JPWO2021207657A5

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Publication number: JPWO2021207657A5
Application number: JP2022561544A
Authority: JP
Publication date: 2024-04-19

Claims

無損傷活性化可能抗体精製組成物を生産する処理法であって、ここで該処理法が：
（ａ）水、無損傷活性化可能抗体、切断不純物、および第１の塩を含む水性原材料をクロマトグラフィーカラムに載せる工程であって、
該クロマトグラフィーカラムが、支持マトリックスおよびそこに結合したリガンドを含む固定相を含み、
該リガンドが、疎水性置換基を含み、
かつ
該無損傷活性化可能抗体が、
（ｉ）第１の生物学的標的に対して特異的な結合親和性を有する少なくとも第１の抗原結合ドメイン（ＡＢ）、および
（ｉｉ）第１のプロドメイン、
を含み、
該少なくとも第１のＡＢが、第１の抗体軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）および第１の抗体重鎖可変ドメイン（ＶＨ）を含み、
該第１のプロドメインが、第１の隠蔽部分（ＭＭ）および第１の開裂可能部分（ＣＭ）を含み、
かつ
該第１のＡＢが、該第１のプロドメインに共役（結合）している、
水性原材料をクロマトグラフィーカラムに載せる工程；および
（ｂ）無損傷活性化可能抗体を含む精製組成物を含む溶出液を生成するために、水および第２の塩を含む溶離液でクロマトグラフィーカラムを溶出する工程であって、
該溶出液から切断不純物が実質的に除去される、工程、
を含む処理法。
（ｉ）該溶出工程（ｂ）を、一定組成の条件下で実施する、
（ｉｉ）工程（ｂ）の後に、該処理法が、クロマトグラフィーカラムを洗浄剤で洗浄することを含むカラム洗浄工程をさらに含み、ここで該処理法が、該洗浄工程の前に、結合した切断不純物を溶出する工程を含まない、および／または
（ｉｉｉ）該第１の塩および第２の塩がそれぞれ独立に：
（ａ）ＰＯ _４ ^３－、ＳＯ _４ ^２－、ＯＨ ^－、ＨＰＯ _４ ^２－、ＣＨ _３ＣＯＯ ^－、クエン酸イオン、アミノ酸陰イオン、Ｆ ^－、Ｃｌ ^－、Ｂｒ ^－、Ｈ _２ＰＯ _４ ^－、Ｉ ^－、ＮＯ _３ ^－、ＣｌＯ _４ ^－、およびＳＣＮ ^－から成る群から選択される陰イオン、および／または
（ｂ）Ｎ（ＣＨ _３） _４ ^＋、ＮＨ _４ ^＋、Ｃｓ ^＋、Ｒｂ ^＋、Ｋ ^＋、Ｎａ ^＋、Ｈ ^＋、Ｃａ ^＋、Ｍｇ ^２＋、Ａｌ ^３＋、およびアミノ酸陽イオンから成る群から選択される陽イオン
を含む、
請求項１に記載の処理法。
該固定相が疎水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＣ）固定相であり、任意選択的に
該第１の塩および該第２の塩が同一の塩である、または
該第１の塩および該第２の塩が異なる塩であり、
任意選択的に該水性原材料および溶離液が、それぞれ、第１の塩濃度および第２の塩濃度を含み、該第１の塩濃度が該第２の塩濃度よりも高濃度である
請求項１～２のいずれか１項の処理法。
該固定相がマルチモーダルクロマトグラフィー（ＭＭＣ）固定相であり、それによって該リガンドが疎水性以外の相互作用に基づいて分離を容易にする少なくとも１種類のさらなる置換基をさらに含み、
