JPS6144824A - 血漿あるいは血清中のｌｄｌおよびｖｌｄｌ含量の減少方法 - Google Patents
血漿あるいは血清中のｌｄｌおよびｖｌｄｌ含量の減少方法Info
- Publication number
- JPS6144824A JPS6144824A JP60110056A JP11005685A JPS6144824A JP S6144824 A JPS6144824 A JP S6144824A JP 60110056 A JP60110056 A JP 60110056A JP 11005685 A JP11005685 A JP 11005685A JP S6144824 A JPS6144824 A JP S6144824A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- plasma
- serum
- column
- ldl
- vldl
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
- A61K35/14—Blood; Artificial blood
- A61K35/16—Blood plasma; Blood serum
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
- B01J39/00—Cation exchange; Use of material as cation exchangers; Treatment of material for improving the cation exchange properties
- B01J39/04—Processes using organic exchangers
- B01J39/05—Processes using organic exchangers in the strongly acidic form
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
- B01J47/00—Ion-exchange processes in general; Apparatus therefor
- B01J47/014—Ion-exchange processes in general; Apparatus therefor in which the adsorbent properties of the ion-exchanger are involved, e.g. recovery of proteins or other high-molecular compounds
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Virology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Developmental Biology & Embryology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- External Artificial Organs (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
発明の分野
本発明は、低密度リボ蛋白質（ｌｏｗ ｄｅｎｓｉｔｙ
ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎｓ ）および極低密度リポ蛋白
質（ｖｅｒｙ ｌｏｗ ｄｅｎｓｉｔｙ １ｉｐｏｐｒ
ｏｔｅｉｎｓ ）の選択的除去により血漿あるいは血清
を精製する方法に関する。 発明の背景 絶食した（ ｆａｓｔｉｎｇ ）血漿中のリボ蛋白質は
、３種の主要な画分からなる二極低密度（Ｖ Ｌ Ｄ
Ｌ）画分、低密度（ＬＤＬ）画分および高密度（ＨＤＬ
）画分。高いＶＬＤＬ＋ＬＤＬ ： ＨＤＬ比率は、
初期冠動脈疾病の対応して高い発生率と結合しているこ
とが観察されている。〔“デ・ロー・デンシティ・リボ
プロティン・バスウェイ・ −アンド・イック・リレー
ション・ツー・アーセリオスクレローシス” （” Ｔ
ｈｅ ＬＯＷ ＤｅｎｓｉｔｙＬｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ
Ｐａｔｈｗａｙ ａｎｄ ｉｔｓ Ｒｅ１ａｔｉｏｎ
ｔ。 Ａｔｈｅｒｉｏｓｃｈｌｅｒｏｓｉｓ ” ）、ゴール
ドスタイン（Ｊ、 Ｌ、 Ｇｏｌｄｓｔｅｉｎ ）およ
びブラウン（Ｍ、 Ｓ。 Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ）、４６．８９７〜９６０
〕。更に、逆の関係が高いＨＤＬ ：ＶＬＤＬ＋ＬＤＬ
比率と心臓血管疾病に起因する総死亡率との間に観察さ
れている。〔′アソシエーションズ・オデ・シアラム・
ハイ・デンシティ・リボプロティン・アンド・トータル
・コレステロール・クイズ・トータル・カルジオバスキ
ュツー・アンド・キャンサー・モータリテイ・イン・ア
・セゾン・イヤー・プロスペクテイプ・スタディ・オプ
ｉ ｏ、ｏ ｏ ｏメツ ” （” Ａｓ５ｏｃｉａｔ
ｉｏｎｓ ｏｆ Ｓｅｒｕｍ Ｈｉｇｈ Ｄｅｎｓｉｔ
ｙＬｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ ａｎｄ Ｔｏｔａｌ Ｃｈ
ｏｌｅｓｔｅｒｏｌ ｗｉｔｈ ＴｏｔａｌＣａｒｄｉ
ｏｖａｓｃｕｌａｒ ａｎｄ Ｃａｎｃｅｒ Ｍｏｒｔ
ａｌｉｔｙ ｉｎ ａＳｅｖｅｎ Ｙｅａｒ Ｐｒｏｓ
ｐｅｃｔｉｖｅ ５ｔｕａｙ ｏｆ ｉ ［１，［］
Ｑ ［ＩＭｅｎ”）、ヤール（Ｓ、 Ｙａａｒｌ ）
、イールドボート（Ｕ、 Ｇｏｌｄｂｏｕｒｔ ）、イ
バンーゾハール（Ｓ。 Ｉｙａｎ−Ｚｏｈａｒ ）およびネリフエルド（Ｈ，Ｗ
。 Ｎｅｒｉｆｅｌｄ ）、１９８１゜ランセット（Ｌａｎ
ｃｅｔ ）、１：１０１１ 〜１０１５：］。 リボ蛋白質は、硫酸化イオン交換体の使用により血漿あ
るいは血清から選択的に除去できることが、この技術分
野において知られている。 １９７８年６月２０日付の米国特許第 ４．０９ ＋Ｉｓ、１３６号中には、分析目的でのリポ
蛋白質画分の選択的除去のための血清あるいは血漿のイ
ンビトロ処理が記載されている。リボ蛋白質は、他の血
漿あるいは血清蛋白質およびイオンの存在において、選
択的に結合する。この方法は、２価のカチオンを含有す
る溶液でのカラ人中の硫酸化イオン交換体の平衡化、お
よび血漿あるいは血清の２価カチオン濃度を０．０５か
ら１．０Ｍ−１での間に調整するための血漿あるいは血
清に対する同じカチオンの添加を含んでいる。血漿ある
いは血清をついで平衡行されたカラムに通過させ、それ
にリボ蛋白質は選択的に結合し、そして他の成分は血漿
あるいは血清中に留まる。結合したリボ蛋白質をカラム
から溶出し、そしてＬＤＬ、ＶＬＤＬおよびＨＤＬの割
合を決定する。ＬＤＬおよびＶＬＤＬの量の割合が大き
ければ大きいほど、患者はよシ危険である。 米国特許第４．Ｄ ９６，１３６号の方法は、分析方法
である。ＬＤＬおよびＶＬＤＬ画分を選択的に抽出し、
他方ＨＤＬを血漿あるいは血清中に残し、ついで血漿ま
たは血清を再使用しうろことは望ましいことであろう。 米国特許第４，０９６，１３６号の方法は、第１工程で
使用される２価のカチオンの固有の毒性の故に、生理的
に受容しえない。そのように処理されたどの血液も生理
的に非相容性であろう。 比較的高い程度の置換を有する硫酸化イオン交換体を使
用することによル、平衡化溶液中における比較的高濃度
の２価のカチオンの使用なしにＬＤＬおよびＶＬＤＬを
結合することの可能であることが、予想外のことには今
や見出された。加えて、ＨＤＬは保持されず、かくして
カラムの使用１ｄＨＤＬ ： ＬＤＬ＋ＶＬＤＬ比率の
最高調節を許容する。 本発明の目的は、この切実な要求の達成への若干の道を
たどること、あるいは少くとも公衆に対し有用な選択を
提供することにある。 発明の要約 本発明は、総括的には減少したＬＤＬおよびＶＬＤＬ含
