JPS63309859A - 過酸化物活性化物質測定用試験組成物およびそれを担持した試験具 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ［産業上の利用分野］ 本発明は過酸化物活性化物質測定用試験組成物およびそ
れを担持した試験具に関する。さらに詳しくは本発明は
有機ヒドロペルオキシドとしてジヒドロペルオキシド化
合物を使用した上記試験組成物および試験具に関する。

本発明によって提供される組成物および試験具は過酸化
物活性化物質例えば血液またはヘモグロビンの検出に有
効に利用される。

尿、糞便または嘔吐物等の中に血液またはヘモグロビン
が含まれている場合には腎臓、胃、腸等泌尿器または消
化器系において炎症、潰瘍等の何らかの疾病が進行して
いるものと推定しうる。

従ってこれらの疾病を速やかに診断、治療するためには
上記尿、糞便、嘔吐物等中の血液またはヘモグロビン（
潜血）を正確に検出することが重要である。本発明の組
成物および試験具はこのような潜血の検査に好適に使用
される。

［従来技術およびその問題点］ 潜血検出用試験具は、有機ヒドロペルオキシド、呈色指
示薬および必要により緩衝剤、湿潤剤、活性剤および安
定剤を含浸する担体からなり、試料中にヘモグロビンが
存在すると有機ヒドロペルオキシドが活性化されて発生
期の酸素を生じ、これによって指示薬が酸化されて発色
する。有機ヒドロペルオキシドとして従来２，５−ジメ
チルヘキサン−２，５−ジヒドロペルオキシドおよびク
メンヒドロペルオキシドが知られている。これらの過酸
化物は実用化されてはいるが経時的安定性がないため検
出感度の低下が著しいこと、ビタミンＣが試料尿中に含
まれている場合に偽陰性と判断されること、尿中成分検
出用多項目試験片の場合、隣接する他の試験片を変色さ
せ、性能低下をもたらすこと、呈色感度が低いこと等の
欠点がある。

これらの欠点を改良したヒドロペルオキシドとして近年
クメンヒドロペルオキシドのベンゼン環に０１−６アル
キル基、Ｃρ、Ｂｒ、Ｉ、ＮＯ２またはカルボキシル基
が置換した化合物が提案されている（特開昭５９−１９
０８８３号公報）。この過酸化物は従来のものよりかな
り改善されてはいるが経時的安定性が充分満足できるも
のではなかった。

［問題点を解決するための手段］ 本発明は上記の欠点のない試験組成物および試験具を提
供せんとするものであり、本発明は下記の試験組成物お
よび試験具よりなる。

１）一般式（１） ％式％ 〔式中Ｒは水素原子、ハロゲン原子、ニトロ基−Ｉ’ｓ
　　　− 一　　４　− またはアルキル基（エーテル結合を含んでいてもよい）
を示し、ｎは１〜４の整数を示す。〕で表わされるジヒ
ドロペルオキシド化合物および酸化呈色指示薬を含有す
る過酸化物活性化物質測定用試験組成物。

２）ｎが２を示す第１項に記載の組成物。

３）ジヒドロペルオキシド化合物が、２．５−ジフェニ
ルへ牛サン−２，５−ジヒドロペルオキシド、２．５−
ビス（４−ブロモフェニル）ヘキサン−２，５〜ジヒド
ロペルオキシドまたは２．５−ビスＣ４−（２，４，７
−）リオキサオクチル）フェニル〕ヘキサン−２，５−
ジヒドロペルオキシド である第１項に記載の組成物。

（以下余白） ４）一般式（１） ００ＨＯＯＨ 〔式中Ｒは水素原子、ハロゲン原子、ニトロ基またはア
ルキル基（エーテル結合を含んでいてもよい）を示し、
ｎは１〜４の整数を示す。〕で表わされるジヒドロペル
オキシド化合物および酸化呈色指示薬を含有する組成物
を担体に担持させた過酸化物活性化物質測定用試験具。

