UA64742C2 - СПОСІБ ОДЕРЖАННЯ РОЗЧИНУ <font face="Symbol">g</font>-ГЛОБУЛІНУ, ПРИЗНАЧЕНОГО ДЛЯ ВНУТРІШНЬОВЕННОГО ВВЕДЕННЯ, І ПРОДУКТ, ЩО ОДЕРЖУЄТЬСЯ У ЦЕЙ СПОСІБ (ВАРІАНТИ) - Google Patents
СПОСІБ ОДЕРЖАННЯ РОЗЧИНУ <font face="Symbol">g</font>-ГЛОБУЛІНУ, ПРИЗНАЧЕНОГО ДЛЯ ВНУТРІШНЬОВЕННОГО ВВЕДЕННЯ, І ПРОДУКТ, ЩО ОДЕРЖУЄТЬСЯ У ЦЕЙ СПОСІБ (ВАРІАНТИ) Download PDFInfo
- Publication number
- UA64742C2 UA64742C2 UA99084781A UA99084781A UA64742C2 UA 64742 C2 UA64742 C2 UA 64742C2 UA 99084781 A UA99084781 A UA 99084781A UA 99084781 A UA99084781 A UA 99084781A UA 64742 C2 UA64742 C2 UA 64742C2
- Authority
- UA
- Ukraine
- Prior art keywords
- solution
- differs
- fractionation
- fraction
- gammaglobulin
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 40
- 108010074605 gamma-Globulins Proteins 0.000 title claims abstract description 23
- 230000008569 process Effects 0.000 title abstract description 5
- 239000003599 detergent Substances 0.000 claims abstract description 32
- 241000700605 Viruses Species 0.000 claims abstract description 25
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 claims abstract description 17
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 claims description 31
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 claims description 31
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 claims description 26
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims description 25
- 238000005194 fractionation Methods 0.000 claims description 19
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 claims description 11
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 claims description 10
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 claims description 10
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 claims description 9
- 238000000746 purification Methods 0.000 claims description 9
- 239000000440 bentonite Substances 0.000 claims description 6
- 229910000278 bentonite Inorganic materials 0.000 claims description 6
- SVPXDRXYRYOSEX-UHFFFAOYSA-N bentoquatam Chemical compound O.O=[Si]=O.O=[Al]O[Al]=O SVPXDRXYRYOSEX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- -1 alkyl phosphate Chemical compound 0.000 claims description 4
- 239000012535 impurity Substances 0.000 claims description 4
- NWUYHJFMYQTDRP-UHFFFAOYSA-N 1,2-bis(ethenyl)benzene;1-ethenyl-2-ethylbenzene;styrene Chemical compound C=CC1=CC=CC=C1.CCC1=CC=CC=C1C=C.C=CC1=CC=CC=C1C=C NWUYHJFMYQTDRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 239000003729 cation exchange resin Substances 0.000 claims description 3
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 claims 4
- 239000003957 anion exchange resin Substances 0.000 claims 2
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 abstract 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 67
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 32
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 28
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 28
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 26
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 26
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 26
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 22
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 19
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 16
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 16
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 15
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 13
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 12
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 12
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 12
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 9
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 9
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 9
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 8
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 8
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 8
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 8
- 239000000539 dimer Substances 0.000 description 7
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 7
- 108010051456 Plasminogen Proteins 0.000 description 6
- 102000013566 Plasminogen Human genes 0.000 description 6
- 150000001450 anions Chemical class 0.000 description 6
- 239000012760 heat stabilizer Substances 0.000 description 6
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 6
- 229940012957 plasmin Drugs 0.000 description 6
- 108010071241 Factor XIIa Proteins 0.000 description 5
- 238000005349 anion exchange Methods 0.000 description 5
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 4
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 4
- 108060005987 Kallikrein Proteins 0.000 description 4
- 102000001399 Kallikrein Human genes 0.000 description 4
- 108090000113 Plasma Kallikrein Proteins 0.000 description 4
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- MZVQCMJNVPIDEA-UHFFFAOYSA-N [CH2]CN(CC)CC Chemical compound [CH2]CN(CC)CC MZVQCMJNVPIDEA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 description 4
- 239000000463 material Substances 0.000 description 4
- 235000010482 polyoxyethylene sorbitan monooleate Nutrition 0.000 description 4
- 229920000053 polysorbate 80 Polymers 0.000 description 4
- 150000005846 sugar alcohols Chemical class 0.000 description 4
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 4
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108010088842 Fibrinolysin Proteins 0.000 description 3
- 229920002562 Polyethylene Glycol 3350 Polymers 0.000 description 3
- 239000008351 acetate buffer Substances 0.000 description 3
- 230000003171 anti-complementary effect Effects 0.000 description 3
- 238000005341 cation exchange Methods 0.000 description 3
- 238000011026 diafiltration Methods 0.000 description 3
- 239000005022 packaging material Substances 0.000 description 3
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 3
- 239000000244 polyoxyethylene sorbitan monooleate Substances 0.000 description 3
- 229940068968 polysorbate 80 Drugs 0.000 description 3
- 239000000047 product Substances 0.000 description 3
- 239000001488 sodium phosphate Substances 0.000 description 3
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 3
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 3
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 3
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 2
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 2
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 2
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 2
- 239000003125 aqueous solvent Substances 0.000 description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- 150000001768 cations Chemical class 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- 238000010924 continuous production Methods 0.000 description 2
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 2
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 2
- 208000005252 hepatitis A Diseases 0.000 description 2
- 238000005342 ion exchange Methods 0.000 description 2
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 2
- 244000309711 non-enveloped viruses Species 0.000 description 2
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 2
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 2
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 description 2
- 229950008882 polysorbate Drugs 0.000 description 2
- 229910000162 sodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000011008 sodium phosphates Nutrition 0.000 description 2
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 2
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K trisodium phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]P([O-])([O-])=O RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 100676-05-9 Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OCC1C(O)C(O)C(O)C(OC2C(OC(O)C(O)C2O)CO)O1 OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BDKLKNJTMLIAFE-UHFFFAOYSA-N 2-(3-fluorophenyl)-1,3-oxazole-4-carbaldehyde Chemical compound FC1=CC=CC(C=2OC=C(C=O)N=2)=C1 BDKLKNJTMLIAFE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000022 2-aminoethyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])N([H])[H] 0.000 description 1
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 description 1
