JPH07116382B2 - 水溶性メチレンビスジアルキルアニリン誘導体及びその塩類並びにそれらを用いた過酸化物質定量用組成物 - Google Patents
水溶性メチレンビスジアルキルアニリン誘導体及びその塩類並びにそれらを用いた過酸化物質定量用組成物Info
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- JPH07116382B2 JPH07116382B2 JP4054477A JP5447792A JPH07116382B2 JP H07116382 B2 JPH07116382 B2 JP H07116382B2 JP 4054477 A JP4054477 A JP 4054477A JP 5447792 A JP5447792 A JP 5447792A JP H07116382 B2 JPH07116382 B2 JP H07116382B2
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- C07C309/14—Sulfonic acids having sulfo groups bound to acyclic carbon atoms of an acyclic saturated carbon skeleton containing nitrogen atoms, not being part of nitro or nitroso groups, bound to the carbon skeleton containing amino groups bound to the carbon skeleton
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Description
【発明の詳細な説明】
本発明は特許請求の範囲に記載の一般式（１）で示され
る水溶性メチレンビスジアルキルアニリン誘導体とその
塩類（以下「本発明化合物」と略す）及び本発明化合物
を色素形成物質として有することよりなる過酸化物質定
量用組成物に関するものである。上記の本発明化合物
は、いずれも文献未載の新規かつ有用な物質であって、
かつ、ペルオキシダーゼまたはそれと同様な触媒作用を
持つ物質と共存させ過酸化水素を定量する際の色素形成
物質として有用である。酵素試薬を用いる臨床検査法は
酵素の基質特異性のために極めて選択的な分析法であ
り、複雑な生体マトリックスの影響を受けることなく各
種の生体内成分を容易に定量できるため、自動分析機器
の普及に伴って今や臨床化学分析には欠くことのできな
い重要な分析方法となっている。酵素的分析法による生
体成分の分析法のうち、特に注目すべき方法は酵素反応
によって過酸化水素を発生させる系である。即ち、生体
成分に撰択的に作用して過酸化水素を発生する酸化酵素
がつぎつぎに見いだされ、現在ではほとんどの生体成分
に対してその酸化酵素が知られるようになってきた。し
たがって、適当な酸化酵素さえ確保できれば、生成する
過酸化水素を定量する事により目的とする生体成分の定
量が可能となる。従来このような機構で生成する過酸化
水素を定量する方法としてはペルオキシダーゼ（以下Ｐ
ＯＤと略記する）存在下各種の水素供与体と４−アミノ
アンチピリン（以下４−ＡＡと略記する）などのカップ
ラーとを過酸化水素によって酸化縮合させ、縮合体の呈
色を吸光光度法によって測定する方法が主であり、例え
ば表１の様な方法が発表されている。 臨床化学検査において、検出感度を高くする事は、血液
という貴重な検体を用いることや微量成分を測定する必
要から必然の要求である。そのことからも表１に示した
水素供与体以上の感度を持った試薬が求められている。
またこれら公知の色素形成物質の波長はほとんどのもの
が５００ｎｍ〜６００ｎｍであるが、一方体液中に含ま
れるビリルビンや溶血によって生じる吸収が紫外領域か
ら５３０ｎｍ付近と広範囲にあるため、測定時に正の誤
