JPS63279789A - 核酸分解酵素の製造法 - Google Patents
核酸分解酵素の製造法Info
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- JPS63279789A JPS63279789A JP11610087A JP11610087A JPS63279789A JP S63279789 A JPS63279789 A JP S63279789A JP 11610087 A JP11610087 A JP 11610087A JP 11610087 A JP11610087 A JP 11610087A JP S63279789 A JPS63279789 A JP S63279789A
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
〔産業上の利用分野〕
本発明は核酸分解酵素の製造法、特に糸状菌を用いて核
酸分解酵素を液内培養により製造する方法に関する。
酸分解酵素を液内培養により製造する方法に関する。
従来の糸状菌により核酸分解酵素を製造する方法は皺を
培養基として用０る固体培養法により主として行なわれ
て来た。一方液内培養法は、培養設備、培養操作自体は
工業的培養に適して ′いるのであるが、上記固体培養
に比較して核酸分解酵素の生産能がはるかに劣ることが
知られている。
培養基として用０る固体培養法により主として行なわれ
て来た。一方液内培養法は、培養設備、培養操作自体は
工業的培養に適して ′いるのであるが、上記固体培養
に比較して核酸分解酵素の生産能がはるかに劣ることが
知られている。
このため液内培養法において核酸分解酵素生産能を高め
る方法として、ペニシリウム層またはアスペルギルス属
の糸状菌を用い、公知の基本培地に更にフィチンを添加
する方法（特公昭４５．６８７１号）、亜鉛イオンを添
加する方法（特公昭５２−４６２６号）、亜□鉛イオン
および低級アルコールを添加する方法（特公昭５６−１
９０５号）、亜鉛イオンに加えて更に鉄イオン、カルシ
ウムイオン、錫イオン、バリウムイオンよりなる群から
選択した金属イオンを添加する方法（特公昭５６−１４
２７７号）が提案された。
る方法として、ペニシリウム層またはアスペルギルス属
の糸状菌を用い、公知の基本培地に更にフィチンを添加
する方法（特公昭４５．６８７１号）、亜鉛イオンを添
加する方法（特公昭５２−４６２６号）、亜□鉛イオン
および低級アルコールを添加する方法（特公昭５６−１
９０５号）、亜鉛イオンに加えて更に鉄イオン、カルシ
ウムイオン、錫イオン、バリウムイオンよりなる群から
選択した金属イオンを添加する方法（特公昭５６−１４
２７７号）が提案された。
前述した従来の固体培養法においては最適培養条件の制
御が困難であり、また培養設備等の見地から工業的生産
性に劣る欠点を有する。
御が困難であり、また培養設備等の見地から工業的生産
性に劣る欠点を有する。
また前述した従来の液内培養法では、今なお酵素生産性
において満足できるものでなく、更に培地中に金属イオ
ンを加えているため、培養液から得られる酵素の精製に
支障をきたす場合もあり、好ましくない。
において満足できるものでなく、更に培地中に金属イオ
ンを加えているため、培養液から得られる酵素の精製に
支障をきたす場合もあり、好ましくない。
従って本発明の目的は従来の液内培養法の欠点を克服し
、しかも工業的生産に適した液内培養による核酸分解酵
素の製造方法を提供することにある。
、しかも工業的生産に適した液内培養による核酸分解酵
素の製造方法を提供することにある。
本発明は核酸分解酵素生産能を有する糸状菌を培養して
核酸分解酵素を製造する方法において、穀類の少なくと
も１種を含有する培地を用いて液内培養を行なう核酸分
解酵素の製造法である。
核酸分解酵素を製造する方法において、穀類の少なくと
も１種を含有する培地を用いて液内培養を行なう核酸分
解酵素の製造法である。
本発明者等は糸状菌による核酸分解酵素の製造方法の研
究を鋭意行なった結果、液内培養において、小麦盤、大