- 101100232420 Arabidopsis thaliana IDA gene Proteins 0.000 description 1
- 102000004506 Blood Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010017384 Blood Proteins Proteins 0.000 description 1
- 229920002134 Carboxymethyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 102100022641 Coagulation factor IX Human genes 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 1
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108010076282 Factor IX Proteins 0.000 description 1
- 108010049003 Fibrinogen Proteins 0.000 description 1
- 102000008946 Fibrinogen Human genes 0.000 description 1
- 102000016359 Fibronectins Human genes 0.000 description 1
- 108010067306 Fibronectins Proteins 0.000 description 1
- 208000001953 Hypotension Diseases 0.000 description 1
- 102000004895 Lipoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108090001030 Lipoproteins Proteins 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N Maltose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)OC(O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N 0.000 description 1
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 1
- 201000005505 Measles Diseases 0.000 description 1
- 229920003171 Poly (ethylene oxide) Polymers 0.000 description 1
- 229940124158 Protease/peptidase inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 102000005686 Serum Globulins Human genes 0.000 description 1
- 108010045362 Serum Globulins Proteins 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 108090000190 Thrombin Proteins 0.000 description 1
- GTVWRXDRKAHEAD-UHFFFAOYSA-N Tris(2-ethylhexyl) phosphate Chemical compound CCCCC(CC)COP(=O)(OCC(CC)CCCC)OCC(CC)CCCC GTVWRXDRKAHEAD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VJHCJDRQFCCTHL-UHFFFAOYSA-N acetic acid 2,3,4,5,6-pentahydroxyhexanal Chemical compound CC(O)=O.OCC(O)C(O)C(O)C(O)C=O VJHCJDRQFCCTHL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 1
- 230000001147 anti-toxic effect Effects 0.000 description 1
- 239000012736 aqueous medium Substances 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 238000010923 batch production Methods 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N beta-maltose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 125000002057 carboxymethyl group Chemical group [H]OC(=O)C([H])([H])[*] 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 238000005277 cation exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 1
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 238000005352 clarification Methods 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 description 1
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 1
- 206010013023 diphtheria Diseases 0.000 description 1
- BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L disodium hydrogen phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].OP([O-])([O-])=O BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229910000397 disodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019800 disodium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 1
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 1
- 229960004222 factor ix Drugs 0.000 description 1
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 1
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 1
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 description 1
- 229940012952 fibrinogen Drugs 0.000 description 1
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 1
- 208000002672 hepatitis B Diseases 0.000 description 1
- 208000021822 hypotensive Diseases 0.000 description 1
- 230000001077 hypotensive effect Effects 0.000 description 1
- 230000000415 inactivating effect Effects 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 238000011221 initial treatment Methods 0.000 description 1
- 239000003456 ion exchange resin Substances 0.000 description 1
- 229920003303 ion-exchange polymer Polymers 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 239000002075 main ingredient Substances 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 235000015927 pasta Nutrition 0.000 description 1
- 239000000137 peptide hydrolase inhibitor Substances 0.000 description 1
- 229920003229 poly(methyl methacrylate) Polymers 0.000 description 1
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 239000004926 polymethyl methacrylate Substances 0.000 description 1
- 229940068977 polysorbate 20 Drugs 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 229940124272 protein stabilizer Drugs 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 239000013049 sediment Substances 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 description 1
- 229940087562 sodium acetate trihydrate Drugs 0.000 description 1
- 238000005063 solubilization Methods 0.000 description 1
- 230000007928 solubilization Effects 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 1
- IRDFFAPCSABAGK-UHFFFAOYSA-N tert-butyl dihydrogen phosphate Chemical compound CC(C)(C)OP(O)(O)=O IRDFFAPCSABAGK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 229960004072 thrombin Drugs 0.000 description 1
- GPRLSGONYQIRFK-MNYXATJNSA-N triton Chemical compound [3H+] GPRLSGONYQIRFK-MNYXATJNSA-N 0.000 description 1
- 239000008215 water for injection Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/04—Peptides having up to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- A61K38/12—Cyclic peptides, e.g. bacitracins; Polymyxins; Gramicidins S, C; Tyrocidins A, B or C
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/06—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies from serum
- C07K16/065—Purification, fragmentation
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
Abstract
Винахід відноситься до медицини та фармацевтики, стосується способу одержання розчину гамаглобуліну для внутрішньовенного введення, який включає у себе етапи теплової обробки для інактивації вірусів і фракціонування неочищеного розчину гамаглобуліну поліетиленгліколем з наступною обробкою очищеного гамаглобуліну розчинником-детергентом для подальшої інактивації вірусів. Також винахід стосується розчину гамаглобуліну, одержаного за даним способом.
Description
Даний винахід стосується об'єднаного, багатоетапного промислового способу одержання імунного сироваткового глобуліну, який у якості головного інгредієнта містить до (у-глобулін) і призначається для внутрішньовенного введення.
Із рівня техніки відомі різноманітні способи одержання розчинів у-глобуліну для внутрішньовенного введення, вихідним матеріалом для яких є фракції людської плазми (фракції Кона). Деякі з фракцій Кона містять більш високі титри у-глобуліну, ніж інші фракції. Зазвичай вихідним матеріалом для одержання розчинів у-глобуліну є фракція Кона ІІ або фракція Кона І-І.
Хоча у відомих з рівня техніки способах використовуються різноманітні методи поділу і стерилізації, постійно вводяться модифікації з метою підвищення чистоти остаточного продукту, його безпеки і загального виходу.
У багатьох промислових способах для інактивації вірусів застосовується етап обробки розчинником/детергентом або етап теплової обробки. На сьогодні не відомі багатоетапні способи, для яких вихідним матеріалом була б паста фракції Кона ІІ або паста ІІ -- І ї які б включали дві різні процедури інактивації вірусів як частину ефективного способу виробництва у-глобуліну з високим виходом.
У патенті США 5,151,499 Катеуата еї а). описаний спосіб одержання білкових композицій з інактивованими вірусами, згідно з яким білкову композицію піддають інактивації оболонкових вірусів обробкою білкової композиції розчинником/детергентом та інактивації безоболонкових вірусів тепловою обробкою білкової композиції. У патенті відзначається, що етап обробки розчинником/детергентом краще здійснювати першим і у присутності інгібітору протеаз, а вже потім проводити теплову обробку. Якщо теплову обробку проводять у рідинній фазі, то білок виділяють із суміші розчинник/детергент адсорбцією на іонообмінній колонці до теплової обробки. Теплову обробку в рідинній фазі можна здійснювати у присутності в якості стабілізатора цукру, цукрового спирту або амінокислот. Поряд з тим, що в патенті перераховані численні вихідні білкові композиції, що містять імуноглобулін, проте наведені приклади їх одержання обмежуються Фактором ЇХ, тромбіном, фібриногеном і фібронектином. Видалення денатурованого білка, що утворився на етапі теплової обробки, при цьому не розглядається.