量を有する血漿あるいは血清を製造する方法からなると
いうことができ、その方法は：ａ）血漿あるいは血清を
生理的に受容しうる塩溶液で平衡化したカチオン性イオ
ン交換体と組合せ、該交換体はヒドロキシＣ２〜Ｃ４ア
ルキル基で置換されそして化学的に結合した少くと４２
ｍｅｑ−／ｇｍの硫酸基を有する水不溶性で、親水性
で、水膨潤性で、架橋結合し、再生された、または微小
顆粒化されたセルロースマトリックスからなり、該交換
体のイオン交換容量は該硫酸基により提供され；および
、 ｂ）該血漿あるいは血清を、該ＬＤＬおよびＶＬＤＬ画
分の１部分がそれから該イオン交換体によ、り抽出され
てしまった後に、該イオン交換体から回収する工程から
なる。 好ましくは、該イオン交換体の硫酸化の程度は、少くと
も５．Ｏｍｅｑ、／ｇｍ−である。 好ましくは、該生理的に受容しうる塩溶液は、次の組成
を有する： Ｉ ＤＯ〜１６０ｍＭＮａＣｌ！ Ｏ〜４０ ｍＭ ＮａＨＣＯ３ ２〜 ８ ｍＭ ＫＣｅ １〜６ ｍＭ Ｍｇ（Ｊ２ よシ好ましくは、該生理的に受容しうる塩溶液は、次の
組成を有する： １４２ ｍＭ ＮａＣｌ ３ ｍＭ ＫＣｌ ３ ｍＭ ＭｇＣｌ！’２ 最も好ましくは、該生理的に受容しうる塩溶液は、次の
組成を有する： １１５ ｍＭ ＮａＣｌ ２７ ｍＭ ＮａＨＣＯ３ ５ｍＭ ＭＣｌ ３ ｍＭ ＭｇＣＩＪ２ 好ましくは、該ヒドロキシ０２〜Ｃ４アルキル基は、ヒ
ドロキシプロピル基で６る。 好ましくは、血液あるいは血漿をカチオン性イオン交換
体と組合せる該工程は、該カチオン性交換体を充填した
少くとも１個のカラムに核血液を通過させることからな
る。 好ましくは、該再生されたセルロース基質は、エピクロ
ロヒドリンで架橋結合し、そしてそれに結合する垂下（
ｐｅｎｄａｎｔ ）ヒドロキシプロピル基を有する。 好ましくは、該血漿あるいは血清は、核力ラムに少くと
も２回通過させる。 好ましくは、該血漿あるいは血清は、該カラムに少くと
も３回以上通過させる。 本発明は、上記の、そしてまた下記の実施例から心に描
きうる態様からなる。
ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎｓ ）および極低密度リポ蛋白
質（ｖｅｒｙ ｌｏｗ ｄｅｎｓｉｔｙ １ｉｐｏｐｒ
ｏｔｅｉｎｓ ）の選択的除去により血漿あるいは血清
を精製する方法に関する。 発明の背景 絶食した（ ｆａｓｔｉｎｇ ）血漿中のリボ蛋白質は
、３種の主要な画分からなる二極低密度（Ｖ Ｌ Ｄ
Ｌ）画分、低密度（ＬＤＬ）画分および高密度（ＨＤＬ
）画分。高いＶＬＤＬ＋ＬＤＬ ： ＨＤＬ比率は、
初期冠動脈疾病の対応して高い発生率と結合しているこ
とが観察されている。〔“デ・ロー・デンシティ・リボ
プロティン・バスウェイ・ −アンド・イック・リレー
ション・ツー・アーセリオスクレローシス” （” Ｔ
ｈｅ ＬＯＷ ＤｅｎｓｉｔｙＬｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ
Ｐａｔｈｗａｙ ａｎｄ ｉｔｓ Ｒｅ１ａｔｉｏｎ
ｔ。 Ａｔｈｅｒｉｏｓｃｈｌｅｒｏｓｉｓ ” ）、ゴール
ドスタイン（Ｊ、 Ｌ、 Ｇｏｌｄｓｔｅｉｎ ）およ
びブラウン（Ｍ、 Ｓ。 Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ）、４６．８９７〜９６０
〕。更に、逆の関係が高いＨＤＬ ：ＶＬＤＬ＋ＬＤＬ
比率と心臓血管疾病に起因する総死亡率との間に観察さ
れている。〔′アソシエーションズ・オデ・シアラム・
ハイ・デンシティ・リボプロティン・アンド・トータル
・コレステロール・クイズ・トータル・カルジオバスキ
ュツー・アンド・キャンサー・モータリテイ・イン・ア
・セゾン・イヤー・プロスペクテイプ・スタディ・オプ
ｉ ｏ、ｏ ｏ ｏメツ ” （” Ａｓ５ｏｃｉａｔ
ｉｏｎｓ ｏｆ Ｓｅｒｕｍ Ｈｉｇｈ Ｄｅｎｓｉｔ
ｙＬｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ ａｎｄ Ｔｏｔａｌ Ｃｈ
ｏｌｅｓｔｅｒｏｌ ｗｉｔｈ ＴｏｔａｌＣａｒｄｉ
ｏｖａｓｃｕｌａｒ ａｎｄ Ｃａｎｃｅｒ Ｍｏｒｔ
ａｌｉｔｙ ｉｎ ａＳｅｖｅｎ Ｙｅａｒ Ｐｒｏｓ
ｐｅｃｔｉｖｅ ５ｔｕａｙ ｏｆ ｉ ［１，［］
Ｑ ［ＩＭｅｎ”）、ヤール（Ｓ、 Ｙａａｒｌ ）
、イールドボート（Ｕ、 Ｇｏｌｄｂｏｕｒｔ ）、イ
バンーゾハール（Ｓ。 Ｉｙａｎ−Ｚｏｈａｒ ）およびネリフエルド（Ｈ，Ｗ
。 Ｎｅｒｉｆｅｌｄ ）、１９８１゜ランセット（Ｌａｎ
ｃｅｔ ）、１：１０１１ 〜１０１５：］。 リボ蛋白質は、硫酸化イオン交換体の使用により血漿あ
るいは血清から選択的に除去できることが、この技術分
野において知られている。 １９７８年６月２０日付の米国特許第 ４．０９ ＋Ｉｓ、１３６号中には、分析目的でのリポ
蛋白質画分の選択的除去のための血清あるいは血漿のイ
ンビトロ処理が記載されている。リボ蛋白質は、他の血
漿あるいは血清蛋白質およびイオンの存在において、選
択的に結合する。この方法は、２価のカチオンを含有す
る溶液でのカラ人中の硫酸化イオン交換体の平衡化、お
よび血漿あるいは血清の２価カチオン濃度を０．０５か
ら１．０Ｍ−１での間に調整するための血漿あるいは血
清に対する同じカチオンの添加を含んでいる。血漿ある
いは血清をついで平衡行されたカラムに通過させ、それ
にリボ蛋白質は選択的に結合し、そして他の成分は血漿
あるいは血清中に留まる。結合したリボ蛋白質をカラム
から溶出し、そしてＬＤＬ、ＶＬＤＬおよびＨＤＬの割
合を決定する。ＬＤＬおよびＶＬＤＬの量の割合が大き
ければ大きいほど、患者はよシ危険である。 米国特許第４．Ｄ ９６，１３６号の方法は、分析方法
である。ＬＤＬおよびＶＬＤＬ画分を選択的に抽出し、
他方ＨＤＬを血漿あるいは血清中に残し、ついで血漿ま
たは血清を再使用しうろことは望ましいことであろう。 米国特許第４，０９６，１３６号の方法は、第１工程で
使用される２価のカチオンの固有の毒性の故に、生理的
に受容しえない。そのように処理されたどの血液も生理
的に非相容性であろう。 比較的高い程度の置換を有する硫酸化イオン交換体を使
用することによル、平衡化溶液中における比較的高濃度
の２価のカチオンの使用なしにＬＤＬおよびＶＬＤＬを
結合することの可能であることが、予想外のことには今
や見出された。加えて、ＨＤＬは保持されず、かくして
カラムの使用１ｄＨＤＬ ： ＬＤＬ＋ＶＬＤＬ比率の
最高調節を許容する。 本発明の目的は、この切実な要求の達成への若干の道を
たどること、あるいは少くとも公衆に対し有用な選択を
提供することにある。 発明の要約 本発明は、総括的には減少したＬＤＬおよびＶＬＤＬ含
量を有する血漿あるいは血清を製造する方法からなると
いうことができ、その方法は：ａ）血漿あるいは血清を
生理的に受容しうる塩溶液で平衡化したカチオン性イオ
ン交換体と組合せ、該交換体はヒドロキシＣ２〜Ｃ４ア
ルキル基で置換されそして化学的に結合した少くと４２
ｍｅｑ−／ｇｍの硫酸基を有する水不溶性で、親水性
で、水膨潤性で、架橋結合し、再生された、または微小
顆粒化されたセルロースマトリックスからなり、該交換
体のイオン交換容量は該硫酸基により提供され；および
、 ｂ）該血漿あるいは血清を、該ＬＤＬおよびＶＬＤＬ画
分の１部分がそれから該イオン交換体によ、り抽出され
てしまった後に、該イオン交換体から回収する工程から
なる。 好ましくは、該イオン交換体の硫酸化の程度は、少くと
も５．Ｏｍｅｑ、／ｇｍ−である。 好ましくは、該生理的に受容しうる塩溶液は、次の組成
を有する： Ｉ ＤＯ〜１６０ｍＭＮａＣｌ！ Ｏ〜４０ ｍＭ ＮａＨＣＯ３ ２〜 ８ ｍＭ ＫＣｅ １〜６ ｍＭ Ｍｇ（Ｊ２ よシ好ましくは、該生理的に受容しうる塩溶液は、次の
組成を有する： １４２ ｍＭ ＮａＣｌ ３ ｍＭ ＫＣｌ ３ ｍＭ ＭｇＣｌ！’２ 最も好ましくは、該生理的に受容しうる塩溶液は、次の