豆粕、米糠等の穀類天然物の少なくとも１種を含有する
培地を用いた場合非常に高い酵素生産性が得られること
を見出したことに基づいている。
究を鋭意行なった結果、液内培養において、小麦盤、大
豆粕、米糠等の穀類天然物の少なくとも１種を含有する
培地を用いた場合非常に高い酵素生産性が得られること
を見出したことに基づいている。
本発明において使用する微生物は、糸状菌に属する核酸
分解酵素生産菌であればよく、例えばペニシリウム属に
属する糸状菌を挙げることができる。これらの具体的菌
株としては例えばペニシリウム シトリナム（Ｐｅｎｉ
ｃｉｌｌｉｕｍｃｉｔｒｉｎｕｍ ）ＩＦＯ−４６３１
ｒＩＦＯ−６’０２６、ＦＯ−６２２５ｒＩＦＯ−７７
８４；ペニシリウム ジャンチネラム（Ｐｅｎｉｃｉｌ
ｌｉｕｍ ｊａｎｔＭｎｅｎｕｍ）ＩＦＯ−４６５１＋
工ＩＦＯ−４６５２、ＦＯ−４６５３、ＦＯ−４６
５４； ペニシリウム エキスパンサム（Ｐｅｎｉｃｉ
ｌｌｉｕｍ ｅｘｐａｎｓｕｍ ）ＩＦＯ−ｓ４ｓａｉ
ペニシリウム メレアグリナム（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕ
ｍｍｅｌｅａｇｒｉｎｕｍ ）■ＦＯ−６２３２、工ｙ
ｏ−７９２６゜工ｐｏ −７９２７：ペニシリウム ス
テラキイ（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ５ｔｅａｋｉｉ
）工ｙｏ −６０２８ｌＩＦＯ−７１３３等がある。
分解酵素生産菌であればよく、例えばペニシリウム属に
属する糸状菌を挙げることができる。これらの具体的菌
株としては例えばペニシリウム シトリナム（Ｐｅｎｉ
ｃｉｌｌｉｕｍｃｉｔｒｉｎｕｍ ）ＩＦＯ−４６３１
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５４； ペニシリウム エキスパンサム（Ｐｅｎｉｃｉ
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ペニシリウム メレアグリナム（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕ
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テラキイ（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ５ｔｅａｋｉｉ
）工ｙｏ −６０２８ｌＩＦＯ−７１３３等がある。
なお本発明の方法はホスホジェステラーゼ、リボヌクレ
アーゼを問わず適用できる。
アーゼを問わず適用できる。
本発明による液内培養を行なうに当って、培地成分とし
て使用しうる穀類には小麦盤、大豆粕、米糠等を使用で
きる。これら穀類は水中に分散させて使用するとよく、
その添加量は通常液体培地の０．０１〜２０重量％、好
ましくは１〜５重量％である。
て使用しうる穀類には小麦盤、大豆粕、米糠等を使用で
きる。これら穀類は水中に分散させて使用するとよく、
その添加量は通常液体培地の０．０１〜２０重量％、好
ましくは１〜５重量％である。
また上記液体培地には糸状菌の培養に通常使用させる炭
素源および窒素源を添加してもよい。
素源および窒素源を添加してもよい。
かかる炭素源としては例えばグルコース、スターチ、グ
リセリンを使用でき、窒素源としては酵母エキス、ペプ
トン、硝酸ナトリウムを使用できる。
リセリンを使用でき、窒素源としては酵母エキス、ペプ
トン、硝酸ナトリウムを使用できる。
液内培養を実施するに当って、培養液のｐＨは通常４〜
８であり、好ましくは５〜７である。
８であり、好ましくは５〜７である。
このため必要に応じて酸として例えば塩酸、硫酸、塩基
として例えばアンモニア、苛性ソーダを使用できる。
として例えばアンモニア、苛性ソーダを使用できる。
培養温度は通常１５〜４０°Ｃ１好ましくは２０〜３５
°Ｃであり、培養時間は２〜４日でよい。
°Ｃであり、培養時間は２〜４日でよい。
培養には通常の振盪培養、通気攪拌培養が使用できる。
