JPS63185372A - 微生物の育種方法 - Google Patents
微生物の育種方法Info
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- JPS63185372A JPS63185372A JP62017734A JP1773487A JPS63185372A JP S63185372 A JPS63185372 A JP S63185372A JP 62017734 A JP62017734 A JP 62017734A JP 1773487 A JP1773487 A JP 1773487A JP S63185372 A JPS63185372 A JP S63185372A
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Landscapes
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
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Description
【発明の詳細な説明】
産業上の利用分野
本発明は、核酸関連物質生産菌の育種方法に関する。
核酸関連物質は、調味料、医薬品原料として有用である
ことから、本発明は食品及び医薬品工業の分野に属する
。
ことから、本発明は食品及び医薬品工業の分野に属する
。
従来の技術
これまでのブレビバクテリウム属、コリネバクテリウム
属に属する核酸生産菌の育種方法としては、紫外線照射
、変異誘起剤等で処理することによって変異株を誘導・
分離するか、または自然に生起する突然変異株を分離し
、その中から目的物の生産性の向上した菌株を選択する
方法が用いられてきた。
属に属する核酸生産菌の育種方法としては、紫外線照射
、変異誘起剤等で処理することによって変異株を誘導・
分離するか、または自然に生起する突然変異株を分離し
、その中から目的物の生産性の向上した菌株を選択する
方法が用いられてきた。
発明が解決しようとする問題点
しかしながら、自然に起こる突然変異は極めて頻度が低
いという問題点があり、一方、変異誘起剤で処理する方
法では目的とする性質以外に必ずしも好ましくない副次
的な影響を伴うことが多いという問題点があり、この様
な問題のより少ない菌株改良方法が望まれていた。
いという問題点があり、一方、変異誘起剤で処理する方
法では目的とする性質以外に必ずしも好ましくない副次
的な影響を伴うことが多いという問題点があり、この様
な問題のより少ない菌株改良方法が望まれていた。
問題点を解決するための手段
核酸関連物質の生産菌であるブレビバクテリウム属およ
びコリネバクテリウム属の細菌は産業上重要な微生物で
あり、生産能力のより一層向上した菌株を取得すること
が望まれている。本発明者らは、これらの物質の生産性
が改善された菌株を得るため種々の検討を重ねた結果、
ブレビバクテリウム属およびコリネバクテリウム属の細
菌の細胞（栄養細胞）を高張液中でプロトプラスト化し
た後、正常細胞に再生させることによって、菌の生育の
遅れなどの有害な副次的影響を伴うことなく、生産性の
改善された菌株が得られることを見いだし、本発明を完
成するに至った。
びコリネバクテリウム属の細菌は産業上重要な微生物で
あり、生産能力のより一層向上した菌株を取得すること
が望まれている。本発明者らは、これらの物質の生産性
が改善された菌株を得るため種々の検討を重ねた結果、
ブレビバクテリウム属およびコリネバクテリウム属の細
菌の細胞（栄養細胞）を高張液中でプロトプラスト化し
