JPS6231695B2

JPS6231695B2 -

Info

Publication number: JPS6231695B2
Application number: JP52011721A
Authority: JP
Inventors: Shunaidaa Barudemaaru; Borutaa Deiitoritsuhi
Original assignee: Armour Pharmaceutical Co
Current assignee: Armour Pharmaceutical Co
Priority date: 1976-02-07
Filing date: 1977-02-07
Publication date: 1987-07-09
Also published as: ATA74177A; FI62624B; AU508852B2; HU177708B; FR2340738A2; IE44591L; NL7700975A; JPS52117414A; DK151609B; MX5356E; PL104234B3; DE2604759A1; DK47277A; DE2604759C2; SE7700960L; SE442707B; FI770290A; FR2340738B2; CA1087524A; AT351672B

Description

【発明の詳細な説明】本発明は特願昭50〜159742（特公昭55〜12001
号）に従つて、血液又は血液製品から沈澱したγ
−グロブリンを、グロブリン分子を互いに遮蔽す
る作用のある高分子物質、好ましくはヒドロキシ
エチル澱粉を含む水溶液に再溶解し、ついでこの
溶液から高分子物質を分離する、血液又は血液製
品から沈澱したγ−グロブリンの静脈内投与に対
する適合性の改良増大法に関する。

特願昭50〜159742の方法ではγ−グロブリンを
濃度８〜10％の、特にヒドロキシエチル澱粉の水
溶液中に再導入することにより望ましくないγ−
グロブリン分を除去している。この混合物はポリ
エチレングリコール（PEG）を添加後、遠心分
離される。得られた沈澱は望ましくないγ−グロ
ブリン分を含み、一方、望ましい部分は別の遠心
分離工程においてPH7.2で20％のPEGで回収され
る。

前記方法で得られるγ−グロブリンはたとえ医
学用としてのあらゆる要件に適合していても、収
率を上げると共に更に高品質、高純度の所望のγ
−グロブリンを得ることが望ましいことが判つ
た。更に前記γ−グロブリン含有水溶液とマイカ
層シリケートのスラリー又は懸濁液とを混合液中
のシリケート濃度が0.2〜10重量％になるように
混合し、ついで充分な時間反応させ、ポリエチレ
ングリコールのような沈澱剤を加えた後、前記マ
イカ層シリケートと共に分離又は処理されるγ−
グロブリン分を除去する方法によつて解決され
る。

ここで「マイカ層シリケート（micaceous
stratified silicates）」とはシリケート類のこと
で、その組成は下記平均式で表わされる。

ａ Me^＋ｙ _ｘｐ−ｏ｛（Al³⁺，Cr³⁺，Fe³⁺， Fe²⁺，Mg²⁺，Zn²⁺， Ni²⁺）^６＋ _２−３（OH）₂ （Si_4-xAl_xO）₁₀｝^x- 及びｂ Me^＋ｙ _ｘｐ−ｏ｛（Al³⁺，Cr³，Fe³⁺， Fe²⁺，Mg²⁺，Zn²⁺，Ni²⁺， Li⁺）^{（６−ｘ）＋} _２−３（OH）₂（Si₄O₁₀）｝^x- カチオンM⁺は他の物質、例えば有機カチオン
でもゼオライト的に（zeolitically）置き換えるこ
とができる。膨潤液ｙとしては飽和炭化水素を除
き、いかなる分子でも導入できる。膨潤液の量は
広範囲に変化できる。（Si，Al）₄O₁₀の溝成単位当
りの１価のカチオンの量ｘ、即ち成層化又は成層
電荷も変化するという事実からみて、非常に大き
な変化が生じる。

特にモンモリロナイト（“Angewandte
Chemie”1963；p113以下に記載のWEISSによる
“Organische Derivate der glimmer artigen
Schichtsilikate”参照）については広く研究され
ている。モンモリロナイトは中間のカチオンを通
つて静電的に網状となつた２次元の無限大のアニ
オンを含んでいる。膨潤作用のエネルギー即ち正
電荷と負電荷とを互いに離すことにより層距離を
増大させるエネルギーはカチオン及びアニオン層
の水和化又は溶媒和化により供給される。一般に
溶媒和化のエネルギーは水和化のエネルギーより
も実質的に小さいので、高誘電率又は水素結合形
成能力を有する分子系だけが入り得る。

アミノ酸、ペプチド及び蛋白質はマイカ層シリ
ケートに入れることができる。PHが低い時は蛋白
質は殆んど定量的に交換される。PH値が増大する
につれて蛋白質内のカチオン位の数は減少し、交
換が不完全になる。

