JPS63309860A - 過酸化物活性化物質測定用試験組成物およびそれを担持した試験具 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ［産業上の利用分野］ 本発明は過酸化物活性化物質測定用試験組成物およびそ
れを担持した試験具に関する。さらに詳しくは本発明は
有機ヒドロペルオキシドとしてペルオキシドビフェニル
化合物を使用した上記試験組成物および試験具に関する
。本発明によって提供される組成物および試験具は過酸
化物活性化物質例えば血液またはヘモグロビンの検出に
有効に利用される。

尿、糞便または嘔吐物等の中に血液またはヘモグロビン
が含まれている場合には腎臓、胃、腸等泌尿器または消
化器系において炎症、潰瘍等の何らかの疾病が進行して
いるものと推定しうる。

従ってこれらの疾病を速やかに診断、治療するためには
上記圧、糞便、嘔吐物等中の血液またはヘモグロビン（
潜血）を正確に検出することが重要である。本発明の組
成物および試験具はこのような潜血の検査に好適に使用
される。

［従来技術およびその問題点］ 潜血検出用試験具は、有機ヒドロペルオキシド、呈色指
示薬および必要により緩衝剤、湿潤剤、活性剤および安
定剤を含浸する担体からなり、試料中にヘモグロビンが
存在すると有機ヒドロペルオキシドが活性化されて発生
期の酸素を生じ、これによって指示薬が酸化されて発色
する。有機ヒドロペルオキシドとして従来２．５−ジメ
チルヘキサン−２，５−ジヒドロペルオキシドおよびク
メンヒドロペルオキシドが知られている。これらの過酸
化物は実用化されてはいるが検出感度が低いことまたブ
ドウ糖試験片等隣接する他の試験片を変色するという欠
点がある。

［問題点を解決するだめの手段］ 本発明は上記の欠点のない試験組成物および試験具を提
供せんとするものであり、本発明は下記の試験組成物お
よび試験具よりなる。

１）一般式 〔式中Ｒは水素原子、アルキル基（エーテル結合を有し
ていてもよい）、ハロゲン原子、カルボキシル基または
ニトロ基を示す。〕 で示されるペルオキシドビフェニル化合物および酸化呈
色指示薬を含有する過酸化物活性化物質測定用試験組成
物。

２）上記式中アルキル基が低級アルキル基である第１項
に記載の組成物。

３）上記ペルオキシドビフェニル化合物が、４−（α−
ヒドロペルオキシイソプロピル）ビフェニルまたは４−
　（α−ヒドロペルオキシイソプロピル）−４′　−メ
チルビフェニルである第１項に記載の組成物。

４）酸化呈色指示薬がオルトトリジン、ベンジジンまた
はロイコマラカイトグリーンである第一　　　ζ　　　
− １項乃至第３項のいずれか１項に記載の組成物。

５）一般式（１） Ｃ式中Ｒは水素原子、アルキル基（エーテル結合を有し
ていてもよい）、ハロゲン原子、カルボキシル基または
ニトロ基を示す。〕 で示されるペルオキシドビフェニル化合物および酸化呈
色指示薬を含有する組成物を担体に担持させた過酸化物
活性化物質測定用試験具。

６）担体が濾紙、ガラス繊維またはプラスチック素材か
らなる不織布である第５項記載の試験具。

上記式（’　Ｉ　）またはｌ）においてＲは水素原子、
アルキル基、ハロゲン原子、カルボキシル基またはニト
ロ基を示す。アルキル基は特に限定されないが、低級ア
ルキル基は好ましい。またアルキル基はエーテル結合を
有していてもよく、その場合、エーテル結合を１個〜７
個有し、代表的には２．４．７−ドリオキサオクチル基
等が挙げられる。

ハロゲン原子も特に限定されないが、塩素、臭素、ヨウ
素は好ましい。

本発明で使用されるペルオキシドビフェニル化合物の代
表的な化合物としては、４−　（α−ヒドロペルオキシ
イソプロピル）ビフェニルまたは４−　（α−ヒドロペ
ルオキシイソプロピル）−４′　−メチルビフェニルが
挙げられる。

本発明で使用する前記式（Ｉ）で示されるペルオキシド
ビフェニル化合物は新規化合物であって前記式（ＩＩ）
で示されるヒドロキシ化合物を酸性条件下で過酸化水素
水溶液で酸化することによって製造される。好ましくは
ヒドロキシ化合物（ｎ）をエーテル等の適当な有機溶剤
にとかし、この溶液に３０％または５０％過酸化水素水
溶液および少量の鉱酸、例えば硫酸または塩酸を加え室
温で十数時間反応させる。反応終了後所望の生成物は常
法に従って反応混合物中から採取される。例えば反応混
合物に水を加え、酢酸エチル等の適当な有機−７＝ 溶剤で抽出し、抽出物から溶剤を留去し、残留物をカラ
ムクロマトグラフィー等で精製することによって所望の
生成物を得ることができる。