任意選択的に該少なくとも１種類のさらなる置換基が、静電、水素結合、および硫黄原子親和性から成る群から選択される相互作用に基づいて分離を容易にし、
任意選択的に該少なくとも１種類のさらなる置換基が、スルフィド置換基、カルボキシル置換基、およびアミン置換基から成る群から選択される、
請求項１～２のいずれか１項の処理法。
（ｉ）該第１の塩および該第２の塩がそれぞれ独立に、Ｃｌ ^－、Ｂｒ ^－、Ｈ _２ＰＯ _４ ^－、Ｉ ^－、ＮＯ _３ ^－、アミノ酸陰イオン、ＣｌＯ _４ ^－、およびＳＣＮ ^－から成る群から選択される陰イオンを含む、
（ｉｉ）該第１および第２の塩がそれぞれ独立に、Ｎ（ＣＨ _３） _４ ^＋、ＮＨ _４ ^＋、Ｂａ ^＋、Ｃａ ^２＋、Ｍｇ ^２＋、Ｃｓ ^＋、Ｒｂ ^＋、Ｋ ^＋、Ｎａ ^＋、およびアミノ酸陽イオンから成る群から選択される陽イオンを含む、
（ｉｉｉ）該第１の塩および該第２の塩が同一である、
（ｉｖ）該第１の塩および該第２の塩が異なる、および／または
（ｖ）該水性原材料および溶出液が、それぞれ、第１の塩濃度および第２の塩濃度を含み、ここで該第２の塩濃度が第１の塩濃度よりも高濃度である、
請求項４の処理法。
（ｉ）該水性原材料が、約５．０～約８．０、または約５．０～約７．５、または約５．０～約７．０、または約５．５～約６．５の範囲のｐＨを含む、
（ｉｉ）工程（ａ）および（ｂ）を、約３℃～約４０℃の範囲の温度、または約１０℃～約３０℃の範囲の温度、または約１５℃～約３０℃の範囲の温度、または約２２℃＋／－４℃の範囲の温度で実施する、
（ｉｉｉ）２８０ｎｍの波長の吸光度で判定した場合に、該処理法によって、少なくとも約７０％、または少なくとも約７１％、または少なくとも約７２％、または少なくとも約７３％、または少なくとも約７４％、または少なくとも約７５％、または少なくとも約７６％、または少なくとも約７７％、または少なくとも約７８％、または少なくとも約７９％、または少なくとも約８０％、または少なくとも約８１％、または少なくとも約８２％、または少なくとも約８３％、または少なくとも約８４％、または少なくとも約８５％、または少なくとも約８６％、または少なくとも約８７％、または少なくとも約８８％、または少なくとも約８９％、または少なくとも約９０％、または少なくとも約９１％、または少なくとも約９２％、または少なくとも約９３％、または少なくとも約９４％、または少なくとも約９５％の総蛋白質収率が得られる、および／または
（ｉｖ）該溶出液中の切断不純物の量に対する該水性原材料中の切断不純物の量の比が、還元ＳＤＳ－ｃＧＥで判定した場合に、％切断不純物として、少なくとも約２、または少なくとも約３、または少なくとも約４、または少なくとも約５、または少なくとも約６、または少なくとも約７、または少なくとも約８、または少なくとも約９、または少なくとも約１０、または少なくとも約１５、または少なくとも約２０である、
請求項１～５のいずれか１項の処理法。
（ｉ）該溶出液が、還元ＳＤＳ－ｃＧＥで判定した場合には、該水性原材料に存在する切断不純物に対する相対量で、約１５％未満、または約１４％未満、または約１３％未満、または約１２％未満、または約１１％未満、または約１０％未満、または約１０％未満、または約９％未満、または約８％未満、または約７％未満、または約６％未満を含み、