У деяких відомих з рівня техніки способах одержання розчинів у-глобуліну, призначених для внутрішньовенного введення, описується застосування теплової обробки в рідинній фазі, проведеної при наявності сорбітолу в якості теплового стабілізатора, як одного з етапів процесу очищення, вихідним матеріалом для якого є паста фракцій Кона ІІ «ж ІІ. У патенті США 4,876,088 Нігао еї аї!., фракцію Кона ІІІ піддають фракціонуванню поліетиленгліколем (далі "ПЕГ") (спочатку ЗУомас. ПЕГ, потім 1295мас. ПЕГ),, потім іонообмінною хроматографією (ДЕАЕ-Сефадекс), і видаляють антитіла групи крові людини до теплової обробки в рідинній фазі при наявності сорбітолу в якості стабілізатора білка. З іншого боку, у
Прикладі 1 патенту США 4,876,088 описується одержання розчину у-глобуліну для внутрішньовенного введення з пасти фракції Кона ІІ. При цьому пасту суспендують у воді, рН доводять до 5,5, і проводять центрифугування, після чого супернатант піддають тепловій обробці для інактивації вірусів у присутності 3395 (мас), сорбітолу. Далі йде фракціонування ПЕГом (6995/1295), при якому видаляють денатурований білок, та інші етапи очищення, включаючи іонообмінну хроматографію на ДЕАЕ-Сефадексі.
Метою даного винаходу є розробка об'єднаного, багатоетапного промислового способу одержання вьісокоочищеного імунного розчину у-глобуліну на основі методу фракціонування Кона.
Іншою метою даного винаходу є одержання дуже чистого, призначеного для внутрішньовенного введення розчину у-глобуліну, вільного як від оболонкових, так і від безоболонкових вірусів, включаючи всі теплочутливі віруси.
Ще однією метою даного винаходу є створення промислового способу одержання у-глобуліну, що передбачав би видалення перед другою стадією інактивації вірусів будь-якого денатурованого білка, що утворився при тепловій стерилізації.
Перераховані вище й інші цілі, які є очевидними для кваліфікованого фахівця, були досягнуті у даному винаході шляхом того, що спиртові фракції Кона, що можуть бути частково очищені, але збагачені на у- глобулін, піддають тепловій обробці у водяному середовищі при наявності теплового стабілізатора для інактивації вірусів, потім проводять фракціонування ПЕГом і другу інактивацію вірусів при наявності розчинника або, краще, суміші розчинник/детергент для руйнування оболонкових вірусів, після чого йде видалення розчинника або суміші розчинник/детергент.
Згідно з кращим варіантом здійснення даного винаходу, тепловим стабілізатором є сорбітол, а в якості розчинника використовується триалкілфосфат.
Згідно з іншим кращим варіантом здійснення даного винаходу, денатуровані продукти, що утворилися в результаті інактивації вірусів тепловою обробкою, видаляють фракціонуванням ПЕГом перед другою інактивацією вірусів, одержуючи тим самим додатково очищений, чистий, прогрітий у-глобулін.
Відповідно до іншого кращого варіанта здійснення даного винаходу, будь-які присутні частки видаляються перед етапом обробки розчинником/детергентом.
Відповідно до ще одного варіанта здійснення винаходу, одержують стерилізований теплом і розчинником/детергентом у-глобулін, придатний до внутрішньовенного введення.
У якості вихідного матеріалу використовуються фракції, що містять імуноглобулін. Ці фракції не обов'язково є фракціями сироватки людини, але повинні містити імуноглобулін. Конкретними прикладами таких фракцій, що містять імуноглобулін, є фракція І-І ї фракція ІІ, які отримуються при фракціонуванні етанолом за Коном, а також паста із еквівалентних їм фракцій, що містять імуноглобулін. Іншими вихідними матеріалами є фракції І - ІІ - ПІ ї фракція І! я Пм/. Вихідний матеріал може містити такі домішки, як антитіла групи крові людини, плазміноген, плазмін, калікреїн, прекалікреїн активатор, полімери І9М, ІдА, дес (що позначаються як "агрегати") і т.д.
Кращим вихідним матеріалом є фракція Кона ІІ або фракція Кона І! ж І. Якщо використовується паста фракцій І! «я І, то бажано піддати її попередній процедурі відмивання з одержанням фракції І! ж- Пму/, що і використовується в способі, відповідно до даного винаходу. "Фракція ІІ ж- ПШм/" являє собою преципітат фракції ІІ - 1, промитий розчином динатрійфосфату.
Фракцію Ії ж Пм/ можна приготувати розчиненням преципітату фракції ІЇ я ПІ у холодній воді для ін'єкцій у співвідношенні приблизно 1 кілограм пасти І - ПІ на 20 об'ємів води. Для солюбілізації ліпідов, ліпопротеїнів і альбуміну добавляють розчин фосфату натрію до остаточної концентрації 0,003М фосфату натрію. Потім добавляють холодний етанол до остаточної концентрації близько 2095. При додаванні спирту температуру поступово знижують до -5:17С, а рН підтримують на рівні 7,230,1, наприклад, додаванням ацетатного буфера або розведеної соляної кислоти. Преципітат фракції І! я ПМму, що утворюється, виділяють за допомогою центрифугуванння і/або фільтрації при температурі -5:2176.
Відповідно до даного винаходу, перед першим етапом інактивації вірусів можуть бути проведені різноманітні попередні етапи очищення і/або зменшення кількості агрегатів. Наприклад, коли використовується паста фракцій ІІ ж Ії, що містить звичайно близько 2095 спирту і більш ніж 7095 Ід, її можна суспендувати у від 3-х до 10-и об'ємів холодної води, краще - у від 3-х до 5-й об'ємів при температурі близько 0-57С і рН, доведеною до величини в інтервалі 4,5-6,0, краще в інтервалі 5,0-5,5, за допомогою ацетатного буфера з рн 4,0 або соляної кислоти. Суміш перемішують протягом 2-15 годин для того, щоб весь у-глобулін перейшов у розчин. Потім такі нерозчинені білки, як альбумін і о-глобуліни, можна видалити шляхом центрифугуванння і/або фільтрації.
Якщо в якості вихідного матеріалу використовуються різноманітні фракції Кона, то початковий етап або етапи способу можуть бути відповідним чином обрані для того, щоб провести попереднє очищення для отримання фракцій з високим вмістом (ДО для подальшої обробки. Наприклад, коли фракція Кона І! (яка містить більш як 9595 Ід) відділена від фракції Кона Ії для подальшої обробки фракції ІЇ, то початкова обробка фракції І може проводитися при кислотності рН від 3,2 до 5,0, краще від 3,8 до 4,2, як описано
Уемурою та ін. (ПШетига еї а!.), у патенті США 4,371,520, із тим щоб зруйнувати агрегати імуноглобулінів, які існують серед мономерів і димерів імуноглобулінів, оскільки відомо, що агрегати мають анти- комплементарну активність (АСА). В іншому випадку, коли в якості вихідного матеріалу використовується фракція Кона І! «- ІІ, тоді, відповідно до патенту США 4,371,520, обробка низьким рН може бути здійснена як додатковий етап після етапу початкового очищення, описаного вище, і перед інактивацією вірусів тепловою обробкою.