５）担体が濾紙、ガラス繊維またはプラスチック素材か
らなる不織布である第４項記載の試験具。

一般式（１）中Ｒは上記したように水素原子、ハロゲン
原子、ニトロ基またはアルキル基を示す。

ハロゲン原子は、いずれの原子でもよいが、塩素、臭素
、ヨウ素は好ましい。

上記アルキル基は好ましくは炭素数１〜８の直鎖状また
は分枝鎖状のアルキル基であり、メチル、エチル、ｎ−
プロピル、ｉ−プロピル、ｎ−ブチル、ｉ−ブチル、ｎ
−ペンチル、ｎ−ヘキシル、ｎ−へブチル、ｎ−オクチ
ル等が例としてあげられる。さらに上記アルキル基はエ
ーテル結合を有していてもよく、好ましくはエーテル結
合を１〜７個含む。この場合、２，４．７−　トリオキ
サオクチル基等が例としてあげられる。

上記式中ｎは１〜４の整数を示し、特にｎは２であるこ
とが好ましい。

本発明のジヒドロペルオキシド化合物の代表的な化合物
としては、２．５−ジフェニルヘキサン−２，５−ジヒ
ドロペルオキシド、 ２．５−ビス（４−ブロモフェニル）ヘキサン−２，５
−ジヒドロペルオキシドまたは ２．５−ビス（４−（２，４，７−）リオキサオクチル
）フェニル〕ヘキサン−２，５−ジヒドロペルオキシド があげられる。

本発明で使用する前記式（１）で示されるジヒ−’／　
　　− ドロペルオキシド化合物は新規化合物であって前記式（
ｎ）で示されるジヒドロキシ化合物を酸性条件下で過酸
化水素水溶液で酸化することによって製造される。好ま
しくはジヒドロキシ化合物（ＩＩＩ）をエーテル等の適
当な有機溶剤にとかし、この溶液に３０％または５０％
過酸化水素水溶液および少量の鉱酸、例えば硫酸または
塩酸を加え室温で十数時間反応させる。反応終了後所望
の生成物は常法に従って反応混合物中から採取される。

例えば反応混合物に水を加え、酢酸エチル等の適当な有
機溶剤で抽出し、抽出物から溶剤を留去し、残留物をカ
ラムクロマトグラフィー等で精製することによって所望
の生成物を得ることができる。

ジヒドロキシ化合物（Ｉｌ）は、一般式％式％ またはアルキル基（エーテル結合を含んでいてもよい）
を示し、Ｘはハロゲン原子を示す。〕で表わされるフェ
ニルハライド誘導体をｎ−ブチルリチウム（またはマグ
ネシウム）と反応させたのち、一般式 （ｎは１〜４の整数を示す）で示されるジケトン体と反
応させることによって得ることができる。

フェニルハライド誘導体とｎ−ブチルリチウムまたはマ
グネシウムとの反応は通常のグリニヤール反応と同様の
条件で実施される。例えばテトラヒドロフラン、ジエチ
ルエーテル等の適当な有機溶媒中、両化合物を一７８℃
（ｎ−ブチルリチウムの場合）または室温ないし還流下
（マグネシウムの場合）で反応させ、次いでジケトン体
を加えることによって化合物（ＩＩ）が得られる。

このジヒドロペルオキシド化合物（１）は前述したよう
に過酸化物活性化物質の測定における過酸化物として使
用でき、特に尿、糞便、嘔吐物中の潜血の検出に有利に
使用される。

本発明の過酸化物質測定用試験組成物は、上記ジヒドロ
ペルオキシド化合物（１）と酸化呈色指示薬とからなる
。

指示薬としては酸化されて呈色するいわゆる酸化指示薬
とよばれるものが使用され、その例としてオルトトリジ
ン、ベンジジン、ロイコマラカイトグリーン等があげら
れる。

また本発明の過酸化物活性化物質測定用試験具は、上記
化合物及び酸化呈色指示薬を含有する組成物を担体に担
持させたものよりなる。この組成物及び試験具は緩衝剤
、湿潤剤、活性剤、安定剤を含んでいてもよい。

