JPS60132922A - ジギタリス抗体の製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、ノギタリス中毒の治療に使用さｎることので
きるジギタリス抗体の製造法に関する。

従来の技術 従来より、重篤なジギタリス中毒の治療は困難であった
。殊に挙げら扛るが、症候群、とくに悪性心拍障害の処
置、およびグリコ７１の強制的除去である。こ扛らの方
法は、中央病棟での多日敬の治療を必要とする。そｎで
もなお死ｃ率が高く：約２０％の患者が制御不能な心拍
障害で死亡する。実際に、極めて重篤な中毒は、調剤が
年波Ｈによるかまたはライサイ１試験（５ｕｉｚｉｄｖ
ｅｒｓｕｃｈ　）　Ｋより過度に投与されるか、または
腎不全により有効成分が多数日ｖｃ　ｂたシ排泄さｎず
かつこｎにより被毒量が蓄積さハた場合に生じる。

従って、本発明の課題は、グリコン１の毒性作用を体内
で中和しかつこ扛を迅速かつ有効に体内から除去する有
効物質を見出すことであるこの課題は、拮抗剤として、
ジゴキ／ンたけでなくツギトキシンおよび他の１連の心
臓ダリフンドにも抜群に適当である、特許請求の範囲に
詳述せ力ジギタリス抗体により解決さ扛る。

寸で１（６０年代のはじめに、ジゴキンン抗体が放射線
免疫効力検定でジゴキンンの定量に使用さｎた（西ドイ
ツ国特許公開公報第２３３１９２２号）。

その後にカート等（Ｊ、０ｕｒｔ　ｅｔａｌ　）が、ヒ
トにおける治療に使用するための羊−抗ノゴキ／ンーＦ
ａｂ断片（Ｓｃｈａｆ−Ａｎｔｉ−Ｄｉｇｏｘｉｎ−Ｆ
ａｂ−Ｆｒａｇｍｅｎｔｅ　）の単離法を発表した（　
Ｐｒｏｃ、Ｎａｔ。

Ａｃａｄ、Ｓｃｉ　、ＵＳＡ　、第６８巻、２４０１頁
、１９７１年）。治療用途には、スミス等（Ｓｍ１ｔｈ
　ｅｔａｌ　）によるＮｅｗ　Ｅｎｇｌ、Ｊ、Ｍｅｄ、
　（１ｇ８２年）１３５７〜１３６２頁、および（１９
７６年〕１１２５〜１１２９頁参照。この場合、羊（Ｓ
ｃｈａｆｅ　）が、アルブミ／に結合せるジゴキ／ンで
免疫さ扛、その血清が取得さｒしかつガンマグロブリン
フラクションが硫酸アンモニウムで自体公知の方法によ
シ沈殿さ、ｌ′しる。グロブリンがパノ？インで均質な
溶液中で分解さｎｌかつ特定のグリコ／１結合Ｆａｂ断
片がウアバイン−セルロースマトリクスで吸着さｎかつ
引続きウアバインで再ひ溶離さｎる。ウアバイン−Ｆａ
ｂ錯体が、蛋白質をグアニジノヒドロクロリドで変性す
ることにより解離さ■、かつウアバインおよびグアニ１
５／が透析により分離さｎる。生理学的緩衝液に対し透
析することにより、グアニジノ処理により変性さγした
Ｆａｂ−蛋白質が古び復元さｎる。この方法は、ジゴキ
／ン抗体ケ経済的に製造するには多数の欠点を有する：
１　有利に、ウアバインｖｃ結合さｒしることにより、
ウアバインとの強い交差反応を有する抗体が単離きｎｌ
かつジゴキ／ンに特定さｆＬかつ従ってウアバインと反
応せざる抗体が廃却さ才する。

２、　ウア・々インーＦａｂ　錯体の解離に際し、蛋白
質成分が変性さ才ｔ、その場合必然的に蛋白質の不可逆
的変化をも生じる。さらに透析は、■方でグアニジン上
１０クロリドを完全に除去しかつ他方でできるだけ広範
囲な復元を惹起するため、極めて大きい容積、長い時間
および慎重な制御を必要とする。