При здійсненні етапу теплової стерилізації білок імуноглобуліну розчиняють у воді, або, якщо він являє собою водяну суміш, наприклад, фільтрат, отриманий після згаданого вище часткового очищення, його можна використовувати в тому ж виді, у якому він є, і добавляти до нього цукор, цукровий спирт або амінокислоти для виконання ролі теплового стабілізатора. В якості теплового стабілізатора краще використовувати сахарозу, мальтозу, сорбітол або манітол, а найкраще - сорбітол. Цукор або цукровий спирт додають до розчину імуноглобуліну у вигляді порошку або перед додаванням змішують із невеличкою кількістю води і доводять його концентрацію в розчині до 10-50905 (мас), до насичення. У цей момент водяний розчин імуноглобуліну містить достатню кількість води, так що концентрація загального білка в розчині складає від 1 до 695, що відповідає звичайному вихідному матеріалу фракцій І! ж ІЇЇ, який містить близько 300 грамів білка на кілограм пасти.
Після додавання теплового стабілізатора суміш гріють для інактивації теплочутливих вірусів до температури 50-70"С протягом 10-100 годин, краще - при 60"С протягом 10-20 годин. Етап теплової обробки не тільки інактивує віруси, але, у силу своєї денатуруючої дії, може вибірково знижувати кількість окремих небажаних білків, зазвичай асоційованих із фракціями Кона І! «з ІІ, таких як прекалікреїн, плазмін, плазміноген і ІДА.
Після теплової обробки добавляють холодну воду в такій кількості, щоб довести концентрацію білка від 0,3 до 2,095. Розчин охолоджують до 0-20.
Після цього ПЕГом проводять фракціонування розчину, який був підданий тепловій обробці.
Фракціонування ПЕГом є добре відомим способом, який застосовується для очищення імуноглобуліну, тобто для відділення потрібних мономерів і димерів до від агрегатів (до й інших домішок, що природно зустрічаються у вихідних фракціях білків плазми. Але, за способом, що тут описується, фракціонування
ПЕГом також дає можливість відокремити потрібні мономери і димери до від небажаних денатурованих білкових продуктів, що утворилися при тепловій обробці. До цих денатурованих білкових продуктів належать денатурований прекалікреїн, плазміноген, плазмін, ІдДА, ІДМ та агрегати.
Може бути використана будь-яка відома з рівня техніки процедура фракціонування ПЕГом. Зазвичай проводять двоетапне фракціонування ПЕГом. На першому етапі концентрацію ПЕГ ії величину рн вибирають таким чином, щоб потрібні мономери й димери дО залишалися в розчині, а такі небажані білки, як агрегати, випадали з розчину в осад. Після центрифугування і/або фільтрації концентрацію ПЕГ підвищують, і рН регулюють так, щоб потрібні мономери й димери до випали в осад.
Наприклад, перший етап фракціонування ПЕГом можна проводити при рН від 5,0 до 7,5, краще - в інтервалі значень рН від 6,5 до 7,5, якщо в якості вихідного матеріалу використовується паста фракцій І! жк
ПМ, і краще від 5,5 до 6,0, якщо в якості вихідного матеріалу використовується паста фракцій ІІ я ПІ, і концентрація ПЕГу варіює в межах 4-895, краще - в межах 4-695, якщо в якості вихідного матеріалу використовується паста фракцій І! ж- му, або 6-895, якщо в якості вихідного матеріалу використовується паста фракцій І! ї- І. При витриманні температури в межах 0-2"С перший етап фракціонування ПЕГом займає від 1 до 8 годин, після чого преципітат видаляють як описано вище.
Потім рН фільтрату доводять до значення в межах від 8,0 до 9,0, краще - від 8,5 до 8,9, і добавляють ще одну порцію ПЕГ до остаточної концентрації від 10 до 1595, краще, якщо близько 1295. Преципітат, що утворився і являє собою очищений імуноглобулін, видаляють фільтрацією і/або центрифугуваннням.
Подальші деталі процедур фракціонування ПЕГом, які застосовуються для здійснення даного винаходу, можна знайти в згаданих вище патентах США 4,876,088 Нігао еї аї., і 4,845,199 Нігао еї аї.
Заключним необхідним етапом способу, розкритого у даному винаході, є етап другої інактивації вірусів із використанням розчинника або суміші розчинник/детергент. Як описано нижче, наступні етапи очищення, зокрема, із використанням іонообмінних смол, можуть здійснюватися як до, так і/або після обробки розчинником/детергентом. Особливі переваги має процедура, що поєднує аніонообмінну обробку до інактивації вірусів розчинником/детергентом із катіонообмінною обробкою після інактивації вірусів розчинником/детергентом. У ході, цієї процедури деякі небажані білкові матеріали (такі як прекалікреїн активатор, ІДА, ІМ і альбумін), що виявляються в плазмі людини, можуть бути видалені з ЇДо за допомогою аніонообмінника, а потім ці матеріали (прекалікреїн активатор, ІДА, І9М, альбумін і ПЕГ), а також залишки реагентів, використаних для обробки розчинником/детергентом, можуть бути видалені катіонообмінною хроматографією.
Якщо цього не було зроблено на попередніх етапах способу, то призначений для обробки розчинником/детергентом розчин повинен бути оброблений для видалення всіх часток, до яких може належати і денатурований білок. Тому бажано пропустити розчин крізь одномікронний або більш тонкий фільтр до того, як буде додаватися розчинник/детергент. Це також знизить імовірність попадання вірусів у великі частки, де вони могли б уникнути контакту з розчинником/детергентом.
В даний час найкращим розчинником для інактивації оболонкових вірусів є триалкілфосфат.
Триалкілфосфат, який використовується при здійсненні даного винаходу, не є предметом жодних особливих обмежень, але використовувати краще три(п-бутил)уфосфат (ТМВР). Серед інших триалкілфосфатів застосовувати можна також три(тер-бутилуфосфат, три(п-гексил)фосфат, три(2- етилгексил)фосфат та ін. Можливо застосування суміші двох і більше різних триалкілфосфатів.
Триалкілфосфат використовують у концентраціях від 0,01 до 1095 (мас), краще - від 0,1 до 395 (мас).
Триалкілфосфат може застосовуватися як разом із детергентом або поверхнево-активною речовиною, так і без них. Використовувати триалкілфосфат краще у сполученні з детергентом. Функції детергента полягають у посиленні контакту вірусів, що утримуються в композиції імуноглобуліну, із триалкілфосфатом.
Прикладами детергентов є поліоксиетиленові похідні жирних кислот, часткові ефіри безводного сорбітолу, такі як Полісорбат 80 (Торгова назва: Твін 80, і т.д.) і Полісорбат 20 (Торгова назва: Твін 20, і т.д.); і такі неіонні агенти, промиті в масляній ванні, як оксиетильований алкілфенол (Торгова назва: Тритон
Х100) та ін., а також інші поверхнево-активні речовини і такі детергенти, як цвітеріонні детергенти, та ін.
При застосуванні детергента, його не варто добавляти в критичних кількостях; детергент можна використовувати в концентраціях, наприклад, від 0,001905 до 1095, і краще - від 0,0195 до 3905.
Відповідно до даного винаходу обробку триалкілфосфатом композиції, що містить імуноглобулін, проводять при температурі від 20 до 35"С, краще - від 25 до 30"С, протягом більш ніж однієї години, краще - від 5 до 8 годин, і найкраще - від 6 до 7 годин.