差を生じるおそれがあり、より高い波長領域で発色する
水素供与体が求められている。本発明者らは、６００ｎ
ｍ以上の波長を持った色素を生成する色素形成物質で、
特に水に対する溶解性のよい化合物を見いだすべく鋭意
研究を重ねた結果、前記一般式（１）で示される本発明
化合物を見いだした。また本発明化合物は従来の方法
（特開 昭５６−９９４５４及び昭５７−６４６６
０）の様にカップラーを必要とせず、酵素と過酸化水素
のみによって発色することも見いだした。例えば本発明
化合物をペルオキシダーゼと過酸化水素による酸化を行
うと下記の（ＩＩ）式で示される青色色素を定量的に形
成し、優れた呈色安定性を保持することを見いだし本発
明を完成した。 本発明品における、カップラーを必要としないという性
質は現在進歩を続けている自動分析機器での測定操作の
簡略化という意味で非常に有利な特長である。また本発
明品をｐＨ ５．５の緩衡液に溶解し、ペルオキシダー
ゼと過酸化水素を添加すると極大吸収波長でモル吸光係
数（ｌ，ｍｏｌ−１，ｃｍ−１）４．０×１０４ないし
５．０×１０４の色素を生じる。これに対しフェノール
と４−アミノアンチピリンを用いて同条件で測定した場
合、極大吸収波長でのモル吸光係数は約５．０×１０３
程度に過ぎない。従って本発明品化合物を用いる過醋化
水素の定量法は非常に高感度な方法であるといえる。さ
て、一般式（Ｉ）で示される化合物は、次の一般式（Ｉ
ＩＩ） （式中Ｒ１，Ｒ２，Ｒ３は前出一般式（Ｉ）と同じ意味
を有する。）で示される化合物にホルマリンを作用させ
合成することができる。このようにして合成された一般
式（Ｉ）で示される本発明化合物具体例を表２に、又そ
の化合物の融点、元素分析値及びｐＨ５．５における過
酸化水素による酸化色素の極大吸収波長λｍａｘ（ｎ
ｍ）を表３に示す。 次に実施例をあげて、更に具体的に本発明化合物の製造
法（実施例１〜３）及びそれを用いた定量方法（実施例
４）を説明するが、本発明はその要旨を越えない限り以
下の実施例に制約されるものではない。 実施例１．化合物 （Ｆ）の製造 Ｎ−エチル−Ｎ−スルホプロピル−３，５−ジメチルア
ニリンナトリウム塩２．０ｇを水１２ｍｌに溶かし、３
７％ホルマリン０．３１ｍｌ９０％ギ酸０．０３ｍｌを
加え３５℃に保ちながら、Ｎ−メチルレアニリンを触媒
量加え反応を行う。４時間反応させた後、アセトン５０
０ｍｌにその反応液をあけ、結晶を析出させる。得られ
た結晶を濾取しメタノールで再結晶して白色のメチレン
ビス（Ｎ−エチル−Ｎ−スルホプロピル−３，５−ジメ
チルアニリンナトリウム塩）１．５２ｇを得る。収率
７４．５％ ＴＬＣ（シリカゲル、０．２Ｎ−アンモニア水飽和ｎ−
ブタノール） Ｒｆ＝０．２８１ Ｈ−ＮＭＲ （Ｄ２Ｏ）δｐｐＭ（ＴＭＳ） １．１１（ｔ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，６Ｈ） １．６２〜
１．９１（ｍ，４Ｈ）２．１６（ｓ，１２Ｈ） ２．６
５（ｔ，７．２７，４Ｈ） ３．４８〜３．７４（ｍ，
８Ｈ） ４．２２（ｓ，２Ｈ）７．１７（ｓ，４Ｈ） ＩＲ（ｃｍ−１）３４８０，１６１０，１２６６，１１
７５ 実施例２．化合物（Ｌ）の製造 Ｎ−エチル−Ｎ−（２−ヒドロキシ−３−スルホプロピ
ル）−３，５−ジメチルアニリンナトリウム塩２．０ｇ
を水１０ｍｌに溶かし、３７％ホルマリン０．３０ｍ
ｌ、９０％ギ酸０．０３ｍｌを加え３５〜４０℃に保ち
ながら、Ｎ−メチルアニリンを触媒量加え反応を行う。
４時間反応させた後、アセトン５００ｍｌにその反応液
をあけ、結晶を析出させる。得られた結晶を濾取しメタ
ノールで再結晶して白色のメチレンビス｛Ｎ−エチル−
Ｎ−（２−ヒドロキシ−３−スルホプロピル）−３，５
ジメチルアニリンナトリウム塩｝１．５２ｇを得る。収
率７７．０％ＴＬＣ （シリカゲル、０．２Ｎ−アンモ
