UA64742C2 - Process for producing intravenously-administrable gamma globulin solution and product manufactured by this process - Google Patents
Process for producing intravenously-administrable gamma globulin solution and product manufactured by this process Download PDFInfo
- Publication number
- UA64742C2 UA64742C2 UA99084781A UA99084781A UA64742C2 UA 64742 C2 UA64742 C2 UA 64742C2 UA 99084781 A UA99084781 A UA 99084781A UA 99084781 A UA99084781 A UA 99084781A UA 64742 C2 UA64742 C2 UA 64742C2
- Authority
- UA
- Ukraine
- Prior art keywords
- solution
- differs
- fractionation
- fraction
- gammaglobulin
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 40
- 108010074605 gamma-Globulins Proteins 0.000 title claims abstract description 23
- 230000008569 process Effects 0.000 title abstract description 5
- 239000003599 detergent Substances 0.000 claims abstract description 32
- 241000700605 Viruses Species 0.000 claims abstract description 25
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 claims abstract description 17
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 claims description 31
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 claims description 31
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 claims description 26
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims description 25
- 238000005194 fractionation Methods 0.000 claims description 19
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 claims description 11
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 claims description 10
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 claims description 10
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 claims description 9
- 238000000746 purification Methods 0.000 claims description 9
- 239000000440 bentonite Substances 0.000 claims description 6
- 229910000278 bentonite Inorganic materials 0.000 claims description 6
- SVPXDRXYRYOSEX-UHFFFAOYSA-N bentoquatam Chemical compound O.O=[Si]=O.O=[Al]O[Al]=O SVPXDRXYRYOSEX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- -1 alkyl phosphate Chemical compound 0.000 claims description 4
- 239000012535 impurity Substances 0.000 claims description 4
- NWUYHJFMYQTDRP-UHFFFAOYSA-N 1,2-bis(ethenyl)benzene;1-ethenyl-2-ethylbenzene;styrene Chemical compound C=CC1=CC=CC=C1.CCC1=CC=CC=C1C=C.C=CC1=CC=CC=C1C=C NWUYHJFMYQTDRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 239000003729 cation exchange resin Substances 0.000 claims description 3
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 claims 4
- 239000003957 anion exchange resin Substances 0.000 claims 2
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 abstract 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 67
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 32
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 28
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 28
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 26
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 26
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 26
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 22
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 19
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 16
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 16
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 15
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 13
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 12
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 12
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 12
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 9
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 9
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 9
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 8
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 8
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 8
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 8
- 239000000539 dimer Substances 0.000 description 7
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 7
- 108010051456 Plasminogen Proteins 0.000 description 6
- 102000013566 Plasminogen Human genes 0.000 description 6
- 150000001450 anions Chemical class 0.000 description 6
- 239000012760 heat stabilizer Substances 0.000 description 6
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 6
- 229940012957 plasmin Drugs 0.000 description 6
- 108010071241 Factor XIIa Proteins 0.000 description 5
- 238000005349 anion exchange Methods 0.000 description 5
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 4
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 4
- 108060005987 Kallikrein Proteins 0.000 description 4
- 102000001399 Kallikrein Human genes 0.000 description 4
- 108090000113 Plasma Kallikrein Proteins 0.000 description 4
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- MZVQCMJNVPIDEA-UHFFFAOYSA-N [CH2]CN(CC)CC Chemical compound [CH2]CN(CC)CC MZVQCMJNVPIDEA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 description 4
- 239000000463 material Substances 0.000 description 4
- 235000010482 polyoxyethylene sorbitan monooleate Nutrition 0.000 description 4
- 229920000053 polysorbate 80 Polymers 0.000 description 4
- 150000005846 sugar alcohols Chemical class 0.000 description 4
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 4
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108010088842 Fibrinolysin Proteins 0.000 description 3
- 229920002562 Polyethylene Glycol 3350 Polymers 0.000 description 3
- 239000008351 acetate buffer Substances 0.000 description 3
- 230000003171 anti-complementary effect Effects 0.000 description 3
- 238000005341 cation exchange Methods 0.000 description 3
- 238000011026 diafiltration Methods 0.000 description 3
- 239000005022 packaging material Substances 0.000 description 3
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 3
- 239000000244 polyoxyethylene sorbitan monooleate Substances 0.000 description 3
- 229940068968 polysorbate 80 Drugs 0.000 description 3
- 239000000047 product Substances 0.000 description 3
- 239000001488 sodium phosphate Substances 0.000 description 3
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 3
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 3
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 3
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 2
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 2
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 2
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 2
- 239000003125 aqueous solvent Substances 0.000 description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- 150000001768 cations Chemical class 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- 238000010924 continuous production Methods 0.000 description 2
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 2
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 2
- 208000005252 hepatitis A Diseases 0.000 description 2
- 238000005342 ion exchange Methods 0.000 description 2
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 2
- 244000309711 non-enveloped viruses Species 0.000 description 2
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 2
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 2
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 description 2
- 229950008882 polysorbate Drugs 0.000 description 2
- 229910000162 sodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000011008 sodium phosphates Nutrition 0.000 description 2
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 2
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K trisodium phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]P([O-])([O-])=O RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 100676-05-9 Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OCC1C(O)C(O)C(O)C(OC2C(OC(O)C(O)C2O)CO)O1 OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BDKLKNJTMLIAFE-UHFFFAOYSA-N 2-(3-fluorophenyl)-1,3-oxazole-4-carbaldehyde Chemical compound FC1=CC=CC(C=2OC=C(C=O)N=2)=C1 BDKLKNJTMLIAFE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000022 2-aminoethyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])N([H])[H] 0.000 description 1
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 description 1
- 101100232420 Arabidopsis thaliana IDA gene Proteins 0.000 description 1
- 102000004506 Blood Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010017384 Blood Proteins Proteins 0.000 description 1
- 229920002134 Carboxymethyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 102100022641 Coagulation factor IX Human genes 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 1
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108010076282 Factor IX Proteins 0.000 description 1
- 108010049003 Fibrinogen Proteins 0.000 description 1
- 102000008946 Fibrinogen Human genes 0.000 description 1
- 102000016359 Fibronectins Human genes 0.000 description 1
- 108010067306 Fibronectins Proteins 0.000 description 1
- 208000001953 Hypotension Diseases 0.000 description 1
- 102000004895 Lipoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108090001030 Lipoproteins Proteins 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N Maltose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)OC(O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N 0.000 description 1
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 1
- 201000005505 Measles Diseases 0.000 description 1
- 229920003171 Poly (ethylene oxide) Polymers 0.000 description 1
- 229940124158 Protease/peptidase inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 102000005686 Serum Globulins Human genes 0.000 description 1
- 108010045362 Serum Globulins Proteins 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 108090000190 Thrombin Proteins 0.000 description 1
- GTVWRXDRKAHEAD-UHFFFAOYSA-N Tris(2-ethylhexyl) phosphate Chemical compound CCCCC(CC)COP(=O)(OCC(CC)CCCC)OCC(CC)CCCC GTVWRXDRKAHEAD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VJHCJDRQFCCTHL-UHFFFAOYSA-N acetic acid 2,3,4,5,6-pentahydroxyhexanal Chemical compound CC(O)=O.OCC(O)C(O)C(O)C(O)C=O VJHCJDRQFCCTHL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 1
- 230000001147 anti-toxic effect Effects 0.000 description 1
- 239000012736 aqueous medium Substances 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 238000010923 batch production Methods 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N beta-maltose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 125000002057 carboxymethyl group Chemical group [H]OC(=O)C([H])([H])[*] 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 238000005277 cation exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 1
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 238000005352 clarification Methods 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 description 1
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 1
- 206010013023 diphtheria Diseases 0.000 description 1
- BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L disodium hydrogen phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].OP([O-])([O-])=O BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229910000397 disodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019800 disodium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 1
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 1
- 229960004222 factor ix Drugs 0.000 description 1
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 1
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 1
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 description 1
- 229940012952 fibrinogen Drugs 0.000 description 1
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 1
- 208000002672 hepatitis B Diseases 0.000 description 1
- 208000021822 hypotensive Diseases 0.000 description 1
- 230000001077 hypotensive effect Effects 0.000 description 1
- 230000000415 inactivating effect Effects 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 238000011221 initial treatment Methods 0.000 description 1
- 239000003456 ion exchange resin Substances 0.000 description 1
- 229920003303 ion-exchange polymer Polymers 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 239000002075 main ingredient Substances 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 235000015927 pasta Nutrition 0.000 description 1
- 239000000137 peptide hydrolase inhibitor Substances 0.000 description 1
- 229920003229 poly(methyl methacrylate) Polymers 0.000 description 1
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 239000004926 polymethyl methacrylate Substances 0.000 description 1
- 229940068977 polysorbate 20 Drugs 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 229940124272 protein stabilizer Drugs 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 239000013049 sediment Substances 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 description 1
- 229940087562 sodium acetate trihydrate Drugs 0.000 description 1
- 238000005063 solubilization Methods 0.000 description 1
- 230000007928 solubilization Effects 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 1
- IRDFFAPCSABAGK-UHFFFAOYSA-N tert-butyl dihydrogen phosphate Chemical compound CC(C)(C)OP(O)(O)=O IRDFFAPCSABAGK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 229960004072 thrombin Drugs 0.000 description 1
- GPRLSGONYQIRFK-MNYXATJNSA-N triton Chemical compound [3H+] GPRLSGONYQIRFK-MNYXATJNSA-N 0.000 description 1
- 239000008215 water for injection Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/04—Peptides having up to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- A61K38/12—Cyclic peptides, e.g. bacitracins; Polymyxins; Gramicidins S, C; Tyrocidins A, B or C
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/06—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies from serum
- C07K16/065—Purification, fragmentation
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
Abstract
Description
Даний винахід стосується об'єднаного, багатоетапного промислового способу одержання імунного сироваткового глобуліну, який у якості головного інгредієнта містить до (у-глобулін) і призначається для внутрішньовенного введення.The present invention relates to a combined, multi-stage industrial method of obtaining immune serum globulin, which as the main ingredient contains do (y-globulin) and is intended for intravenous administration.