Під час обробки триалкілфосфатом імуноглобулін знаходиться у водяному середовищі у формі розчину з концентрацією білка від З до 895.
Якщо аніонообмінна обробка не була проведена перед обробкою розчинником/детергентом, то її можна здійснити з вже обробленим розчинником/детергентом імуноглобуліном. Бажано хоча б катіонообмінну обробку проводити за допомогою імуноглобуліну, обробленого розчинником/детергентом. Іонообмінну обробку проводять імуноглобуліном, розчиненим у водяному розчиннику, з рН, як правило, близько 5-8, із достатньо низькою іонною силою для максимальної адсорбції дб. Концентрація білка зазвичай знаходиться в межах 1-1595 (мас.), краще, якщо в межах 3-1095 (мас.). Іонообмінник врівноважують тим самим водяним розчинником, у якому розчиняють імуноглобулін, та за допомогою як безперервного, так і порціонного процесу. Наприклад, при здійсненні порціонної аніонообмінної обробки розчин імуноглобуліну змішують з аніонообмінником у кількості від 10 до 100мл на Імл попередньо обробленого аніонообмінника (наприклад, 1 грам смоли ДЕАЕ Сефадекс А-50 набухає приблизно до 20 грамів вологої ваги в 0,495 розчині хлориду натрію), і суміш перемішують при 0-57С протягом 0,5-5 годин із наступним фільтруванням або центрифугуваннням на швидкості від 6000 до 8000об./хв. протягом 10-30 хвилин із одержанням супернатанту. При здійсненні безперервного процесу розчин імуноглобуліну пропускають крізь колонку з аніонообмінником із швидкістю від 10 до 100мл на мл аніонообмінника, і збирають фракцію, що не зв'язалася.
Аніонообмінник, що використовується, містить, наприклад, аніонообмінні групи, пов'язані з нерозчинним носієм. До аніонообмінних груп належать діетиламіноетил (ДЕАЕ), група четверинного аміноетилу (ОАЕ) та ін., а до нерозчинних носіїв належать агароза, целюлоза, декстран, поліакриламід та ін.
До прийнятних катіонообмінників належать карбоксиметил Сефадекс (СМ-Сефадекс), СМ-целюлоза,
ЗР-Сефадекс, СМ-Сефароза і 5-Сефароза. Попередньо оброблений катіонообмінник у кількості їмл (наприклад, 1 грам смоли ДЕАЕ Сефадекс С-50 набухає приблизно до 30-35 грамів вологої ваги в 0,495 розчині хлориду натрію) змішують із 0,5-5,0мл розчину імуноглобуліну і перемішують при 0-57С протягом 1- 6 годин. Суспензію центрифугують або фільтрують для відділення (до смоли, що сорбувала. Може також застосовуватися і безперервний процес.
При катіонообмінній обробці в описаних умовах до сорбується і, після промивання катіонообмінної смоли, що сорбувала білок, |до можна елюювати, наприклад, 1,4М розчином хлориду натрію.
Після здійснення описаних вище етапів процесу до просвітлюють, діафільтрують і концентрують до потрібного ступеня. При необхідності можна додати такий стабілізатор, як О-сорбітол, і провести остаточне регулювання концентрацій із тим, щоб одержати розчин із рН близько 5,4, який містить близько 100мг/мл
ІдОо і 5Омг/мл ЮО-сорбітолу. Цей розчин потім стерилізують фільтруванням через стерилізований фільтр, що затримує бактерії, і закривають в ампули.
Нижченаведені приклади мають виключно ілюстративне спрямування і в жодній мірі не обмежують об'єм даного винаходу.
За необхідністю, з описаним вище процесом можна поєднувати й інші процеси очищення імуноглобулінів. Наприклад, можна використовувати етап просвітлюваня бентонітом, ефективний у зменшенні кількості калікреїна і прекалікреїн-активатора. Ілюстрацією цього способу є наведений нижче
Приклад 1.
Приклад 1. Гамаглобулін, підданий тепловій обробці й обробці розчинником/детергентом
Пасту фракції ІІ ж- Пму у кількості б68а5г суспендують у 11,9кг холодної води. До суспензії добавляють розчин ацетат-тригідрата натрію до остаточної концентрації близько 0,04М для селективної солюбілізації
ІдО. Після перемішування протягом 15 хвилин рН суспензії доводять до 4,8 ацетатним буфером із рН 4,0.
До суспензії добавляють холодний спирт (9595) до остаточної концентрації 1795. Під час додавання спирту температуру суспензії поступово знижують до приблизно -6"С. До суспензії в якості агента, що фільтрує, добавляють 303г Целіту 535, промитого кислотою (наданого Сеїйе Согрогаїййоп), до остаточної концентрації близько 295. Після перемішування протягом 1 години Целіт і пасту фракції ЇЇ, що містять такі непотрібні білки, як плазмін, плазміноген, ДМ і ІдДА, видаляють фільтрацією за допомогою фільтрувального пресу.
Фільтрат потім просвітлюють пропусканням крізь фільтри 0,45мкм і 0,2мкм.
Кислотність просвітленого розчину фракції ІІ 4 Пму/ доводять до рН 4,0 додаванням 0,1М соляної кислоти і концентрують ультрафільтрацією до об'єму 3,4 літра (1/5 початкового об'єму). До концентрованого розчину добавляють холодну воду в об'ємі, який дорівнює об'єму, видаленому при першій ультрафільтрації, і розчин знову піддають ультрафільтрації до 1/5 початкового об'єму. На цьому етапі концентрація білка в розчині складає близько 295. Розчин концентрують приблизно до 4,095 білка і піддають діафільтрації проти холодної води доти, поки провідність розчину не падає нижче З0ОмкС/см, що сприяє запобіганню агрегатоутворенню і зниженню денатурації при тепловій обробці. Далі розчин знову концентрують до 8,890 білка. До розчину добавляють Ю-сорбітол до остаточної концентрації близько 3395. Після перемішування протягом 30 хвилин рН розчину, що містить сорбітол, доводять до 5,5 добавленням 0,5М гідроксиду натрію.
Потім розчин нагрівають протягом 10 годин при 60"С. Після теплової обробки до розчину добавляють З об'єми холодної води, і розведений розчин охолоджують до 0-26.
Величину рН розчину доводять до 6,9 добавленням 0,25М гідроксиду натрію, і до розчину добавляють
БОФо-й поліетиленгліколь (ПЕГ) 3350 до остаточної концентрації 495. Концентрацію хлориду натрію в розчині доводять до ЗММ для полегшення преципітації домішок і агрегатів при рН 6,9. Осад, що утворився, видаляють фільтрацією. Величину рН фільтрату доводять до 4,8 добавленням 0,1М соляної кислоти, і добавляють бентоніт остаточної концентрації близько 0,2595. Величину рН суспензії бентоніту доводять до 5,2, і суспензію фільтрують для видалення бентоніту. Величину рН фільтрату доводять до 8,5 добавленням 0,25М гідроксиду натрію, і до розчину додають 5095-й поліетиленгліколь (ПЕГ) 3350 до остаточної концентрації 1295. Преципітат (очищений імунний глобулін), що утворився, видаляють центрифугуваннням.