緩衝剤は試験具上のｐＨ値を一定に保つために使用され
、例えばクエン酸塩、リンゴ酸塩、コハク酸塩のような
試験具を試料中に浸漬した際のｐＨ値が４〜８の範囲に
維持できるようなものが好ましい。湿潤剤は試験具を試
料中に浸したとき、試料液が試験具に均一に湿潤するよ
うに使用され、例えばラウリル硫酸ナトリウム、ドデシ
ルベンゼンスルホン酸ナトリウム、ジオクチルスルホコ
ハク酸ナトリウム等の界面活性剤が好適に使用される。

活性剤は試験具上での呈色反応の感度を高めるために用
いられ、３−アミノキノリン、キニン、イソキノリン等
が好ましい。安定剤は試験具から試験薬の流出を防止す
るために粘稠剤が使用され、ポリビニルアルコール、ポ
リビニルピロリドン、ポリエチレングリコール等の重合
物あるいはゼラチン、アラビアゴム等が好ましい、溶剤
は上記薬剤の混合物が容易に溶けるものであればよく、
有利にはエチルアルコール、アセトン、ベンゼン、トル
エン、クロロホルム等が使用される。担体としては濾紙
、ガラス繊維、プラスチック素材からなる不織布が好適
であり、上記溶剤に溶けたり反応したすせず、かつ上記
組成物を吸収するものであればよい。

尚、本発明に係る試験組成物は必らずしも担体を必要と
するものではなく、たとえば、該組成物を尿等の被検液
中に滴下する、あるいは被検液を該組成物の溶液中に滴
下する等により使用することもできる。

上記試験組成物および試験具に用いられるジヒドロペル
オキシド化合物およびその他の試薬の量は特に重要では
なく、従来のものに準じて適宜決定される。即ち、検出
対象の過酸化物活性化物質に対して反応させ、呈色反応
を起させるに十分な量が選択される。

次に実施例、参考例および試験例を示して本発明をさら
に具体的に説明する。

参考例　１ ２．５−ジフェニルヘキサン−２，５−ジヒドロペルオ
キシド ＨＣ−Ｃ−ＣＨ２ＣＨ２−Ｃ−ＣＨ３ ００ＨＯＯＨ アルゴン雰囲気下、２．５−ヘキサンジオン５．７０ｇ
（５０ｍＩＩｌｏｌ）の５０ｍ１乾燥テトラヒドロフラ
ン溶液にフェニルマグネシウムブロマイドの２Ｍテトラ
ヒドロフラン溶液（６２，５ｍｌ、　１２５ｍＩＩｌｏ
ｌ）を０℃にて加えたのち、室温にて一晩撹拌した。反
応液に、水を加え酢酸エチルにて抽出をおこなった。有
機層を減圧濃縮し得られる残渣をシリカゲルカラムクロ
マトグラフィー　（ＣＨ２ＣＨ２２−Ｍｅ　ＯＨ。

２０：１）にて精製をおこない、２．５−ジフェニルヘ
キサン−２，５−ジオール８．００ｇ　（２９，８ｍｌ
１ｏｌ）を得た。

上記アルコール化合物８．００ｇ　（２９，６＋ｅｍｏ
ｌ）の７ｍｌジエチルエーテル溶液に３０％過酸化水素
水溶液１５ｍ１．濃硫酸０．３７２　ｍｌを０℃にて加
え、室温にて一晩反応させた。反応液に水を加え酢酸エ
チルにて抽出をおこなった。有機層を減圧濃縮し得られ
る残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにて精製
した。ジクロロメタン−メタノール（２０：１）にて溶
離することにより２，５−ジフェニルヘキサン−２，５
−ジヒドロペルオキシド８．２７ｇ（２０，７ｍｍｏｌ
）を得た。