た後、正常細胞に再生させることによって、菌の生育の
遅れなどの有害な副次的影響を伴うことなく、生産性の
改善された菌株が得られることを見いだし、本発明を完
成するに至った。
以下に本発明の詳細な説明する。
本発明は、核酸関連物質生産能を有するブレビバクテリ
ウム属、コリネバクテリウム属の細菌の細胞を高張液中
でプロトプラスト化したのち、正常細胞に復帰再生させ
、核酸関連物質の生産能が改善されたプロトプラスト再
生株に分離することによる微生物の育種方法を提供する
。
ウム属、コリネバクテリウム属の細菌の細胞を高張液中
でプロトプラスト化したのち、正常細胞に復帰再生させ
、核酸関連物質の生産能が改善されたプロトプラスト再
生株に分離することによる微生物の育種方法を提供する
。
本発明で使用する微生物としては、ブレビバクテリウム
属およびコリネバクテリウム属の細菌であれば、野生株
、薬剤耐性、栄養要求性等を有する変異株等、核酸関連
物質の生産性の有無にかかわらすいずれでも使用するこ
とができる。
属およびコリネバクテリウム属の細菌であれば、野生株
、薬剤耐性、栄養要求性等を有する変異株等、核酸関連
物質の生産性の有無にかかわらすいずれでも使用するこ
とができる。
栄養細胞を得るために使用する培地は、ブレビバクテリ
ウム属および／またはコリネバクテリウム属の細菌が生
育できるものであればいずれでも使用できる。例えば、
ＮＢ培地（第１表）等の完全栄養培地や、Ｇ■培地（第
２表）のような半合成培地等が使用できる。
ウム属および／またはコリネバクテリウム属の細菌が生
育できるものであればいずれでも使用できる。例えば、
ＮＢ培地（第１表）等の完全栄養培地や、Ｇ■培地（第
２表）のような半合成培地等が使用できる。
第 １ 表
粉末ブイヨン ２０ｇ／ｊ１！酵母エキス
５ｇ／β ｐＨ７，２ 第 ２ 表 グルコース １５ｇ／β（ＮＨ４） ２
Ｓ［＋４ ８ ｇ ／β尿 素
１．２ｇ／ｊ！酵母エキス
１．２ｇ／ｊ’ＫＨ２Ｐｏ、
０．５ ｇ ／ 、ｉ！に２８ＰＯ，０，５ｇ
／ １ ＭｇＳＯ４・７Ｈ２００，１ｇ／β Ｆｅ５０＋ ４１１２０ ２ ｍｇ／
Ｒ２ｎ５０，４ＨＪ １ ｍｇ／β
Ｍｎ５Ｏ＋・４−６＋−＋２ｏ １
ｍｇ／ ｊｉ！ビオチン ０．１ ｍ
ｇ／ 、ｉｌ’サイアミン塩酸塩 ２ｍｇ／ｉ
！パントテン酸カルシウム １０ｍｇ／、ｆ’アデニン
１００ｍｇ／Ａクアニン
１００ｍｇ／、ｉ！ｐＨ７，２ この培地にブレビバクテリウム属またはコリネバクテリ
ウム属の細菌を接種し、振とう培養する。
５ｇ／β ｐＨ７，２ 第 ２ 表 グルコース １５ｇ／β（ＮＨ４） ２
Ｓ［＋４ ８ ｇ ／β尿 素
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１００ｍｇ／Ａクアニン
１００ｍｇ／、ｉ！ｐＨ７，２ この培地にブレビバクテリウム属またはコリネバクテリ
ウム属の細菌を接種し、振とう培養する。
菌の対数増殖期の初期に細胞壁合成阻害剤を添加する。
細胞壁合成を阻害する薬剤としては、ペニシリン、グリ
シン等を使用することができる。これら薬剤の使用量は
、微生物の生育を半ば抑制する濃度以下が望ましく、ペ
ニシリンの場合には培養液中に０．１〜２．０μｇ／ｍ
１程度、またグリシンの場合には１０〜ｂ に添加する。薬剤添加後さらに培養を続け、数世代増殖
させて栄養細胞を得る。
シン等を使用することができる。これら薬剤の使用量は
、微生物の生育を半ば抑制する濃度以下が望ましく、ペ
ニシリンの場合には培養液中に０．１〜２．０μｇ／ｍ
１程度、またグリシンの場合には１０〜ｂ に添加する。薬剤添加後さらに培養を続け、数世代増殖