Близько 175 грамів пасти імуноглобуліну, очищеного як описано вище, суспендують у 790г 0,3905-го розчину хлориду натрію, рН суспензії доводять до 5,5, і суспензію перемішують протягом 2,5 годин. До розчину добавляють 62г попередньо урівноваженої (0,3956-м розчином хлориду натрію з рН 5,5) смоли
ОЕАЕ-Сефадекс А-50, і суспензію перемішують протягом 2 годин. Потім суспензію фільтрують для видалення смоли. Концентрацію хлориду натрію доводять до 0,495, і до фільтрату добавляють суміш три-п- бутилфосфату (ТМВР) і Полісорбату 80 так, щоб остаточна концентрація ТМВР складала 0,395, а
Полісорбату 80-1905. Після інкубації протягом ночі рН розчину доводять до 5,8 і добавляють 860г попередньо урівноваженої (0,495-м розчином хлориду натрію з рН 5,8) смоли СМ-Сефадекс С-50. Після перемішування протягом 2 годин суспензію фільтрують. Після 3-х кратного промивання смоли СМ-Сефадекс 0,395-м хлоридом натрію, адсорбований (дб вимивають 1,4М хлоридом натрію. Елюат просвітлюють і піддають діафільтрації і концентруванню. Добавляють ЮО-сорбітол, і концентрацію розчину остаточно доводять до приблизно 1О00мг/мл ІдсС і близько 5О0мг/мл О-сорбітолу з рН 5,4. Після цього розчин стерилізують пропусканням крізь стерилізований фільтр, який затримує бактерії, і закривають в ампули.
Проміжний етап обробки бентонітом, описаний у даному Прикладі, є ефективний для подальшого зменшення присутності таких гіпотензивних ферментів, як калікреїн і прекалікреїн-активатор.
Параметри, які піддавали тестуванню
Антикомплементарна активність (СНбо од./мг Ід) 0,34
Чистота до (90) 100
Вміст ідо (мг/мл) 112,7
Прекалікреїн (96 СВЕВ Неї. Я3) 21
Антитіла проти кору (96 СВЕК Кеї. І ої Мо. 176) 0,67
Розподіл до за молекулярною масою при НРІ С (95): - мономерів 82,2 - димерів 174 - фрагментів ОО - агрегатів 0,3
Антитіла проти гепатиту А (титр) 1200
Антитіла проти гепатиту В (титр) 11024
ІДЗА (мкг/мл) 22
ІДМ (мкг/мл) 16
Плазміноген (нг/мл) нт
Плазмін (нг/мл) 16
РН 5,4
НТ - Не тестували
Приклад 2. Гамаглобулін, підданий тепловій обробці й обробці розчинником/детергентом
Один (1) кг пасти фракції Ії ї- ЇЇ суспендують у 4,5кг холодної води при 0-2"С. Після перемішування протягом 1 години рН суспензії доводять до 5,0 додаванням 1М соляної кислоти. Після перемішування протягом З годин при рН 5,0 преципітат видаляють центрифугуваннням. До центрифугату добавляють О- сорбітол до остаточної концентрації 3395, і суміш перемішують протягом 1 години. Кислотність суспензії доводять до рН 5,5, а потім суспензію нагрівають при 60"С протягом 10 годин. Після теплової обробки до розчину добавляють З об'єми холодної води, і розведений розчин охолоджують до 0-27С. Далі добавляють
БОбо-й розчин ПЕГ 3350 до остаточної концентрації ПЕГ 695. Величину рН суспензії, що містить ПЕГ, доводять до 5,7 додаванням 0,5М гідроксиду натрію, і суспензію перемішують протягом 2 годин. Промитий кислотою Целіт 535 добавляють до остаточної концентрації 1,595, і суспензію перемішують протягом 1 години. Преципітат разом із Целітом видаляють фільтрацією. Величину рН фільтрату доводять до 8,8 додаванням 0,5М гідроксиду натрію, концентрацію ПЕГ доводять до 1295 додаванням 5095 розчину ПЕГ.
Величину рН суспензії доводять до 8,8, суспензію перемішують протягом 1 години і фільтрують, збираючи пасту очищеного імуноглобуліну. Таким чином отримують близько 251г пасти очищеного імуноглобуліну.
Пасту очищеного імуноглобуліну у кількості 251г, отриманої як описано вище, суспендують в 1,4кг 0,395- го розчину хлориду натрію. Після перемішування протягом 1 години рН суспензії доводять до 6,0 додаванням 590-ї оцтової кислоти. Після повного розчинення пасти добавляють 104г попередньо урівноваженої (0,396-м розчином хлориду натрію з рН 6,0) смоли ОЕАЕ-Сефадекс А-50, і розчин перемішують на протязі 2 годин. Смолу видаляють фільтрацією. Потім фільтрат просвітлюють пропусканням крізь 0,2мкм фільтр. Концентрацію хлориду натрію в просвітленому розчині доводять до 0,495. Потім до розчину добавляють суміш три-п-бутилфосфату (ТМВР) і Полісорбату 80 так, щоб остаточна концентрація ТМВР складала 0,395, а Полісорбату 80-195. Розчин инкубують при 27"С протягом 1 години і залишають на ніч у холодильнику при 4"С. Наступного дня рН розчину доводять до 5,8, і в розчин добавляють 1,8кг попередньо урівноваженої (0,4950-м розчином хлориду натрію з рН 5,8) смоли СМ-
Сефадекс С-50. Після перемішування протягом 2 годин смолу видаляють фільтрацією. Після 3-х кратного промивання смоли СМ-Сефадекс 0,395-м хлоридом натрію, адсорбований ІДС вимивають 1,4М хлоридом натрію. Елюат просвітлюють і піддають діафільтрації і концентруванню. Добавляють О-сорбітол, і концентрацію розчину остаточно доводять до приблизно 100мг/мл ІдсС і близько 5Омг/мл О-сорбітолу.
Розчин поділяють на дві порції - порцію А и порцію В. Величину рН порції А доводять до 5,4, а рН порції О - до 4,3. Потім розчини порцій А і В індивідуально стерилізують пропусканням крізь стерилізовані фільтри, що затримують бактерії, і закривають в ампули.
Параметри, які піллавали тестуванню
Антикомплементарна активність (СНбо од./мг Ід) -0,05
Чистота до (90) 100
Вміст до (мг/мл) 104,2
Прекалікреїн (96 СВЕК Кеї. й3) нт
Антитіла проти дифтерії (Антитоксин од./мл) 8.2
Розподіл до за молекулярною масою при НРІ С (95): Рн 5,4 рн4іЗз - мономерів 88,8 97,5 - димерів 10,9 2,3 - фрагментів 0,3 нт - агрегатів -0,3 -0,3
Антитіла проти гепатиту А (титр) 1700
І ЗА (мкг/мл) 78
ГОМ (мкг/мл) 28
Калікреїн (Адов) 0,09
Плазміноген (нг/мл) -8,4
Плазмін (нг/мл) -8,4
НТ - Не тестували
Для кваліфікованого фахівця є очевидними можливі варіанти винаходу.