３　この方法の場合、免疫吸着剤として、リセヌクレア
ーゼを経てセルロースに結合さｎたウア・ぐインが使用
さ扛る。有機天然物質としてのセルロースは、実際に不
断に細菌で汚染され、その結果とりわけ量産に際しかつ
吸着剤の反復使用に際し無菌かつ発熱性物質不含の作業
が不可能である。

従って他の課題は、ジゴキ／ンおよびツギトキシンに特
定された、無菌かつ発熱物質不含の抗体の有効な製造法
を見出すことである。

この課題は、前述の方法で得らｆＬだガンマグロブリン
フラクションを、ツギトキシンが共有玄先　ｌヌ　Ｊｌ
　ン　イー　ｂ匡　Ｂ仏　斤斤　Ｊ−Ｊテ　１１」テ　
）ｋ　ごけ　７　−　ジ　ツー　、・。

ン抗体に特定の吸着剤に吸着させ、かつツギトキシンと
結合せざる成分を適当な緩価液で洗除することにより解
決さ扛る。第２の工程において、ジゴキシンに特定の１
゜が装荷さγした吸着剤が／♀ノξインで処狸されかつ
抗体のＦａｂ成分がＦｃ　成分と分離される。・ξ・ξ
イノおよび分離さ扛たＦｃ　成分が溶離さ扛、かつ引続
きジゴキンンに特定のＦａｂ断片が強力な溶離剤でカラ
ムから溶出されかつ回収さ扛ることかできる。

こうして得らｔ′したＦａｂ断片は、有害な不純物の最
後の痕跡をも除去するため、ゲル透過りロマトグラフィ
−、イオン交換クロマトグラフィー捷たけ分別沈殿並び
に限外濾過によυさらに精製さ扛ることかできる。

有利に、無機質のキャリヤマトリクスとして、適当な気
孔寸法を有する多孔質ガラスが使用さｎるが、但しまた
十分に大きし・表面積（約１〜２０ｍ”／９、有利に５
〜１５ｍ′／、９）および相応する特性を有する他の無
機質キャリヤ、例えばンリカゲル、酸什アルミニウムゲ
ル答力１伸用可能である。ガラスは、ジギトキシンを結
合させるキャリヤ表面を形成するため、例えば、トリア
ルコキシシリルゾロビルアミンまたは、遊離のアミン基
または他のジゴキシンと反応性の基を生じる他の化合物
のようなスペーサで処理さｎる。こうして得られたキャ
リヤは、過沃素酸塩ｆ自体公知の方法でいわゆる°′ジ
ギトキシンジアルデヒ１″に酸化さｎたジギトキンンと
反応さ扛（酸化については、サルド等（５ａｒｄ。

ｅｔ　ａｌ　’）によるＯｈｅｍ、Ｐｈａｒｍ、Ｂｕｌ
、第１８巻、９４〜９９頁（１９７０年））、かつ得ら
れた゛シッフの塩基”が還元さｎる。

こうして得られた吸着剤は、カート等により発表さｆ′
したもの（前記参照）と比べ以下の顕著な利点を有する
： １、　この吸着剤は、無機質キャリヤを使用することに
よシ、細菌繁殖に対し実際に不活性かつ機械的に極めて
安定であシ、従ってこｆらは繰返し使用されることがで
きる。

２、　ジゴキシンが、ノぐノぞインによシ分解不能なブ
リッジを経てガラスへ共有結合さｎることにより、抗体
の分割が直接に吸着剤で行なわｎる。これにより、異種
蛋白質だけでなく１，９パイン分解に際し生じるＦｃ　
成分並びにパノξイン自体をも慎重にカラムから洗除し
かつこγしにより吸着されｆｉＦａｂブロックと分離す
ることがｎ］能である。他方でこの分割によシ、残存す
るＦａｂ断片に対する吸着剤の結合力が、こｎらＦａｂ
断片が適当な脱着剤で変性さｎることなく再びカラムか
ら溶出されうる程度に低減さ扛る。

３、　ジギトキンンを含有する吸着剤を使用することに
より、ジギトキ／ン、ジゴキ／ンおよびそ扛らの誘導体
に特定のそれら抗体がとくに強固に結合され、従って最
終的に、前記グリコ／１に対する拮抗体として殊に有効
であるＦａｂブロックが得らｎる。