させて栄養細胞を得る。
培養液から集菌し、培地および高張液にて洗浄したのち
、それぞれの高張培地に懸濁し、溶菌酵素処理を行う。
、それぞれの高張培地に懸濁し、溶菌酵素処理を行う。
洗浄に用いる培地としては、前記のＮＢ培地、ＧＩＩＩ
培地等が使用でき、高張液としてはＰ３高張液（第３表
）が使用できる。
培地等が使用でき、高張液としてはＰ３高張液（第３表
）が使用できる。
第 ３ 表
ＮａＣｊ２７０ｍＭ
ＭｇＣＲ２５ｍＭ
ＣａＣＬ ５ｍＭ
Ｎ−Ｔｒｉｓ（ｈｙｄｒｏｘｙｍｅｔｈｙｌ）−ｍｅｔ
ｈｙ＋−２−ａｍｉｎ。
ｈｙ＋−２−ａｍｉｎ。
５ｕｌｆｏｎｉｃ ａｃｉｄ ２５ ｍＭ
Ｄ−３ｏｒｂｉｔｏｌ １．６Ｍ ｐＨ７，６ また高張培地としては栄養培地、半合成培地、最少培地
等に高張化薬剤として０．２５〜０．６Ｍンユークロー
ス、０．３〜０．７ Ｍコハク酸２ナトリウム、０．４
〜２．０ Ｍソルビトールのいずれかを添加したもの、
あるいはＰ３高張液等を用いることができる。溶菌酵素
処理は、卵白リゾチームあるいはアクロモペプチダーゼ
等を何れも０．１〜５０ｍｇ ／ ｍ ｌ程度の濃度と
なるように添加し、３０〜４０℃にて約５〜２０時間保
持する。プロトプラストの生成は光学顕微鏡で確認する
ことができる。
Ｄ−３ｏｒｂｉｔｏｌ １．６Ｍ ｐＨ７，６ また高張培地としては栄養培地、半合成培地、最少培地
等に高張化薬剤として０．２５〜０．６Ｍンユークロー
ス、０．３〜０．７ Ｍコハク酸２ナトリウム、０．４
〜２．０ Ｍソルビトールのいずれかを添加したもの、
あるいはＰ３高張液等を用いることができる。溶菌酵素
処理は、卵白リゾチームあるいはアクロモペプチダーゼ
等を何れも０．１〜５０ｍｇ ／ ｍ ｌ程度の濃度と
なるように添加し、３０〜４０℃にて約５〜２０時間保
持する。プロトプラストの生成は光学顕微鏡で確認する
ことができる。
この様にして調整したプロトプラストは、高張寒天培地
上において生育してコロニーを形成し、栄養細胞に再生
する。再生を行わせるためには、通常３日から２０日間
、２０〜４０℃に保つ。高張寒天培地としては、栄養培
地、半合成培地、最少培地等に０．２５〜０．６０Ｍの
シュークロース、または０．３〜０．７Ｍのコハク酸２
ナトリウムを添加したもの等が用いられる。
上において生育してコロニーを形成し、栄養細胞に再生
する。再生を行わせるためには、通常３日から２０日間
、２０〜４０℃に保つ。高張寒天培地としては、栄養培
地、半合成培地、最少培地等に０．２５〜０．６０Ｍの
シュークロース、または０．３〜０．７Ｍのコハク酸２
ナトリウムを添加したもの等が用いられる。
かくして得たプロトプラスト再生コロニーを分離すれば
、その菌株中から５′−イノシン酸、５′−キサンチル
酸、イノシン等の核酸関連物質の発酵生産能の改善され
た菌株を、通常の発酵生産試験方法によって選択、分離
することができる。
、その菌株中から５′−イノシン酸、５′−キサンチル
酸、イノシン等の核酸関連物質の発酵生産能の改善され
た菌株を、通常の発酵生産試験方法によって選択、分離
することができる。
以下、実施例にて詳細に説明する。
実施例１゜
５′−イノシン酸生産能を有するブレビバクテリウム・
アンモニアゲネスＦＥＲＭ Ｐ’−３７９０をＮＢ培
地で３０℃、１６時間振とう培養し、その種培養液Ｑ、
３ｍｌをＧ■培地３ｍｌの入ったＬ字型試験管に接種し
、モノー型培養機を用いて３０℃で振とう培養した。対
数増殖期の初期（菌体濃度１０６個／ｍ１）にＱ、３ｕ
／ｍ＋になるようにペニシリンＧを添加し、さらに３時