Claims (14)
1. Спосіб одержання розчину гамаглобуліну, призначеного для внутрішньовенного введення, який включає: а) теплову обробку неочищеного розчину гамаглобуліну протягом такого часу і за таких температурних умов, які є достатніми для інактивації теплочутливих вірусів; б) фракціонування поліетиленгліколем розчину гамаглобуліну, що пройшов теплову обробку, із одержанням очищеного розчину гамаглобуліну, причому фракціонування проводиться принаймні в дві стадії; при цьому домішки видаляють у вигляді преципітату на першій стадії фракціонування поліетиленгліколем, а гамаглобулін видаляють у вигляді преципітату на другій стадії фракціонування поліетиленгліколем; 1 в) обробку очищеного розчину гамаглобуліну органічним розчинником для інактивації оболонкових вірусів без подальшого фракціонування поліетиленгліколем.
2. Спосіб за п. 1, який відрізняється тим, що неочищений розчин гамаглобуліну є фракцією Кона І П - Ш, фракцією Кона П ї- Ш, фракцією Кона П - Пк, або фракцією Кона ЦП.
3. Спосіб за п. 1, який відрізняється тим, що неочищений розчин гамаглобуліну піддають принаймні одному етапу очищення до етапу теплової обробки (а).
4. Спосіб за п. І, який відрізняється тим, що етап теплової обробки (а) здійснюють при температурі приблизно від 50 до 707С протягом приблизно від 10 до 100 годин.
5. Спосіб за п. 4, який відрізняється тим, що етап теплової обробки (а) здійснюють при температурі близько 602С протягом близько 10 годин.
6. Спосіб за п. 1, який відрізняється тим, що органічним розчинником, що застосовується на етапі (в), є алкілфосфат.
7. Спосіб за п. 6, який відрізняється тим, що алкілфосфатом є три-п-бутилфосфат.
8. Спосіб за п. 1, який відрізняється тим, що органічний розчинник містить детергент.
9. Спосіб за п.7, який відрізняється тим, що органічний розчинник містить детергент.
10. Спосіб за п. 1, який відрізняється тим, що після етапу (а) розчин гамаглобуліну піддають обробці аніонообмінною смолою 1 катіонообмінною смолою.
11.Спосіб за п. 10, який відрізняється тим, що обробка аніонообмінною смолою передує етапу (в), а обробку катіонообмінною смолою проводять після етапу (в).
12.Спосіб за п. 1, який відрізняється тим, що етап просвітлювання бентонітом здійснюють після першої стадії фракціонування поліетиленгліколем.
13.Розчин гамаглобуліну, призначений для внутрішньовенного введення, одержаний у спосіб зап. 1.
14.Розчин гамаглобуліну, призначений для внутрішньовенного введення, одержаний у спосіб за п. 10.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US99795297A | 1997-12-24 | 1997-12-24 | |
| PCT/US1998/025208 WO1999033484A1 (en) | 1997-12-24 | 1998-12-07 | Production process for intravenous immune serum globulin and resultant product |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| UA64742C2 true UA64742C2 (uk) | 2004-03-15 |
Family
ID=25544595
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| UA99084781A UA64742C2 (uk) | 1997-12-24 | 1998-07-12 | СПОСІБ ОДЕРЖАННЯ РОЗЧИНУ <font face="Symbol">g</font>-ГЛОБУЛІНУ, ПРИЗНАЧЕНОГО ДЛЯ ВНУТРІШНЬОВЕННОГО ВВЕДЕННЯ, І ПРОДУКТ, ЩО ОДЕРЖУЄТЬСЯ У ЦЕЙ СПОСІБ (ВАРІАНТИ) |
Country Status (15)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0971727A4 (uk) |
| JP (1) | JP2001514672A (uk) |
| KR (1) | KR20000075562A (uk) |
| CN (1) | CN1214042C (uk) |
| AR (1) | AR018260A1 (uk) |
| AU (1) | AU747893B2 (uk) |
| BR (1) | BR9807598A (uk) |
| CA (1) | CA2281938A1 (uk) |
| CO (1) | CO4970799A1 (uk) |
| IL (1) | IL131471A0 (uk) |
| MY (1) | MY117328A (uk) |
| RU (1) | RU2198668C2 (uk) |
| TW (1) | TW546144B (uk) |
| UA (1) | UA64742C2 (uk) |
| WO (1) | WO1999033484A1 (uk) |
Families Citing this family (13)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| ES2421736T3 (es) * | 1998-06-09 | 2013-09-05 | Csl Behring Ag | Procedimiento para la preparación de inmunoglobulinas para administración intravenosa y otros productos inmunoglobulínicos |
| CA2375560A1 (en) * | 1999-06-15 | 2000-12-21 | Alpha Therapeutic Corporation | Manufacturing method for intravenous immune globulin and resultant product |
| JP2004525077A (ja) * | 2000-09-28 | 2004-08-19 | リサーチ コーポレイション テクノロジーズ，インコーポレイテッド | イムノグロブリンｇ強化血漿画分の経口投与による免疫媒介性疾病の治療 |
| ES2184594B1 (es) * | 2001-01-17 | 2004-01-01 | Probitas Pharma Sa | Procedimiento para la produccion de gammaglobulina g humana inactivada de virus. |
| US6893639B2 (en) * | 2001-10-19 | 2005-05-17 | Hemacare Corporation | Method for high yield purification of immune globulins from blood plasma and blood plasma intermediates |
| KR101119448B1 (ko) | 2002-09-11 | 2012-03-15 | 추가이 세이야쿠 가부시키가이샤 | 단백질 정제 방법 |
| TWI320788B (en) | 2005-05-25 | 2010-02-21 | Hoffmann La Roche | Method for the purification of antibodies |
| KR100791502B1 (ko) * | 2006-09-29 | 2008-01-03 | 한스바이오메드 주식회사 | 바이러스 불활화된 무세포 인체 이식재 생산방법 |
| CA2742817A1 (en) * | 2008-11-20 | 2010-05-27 | Biogen Idec Ma Inc. | Arginine inactivation of viruses |
| IL212911A0 (en) | 2011-05-16 | 2011-07-31 | Omrix Biopharmaceuticals Ltd | Immunoglobulin reduced in thrombogenic contaminants and preparation thereof |
| ES2381828B1 (es) * | 2012-03-20 | 2012-11-16 | Grifols, S.A. | PROCEDIMIENTO PARA OBTENER UNA COMPOSICION DE IgG MEDIANTE TRATAMIENTO TERMICO |