ジゴキシン抗体の、工ｇＧ含有血清からのジギトキシン
含有吸着剤への吸着は、このような分離に常用の中性〜
弱酸性（ｐＨ６〜７．５）の水性緩衝−および塩溶液中
で行なわ扛る。有利に、中性の燐酸塩緩衝剤が０．０１
−０．５Ｍの濃度で、塩としての塩化ナトリウムおよび
硫酸アンモニウムが０．０１〜０５Ｍ１とくに００２５
〜０゜０５Ｍの濃度で使用さ扛る。この溶液は、さらに
付加的に常用の湿潤剤０．０１〜０．１重量％を含有す
ることができる。またノミ２４フ分解後に、こ九ら溶液
を使用し、ＦＣ成分並びにノミノミインがカラムから洗
除さｎることができる。

高濃度の強酸性緩衝液は、抗体ないしはＦａｂ断片の分
離を生じるが、但し同時に部分的変性をも生じる。従っ
て有利に、ｐ’ａｂ断片の分離が希鉱酸、とくに１〜１
０ｍＭ１ＩＩ度の塩酸で実施さ扛る。２〜５ｍＭの濃度
が有利である、そｎというのもこの濃度が、Ｆａｂブロ
ックの迅速な分離と最低の変性率とを結び付け、かつ透
析により容易にＦａｂブロックと分離されうるからであ
る。

実施例 以下に、本発明を実施例につき詳説するが、本発明はこ
れら実施例により制限されない。

例： 免疫原 ジゴキシン−グルタリル−〇−ヒ１０キシサクシンイミ
ドを、水溶液中で蛋白質、有利に牛アルブミンまたはエ
デスチン（麻の実からの蛋白質の１種）と反応させる。

過剰量のジゴキシン誘導体を分離した後、生じたジギト
キソーズの蛋白質１分子当り多数のジゴキ／ン分子を、
グルタリル連鎖を介し蛋白質へ結合させる。

免疫化 ジゴキンン免疫原約ｏ５ｍｙを、完全なフロイントの補
薬（Ｆｒｅｕｎｃｌ’ｓ　Ａｄｊ　ｕ　ｖａｎｓ　）中
に溶解し、最低体重４５ｋｇの健全な羊の陵内に投与す
る。

２週間、その後にΦ週間の間隔で、免疫原を同じく調剤
し、免疫応答を増大させるため筋肉内および皮下に注射
する。２〜４ケ月後に、動物の血清中の力価がジゴキシ
ン特定のＩｇＧ１ｍｇ／−に達する。

血清採取、分析、プール形成 サンプル検査で前記力価が得らｆ′Ｌだ健全な動物は、
最低１力年にわたり毎週頚動脈からの採血に使用するこ
とができる。採血の法取り検査において、力価を、放射
線免疫試験または酵素免疫試験で連続的に測定する。同
じく抜取り検査において、結合定数を、所定希釈率の抗
血清サンプルにより、放射性標識せるジゴキシンの結合
率をスキャツチャード・プロット評価（Ｓｃａｔｃｈａ
ｒｄ−Ｐｌｏｔ’　Ａｕｓｗｅｒｔｕｎｇ　）すること
により（リットル１モル）と一致することが明白となっ
た。Ｆａｂ単離で使用すべき抗血清の回分変動率をでき
るだけ低く維持するため、２０〜５０１のロットを、多
数の羊の長期間にわたる個々の採血から形成する。

’Ａ整さｎた多孔質ガラス（エレクトロ・ニュクレオニ
クス社製（Ｅｌｅｃｔｒｏ　Ｎｕｃｌｅｏｎｉｃｓ　、
工ｎｃ。

、Ｆａｉｒｆｉｅｌｄ　、ＵＳＡ　）　）　９４０　ｊ
ｉを、微小粒子および不純物を除去するため水性懸濁液
中で超音波で処理し、その後に６５％硝酸で８０〜９０
℃で３時間加熱する。酸を洗除した後、ガラスを１５０
℃で乾燥する。この精製ガラスを、無水ジメチルスルホ
キシ１２７１中で３−　（１−リエトキノシリル）−ゾ
ロピルアミン３００−とともに約２０時間８５℃で還流
冷却器下に緩慢に攪拌する。過剰量のンリルアミンをイ
ソゾロノミノールで洗除し、かつアミン化せるガラスを
さらに乾燥する（６０℃、低真空）。収量二アミノゾロ
ビルガラス１．８７（７５０ｇ）。