ニア水飽和ｎ−ブタノール）Ｒｆ＝０．２５１ Ｈ−ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ） δｐｐＭ（ＴＭＳ） １．０１（ｔ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，６Ｈ）２．０１（ｓ，
１２Ｈ）２．０９〜２．２０（ｍ，２Ｈ）２．５０
（ｄ，Ｊ＝２．１，４Ｈ） ３．１８〜３．４２（ｍ，
８Ｈ） ３．７４（ｓ，２Ｈ）６．３２（ｓ，４Ｈ） ＩＲ（ｃｍ−１） ３５００，１６０３，１２２０，１
１６０ 実施例３．化合物（Ｏ）の製造 Ｎ−ブチル−Ｎ−スルホプロピル−３，５−ジエチルア
ニリンナトリウム塩２．１４ｇを水２０ｍｌに溶かし、
３７％ホルマリン０．３１ｍｌ、９０％ギ酸０．０１ｍ
ｌを加え３５〜４０℃に保ちながら、Ｎ−メチルアニリ
ンを触媒量加え反応を行う。４時間反応させた後、アセ
トン５００ｍｌにその反応液をあけ、結晶を析出させ
る。得られた結晶を濾取しメタノールで再結晶して白色
のメチレンビス（Ｎ−ブチル−Ｎ−スルホプロピル−
３，５−ジエチルアニリンナトリウム塩）１．４６ｇを
得る。収率６７．１％ ＴＬＣ（シリカゲル、０．２Ｎ−アンモニア水飽和ｎ−
ブタノール） Ｒｆ＝０．３４１ Ｈ−ＮＭＲ （Ｄ２Ｏ）δｐｐＭ（ＴＭＳ） ０．９７（ｔ，Ｊ＝７．７Ｈｚ，６Ｈ） １．２０
（ｔ，Ｊ＝７．４，１２Ｈ）１．３９〜１．６８（ｍ，
８Ｈ）１．５５〜１．７６（ｍ，４Ｈ） ２．６６
（ｔ，７．６，４Ｈ） ３．１７〜３．４４（ｍ，８
Ｈ） ３．９６（ｓ，２Ｈ） ６．４９（ｓ，４Ｈ） ＩＲ（ｃｍ−１）３３８０，１６００，１２３９，１２
１２，１１１９，１０５０ 実施例 ４ 過酸化水素標準液による検量線の作成 ｐＨ ５．５の５０ｍＭ ＭＥＳ （２−（Ｎ−モルホ
リノ）エタンスルホン酸一水塩）緩衡液１００ｍｌにパ
ーオキシダーゼ５００単位を溶かしたものを４個用意
し、それぞれにメチレンビス（Ｎ−スルホプロピル−
３，５−ジメチルアニリン２ナトリウム塩） （化合物
Ｂ） ５．４３ｍｇ、メチレンビス（Ｎ−エチル−Ｎ
−スルホプロピル−３，５−ジメチルアニリン２ナトリ
ウム塩）（化合物 Ｆ） ５．９８ｍｇ、メチレンビス
（Ｎ−プロピル−Ｎ−スルホプロピル−３，５−ジエチ
ルアニリン２ナトリウム塩）（化合物 Ｉ）６．８３
ｍｇ、メチレンビス（Ｎ−エチル−Ｎ−（２ヒドロキシ
−３−スルホプロピル）−３，５−ジメチルアニリン２
ナトリウ塩） （化合物 Ｌ）６．３１ｍｇを溶かし４
種の発色試薬とする。それぞれの発色試薬に対して試験
管ａ〜ｆを設け、それらの試験管に発色試薬、及び過酸
化水素標準液を以下の様にとる。 各試験管を３７℃の恒温槽に１０分間浸けた後、試薬盲
検を対照にそれぞれの最大吸収波長での吸光度を測定す
る。得られた値から作成した検量線を図１に示す。図１
から１〜１００μＭの濃度範囲で各発色試薬とも検量線
が直線性を示す事がわかる。以上の結果から本発明品の
化合物全てが過酸化物質定量用試薬としての効果を奏す
ることは明らかである。そのうち本測定において最も高
い感度を示した化合物Ｆについては、以下に定量の具体
例を示す。むろんこれらは単なる例示であって、本発明
がこれによって限定されるものではない。 実施例 ５ 化合物Ｆによる血清中のグルコースの定量
５０ｍＭ ＭＥＳ緩衡液（ｐＨ＝５．５）１００ｍｌに
グルコースオキシダーゼ５００単位、パーオキシダーゼ
５００単位、メチレンビス （Ｎ−エチル−Ｎ−スルホプロピル−３，５−ジメチル
アニリン２ナトリウム塩） （化合物 Ｆ）５．９８ｍ
ｇを溶かし発色試薬とする。 ｉ）グルコース標準液を用いた検量線の作成 グルコ−ス２００ｍｇを１００ｍｌの水に溶かしたもの
をグルコース標準液とし、適宜希釈して実験に用いる。
試験管ａ〜ｄに以下に示す様に試薬をとる。 各試験官を３７℃の恒温槽に１０分間浸けたあと、試験
盲検を対照に６４８ｎｍの吸光度を測定する。得られた
値から作成した検量線を図２に示す。その結果グルコー
ス濃度０〜２００ｍｇ／ｄｌの範囲で良好な直線性を示
