JP2001514672A

JP2001514672A - Method for producing gamma globulin for intravenous administration and its product

Info

Publication number: JP2001514672A
Application number: JP53498599A
Authority: JP
Inventors: アール．・マミジラジャ; アンドラニク・バグダサリアン; 和男武智; ゴルゴニオ・カナベラル
Original assignee: アルファーセラピューティックコーポレーション
Priority date: 1997-12-24
Filing date: 1998-12-07
Publication date: 2001-09-11
Also published as: WO1999033484A1; CN1252729A; KR20000075562A; EP0971727A1; IL131471A0; MY117328A; TW546144B; CA2281938A1; AU1703899A; UA64742C2; RU2198668C2; AR018260A1; AU747893B2; BR9807598A; CN1214042C; CO4970799A1; EP0971727A4

Abstract

(57)【要約】実質的にウイルスに汚染されていない静脈投与可能なガンマグロブリン溶液の生産方法であって、ウイルス不活化のために加熱処理し、粗製ガンマグロブリン溶液を分画し、そして精製されたガンマグロブリン溶液を溶媒−洗浄剤を用いて更にウイルス不活化する方法。 (57) [Summary] A method for producing an intravenously administrable gamma globulin solution substantially free of virus, comprising heat-treating for virus inactivation, fractionating a crude gamma globulin solution, and purifying the purified gamma globulin solution. A method for further inactivating a virus using a solvent-cleaning agent.