ＮＭＲ（ｐｐｍ　、　ＣＤ　Ｃ１）　３　）７．９３（
ｓ、２Ｈ）、　　７．２８（ｓ、１０Ｈ）　、　　１．
９０（ｓ、４Ｈ）。

１．５２（ｓ、ＯＨ） ｍｌ ＩＲ（ν（至）、　ＣＨＣｆＩ３）　３５２０．３３２
０参考例　２ ２．５−ビス（４−ブロモフェニル）ヘキサン−２，５
−ジヒドロペルオキシド ００ＨＯＯＨ アルゴン雰囲気下、１．４−ジブロモベンゼン９．４０
ｇ　（８９，８ｍａ＋ｏｌ）の乾燥テトラヒドロフラン
（３０ｍｌ）溶液にマグネシウム９７２ｍｇ　（４０，
０＊ｓｏ’ｌ）を加えた。さらに、反応液に２．５−ヘ
キサンジオン１．２０ｍ１　（１０，２ｍｍｏｌ）を加
え一晩撹拌した後、飽和塩化アンモニウム水溶液を加え
酢酸エチルにて抽出した。有機層を減圧濃縮し、得られ
る残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにて精製
をおこなった。ジクロロメタン−メタノール（２０：１
）で展開することにより、２．５−ビス（４−ブロモフ
ェニル）ヘキサン−２，５−ジオール２．８８ｇ　（６
゜７２８ｍｍｏｌ）を得た。

上記アルコール化合物２．８８ｇ（６，７２６ｍｍｏｌ
）にエーテル５ｍｌ、　５０％過酸化水素水溶液２０ｍ
１と濃硫酸０．５００　ｍｌを加え室温にて１６時間反
応させた後、水を加え酢酸エチルにて抽出をおこなった
。有機層を水洗した後、減圧濃縮し得られる残渣をシリ
カゲルカラムクロマトグラフィーにて分離精製をおこな
った。酢酸エチル−ヘキサン（２：　１）で溶離するこ
とにより２，５−ビス（４−ブロモフェニル）ヘキサン
−２，５−ジヒドロペルオキシド２．０７ｇ　（４，５
０ｇｍｏｌ）を得た。

Ｎ　Ｍ　Ｒ（ｐｐｍ　、　ＣＤ　Ｃｆｌ　ａ　）１１１
．０３（ｓ、２Ｈ）、　７．３１（ｄ、４Ｈ，Ｊ−９Ｈ
ｚ）、　７．１０（ｄ、４Ｈ，Ｊ−９Ｈ２） １　Ｒ（νｃｍ　　、　ＣＨＣｊ！　３　）　３５２０
．８３２０＝　　　１　）　　− 参考例　３ ２．５−ビス（４−（２，４，７−トリオキサオクチル
）フェニル〕ヘキサン−２，５−ジヒドロペルオキシド アルゴン雰囲気下、４−ブロモベンジルアルコール３．
７１ｓｔ　（１９，８ｉｉｏ１）の乾燥ジクロロメタン
（３７ｍｌ）溶液にβ−メトキシエトキシメチルクロラ
イド２．７０ｍ１　（２３，６ｍｍｏｌ）とＮ、Ｎ−ジ
イソプロピルエチルアミン５．２１ｍ１　（２９，ｈ問
ｌ）を加え室温にて１８時間反応させた。その溶液に水
を加えジクロロメタンにて抽出をおこない、有機層を水
洗し減圧濃縮した。得られる残渣をシリカゲルカラムク
ロマトグラフィーにて分離精製をおこなった。ジクロロ
メタンで溶離することにより４−ブロモー１−　（２，
４，７−トリオキサオクチル）ベンゼン４．８７ｇ　（
１７，７ｍａ＋ｏｌ）を得た。

アルゴン雰囲気下、上記ブロモ化合物４．８７ｇ（１７
，７＋ｕｏｌ）の乾燥テトラヒドロフラン（５０ｍｌ）
溶液にマグネシウム片４８０　ｍｇ　（１８，９ｉｍｏ
ｌ）を加え４時間還流させた。反応液を０℃に冷却した
後、２．５−ヘキサンジオン６７１　ｔｉｇ　（５，８
８１１ＩＩｏｌ）の乾燥テトラヒドロフラン（７ｍｌ）
溶液を加えた。室温にて１６時間反応させた後、飽和塩
化アンモニウム水溶液を加え酢酸エチルにて抽出した。