任意選択的に該溶出液が、還元ＳＤＳ－ｃＧＥで判定した場合に、約５％未満、または約４％未満、または約３％未満、または約２％未満、または約１％未満、または約０．９％未満、または約０．８％未満、または約０．７％未満、または約０．６％未満、または約０．５％未満の切断不純物を含み、
任意選択的に該溶出液が、還元ＳＤＳ－ｃＧＥで判定した場合に、約２％未満、または約１％未満、または約０．９％未満、または約０．８％未満、または約０．７％未満、または約０．６％未満、または約０．５％未満の切断不純物を含む、
（ｉｉ）該溶出液が、還元ＳＤＳ－ｃＧＥで判定した場合に、約０．１％～約１５％の切断不純物、または約０．１％～約１０％の切断不純物、または約０．１％～約１０％の切断不純物、または約０．１％～約５％の切断不純物、または約０．１％～約４％の切断不純物、または約０．１％～約３％の切断不純物、または約０．１％～約２％の切断不純物、または約０．１％～約１％の切断不純物の範囲にある切断不純物の相対量を含む、または
（ｉｉｉ）該溶出液が、還元ＳＤＳ－ｃＧＥで判定した場合に、検出可能な切断不純物を含まない、
請求項１～６のいずれか１項の処理法。
該水性原材料が、宿主細胞蛋白質（ＨＣＰ）および高分子量分子種（ＨＭＷＳ）から成る群から選択される不純物をさらに含み、任意選択的に
（ｉ）該水性原材料がＨＣＰをさらに含み、任意選択的に：
該溶出液中のＨＣＰの量に対する該水性原材料中のＨＣＰの量の比が、対応するＨＣＰＥＬＩＳＡアッセイによって判定した場合に、ｐｐｍ単位で、少なくとも約２、または少なくとも約３、または少なくとも約４、または少なくとも約５、または少なくとも約６、または少なくとも約７、または少なくとも約８、または少なくとも約９、または少なくとも約１０である、および／または
（ｉｉ）該溶出液が、対応するＨＣＰＥＬＩＳＡアッセイによって判定した場合に、約約１５０ｐｐｍ未満、または約１４０ｐｐｍ未満、または約１３０ｐｐｍ未満、または約１２０ｐｐｍ未満、または約１１０ｐｐｍ未満、または約１００ｐｐｍ未満、または約９０ｐｐｍ未満、または約８０ｐｐｍ未満、または約７０ｐｐｍ未満、または約６０ｐｐｍ未満、または約５０ｐｐｍ未満、または約４５ｐｐｍ未満、または約４０ｐｐｍ未満、または約３５ｐｐｍ未満、または約３０ｐｐｍ未満、または約２５ｐｐｍ未満、または約２０ｐｐｍ未満、または約１５ｐｐｍ未満、または約１０ｐｐｍ未満のＨＣＰ、または約５ｐｐｍ未満のＨＣＰ未満、または約１ｐｐｍ未満のＨＣＰを含む、
請求項１～７のいずれか１項の処理法。
（ｉ）該水性原材料がＨＭＷＳをさらに含み、任意選択的に
（ａ）該溶出液中のＨＭＷＳの量に対する該水性原材料中のＨＭＷＳの量の比が、サイズ排除（ＳＥ）－ＨＰＬＣで測定した場合に、％ピーク面積に基づいて、少なくとも約２、または少なくとも約３、または少なくとも約４、または少なくとも約５である、および／または
（ｂ）該溶出液が、ＳＥ－ＨＰＬＣによって測定した場合に、約５％未満のＨＭＷＳ、または約４％未満のＨＭＷＳ、または約３％未満のＨＭＷＳ、または約２％未満のＨＭＷＳ、または約１％未満のＨＭＷＳを含む、
（ｉｉ）該溶出液が、還元ＳＤＳ－ｃＧＥで判定した場合に、少なくとも約９０％の無損傷活性化可能抗体、または少なくとも約９１％、または少なくとも約９２％、または少なくとも約９３％、または少なくとも約９４％、または少なくとも約９５％の無損傷活性化可能抗体を含む、および／または
（ｉｉｉ）工程（ａ）の前に、該処理法が：