組成を有する： １１５ ｍＭ ＮａＣｌ ２７ ｍＭ ＮａＨＣＯ３ ５ｍＭ ＭＣｌ ３ ｍＭ ＭｇＣＩＪ２ 好ましくは、該ヒドロキシ０２〜Ｃ４アルキル基は、ヒ
ドロキシプロピル基で６る。 好ましくは、血液あるいは血漿をカチオン性イオン交換
体と組合せる該工程は、該カチオン性交換体を充填した
少くとも１個のカラムに核血液を通過させることからな
る。 好ましくは、該再生されたセルロース基質は、エピクロ
ロヒドリンで架橋結合し、そしてそれに結合する垂下（
ｐｅｎｄａｎｔ ）ヒドロキシプロピル基を有する。 好ましくは、該血漿あるいは血清は、核力ラムに少くと
も２回通過させる。 好ましくは、該血漿あるいは血清は、該カラムに少くと
も３回以上通過させる。 本発明は、上記の、そしてまた下記の実施例から心に描
きうる態様からなる。
本発明は、添付の図面を参照することにょシ、よシ完全
に理解しうるであろう；その 第１図は、生理的塩バッファーで平衡化したときの硫酸
化さ扛、ヒドロキシプロピル化さし、再生されたセルロ
ースのＬＤＬおよびＶＬＤＬ容量を示す溶出プロフィル
であり、 第２図は、カラムを通過した血漿の容量に対する硫酸化
さ扛、ヒドロキシゾロビル化され、再生すｆｌタセルロ
ース５ ｍｌカラムに結合したＬＤＬおよびＶＬＤＬの
ビーク■および■（それぞれＡおよびＢ）の領域のプロ
ットでアシ、 第６図Ａは、Ｍｇ ２＋含有バツフアーで平衡化した硫
酸化され、ヒドロキシプロピル化され、再生されたセル
ロースを使用して、血漿検体１酊から結合した総ＬＤＬ
、ＶＬＤＬおよびＨＤＬの溶出プロフィルであり、 第３図Ｂは、生理的塩バッファーで平衡化した硫酸化さ
れ、ヒドロキシノロビル化され、再生されたセルロース
を使用して、血漿検体１−から結合した総ＬＤＬ、ＶＬ
ＤＬの溶出プロフィルであり、 第４図は、Ｍｇ２バッファーで平衡化したカラムでの第
２図における如きプロットであり、第５図は、結合した
ＬＤＬおよびＨＤＬ画分の相対量を示す、生理的バッフ
ァー中のＮａＣｅの濃度に対するｍｙ／ｍｌにおける吸
着されたコレステロールのプロットでろＤ（Ｍ”＋不存
在下でのりボタンバク吸着、硫酸化セルロース５−２５
ＭＭＤＬ ７ｇ）、第６図は、生理的塩バッファーで
平衡化したとき、硫酸化され、ヒドロキシゾロビル化さ
れ、再生されたセルロースに対する他の血清蛋白質の非
特異結合の量を示す溶出プロフィルである。 発明の詳細な記述 本発明は次の実施例を参照することにより、よシ完全に
理解しうるであろう。 例１ 樹脂の製造 表題化合物は、米国特許第４，１７８．４３９号の実施
例３の方法により製造した。 ｂ） ２ ｍｅｑ、／Ｆ樹脂の製造 ａ）からのヒドロキシプロピル化され、再生されたセル
ロース（１０，９）ｋ、ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ
）１１０ｍ／と混合して、マトリックスを膨潤させた（
回転棒で回転させた密封容器中に入れることにより達成
）。ピリジン−クロロスルホン酸複合体（１０１りｋ加
え、そして混合物音４０時間回転した。真空を使用して
生成物を湿ったケーキに濾過し、それをついで次の溶媒
で洗滌した一ＤＭＦ（２００ｍｌ）、Ｄ Ｍ Ｆ ：
Ｈ２Ｏ，５０：５０（２００ｍｌ）、Ｈ２Ｏ（５００ｍ
Ａ’）、１Ｍ ＮａＣｅ （５００ｍｌ、 ４回に分け
て）および水（５００ｍＡ’、４回に分けて）。樹脂を
ついで限定しく ｄｅｆｉｎｅｄ ）そして凍結乾燥し
た。 ｃ） ５ｍｅｑ、７ｇ樹脂の製造 複合体４０ｇおよびＤＭＦ１２０１ＴＬｌを樹脂検体１
０ｇと使用したことを除き、ｂ）におけると同じ方法に
従った。 例２ 生理的塩バッファー（ｐＨ７，４）の製造バッファーを
、次の溶質の濃度で製造した。 ＮａＣ／ （、１４２ｍＭ ）、Ｋｃ４！’（５ｍＭ
） 、＆よびＭｇＣｅ２（３ｍＭ ）。これは血漿のイ
オン組成に相当する： Ｎａ” １４２ ＨＣＯｓ−２７に＋５
Ｃ（１−１０３ Ｃａ” ５“ ホスフェート ２Ｍｇ”
３ 蛋白質 １６〔参照：ヤヤンブル
（Ｊ’、 Ｌ、 Ｇａｍｂｌｅ ）、ケミカル・アナト
ミー（Ｃｂｅｍｉｃａｌ Ａｎａｔｏｍｙ ）、フィジ
オロジー・アンド・パツソロジーｅオブ・エキストラセ
ルラー・フリユイド（Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ ａｎｄＰ
ａｔｈｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ
Ｆｌｕｉｄ ）、６版、バーバード・ユニバーシティ
・プレス（ＨａｒｖａｒｄＵｎｉｖ、 Ｐｒｅｓｓ ）
、１９５４］。 このバッファー４ｅを製造するために、１ＭＫＣｅ ２
Ｑ ＴＬＩ、 ２ Ｍ ＭｇＣｅ２６ ｍｌオヨび４
Ｍ ＮａＣｄ１４２ｍ１を所要容量に仕上げた。 ＋ Ｃａ ２＋は、そ扛が血漿の凝固を促進するので、
バッファーから除いた。 例３ バッファーの組成は、ＭｇＣ１２（０−２５Ｍ ）、Ｎ
ａｃｅ （０，０２Ｍ ） 、およびＮａ）１００３
（０，１Ｍ ’）であった。このバッファー１１を製造
するために、次ノ量に溶カシア’Ｃ： Ｍｇ（Ｊ２ ＠
６ Ｍｇ０ （５０−８２ｇ）、ＮａＣｌ （１−２
！ｉ’ ）、ＮａＨＣＯ３（０，８４１１）。 例４ 溶出バッファー（ｐＨ７，４）の製造 バッファーの組成は、 ＮａＣｅ（２Ｍ ）オ、！ヒＮ
ａＨＣＯ３（０−０１Ｍ ）であった。このバッファー
を製造するために、次の量を水１ｇに溶かしたーＮａｃ
ｌ （１１７１／ ）、ＮａＨＣＯ３（０，８４Ｊｉ’
）。 例５ バッファーは２ Ｍ ＭｇＣ１１２２５ｍ 、 １Ｍ
ＮａＣＪ ４ｄおよび１Ｍ ＮａＨＣＯ３２１Ｒ１を含
有した。−は７．４に調節し、そして容量は１００４と
した。血漿は、このバッファーで１：１希釈した。 例６ 微小物（ｆｉｎｅｓ ）を除去するための方法例１に従
い製造した樹脂を、１０カラム容量の３ Ｍ ＮａＣｌ
、 ０．１ Ｍ炭酸アンモニウム（＃ ９．０ ）、
ついで蒸留水、ついで水：エタノール、２：１、そして
最後に蒸留水で順次洗滌した。若干の微小粒子がカラム
使用および再生の間に生成し、そして樹脂を背の高い容
器（たとえばメスシリンダー）中に沈積させることによ
り除去した。微小物を含有する過剰の液体（樹脂の容量
の少くとも２５％）を吸引により除去した。 例７ 血漿検体の製造 ブタの血液の採取の間、クエン酸ナトリウム５ｇＺｇを
加えて、凝固を防止した。血液をついで４００ Ｏｒｐ
ｍで２０分間遠心分離して、赤血球を除去した。もしも
必要ならば、血漿検体のＰＨヲＱ、１５ Ｍ ＮａＯＨ
または［１，１Ｍ Ｈ（Ｊのいずれかで７．４に調節し
た。電導度は、生理的塩バッファーでの実験のために６
．５ｍに、そしてｙｇ２＋含有バッファーでの実験のた
めにＩｓｍに調節した（検体に依存し、水または１〜４
Ｍ ＮａＣｌのいずれかで）。 Ｍｇ２＋含有バツフアーでの分離のために、血漿検体を
例５に従い製造したバッファーと１：１で混合した。 例８ クロマトグラフィ条件 例１に従い製造した樹脂検体（５ｄ１膨潤容量１４ｄ／
ｇ、５．１６ ｍｅｑ ／ ｇ）をカラムバッファーで
平衡化し、そして溶出液の−および電導度を測定した。 試験カラムに使用の前に、樹脂を血漿検体にさらし、つ
いで清浄化した。この樹脂の前処理は、樹脂検体を最初
に使用するときに観察される物質の損失を著しく減少さ
せた。樹脂検体をガラスカラム（０，９Ｘ２０ａｎ）中
に、樹脂を保持するためにガラスウールプラグで、充填
した。使用した流速はｌ 、 ６ｍｌ ７分であり、そ
して嬬動ポンプで達成した。画分はセシル（Ｃｅｃｉｌ
） ２１２分光光度計上、２０．Ｄ、フルスケールで
追跡した。 使用した波長は、生理的塩につき２４２または２５６
ｎｍのいず扛か、あるいはＭｇ ２＋含有バツフアーに
つ＠ ３００ ｎｍであった。チャート記録器はＣ１，
２５ａｎ／分で操作した。 例９ 例１に従い製造した樹脂５１１１４’ｔ−含有する１連
の試験カラムを生理的塩バッファーで平衡化し、そして
次の血漿容ｔｏ、５．１．０．１．５．２．０．２．５
．３．０．４．０および１Ｑｍを負荷した。負荷の後、
各カラムを生理的塩バッファーで、Ｏ，Ｄ、の読みが最