ヒドロキシ化合物（ｎ）は、一般式 〔式中Ｒは前述したものと同一意義を有し、Ｘはハロゲ
ン原子を示す〕 で表わされるビフェニルハライド誘導体をｎ−ブチルリ
チウム（またはマグネシウム）、次いでアセトンと反応
させることによって得られる。この反応は通常のグリニ
ヤール反応と同様の条件で実施される。例えばテトラヒ
ドロフラン、ジエチルエーテル等の適当な有機溶媒中、
両化合物を一７８℃（ｎ−ブチルリチウムの場合）また
は室温ないし還流下（マグネシウムの場合）で反応させ
、次いでアセトンを加えることによって化合物（ＩＩ）
が得られる。

上記ペルオキシドビフェニル化合物（Ｔ）は前述したよ
うに過酸化物活性化物質の測定における過酸化物として
使用でき、特に尿、糞便、嘔吐物中の潜血の検出に有利
に使用することができる。

従って本発明の過酸化物活性化物質測定用試験組成物は
、上記化合物（Ｉ）および呈色指示薬よりなる。

指示薬としては酸化されて呈色するいわゆる酸化指示薬
とよばれるものが使用され、その例としてオルトトリジ
ン、ベンジジン、ロイコマラカイトグリーン等があげら
れる。

また必要により緩衝剤、湿潤剤、活性剤、安定剤および
溶剤を含んでいてもよい。

緩衝剤は試験具上のｐＨ値を一定に保つために使用され
、例えばクエン酸塩、リンゴ酸塩、コハク酸塩のような
試験具を試料中に浸漬した際のｐＨ値が４〜８の範囲に
維持できるようなものが好ましい。湿潤剤は試験具を試
料中に浸したとき、試料液が試験具に均一に湿潤するよ
うに使用され、例えばラウリル硫酸ナトリウム、ドデシ
ルベンゼン＝　９− スルホン酸ナトリウム、ジオクチルスルホコハク酸ナト
リウム等の界面活性剤が好適に使用される。

活性剤は試験具上での呈色反応の感度を高めるために用
いられ、３−アミノキノリン、キニン、イソキノリン等
が好ましい。安定剤は試験具から試験薬の流出を防止す
るために粘稠剤が使用され、ポリビニルアルコール、ポ
リビニルピロリドン、ポリエチレングリコール等の重合
物あるいはゼラチン、アラビアゴム等が好ましい。溶剤
は上記薬剤の混合物が容易に溶けるものであればよく、
有利にはエチルアルコール、アセトン、ベンゼン、トル
エン、クロロホルム等が使用される。

この組成物は直接、尿等の被検液中に滴下して使用する
か、あるいはこの組成物中に尿等の被検液を滴下して使
用することができる。

さらに本発明の過酸化物活性化物質測定用試験具は、上
記組成物を担体に担持させたものである。

担体としては濾紙、ガラス繊維、プラスチック素材から
なる不織布が好適であり、上記溶剤に溶けたり反応した
すせず、かつ上記組成物を吸収するものであればよい。

上記試験組成物および試験具に用いられるペルオキシド
ビフェニル化合物およびその他の試薬の量は特に重要で
はなく、従来のものに準じて適宜決定される。即ち、検
出対象の過酸化物活性化物質に対して反応させ、呈色反
応を起させるに十分な量が選択される。

次に実施例、参考例および試験例を示して本発明をさら
に具体的に説明する。

参考例　１ ４−　（α−ヒドロペルオキシイソプロピル）ビフェニ
ル アルゴン雰囲気下、４−ブロモビフェニル４．３８ｇ　
（１８，８ＩＩＩｌｏｌ）の乾燥テトラヒドロフラン（
５０ｍｌ）溶液にｎ−ブチルリチウムの１．６０Ｍヘキ
サン溶液（１７，６ｍｌ、　２８．２ｍｍｏｌ）を−７
８℃にて加えた後、３０分間反応させた。その溶液にア
セトン１２．０ｍ１（１６３Ｉｌ■ｏｌ）を加え一７８
℃にて１０分間反応させた後、飽和塩化アンモニウム水
溶液を加え酢酸エチルにて抽出をおこなった。有機層を
水洗した後、減圧濃縮して得られる残渣をシリカゲルカ
ラムクロマトグラフィーにて分離精製をおこなった。ジ
クロロメタンで溶離することにより、４−　（α−ヒド
ロキシイソプロピル）ビフェニル２．５９ｆ（１２，２
＋ｕｏｌ）を得た。