Із рівня техніки відомі різноманітні способи одержання розчинів у-глобуліну для внутрішньовенного введення, вихідним матеріалом для яких є фракції людської плазми (фракції Кона). Деякі з фракцій Кона містять більш високі титри у-глобуліну, ніж інші фракції. Зазвичай вихідним матеріалом для одержання розчинів у-глобуліну є фракція Кона ІІ або фракція Кона І-І.Various methods of obtaining γ-globulin solutions for intravenous administration are known from the state of the art, the starting material for which are fractions of human plasma (Kohn fractions). Some of the Kohn fractions contain higher titers of y-globulin than other fractions. Usually, the starting material for obtaining y-globulin solutions is Kohn fraction II or Kohn fraction I-I.
Хоча у відомих з рівня техніки способах використовуються різноманітні методи поділу і стерилізації, постійно вводяться модифікації з метою підвищення чистоти остаточного продукту, його безпеки і загального виходу.Although various methods of separation and sterilization are used in the methods known from the state of the art, modifications are constantly introduced to improve the purity of the final product, its safety and overall yield.
У багатьох промислових способах для інактивації вірусів застосовується етап обробки розчинником/детергентом або етап теплової обробки. На сьогодні не відомі багатоетапні способи, для яких вихідним матеріалом була б паста фракції Кона ІІ або паста ІІ -- І ї які б включали дві різні процедури інактивації вірусів як частину ефективного способу виробництва у-глобуліну з високим виходом.In many industrial processes, a solvent/detergent treatment step or a heat treatment step is used to inactivate viruses. To date, there are no known multi-step methods for which the starting material would be Kohn fraction II paste or II - II paste and which would include two different virus inactivation procedures as part of an efficient method for high-yield γ-globulin production.
У патенті США 5,151,499 Катеуата еї а). описаний спосіб одержання білкових композицій з інактивованими вірусами, згідно з яким білкову композицію піддають інактивації оболонкових вірусів обробкою білкової композиції розчинником/детергентом та інактивації безоболонкових вірусів тепловою обробкою білкової композиції. У патенті відзначається, що етап обробки розчинником/детергентом краще здійснювати першим і у присутності інгібітору протеаз, а вже потім проводити теплову обробку. Якщо теплову обробку проводять у рідинній фазі, то білок виділяють із суміші розчинник/детергент адсорбцією на іонообмінній колонці до теплової обробки. Теплову обробку в рідинній фазі можна здійснювати у присутності в якості стабілізатора цукру, цукрового спирту або амінокислот. Поряд з тим, що в патенті перераховані численні вихідні білкові композиції, що містять імуноглобулін, проте наведені приклади їх одержання обмежуються Фактором ЇХ, тромбіном, фібриногеном і фібронектином. Видалення денатурованого білка, що утворився на етапі теплової обробки, при цьому не розглядається.In U.S. Patent 5,151,499 Cateuata ei a). the method of obtaining protein compositions with inactivated viruses is described, according to which the protein composition is subjected to inactivation of enveloped viruses by treatment of the protein composition with a solvent/detergent and inactivation of non-enveloped viruses by heat treatment of the protein composition. The patent states that it is better to perform the solvent/detergent treatment step first and in the presence of a protease inhibitor, and only then carry out the heat treatment. If heat treatment is carried out in the liquid phase, the protein is separated from the solvent/detergent mixture by adsorption on an ion exchange column before heat treatment. Heat treatment in the liquid phase can be carried out in the presence of sugar, sugar alcohol or amino acids as a stabilizer. Along with the fact that the patent lists numerous starting protein compositions containing immunoglobulin, however, the given examples of their production are limited to Factor IX, thrombin, fibrinogen and fibronectin. The removal of denatured protein formed at the stage of heat treatment is not considered.
У деяких відомих з рівня техніки способах одержання розчинів у-глобуліну, призначених для внутрішньовенного введення, описується застосування теплової обробки в рідинній фазі, проведеної при наявності сорбітолу в якості теплового стабілізатора, як одного з етапів процесу очищення, вихідним матеріалом для якого є паста фракцій Кона ІІ «ж ІІ. У патенті США 4,876,088 Нігао еї аї!., фракцію Кона ІІІ піддають фракціонуванню поліетиленгліколем (далі "ПЕГ") (спочатку ЗУомас. ПЕГ, потім 1295мас. ПЕГ),, потім іонообмінною хроматографією (ДЕАЕ-Сефадекс), і видаляють антитіла групи крові людини до теплової обробки в рідинній фазі при наявності сорбітолу в якості стабілізатора білка. З іншого боку, уIn some known from the state of the art methods of obtaining y-globulin solutions intended for intravenous administration, the use of heat treatment in the liquid phase, carried out in the presence of sorbitol as a heat stabilizer, is described as one of the stages of the purification process, the starting material for which is a paste of Kohn's fractions II "and II. In US Pat. No. 4,876,088 to Nigao et al., Kohn's fraction III is fractionated with polyethylene glycol (hereafter "PEG") (initially 10 wt. PEG, then 1295 wt. PEG), then by ion exchange chromatography (DEAE-Sephadex), and human blood group antibodies are removed to heat treatment in the liquid phase in the presence of sorbitol as a protein stabilizer. On the other hand, in
Прикладі 1 патенту США 4,876,088 описується одержання розчину у-глобуліну для внутрішньовенного введення з пасти фракції Кона ІІ. При цьому пасту суспендують у воді, рН доводять до 5,5, і проводять центрифугування, після чого супернатант піддають тепловій обробці для інактивації вірусів у присутності 3395 (мас), сорбітолу. Далі йде фракціонування ПЕГом (6995/1295), при якому видаляють денатурований білок, та інші етапи очищення, включаючи іонообмінну хроматографію на ДЕАЕ-Сефадексі.Example 1 of the US patent 4,876,088 describes the preparation of a solution of γ-globulin for intravenous administration from the paste of the Kohn fraction II. At the same time, the paste is suspended in water, the pH is adjusted to 5.5, and centrifugation is carried out, after which the supernatant is subjected to heat treatment to inactivate viruses in the presence of 3395 (wt), sorbitol. This is followed by fractionation with PEG (6995/1295), which removes the denatured protein, and other purification steps, including ion exchange chromatography on DEAE-Sephadex.
Метою даного винаходу є розробка об'єднаного, багатоетапного промислового способу одержання вьісокоочищеного імунного розчину у-глобуліну на основі методу фракціонування Кона.The purpose of this invention is the development of a combined, multi-stage industrial method of obtaining a highly purified immune solution of y-globulin based on the Kohn fractionation method.
Іншою метою даного винаходу є одержання дуже чистого, призначеного для внутрішньовенного введення розчину у-глобуліну, вільного як від оболонкових, так і від безоболонкових вірусів, включаючи всі теплочутливі віруси.Another object of this invention is to provide a highly pure, intravenous solution of γ-globulin free from both enveloped and non-enveloped viruses, including all heat-sensitive viruses.
Ще однією метою даного винаходу є створення промислового способу одержання у-глобуліну, що передбачав би видалення перед другою стадією інактивації вірусів будь-якого денатурованого білка, що утворився при тепловій стерилізації.Another goal of this invention is to create an industrial method for obtaining y-globulin, which would involve the removal of any denatured protein formed during heat sterilization before the second stage of virus inactivation.
Перераховані вище й інші цілі, які є очевидними для кваліфікованого фахівця, були досягнуті у даному винаході шляхом того, що спиртові фракції Кона, що можуть бути частково очищені, але збагачені на у- глобулін, піддають тепловій обробці у водяному середовищі при наявності теплового стабілізатора для інактивації вірусів, потім проводять фракціонування ПЕГом і другу інактивацію вірусів при наявності розчинника або, краще, суміші розчинник/детергент для руйнування оболонкових вірусів, після чого йде видалення розчинника або суміші розчинник/детергент.The above and other objects, which are obvious to the skilled person, have been achieved in the present invention by subjecting Kohn's alcohol fractions, which may be partially purified but enriched in u-globulin, to heat treatment in an aqueous medium in the presence of a heat stabilizer to inactivation of viruses, then fractionation with PEG and a second inactivation of viruses in the presence of a solvent or, better, a mixture of solvent/detergent for the destruction of enveloped viruses, followed by removal of the solvent or mixture of solvent/detergent.
Згідно з кращим варіантом здійснення даного винаходу, тепловим стабілізатором є сорбітол, а в якості розчинника використовується триалкілфосфат.According to the best variant of the implementation of this invention, the heat stabilizer is sorbitol, and trialkyl phosphate is used as a solvent.
Згідно з іншим кращим варіантом здійснення даного винаходу, денатуровані продукти, що утворилися в результаті інактивації вірусів тепловою обробкою, видаляють фракціонуванням ПЕГом перед другою інактивацією вірусів, одержуючи тим самим додатково очищений, чистий, прогрітий у-глобулін.According to another preferred embodiment of the present invention, the denatured products formed as a result of the inactivation of viruses by heat treatment are removed by PEG fractionation before the second inactivation of the viruses, thereby obtaining additionally purified, pure, warmed γ-globulin.