アルブミン、グロブリン及びプロラミンは同様
に結合する。血清グロブリンに対しては、反応は
シリケート結晶の末端から深さが20〜30Åの内部
に進行するに過ぎない。アルブミンはシリケート
の層間に広がる。層間隔（spacing）が14.5〜
15.0Åでは広がつた蛋白質に対して有用な層厚は
最大5.5〜６Åであることを示している。

γ−グロブリンの導入量は損傷を受け又は損傷
を受けないそのままの分子を含んでいるという事
実からみて、損傷分子を物理的に完全な分子と化
学的に区別するため、一方向又は他方向にできる
だけ損傷分子を結合させるようにしなければなら
ない。損傷分子は水素結合を形成することができ
る。従つて損傷分子はシリケート層中に大部分沈
積または結合せしめ、一方、損傷のないγ−グロ
ブリンは溶液中に残存させる。マイカ層シリケー
トの層中に結合した状態では損傷したγ−グロブ
リン分子は引続き、例えば遠心分離によつて除去
できる。

本発明に望ましいカチオン交換能力は
HOFMANN（Z.Kristallogr.(A)98（1937）31；
Chemie 55（1942）283）によれば、カオリンや
関連物質（例えばハロイサイトAl₂O₃・2SiO₂・
4H₂O）及びそれらの格子構造と関連したある種
のマイカ系鉱物によつても示されている。

これらの物質もバーミキユライト及びこれと関
連したバタバイト（batavite）（鉄を含まないバ
ーミキユライト）を含んでいる。WEISS及び
HOFMANN（Ｚ・Naturf.，6b，405）によれば
バタバイトの構造式は次の通りである。

｛（Mg₂.₆₄Al₀.₃₃）｜（OH）₁.₉₄｜ Si₂.₉₉Al₁.₀₁O₁₀｜｝0.68 ＋Mg^＋＋ _０．_３４＋２，34H₂O. この物質はモンモリロナイトと同様、結晶内膨
潤能力及び大きなカチオン交換能力を有してい
る。調査の結果（上記文献参照）、バタバイトは
シリケートの層間に沈積した蛋白質と共に人間の
アルブミンを５重量％まで吸収することが判つ
た。同様に大凡下記構造式を有するバーミキユラ
イト｛（Mg₃，Al₂，Fe^ＩＩ _３FE，^ＩＩＩ _２）（OH）₂〔Si₃.₃₅Al₀.₆₅ O₁₀〕｝^O,^65-＋Ｏ，65M＋は層形成及び膨潤性に関して所望の性質を有して
いる。バーミキユライトは３つの八方晶形モンモ
リロナイトに相当するが、その結晶ははるかに大
きく、且つその格子形状は更に規則的である。

従つて一般にこれらの鉱物は層構造を有し、シ
リケート層間でカチオンを示し、且つ膨潤する傾
向のある精製プロセスに適している。実験的な経
験によれば、この種の鉱物は恐らくその強いカチ
オン活性により欠陥のあるγ−グロブリン分子を
保持する作用があるが、害を受けない分子は結合
しない。ここでは特定の濃度範囲及びPH値を維持
することが必要である。

本発明によれば鉱物類としてモンモリロナイ
ト、バタバイト又はバーミキユライトが使用され
る。再溶解時のγ−グロブリンの溶解量に従つて
シリケートを0.2〜10重量％、特に0.2〜約５重量
％加える。0.2重量％未満では損傷したγ−グロ
ブリン分子の濃度が低くても損傷分子の処理に時
間がかゝり過ぎ、また10重量％を越えても10％の
場合以上の処理時間短縮効果を期待できない。実
験的な経験によれば、反応は４〜20℃の温度で起
こる。そしてこの方法はPH4.0〜7.6で行なわれ
る。反応時間は３〜10時間の範囲でなければなら
ない。そして反応は比較的遅く、また長時間行な
うとよい結果を与えるので、この方法は夜通し行
なうことが好ましい。シリケートの排出又は分離
は遠心分離工程で行なうことが好ましい。しかし
公知の他の一般的な方法、例えば扇状過
（alluvial filtration）も使用できる。

以下の実施例で本発明を更に説明する。

実施例１ａ γ−グロブリンの分離この方法は８％のエタノールと混合し、PH7.2
及び温度−３℃で沈澱させて集めた血漿で始め
る。こうして分別物を分離し、ついで上澄液を
温度−５℃及びPH5.8で19％のエタノールと混合
する。この工程ではγ−グロブリンを含む分別物
〜が分離される。その沈澱を再溶解し、再び
PH５及び８％のエタノールで沈澱させる。次に残
存する上澄液を再びPH7.2で25％のエタノールに
より沈澱させる。得られた沈澱（分別物）は少
くとも90％のγ−グロブリンを含有する。