（ａ ^０）１種類以上のバルク中間体産物組成物を生産する目的で、該無損傷活性化可能抗体および該切断不純物を含む生物学的回収組成物を、遠心分離工程、濾過工程、親和性クロマトグラフィー工程、ウイルス不活性化工程、サイズ排除クロマトグラフィー工程、ウイルス濾過工程、イオン交換クロマトグラフィー工程、およびそれらのうちの２種類以上の任意の組み合わせから成る群から選択される１種類以上の介在的ユニット操作に供する工程であって、ここで該水性原材料が少なくとも１種類のバルク中間体産物組成物を含む、介在的ユニット操作に供する工程、
をさらに含む、
請求項１～８のいずれか１項の処理法。
（ｉ）下流の産物組成物を生成する目的で、該溶出液を１種類以上の下流ユニット操作に供し、
任意選択的に該１種類以上の下流ユニット操作が、さらなる精製工程、化学合成処理、希釈プロセス、溶媒交換工程、製剤化工程、凍結乾燥プロセス、およびそれらのうちの２種類以上の任意の組み合わせから成る群から選択される、
（ｉｉ）該水性原材料が、還元ＳＤＳ－ｃＧＥで判定した場合に、約０．５％超の切断不純物、または約０．６％超、または約０．７％超、または約０．８％超、または約０．９％超、または約１％超、または約１．５％超、または約２％超、または約２．５％超、または約３％超、または約３．５％超、または約４％超、または約４．５％超の切断不純物を含む、および／または
（ｉｉｉ）該無損傷活性化可能抗体が第２のＡＢおよび第２のプロドメインを含み、およびここで該切断不純物が、質量分析で判定した場合に単一アーム切断不純物を含む、
請求項１～９のいずれか１項の処理法。
請求項１～１０のいずれか１項の処理法によって生産される、精製した無損傷活性化可能抗体組成物。
請求項１～１０のいずれか１項の下流の産物組成物を含む精製産物組成物。
還元ＳＤＳ－ｃＧＥで判定した場合に少なくとも約９０％の無損傷活性化可能抗体、還元ＳＤＳ－ｃＧＥで判定した場合に約１５％未満の切断不純物、ＳＥ－ＨＰＬＣで判定した場合に約５％未満のＨＭＷＳ、および対応するＨＣＰＥＬＩＳＡで判定した場合に約１５０ｐｐｍ未満のＨＣＰを含む、
請求項１１または１２のいずれか１項の組成物。
（ｉ）該組成物が、還元ＳＤＳ－ｃＧＥで判定した場合に、約１４％未満の切断不純物、または約１３％未満の切断不純物、または約１２％未満の切断不純物、または約１２％未満の切断不純物、または約１１％未満の切断不純物、または約１０％未満の切断不純物、または約９％未満の切断不純物、または約８％未満の切断不純物、または約７％未満の切断不純物、または約６％未満の切断不純物を含む、
（ｉｉ）該組成物が、還元ＳＤＳ－ｃＧＥで判定した場合に、約５％未満の切断不純物、または約４％未満の切断不純物、または約３％未満の切断不純物、または約２％未満の切断不純物を含む、
（ｉｉｉ）該組成物が、還元ＳＤＳ－ｃＧＥで判定した場合に、約１％未満の切断不純物、または約０．９％未満の切断不純物、または約０．８％未満の切断不純物、または約０．７％未満の切断不純物、または約０．６％未満の切断不純物、または約０．５％未満の切断不純物を含む、
（ｉｖ）該組成物が、対応するＨＣＰＥＬＩＳＡアッセイで判定した場合に、約１４０ｐｐｍ未満のＨＣＰ、または約１３０ｐｐｍ未満のＨＣＰ、または約１２０ｐｐｍ未満のＨＣＰ、または約１１０ｐｐｍ未満のＨＣＰ、または約１００ｐｐｍ未満のＨＣＰ、または約９０ｐｐｍ未満のＨＣＰ、または約８０ｐｐｍ未満のＨＣＰ、または約７０ｐｐｍ未満のＨＣＰ、または約６０ｐｐｍ未満のＨＣＰ、または約５０ｐｐｍ未満のＨＣＰ、または約４５ｐｐｍ未満のＨＣＰ、または約４０ｐｐｍ未満のＨＣＰ、または約３５ｐｐｍ未満のＨＣＰ、または約３０ｐｐｍ未満のＨＣＰ、または約２５ｐｐｍ未満のＨＣＰ、または約２０ｐｐｍ未満のＨＣＰ、または約１５ｐｐｍ未満のＨＣＰ、または約１０ｐｐｍ未満のＨＣＰを含む、