Відповідно до іншого кращого варіанта здійснення даного винаходу, будь-які присутні частки видаляються перед етапом обробки розчинником/детергентом.According to another preferred embodiment of the present invention, any particles present are removed prior to the solvent/detergent treatment step.
Відповідно до ще одного варіанта здійснення винаходу, одержують стерилізований теплом і розчинником/детергентом у-глобулін, придатний до внутрішньовенного введення.According to another embodiment of the invention, heat and solvent/detergent sterilized γ-globulin suitable for intravenous administration is obtained.
У якості вихідного матеріалу використовуються фракції, що містять імуноглобулін. Ці фракції не обов'язково є фракціями сироватки людини, але повинні містити імуноглобулін. Конкретними прикладами таких фракцій, що містять імуноглобулін, є фракція І-І ї фракція ІІ, які отримуються при фракціонуванні етанолом за Коном, а також паста із еквівалентних їм фракцій, що містять імуноглобулін. Іншими вихідними матеріалами є фракції І - ІІ - ПІ ї фракція І! я Пм/. Вихідний матеріал може містити такі домішки, як антитіла групи крові людини, плазміноген, плазмін, калікреїн, прекалікреїн активатор, полімери І9М, ІдА, дес (що позначаються як "агрегати") і т.д.Fractions containing immunoglobulin are used as starting material. These fractions are not necessarily human serum fractions, but must contain immunoglobulin. Specific examples of such fractions containing immunoglobulin are fraction I-I and fraction II, which are obtained by fractionation with ethanol according to Kohn, as well as a paste of their equivalent fractions containing immunoglobulin. Other starting materials are fractions I - II - PI and fraction I! I PM/. The starting material may contain such impurities as human blood group antibodies, plasminogen, plasmin, kallikrein, prekallikrein activator, polymers I9M, IdA, des (referred to as "aggregates"), etc.
Кращим вихідним матеріалом є фракція Кона ІІ або фракція Кона І! ж І. Якщо використовується паста фракцій І! «я І, то бажано піддати її попередній процедурі відмивання з одержанням фракції І! ж- Пму/, що і використовується в способі, відповідно до даного винаходу. "Фракція ІІ ж- ПШм/" являє собою преципітат фракції ІІ - 1, промитий розчином динатрійфосфату.The best source material is Kona II or Kona I! same I. If the paste of fractions I is used! "if I, then it is desirable to subject it to a preliminary washing procedure to obtain fraction I! z-Pmu/, which is used in the method according to this invention. "Fraction II zh- PShm/" is a precipitate of fraction II - 1, washed with disodium phosphate solution.
Фракцію Ії ж Пм/ можна приготувати розчиненням преципітату фракції ІЇ я ПІ у холодній воді для ін'єкцій у співвідношенні приблизно 1 кілограм пасти І - ПІ на 20 об'ємів води. Для солюбілізації ліпідов, ліпопротеїнів і альбуміну добавляють розчин фосфату натрію до остаточної концентрації 0,003М фосфату натрію. Потім добавляють холодний етанол до остаточної концентрації близько 2095. При додаванні спирту температуру поступово знижують до -5:17С, а рН підтримують на рівні 7,230,1, наприклад, додаванням ацетатного буфера або розведеної соляної кислоти. Преципітат фракції І! я ПМму, що утворюється, виділяють за допомогою центрифугуванння і/або фільтрації при температурі -5:2176.Fraction II and PM/ can be prepared by dissolving the precipitate of fraction II and PI in cold water for injections in the ratio of approximately 1 kilogram of paste I - PI per 20 volumes of water. To solubilize lipids, lipoproteins, and albumin, sodium phosphate solution is added to the final concentration of 0.003M sodium phosphate. Cold ethanol is then added to a final concentration of about 2095. When adding alcohol, the temperature is gradually lowered to -5:17C, and the pH is maintained at 7.230.1, for example, by adding an acetate buffer or dilute hydrochloric acid. Precipitate fraction I! The resulting PMMA is isolated by centrifugation and/or filtration at a temperature of -5:2176.
Відповідно до даного винаходу, перед першим етапом інактивації вірусів можуть бути проведені різноманітні попередні етапи очищення і/або зменшення кількості агрегатів. Наприклад, коли використовується паста фракцій ІІ ж Ії, що містить звичайно близько 2095 спирту і більш ніж 7095 Ід, її можна суспендувати у від 3-х до 10-и об'ємів холодної води, краще - у від 3-х до 5-й об'ємів при температурі близько 0-57С і рН, доведеною до величини в інтервалі 4,5-6,0, краще в інтервалі 5,0-5,5, за допомогою ацетатного буфера з рн 4,0 або соляної кислоти. Суміш перемішують протягом 2-15 годин для того, щоб весь у-глобулін перейшов у розчин. Потім такі нерозчинені білки, як альбумін і о-глобуліни, можна видалити шляхом центрифугуванння і/або фільтрації.According to this invention, before the first stage of virus inactivation, various preliminary stages of purification and/or reduction of the number of aggregates can be carried out. For example, when a paste of fractions II and III is used, which usually contains about 2095 alcohol and more than 7095 Id, it can be suspended in from 3 to 10 volumes of cold water, better - in from 3 to 5 and volumes at a temperature of about 0-57C and a pH adjusted to a value in the range of 4.5-6.0, preferably in the range of 5.0-5.5, using an acetate buffer with a pH of 4.0 or hydrochloric acid. The mixture is stirred for 2-15 hours so that all the y-globulin goes into the solution. Undissolved proteins such as albumin and o-globulins can then be removed by centrifugation and/or filtration.
Якщо в якості вихідного матеріалу використовуються різноманітні фракції Кона, то початковий етап або етапи способу можуть бути відповідним чином обрані для того, щоб провести попереднє очищення для отримання фракцій з високим вмістом (ДО для подальшої обробки. Наприклад, коли фракція Кона І! (яка містить більш як 9595 Ід) відділена від фракції Кона Ії для подальшої обробки фракції ІЇ, то початкова обробка фракції І може проводитися при кислотності рН від 3,2 до 5,0, краще від 3,8 до 4,2, як описаноIf various Kohn fractions are used as starting material, the initial step or steps of the method can be suitably selected to carry out pre-purification to obtain fractions with a high content (DO) for further processing. For example, when the Kohn fraction I! (which contains more than 9595 Id) is separated from the Kohn fraction II for further treatment of fraction II, then the initial treatment of fraction I can be carried out at an acidity of pH from 3.2 to 5.0, preferably from 3.8 to 4.2, as described
Уемурою та ін. (ПШетига еї а!.), у патенті США 4,371,520, із тим щоб зруйнувати агрегати імуноглобулінів, які існують серед мономерів і димерів імуноглобулінів, оскільки відомо, що агрегати мають анти- комплементарну активність (АСА). В іншому випадку, коли в якості вихідного матеріалу використовується фракція Кона І! «- ІІ, тоді, відповідно до патенту США 4,371,520, обробка низьким рН може бути здійснена як додатковий етап після етапу початкового очищення, описаного вище, і перед інактивацією вірусів тепловою обробкою.Uemura et al. (PShetiga ei a!.), in US Patent 4,371,520, in order to disrupt immunoglobulin aggregates that exist among immunoglobulin monomers and dimers, since the aggregates are known to have anti-complementary activity (ASA). In another case, when the Kohn fraction is used as the starting material! "-II, then, according to US Patent 4,371,520, the low pH treatment can be carried out as an additional step after the initial purification step described above and before the inactivation of the viruses by heat treatment.
При здійсненні етапу теплової стерилізації білок імуноглобуліну розчиняють у воді, або, якщо він являє собою водяну суміш, наприклад, фільтрат, отриманий після згаданого вище часткового очищення, його можна використовувати в тому ж виді, у якому він є, і добавляти до нього цукор, цукровий спирт або амінокислоти для виконання ролі теплового стабілізатора. В якості теплового стабілізатора краще використовувати сахарозу, мальтозу, сорбітол або манітол, а найкраще - сорбітол. Цукор або цукровий спирт додають до розчину імуноглобуліну у вигляді порошку або перед додаванням змішують із невеличкою кількістю води і доводять його концентрацію в розчині до 10-50905 (мас), до насичення. У цей момент водяний розчин імуноглобуліну містить достатню кількість води, так що концентрація загального білка в розчині складає від 1 до 695, що відповідає звичайному вихідному матеріалу фракцій І! ж ІЇЇ, який містить близько 300 грамів білка на кілограм пасти.When performing the heat sterilization step, the immunoglobulin protein is dissolved in water, or if it is an aqueous mixture, for example, the filtrate obtained after the partial purification mentioned above, it can be used as it is, and sugar is added to it, sugar alcohol or amino acids to act as a heat stabilizer. As a heat stabilizer, it is better to use sucrose, maltose, sorbitol or mannitol, and best of all - sorbitol. Sugar or sugar alcohol is added to the immunoglobulin solution in the form of a powder, or mixed with a small amount of water before addition and its concentration in the solution is brought to 10-50905 (mass), to saturation. At this moment, the aqueous solution of immunoglobulin contains a sufficient amount of water, so that the concentration of total protein in the solution is from 1 to 695, which corresponds to the usual source material of fractions I! and III, which contains about 300 grams of protein per kilogram of pasta.
