第１図 ノエチルアルコール　ｉｓ　。 （ＪＤ　）、２３２ｎｒｎ（（５４０）、ｒｎａｘ　Ｉ
   　国 ２６３ｎｍ（８００）、３０４ｎｍ（４５８）、３１９
   　ｎｍ（４５０）、３３３ｎｍ（４０３）、３５９ｎｍ
   （４０２）、３７６ｎｍ（４７７）、３９４ｎｍ（４８
   ０）、５０８　ｎｍ（１６０） ■　赤外線吸収スペクトル（ＫＢｒ法ン第２図 ■　Ｈ−ＮＭＲスペクトル（９０ＭＨｚ　）重クロロホ
   ルム／重トリフルオロ酢酸 （１０：　１　）混合溶液中ＴＭＳ’ｉ−基準物質とし
   て測定した。 第３図 ■　溶剤に対する溶解性 クロロホルム、テトラヒドロフラン、ジオキサン、アセ
   トン、ジメチルスルホキシド、りｏ　ｏ　＊ｙｂムー酢
   酸ｍ液、クロロホルム−メチルアルコール混液に可溶。 ｎ−ヘキサノ、水に難溶。 ■　塩基性、酸性、中性の区別 酸性 ■　物質の色及び性状 赤紫色針状晶（クロロホルム−酢酸混液より再結晶） ［株］　薄層クロマトグラフイ− 担体ニジリカゲルプレー）Ｆｚｓ４（メルク社製０　分
   子式　■ Ｃｓｏ　Ｈ２１Ｎ０ＩＯ ２ストレプトミセス属に属する抗生物質　■５Ｓ９８１
   ６Ｅ生産菌を培養し、その培養物から下記の理化学的性
   質、 ■　元素分析 ＨＮ 実験値（％）　６４．９５　３．７６　２．４８　の理
   論値（チ）　６４．８７　３．８１　２．５２■　分子
   量 ５５５．５０ ■融点 ３００℃以上 ■　紫外線吸収スペクトル　■ 第１図 λ：ｘ−ｆｋ７に’：１−ｋ　（Ｅに）　：　２３２ｎ
   ｍ（６４０）、ｍ＆Ｘ ２６３ｎｍ（８００）、３０４ｎｍ（４５８）、３１９
   ｎｍ（４５０）、３３３ｎｍ（４０３）、３５９ｎｍ（
   ４０２）、３７６ｎｍ（４７７）、３９４　ｎｍ（４，
   ８０）、５０８ｎｍ（１６０） 赤外線吸収スペクトル（ＫＢｒ法） 第２図 １Ｈ−ＮＭＲスペクトル（９０ＭＨｚ　）重クロロホル
   ム／重トリフルオロ酢酸 （１０：ｉ）混合溶液中ＴＭＳ’に基準物質として測定
   した。 第３図 溶剤に対する溶解性 クロロポルム、テトラヒドロフラン、ジオキサン、アセ
   トン、ジメチルスルホギシド、りｏ　ｏ　ホｈ　ムー酢
   酸混液、クロロホルム−メチルアルコール混液に可溶。 ｎ−へΦサン、水に難溶。 塩基性、敵性、中性の区別 酸性 ■　物質の色及び性状 赤紫色針状晶（クロロホルム−酢酸混液より再結晶） ０　薄層クロマトグラフィー 担体ニジリカゲルプレー）　Ｆ２５ｔ　（メルク社製）
   ■　分子式 ％式％ を有する抗生物質５Ｓ９８１６Ｅｔ−採取することを特
   徴とする抗生物質５Ｓ９８１６Ｅの製造法。 ３　５Ｓ９８１６Ｅ物質生産菌がストレプトミセス・エ
   スピー８９８１６株である特許請求の範囲第２項記載の
   製造法。