した。 ｉｉ）血清中のグルコースの定量 試験管に除タンパクした血清２０ｍｌをとり、上記発色
試薬１．０ｍｌを加えて、３７℃の恒温槽に１０分間浸
けたあと、試験盲検を対照に６４８ｎｍでの吸光度を測
定し、検量線と対比して血清中のグルコース濃度を求め
る。 検体Ｉ（３２才 男性） 吸光度 ０．２９３ グルコース濃度 ９１．６９ｍｇ／ｄｌ 検体ＩＩ（２８才 男性） 吸光度 ０．３３３ グルコース濃度 １０５．２４ｍｇ／ｄｌ 検体ＩＩＩ（３６才 男性） 吸光度 ０・３６１ グルコース濃度 １１２．９８ｍｇ／ｄｌ
る水溶性メチレンビスジアルキルアニリン誘導体とその
塩類（以下「本発明化合物」と略す）及び本発明化合物
を色素形成物質として有することよりなる過酸化物質定
量用組成物に関するものである。上記の本発明化合物
は、いずれも文献未載の新規かつ有用な物質であって、
かつ、ペルオキシダーゼまたはそれと同様な触媒作用を
持つ物質と共存させ過酸化水素を定量する際の色素形成
物質として有用である。酵素試薬を用いる臨床検査法は
酵素の基質特異性のために極めて選択的な分析法であ
り、複雑な生体マトリックスの影響を受けることなく各
種の生体内成分を容易に定量できるため、自動分析機器
の普及に伴って今や臨床化学分析には欠くことのできな
い重要な分析方法となっている。酵素的分析法による生
体成分の分析法のうち、特に注目すべき方法は酵素反応
によって過酸化水素を発生させる系である。即ち、生体
成分に撰択的に作用して過酸化水素を発生する酸化酵素
がつぎつぎに見いだされ、現在ではほとんどの生体成分
に対してその酸化酵素が知られるようになってきた。し
たがって、適当な酸化酵素さえ確保できれば、生成する
過酸化水素を定量する事により目的とする生体成分の定
量が可能となる。従来このような機構で生成する過酸化
水素を定量する方法としてはペルオキシダーゼ（以下Ｐ
ＯＤと略記する）存在下各種の水素供与体と４−アミノ
アンチピリン（以下４−ＡＡと略記する）などのカップ
ラーとを過酸化水素によって酸化縮合させ、縮合体の呈
色を吸光光度法によって測定する方法が主であり、例え
ば表１の様な方法が発表されている。 臨床化学検査において、検出感度を高くする事は、血液
という貴重な検体を用いることや微量成分を測定する必
要から必然の要求である。そのことからも表１に示した
水素供与体以上の感度を持った試薬が求められている。
またこれら公知の色素形成物質の波長はほとんどのもの
が５００ｎｍ〜６００ｎｍであるが、一方体液中に含ま
れるビリルビンや溶血によって生じる吸収が紫外領域か
ら５３０ｎｍ付近と広範囲にあるため、測定時に正の誤
差を生じるおそれがあり、より高い波長領域で発色する
水素供与体が求められている。本発明者らは、６００ｎ
ｍ以上の波長を持った色素を生成する色素形成物質で、
特に水に対する溶解性のよい化合物を見いだすべく鋭意
研究を重ねた結果、前記一般式（１）で示される本発明
化合物を見いだした。また本発明化合物は従来の方法
（特開 昭５６−９９４５４及び昭５７−６４６６
０）の様にカップラーを必要とせず、酵素と過酸化水素
のみによって発色することも見いだした。例えば本発明
化合物をペルオキシダーゼと過酸化水素による酸化を行
うと下記の（ＩＩ）式で示される青色色素を定量的に形
成し、優れた呈色安定性を保持することを見いだし本発
明を完成した。 本発明品における、カップラーを必要としないという性
質は現在進歩を続けている自動分析機器での測定操作の
簡略化という意味で非常に有利な特長である。また本発
明品をｐＨ ５．５の緩衡液に溶解し、ペルオキシダー
ゼと過酸化水素を添加すると極大吸収波長でモル吸光係
数（ｌ，ｍｏｌ−１，ｃｍ−１）４．０×１０４ないし
５．０×１０４の色素を生じる。これに対しフェノール
と４−アミノアンチピリンを用いて同条件で測定した場
合、極大吸収波長でのモル吸光係数は約５．０×１０３
程度に過ぎない。従って本発明品化合物を用いる過醋化
水素の定量法は非常に高感度な方法であるといえる。さ