初の値（第１．３および６図におけるビークＩ）に戻る
まで洗滌した。溶出バッファーは、つイテ結合ＶＬＤＬ
＋ＬＤＬ画分（第１．３および６図におけるビーク■）
を溶出するために使用した。採取したビーク■に相当す
る溶液金、ついで、生理的塩溶液でまた平衡化した＄２
の試験カラムに負荷し、そしてビークＩｌｌ （非結合
物質）およびビーク■（第１のカラムに結合しなかった
残留ＶＬＤＬ、ＬＤＬ）ｔ−与えるために読み取シを繰
返した。 クロマトグラフィ系列についての典型的溶出プロフィル
を、第１図として示す。このプロフィルは、血液中に存
在するＶＬＤＬおよびＬＤＬの大部分が血液の樹脂への
１回通過によ多結合することを示している。 この結果は第２図により明瞭に示されておシ、そ扛には
例の各種血漿負荷において結合したＶＬＤＬおよびＬＤ
Ｌの組合せ量が示されている。 曲線Ａは第１のカラムに結合した組合せＶＬＤＬおよび
ＬＤＬの童に相当し、他方曲線Ｂは採取したビーク■に
相当する溶液を第２のカラムに負荷したとき結合したＶ
ＬＤＬおよびＬＤＬの組合せ童を示す。従って、５ｍＪ
カラムにつき血漿１０１ｒＬｌの負荷において、ＶＬＤ
ＬおよびＬＤＬの７９％（総量０．４０ Ｆのうち０．
３３、．９ ＞がカラムの１回の通過により除去された
。 比較的高い流速（＃速度１．８（２）７分）をこの実験
において使用し、そしてこれは低い検体負荷においてさ
えもリボ蛋白質の不完全な結合を説明しうる。そｎらの
高い流速は分離が最少時間で行われなければならない臨
床条件に近似させるために選択した〔たとえば、直径１
０（２）のカラムに充填した樹脂１４００−は、２（１
０）ｆｆＪ／分（１２ｄ／時間）の流速を与え、それは
試験カラムで使用した流速に相当するコ。 例１０ Ｍｇ ２＋バツフアーで平衡化した試験カラムを使用し
たクロマトグラフィ系列を、比較のために行った。 例７に２ける如く製造した血漿検体を、カラムをＭｇ
２＋含有バツフアーで平衡化したことを除き例９に記載
した実験条件を使用して、クロマトグラフィした。Ｍｇ
２＋含有バツフアーでの各分離につき、血漿負荷容量
を例５のバッファーと１＝１比率で混合した。 第３図は、２つのクロマトグラフィ系列の溶出プロフィ
ルを比較するものである。第３Ａ図は、１連の例１０に
ついての典型的溶出プロフィルを示し、ビーク■はＶＬ
ＤＬ、ＬＤＬｊｌ？よびＨＤＬを含有する。第６Ｂ図は
、Ｍｇ ２＋の実質的不存在において行われた１連の例
９についてのプロフィルを示す。この効果はまた、第２
図と第４図との比較により説明される。 カラムからのＭｇ２＋の除去は、よシ少い量の総リボ蛋
白質が結合する結果を生じることを知ることができる。 この結合における減少は、生理的塩で平衡化した基質に
より保持されないＨＤＬに起因するものである。ＨＤＬ
の結合の欠乏はまた、第５図により詳細に示されている
。 例１１ 例９の実験条件下に、例９におけると同じ血漿負荷＠ｆ
ｋクロマトグラフィした。ビーク■に相当する組合せＬ
ＤＬおよびＶＬＤＬ溶液を採取し、そしてまた生理的塩
で平衡化した第２のカラムに再負荷した。この再負荷の
結果を、第６図に示す。 対照実験は、他の主要血漿蛋白質が流酸化した樹脂と結
合しないことを示した。しかしながら、少量のある蛋白
質は、リボ蛋白質−樹脂複合体に対する結合に基き結合
リボ蛋白質に夾雑しうる。 従って、第６図において、ビーク■および■の各各中の
蛋白質の量はローリ−法〔ローリ−（Ｌｏｗｒｙ ）、
１９５１、バイオロジカル・ケミストリー（Ｂｉｏｌ、
Ｃｈｅｍ、 ）、１９３．２６５頁以下〕により測
定し、そして夾雑の量（ビーク■に関連してビーク■に
おける蛋白質の損失により測定して）は３％以下であっ
た。この値は、ビーク■に関連してビーク■の領域にお
ける少量の減少に相当した。 この結果は、患者の血液からＬＤＬを除去するために塩
の生理的に受容しりろ水準で平衡化されたこの樹脂の使
用が非常に少量の血清蛋白質、たとえばアルジミン、グ
ロブリン類の損失しか生じないことを示している。若干
の血清蛋白質、たとえばヘパリン親和性カラムと結合す
ることが知られている第８因子（ｆａｃｔｏｒ ８）が
、しかしながら、除去されることは可能である。 例１２ よく攪拌し、冷却（０〜４℃）したＤＭＦ（２ｅ ）
中に液状ＳＯｓ （１（１０）１１） ｆユツ＜ ’）
滴下ｆることにより、（ジメチルホルムアミド）ＤＭＦ
： ＢＯ３の溶液を製造した。温度を添加の間、０〜４
℃に維持し、そして溶液をｓｏ３添加の完了に際して、
室温で１時間攪拌した。生成した溶液は、丸底ガラス栓
付褐色ジャー中に、窒素下そして暗所に貯蔵した。溶液
の検体を水で希釈しそして滴定したーＳｏ３：ＤＭＦの
１．１８Ｎ溶液を生じた。 Ｂ、硫酸化 （ａ） 最初の１ｇ実験は、上記溶液５．５ ＷＬｌ
がヒドロキシゾロビル化され、再生されたセルロース（
樹脂）とで、約１．５ｍｅｑ−７ｇの硫酸置換および１
９ｍ１／１１の膨潤容量を与えることを示した。この溶
液１６ｍの使用は、４．９ ｍｅｑ−／ Ｉおよび１６
１ｄＺｇをそれぞれ与えた。この硫酸化方法の使用は、
上記に略述した如く１当量のピリジンの添加を随伴した
。 （ｂ） 方法 一樹脂１００ｇ’ｅＤＭＦ７００ｍＪ中で１夜膨潤させ
、 一ピリジン１７５１１１ｔ−ＢＯ３： ＤＭＦ複合体１
７５０ゴに加、え、 −この混合物をついで膨潤したＤＭＦ−樹脂懸濁液に加
え、 一生成した混合物をついで密封容器中で６時間攪拌し、
そして１夜放置し、 一樹脂を次の如く洗滌し：ＤＭＦ２ｇ；７０％Ｄ Ｍ
Ｆ ／ ３０％）（２ｏ ３１ ； ３０％ＤＭＦ／７
Ｑ％ Ｈ２Ｏ３ｅ ｐ Ｈ２Ｏ１７１ｓ −生成した物質を凍結乾燥し、そして５．．５５ ｍｅ
ｑ−７ｇおよび重量１９０Ｆ（膨潤容量１４７ｆｆＪ、
＃）を与え、 一４５０ｇへのスクールアップは同じ結果を与えた。 例１３ 樹脂を例１２の方法に従い製造した。カラム容量は、バ
ッファーで平衡化した後７．５ ′ＩＬｌであった。 それに、１Ｍ ＮａＨＣＯ３０−５１１１、Ｉ Ｍ Ｎ
ａｃ＃ １．０ｍおよび蒸留水で総容量７ＱｍＪに希釈
した血清３７ｍ１（比率５：１）ｔ−負荷した。 ６カラムをセットした： １）生理的バッファーで平衡化した、硫酸化され、ヒド
ロキシプロピル化された微細顆粒化セルロース（８ＭＧ
Ｏ）。 ２） Ｍｇ２＋含有バツフアーで平衡化し、塩で洗滌
した、硫酸化され、ヒドロキシプロピル化され、再生さ
れたセルロース（５ＨＲＣ）。 ３）生理的バッファーで平衡化し、そして塩で洗滌した
（ＳＨＲＣ）。 検体を負荷し、そして４回ゆつ＜ Ｄ （１，５１７／
分以下）操作し、そしてバルマーストン・ノース・ホス
ピタル（Ｐａｌｍｅｒｓｔｏｎ Ｎｏｒｔｈ Ｈｏ５ｐ
ｉｔａｌ ） 、バルマーストンｅノース（Ｐａｌｍｅ
ｒｓｔｏｎ Ｎｏｒｔｈ ）、ニューシーラントにおい
て分析した。 コレステロール分析 総血清 ０．７６ ６．４８、Ｍ
、Ｇ、Ｃ，０，２４２，０ Ｓ、Ｈ，Ｒ，Ｃ。 （生理的バッファー） ０°２９ ２°
４Ｓ、Ｈ，Ｒ，Ｃ。 （Ｍｇ”＋含有バッファー） １°０７ ２
°６樹脂のコレステロール容量 １） （８ＭＧＣ） ８．
５２） （ＳＨＲＣ）（生理的バッファー）
８．０３） （８ＨＲＣ）（Ｍｇ２＋含有バツフ
アー）７．３検体を水のみで希釈したことを除いてはこ
の方法を繰返して、次の結果を得た： 総血清 ０．８９ ８．１（ＳＨＲＣ Ｍｇバッファー） ０・３３ ２．９
（ＳＨＲＣ 生理的バッファー） ０°２７ ２°６樹脂
のコレステロール容量 １） （ＳＨＲＣＭｇバッフ”１ ）
１０．１ｇ／Ｖ２） （ｓＨＲｃ 生理的ハラ７
７− ） １０．１．９／ ｅコレステロ
ール容量は、樹脂ノＶ Ｌ Ｄ Ｌ ＋ＬＤＬ容量と直
接釣合っている。生理的に受容しうるバッファーでの方
法の使用は、Ｍｇ２＋バツフアーを使用するそｎと少く
とも等価の結果を与えることが知ら扛る。加えて、バッ
ファーの代りに水での検体の希釈は、よシ高い容量を導
く。
に理解しうるであろう；その 第１図は、生理的塩バッファーで平衡化したときの硫酸
化さ扛、ヒドロキシプロピル化さし、再生されたセルロ
ースのＬＤＬおよびＶＬＤＬ容量を示す溶出プロフィル