培地中に生産された核酸分解酵素は培養液を遠心分離し
て得られる上澄液またはＰ液中に粗酵素液として回収さ
れるが、必要に応じてさらに一般的な酵素精製法例えば
塩析法、有機溶媒による沈澱法、イオン交換り・ロマト
グラフイ、分子分別法等により精製することができる。
て得られる上澄液またはＰ液中に粗酵素液として回収さ
れるが、必要に応じてさらに一般的な酵素精製法例えば
塩析法、有機溶媒による沈澱法、イオン交換り・ロマト
グラフイ、分子分別法等により精製することができる。
核酸分解酵素の活性は次の如くして測定した。
基質はサケ白子ＤＮＡ ５１１１ｐをｌ ｍｌの０゜Ｉ
ＭのＮａｐ７？溶液中に溶解した後、１０分間１００°
Ｃに加熱し、次いで急速に氷冷して調製した。０．３Ｍ
酢酸ヘロ＋ −／ｌ／ （ｐＨ５，３） ０．２ ｍｌ
および基質溶液（熱変性ＤＮＡ ５ Ｗ／ ｒｎｌ ）
０．２ ｍｔを含む試験管を３７℃の恒温槽に浸漬し
、次に粗酵素液Ｑ、 ｌ ｍｌを添加し、１５分間反応
させた後、直ちに７．５重量−過塩素酸水溶液１ ｍｇ
を添加した。添加後Ｏ″Ｃで２０分間静置した後、１０
０００＊ｇで１０分間遠心分離した。上澄液をとり、こ
れを蒸溜水で３倍に稀釈した後、２６０ｍｍの吸光度を
測定した。酸可溶画分中のヌクレオチドの量はＤＮＡ由
来ヌクレオチドの平均モル吸光係数を１００００として
計算した。核酸分解酵素活性１単位は上記実験方法にお
いて、熱変性ＤＮＡに作用して３７℃、１分間に１マイ
クルモルのヌクレオチドを生産する酵素量である。
ＭのＮａｐ７？溶液中に溶解した後、１０分間１００°
Ｃに加熱し、次いで急速に氷冷して調製した。０．３Ｍ
酢酸ヘロ＋ −／ｌ／ （ｐＨ５，３） ０．２ ｍｌ
および基質溶液（熱変性ＤＮＡ ５ Ｗ／ ｒｎｌ ）
０．２ ｍｔを含む試験管を３７℃の恒温槽に浸漬し
、次に粗酵素液Ｑ、 ｌ ｍｌを添加し、１５分間反応
させた後、直ちに７．５重量−過塩素酸水溶液１ ｍｇ
を添加した。添加後Ｏ″Ｃで２０分間静置した後、１０
０００＊ｇで１０分間遠心分離した。上澄液をとり、こ
れを蒸溜水で３倍に稀釈した後、２６０ｍｍの吸光度を
測定した。酸可溶画分中のヌクレオチドの量はＤＮＡ由
来ヌクレオチドの平均モル吸光係数を１００００として
計算した。核酸分解酵素活性１単位は上記実験方法にお
いて、熱変性ＤＮＡに作用して３７℃、１分間に１マイ
クルモルのヌクレオチドを生産する酵素量である。
本発明によれば穀類の少なくとも１種を含有する培地を
用いることにより、液内培養を可能にし、高活性の核酸
分解酵素の工業的生産を可能にする。更に培養液中には
従来法におけるような金属イオンの混入等は見られない
。
用いることにより、液内培養を可能にし、高活性の核酸
分解酵素の工業的生産を可能にする。更に培養液中には
従来法におけるような金属イオンの混入等は見られない
。
以下に実施例を挙げて本発明を更に詳細に説明するが、
本発明はこれら実施例に限定されるものではない。
本発明はこれら実施例に限定されるものではない。
実施例 １
米糠を培地成分とし、米糠３重量％を含有する水分散液
培地に、そのｐＨ緩衝性を持たせるため、ＫＭ ＊Ｐ
Ｏ４を０．１０重量％の割合で加え、ｐＨを６．０に調
整した。こあ液体培地１００ｍ１を５００ゴ三角フラス
コに分注後、１２０℃で２０分間加熱して滅菌した後、
ペニシリウム ジャンチネラムＩＦＯ−４６５３を接種
し、２８℃で３日間振盪培養を行なった。この培養終了
後、Ｐ紙＆５ｃ（東洋科学産業社製）を用いて濾過した
。
培地に、そのｐＨ緩衝性を持たせるため、ＫＭ ＊Ｐ
Ｏ４を０．１０重量％の割合で加え、ｐＨを６．０に調
整した。こあ液体培地１００ｍ１を５００ゴ三角フラス
コに分注後、１２０℃で２０分間加熱して滅菌した後、
ペニシリウム ジャンチネラムＩＦＯ−４６５３を接種
し、２８℃で３日間振盪培養を行なった。この培養終了
後、Ｐ紙＆５ｃ（東洋科学産業社製）を用いて濾過した
。
この培養Ｐ液の核酸分解酵素活性は２．３ Ｕ ／ｍｌ
であった。
であった。
実施例 ２
培地成分として小麦粒２重量％および米糠１重量％を含