て、一般式（Ｉ）で示される化合物は、次の一般式（Ｉ
ＩＩ） （式中Ｒ１，Ｒ２，Ｒ３は前出一般式（Ｉ）と同じ意味
を有する。）で示される化合物にホルマリンを作用させ
合成することができる。このようにして合成された一般
式（Ｉ）で示される本発明化合物具体例を表２に、又そ
の化合物の融点、元素分析値及びｐＨ５．５における過
酸化水素による酸化色素の極大吸収波長λｍａｘ（ｎ
ｍ）を表３に示す。 次に実施例をあげて、更に具体的に本発明化合物の製造
法（実施例１〜３）及びそれを用いた定量方法（実施例
４）を説明するが、本発明はその要旨を越えない限り以
下の実施例に制約されるものではない。 実施例１．化合物 （Ｆ）の製造 Ｎ−エチル−Ｎ−スルホプロピル−３，５−ジメチルア
ニリンナトリウム塩２．０ｇを水１２ｍｌに溶かし、３
７％ホルマリン０．３１ｍｌ９０％ギ酸０．０３ｍｌを
加え３５℃に保ちながら、Ｎ−メチルレアニリンを触媒
量加え反応を行う。４時間反応させた後、アセトン５０
０ｍｌにその反応液をあけ、結晶を析出させる。得られ
た結晶を濾取しメタノールで再結晶して白色のメチレン
ビス（Ｎ−エチル−Ｎ−スルホプロピル−３，５−ジメ
チルアニリンナトリウム塩）１．５２ｇを得る。収率
７４．５％ ＴＬＣ（シリカゲル、０．２Ｎ−アンモニア水飽和ｎ−
ブタノール） Ｒｆ＝０．２８１ Ｈ−ＮＭＲ （Ｄ２Ｏ）δｐｐＭ（ＴＭＳ） １．１１（ｔ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，６Ｈ） １．６２〜
１．９１（ｍ，４Ｈ）２．１６（ｓ，１２Ｈ） ２．６
５（ｔ，７．２７，４Ｈ） ３．４８〜３．７４（ｍ，
８Ｈ） ４．２２（ｓ，２Ｈ）７．１７（ｓ，４Ｈ） ＩＲ（ｃｍ−１）３４８０，１６１０，１２６６，１１
７５ 実施例２．化合物（Ｌ）の製造 Ｎ−エチル−Ｎ−（２−ヒドロキシ−３−スルホプロピ
ル）−３，５−ジメチルアニリンナトリウム塩２．０ｇ
を水１０ｍｌに溶かし、３７％ホルマリン０．３０ｍ
ｌ、９０％ギ酸０．０３ｍｌを加え３５〜４０℃に保ち
ながら、Ｎ−メチルアニリンを触媒量加え反応を行う。
４時間反応させた後、アセトン５００ｍｌにその反応液
をあけ、結晶を析出させる。得られた結晶を濾取しメタ
ノールで再結晶して白色のメチレンビス｛Ｎ−エチル−
Ｎ−（２−ヒドロキシ−３−スルホプロピル）−３，５
ジメチルアニリンナトリウム塩｝１．５２ｇを得る。収
率７７．０％ＴＬＣ （シリカゲル、０．２Ｎ−アンモ
ニア水飽和ｎ−ブタノール）Ｒｆ＝０．２５１ Ｈ−ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ） δｐｐＭ（ＴＭＳ） １．０１（ｔ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，６Ｈ）２．０１（ｓ，
１２Ｈ）２．０９〜２．２０（ｍ，２Ｈ）２．５０
（ｄ，Ｊ＝２．１，４Ｈ） ３．１８〜３．４２（ｍ，
８Ｈ） ３．７４（ｓ，２Ｈ）６．３２（ｓ，４Ｈ） ＩＲ（ｃｍ−１） ３５００，１６０３，１２２０，１
１６０ 実施例３．化合物（Ｏ）の製造 Ｎ−ブチル−Ｎ−スルホプロピル−３，５−ジエチルア
ニリンナトリウム塩２．１４ｇを水２０ｍｌに溶かし、
３７％ホルマリン０．３１ｍｌ、９０％ギ酸０．０１ｍ
ｌを加え３５〜４０℃に保ちながら、Ｎ−メチルアニリ
ンを触媒量加え反応を行う。４時間反応させた後、アセ
トン５００ｍｌにその反応液をあけ、結晶を析出させ
る。得られた結晶を濾取しメタノールで再結晶して白色
のメチレンビス（Ｎ−ブチル−Ｎ−スルホプロピル−
３，５−ジエチルアニリンナトリウム塩）１．４６ｇを
得る。収率６７．１％ ＴＬＣ（シリカゲル、０．２Ｎ−アンモニア水飽和ｎ−
ブタノール） Ｒｆ＝０．３４１ Ｈ−ＮＭＲ （Ｄ２Ｏ）δｐｐＭ（ＴＭＳ） ０．９７（ｔ，Ｊ＝７．７Ｈｚ，６Ｈ） １．２０
（ｔ，Ｊ＝７．４，１２Ｈ）１．３９〜１．６８（ｍ，