間培養を続けた。培養液から３．００Ｏｒｐｍ、 １０
分間の遠心分離により細胞を回収しＧ■培地で洗浄後Ｇ
Ｉ培地２ｍｌに懸濁した。
アンモニアゲネスＦＥＲＭ Ｐ’−３７９０をＮＢ培
地で３０℃、１６時間振とう培養し、その種培養液Ｑ、
３ｍｌをＧ■培地３ｍｌの入ったＬ字型試験管に接種し
、モノー型培養機を用いて３０℃で振とう培養した。対
数増殖期の初期（菌体濃度１０６個／ｍ１）にＱ、３ｕ
／ｍ＋になるようにペニシリンＧを添加し、さらに３時
間培養を続けた。培養液から３．００Ｏｒｐｍ、 １０
分間の遠心分離により細胞を回収しＧ■培地で洗浄後Ｇ
Ｉ培地２ｍｌに懸濁した。
この懸濁液を２分しその一方をとりＮＢ培地で希釈し、
ＮＢ寒天培地（ＮＢに１．４％寒天添加）プレートに塗
布接種して生菌数（ｃｆｕ／ｍｌ）を求めた（プロトプ
ラスト化処理前低張条件生育可能菌数）。
ＮＢ寒天培地（ＮＢに１．４％寒天添加）プレートに塗
布接種して生菌数（ｃｆｕ／ｍｌ）を求めた（プロトプ
ラスト化処理前低張条件生育可能菌数）。
残りの懸濁液を遠心分離にかけ集菌し、等容量の２．０
ｍｇ／ｍｌ卵白リゾチーム、０．６ ｍｇ／ｍｌアク
ロモペプチダーゼ含有Ｐ３高張溶液に再懸濁し、３０℃
に静置した。処理１６時間後に光学顕微鏡でプロトプラ
ストの形成度を観察するとともに、細胞をＰ３高張液で
遠心洗浄後２分し、一方はＰ３高張液で希釈して高張寒
天培地（ＧＩ培地に０．５Ｍコハク酸２す） ＩＪウム
、１．４％寒天を添加）へ塗布し、他方はＮＢ培地で希
釈してＮＢ寒天培地へ塗布して、両者を３０℃で培養し
た。プレート上に出現するコロニーは各々高張条件で生
育するコロニー（栄養細胞とプロトプラスト再生コロニ
ー）、低張条件で生育するコロニー（栄養細胞のみ）を
示しており、前者は１４４日目後者は２日目にコロニー
数を測定した。その結果を第４表に示す。
ｍｇ／ｍｌ卵白リゾチーム、０．６ ｍｇ／ｍｌアク
ロモペプチダーゼ含有Ｐ３高張溶液に再懸濁し、３０℃
に静置した。処理１６時間後に光学顕微鏡でプロトプラ
ストの形成度を観察するとともに、細胞をＰ３高張液で
遠心洗浄後２分し、一方はＰ３高張液で希釈して高張寒
天培地（ＧＩ培地に０．５Ｍコハク酸２す） ＩＪウム
、１．４％寒天を添加）へ塗布し、他方はＮＢ培地で希
釈してＮＢ寒天培地へ塗布して、両者を３０℃で培養し
た。プレート上に出現するコロニーは各々高張条件で生
育するコロニー（栄養細胞とプロトプラスト再生コロニ
ー）、低張条件で生育するコロニー（栄養細胞のみ）を
示しており、前者は１４４日目後者は２日目にコロニー
数を測定した。その結果を第４表に示す。
第 ４ 表
０．３ １．５Ｘ１０９７．６Ｘ１０８３．８Ｘ１０’
無添加 ２．４Ｘ１０９ ２．１刈０９２．０
×１０９リゾチームおよびアクロモペプチダーゼで処理
することによりペニシリン処理細胞がプロトプラスト化
され、かつ高張条件下において溶菌酵素処理部菌数に対
し約５０％の高い効率で再生株が得られた。
無添加 ２．４Ｘ１０９ ２．１刈０９２．０
×１０９リゾチームおよびアクロモペプチダーゼで処理
することによりペニシリン処理細胞がプロトプラスト化
され、かつ高張条件下において溶菌酵素処理部菌数に対
し約５０％の高い効率で再生株が得られた。
このようにして得られたプロトプラスト再生株の内から
ＩＰ８ＦＥＲＭ ｔｌＰ−１２５８を選び５′−イノ
シン酸の生産性を調べた。
ＩＰ８ＦＥＲＭ ｔｌＰ−１２５８を選び５′−イノ
シン酸の生産性を調べた。
ブレビバクテリウム・アンモニアゲネスＦＥＲＭ Ｐ
−３７９０及びＩＰ８ＦＥＲＭ ０Ｐ−１２５８を各
々ＮＢ培地２Ｑｍｌを含む２５ （１ｍｌ容三角フラス