有機層を減圧濃縮し得られる残渣をシリカゲルカラムク
ロマトグラフィー精製をおこなった。ジクロロメタン−
メタノール（２０：１）で溶離することにより２．５−
ビス（４−（２，４，７−）リオキサオクチル）フェニ
ル〕ヘキサン−２，５−ジオール１．５８ｇ（ＬＯ８ｍ
ｍｏｌ）を得た。

上記アルコール化合物１．５８ｇ　（３，０８ｍ＋ｎｏ
ｌ）にエーテル４ｍｌ、５０％過酸化水素水溶液１８ｍ
１と濃硫酸０．４００　ｍｌを加え室温にて１９時間反
応させた後、水を加え酢酸エチルにて抽出した。有機層
を水洗した後、減圧濃縮し得られる残渣をシリカゲルカ
ラムクロマトグラフィーにて分離精製をおこなった。酢
酸エチル−ヘキサン（２：１）で溶離することにより、
２．５−ビス（４−（２，４，７−トリオキサオクチル
）フェニル〕ヘキサン−２，５−ジヒドロペルオキシド
１．１９ｇ　（２，２１ｍｍｏｌ）を得た。

Ｎ　Ｍ　Ｒ（ｐｐＩｌｌ、ＣＤ　ＣＲａ　）８．０Ｂ（
ｓ、２Ｈ）、　７．５０〜７．１４（＋ｎ、８Ｈ）、　
４．７１１（ｓ、４Ｈ）、　４．５４（ｓ、４Ｈ）、　
３．８５〜３．４７（ｍ、８Ｈ）。

３．４１（ｓ、６Ｈ）、　１．９４（ｓ、４Ｈ）、　１
．５１（ｓ、６Ｈ）１Ｒ（ν印　、　ＣＨＣｊ？　３）
　８５２０．３３２０実施例 試験紙の製造法 溶液Ｉ ジヒドロペルオキシド化合物（Ｔ） 分子量Ｘ　２．２４Ｘ　１０−３ｇ ｐ−）ルエンスルホニルーＮ−ジエチルアミド５、Ｏｇ ジオクチルスルホコハク酸ナトリウム１．５ｇエタノー
ル　　　　　１００ｍ１ 濾紙を溶液Ｉに充分浸潤して、４０℃の乾燥オーブンで
２０分間乾燥する。

溶液■ ア　　り　　リ　　ル　ア　　ミ　　ド　　　　　　　
　　　　　　　１０ｇポリエチレングリコール　　　　
　　　１０ｇクエン酸三ナトリウム・二水和物　　　９
ｇクエン酸・−水和物　　　　　　１ｇ サ　　　　ポ　　　　ニ　　　　ン　　　　　　　　　
　１００ＩＩ１００ＩＩ１−２Ｎａ　　　　３０ｍｇ 水　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　１００
ｍ１溶液Ｉで乾燥した濾紙を溶液■に充分浸潤して４０
℃の乾燥オーブンで５０分間乾燥する。

溶液■ オ　ル　　ト　　ト　　リ　　ジ　　ン　　　　　　　
　　　　１．２０ｇ３−アミノキノリン　　　　　０．
５　ｇベ　　　　ン　　　　ゼ　　　　ン　　　　　　
　　　　　　　１００　　ｍｌ溶液■で乾燥した濾紙を
溶液■に充分浸潤して４０℃の乾燥オーブンで１０分間
乾燥する。これを、性能評価用の試験紙として使用する
。

試験例　１ 上記試験紙の製造例で示したようにして得られた試験片
を試料中に１秒間浸漬させる。前記試験片の呈色を時間
の経過につれて所定の色調表と照らし合わせて色調表に
記された判定符号を目視により読みとる。前記色調表に
よって呈色の度合から試料中潜血の濃度を判定する。そ
の判定符号と、ヘモグロビン濃度との相関を下に示す。

表　　　　１ なお、色調表のヘモグロビン濃度と相関する色調は、過
酸化物２．５−ジメチルヘキサン−２，５−ジヒドロペ
ルオキシドを用いて前記製造例で示した方法により作製
した試験片の判定時間６０秒後の色を示している。