８Ｈ）１．５５〜１．７６（ｍ，４Ｈ） ２．６６
（ｔ，７．６，４Ｈ） ３．１７〜３．４４（ｍ，８
Ｈ） ３．９６（ｓ，２Ｈ） ６．４９（ｓ，４Ｈ） ＩＲ（ｃｍ−１）３３８０，１６００，１２３９，１２
１２，１１１９，１０５０ 実施例 ４ 過酸化水素標準液による検量線の作成 ｐＨ ５．５の５０ｍＭ ＭＥＳ （２−（Ｎ−モルホ
リノ）エタンスルホン酸一水塩）緩衡液１００ｍｌにパ
ーオキシダーゼ５００単位を溶かしたものを４個用意
し、それぞれにメチレンビス（Ｎ−スルホプロピル−
３，５−ジメチルアニリン２ナトリウム塩） （化合物
Ｂ） ５．４３ｍｇ、メチレンビス（Ｎ−エチル−Ｎ
−スルホプロピル−３，５−ジメチルアニリン２ナトリ
ウム塩）（化合物 Ｆ） ５．９８ｍｇ、メチレンビス
（Ｎ−プロピル−Ｎ−スルホプロピル−３，５−ジエチ
ルアニリン２ナトリウム塩）（化合物 Ｉ）６．８３
ｍｇ、メチレンビス（Ｎ−エチル−Ｎ−（２ヒドロキシ
−３−スルホプロピル）−３，５−ジメチルアニリン２
ナトリウ塩） （化合物 Ｌ）６．３１ｍｇを溶かし４
種の発色試薬とする。それぞれの発色試薬に対して試験
管ａ〜ｆを設け、それらの試験管に発色試薬、及び過酸
化水素標準液を以下の様にとる。 各試験管を３７℃の恒温槽に１０分間浸けた後、試薬盲
検を対照にそれぞれの最大吸収波長での吸光度を測定す
る。得られた値から作成した検量線を図１に示す。図１
から１〜１００μＭの濃度範囲で各発色試薬とも検量線
が直線性を示す事がわかる。以上の結果から本発明品の
化合物全てが過酸化物質定量用試薬としての効果を奏す
ることは明らかである。そのうち本測定において最も高
い感度を示した化合物Ｆについては、以下に定量の具体
例を示す。むろんこれらは単なる例示であって、本発明
がこれによって限定されるものではない。 実施例 ５ 化合物Ｆによる血清中のグルコースの定量
５０ｍＭ ＭＥＳ緩衡液（ｐＨ＝５．５）１００ｍｌに
グルコースオキシダーゼ５００単位、パーオキシダーゼ
５００単位、メチレンビス （Ｎ−エチル−Ｎ−スルホプロピル−３，５−ジメチル
アニリン２ナトリウム塩） （化合物 Ｆ）５．９８ｍ
ｇを溶かし発色試薬とする。 ｉ）グルコース標準液を用いた検量線の作成 グルコ−ス２００ｍｇを１００ｍｌの水に溶かしたもの
をグルコース標準液とし、適宜希釈して実験に用いる。
試験管ａ〜ｄに以下に示す様に試薬をとる。 各試験官を３７℃の恒温槽に１０分間浸けたあと、試験
盲検を対照に６４８ｎｍの吸光度を測定する。得られた
値から作成した検量線を図２に示す。その結果グルコー
ス濃度０〜２００ｍｇ／ｄｌの範囲で良好な直線性を示
した。 ｉｉ）血清中のグルコースの定量 試験管に除タンパクした血清２０ｍｌをとり、上記発色
試薬１．０ｍｌを加えて、３７℃の恒温槽に１０分間浸
けたあと、試験盲検を対照に６４８ｎｍでの吸光度を測
定し、検量線と対比して血清中のグルコース濃度を求め
る。 検体Ｉ（３２才 男性） 吸光度 ０．２９３ グルコース濃度 ９１．６９ｍｇ／ｄｌ 検体ＩＩ（２８才 男性） 吸光度 ０．３３３ グルコース濃度 １０５．２４ｍｇ／ｄｌ 検体ＩＩＩ（３６才 男性） 吸光度 ０・３６１ グルコース濃度 １１２．９８ｍｇ／ｄｌ
【図面の簡単な説明】
図−１は試薬Ｂ，Ｆ，Ｉ，Ｌの過酸化水素濃度に対する
検量線で縦軸に最大吸収波長での吸光度、横軸に過酔化
水素濃度をとってある。但し、●，○，□，△はそれぞ
れ化合物Ｂ，Ｆ，Ｉ，Ｌを表わす。図−２は試薬Ｆを用
いたときのグルコース濃度に対する検量線で、縦軸に６
４８ｎｍでの吸光度、横軸にグルコース濃度をとってあ
る。
検量線で縦軸に最大吸収波長での吸光度、横軸に過酔化
水素濃度をとってある。但し、●，○，□，△はそれぞ
れ化合物Ｂ，Ｆ，Ｉ，Ｌを表わす。図−２は試薬Ｆを用
いたときのグルコース濃度に対する検量線で、縦軸に６
４８ｎｍでの吸光度、横軸にグルコース濃度をとってあ
る。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 （式中Ｒ１は水素原子、低級アルキル基および炭素数２