ジギトキシン６ｇを、エタノール／水の２：１混合物午
５Ｏ−中で化学量論的に畳重の過沃素酸ナトリウム（１
，７＃）と室温で反応させる。不溶性の沈殿を濾別しか
つ廃却する。上澄みを回転蒸発器で乾燥させる。残渣を
水２×１００−で洗浄し、その後に真空中で塩化カル／
ラム上で乾燥する。収量：酸化ジギトキシン牛〜ｙ０ 酸化ジギトキ／ン４．５ｇを、エタノール−水の２：］
、混合物２．２５７中に溶解し、アミノプロピル−ガラ
ス７５０ｇを混合し、かつ緩慢な攪拌下に２０時間室温
で反応させる。このガラスを、濾別することにより分離
する。濾液中で、ジギトキシンをＵｖ（２６０ｎｍ　）
中の吸光度測定により定量し、かつこ扛から固定さｎた
ジギトキシンを３１算する。（標準値ニー）ゴキ／ン３
ｍ９／ガラス容積−）。硼水素化ナトリウム４ｆＩを、
２次蒸溜水（ｂｉｄｅｓｔ、Ｗａｓｓｅｒ　）　１７中
に溶解し、エタノール２１で希釈しかつジギトキシン誘
導ガラスへ添加する。多数回の振り混ぜ下に、２時間に
わたり室温で、ｐＨ値を２Ｎ塩酸の添加により７．０〜
７．４　Ｋ調節する。この場合、差当り不安定なシップ
塩基結合を介しガラスに固定さｎたジギトキシンが、安
定な固定へ変換さ扛る。このジギトキシンーガラスー免
疫吸着剤をエタノール／水／エタノールで完全に洗浄し
、その後に低真空で乾燥する。収量：免疫吸着剤約１．
８７゜ この吸着剤を、緩衝液Ａ（ｐＨ７０の燐酸塩５０　ｍＭ
　／　Ｎａ１ｌ　０．１５　Ｍ／アジ化ナナトリウム０
１％に懸濁し、フリットを有するガラスカラム中へ充填
し、かつＮａ１ｌ　Ｑ、　５　Ｍ　／　）ライ−ｙ２０
（Ｔｗｅｅｎ２０）０．０５％より成る溶液、その後に
２次蒸溜水、その後にｌ’Ｍゾロピオン酸で洗浄する。

最後に、緩衝ｔＬＡで平衡化する。Ｆａｂ精製に際し使
用さｎた免疫吸着剤を、１Ｍプロピオン酸で洗浄するこ
とにより再生しかつ緩衝液Ａ中に４℃で貯蔵する。この
吸着剤は、特性が損なわｎることなく多数回使用可能で
ある。使用直前に、新鮮な吸着剤を前洗浄する精製に使
用する溶液を、オートクレーブ中でまたは薄膜濾過によ
シ滅菌する。溶液の製造に使用する水は蒸溜により発熱
物質不含である。

容器および装置並びに他の補助的材料（例えばクロマト
グラフ材料）は、適合性に応じ、加熱捷たは、Ｑ、　５
　Ｍ　ＮａＯＨを使用する処理により発熱物質不含とす
る。

抗血清３０Ｉ！を、リポ蛋白質を除去するため、アエロ
ジル（Ａｅｒｏｓｉｌ　）　３００　＆とともに１時間
室温で攪拌する。アエロジルを遠心分離により分離した
後・牛℃に冷却した上澄み液から、固体硫酸アンモニウ
ムを濃度１．８Ｍになるまで添加することにより、ガン
マグロブリンヲ沈殿させる。沈殿を、遠心分離すること
により集め、塩化ナトリウム０．１５　Ｍ　／ア）ｌ’
０．１％より成る溶液に溶解し、かつ緩衝液（燐酸塩１
５ｍＭ％　ｐ）１　７．１　／　Ｎａ１ｌ　５　Ｑ　ｍ
モル／ヒビタン（Ｈｉｂｉｔａｎｅ　）　Ｏ，００２％
）に対し牛℃で透析する。この透析物を、交換容積１６
．２Ａを有するジエチルアミンセルロースカラム（Ｄｅ
５２−セルロース、ホワットマン社製（Ｗｈａｔｍａｎ
　。