Після додавання теплового стабілізатора суміш гріють для інактивації теплочутливих вірусів до температури 50-70"С протягом 10-100 годин, краще - при 60"С протягом 10-20 годин. Етап теплової обробки не тільки інактивує віруси, але, у силу своєї денатуруючої дії, може вибірково знижувати кількість окремих небажаних білків, зазвичай асоційованих із фракціями Кона І! «з ІІ, таких як прекалікреїн, плазмін, плазміноген і ІДА.After adding a heat stabilizer, the mixture is heated to inactivate heat-sensitive viruses to a temperature of 50-70"C for 10-100 hours, better - at 60"C for 10-20 hours. The heat treatment step not only inactivates viruses, but, due to its denaturing effect, can selectively reduce the amount of certain unwanted proteins, usually associated with the Kohn I fractions! "with II, such as prekallikrein, plasmin, plasminogen and IDA.
Після теплової обробки добавляють холодну воду в такій кількості, щоб довести концентрацію білка від 0,3 до 2,095. Розчин охолоджують до 0-20.After heat treatment, cold water is added in such quantity to bring the protein concentration from 0.3 to 2.095. The solution is cooled to 0-20.
Після цього ПЕГом проводять фракціонування розчину, який був підданий тепловій обробці.After that, fractionation of the solution, which was subjected to heat treatment, is carried out with PEG.
Фракціонування ПЕГом є добре відомим способом, який застосовується для очищення імуноглобуліну, тобто для відділення потрібних мономерів і димерів до від агрегатів (до й інших домішок, що природно зустрічаються у вихідних фракціях білків плазми. Але, за способом, що тут описується, фракціонуванняFractionation by PEG is a well-known method that is used to purify immunoglobulin, that is, to separate the necessary monomers and dimers from aggregates (and other impurities that naturally occur in the initial fractions of plasma proteins. But, according to the method described here, fractionation
ПЕГом також дає можливість відокремити потрібні мономери і димери до від небажаних денатурованих білкових продуктів, що утворилися при тепловій обробці. До цих денатурованих білкових продуктів належать денатурований прекалікреїн, плазміноген, плазмін, ІдДА, ІДМ та агрегати.PEG also makes it possible to separate the desired monomers and dimers from unwanted denatured protein products formed during heat treatment. These denatured protein products include denatured prekallikrein, plasminogen, plasmin, IdDA, IDM, and aggregates.
Може бути використана будь-яка відома з рівня техніки процедура фракціонування ПЕГом. Зазвичай проводять двоетапне фракціонування ПЕГом. На першому етапі концентрацію ПЕГ ії величину рн вибирають таким чином, щоб потрібні мономери й димери дО залишалися в розчині, а такі небажані білки, як агрегати, випадали з розчину в осад. Після центрифугування і/або фільтрації концентрацію ПЕГ підвищують, і рН регулюють так, щоб потрібні мономери й димери до випали в осад.Any PEG fractionation procedure known in the art can be used. Two-stage fractionation with PEG is usually carried out. At the first stage, the concentration of PEG and the value of pH are chosen in such a way that the desired monomers and dimers of DO remain in the solution, and such undesirable proteins as aggregates fall out of the solution into the sediment. After centrifugation and/or filtration, the concentration of PEG is increased, and the pH is adjusted so that the desired monomers and dimers are precipitated.
Наприклад, перший етап фракціонування ПЕГом можна проводити при рН від 5,0 до 7,5, краще - в інтервалі значень рН від 6,5 до 7,5, якщо в якості вихідного матеріалу використовується паста фракцій І! жкFor example, the first stage of fractionation with PEG can be carried out at pH from 5.0 to 7.5, better - in the range of pH values from 6.5 to 7.5, if the paste of fractions I is used as the starting material! residential area
ПМ, і краще від 5,5 до 6,0, якщо в якості вихідного матеріалу використовується паста фракцій ІІ я ПІ, і концентрація ПЕГу варіює в межах 4-895, краще - в межах 4-695, якщо в якості вихідного матеріалу використовується паста фракцій І! ж- му, або 6-895, якщо в якості вихідного матеріалу використовується паста фракцій І! ї- І. При витриманні температури в межах 0-2"С перший етап фракціонування ПЕГом займає від 1 до 8 годин, після чого преципітат видаляють як описано вище.PM, and better from 5.5 to 6.0, if the paste of II and PI fractions is used as the starting material, and the concentration of PEG varies within 4-895, better - within 4-695, if the paste is used as the starting material factions and! press, or 6-895, if the paste of fractions I is used as the starting material! If the temperature is maintained in the range of 0-2"С, the first stage of fractionation with PEG takes from 1 to 8 hours, after which the precipitate is removed as described above.
Потім рН фільтрату доводять до значення в межах від 8,0 до 9,0, краще - від 8,5 до 8,9, і добавляють ще одну порцію ПЕГ до остаточної концентрації від 10 до 1595, краще, якщо близько 1295. Преципітат, що утворився і являє собою очищений імуноглобулін, видаляють фільтрацією і/або центрифугуваннням.Then the pH of the filtrate is adjusted to a value in the range from 8.0 to 9.0, preferably from 8.5 to 8.9, and another portion of PEG is added to a final concentration of from 10 to 1595, preferably around 1295. The precipitate, which is formed and is a purified immunoglobulin, is removed by filtration and/or centrifugation.
Подальші деталі процедур фракціонування ПЕГом, які застосовуються для здійснення даного винаходу, можна знайти в згаданих вище патентах США 4,876,088 Нігао еї аї., і 4,845,199 Нігао еї аї.Further details of the PEG fractionation procedures used in the practice of this invention can be found in the aforementioned US Patents 4,876,088 Nigao et al., and 4,845,199 Nigao et al.
Заключним необхідним етапом способу, розкритого у даному винаході, є етап другої інактивації вірусів із використанням розчинника або суміші розчинник/детергент. Як описано нижче, наступні етапи очищення, зокрема, із використанням іонообмінних смол, можуть здійснюватися як до, так і/або після обробки розчинником/детергентом. Особливі переваги має процедура, що поєднує аніонообмінну обробку до інактивації вірусів розчинником/детергентом із катіонообмінною обробкою після інактивації вірусів розчинником/детергентом. У ході, цієї процедури деякі небажані білкові матеріали (такі як прекалікреїн активатор, ІДА, ІМ і альбумін), що виявляються в плазмі людини, можуть бути видалені з ЇДо за допомогою аніонообмінника, а потім ці матеріали (прекалікреїн активатор, ІДА, І9М, альбумін і ПЕГ), а також залишки реагентів, використаних для обробки розчинником/детергентом, можуть бути видалені катіонообмінною хроматографією.The final necessary stage of the method disclosed in this invention is the stage of the second inactivation of viruses using a solvent or a solvent/detergent mixture. As described below, subsequent purification steps, in particular using ion exchange resins, can be carried out both before and/or after solvent/detergent treatment. A procedure that combines anion exchange treatment before virus inactivation with a solvent/detergent with cation exchange treatment after virus inactivation with a solvent/detergent has particular advantages. In the course of this procedure, some unwanted protein materials (such as prekallikrein activator, IDA, IM, and albumin) found in human plasma can be removed from IDO using an anion exchanger, and then these materials (prekallikrein activator, IDA, I9M, albumin and PEG), as well as residual reagents used for solvent/detergent treatment, can be removed by cation exchange chromatography.
Якщо цього не було зроблено на попередніх етапах способу, то призначений для обробки розчинником/детергентом розчин повинен бути оброблений для видалення всіх часток, до яких може належати і денатурований білок. Тому бажано пропустити розчин крізь одномікронний або більш тонкий фільтр до того, як буде додаватися розчинник/детергент. Це також знизить імовірність попадання вірусів у великі частки, де вони могли б уникнути контакту з розчинником/детергентом.If this was not done in the previous stages of the method, then the solution intended for treatment with a solvent/detergent should be treated to remove all particles, which may include denatured protein. Therefore, it is advisable to pass the solution through a 1 micron or finer filter before the solvent/detergent is added. This will also reduce the chance of viruses being trapped in large particles where they could escape contact with the solvent/detergent.
В даний час найкращим розчинником для інактивації оболонкових вірусів є триалкілфосфат.Currently, the best solvent for inactivating enveloped viruses is trialkyl phosphate.
Триалкілфосфат, який використовується при здійсненні даного винаходу, не є предметом жодних особливих обмежень, але використовувати краще три(п-бутил)уфосфат (ТМВР). Серед інших триалкілфосфатів застосовувати можна також три(тер-бутилуфосфат, три(п-гексил)фосфат, три(2- етилгексил)фосфат та ін. Можливо застосування суміші двох і більше різних триалкілфосфатів.Trialkylphosphate, which is used in the implementation of this invention, is not subject to any special restrictions, but it is better to use tri(p-butyl)uphosphate (TMBP). Among other trialkylphosphates, you can also use tri(tert-butylphosphate), tri(p-hexyl)phosphate, tri(2-ethylhexyl)phosphate, etc. It is possible to use a mixture of two or more different trialkylphosphates.
Триалкілфосфат використовують у концентраціях від 0,01 до 1095 (мас), краще - від 0,1 до 395 (мас).Trialkyl phosphate is used in concentrations from 0.01 to 1095 (mass), preferably from 0.1 to 395 (mass).
Триалкілфосфат може застосовуватися як разом із детергентом або поверхнево-активною речовиною, так і без них. Використовувати триалкілфосфат краще у сполученні з детергентом. Функції детергента полягають у посиленні контакту вірусів, що утримуються в композиції імуноглобуліну, із триалкілфосфатом.Trialkyl phosphate can be used with or without a detergent or surfactant. It is better to use trialkyl phosphate in combination with a detergent. The functions of the detergent are to strengthen the contact of viruses contained in the composition of immunoglobulin with trialkylphosphate.