ないし３のスルホアルキル基またはヒドロキシスルホア
ルキル基よりなる群から選択された置換基を示し、Ｒ２
は炭素数２ないし３のスルホアルキル基またはヒドロキ
シスルホアルキル基を表しＲ３は低級アルキル基を表
す）で示される水溶性メチレンビスジアルキルアニリン
誘導体及びその塩類 （式中Ｒ１は水素原子、低級アルキル基および炭素数２
ないし３のスルホアルキル基またはヒドロキシスルホア
ルキル基よりなる群から選択された置換基を示し、Ｒ２
は炭素数２ないし３のスルホアルキル基またはヒドロキ
シスルホアルキル基を表しＲ３は低級アルキル基を表
す）で示される水溶性メチレンビスジアルキルアニリン
誘導体及びその塩類を色素形成物質として有することよ
りなる過酸化物質定量用組成物
Priority Applications (5)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP4054477A JPH07116382B2 (ja) | 1992-01-28 | 1992-01-28 | 水溶性メチレンビスジアルキルアニリン誘導体及びその塩類並びにそれらを用いた過酸化物質定量用組成物 |
| DE69201786T DE69201786T2 (de) | 1992-01-28 | 1992-11-26 | Wasserlösliche Methylenbis(dialkylanilin)-Derivate und ihre Verwendung. |
| DE92120132T DE553427T1 (de) | 1992-01-28 | 1992-11-26 | Wasserlösliche Methylenbis(dialkylanilin)-Derivate und ihre Verwendung. |
| EP92120132A EP0553427B1 (en) | 1992-01-28 | 1992-11-26 | Water-soluble methylenebis(dialkylaniline) derivatives and application thereof |
| US07/994,297 US5264622A (en) | 1992-01-28 | 1992-12-21 | Water-soluble methylenebis(dialkylaniline) derivatives and application thereof |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP4054477A JPH07116382B2 (ja) | 1992-01-28 | 1992-01-28 | 水溶性メチレンビスジアルキルアニリン誘導体及びその塩類並びにそれらを用いた過酸化物質定量用組成物 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0770462A JPH0770462A (ja) | 1995-03-14 |
| JPH07116382B2 true JPH07116382B2 (ja) | 1995-12-13 |
Family
ID=12971752
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP4054477A Expired - Lifetime JPH07116382B2 (ja) | 1992-01-28 | 1992-01-28 | 水溶性メチレンビスジアルキルアニリン誘導体及びその塩類並びにそれらを用いた過酸化物質定量用組成物 |
Country Status (4)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5264622A (ja) |
| EP (1) | EP0553427B1 (ja) |
| JP (1) | JPH07116382B2 (ja) |