であり、 第２図は、カラムを通過した血漿の容量に対する硫酸化
さ扛、ヒドロキシゾロビル化され、再生すｆｌタセルロ
ース５ ｍｌカラムに結合したＬＤＬおよびＶＬＤＬの
ビーク■および■（それぞれＡおよびＢ）の領域のプロ
ットでアシ、 第６図Ａは、Ｍｇ ２＋含有バツフアーで平衡化した硫
酸化され、ヒドロキシプロピル化され、再生されたセル
ロースを使用して、血漿検体１酊から結合した総ＬＤＬ
、ＶＬＤＬおよびＨＤＬの溶出プロフィルであり、 第３図Ｂは、生理的塩バッファーで平衡化した硫酸化さ
れ、ヒドロキシノロビル化され、再生されたセルロース
を使用して、血漿検体１−から結合した総ＬＤＬ、ＶＬ
ＤＬの溶出プロフィルであり、 第４図は、Ｍｇ２バッファーで平衡化したカラムでの第
２図における如きプロットであり、第５図は、結合した
ＬＤＬおよびＨＤＬ画分の相対量を示す、生理的バッフ
ァー中のＮａＣｅの濃度に対するｍｙ／ｍｌにおける吸
着されたコレステロールのプロットでろＤ（Ｍ”＋不存
在下でのりボタンバク吸着、硫酸化セルロース５−２５
ＭＭＤＬ ７ｇ）、第６図は、生理的塩バッファーで
平衡化したとき、硫酸化され、ヒドロキシゾロビル化さ
れ、再生されたセルロースに対する他の血清蛋白質の非
特異結合の量を示す溶出プロフィルである。 発明の詳細な記述 本発明は次の実施例を参照することにより、よシ完全に
理解しうるであろう。 例１ 樹脂の製造 表題化合物は、米国特許第４，１７８．４３９号の実施
例３の方法により製造した。 ｂ） ２ ｍｅｑ、／Ｆ樹脂の製造 ａ）からのヒドロキシプロピル化され、再生されたセル
ロース（１０，９）ｋ、ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ
）１１０ｍ／と混合して、マトリックスを膨潤させた（
回転棒で回転させた密封容器中に入れることにより達成
）。ピリジン−クロロスルホン酸複合体（１０１りｋ加
え、そして混合物音４０時間回転した。真空を使用して
生成物を湿ったケーキに濾過し、それをついで次の溶媒
で洗滌した一ＤＭＦ（２００ｍｌ）、Ｄ Ｍ Ｆ ：
Ｈ２Ｏ，５０：５０（２００ｍｌ）、Ｈ２Ｏ（５００ｍ
Ａ’）、１Ｍ ＮａＣｅ （５００ｍｌ、 ４回に分け
て）および水（５００ｍＡ’、４回に分けて）。樹脂を
ついで限定しく ｄｅｆｉｎｅｄ ）そして凍結乾燥し
た。 ｃ） ５ｍｅｑ、７ｇ樹脂の製造 複合体４０ｇおよびＤＭＦ１２０１ＴＬｌを樹脂検体１
０ｇと使用したことを除き、ｂ）におけると同じ方法に
従った。 例２ 生理的塩バッファー（ｐＨ７，４）の製造バッファーを
、次の溶質の濃度で製造した。 ＮａＣ／ （、１４２ｍＭ ）、Ｋｃ４！’（５ｍＭ
） 、＆よびＭｇＣｅ２（３ｍＭ ）。これは血漿のイ
オン組成に相当する： Ｎａ” １４２ ＨＣＯｓ−２７に＋５
Ｃ（１−１０３ Ｃａ” ５“ ホスフェート ２Ｍｇ”
３ 蛋白質 １６〔参照：ヤヤンブル
（Ｊ’、 Ｌ、 Ｇａｍｂｌｅ ）、ケミカル・アナト
ミー（Ｃｂｅｍｉｃａｌ Ａｎａｔｏｍｙ ）、フィジ
オロジー・アンド・パツソロジーｅオブ・エキストラセ
ルラー・フリユイド（Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ ａｎｄＰ
ａｔｈｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ
Ｆｌｕｉｄ ）、６版、バーバード・ユニバーシティ
・プレス（ＨａｒｖａｒｄＵｎｉｖ、 Ｐｒｅｓｓ ）
、１９５４］。 このバッファー４ｅを製造するために、１ＭＫＣｅ ２
Ｑ ＴＬＩ、 ２ Ｍ ＭｇＣｅ２６ ｍｌオヨび４
Ｍ ＮａＣｄ１４２ｍ１を所要容量に仕上げた。 ＋ Ｃａ ２＋は、そ扛が血漿の凝固を促進するので、
バッファーから除いた。 例３ バッファーの組成は、ＭｇＣ１２（０−２５Ｍ ）、Ｎ
ａｃｅ （０，０２Ｍ ） 、およびＮａ）１００３
（０，１Ｍ ’）であった。このバッファー１１を製造
するために、次ノ量に溶カシア’Ｃ： Ｍｇ（Ｊ２ ＠
６ Ｍｇ０ （５０−８２ｇ）、ＮａＣｌ （１−２
！ｉ’ ）、ＮａＨＣＯ３（０，８４１１）。 例４ 溶出バッファー（ｐＨ７，４）の製造 バッファーの組成は、 ＮａＣｅ（２Ｍ ）オ、！ヒＮ
ａＨＣＯ３（０−０１Ｍ ）であった。このバッファー
を製造するために、次の量を水１ｇに溶かしたーＮａｃ
ｌ （１１７１／ ）、ＮａＨＣＯ３（０，８４Ｊｉ’
）。 例５ バッファーは２ Ｍ ＭｇＣ１１２２５ｍ 、 １Ｍ
ＮａＣＪ ４ｄおよび１Ｍ ＮａＨＣＯ３２１Ｒ１を含
有した。−は７．４に調節し、そして容量は１００４と
した。血漿は、このバッファーで１：１希釈した。 例６ 微小物（ｆｉｎｅｓ ）を除去するための方法例１に従
い製造した樹脂を、１０カラム容量の３ Ｍ ＮａＣｌ
、 ０．１ Ｍ炭酸アンモニウム（＃ ９．０ ）、
ついで蒸留水、ついで水：エタノール、２：１、そして
最後に蒸留水で順次洗滌した。若干の微小粒子がカラム
使用および再生の間に生成し、そして樹脂を背の高い容
器（たとえばメスシリンダー）中に沈積させることによ
り除去した。微小物を含有する過剰の液体（樹脂の容量
の少くとも２５％）を吸引により除去した。 例７ 血漿検体の製造 ブタの血液の採取の間、クエン酸ナトリウム５ｇＺｇを
加えて、凝固を防止した。血液をついで４００ Ｏｒｐ
ｍで２０分間遠心分離して、赤血球を除去した。もしも
必要ならば、血漿検体のＰＨヲＱ、１５ Ｍ ＮａＯＨ
または［１，１Ｍ Ｈ（Ｊのいずれかで７．４に調節し
た。電導度は、生理的塩バッファーでの実験のために６
．５ｍに、そしてｙｇ２＋含有バッファーでの実験のた
めにＩｓｍに調節した（検体に依存し、水または１〜４
Ｍ ＮａＣｌのいずれかで）。 Ｍｇ２＋含有バツフアーでの分離のために、血漿検体を
例５に従い製造したバッファーと１：１で混合した。 例８ クロマトグラフィ条件 例１に従い製造した樹脂検体（５ｄ１膨潤容量１４ｄ／
ｇ、５．１６ ｍｅｑ ／ ｇ）をカラムバッファーで
平衡化し、そして溶出液の−および電導度を測定した。 試験カラムに使用の前に、樹脂を血漿検体にさらし、つ
いで清浄化した。この樹脂の前処理は、樹脂検体を最初
に使用するときに観察される物質の損失を著しく減少さ
せた。樹脂検体をガラスカラム（０，９Ｘ２０ａｎ）中
に、樹脂を保持するためにガラスウールプラグで、充填
した。使用した流速はｌ 、 ６ｍｌ ７分であり、そ
して嬬動ポンプで達成した。画分はセシル（Ｃｅｃｉｌ
） ２１２分光光度計上、２０．Ｄ、フルスケールで
追跡した。 使用した波長は、生理的塩につき２４２または２５６
ｎｍのいず扛か、あるいはＭｇ ２＋含有バツフアーに
つ＠ ３００ ｎｍであった。チャート記録器はＣ１，
２５ａｎ／分で操作した。 例９ 例１に従い製造した樹脂５１１１４’ｔ−含有する１連
の試験カラムを生理的塩バッファーで平衡化し、そして
次の血漿容ｔｏ、５．１．０．１．５．２．０．２．５
．３．０．４．０および１Ｑｍを負荷した。負荷の後、
各カラムを生理的塩バッファーで、Ｏ，Ｄ、の読みが最
初の値（第１．３および６図におけるビークＩ）に戻る
まで洗滌した。溶出バッファーは、つイテ結合ＶＬＤＬ
＋ＬＤＬ画分（第１．３および６図におけるビーク■）
を溶出するために使用した。採取したビーク■に相当す
る溶液金、ついで、生理的塩溶液でまた平衡化した＄２
の試験カラムに負荷し、そしてビークＩｌｌ （非結合
物質）およびビーク■（第１のカラムに結合しなかった
残留ＶＬＤＬ、ＬＤＬ）ｔ−与えるために読み取シを繰
返した。 クロマトグラフィ系列についての典型的溶出プロフィル
を、第１図として示す。このプロフィルは、血液中に存
在するＶＬＤＬおよびＬＤＬの大部分が血液の樹脂への
１回通過によ多結合することを示している。 この結果は第２図により明瞭に示されておシ、そ扛には
例の各種血漿負荷において結合したＶＬＤＬおよびＬＤ
Ｌの組合せ量が示されている。 曲線Ａは第１のカラムに結合した組合せＶＬＤＬおよび
ＬＤＬの童に相当し、他方曲線Ｂは採取したビーク■に
相当する溶液を第２のカラムに負荷したとき結合したＶ