（ｖ）該組成物が、ＳＥ－ＨＰＬＣで判定した場合に、約４％未満のＨＭＷＳ、または約３％未満のＨＭＷＳ、または約２％未満のＨＭＷＳ、または約１％未満のＨＭＷＳを含む、
（ｖｉ）該組成物が、還元ＳＤＳ－ｃＧＥで判定した場合に、少なくとも約９１％、または少なくとも約９２％、または少なくとも約９３％、または少なくとも約９４％、または少なくとも約９５％の無損傷活性化可能抗体を含む、および／または
（ｖｉｉ）該組成物が凍結乾燥物である、
請求項１３の精製した無損傷活性化可能抗体組成物。
請求項１３～１４のいずれか１項の組成物および薬学的に許容可能な賦形剤を含む薬学的に許容可能な組成物。
無損傷活性化可能抗体およびその切断異型体を含む組成物であって、ここで該組成物が、ＳＤＳ－ｃＧＥで評価した場合に少なくとも９５％の無損傷活性化可能抗体および０．０５～５％のその切断異型体を含み、ここで無損傷活性化可能抗体％およびその切断異型体％が全体で１００％である、組成物。
無損傷活性化可能抗体およびその切断異型体、ならびにＣｌ ^－、Ｂｒ ^－、Ｈ _２ＰＯ _４ ^－、Ｉ ^－、ＮＯ _３ ^－、ＣｌＯ _４ ^－、およびＳＣＮ ^－から選択される陰イオンおよびＮ（ＣＨ _３） _４ ^＋、ＮＨ _４ ^＋、Ｂａ ^＋、Ｃａ ^２＋、Ｍｇ ^２＋、Ｃｓ ^＋、Ｒｂ ^＋、Ｋ ^＋、Ｎａ ^＋から選択される陽イオン、または該陰イオンおよび該陽イオンの組み合わせを含む、水性組成物。
請求項１６～１７のいずれか１項の組成物またはそれらの組み合わせを含む容器、バイアル、注射筒、または注入デバイス。
ＨＩＣまたはＭＭＣクロマトグラフィーカラムの水性原材料であって、該水性原材料が水、無損傷活性化可能抗体、ＳＤＳ－ｃＧＥで判定した場合に無損傷活性化可能抗体の切断異型体を少なくとも２％、対応するＨＣＰＥＬＩＳＡで判定した場合に少なくとも１０ｐｐｍのＨＣＰ、およびＳＥ－ＨＰＬＣで判定した場合に少なくとも１％のＨＭＷＳを含む、水性原材料。
請求項１８または請求項１９の水性原材料のＭＭＣ溶出液であって、該ＭＭＣ溶出液が、ＳＤＳ－ｃＧＥで判定した場合に少なくとも９７％の無損傷活性化可能抗体、ＳＤＳ－ｃＧＥで判定した場合に１％未満の無損傷活性化可能抗体の切断異型体、ＥＬＩＳＡで判定した場合に６ｐｐｍ未満のＨＣＰ、およびＳＥ－ＨＰＬＣで判定した場合に１％未満のＨＭＷＳを含み、ここで無損傷活性化可能抗体％および切断異型体％が全体で１００％である、ＭＭＣ溶出液。
（Ａ）ＭＭ、ＣＭ、およびＡＢを含む無損傷活性化可能抗体を９５％超含み、かつ（Ｂ）その切断異型体を、ＳＤＳ－ｃＧＥで判定した場合に０．０５～５％含む組成物を生産する処理法であって、
（ｉ）水、（Ａ）、（Ｂ）、および第１の塩を含む水性原材料を、クロマトグラフィーカラムに載せる工程であって、該クロマトグラフィーカラムが、支持マトリックスおよびそれに結合した疎水性リガンドを含む固定相を含む、工程；
および
（ｉｉ）該組成物を取得するために、水および第２の塩を含む溶離液で、該クロマトグラフィーカラムを溶出する工程、
を含む、処理法。