Прикладами детергентов є поліоксиетиленові похідні жирних кислот, часткові ефіри безводного сорбітолу, такі як Полісорбат 80 (Торгова назва: Твін 80, і т.д.) і Полісорбат 20 (Торгова назва: Твін 20, і т.д.); і такі неіонні агенти, промиті в масляній ванні, як оксиетильований алкілфенол (Торгова назва: ТритонExamples of detergents are polyoxyethylene derivatives of fatty acids, partial esters of anhydrous sorbitol, such as Polysorbate 80 (Trade name: Tween 80, etc.) and Polysorbate 20 (Trade name: Tween 20, etc.); and such nonionic agents washed in an oil bath as oxyethylated alkylphenol (Trade name: Triton
Х100) та ін., а також інші поверхнево-активні речовини і такі детергенти, як цвітеріонні детергенти, та ін.X100), etc., as well as other surface-active substances and such detergents as zwitterionic detergents, etc.
При застосуванні детергента, його не варто добавляти в критичних кількостях; детергент можна використовувати в концентраціях, наприклад, від 0,001905 до 1095, і краще - від 0,0195 до 3905.When using detergent, it should not be added in critical quantities; the detergent can be used in concentrations, for example, from 0.001905 to 1095, and better - from 0.0195 to 3905.
Відповідно до даного винаходу обробку триалкілфосфатом композиції, що містить імуноглобулін, проводять при температурі від 20 до 35"С, краще - від 25 до 30"С, протягом більш ніж однієї години, краще - від 5 до 8 годин, і найкраще - від 6 до 7 годин.According to this invention, the trialkyl phosphate treatment of the composition containing immunoglobulin is carried out at a temperature of 20 to 35"C, better - from 25 to 30"C, for more than one hour, better - from 5 to 8 hours, and best - from 6 up to 7 hours.
Під час обробки триалкілфосфатом імуноглобулін знаходиться у водяному середовищі у формі розчину з концентрацією білка від З до 895.During treatment with trialkyl phosphate, the immunoglobulin is in the aqueous environment in the form of a solution with a protein concentration of 3 to 895.
Якщо аніонообмінна обробка не була проведена перед обробкою розчинником/детергентом, то її можна здійснити з вже обробленим розчинником/детергентом імуноглобуліном. Бажано хоча б катіонообмінну обробку проводити за допомогою імуноглобуліну, обробленого розчинником/детергентом. Іонообмінну обробку проводять імуноглобуліном, розчиненим у водяному розчиннику, з рН, як правило, близько 5-8, із достатньо низькою іонною силою для максимальної адсорбції дб. Концентрація білка зазвичай знаходиться в межах 1-1595 (мас.), краще, якщо в межах 3-1095 (мас.). Іонообмінник врівноважують тим самим водяним розчинником, у якому розчиняють імуноглобулін, та за допомогою як безперервного, так і порціонного процесу. Наприклад, при здійсненні порціонної аніонообмінної обробки розчин імуноглобуліну змішують з аніонообмінником у кількості від 10 до 100мл на Імл попередньо обробленого аніонообмінника (наприклад, 1 грам смоли ДЕАЕ Сефадекс А-50 набухає приблизно до 20 грамів вологої ваги в 0,495 розчині хлориду натрію), і суміш перемішують при 0-57С протягом 0,5-5 годин із наступним фільтруванням або центрифугуваннням на швидкості від 6000 до 8000об./хв. протягом 10-30 хвилин із одержанням супернатанту. При здійсненні безперервного процесу розчин імуноглобуліну пропускають крізь колонку з аніонообмінником із швидкістю від 10 до 100мл на мл аніонообмінника, і збирають фракцію, що не зв'язалася.If the anion exchange treatment was not carried out before the solvent/detergent treatment, it can be carried out with the already treated solvent/detergent immunoglobulin. It is desirable to carry out at least cation exchange treatment with the help of immunoglobulin treated with a solvent/detergent. Ion-exchange treatment is carried out with immunoglobulin dissolved in an aqueous solvent, with a pH, as a rule, of about 5-8, with a sufficiently low ionic strength for maximum adsorption of db. The protein concentration is usually in the range of 1-1595 (wt.), it is better if it is in the range of 3-1095 (wt.). The ion exchanger is equilibrated with the same aqueous solvent in which the immunoglobulin is dissolved, using both a continuous and a batch process. For example, when carrying out batch anion exchange treatment, the immunoglobulin solution is mixed with an anion exchanger in the amount of 10 to 100 ml per Iml of pre-treated anion exchanger (for example, 1 gram of DEAE Sephadex A-50 resin swells to about 20 grams of wet weight in 0.495 sodium chloride solution), and the mixture stir at 0-57C for 0.5-5 hours followed by filtration or centrifugation at a speed of 6000 to 8000 rpm. for 10-30 minutes to obtain a supernatant. In a continuous process, the immunoglobulin solution is passed through an anion exchanger column at a rate of 10 to 100 mL per mL of anion exchanger, and the unbound fraction is collected.
Аніонообмінник, що використовується, містить, наприклад, аніонообмінні групи, пов'язані з нерозчинним носієм. До аніонообмінних груп належать діетиламіноетил (ДЕАЕ), група четверинного аміноетилу (ОАЕ) та ін., а до нерозчинних носіїв належать агароза, целюлоза, декстран, поліакриламід та ін.The anion exchanger used contains, for example, anion exchange groups associated with an insoluble carrier. Anion-exchange groups include diethylaminoethyl (DEAE), quaternary aminoethyl group (UAE), etc., and insoluble carriers include agarose, cellulose, dextran, polyacrylamide, etc.
До прийнятних катіонообмінників належать карбоксиметил Сефадекс (СМ-Сефадекс), СМ-целюлоза,Acceptable cation exchangers include carboxymethyl Sephadex (CM-Sephadex), CM-cellulose,
ЗР-Сефадекс, СМ-Сефароза і 5-Сефароза. Попередньо оброблений катіонообмінник у кількості їмл (наприклад, 1 грам смоли ДЕАЕ Сефадекс С-50 набухає приблизно до 30-35 грамів вологої ваги в 0,495 розчині хлориду натрію) змішують із 0,5-5,0мл розчину імуноглобуліну і перемішують при 0-57С протягом 1- 6 годин. Суспензію центрифугують або фільтрують для відділення (до смоли, що сорбувала. Може також застосовуватися і безперервний процес.ZR-Sephadex, CM-Sepharose and 5-Sepharose. Pretreated cation exchanger in the amount of iml (for example, 1 gram of DEAE Sephadex C-50 resin swells to approximately 30-35 grams of wet weight in a 0.495 sodium chloride solution) is mixed with 0.5-5.0 ml of immunoglobulin solution and stirred at 0-57C for 1-6 hours. The suspension is centrifuged or filtered to separate (to the sorbing resin. A continuous process can also be used.
При катіонообмінній обробці в описаних умовах до сорбується і, після промивання катіонообмінної смоли, що сорбувала білок, |до можна елюювати, наприклад, 1,4М розчином хлориду натрію.During the cation exchange treatment under the described conditions, do is sorbed and, after washing the cation exchange resin that sorbed the protein, |do can be eluted, for example, with a 1.4 M sodium chloride solution.
Після здійснення описаних вище етапів процесу до просвітлюють, діафільтрують і концентрують до потрібного ступеня. При необхідності можна додати такий стабілізатор, як О-сорбітол, і провести остаточне регулювання концентрацій із тим, щоб одержати розчин із рН близько 5,4, який містить близько 100мг/млAfter carrying out the above-described stages of the process, it is clarified, diafiltered and concentrated to the desired degree. If necessary, a stabilizer such as O-sorbitol can be added and the final concentration adjusted to obtain a solution with a pH of about 5.4, which contains about 100 mg/ml
ІдОо і 5Омг/мл ЮО-сорбітолу. Цей розчин потім стерилізують фільтруванням через стерилізований фільтр, що затримує бактерії, і закривають в ампули.IDOO and 5Omg/ml SO-sorbitol. This solution is then sterilized by filtering through a sterilized bacteria-retaining filter and sealed in ampoules.
Нижченаведені приклади мають виключно ілюстративне спрямування і в жодній мірі не обмежують об'єм даного винаходу.The following examples are purely illustrative and do not in any way limit the scope of this invention.
За необхідністю, з описаним вище процесом можна поєднувати й інші процеси очищення імуноглобулінів. Наприклад, можна використовувати етап просвітлюваня бентонітом, ефективний у зменшенні кількості калікреїна і прекалікреїн-активатора. Ілюстрацією цього способу є наведений нижчеIf necessary, other immunoglobulin purification processes can be combined with the process described above. For example, a bentonite clarification step can be used, which is effective in reducing the amount of kallikrein and prekallikrein activator. An illustration of this method is given below
Приклад 1.Example 1.
Приклад 1. Гамаглобулін, підданий тепловій обробці й обробці розчинником/детергентомExample 1. Gammaglobulin subjected to heat treatment and solvent/detergent treatment
Пасту фракції ІІ ж- Пму у кількості б68а5г суспендують у 11,9кг холодної води. До суспензії добавляють розчин ацетат-тригідрата натрію до остаточної концентрації близько 0,04М для селективної солюбілізаціїPaste fraction II zh-Pmu in the amount of b68a5g is suspended in 11.9 kg of cold water. A solution of sodium acetate trihydrate is added to the suspension to a final concentration of about 0.04M for selective solubilization
ІдО. Після перемішування протягом 15 хвилин рН суспензії доводять до 4,8 ацетатним буфером із рН 4,0.And till. After stirring for 15 minutes, the pH of the suspension is adjusted to 4.8 with an acetate buffer with a pH of 4.0.