コに一白金耳接種し、３０℃２４時間培養した種培養を
発酵培地（グルコース１３０ ｇ、 Ｋ）１２ＰＯ４１
０ｇＸＫ２ＨＰＯ４１０ｇ、 Ｍｇ５Ｏｔ・７Ｈ２０ｌ
ｏｇ。
−３７９０及びＩＰ８ＦＥＲＭ ０Ｐ−１２５８を各
々ＮＢ培地２Ｑｍｌを含む２５ （１ｍｌ容三角フラス
コに一白金耳接種し、３０℃２４時間培養した種培養を
発酵培地（グルコース１３０ ｇ、 Ｋ）１２ＰＯ４１
０ｇＸＫ２ＨＰＯ４１０ｇ、 Ｍｇ５Ｏｔ・７Ｈ２０ｌ
ｏｇ。
コーンスチーブリ力−２０ｇ１ＣａＣＩ１２・２■２０
０、 ｌ ｇ ５ｐｅｓｏ＜・７Ｌ０１０ ｍｇＸＺｎ
ＳＯ４・７Ｈ２０２ｍｇ、ＭｎＣ１２２・４−６Ｈ２０
２＋１１ｇ５ビオチン ３０．ｉｃｇ、ビタミンＢ＋
５ｍｇ、パントテン酸カルシウム１０ｍｇ、ニコチン
酸５ｍｇ１アデニン１００ｍｇ、グＴニン１００ｍｇ、
尿素４ｇを純水１１に含み、ｐ Ｈ７，６に調整した培
地）２０ｍｌを含むバッフルプレート付２５３ｍｌ容三
角フラスコに１０％容量の割合で植菌し、３０℃で４日
間振とう培養（２２Ｏｒｐｍ） シた。４８および７
２時間目に別殺菌した尿素を２ｇ／Ｉｔの割合で添加し
た。この結果蓄積した５′−イノシン酸の量を第５表に
示す。
０、 ｌ ｇ ５ｐｅｓｏ＜・７Ｌ０１０ ｍｇＸＺｎ
ＳＯ４・７Ｈ２０２ｍｇ、ＭｎＣ１２２・４−６Ｈ２０
２＋１１ｇ５ビオチン ３０．ｉｃｇ、ビタミンＢ＋
５ｍｇ、パントテン酸カルシウム１０ｍｇ、ニコチン
酸５ｍｇ１アデニン１００ｍｇ、グＴニン１００ｍｇ、
尿素４ｇを純水１１に含み、ｐ Ｈ７，６に調整した培
地）２０ｍｌを含むバッフルプレート付２５３ｍｌ容三
角フラスコに１０％容量の割合で植菌し、３０℃で４日
間振とう培養（２２Ｏｒｐｍ） シた。４８および７
２時間目に別殺菌した尿素を２ｇ／Ｉｔの割合で添加し
た。この結果蓄積した５′−イノシン酸の量を第５表に
示す。
第 ５ 表
ＦＥＲＭ Ｐ−３７９０２０，８
Ｉ Ｐ８ ２４．３
プロトプラスト再生株では５′−イノシン酸生産性の改
善が認められた。
善が認められた。
実施例２゜
５′−キサンチル酸生産能を有するブレビバクテリウム
・アンモニアゲネスＡＴＣＣ２１０７５を用い、ペニシ
リン濃度をＱ、５ｕ／ｍｌとする以外は実施例１と同様
にしてプロトプラスト再生を行った。出現コロニー数を
第６表に示す。
・アンモニアゲネスＡＴＣＣ２１０７５を用い、ペニシ
リン濃度をＱ、５ｕ／ｍｌとする以外は実施例１と同様
にしてプロトプラスト再生を行った。出現コロニー数を
第６表に示す。
第 ６ 表
０．５ １．２Ｘ１０９５．０Ｘ１０８３．６Ｘ１０’
無添加 ２．３Ｘ１０９２．ＩＸｌ［１’
２．ＩＸｌ［１”溶菌酵素処理によりペニシリン処理細
胞がプロトプラスト化され、かつ高張寒天培地にて約４
０％の高い頻度で再生株が得られた。
無添加 ２．３Ｘ１０９２．ＩＸｌ［１’
２．ＩＸｌ［１”溶菌酵素処理によりペニシリン処理細
胞がプロトプラスト化され、かつ高張寒天培地にて約４
０％の高い頻度で再生株が得られた。
このようにして得られたプロトプラスト再生株の内から
ＸＰ１２３ ＦＥＲＭ ＢＰ−１２６１を選び５７−
キサンチル酸の生産性を調べた。
ＸＰ１２３ ＦＥＲＭ ＢＰ−１２６１を選び５７−
キサンチル酸の生産性を調べた。
ブレビバクテリウム・アンモニアゲネスＡＴＣＣ２１０
７５及びＸＰ１２３ ＦＥＲＭ ＢＰ−１２６１を各
々ＮＢ培地２０ｍ１を含む２５ Ｑｍｌ容三角フラスコ
に一白金耳接種し、３０℃、２４時間培養した種培養を
実施例１と同じ発酵培地２０ｍ１を含む２５０ｍ１容三
角フラスコに１０％容量の割合で植菌し、３０℃で４日