| ES2785375T3 (es) * | 2014-03-11 | 2020-10-06 | Green Cross Holdings Corp | Procedimiento de purificación de inmunoglobulina |
| CN107880116B (zh) * | 2016-09-30 | 2023-02-03 | 盖立复集团公司 | 用于制备免疫球蛋白的方法 |
Family Cites Families (15)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE2604759C2 (de) * | 1976-02-07 | 1983-06-01 | SCHURA Blutderivate GmbH & Co KG, 4150 Krefeld | Verfahren zur Gewinnung von iv-verträglichen Γglobulinen |
| US4820805A (en) * | 1983-07-14 | 1989-04-11 | New York Blood Center, Inc. | Undenatured virus-free trialkyl phosphate treated biologically active protein derivatives |
| US4835257A (en) * | 1984-07-07 | 1989-05-30 | Armour Pharma Gmbh | Process for preparing gamma globulin suitable for intravenous administration using peg and a citrate buffer |
| FR2582515B1 (fr) * | 1985-05-30 | 1988-11-04 | Merieux Inst | Procede de preparation de gamma-gobulines administrables par voie intraveineuse et gamma-globulines obtenues |
| JPH0662436B2 (ja) * | 1986-05-19 | 1994-08-17 | 株式会社ミドリ十字 | 静注用免疫グロブリン製剤の製造方法 |
| US4841023A (en) * | 1986-06-25 | 1989-06-20 | New York Blood Center, Inc. | Inactivation of viruses in labile protein-containing compositions using fatty acids |
| DE3825429C2 (de) * | 1988-07-27 | 1994-02-10 | Biotest Pharma Gmbh | Verfahren zur Herstellung eines intravenös verabreichbaren polyklonalen Immunglobulin-Präparates mit hohem IgM-Gehalt |
| CA2007545A1 (en) * | 1989-01-13 | 1990-07-13 | Yahiro Uemura | Production method for protein-containing composition |
| JP2965069B2 (ja) * | 1989-01-13 | 1999-10-18 | 吉富製薬株式会社 | 蛋白質含有組成物の製造方法 |
| JP3297433B2 (ja) * | 1989-06-15 | 2002-07-02 | ローヌ−プーラン ローラー インターナショナル （ホウルディングス） インコーポレイテッド | ウイルスで汚染された薬理組成物中のウイルスの不活性化方法 |
| US5177194A (en) * | 1990-02-01 | 1993-01-05 | Baxter International, Inc. | Process for purifying immune serum globulins |
| JP3145696B2 (ja) * | 1990-10-05 | 2001-03-12 | 日本ケミカルリサーチ株式会社 | 分泌型免疫グロブリンａ製剤の製造法 |
| US5110910A (en) * | 1991-03-25 | 1992-05-05 | Miles Inc. | Virucidal euglobulin precipitation |
| DE4431833C1 (de) * | 1994-09-07 | 1995-05-18 | Blutspendedienst Der Drk Lande | Verfahren zur Herstellung eines AHF-Konzentrates |
| JP4003235B2 (ja) * | 1994-09-30 | 2007-11-07 | 三菱ウェルファーマ株式会社 | 静注用免疫グロブリン製剤の製造方法 |
-
1998
- 1998-07-12 UA UA99084781A patent/UA64742C2/uk unknown
- 1998-12-07 RU RU99120190/14A patent/RU2198668C2/ru not_active IP Right Cessation
- 1998-12-07 CA CA002281938A patent/CA2281938A1/en not_active Abandoned
- 1998-12-07 CN CNB988043769A patent/CN1214042C/zh not_active Expired - Fee Related
- 1998-12-07 KR KR1019997007622A patent/KR20000075562A/ko not_active Application Discontinuation
- 1998-12-07 EP EP98961803A patent/EP0971727A4/en not_active Withdrawn
- 1998-12-07 IL IL13147198A patent/IL131471A0/xx unknown
- 1998-12-07 AU AU17038/99A patent/AU747893B2/en not_active Ceased
- 1998-12-07 WO PCT/US1998/025208 patent/WO1999033484A1/en not_active Application Discontinuation
- 1998-12-07 JP JP53498599A patent/JP2001514672A/ja not_active Ceased
- 1998-12-07 BR BR9807598-5A patent/BR9807598A/pt not_active Application Discontinuation
- 1998-12-22 AR ARP980106616A patent/AR018260A1/es unknown
- 1998-12-23 MY MYPI98005848A patent/MY117328A/en unknown
- 1998-12-23 TW TW087121571A patent/TW546144B/zh not_active IP Right Cessation
- 1998-12-23 CO CO98076460A patent/CO4970799A1/es unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CO4970799A1 (es) | 2000-11-07 |
| BR9807598A (pt) | 2000-02-22 |
| IL131471A0 (en) | 2001-01-28 |
| AU747893B2 (en) | 2002-05-30 |
| MY117328A (en) | 2004-06-30 |
| CA2281938A1 (en) | 1999-07-08 |
| RU2198668C2 (ru) | 2003-02-20 |
| AU1703899A (en) | 1999-07-19 |
| TW546144B (en) | 2003-08-11 |
| CN1214042C (zh) | 2005-08-10 |
| WO1999033484A1 (en) | 1999-07-08 |
| CN1252729A (zh) | 2000-05-10 |
| KR20000075562A (ko) | 2000-12-15 |
| JP2001514672A (ja) | 2001-09-11 |
| EP0971727A1 (en) | 2000-01-19 |
| AR018260A1 (es) | 2001-11-14 |
| EP0971727A4 (en) | 2005-01-19 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US5177194A (en) | Process for purifying immune serum globulins | |
| EP0037078B1 (en) | Process for heat treatment of aqueous solution containing human blood coagulation factor xiii | |
| JP4445202B2 (ja) | 治療的使用のためのヒト免疫グロブリン濃縮物の調製方法 | |
| UA64742C2 (uk) | СПОСІБ ОДЕРЖАННЯ РОЗЧИНУ <font face="Symbol">g</font>-ГЛОБУЛІНУ, ПРИЗНАЧЕНОГО ДЛЯ ВНУТРІШНЬОВЕННОГО ВВЕДЕННЯ, І ПРОДУКТ, ЩО ОДЕРЖУЄТЬСЯ У ЦЕЙ СПОСІБ (ВАРІАНТИ) | |
| US20060177909A1 (en) | Preparation of immunoglobulin | |
| EP1041998A1 (en) | Composition and method for dermal and transdermal administration of a cytokine | |
| US6162904A (en) | Manufacturing method for intraveneously administrable immune globulin and resultant product | |
| US6441144B1 (en) | Method for repairing dual virally inactivated immune globulin for intravenous administration | |
| AU756071B2 (en) | Manufacturing method for intravenous immune globulin and resultant product | |
| MXPA99007835A (en) | Production process for intravenous immune serum globulin and resultant product | |
| CZ293499A3 (cs) | Způsob přípravy intravenózně aplikovatelného roztoku gammaglobulinu a výsledný produkt |