ＬＤＬおよびＬＤＬの組合せ童を示す。従って、５ｍＪ
カラムにつき血漿１０１ｒＬｌの負荷において、ＶＬＤ
ＬおよびＬＤＬの７９％（総量０．４０ Ｆのうち０．
３３、．９ ＞がカラムの１回の通過により除去された
。 比較的高い流速（＃速度１．８（２）７分）をこの実験
において使用し、そしてこれは低い検体負荷においてさ
えもリボ蛋白質の不完全な結合を説明しうる。そｎらの
高い流速は分離が最少時間で行われなければならない臨
床条件に近似させるために選択した〔たとえば、直径１
０（２）のカラムに充填した樹脂１４００−は、２（１
０）ｆｆＪ／分（１２ｄ／時間）の流速を与え、それは
試験カラムで使用した流速に相当するコ。 例１０ Ｍｇ ２＋バツフアーで平衡化した試験カラムを使用し
たクロマトグラフィ系列を、比較のために行った。 例７に２ける如く製造した血漿検体を、カラムをＭｇ
２＋含有バツフアーで平衡化したことを除き例９に記載
した実験条件を使用して、クロマトグラフィした。Ｍｇ
２＋含有バツフアーでの各分離につき、血漿負荷容量
を例５のバッファーと１＝１比率で混合した。 第３図は、２つのクロマトグラフィ系列の溶出プロフィ
ルを比較するものである。第３Ａ図は、１連の例１０に
ついての典型的溶出プロフィルを示し、ビーク■はＶＬ
ＤＬ、ＬＤＬｊｌ？よびＨＤＬを含有する。第６Ｂ図は
、Ｍｇ ２＋の実質的不存在において行われた１連の例
９についてのプロフィルを示す。この効果はまた、第２
図と第４図との比較により説明される。 カラムからのＭｇ２＋の除去は、よシ少い量の総リボ蛋
白質が結合する結果を生じることを知ることができる。 この結合における減少は、生理的塩で平衡化した基質に
より保持されないＨＤＬに起因するものである。ＨＤＬ
の結合の欠乏はまた、第５図により詳細に示されている
。 例１１ 例９の実験条件下に、例９におけると同じ血漿負荷＠ｆ
ｋクロマトグラフィした。ビーク■に相当する組合せＬ
ＤＬおよびＶＬＤＬ溶液を採取し、そしてまた生理的塩
で平衡化した第２のカラムに再負荷した。この再負荷の
結果を、第６図に示す。 対照実験は、他の主要血漿蛋白質が流酸化した樹脂と結
合しないことを示した。しかしながら、少量のある蛋白
質は、リボ蛋白質−樹脂複合体に対する結合に基き結合
リボ蛋白質に夾雑しうる。 従って、第６図において、ビーク■および■の各各中の
蛋白質の量はローリ−法〔ローリ−（Ｌｏｗｒｙ ）、
１９５１、バイオロジカル・ケミストリー（Ｂｉｏｌ、
Ｃｈｅｍ、 ）、１９３．２６５頁以下〕により測
定し、そして夾雑の量（ビーク■に関連してビーク■に
おける蛋白質の損失により測定して）は３％以下であっ
た。この値は、ビーク■に関連してビーク■の領域にお
ける少量の減少に相当した。 この結果は、患者の血液からＬＤＬを除去するために塩
の生理的に受容しりろ水準で平衡化されたこの樹脂の使
用が非常に少量の血清蛋白質、たとえばアルジミン、グ
ロブリン類の損失しか生じないことを示している。若干
の血清蛋白質、たとえばヘパリン親和性カラムと結合す
ることが知られている第８因子（ｆａｃｔｏｒ ８）が
、しかしながら、除去されることは可能である。 例１２ よく攪拌し、冷却（０〜４℃）したＤＭＦ（２ｅ ）
中に液状ＳＯｓ （１（１０）１１） ｆユツ＜ ’）
滴下ｆることにより、（ジメチルホルムアミド）ＤＭＦ
： ＢＯ３の溶液を製造した。温度を添加の間、０〜４
℃に維持し、そして溶液をｓｏ３添加の完了に際して、
室温で１時間攪拌した。生成した溶液は、丸底ガラス栓
付褐色ジャー中に、窒素下そして暗所に貯蔵した。溶液
の検体を水で希釈しそして滴定したーＳｏ３：ＤＭＦの
１．１８Ｎ溶液を生じた。 Ｂ、硫酸化 （ａ） 最初の１ｇ実験は、上記溶液５．５ ＷＬｌ
がヒドロキシゾロビル化され、再生されたセルロース（
樹脂）とで、約１．５ｍｅｑ−７ｇの硫酸置換および１
９ｍ１／１１の膨潤容量を与えることを示した。この溶
液１６ｍの使用は、４．９ ｍｅｑ−／ Ｉおよび１６
１ｄＺｇをそれぞれ与えた。この硫酸化方法の使用は、
上記に略述した如く１当量のピリジンの添加を随伴した
。 （ｂ） 方法 一樹脂１００ｇ’ｅＤＭＦ７００ｍＪ中で１夜膨潤させ
、 一ピリジン１７５１１１ｔ−ＢＯ３： ＤＭＦ複合体１
７５０ゴに加、え、 −この混合物をついで膨潤したＤＭＦ−樹脂懸濁液に加
え、 一生成した混合物をついで密封容器中で６時間攪拌し、
そして１夜放置し、 一樹脂を次の如く洗滌し：ＤＭＦ２ｇ；７０％Ｄ Ｍ
Ｆ ／ ３０％）（２ｏ ３１ ； ３０％ＤＭＦ／７
Ｑ％ Ｈ２Ｏ３ｅ ｐ Ｈ２Ｏ１７１ｓ −生成した物質を凍結乾燥し、そして５．．５５ ｍｅ
ｑ−７ｇおよび重量１９０Ｆ（膨潤容量１４７ｆｆＪ、
＃）を与え、 一４５０ｇへのスクールアップは同じ結果を与えた。 例１３ 樹脂を例１２の方法に従い製造した。カラム容量は、バ
ッファーで平衡化した後７．５ ′ＩＬｌであった。 それに、１Ｍ ＮａＨＣＯ３０−５１１１、Ｉ Ｍ Ｎ
ａｃ＃ １．０ｍおよび蒸留水で総容量７ＱｍＪに希釈
した血清３７ｍ１（比率５：１）ｔ−負荷した。 ６カラムをセットした： １）生理的バッファーで平衡化した、硫酸化され、ヒド
ロキシプロピル化された微細顆粒化セルロース（８ＭＧ
Ｏ）。 ２） Ｍｇ２＋含有バツフアーで平衡化し、塩で洗滌
した、硫酸化され、ヒドロキシプロピル化され、再生さ
れたセルロース（５ＨＲＣ）。 ３）生理的バッファーで平衡化し、そして塩で洗滌した
（ＳＨＲＣ）。 検体を負荷し、そして４回ゆつ＜ Ｄ （１，５１７／
分以下）操作し、そしてバルマーストン・ノース・ホス
ピタル（Ｐａｌｍｅｒｓｔｏｎ Ｎｏｒｔｈ Ｈｏ５ｐ
ｉｔａｌ ） 、バルマーストンｅノース（Ｐａｌｍｅ
ｒｓｔｏｎ Ｎｏｒｔｈ ）、ニューシーラントにおい
て分析した。 コレステロール分析 総血清 ０．７６ ６．４８、Ｍ
、Ｇ、Ｃ，０，２４２，０ Ｓ、Ｈ，Ｒ，Ｃ。 （生理的バッファー） ０°２９ ２°
４Ｓ、Ｈ，Ｒ，Ｃ。 （Ｍｇ”＋含有バッファー） １°０７ ２
°６樹脂のコレステロール容量 １） （８ＭＧＣ） ８．
５２） （ＳＨＲＣ）（生理的バッファー）
８．０３） （８ＨＲＣ）（Ｍｇ２＋含有バツフ
アー）７．３検体を水のみで希釈したことを除いてはこ
の方法を繰返して、次の結果を得た： 総血清 ０．８９ ８．１（ＳＨＲＣ Ｍｇバッファー） ０・３３ ２．９
（ＳＨＲＣ 生理的バッファー） ０°２７ ２°６樹脂
のコレステロール容量 １） （ＳＨＲＣＭｇバッフ”１ ）
１０．１ｇ／Ｖ２） （ｓＨＲｃ 生理的ハラ７
７− ） １０．１．９／ ｅコレステロ
ール容量は、樹脂ノＶ Ｌ Ｄ Ｌ ＋ＬＤＬ容量と直
接釣合っている。生理的に受容しうるバッファーでの方
法の使用は、Ｍｇ２＋バツフアーを使用するそｎと少く
とも等価の結果を与えることが知ら扛る。加えて、バッ
ファーの代りに水での検体の希釈は、よシ高い容量を導
く。
第１図は、本発明の方法による血漿の溶出プロフィルを
示し、 第２図は、ビーク■および■の領域におけるＬＤＬおよ
びＶＬＤＬのプロットであり、第６図Ａは、対照方法に
よる血漿の総ＬＤＬ１ＶＬＤＬおよびＨＤＬの溶出プロ
フィルを示し、第３図Ｂは、本発明の方法による血漿の
総ｒ＝Ｄｒ。 およびＶＬＤＬの溶出プロフィルを示し、第４図は、対
照方法による、第２図と同様のプロットであり、 第５図は、結合したＬＤＬおよびＨＤＬ画分の相対量を
示す、生理的バッファー中のＮａＣｅの濃度に対する吸
着されたコレステロールのプロットであり、そして、 第６図は、本発明の方法による他の血漿蛋白質の非特異
結合の量を示す溶出プロフィルを示す。
示し、 第２図は、ビーク■および■の領域におけるＬＤＬおよ
びＶＬＤＬのプロットであり、第６図Ａは、対照方法に
よる血漿の総ＬＤＬ１ＶＬＤＬおよびＨＤＬの溶出プロ
フィルを示し、第３図Ｂは、本発明の方法による血漿の
総ｒ＝Ｄｒ。 およびＶＬＤＬの溶出プロフィルを示し、第４図は、対
照方法による、第２図と同様のプロットであり、 第５図は、結合したＬＤＬおよびＨＤＬ画分の相対量を
示す、生理的バッファー中のＮａＣｅの濃度に対する吸