有する水性培地ｐＨの緩衝能を持たせるためにＫＭ ｚ
１？ Ｏａを０．１重量％の割合で加え、ｐｌ（を６．
Ｏ６１ｍ調整した。この水性培地１００ｍ１を５００
ｍＪ三角フラスコに分注後、１２０℃で２０分間加熱し
て滅菌後、ペニシリウム ステッキイエＸＰｏ −７１
３３を接種し、２８℃で３日間振盪培養を行なった。こ
の培養終了後、Ｆ紙Ａ５ｃ（東洋科学産業社製）を用い
て濾過した。この培養Ｐ液の核酸分解酵素活性は０．５
Ｕ／ｒ／Ｌｌであった。
有する水性培地ｐＨの緩衝能を持たせるためにＫＭ ｚ
１？ Ｏａを０．１重量％の割合で加え、ｐｌ（を６．
Ｏ６１ｍ調整した。この水性培地１００ｍ１を５００
ｍＪ三角フラスコに分注後、１２０℃で２０分間加熱し
て滅菌後、ペニシリウム ステッキイエＸＰｏ −７１
３３を接種し、２８℃で３日間振盪培養を行なった。こ
の培養終了後、Ｆ紙Ａ５ｃ（東洋科学産業社製）を用い
て濾過した。この培養Ｐ液の核酸分解酵素活性は０．５
Ｕ／ｒ／Ｌｌであった。
実施例 ３
培地成分として大豆粕１重量％および小麦粒２重量％を
含有する水性培地に、培地ｐＨの緩衝能を持たせるため
、ＫＨ２ＰＯ４を０．１重量％の割合で加え、ｐＨを６
．０に調整した。この水性培地１００罰を５００ｍ１三
角フラスコに分注し、１２０℃で２０分間加熱滅菌した
後ペニシリウム ジャンチネラムＩＦＯ−４６５１を接
種し、２８℃で４日間振盪培養を行なった。この培養終
了後をＰ紙Ａ５ ｏを用いて濾過した。この培養ｐ液の
核酸分解酵素活性はＱ、５ Ｕ ／ ｒｕｌであった０ 実施例 ４ 培地成分として米糠１重量％、小麦粒２重量％を含有す
る水性培地を用いて３０／ジヤーで液内培養を行なった
。培地を１２０°Ｃで２０分間加熱して滅菌した後、ペ
ニシリウム ジャンチネラムＩＦＯ−４６５３を接種し
た。培地量は２０Ｉ！とじた。攪拌条件２５ Ｏｒｐｍ
、通気は０５ｖｖｕ、湿度は２８℃で実施した。４日間
培養した時点での培養Ｐ液中の核酸分解酵素活性は４，
５ｖ ／ ｍｌであった。
含有する水性培地に、培地ｐＨの緩衝能を持たせるため
、ＫＨ２ＰＯ４を０．１重量％の割合で加え、ｐＨを６
．０に調整した。この水性培地１００罰を５００ｍ１三
角フラスコに分注し、１２０℃で２０分間加熱滅菌した
後ペニシリウム ジャンチネラムＩＦＯ−４６５１を接
種し、２８℃で４日間振盪培養を行なった。この培養終
了後をＰ紙Ａ５ ｏを用いて濾過した。この培養ｐ液の
核酸分解酵素活性はＱ、５ Ｕ ／ ｒｕｌであった０ 実施例 ４ 培地成分として米糠１重量％、小麦粒２重量％を含有す
る水性培地を用いて３０／ジヤーで液内培養を行なった
。培地を１２０°Ｃで２０分間加熱して滅菌した後、ペ
ニシリウム ジャンチネラムＩＦＯ−４６５３を接種し
た。培地量は２０Ｉ！とじた。攪拌条件２５ Ｏｒｐｍ
、通気は０５ｖｖｕ、湿度は２８℃で実施した。４日間
培養した時点での培養Ｐ液中の核酸分解酵素活性は４，
５ｖ ／ ｍｌであった。
以上詳細に説明したように、本発明によれば穀類を用い
て液内培養を可能にしたことにより工業的生産に適した
核酸分解酵素の製造方法が提供され、しかも製造方法が
簡便で、酵素生産量が高く、金属イオンの混入は見られ
ずすぐれた効果を有する。
て液内培養を可能にしたことにより工業的生産に適した
核酸分解酵素の製造方法が提供され、しかも製造方法が
簡便で、酵素生産量が高く、金属イオンの混入は見られ
ずすぐれた効果を有する。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １、核酸分解酵素生産能を有する糸状菌を培養して核酸
分解酵素を製造する方法において、穀類の少なくとも１
種を含有する培地を用いて液内培養を行なうことを特徴
とする核酸分解酵素の製造法。 ２、糸状菌がペニシリウム属に属する糸状菌である特許
請求の範囲第１項記載の核酸分解酵素の製造法。 ３、糸状菌がペニシリウム シトリナムＩＦＯ−４６３
１、ＩＦＯ−６０２６、ＩＦＯ−６２２５、ＩＦＯ−７
７８４；ペニシリウム ジヤンチネラム ＩＦＯ−４６