Ｍａｉｄｓｔｏｎｅ　、　Ｅｎｇｌａｎｄ　）　）　Ｋ
装填しかつ透析緩衝液と同じ組成の緩衝液で溶離する。

この緩衝液とともｆカラムから流出する蛋白質は、羊−
抗ジゴキンンー血清からの、Ｆａｂ製造に役立つ１ｇＧ
フラクションである。蛋白質収量は約５００〜７００Ｉ
である。ノゴキンン特定抗体の含有率は、抗血清中の初
期力価の約８０〜９０％である。

ジゴキシン特定工ｇ０１５　ｇを含有する溶液約１０１
ｉ中（７）　ＩｇＧ　７　ラクンヨン約２５０．９を、
燐酸塩５０　ｍＭ　／　Ｎａ１ｌ　Ｑ、　ｌ’５　Ｍ　
／ヒビタフ０．００之 ）に装入する。この溶液を、室温で約２時間以内ニ、シ
ゴキンンーガラスー免疫吸着剤２．４４が充填さｎたカ
ラムを経てポンプ搬送する。特定ＩｇＧ成分の９０％が
吸着剤に結合する。この吸着剤を、Ｎａ１ｌ　Ｏ．　３
　５　Ｍおよびトウイー７２００、０５％が添加さｎた
緩衝液Ｂで洗浄し、その後に、引続くノξノξイン分解
に適当である緩衝液０（ｐＨ７．０の燐酸塩７　５　ｍ
Ｍ　／　Ｎａ１ｌ　ｐ．、１　５Ｍ／エチレンジアミン
テトラ酢酸２ｍＭ／システィン１０ｍＭ／ヒビタン０．
０１％）で平衡化する。

ジゴキシン特定工ｇＧが装荷さｎた吸着剤を、遅滞する
ととｆ．ｃ　＜カラムからガラス管中へ移し、かつ緩衝
液０２ｊ？中に溶解された・ξ・ぐイン２４０ｍ９を混
合する。金属製翼形ミキサを使用し緩慢妃攪拌した場合
、４時間１５分で３７℃で培養さｌｒＬる。吸着剤懸濁
液の上澄みのサンプルを、培養中の種々の時点でＵＶ光
度３１（２．８　０ｍｍ）ｆｆｉ測定することにより、
Ｐｃ　蛋白質の分離の機構（Ｋｉｎｅｔｌｋ）および従
ってＦａｂ形成を追跡することができる。培養の終りに
、吸着剤を再ひカラム中へ充填しかつ緩，衝液Ｂで洗浄
する。システィンの存在におけるノ々ノξイン分解から
の遊離のＳＨ基を中和するため、吸着剤．を、沃化アセ
タミド１０ｒｎＭを添加した緩衝液（ｐＨ７５の燐酸塩
７５ｍＭ　／Ｎａ０１Ｑ．１５Ｍ／ヒビタン０．０１％
）で洗浄する。その後に、Ｎａ１１０、１δＭ／ヒビタ
ン０，０１％より成る溶液で過剰量の沃化アセタミ１を
洗除し、かつＮａｏ１３Ｏｎ＋Ｍ．溶液で吸着剤を溶離
のために的処理１−る。

溶離（　ＲＴ　） 特定Ｆａｂを溶離するため、３ｍＭ塩酸水を吸着カラム
を経てポンプ搬送する。Ｆａｂ蛋白質を、カラムの流出
口で、Ｕｙｌ＆収（２８０ｍｍ．、）を測定することに
より検知しかつ捕集する。蛋白質約１１ｇを含有する溶
液５〜７ｉを、限外ｄ便過により約２０（ｊ７−２５０
−に濃縮し、その後に直ちに親液性化する。