До суспензії добавляють холодний спирт (9595) до остаточної концентрації 1795. Під час додавання спирту температуру суспензії поступово знижують до приблизно -6"С. До суспензії в якості агента, що фільтрує, добавляють 303г Целіту 535, промитого кислотою (наданого Сеїйе Согрогаїййоп), до остаточної концентрації близько 295. Після перемішування протягом 1 години Целіт і пасту фракції ЇЇ, що містять такі непотрібні білки, як плазмін, плазміноген, ДМ і ІдДА, видаляють фільтрацією за допомогою фільтрувального пресу.Cold alcohol (9595) is added to the suspension to a final concentration of 1795. During the addition of the alcohol, the temperature of the suspension is gradually lowered to about -6°C. 303g of acid-washed Celite 535 (courtesy of Seyye Sogrogayyop) is added to the suspension as a filtering agent. to a final concentration of about 295. After stirring for 1 hour, Celite and its paste fractions containing such unnecessary proteins as plasmin, plasminogen, DM and IdDA are removed by filtration using a filter press.
Фільтрат потім просвітлюють пропусканням крізь фільтри 0,45мкм і 0,2мкм.The filtrate is then clarified by passing through 0.45μm and 0.2μm filters.
Кислотність просвітленого розчину фракції ІІ 4 Пму/ доводять до рН 4,0 додаванням 0,1М соляної кислоти і концентрують ультрафільтрацією до об'єму 3,4 літра (1/5 початкового об'єму). До концентрованого розчину добавляють холодну воду в об'ємі, який дорівнює об'єму, видаленому при першій ультрафільтрації, і розчин знову піддають ультрафільтрації до 1/5 початкового об'єму. На цьому етапі концентрація білка в розчині складає близько 295. Розчин концентрують приблизно до 4,095 білка і піддають діафільтрації проти холодної води доти, поки провідність розчину не падає нижче З0ОмкС/см, що сприяє запобіганню агрегатоутворенню і зниженню денатурації при тепловій обробці. Далі розчин знову концентрують до 8,890 білка. До розчину добавляють Ю-сорбітол до остаточної концентрації близько 3395. Після перемішування протягом 30 хвилин рН розчину, що містить сорбітол, доводять до 5,5 добавленням 0,5М гідроксиду натрію.The acidity of the clarified solution of fraction II 4 Pmu/ is brought to pH 4.0 by adding 0.1M hydrochloric acid and concentrated by ultrafiltration to a volume of 3.4 liters (1/5 of the initial volume). Cold water is added to the concentrated solution in a volume equal to the volume removed during the first ultrafiltration, and the solution is again subjected to ultrafiltration to 1/5 of the initial volume. At this stage, the concentration of protein in the solution is about 295. The solution is concentrated to about 4.095 protein and subjected to diafiltration against cold water until the conductivity of the solution falls below 30ΩmS/cm, which helps prevent aggregate formation and reduce denaturation during heat treatment. Then the solution is again concentrated to 8.890 protein. U-sorbitol is added to the solution to a final concentration of about 3395. After stirring for 30 minutes, the pH of the solution containing sorbitol is adjusted to 5.5 by adding 0.5M sodium hydroxide.
Потім розчин нагрівають протягом 10 годин при 60"С. Після теплової обробки до розчину добавляють З об'єми холодної води, і розведений розчин охолоджують до 0-26.Then the solution is heated for 10 hours at 60"C. After heat treatment, 3 volumes of cold water are added to the solution, and the diluted solution is cooled to 0-26.
Величину рН розчину доводять до 6,9 добавленням 0,25М гідроксиду натрію, і до розчину добавляютьThe pH value of the solution is brought to 6.9 by adding 0.25M sodium hydroxide, and the solution is added
БОФо-й поліетиленгліколь (ПЕГ) 3350 до остаточної концентрації 495. Концентрацію хлориду натрію в розчині доводять до ЗММ для полегшення преципітації домішок і агрегатів при рН 6,9. Осад, що утворився, видаляють фільтрацією. Величину рН фільтрату доводять до 4,8 добавленням 0,1М соляної кислоти, і добавляють бентоніт остаточної концентрації близько 0,2595. Величину рН суспензії бентоніту доводять до 5,2, і суспензію фільтрують для видалення бентоніту. Величину рН фільтрату доводять до 8,5 добавленням 0,25М гідроксиду натрію, і до розчину додають 5095-й поліетиленгліколь (ПЕГ) 3350 до остаточної концентрації 1295. Преципітат (очищений імунний глобулін), що утворився, видаляють центрифугуваннням.BOFo and polyethylene glycol (PEG) 3350 to a final concentration of 495. The concentration of sodium chloride in the solution is brought to ZMM to facilitate the precipitation of impurities and aggregates at pH 6.9. The precipitate formed is removed by filtration. The pH value of the filtrate is adjusted to 4.8 by adding 0.1M hydrochloric acid, and bentonite with a final concentration of about 0.2595 is added. The pH value of the bentonite suspension is adjusted to 5.2, and the suspension is filtered to remove the bentonite. The pH of the filtrate is adjusted to 8.5 by adding 0.25 M sodium hydroxide, and 5095 polyethylene glycol (PEG) 3350 is added to the solution to a final concentration of 1295. The precipitate (purified immune globulin) formed is removed by centrifugation.
Близько 175 грамів пасти імуноглобуліну, очищеного як описано вище, суспендують у 790г 0,3905-го розчину хлориду натрію, рН суспензії доводять до 5,5, і суспензію перемішують протягом 2,5 годин. До розчину добавляють 62г попередньо урівноваженої (0,3956-м розчином хлориду натрію з рН 5,5) смолиAbout 175 grams of immunoglobulin paste, purified as described above, is suspended in 790 g of 0.3905 sodium chloride solution, the pH of the suspension is adjusted to 5.5, and the suspension is stirred for 2.5 hours. Add 62 g of pre-equilibrated (0.3956 m sodium chloride solution with pH 5.5) resin to the solution
ОЕАЕ-Сефадекс А-50, і суспензію перемішують протягом 2 годин. Потім суспензію фільтрують для видалення смоли. Концентрацію хлориду натрію доводять до 0,495, і до фільтрату добавляють суміш три-п- бутилфосфату (ТМВР) і Полісорбату 80 так, щоб остаточна концентрація ТМВР складала 0,395, аOEAE-Sephadex A-50, and the suspension is stirred for 2 hours. The suspension is then filtered to remove resin. The concentration of sodium chloride is adjusted to 0.495, and a mixture of tri-p-butyl phosphate (TMBP) and Polysorbate 80 is added to the filtrate so that the final concentration of TMBP is 0.395, and
Полісорбату 80-1905. Після інкубації протягом ночі рН розчину доводять до 5,8 і добавляють 860г попередньо урівноваженої (0,495-м розчином хлориду натрію з рН 5,8) смоли СМ-Сефадекс С-50. Після перемішування протягом 2 годин суспензію фільтрують. Після 3-х кратного промивання смоли СМ-Сефадекс 0,395-м хлоридом натрію, адсорбований (дб вимивають 1,4М хлоридом натрію. Елюат просвітлюють і піддають діафільтрації і концентруванню. Добавляють ЮО-сорбітол, і концентрацію розчину остаточно доводять до приблизно 1О00мг/мл ІдсС і близько 5О0мг/мл О-сорбітолу з рН 5,4. Після цього розчин стерилізують пропусканням крізь стерилізований фільтр, який затримує бактерії, і закривають в ампули.Polysorbate 80-1905. After overnight incubation, the pH of the solution is adjusted to 5.8 and 860 g of pre-equilibrated (0.495 ml sodium chloride solution with pH 5.8) CM-Sefadex C-50 resin is added. After stirring for 2 hours, the suspension is filtered. After 3 times washing of the CM-Sefadex resin with 0.395% sodium chloride, adsorbed (db) is washed with 1.4M sodium chloride. The eluate is clarified and subjected to diafiltration and concentration. Add SO-sorbitol, and the concentration of the solution is finally brought to approximately 1000 mg/ml of IDS and about 5O0 mg/ml of O-sorbitol with a pH of 5.4.The solution is then sterilized by passing through a sterilized filter that retains bacteria and sealed in ampoules.
Проміжний етап обробки бентонітом, описаний у даному Прикладі, є ефективний для подальшого зменшення присутності таких гіпотензивних ферментів, як калікреїн і прекалікреїн-активатор.The intermediate bentonite treatment step described in this Example is effective in further reducing the presence of hypotensive enzymes such as kallikrein and prekallikrein activator.