間振とう培養（２２Ｏｒｌ）ｍ） した。４８ふよび７
２時間目に別殺菌した尿素を２ｇ／βの割合で添加した
。この結果蓄積した５′−キサンチル酸の量を第７表に
示す。
７５及びＸＰ１２３ ＦＥＲＭ ＢＰ−１２６１を各
々ＮＢ培地２０ｍ１を含む２５ Ｑｍｌ容三角フラスコ
に一白金耳接種し、３０℃、２４時間培養した種培養を
実施例１と同じ発酵培地２０ｍ１を含む２５０ｍ１容三
角フラスコに１０％容量の割合で植菌し、３０℃で４日
間振とう培養（２２Ｏｒｌ）ｍ） した。４８ふよび７
２時間目に別殺菌した尿素を２ｇ／βの割合で添加した
。この結果蓄積した５′−キサンチル酸の量を第７表に
示す。
第 ７ 表
菌 株 ５′−キサンチル酸（ｇ／ｌΔＴ
ＣＣ２１０７５１４，８ ＸＰ１２３ １７．３プロトプラ
スト再生株では５′−キサンチル酸生産性の改善が認め
られた。
ＣＣ２１０７５１４，８ ＸＰ１２３ １７．３プロトプラ
スト再生株では５′−キサンチル酸生産性の改善が認め
られた。
実施例３゜
イノシン生産能を有するブレビバクテリウム・アンモニ
アゲネスＡＴＣＣ２１４７７を用い、実施例１と同様に
してプロトプラスト再生を行った。
アゲネスＡＴＣＣ２１４７７を用い、実施例１と同様に
してプロトプラスト再生を行った。
出現コロニー数を第８表に示す。
第 ８ 表
０．３ １．７Ｘ１０９８．５Ｘ１０８２．６Ｘ１０’
無添加 ２．６Ｘ１０９２．５Ｘ１０９２．４Ｘ
１０’溶菌酵素処理によりペニシリン処理細胞がプロト
プラスト化され、かつ高張寒天培地にて約５０％の高い
頻度で再生株が得られた。
無添加 ２．６Ｘ１０９２．５Ｘ１０９２．４Ｘ
１０’溶菌酵素処理によりペニシリン処理細胞がプロト
プラスト化され、かつ高張寒天培地にて約５０％の高い
頻度で再生株が得られた。
このようにして得られたプロトプラスト再生株の内から
ｌＲ２５ＦＥＲＭ ＢＰ−１２６０を選びイノシンの
生産性を調べた。
ｌＲ２５ＦＥＲＭ ＢＰ−１２６０を選びイノシンの
生産性を調べた。
ブレビバクテリウム・アンモニアゲネスＡＴＣＣ２１４
７７およびｌＲ２５ＦＥＲＭ ０Ｐ−１２６０を用い
実施例１と同じ培地及び方法により蓄積し菌 株
イノシン（ｇ／１２）ＡＴＣＣ２１４７７６，
０ Ｉ Ｒ２５８，４ プロトプラスト再生株ではイノシン生産性の改善がｇ忍
められた。
７７およびｌＲ２５ＦＥＲＭ ０Ｐ−１２６０を用い
実施例１と同じ培地及び方法により蓄積し菌 株
イノシン（ｇ／１２）ＡＴＣＣ２１４７７６，
０ Ｉ Ｒ２５８，４ プロトプラスト再生株ではイノシン生産性の改善がｇ忍
められた。
実施例４゜
５′−イノシン酸生産能を有するコリネバクテリウム・
グルタミクムＡＴＣＣ１９１８５を用い、実施例１と同
様にしてプロトプラスト再生を行った。出現コロニー数
を第１０表に示す。
グルタミクムＡＴＣＣ１９１８５を用い、実施例１と同
様にしてプロトプラスト再生を行った。出現コロニー数
を第１０表に示す。
第 １０ 表
０．３ ２．０ｘ１０９６．３ｘｌＯ８ｇ、１ｘ１０３
無添加 ２．５Ｘ１０” ２．４Ｘ１０
９２．３Ｘ１０”溶菌酵素処理によりペニシリン処理細
胞がプロトプラスト化され、かつ高張寒天培地にて約３
０％の高い頻度で再生株が得られた。
無添加 ２．５Ｘ１０” ２．４Ｘ１０
９２．３Ｘ１０”溶菌酵素処理によりペニシリン処理細
胞がプロトプラスト化され、かつ高張寒天培地にて約３
０％の高い頻度で再生株が得られた。
このようにして得られたプロトプラスト再生株の内から
ＩＰ９６ ＦＥＲＭ ＢＰ−１２５９を選び５′−
イノシン酸の生産性を調べた。コリネバクテリウム・グ
ルタミクムＡＴＣＣ１９１８５及びＩＰ９６ ＦＥＲ