長さ１ｍのカラムに、セファクリＡ　Ｓ．２　０　０（
　５ｅｐｈａｃｒｙｌ　Ｓ　２　０　０　）　（ファー
マンア社製（Ｐｈａｒｍａｃｉａ　、Ｓｃｈｗｅｄｅｎ
　）　）　７．　５　ＩＩを充填し、かつ緩衝液（１）
）（７．０の燐酸塩５　ｍＭ　／　Ｎａ１ｌ　Ｑ．５、
Ｍ　／ヒビタン０００２％）で平衡化する。Ｆａｂ親液
性化物約５．９を、平衡化用緩衝液１１ｃｌｒｎｌ。

に溶解しかつゲルカラムを経てクロマトグラフ処理する
。石離物のＵＶ吸収を記録することにより、Ｆａｂビー
クを分子量５００００で検出しかつ捕集する。収量ニゲ
ルクロマトグラフにより均質ブエ蛋白質約３７５９゜Ｉ
ｇＧ残分、高分子Ｆａｂ凝集体および微小断片を分離す
る。このＦａｂ溶液約７００〜８００７を、限外濾過に
より約１５０　ｍｌにｔｋＪし、その後に緩衝液（燐酸
塩１５　ｍＭ　、　ｐＨ７，５／Ｎａａ１０．１５　Ｍ
　）　ＶＣ対し透析ｌ−る。

このクロマトグラフィーな、第２の分量のＦａｂ親液性
化物につき同じカラムで繰返す。クロマトグラフ処理し
たこ７Ｌら２つの分量を、引続く工程のために再び合す
る。第１の分量の中間貯蔵物は、−２０℃で深冷凍結さ
扛て℃・た。

Ｄｅ５２セルロース（滅菌および発熱性物質分離のため
Ｑ、　５　Ｎ　ＨＯＩおよびＱ、　５　Ｍ　ＮａＯＨで
前処理しり）ヲ、カラム中へ充填しかつｌＱｍＭ燐酸塩
緩衝１ｐＨ７，１で平衡化する。前記工程からのＦａｂ
蛋白質を限外濾過により蛋白質濃度的５０ｍ９／−に調
節し、その後にこの蛋白質溶液をＤｅ５２カラムを通過
させる。Ｆａｂ蛋白質が殆んど遅滞せずに通過し、痕跡
量の異秒蛋白質（例えばアルジミン、ＦＣ等）が固定さ
れる。Ｆａｂ蛋白質を、流出口で捕集し、必要に応じ限
外濾過により蛋白質約１５〜２０ｍン／ｍｌに濃縮し、
電極でｐＨ値を７０〜７１に補正し、かつ０２μ薄膜フ
イルタにより滅菌濾別１−る。工程収率：９５％。最終
収量：羊−抗ノゴキ／ンＦａｂ５〜６．ｆ’。