着されたコレステロールのプロットであり、そして、 第６図は、本発明の方法による他の血漿蛋白質の非特異
結合の量を示す溶出プロフィルを示す。
Claims (10)
- （１）血漿あるいは血清中のＬＤＬおよびＶＬＤＬ含量
の減少方法において、 ａ）血漿あるいは血清を生理的に受容しうる塩溶液で平
衡化したカチオン性イオン交換体と組合せ、該交換体は
ヒドロキシＣ＿２〜Ｃ＿４アルキル基で置換されそして
化学的に結合した少くとも２ｍｅｑ．／ｇｍの硫酸基を
有する水不溶性で、親水性で、水膨潤性で、架橋結合し
、再生された、または微小細胞性のセルロースマトリッ
クスからなり、該交換体のイオン交換容量は該硫酸基に
より提供され；および、 ｂ）該血漿あるいは血清を、該ＬＤＬおよびＶＬＤＬ画
分の１部分がそれから該イオン交換体により抽出されて
しまつた後に、該イオン交換体から回収する工程からな
る方法。 - （２）使用される該イオン交換体の硫酸化の程度が４〜
６ｍｅｑ．／ｇｍである、特許請求の範囲第１項に従う
方法。 - （３）使用される該生理的に受容しうる塩溶液が次の組
成を有する、特許請求の範囲第１項に従う方法： １００〜１６０ｍＭ ＮａＣｌ ０〜４０ｍＭ ＮａＨＣＯ＿３ ２〜８ｍＭ ＫＣｌ １〜６ｍＭ ＭｇＣｌ＿２ - （４）使用される該生理的に受容しうる塩溶液が次の組
成を有する、特許請求の範囲第２項に従う方法： １４２ｍＭ ＮａＣｌ ５ｍＭ ＫＣｌ ３ｍＭ ＭｇＣｌ＿２ - （５）使用される該生理的に受容しうる塩溶液が次の組
成を有する、特許請求の範囲第２項に従う方法： １１５ｍＭ ＮａＣｌ ２７ｍＭ ＮａＨＣＯ＿３ ５ｍＭ ＫＣｌ ３ｍＭ ＭｇＣｌ＿２ - （６）該ヒドロキシＣ＿２〜Ｃ＿４アルキル基がヒドロ
キシプロピル基である、特許請求の範囲第１項に従う方
法。 - （７）血漿あるいは血清をカチオン性イオン交換体と組
合せる該工程が該血漿あるいは血清を、該カチオン性交
換体を充填した少くとも１個のカラムに通過させること
からなる、特許請求の範囲第１項に従う方法。 - （８）使用される該セルロースマトリックスがエピクロ
ロヒドリンで架橋結合された再生されたセルロースであ
り、そしてそれに結合する垂下ヒドロキシプロピル基を
有する、特許請求の範囲第１項に従う方法。 - （９）該カラムに通過させる該血漿あるいは血清が該カ
ラムに少くとも２回以上通過させるものである、特許請
求の範囲第７項に従う方法。 - （１０）該カラムに通過させる該血漿あるいは血清が該
カラムに少くとも３回以上通過させるものである、特許
請求の範囲第７項に従う方法。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| NZ208241A NZ208241A (en) | 1984-05-22 | 1984-05-22 | Purification of blood plasma or serum: selective removal of (very) low density lipoproteins (ldl and vldl) |
| NZ208241 | 1984-05-22 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6144824A true JPS6144824A (ja) | 1986-03-04 |
Family
ID=19920786
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP60110056A Pending JPS6144824A (ja) | 1984-05-22 | 1985-05-22 | 血漿あるいは血清中のｌｄｌおよびｖｌｄｌ含量の減少方法 |
Country Status (6)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4603010A (ja) |
| EP (1) | EP0165709A3 (ja) |
| JP (1) | JPS6144824A (ja) |
| AU (1) | AU575167B2 (ja) |
| CA (1) | CA1240923A (ja) |
| NZ (1) | NZ208241A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2019531892A (ja) * | 2016-10-26 | 2019-11-07 | イー・エム・デイー・ミリポア・コーポレイシヨン | セルロース含有フィルタ材料からの浸出性ベータ−グルカンレベルの減少 |
Families Citing this family (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| SE456136B (sv) * | 1985-06-17 | 1988-09-12 | Oncholab Ab | Forfarande for framstellning av en med ett lipofilt biologiskt aktivt emne bemengd berare pa basis av rekonstituerat ldl (lagdensitetslipoprotein) |
| EP0321597B1 (de) * | 1986-09-09 | 1992-11-11 | Fraunhofer-Gesellschaft Zur Förderung Der Angewandten Forschung E.V. | Selektives Adsorbens zur Bindung von Lipoproteinen niedriger Dichte |
| DE3724726A1 (de) * | 1987-07-25 | 1989-02-02 | Behringwerke Ag | Verfahren zur reinigung des plazentaren gewebeproteins pp4 |
| CA2145389A1 (en) * | 1992-09-24 | 1994-03-31 | Laszlo Varady | Quantitative measurement of ldl |
| US6706008B2 (en) | 2001-03-06 | 2004-03-16 | Baxter International Inc. | Automated system and method for withdrawing compounds from blood |
| US6582386B2 (en) | 2001-03-06 | 2003-06-24 | Baxter International Inc. | Multi-purpose, automated blood and fluid processing systems and methods |
| US6884228B2 (en) | 2001-03-06 | 2005-04-26 | Baxter International Inc. | Automated system adaptable for use with different fluid circuits |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| NZ180199A (en) * | 1976-03-04 | 1978-11-13 | New Zealand Dev Finance | Method of testing for the presence of elevated plasma liprotein concentration |
| NZ187246A (en) * | 1976-03-04 | 1980-05-27 | New Zealand Dev Finance | Hydrophilic hydroxy c2-c4 alkylated crosslinked regenerated cellulose |