| DE (2) | DE553427T1 (ja) |
Families Citing this family (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
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| US7485436B2 (en) * | 2001-10-11 | 2009-02-03 | Arkray, Inc. | Method of stabilizing oxidation color former |
| JP5230986B2 (ja) * | 2007-09-28 | 2013-07-10 | テルモ株式会社 | 酸化発色化合物、試薬組成物、および試験具 |
| JP5189816B2 (ja) * | 2007-09-28 | 2013-04-24 | テルモ株式会社 | 酸化発色化合物、試薬組成物、および試験具 |
| CA2733390A1 (en) * | 2008-08-01 | 2010-02-04 | Bioxiness Pharmaceuticals, Inc. | Methionine analogs and methods of using same |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE3037342A1 (de) * | 1980-01-09 | 1981-07-16 | Dojindo Laboratories, Kumamotoshi | N-sulfoalkylanilinderivate und ihre verwendung |
| JPS5699454A (en) * | 1980-01-09 | 1981-08-10 | Doujin Kagaku Kenkyusho:Kk | N-sulfoalkylaniline derivative |
| JPS589094B2 (ja) * | 1980-10-06 | 1983-02-18 | 株式会社 同仁化学研究所 | Ｎ−ヒドロキシスルホアルキルアニリン誘導体及びその応用 |
-
1992
- 1992-01-28 JP JP4054477A patent/JPH07116382B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1992-11-26 EP EP92120132A patent/EP0553427B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1992-11-26 DE DE92120132T patent/DE553427T1/de active Pending
- 1992-11-26 DE DE69201786T patent/DE69201786T2/de not_active Expired - Fee Related
- 1992-12-21 US US07/994,297 patent/US5264622A/en not_active Expired - Fee Related
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0770462A (ja) | 1995-03-14 |
| DE553427T1 (de) | 1994-02-03 |
| DE69201786T2 (de) | 1995-07-27 |
| DE69201786D1 (de) | 1995-04-27 |
| EP0553427B1 (en) | 1995-03-22 |
| EP0553427A1 (en) | 1993-08-04 |
| US5264622A (en) | 1993-11-23 |
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