Ｍ ＢＰ−１２５９を各々ＮＢ培地２ Ｑｍｌを含む
２５０ｍｌ容三角フラスコに一白金耳接種し、３０℃、
２４時間培養した種培養を発酵培地（グルコース１００
ｇ、に１１２Ｐ［］４１０ ｇ 、 Ｋ２）ＩＰ［１４
１０ｇ、ＭｇＳ口、・７１（２０１０ｇ１コ一ンスチー
プリカー２０ｇ ％ ｐｅｓｏ４・’？＋＋２ｏ １０
ｍｇ、 Ｚｎ５Ｏ＜４）１２［］ １１０ｍ１１Ｍｎ
５Ｏ＊７Ｈ２０１０ｍｇ、ビオチン２００ｘｒ、ビタミ
ン８１０．２ｍｇ、アデニン１００ｍｇ、尿素３ｇを純
水１１に含みｐ Ｈ７，２に調整した培地）２０ｍｌを
含む２５０＋ｔ＋１容三角フラスコに１０％容量の割合
で植菌し、３０℃で４日間振とう培養（２２Ｏｒｐｍ＞
Ｌ、た。
ＩＰ９６ ＦＥＲＭ ＢＰ−１２５９を選び５′−
イノシン酸の生産性を調べた。コリネバクテリウム・グ
ルタミクムＡＴＣＣ１９１８５及びＩＰ９６ ＦＥＲ
Ｍ ＢＰ−１２５９を各々ＮＢ培地２ Ｑｍｌを含む
２５０ｍｌ容三角フラスコに一白金耳接種し、３０℃、
２４時間培養した種培養を発酵培地（グルコース１００
ｇ、に１１２Ｐ［］４１０ ｇ 、 Ｋ２）ＩＰ［１４
１０ｇ、ＭｇＳ口、・７１（２０１０ｇ１コ一ンスチー
プリカー２０ｇ ％ ｐｅｓｏ４・’？＋＋２ｏ １０
ｍｇ、 Ｚｎ５Ｏ＜４）１２［］ １１０ｍ１１Ｍｎ
５Ｏ＊７Ｈ２０１０ｍｇ、ビオチン２００ｘｒ、ビタミ
ン８１０．２ｍｇ、アデニン１００ｍｇ、尿素３ｇを純
水１１に含みｐ Ｈ７，２に調整した培地）２０ｍｌを
含む２５０＋ｔ＋１容三角フラスコに１０％容量の割合
で植菌し、３０℃で４日間振とう培養（２２Ｏｒｐｍ＞
Ｌ、た。
４８および７２時間目に別殺菌した尿素を２ｇ／ｌの割
合で添加した。この結果蓄積した５′−イノシン酸の量
を第１１表に示す。
合で添加した。この結果蓄積した５′−イノシン酸の量
を第１１表に示す。
第 １１ 表
菌 株 ５′−イノシン酸（ｇ／ｌＡＴＣＣ１
９１８５７，３ Ｉ Ｐ ９６ ９．８プロト
プラスト再生株では５′−イノシン酸生産性の改善が認
められた。
９１８５７，３ Ｉ Ｐ ９６ ９．８プロト
プラスト再生株では５′−イノシン酸生産性の改善が認
められた。
発明の効果
本発明によれば、高頻度で核酸関連物質の改善された菌
株を得ることができる。
株を得ることができる。
特許出願人 （１０２）協和醗酵工業株式会社手続補正
口 昭和６２年 ３月 ｙ日
口 昭和６２年 ３月 ｙ日
Claims (2)
- （１）核酸関連物質生産能を有するブレビバクテリウム
属、コリネバクテリウム属の細菌の細胞を高張液中でプ
ロトプラスト化したのち、正常細胞に復帰再生させ、核
酸関連物質の生産性が改善されたプロトプラスト再生株
を分離することを特徴とする微生物の育種方法。 - （２）核酸関連物質が５′−イノシン酸、５′−キサン
チル酸またはイノシンである特許請求の範囲第１項記載
の方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP62017734A JP2618383B2 (ja) | 1987-01-28 | 1987-01-28 | 微生物の育種方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP62017734A JP2618383B2 (ja) | 1987-01-28 | 1987-01-28 | 微生物の育種方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS63185372A true JPS63185372A (ja) | 1988-07-30 |