この滅菌濾別せる最終生成物を、細菌不含にガラス種牛
に充填しかつ一２０℃に深冷凍結し貯蔵する。

第１頁の続き ０発　明　者　へルムート・レンツ　ドイツ連邦共和ト
ラーセ　７ ０発　明　者　アルベルト・レーダー　ドイツ連邦共和
−セ　４１

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、　ジゴキシン抗体を製造するため、その場合適当な
   哺乳動物を蛋白質に結合せるジゴキシンで免疫し、この
   動物の血清を取得し、免疫グロブリンを含有する蛋白質
   フラクションを自体公知の方法で分離し、免疫学的に活
   性なグロブリンを免疫学的に活性なカラムＫ１１着させ
   かつ他の蛋白質と分離し、抗体を再びカラムから溶離さ
   せ、Ｆａｂフラクションを７８ノ？インで分解しかつ精
   製する方法において、免疫学的に活性な吸着剤として゛
   大表面積の無機質マトリクスを使用し、このマトリクス
   へ、・ぐ・ｅインで分解不能なスペーサを介しジギトキ
   シンアルデヒドを結合させ、かつＦａｂフラク７ヨンの
   、マトリクス上の抗体からの分離を実施することを特徴
   とするジギタリス抗体２　無機質のキャリヤ材料として
   多孔質ガラスを使用することを特徴とする特許請求の範
   囲第１項記載のジギタリス抗体の製造法。 ３、　スパーサとしてトリエトキン／ジルゾロビルアミ
   ンを使用することを特徴とする特許請求の範囲第１項ま
   たは第２項のいずｆか１項に記載のノギクリス抗体の製
   造法。 ４　免疫用の有効成分として、アルブミンに結合ぜるジ
   ゴキシングルタリル−０−ヒドロキシサクシン　イξｒ
   を使用することを特徴とする特許請求の範囲第１項から
   第３項までのいずｎか１項に記載の、クヅタリス抗体の
   製造法。 ５、抗体を含有するグロブリンフラクションを、動物血
   清から硫酸アンモニウム沈殿により取得することを特徴
   とする特許請求の範囲第１項から第牛項までの（・ずれ
   か１項に記載の２ギタリス抗体の製造法。 ６、抗体の吸着および随伴蛋白質の溶離な、ｐＨ７に緩
   衝された燐酸塩−／塩化ナトリウム溶液を使用し行なう
   、ことを特徴とする特￥ｒ請求の範囲第１項から第５項
   までのいずｒしか１項に記載のジギクリス抗体の製造法
   。 ７　ノミパインにより分離さｎたＦａｂ断片を、塩酸水
   を使用しカラムから溶離前ることを特徴とする特許請求
   の範囲第１項から第６項までのいず扛か１項に記載のジ
   ギタリス抗体の製造法。 ８、　カラムから分離さｆｌ、たＦａｂ断片を、ゲルお
   よび７寸りはイオン交換体のクロマトグラフィーにより
   さらに精製することを特徴とする特許請求の範囲第１項
   から第７項までのいず扛か１項に記載のジギタリス抗体
   の製造法Ｏ′ ９　ジゴキシン抗体を製造するため、その場合適当な咄
   乳動物を蛋白質に結合せるジゴキシンで免疫し、この動
   物の血清を取得し、免疫グロブリンを含有する蛋白質フ
   ラクションを自体公知の方法で分離し、免疫学的に活性
   なグロブリンを免疫学的に活性なカラムに吸着させかつ
   他の蛋白質と分離し、抗体を再ひカラムかう溶離させ、
   Ｆａｂフラク／ヨンをパノξインで分解しかつ精製する
   ための、免疫学的に活性な吸着剤として大表面積の無機
   質マトリクスを使用し、このマトリクスへ、バノξイン
   で分解不能なス被−サを介しジギトキ／ンアルデヒドを
   結合させ、かつＦａｂフラク／ヨンの、マトリクス上の
   抗体からの分離を実施する方法において、ジギトキンン
   を過沃素酸塩で酸化することにより得られたノギトキノ
   ンアルデヒドをマトリクスヘシソフの塩基として結合き
   せ、かつ硼水素化ナトリウムでこの／ラフの塩基を還元
   することを特徴とするジギタリス抗体の製造法。 １Ｏ免疫用の有効成分として、アルブミンに結合せるノ
   ボキシングルタリル−０−ヒドロキシサクンンイミドを
   使用することを特徴と−ｉ−る、特許請求の範囲第９項
   記載のノギタリス゛０、：：：：：ｏ　、、。ｉ９ｙ、
   ７１＞−ａ、ｙｆ、動物血清から硫酸アンモニウム沈殿
   により取得することを特徴とする特許請求の範囲第９項
   または第１０項のいず扛か１項に記載の２ギタリス抗体
   の製造法。 １２　抗体の吸着および随伴蛋白質の溶離火、ｐＨ’Ｉ
   Ｋ緩箭さ′ｎだ燐酸塩−／塩化ナナトリウム溶液使用し
   行なうことを特徴とする特許請求の範囲第９項から第１
   １項までのいず扛か１項に記載のジギタリス抗体の製造
   法。 ■３ノξパインによシ分離さｎたＦａｂ断片を、塩酸水
   を使用しカラムから溶離することを特徴とする特許請求
   の範囲第９項から第１２項までのいずｎか１項に記載の
   ノギタリス抗体の製造法。 １４、カラムから分離さｆ′したｐａｂ断片を、ゲルお
   よび／またはイオン交換体のクロマトグラフィーにより
   さらに精製することを特徴とする特許請求の範囲第９項
   から第１３項までのいす扛か１項に記載のジギタリス抗
   体の製造法。