Параметри, які піддавали тестуваннюParameters that were tested
Антикомплементарна активність (СНбо од./мг Ід) 0,34Anticomplementary activity (CHbo units/mg ID) 0.34
Чистота до (90) 100Purity up to (90) 100
Вміст ідо (мг/мл) 112,7Ido content (mg/ml) 112.7
Прекалікреїн (96 СВЕВ Неї. Я3) 21Prekallikrein (96 SVEV Nei. I3) 21
Антитіла проти кору (96 СВЕК Кеї. І ої Мо. 176) 0,67Antibodies against measles (96 SVEK Kei. I oi Mo. 176) 0.67
Розподіл до за молекулярною масою при НРІ С (95): - мономерів 82,2 - димерів 174 - фрагментів ОО - агрегатів 0,3Distribution by molecular weight at NRI C (95): - monomers 82.2 - dimers 174 - OO fragments - aggregates 0.3
Антитіла проти гепатиту А (титр) 1200Antibodies against hepatitis A (titre) 1200
Антитіла проти гепатиту В (титр) 11024Antibodies against hepatitis B (titre) 11024
ІДЗА (мкг/мл) 22IDZA (μg/ml) 22
ІДМ (мкг/мл) 16IDM (μg/ml) 16
Плазміноген (нг/мл) нтPlasminogen (ng/ml) nt
Плазмін (нг/мл) 16Plasmin (ng/ml) 16
РН 5,4pH 5.4
НТ - Не тестувалиNT - Not tested
Приклад 2. Гамаглобулін, підданий тепловій обробці й обробці розчинником/детергентомExample 2. Gammaglobulin subjected to heat treatment and solvent/detergent treatment
Один (1) кг пасти фракції Ії ї- ЇЇ суспендують у 4,5кг холодної води при 0-2"С. Після перемішування протягом 1 години рН суспензії доводять до 5,0 додаванням 1М соляної кислоти. Після перемішування протягом З годин при рН 5,0 преципітат видаляють центрифугуваннням. До центрифугату добавляють О- сорбітол до остаточної концентрації 3395, і суміш перемішують протягом 1 години. Кислотність суспензії доводять до рН 5,5, а потім суспензію нагрівають при 60"С протягом 10 годин. Після теплової обробки до розчину добавляють З об'єми холодної води, і розведений розчин охолоджують до 0-27С. Далі добавляютьOne (1) kg of paste fraction II-II is suspended in 4.5 kg of cold water at 0-2"C. After stirring for 1 hour, the pH of the suspension is brought to 5.0 by adding 1M hydrochloric acid. After stirring for 3 hours at pH 5 .0 precipitate is removed by centrifugation. O-sorbitol is added to the centrifuge to a final concentration of 3395, and the mixture is stirred for 1 hour. The acidity of the suspension is adjusted to pH 5.5, and then the suspension is heated at 60"C for 10 hours. After heat treatment, 3 volumes of cold water are added to the solution, and the diluted solution is cooled to 0-27C. Then they add
БОбо-й розчин ПЕГ 3350 до остаточної концентрації ПЕГ 695. Величину рН суспензії, що містить ПЕГ, доводять до 5,7 додаванням 0,5М гідроксиду натрію, і суспензію перемішують протягом 2 годин. Промитий кислотою Целіт 535 добавляють до остаточної концентрації 1,595, і суспензію перемішують протягом 1 години. Преципітат разом із Целітом видаляють фільтрацією. Величину рН фільтрату доводять до 8,8 додаванням 0,5М гідроксиду натрію, концентрацію ПЕГ доводять до 1295 додаванням 5095 розчину ПЕГ.BObo-th solution of PEG 3350 to the final concentration of PEG 695. The pH value of the suspension containing PEG is brought to 5.7 by adding 0.5M sodium hydroxide, and the suspension is stirred for 2 hours. Acid washed Celite 535 was added to a final concentration of 1.595 and the suspension was stirred for 1 hour. The precipitate together with Celite is removed by filtration. The pH value of the filtrate is brought to 8.8 by adding 0.5 M sodium hydroxide, the concentration of PEG is brought to 1295 by adding 5095 PEG solution.
Величину рН суспензії доводять до 8,8, суспензію перемішують протягом 1 години і фільтрують, збираючи пасту очищеного імуноглобуліну. Таким чином отримують близько 251г пасти очищеного імуноглобуліну.The pH value of the suspension is adjusted to 8.8, the suspension is stirred for 1 hour and filtered, collecting the purified immunoglobulin paste. In this way, about 251 g of purified immunoglobulin paste is obtained.
Пасту очищеного імуноглобуліну у кількості 251г, отриманої як описано вище, суспендують в 1,4кг 0,395- го розчину хлориду натрію. Після перемішування протягом 1 години рН суспензії доводять до 6,0 додаванням 590-ї оцтової кислоти. Після повного розчинення пасти добавляють 104г попередньо урівноваженої (0,396-м розчином хлориду натрію з рН 6,0) смоли ОЕАЕ-Сефадекс А-50, і розчин перемішують на протязі 2 годин. Смолу видаляють фільтрацією. Потім фільтрат просвітлюють пропусканням крізь 0,2мкм фільтр. Концентрацію хлориду натрію в просвітленому розчині доводять до 0,495. Потім до розчину добавляють суміш три-п-бутилфосфату (ТМВР) і Полісорбату 80 так, щоб остаточна концентрація ТМВР складала 0,395, а Полісорбату 80-195. Розчин инкубують при 27"С протягом 1 години і залишають на ніч у холодильнику при 4"С. Наступного дня рН розчину доводять до 5,8, і в розчин добавляють 1,8кг попередньо урівноваженої (0,4950-м розчином хлориду натрію з рН 5,8) смоли СМ-Paste of purified immunoglobulin in the amount of 251 g, obtained as described above, is suspended in 1.4 kg of 0.395% sodium chloride solution. After stirring for 1 hour, the pH of the suspension is adjusted to 6.0 by adding 590 acetic acid. After complete dissolution of the paste, add 104g of pre-equilibrated (0.396 m sodium chloride solution with pH 6.0) OEAE-Sephadex A-50 resin, and the solution is stirred for 2 hours. Resin is removed by filtration. The filtrate is then clarified by passing it through a 0.2 μm filter. The concentration of sodium chloride in the clarified solution is brought to 0.495. Then a mixture of tri-p-butyl phosphate (TMVR) and Polysorbate 80 is added to the solution so that the final concentration of TMVR is 0.395, and Polysorbate 80-195. The solution is incubated at 27"C for 1 hour and left overnight in the refrigerator at 4"C. The next day, the pH of the solution is adjusted to 5.8, and 1.8 kg of pre-equilibrated (with a 0.4950 m solution of sodium chloride with a pH of 5.8) CM resin is added to the solution.
Сефадекс С-50. Після перемішування протягом 2 годин смолу видаляють фільтрацією. Після 3-х кратного промивання смоли СМ-Сефадекс 0,395-м хлоридом натрію, адсорбований ІДС вимивають 1,4М хлоридом натрію. Елюат просвітлюють і піддають діафільтрації і концентруванню. Добавляють О-сорбітол, і концентрацію розчину остаточно доводять до приблизно 100мг/мл ІдсС і близько 5Омг/мл О-сорбітолу.Sephadex S-50. After stirring for 2 hours, the resin is removed by filtration. After 3-fold washing of the CM-Sefadex resin with 0.395 M sodium chloride, the adsorbed IDS is washed with 1.4 M sodium chloride. The eluate is clarified and subjected to diafiltration and concentration. O-sorbitol is added, and the concentration of the solution is finally brought to about 100mg/ml of IDSC and about 5Omg/ml of O-sorbitol.
Розчин поділяють на дві порції - порцію А и порцію В. Величину рН порції А доводять до 5,4, а рН порції О - до 4,3. Потім розчини порцій А і В індивідуально стерилізують пропусканням крізь стерилізовані фільтри, що затримують бактерії, і закривають в ампули.The solution is divided into two portions - portion A and portion B. The pH of portion A is adjusted to 5.4, and the pH of portion O is adjusted to 4.3. Then the solutions of portions A and B are individually sterilized by passing through sterilized filters that retain bacteria and closed in ampoules.
Параметри, які піллавали тестуваннюParameters used for testing
Антикомплементарна активність (СНбо од./мг Ід) -0,05Anticomplementary activity (CHbo units/mg ID) -0.05
Чистота до (90) 100Purity up to (90) 100
Вміст до (мг/мл) 104,2Content up to (mg/ml) 104.2
Прекалікреїн (96 СВЕК Кеї. й3) нтPrekallikrein (96 SVEK Kei. y3) nt
Антитіла проти дифтерії (Антитоксин од./мл) 8.2Antibodies against diphtheria (Antitoxin units/ml) 8.2
Розподіл до за молекулярною масою при НРІ С (95): Рн 5,4 рн4іЗз - мономерів 88,8 97,5 - димерів 10,9 2,3 - фрагментів 0,3 нт - агрегатів -0,3 -0,3Distribution by molecular weight at NRI C (95): Рн 5.4 рн4иЗз - monomers 88.8 97.5 - dimers 10.9 2.3 - fragments 0.3 nt - aggregates -0.3 -0.3
Антитіла проти гепатиту А (титр) 1700Antibodies against hepatitis A (titre) 1700
І ЗА (мкг/мл) 78AND FOR (mcg/ml) 78
ГОМ (мкг/мл) 28HOM (μg/ml) 28
Калікреїн (Адов) 0,09Kallikrein (Adov) 0.09
Плазміноген (нг/мл) -8,4Plasminogen (ng/ml) -8.4
Плазмін (нг/мл) -8,4Plasmin (ng/ml) -8.4
НТ - Не тестувалиNT - Not tested
Для кваліфікованого фахівця є очевидними можливі варіанти винаходу.Possible variants of the invention are obvious to a skilled specialist.