上記ヒドロキシ化合物２．５９ｇ　（１２，２ｍ５ｏｌ
）にエーテル４ｍｌ、３０％過酸化水素水溶液２０ｍ１
と濃硫酸０゜５０ｍ１を加え、室温にて１６時間反応さ
せた後、水を加え酢酸エチルにて抽出をおこなった。有
機層を水洗した後、減圧濃縮し得られる残渣をシリカゲ
ルカラムクロマトグラフィーにて分離精製をおこなった
。ジクロロメタンで溶離することにより４−　（α−ヒ
ドロペルオキシイソプロピル）ビフェ、ニル２．８２ｇ
　（１０，１ｓａ＋ｏｌ）を得た。

（以下余白） ＮＭＲ（ｐｐＩｌ、ＣＤＣｌｌ３） ８．１２（ｓ、１ｌｌ）、　　７．７２〜７．２０（ｍ
、９■）、　　１．６３（ｓ　、　［ｌＨ） １Ｒ（ν国　、　ＣＨＣｌ１３）　３５３０．３３３０
参考例　２ ４−　（α−ヒドロペルオキシイソプロピル）−４′　
−メチルビフェニル アルゴン雰囲気下、４−ブロモ−４′　−メチルビフェ
ニル２．’ｌ’１ｇ　（１１，２ｖｎｏｌ）の乾燥テト
ラヒドロフラン（５０ｍｌ）溶液にｎ−ブチルリチウム
の１．６０Ｍヘキサン溶液（７，００ｍ１．１１．２ａ
ｌＩＩ＋ｏｌ）を−７８℃にて加えた後、１時間反応さ
せた。その溶液にアセトン４．０　ｍｌ　（５４，５ｆ
ｆ１ｍｏｌ）を加え一７８℃にて１０分間反応させた後
、飽和塩化アンモニウム水溶液を加え酢酸エチルにて抽
出をおこなった。有機層を水洗した後、得られる残渣を
シリカゲル力ラムクロマトグラフィーにて分離精製をお
こなった。ジクロロメタンで溶離することにより、４−
（α−ヒドロキシイソプロピル）−４′　−メチルビフ
ェニル８９８　ｍｇ　（３，９７Ｉｌａ＋ｏｌ）を得た
。

上記ヒドロキシ化合物８９８　ｍｇ　（３，９７ｍＩＩ
ｏｌ）にエーテル４ｍｌ、３０％過酸化水素水溶液２０
ｍ１と濃硫酸０．５０ｍ１を加え室温で１８時間反応さ
せた後、水を加え酢酸エチルにて抽出をおこなった。有
機層を水洗した後、減圧濃縮し得られる残渣をシリカゲ
ルカラムクロマトグラフィーにて分離精製をおこなった
。ジクロロメタンで溶離することにより４−　（α−ヒ
ドロペルオキシイソプロピル）＝４′　−メチルビフェ
ニル７８８　ｍｇ　（３，２５１１ＩＩｏｌ）を得た。

ＮＭＲ（ｐｐｍ　、ＣＤ　Ｃ１ｌ　ｓ　）８．０３（ｓ
、ＩＩＩ）、　　７．４２（ｄ、４Ｈ，Ｊ−８Ｈ２）、
　　７．１５（ｄ、２Ｈ，Ｊ−８Ｈｚ）、　２．３８（
ｓ、３Ｈ）（以下余白） 実施例 試験紙の製造法 溶液Ｉ ペルオキシドビフェニル化合物（１） 分子１ｉｘ４．４８ｘｌＯ″″８ｇ ｐ−ｈルエンスルホニルーＮ−ジエチルアミド５、Ｏｇ ジオクチルスルホコハク酸ナトリウム１．５ｇエタノー
ル　　　　　１００ｍ１ 濾紙を溶液Ｉに充分浸潤して、４０”Ｃの乾燥オーブン
で２０分間乾燥する。

溶液■ ア　　り　　リ　　ル　ア　　ミ　　ド　　　　　　　
　　　　　　１０ｇポリエチレングリコール　　　　　
　　１０ｇクエン酸三ナトリウム・二水和物　　　９ｇ
クエン酸・−水和物　　　　　　１ｇ サ　　　　ボ　　　　ニ　　　　ン　　　　　　　　　
　１００ｓｇ１０Ｏｓ　−２Ｎａ　　　　３０Ｉ１ｇ水
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　１００ｍ
１溶液Ｉで乾燥した濾紙を溶液■に充分浸潤して４０℃
の乾燥オーブンで５０分間乾燥する。

溶液■ オルトトリジン　　　１．２０゜ ３−アミノキノリン　　　　　０．５　ｇベ　　　　ン
　　　　ゼ　　　　ン　　　　　　　　　　　　１００
　　ｍｌ溶液■で乾燥した濾紙を溶液■に充分浸潤して
４０℃の乾燥オーブンで１０分間乾燥する。これを、性
能評価用の試験紙として使用する。