ＳＤＳ－ｃＧＥで判定した場合に無損傷活性化可能抗体および５％未満のその切断異型体、ＳＥ－ＨＰＬＣで判定した場合に５％未満のＨＭＷＳ、および対応するＨＣＰＥＬＩＳＡで判定した場合に１００ｐｐｍ未満のＨＣＰ、またはそれらの組み合わせを含む組成物を生産する方法であって、
（ｉ）水、該無損傷活性化可能抗体、その切断異型体、ＨＭＷＳ、ＨＣＰ、および第１の塩を含む水性原材料をクロマトグラフィーカラムに載せる工程であって、該クロマトグラフィーカラムが、支持マトリックスおよびそれに結合した疎水性リガンドを含む固定相を含む、工程；および
（ｉｉ）該組成物を取得する目的で、水および第２の塩を含む溶離液で、該クロマトグラフィーカラムを溶出する工程、
を含む、方法。
無損傷活性化可能抗体をその切断異型体から分離する方法であって、該切断異型体のアミノ酸配列が、該無損傷活性化可能抗体のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であり、該方法が：
（ｉ）水、該無損傷活性化可能抗体、その切断異型体、および第１の塩を含む水性原材料をクロマトグラフィーカラムに載せる工程であって、
ここで該クロマトグラフィーカラムが、支持マトリックスおよびそれに結合した疎水性リガンドを含む固定相を含む、工程；および
（ｉｉ）組成物を取得する目的で、水および第２の塩を含む溶離液で該クロマトグラフィーカラムを溶出する工程であって、該水性原材料中の該切断異型体の相対量が少なくとも９０％減少する、工程
を含む、方法。
癌、炎症性疾患、自己免疫疾患、またはそれらの組み合わせに罹患した対象の治療のための薬剤の製造における、請求項１６の組成物の使用。
毒性用量よりも低い用量の活性化可能抗体の切断異型体、および特定用量の無損傷活性化可能抗体を含む組成物の使用であって、前記使用が、癌、炎症性疾患、自己免疫疾患、またはそれらの組み合わせに罹患した対象を治療するための薬剤の製造のためであり、
ＳＤＳ－ｃＧＥで判定した場合に、前記無損傷活性化可能抗体の相対量が少なくとも９５％であり、かつその切断異型体の相対量が５％未満である、使用。
生物学的回収組成物または蛋白質親和性クロマトグラフィー溶出液において、７５～８５％収率の無損傷活性化可能抗体を取得しながら、ＳＤＳ－ｃＧＥで判定した場合に無損傷活性化可能抗体の切断異型体の量を７倍～１０倍減少させ、ＥＬＩＳＡで判定した場合にＨＣＰの量を８倍～１０倍減少させ、およびＳＥ－ＨＰＬＣで判定した場合にＨＭＷＳの量を７倍～１３倍減少させる処理法であって、該処理法が：
（ａ）生物学的回収組成物または蛋白質親和性クロマトグラフィー溶出液を、支持マトリックスおよびそれに結合した疎水性置換基を含むリガンドを含む固定相を含むクロマトグラフィーカラムに載せ、および第１の塩および水を該クロマトグラフィーカラムに載せる工程；および
（ｂ）溶出液を得る目的で、水および第２の塩を含む溶離液で該クロマトグラフィーカラムを溶出する工程、
を含む、処理法。
組成物生産処理中に活性化可能抗体およびその切断異型体の相対％を判定またはモニターする方法であって、
（ａ）活性化可能抗体の集団およびその切断異型体の集団を含む試料組成物をゲルキャピラリー電気泳動に供する工程；
（ｂ）ゲルキャピラリー電気泳動で活性化可能抗体の集団をその切断異型体の集団から分離する工程；および
（ｃ）無損傷のプロドメインを含むポリペプチドに対応するピーク面積およびその切断プロドメインを含むポリペプチドに対応するピーク面積を測定することによって、活性化可能抗体の集団およびその切断異型体の集団の相対量を定量する工程、
を含む、方法。