Claims (14)
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US99795297A | 1997-12-24 | 1997-12-24 | |
| PCT/US1998/025208 WO1999033484A1 (en) | 1997-12-24 | 1998-12-07 | Production process for intravenous immune serum globulin and resultant product |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| UA64742C2 true UA64742C2 (en) | 2004-03-15 |
Family
ID=25544595
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| UA99084781A UA64742C2 (en) | 1997-12-24 | 1998-07-12 | Process for producing intravenously-administrable gamma globulin solution and product manufactured by this process |
Country Status (15)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0971727A4 (en) |
| JP (1) | JP2001514672A (en) |
| KR (1) | KR20000075562A (en) |
| CN (1) | CN1214042C (en) |
| AR (1) | AR018260A1 (en) |
| AU (1) | AU747893B2 (en) |
| BR (1) | BR9807598A (en) |
| CA (1) | CA2281938A1 (en) |
| CO (1) | CO4970799A1 (en) |
| IL (1) | IL131471A0 (en) |
| MY (1) | MY117328A (en) |
| RU (1) | RU2198668C2 (en) |
| TW (1) | TW546144B (en) |
| UA (1) | UA64742C2 (en) |
| WO (1) | WO1999033484A1 (en) |
Families Citing this family (13)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DK2270044T3 (en) | 1998-06-09 | 2015-01-26 | Csl Behring Ag | Liquid immunoglobulin G (IgG) product |
| EP1185290A4 (en) * | 1999-06-15 | 2005-08-31 | Alpha Therapeutic Corp | Manufacturing method for intravenous immune globulin and resultant product |
| JP2004525077A (en) * | 2000-09-28 | 2004-08-19 | リサーチ コーポレイション テクノロジーズ，インコーポレイテッド | Treatment of immune-mediated diseases by oral administration of immunoglobulin G enriched plasma fraction |
| ES2184594B1 (en) | 2001-01-17 | 2004-01-01 | Probitas Pharma Sa | PROCEDURE FOR THE PRODUCTION OF GAMMAGLOBULINA G HUMANA INACTIVADA OF VIRUS. |
| US6893639B2 (en) | 2001-10-19 | 2005-05-17 | Hemacare Corporation | Method for high yield purification of immune globulins from blood plasma and blood plasma intermediates |
| HUE027134T2 (en) | 2002-09-11 | 2016-10-28 | Chugai Pharmaceutical Co Ltd | Method of purifying protein |
| TWI391399B (en) | 2005-05-25 | 2013-04-01 | Hoffmann La Roche | Method for determining the concentration of a salt for eluting a polypeptide |
| KR100791502B1 (en) * | 2006-09-29 | 2008-01-03 | 한스바이오메드 주식회사 | Production methods of virus inactivated and cell-free body implant |
| US8980610B2 (en) * | 2008-11-20 | 2015-03-17 | Biogen Idec Ma Inc. | Arginine inactivation of viruses |
| IL212911A0 (en) * | 2011-05-16 | 2011-07-31 | Omrix Biopharmaceuticals Ltd | Immunoglobulin reduced in thrombogenic contaminants and preparation thereof |
| ES2381828B1 (en) * | 2012-03-20 | 2012-11-16 | Grifols, S.A. | PROCEDURE TO OBTAIN A COMPOSITION OF IgG THROUGH THERMAL TREATMENT |
| WO2015137530A1 (en) * | 2014-03-11 | 2015-09-17 | 주식회사 녹십자홀딩스 | Method for purifying immunoglobulin |
| CN107880116B (en) * | 2016-09-30 | 2023-02-03 | 盖立复集团公司 | Method for producing immunoglobulins |
Family Cites Families (15)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE2604759C2 (en) * | 1976-02-07 | 1983-06-01 | SCHURA Blutderivate GmbH & Co KG, 4150 Krefeld | Method of Obtaining IV Compatible Gamma Globulins |
| US4820805A (en) * | 1983-07-14 | 1989-04-11 | New York Blood Center, Inc. | Undenatured virus-free trialkyl phosphate treated biologically active protein derivatives |
| US4835257A (en) * | 1984-07-07 | 1989-05-30 | Armour Pharma Gmbh | Process for preparing gamma globulin suitable for intravenous administration using peg and a citrate buffer |
| FR2582515B1 (en) * | 1985-05-30 | 1988-11-04 | Merieux Inst | PROCESS FOR THE PREPARATION OF GAMMA-GOBULINS ADMINISTRABLE BY THE INTRAVENOUS ROUTE AND GAMMA-GLOBULINS OBTAINED |
| JPH0662436B2 (en) * | 1986-05-19 | 1994-08-17 | 株式会社ミドリ十字 | Method for producing intravenous immunoglobulin preparation |
| US4841023A (en) * | 1986-06-25 | 1989-06-20 | New York Blood Center, Inc. | Inactivation of viruses in labile protein-containing compositions using fatty acids |
| DE3825429C2 (en) * | 1988-07-27 | 1994-02-10 | Biotest Pharma Gmbh | Method for producing an intravenously administrable polyclonal immunoglobulin preparation with a high IgM content |
| JP2965069B2 (en) * | 1989-01-13 | 1999-10-18 | 吉富製薬株式会社 | Method for producing protein-containing composition |
| DE69011136T3 (en) * | 1989-01-13 | 2003-10-23 | Mitsubishi Pharma Corp | Process for the preparation of a protein-containing composition. |
| JP3297433B2 (en) * | 1989-06-15 | 2002-07-02 | ローヌ−プーラン ローラー インターナショナル （ホウルディングス） インコーポレイテッド | Method for inactivating viruses in pharmaceutical compositions contaminated with viruses |
| US5177194A (en) * | 1990-02-01 | 1993-01-05 | Baxter International, Inc. | Process for purifying immune serum globulins |
| JP3145696B2 (en) * | 1990-10-05 | 2001-03-12 | 日本ケミカルリサーチ株式会社 | Method for producing secretory immunoglobulin A preparation |
| US5110910A (en) * | 1991-03-25 | 1992-05-05 | Miles Inc. | Virucidal euglobulin precipitation |
| DE4431833C1 (en) * | 1994-09-07 | 1995-05-18 | Blutspendedienst Der Drk Lande | Prepn. of an anti-haemophilic factor from a cryo-precipitate |
| JP4003235B2 (en) * | 1994-09-30 | 2007-11-07 | 三菱ウェルファーマ株式会社 | Method for producing intravenous immunoglobulin preparation |
-
1998
- 1998-07-12 UA UA99084781A patent/UA64742C2/en unknown
- 1998-12-07 RU RU99120190/14A patent/RU2198668C2/en not_active IP Right Cessation
- 1998-12-07 IL IL13147198A patent/IL131471A0/en unknown
- 1998-12-07 WO PCT/US1998/025208 patent/WO1999033484A1/en not_active Application Discontinuation
- 1998-12-07 JP JP53498599A patent/JP2001514672A/en not_active Ceased
- 1998-12-07 AU AU17038/99A patent/AU747893B2/en not_active Ceased
- 1998-12-07 CN CNB988043769A patent/CN1214042C/en not_active Expired - Fee Related
- 1998-12-07 BR BR9807598-5A patent/BR9807598A/en not_active Application Discontinuation
- 1998-12-07 KR KR1019997007622A patent/KR20000075562A/en not_active Application Discontinuation
- 1998-12-07 EP EP98961803A patent/EP0971727A4/en not_active Withdrawn
- 1998-12-07 CA CA002281938A patent/CA2281938A1/en not_active Abandoned
- 1998-12-22 AR ARP980106616A patent/AR018260A1/en unknown
- 1998-12-23 TW TW087121571A patent/TW546144B/en not_active IP Right Cessation
- 1998-12-23 MY MYPI98005848A patent/MY117328A/en unknown
- 1998-12-23 CO CO98076460A patent/CO4970799A1/en unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| MY117328A (en) | 2004-06-30 |
| AU1703899A (en) | 1999-07-19 |
| AU747893B2 (en) | 2002-05-30 |
| CA2281938A1 (en) | 1999-07-08 |
| CN1252729A (en) | 2000-05-10 |
| KR20000075562A (en) | 2000-12-15 |
| CN1214042C (en) | 2005-08-10 |
| TW546144B (en) | 2003-08-11 |
| AR018260A1 (en) | 2001-11-14 |
| EP0971727A4 (en) | 2005-01-19 |
| JP2001514672A (en) | 2001-09-11 |
| WO1999033484A1 (en) | 1999-07-08 |
| CO4970799A1 (en) | 2000-11-07 |
| IL131471A0 (en) | 2001-01-28 |
| EP0971727A1 (en) | 2000-01-19 |
| RU2198668C2 (en) | 2003-02-20 |
| BR9807598A (en) | 2000-02-22 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US5177194A (en) | Process for purifying immune serum globulins | |
| EP0037078B1 (en) | Process for heat treatment of aqueous solution containing human blood coagulation factor xiii | |
| JP4445202B2 (en) | Method for preparing human immunoglobulin concentrates for therapeutic use | |
| UA64742C2 (en) | Process for producing intravenously-administrable gamma globulin solution and product manufactured by this process | |
| US20060177909A1 (en) | Preparation of immunoglobulin | |
| WO1999033486A1 (en) | Composition and method for dermal and transdermal administration of a cytokine | |
| US6162904A (en) | Manufacturing method for intraveneously administrable immune globulin and resultant product | |
| US6441144B1 (en) | Method for repairing dual virally inactivated immune globulin for intravenous administration | |
| AU756071B2 (en) | Manufacturing method for intravenous immune globulin and resultant product | |
| MXPA99007835A (en) | Production process for intravenous immune serum globulin and resultant product | |
| CZ293499A3 (en) | Process for preparing gamma globulin solution intended for intravenous application and the resulting product |