ｂ抗補体活性の減少 γ−グロブリン沈澱を、7.0のPHを有する約６
％濃度の緩衝水溶液に入れ、同時にこの溶液に約
10％のヒドロキシエチル澱粉を加える。次にこの
溶液にベントナイトSF（主成分：モンモリロナ
イト、粒径：80μ以下、メーカー：
Feinbiochemika，ハイデルベルク）の水性スラ
リー又は懸濁液を加えて全溶液中のベントナイト
濃度を2.5重量％とし、ついで充分に撹拌する。
次にこの溶液を15゜±２℃の温度で６時間放置す
る。引続き10％のポリエチレングリコールを加え
た後、ベントナイトを望ましくない成分と共に遠
心分離により除去する。

ｃ通常の生理食塩水への導入遠心分離工程で得られた上澄液は溶液状の望ま
しいγ−グロブリン成分を含んでいる。この上澄
液を0.1N−NaOHでPH7.2に調整した後、20％の
PEGと混合する。こうして純γ−グロブリンの
沈澱が生ずる。この沈澱を遠心分離によつて回収
し、通常の生理食塩水で蛋白質濃度5.2％に調整
した後、無菌過する。このものは治療用として
使用できる。

実施例２工程ａ）及びｃ）は実施例１の夫々の工程に同
じである。工程ｂ）は次のように変形した。

γ−グロブリン沈澱を7.49PHを有する濃度約４
重量％の緩衝水溶液に入れ、同時に約８％のヒド
ロキシエチル澱粉を加える。更にこの溶液に、５
重量％の割合になるまでバーミキユライト微粉末
（粒径80μ以下）の水性スラリー又は懸濁液を加
える。全組成を激しく撹拌する。ここでこの溶液
を15゜±２℃の温度で８時間放置する。ついでこ
の溶液に約10重量％のヒドロキシエチル澱粉を加
える。最後にバーミキユライトを遠心分離によつ
て望ましくない成分と共に除去する。

この操作に続いて工程ｃ）を行なう。

効果：追加の関係原発明は特許第1095610号（特公昭55−12001
号）γ−グロブリン分子を互いに保護すると共に
水溶液から分離させるヒドロキシエチル澱粉、ゼ
ラチン、デキストラン、アルブミン、多価アルコ
ール又はビニル重合体のような高分子物質の存在
する水溶液中にγ−グロブリン沈澱を溶解する、
液又は血液製品から沈澱したγ−グロブリンの静
脈内での適合性改良方法であるのに対し、本件発
明は原発明の方法において前記γ−グロブリンを
溶解した水溶液を更に0.2〜10重量％の濃度のマ
イカシリケートのスラリー又は懸濁液と混合し、
ついで充分な時間反応させ、ポリエチレングリコ
ールのような沈澱剤を加えた後、前記マイカ層シ
リケートと共に分離又は処理されるγ−グロブリ
ン分を除去する、液又は血液製品から沈澱したγ
−グロブリンの静脈内での適合性改良方法であ
る。

Claims

【特許請求の範囲】１ γ−グロブリン分子を互いに保護すると共に
水溶液から分離させるヒドロキシエチル澱粉、ゼ
ラチン、デキストラン、アルブミン、多価アルコ
ール又はビニル重合体のような高分子物質の存在
する水溶液中にγ−グロブリン沈澱を溶解する、
血液又は血液製品から沈澱したγ−グロブリンの
静脈内投与に対する適合性改良方法において、更
に前記γ−グロブリン含有水溶液とマイカ層シリ
ケートのスラリー又は懸濁液とを混合液中のシリ
ケート濃度が0.2〜10重量％になるように混合
し、ついで充分な時間反応させ、ポリエチレング
リコールのような沈澱剤を加えた後、前記マイカ
層シリケートと共に分離又は処理されるγ−グロ
ブリン分を除去することを特徴とする血液又は血
液製品から沈澱したγ−グロブリンの静脈内投与
に対する適合性改良方法。２前記マイカ層シリケートとしてモンモリロナ
イトを主成分とするベントナイトを用いる特許請
求の範囲１項記載の方法。３前記マイカ層シリケートとして鉱物類のバタ
バイト又はバーミキユライトを用いる特許請求の
範囲１項記載の方法。４ 0.2〜５重量％のシリケートを加える特許請
求の範囲１〜３項のいずれかに記載の方法。５反応を４〜20℃の温度で行なう特許請求の範
囲１〜４項のいずれかに記載の方法。６前記マイカ層シリケートとの反応をPH4.0〜
7.6の溶液中で行なう特許請求の範囲１〜６項の
いずれかに記載の方法。７反応時間が３〜10時間の範囲である特許請求
の範囲１〜６項のいずれかに記載の方法。