試験例　１ 上記試験紙の製造例で示したようにして得られた試験片
を試料中に１秒間浸漬させる。前記試験片の呈色を時間
の経過につれて所定の色調表と照らし合わせて色調表に
記された判定符号を目視により読みとる。前記色調表に
よって呈色の度合がら試料中潜血の濃度を判定する。そ
の判定符号と、ヘモグロビン濃度との相関を下に示す。

（以下余白） 表　　　　１ なお、色調表のヘモグロビン濃度と相関する色調は、過
酸化物２．５−ジメチルヘキサン−２，５−ジヒドロペ
ルオキシドを用いて前記製造例で示した方法により作製
した試験片の判定時間６０秒後の色を示している。

その結果、４−　（α−ヒドロペルオキシイソプロピル
）ビフェニルは、約１５秒の判定時間で色調表に相当す
る呈色をしていた。一方、クメンヒドロペルオキシドを
用いた試験紙が色調表に相当する呈色をするのに約２５
秒要した。なお色調表を作成するに用いた２、５−ジメ
チルヘキサン−２，５−ジヒドロペルオキシドは６０秒
を要している。

以上のことから、本発明のベルオキシドビフエニル化合
物（１）は、市販されている尿中潜血測定試験紙に用い
られている過酸化物２．５−ジメチルヘキサン−２，５
−ジヒドロペルオキシドとクメンヒドロペルオキシドよ
りも高い感度を有していることがわかった。

試験例　２ スティック上で、潜血測定用試験片とブドウ糖測定用試
験片が隣接している場合、ブドウ糖試験紙に変色が生ず
ることが知られている。

過酸化物として４−　（α−ヒドロペルオキシイソプロ
ピル）ビフェニルを用いて前記製造例で示した方法によ
り作製した試験片と２．５−ジメチルヘキサン−２，５
−ジヒドロペルオキシドを用いた試験片とを、別々のス
ティック上に貼り、その各々のスティック上の隣接する
部位にブドウ糖試験片を貼り、４０℃１力月間保管した
。その結果は、前者がブドウ糖試験片に、変色がないの
に対して、後者は変色が生じていた。このことから、本
発明における過酸化物（Ｉ）は隣接する他の尿中試験項
目への影響が少ない。

［発明の効果］ 本発明の試験組成物および試験具は過酸化物活性化物質
、特に血液またはヘモグロビンの検出に有効に利用され
る。即ち、有機ヒドロペルオキシド、呈色指示薬からな
る過酸化物活性化物質測定組成物において有機ヒドロペ
ルオキシドとしてペルオキシドビフェニル化合物（Ｉ）
を使用すると下記の特長を有する該測定組成物が得られ
る。

（１）従来の測定組成物より呈色反応の速度が速く、呈
色感度が高い。

（２）尿中成分検出用多項目試験片の場合、ブドウ糖試
験片等隣接する他の試験片を変色させることがない。

このように本発明の試験組成物および試験具は過酸化物
活性化物質試験に非常に優れた性質を有している。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １）一般式 ▲数式、化学式、表等があります▼（ I ） 〔式中Ｒは水素原子、アルキル基（エーテル結合を有し
   ていてもよい）、ハロゲン原子、カルボキシル基または
   ニトロ基を示す。〕 で示されるペルオキシドビフェニル化合物および酸化呈
   色指示薬を含有する過酸化物活性化物質測定用試験組成
   物。 ２）上記式中アルキル基が低級アルキル基である特許請
   求の範囲第１項に記載の組成物。 ３）上記ペルオキシドビフェニル化合物が、４−（α−
   ヒドロペルオキシイソプロピル）ビフェニルまたは４−
   （α−ヒドロペルオキシイソプロピル）−４′−メチル
   ビフェニルである特許請求の範囲第１項に記載の組成物
   。 ４）酸化呈色指示薬がオルトトリジン、ベンジジンまた
   はロイコマラカイドグリーンである特許請求の範囲第１
   項乃至第３項のいずれか１項に記載の組成物。 ５）一般式（ I ） ▲数式、化学式、表等があります▼（ I ） 〔式中Ｒは水素原子、アルキル基（エーテル結合を有し
   ていてもよい）、ハロゲン原子、カルボキシル基または
   ニトロ基を示す。〕 で示されるペルオキシドビフェニル化合物 および酸化呈色指示薬を含有する組成物を担体に担持さ
   せた過酸化物活性化物質測定用 試験具。 ６）担体がろ紙、ガラス繊維またはプラスチック素材か
   らなる不織布である特許請求の範囲第５項記載の試験具
   。