その結果、２，５−ジフェニルヘキサン−２，５−ジヒ
ドロペルオキシドは、約３０秒の判定時間で色調表に相
当する呈色をしていた。なお色調表を作成するに用いた
２、５−ジメチルヘキサン−２，５−ジヒドロベルオキ
シドは６０秒を要している。

以上のことから、本発明において使用するジヒドロペル
オキシド化合物（Ｉ）は、市販されている尿中潜血測定
試験紙に用いられている過酸化物２．５−ジメチルヘキ
サン−２，５−ジヒドロペルオキシドよりも高い感度を
有していることがわかった。

次に、６０℃で貯蔵後に試験をおこなった判定結果を表
２および３に示す。

（以下余白） 表２および表３から２．５−ジフェニルヘキサン−２，
５−ジヒドロペルオキシドが、経時変化に対する安定性
に優れていることがわかる。

試験例　２ スティック上で、潜血測定用試験片とブドウ糖測定用試
験片が隣接している場合、ブドウ糖試験紙に変色が生ず
ることが知られている。

過酸化物として２，５−ジフェニルヘキサン−２，５−
ジヒドロペルオキシドを用いて前記製造例で示した方法
により作製した試験片と２．５−ジメチルヘキサン−２
，５−ジヒドロペルオキシドを用いた試験片とを、別々
のスティック上に貼り、その各々のスティック上の隣接
する部位にブドウ糖試験片を貼り、４０℃１力月間保管
した。その結果は、前者がブドウ糖試験片に、変色がな
いのに対して、後者は変色が生じていた。このことから
、本発明の過酸化物（Ｉ）は隣接する他の尿中試験項目
への影響が少ない。

［発明の効果］ 本発明の試験組成物および試験具は過酸化物活性化物質
、特に血液またはヘモグロビンの検出に有効に利用され
る。即ち、有機ヒドロペルオキシド、呈色指示薬からな
る過酸化物活性化物質試験組成物および試験具において
有機ヒドロペルオキシドとして本発明のジヒドロペルオ
キシド化合物（１）を使用すると下記の特長を有する該
試験組成物および試験具が得られる。

（１）　　経時的に安定であり、長期間貯蔵しても良好
な検出感度を維持することができる。

（２）尿中成分検出用多項目試験片の場合、ブドウ糖試
験片等隣接する他の試験片を変色させることがなく、性
能低下をもたらさない。

（３）従来の測定組成物より呈色反応の速度が速く、呈
色感度が高い。

このように本発明の試験組成物および試験具は過酸化物
活性化物質試験に非常に優れた性質を有している。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １）一般式（ I ） ▲数式、化学式、表等があります▼（ I ） 〔式中Ｒは水素原子、ハロゲン原子、ニトロ基またはア
   ルキル基（エーテル結合を含んでいてもよい）を示し、
   ｎは１〜４の整数を示す。〕で表わされるジヒドロペル
   オキシド化合物および酸化呈色指示薬を含有する過酸化
   物活性化物質測定用試験組成物。 ２）ｎが２を示す特許請求の範囲第１項に記載の組成物
   。 ３）ジヒドロペルオキシド化合物が、２，５−ジフェニ
   ルヘキサン−２，５−ジヒドロペルオキシド、２，５−
   ビス（４−ブロモフェニル）ヘキサン−２，５−ジヒド
   ロペルオキシドまたは２，５−ビス〔４−（２，４，７
   −トリオキサオクチル）フェニル〕ヘキサン−２，５−
   ジヒドロペルオキシド である特許請求の範囲第１項に記載の組成物。 ４）一般式（ I ） ▲数式、化学式、表等があります▼（ I ） 〔式中Ｒは水素原子、ハロゲン原子、ニトロ基またはア
   ルキル基（エーテル結合を含んでいてもよい）を示し、
   ｎは１〜４の整数を示す。〕で表わされるジヒドロペル
   オキシド化合物および酸化呈色指示薬を含有する組成物
   を担体に担持させた過酸化物活性化物質測定用試験具。 ５）担体がろ紙、ガラス繊維またはプラスチック素材か
   らなる不織布である特許請求の範囲第４項記載の試験具
   。