５１３、ＩＦＯ−４６５２、ＩＦＯ−４６５３、ＩＦＯ
−４６５４；ペニシリウム エキスパンサムＩＦＯ−５
４５３；ペニシリウム メレアグリナムＩＦＯ−６２３
２、ＩＦＯ−７９２６、ＩＦＯ−７９２７；ペニシリウ
ム ステツキイＩＦＯ−６０２８、ＩＦＯ−７１３３で
ある特許請求の範囲第２項記載の核酸分解酵素の製造法
。 ４、穀類が小麦麩、大豆粕または米糠である特許請求の
範囲第１項記載の核酸分解酵素の製造法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP11610087A JPS63279789A (ja) | 1987-05-13 | 1987-05-13 | 核酸分解酵素の製造法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP11610087A JPS63279789A (ja) | 1987-05-13 | 1987-05-13 | 核酸分解酵素の製造法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS63279789A true JPS63279789A (ja) | 1988-11-16 |
Family
ID=14678701
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP11610087A Pending JPS63279789A (ja) | 1987-05-13 | 1987-05-13 | 核酸分解酵素の製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS63279789A (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102321545A (zh) * | 2011-10-21 | 2012-01-18 | 福建农林大学 | 一株产雷公藤甲素的内生真菌 |
| CN106318926A (zh) * | 2015-06-19 | 2017-01-11 | 安琪酵母股份有限公司 | 一种桔青霉发酵产核酸酶p1的生产方法 |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS4839475A (ja) * | 1971-09-30 | 1973-06-09 | ||
| JPS51101190A (en) * | 1975-02-27 | 1976-09-07 | Yamasa Shoyu Kk | 5** hosuhojesuteraazeno seizoho |
-
1987
- 1987-05-13 JP JP11610087A patent/JPS63279789A/ja active Pending
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS4839475A (ja) * | 1971-09-30 | 1973-06-09 | ||
| JPS51101190A (en) * | 1975-02-27 | 1976-09-07 | Yamasa Shoyu Kk | 5** hosuhojesuteraazeno seizoho |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102321545A (zh) * | 2011-10-21 | 2012-01-18 | 福建农林大学 | 一株产雷公藤甲素的内生真菌 |
| CN106318926A (zh) * | 2015-06-19 | 2017-01-11 | 安琪酵母股份有限公司 | 一种桔青霉发酵产核酸酶p1的生产方法 |
| CN106318926B (zh) * | 2015-06-19 | 2019-10-25 | 安琪酵母股份有限公司 | 一种桔青霉发酵产核酸酶p1的生产方法 |
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