| JP2618383B2 JP2618383B2 (ja) | 1997-06-11 |
Family
ID=11951976
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP62017734A Expired - Lifetime JP2618383B2 (ja) | 1987-01-28 | 1987-01-28 | 微生物の育種方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2618383B2 (ja) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH05317033A (ja) * | 1992-01-09 | 1993-12-03 | Becton Dickinson & Co | 細胞内構成物の遊離法 |
| JP2002165588A (ja) * | 2000-11-22 | 2002-06-11 | Ajinomoto Co Inc | 発酵法によるキサントシン−５’−モノフォスフェートの製造法 |
| CN102352321A (zh) * | 2011-10-09 | 2012-02-15 | 江西新瑞丰生化有限公司 | 赤霉素产生菌原生质体的制备与再生方法 |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS58152485A (ja) * | 1982-03-05 | 1983-09-10 | Ajinomoto Co Inc | 微生物の育種方法 |
| JPS58158196A (ja) * | 1982-03-16 | 1983-09-20 | Ajinomoto Co Inc | 発酵法による５′−イノシン酸の製造法 |
-
1987
- 1987-01-28 JP JP62017734A patent/JP2618383B2/ja not_active Expired - Lifetime
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS58152485A (ja) * | 1982-03-05 | 1983-09-10 | Ajinomoto Co Inc | 微生物の育種方法 |
| JPS58158196A (ja) * | 1982-03-16 | 1983-09-20 | Ajinomoto Co Inc | 発酵法による５′−イノシン酸の製造法 |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH05317033A (ja) * | 1992-01-09 | 1993-12-03 | Becton Dickinson & Co | 細胞内構成物の遊離法 |
| JP2002165588A (ja) * | 2000-11-22 | 2002-06-11 | Ajinomoto Co Inc | 発酵法によるキサントシン−５’−モノフォスフェートの製造法 |
| CN102352321A (zh) * | 2011-10-09 | 2012-02-15 | 江西新瑞丰生化有限公司 | 赤霉素产生菌原生质体的制备与再生方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP2618383B2 (ja) | 1997-06-11 |
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