| DE3330648C2 (de) * | 1983-08-25 | 1986-11-20 | Behringwerke Ag, 3550 Marburg | Verfahren zum Abtrennen von Lipoproteinen mittels derivatisiertem Polyhydroxymethylen |
-
1984
- 1984-05-22 NZ NZ208241A patent/NZ208241A/en unknown
-
1985
- 1985-05-17 EP EP85303494A patent/EP0165709A3/en not_active Withdrawn
- 1985-05-21 CA CA000481911A patent/CA1240923A/en not_active Expired
- 1985-05-21 US US06/736,306 patent/US4603010A/en not_active Expired - Fee Related
- 1985-05-21 AU AU42706/85A patent/AU575167B2/en not_active Ceased
- 1985-05-22 JP JP60110056A patent/JPS6144824A/ja active Pending
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2019531892A (ja) * | 2016-10-26 | 2019-11-07 | イー・エム・デイー・ミリポア・コーポレイシヨン | セルロース含有フィルタ材料からの浸出性ベータ−グルカンレベルの減少 |
| US11014031B2 (en) | 2016-10-26 | 2021-05-25 | Emd Millipore Corporation | Reduction of leachable beta-glucan levels from cellulose-containing filter materials |
| JP2021154280A (ja) * | 2016-10-26 | 2021-10-07 | イー・エム・デイー・ミリポア・コーポレイシヨン | セルロース含有フィルタ材料からの浸出性ベータ−グルカンレベルの減少 |
| US11712647B2 (en) | 2016-10-26 | 2023-08-01 | Emd Millipore Corporation | Reduction of leachable beta-glucan levels from cellulose-containing filter materials |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP0165709A2 (en) | 1985-12-27 |
| EP0165709A3 (en) | 1986-11-20 |
| NZ208241A (en) | 1987-09-30 |
| US4603010A (en) | 1986-07-29 |
| AU4270685A (en) | 1985-11-28 |
| AU575167B2 (en) | 1988-07-21 |
| CA1240923A (en) | 1988-08-23 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US4742159A (en) | Digitalis antibodies, process for the preparation thereof and the use thereof for the therapy of digitalis intoxications | |
| US4096136A (en) | Method of selectively removing lipoprotein from blood plasma or serum using sulfated carbohydrate ion-exchangers | |
| Seegers et al. | Further studies on the purification of thrombin | |
| JPS58131918A (ja) | 因子８親凝集性活性蛋白質の調整方法およびその方法に使用する免疫吸着剤 | |
| JPS646201B2 (ja) | ||
| Harris et al. | QUANTITATIVE CHROMATOGRAPHIC METHODS: PART 7. ISOLATION OF AMINO ACIDS FROM SERUM AND OTHER FLUIDS | |
| Legler et al. | Comparative immunology: serum complement of freshwater fishes | |
| US4043997A (en) | Method for isolating albumin using insoluble supports coupled to a dye | |
| JPH0724723B2 (ja) | 硫酸化された非炭水化物ゲルマトリツクス吸着剤 | |
| PT95574B (pt) | Processo para purificar compostos conjugados com agente quelante | |
| JPS6144824A (ja) | 血漿あるいは血清中のｌｄｌおよびｖｌｄｌ含量の減少方法 | |
| DE2532151C3 (de) | Antisenim zur quantitativen Bestimmung der Abbauprodukte des Fibrins und Fibrinogen« und Verfahren zu seiner Herstellung | |
| DE2616984C3 (de) | Verfahren zur Isolierung und Reinigung eines plazentenspezifischen Glycoproteins | |
| JPS6034916A (ja) | 第１ｘ因子および他のビタミンｋ依存性タンパク質の高純度精製 | |
| US4539398A (en) | Affinity fractionation of heparin on immobilized Concanavalin A | |
| US4308204A (en) | Process for preparing the third component of the complement from human blood plasma | |
| JP2001323000A (ja) | Ｆｓｈ（卵胞刺激ホルモン）とｌｈ（黄体化ホルモン）の分離と精製工程 | |
| JP2001097997A (ja) | 硫酸化ヒアルロン酸を用いたアフィニティー吸着担体及びその使用 | |
| US4885359A (en) | Method for the purification of LPF-HA | |
| US3446598A (en) | Chorionic gonadotropin separation process | |
| CH660634A5 (de) | Verfahren zur herstellung von natuerlichem immunoadsorbens. | |
| JPS589686A (ja) | ス−パ−オキサイドジスムタ−ゼの精製法 | |
| RU2042358C1 (ru) | Способ получения концентрата фактора ix | |
| DE19623131C2 (de) | Konjugat, Verfahren zu dessen Herstellung sowie dessen Verwendung zur Bindung von Substanzen | |
| DK173863B1 (da) | Immunosorbent |