Description

【発明の詳細な説明】静脈投与用ガンマグロブリンの製造方法とその生産物技術分野本発明は、その主成分としてIgG（ガンマグロブリン）を含む静脈投与用免疫血清グロブリンの製造のための完全な商業的な多工程方法に関する。背景技術ヒト血漿のコーン画分に由来する出発原料から静脈投与用ガンマグロブリン溶液を製造するための、種々の方法が知られている。該コーン画分のあるものは、他より高単位のガンマグロブリンを含有する。ガンマグロブリン溶液の出発原料は、通常コーン画分II又はコーン画分II+IIIである。先行開発者は、種々の分離と滅菌技術を使用しているが、その改良は、常に、最終産物の純度をあげ、安全性を確保し、全体として回収率を上げることである。多くの商業化された方法は、ウイルス不活化のために溶剤−洗浄剤（dete rgent）工程、又はウイルス不活化のために加熱処理工程を採用している。今日まで、該技術は、有効で、高回収率の、ガンマグロブリン製造方法の工程中に、二つの異なるウイルス不活化法を含む、コーン画分IIペースト又はII＋IIIペーストから始まる、多工程方法の提供はされていなかった。亀山らによる米国特許第5,151,499号は、ウイルス不活化タンパク質組成物の製造法に関するものであるが、それはタンパク質組成物を、膜付きウイルスの不活化のために、溶剤−洗浄剤処理し、膜無しウイルスの不活化のために加熱処理することからなる。この‘499特許は、好ましくは、該溶剤−洗浄剤工程が先にかつプロテアーゼ阻害剤の存在下で行われ、次いで、加熱処理が行われることを教示する。該加熱処理が液体状態で行われる場合、いかなる加熱処理を施す前に、該タンパク質は、イオン交換カラムに吸着させ、該溶剤−洗浄剤から回収される。この液体状態での加熱処理は、糖、糖アルコール、アミノ酸のような安定剤の存在下で行うことが出来る。‘499特許は、免疫グロブリンを含む多くの対象となるタンパク質組成物を列挙しており、その具体的な実施例は、血液凝固第IX因子、トロンビン、フィブリノーゲン、及びフィブロネクチンである。しかし、分画中を通して、加熱処理工程で産生される変性タンパク質の除去は考慮されていない。静脈注射用ガンマグロブリン溶液の生産方法に関するある先行技術では、コーン画分II+IIIペーストから始まる多工程精製処理において、加熱安定化剤ソルビトールの存在下で施される液体状態での加熱処理の導入が開示されている。ヒラオらによる米国特許第4,845,199号では、コーン画分II+IIIについて、ポリエチレングリコール(以下"PEG"と記す)分画処理(８％Ｗ/Ｖ PEG次いで１２％Ｗ/Ｖ PEG)が施され、次いで、イオン交換クロマトグラフィ−（DEAE−セファデックス）及びヒト血液型抗体の除去処理が、タンパク質安定剤としてのソルビトール存在下での液体状態での加熱処理前に行われる。他方、ヒラオらによる米国特許第4,876,088号の実施例１には、コーン画分II+IIIペーストから得た静脈注射用ガンマグロブリン液状製剤は、該ペーストを水に懸濁させ、そのpHは５.５に調整されて遠心分離され、上清とともに３３％Ｗ/Ｖのソルビトール存在下でウイルス不活化のための加熱処理が行われ、次いで加熱により変性したタンパク質の除去のためにPEG(６％／１２％)分画処理がされ、そしてDEAE−セファデックスイオン交換クロマトグラフィーを含む他の精製工程を経たことが開示されている。発明の開示本発明の目的は、コーン画分から高度に精製されたガンマグロブリン溶液を産生するための、完全な商業的に使用可能な方法を提供するものである。本発明の他の目的は、大変純粋な静脈投与可能なガンマグロブリン溶液であって、熱に感受性のあるすべてのウイルスを含む膜付きウイルス及び膜無しウイルスのどちらも混入していないものを提供することである。本発明のさらなる目的は、第二段階のウイルス不活化処理前に、加熱滅菌中に産生されたいかなる変性タンパク質の除去も可能にさせる、商業的なガンマグロブリンの製造方法を提供することである。上記及び当業者には明白であるその他の目的は、アルコールコーン画分（それは部分精製されていても良いが、しかしガンマグロブリンを豊富に含有する）が、ウイルス不活化のため水溶液中で熱安定剤の該存在下で加熱処理され、そしてその後、まずPEG分画され、そして次に第２のウイルス不活化が溶剤、好ましくは溶剤−洗浄剤の存在下で、膜付きウイルスを崩壊するために施され、続いて該溶剤又は溶剤−洗浄剤の混合物から分離されるという本発明により提供される。本発明の好ましい具体例では、ソルビトールは加熱安定化剤であり、トリアルキルフォスフェートは溶剤である。本発明の他の好ましい具体例では、該加熱処理ウイルス不活化による変性産生物は、第２のウイルス不活化処理前にPEG分画により除去され、非常に純粋な加熱処理されたガンマグロブリンが提供される。本発明の他の好ましい具体例では、どのような微粒子も該溶剤−洗浄剤処理前に、除去される。さらに、本発明の他の好ましい具体例では、静脈投与に適した、加熱滅菌され、溶剤−洗浄剤滅菌されたガンマグロブリンが提供される。発明の詳細な説明免疫グロブリン含有画分が出発原料として用いられる。この画分は、特別に限定されるものでないが、ヒト血清由来、そして免疫グロブリンを含有するものである。このような免疫グロブリン含有画分の具体的な例示としては、コーンのエタノール分画によって得られる画分II+III及び画分II、並びにこれらと均等な免疫グロブリン含有画分のペーストが含まれる。他の出発原料として画分I+II +III及び画分II+IIIwがある。この出発原料は、ヒト血液型抗体、プラスミノーゲン、プラスミン、カリクレイン、プレカリクレインアクチベーター、IgM、IgA 、IgGポリマー(以下"凝集体"と記す)、その他の不純物を混入しているかもしれない。該好ましい出発原料は、コーン画分II又はコーン画分II+IIIである。コーン画分II+IIIペーストを用いる場合、画分II+IIIwを形成するために、最初に予備洗浄工程に付すことが推奨されるが、画分II+IIIwはその後、本発明の方法に使用される。"画分II+IIIw"は、リン酸二ナトリウム溶液で洗浄されたコーン画分II+III沈澱である。画分II+IIIwは、画分II+III沈澱を冷注射用水に、II+IIIペースト約１キログラムあたり約２０容量の水に懸濁して得られる。リン酸ナトリウム溶液は脂質、脂質タンパク質及びアルブミンを溶解できるよう最終濃度が約0.003Mリン酸ナトリウムになるように添加される。冷エタノールは最終濃度が約20％となるよう加えられる。該アルコールを添加している間、温度は、漸次−５±１℃に低下させ、pHは例えば、酢酸塩緩衝液や希釈した水酸化ナトリウムを用いて7.2±0.1 に維持または調整される。形成される該画分II＋ IIIw沈澱は、温度を−５±１℃に維持した状態で遠心分離及び／又はろ過により回収される。本発明の最初のウイルス不活化処理工程の前に、種々の予備的な精製及び／又は凝集物を減少させる工程を施すことができる。例えば、画分II+IIIwペーストが使用された場合、典型的にはこれは約20％のアルコール及び70％を超えるIgGを含有するが、それを３−１０容量、好ましくは３−５容量の、温度約０−５℃の冷水で、pHを、pH4.0の酢酸塩緩衝液または塩酸を用いて4.5−6.0、好ましくは5.0−5.5に調整したものに、懸濁することができる。該混合物は、すべてのガンマグロブリンが、溶液に溶け込むよう約２−１５時間撹拌される。その後、アルブミン及びアルファグロブリンのような不溶性タンパク質は、遠心分離及び／又はろ過により除去され得る。異なる出発コーン画分を採用した場合、該方法の該最初の工程又は複数の工程は、更に処理されるべき高IgG含量の画分を得るために、予備精製を行うのに望ましい工程が適切に選択され得る。例えば、コーン画分II（95％以上のIgG 含有）が、コーン画分IIIから分離されている場合、さらに処理されるべき画分I Iについて、最初の処理として、免疫グロブリンの凝集体を、免疫グロブリンのモノマー及びダイマーに分解するために、ウエムラらによる米国特許第4,371,52 0号に記載されている、酸性pH3.2−5.0、好ましくは3.8−4.2の処理をすることができる。この凝集体は抗補体活性（ＡＣＡ）を有することが知られているからである。他の代替法としては、コーン画分II+IIIを出発原料とすると、上記ウエムラらの特許の低ｐＨ処理が、上述した最初の精製工程に続き、該ウイルス不活化加熱処理工程の前の付加的工程として実施され得る。該加熱滅菌工程では、該免疫グロブリンタンパク質を水に溶解し、又は、上述した部分的に精製された画分II+IIIからろ過によって回収された水系混合物の状態である場合、それはそのまま使用可能であるが、そこへ糖、糖アルコール及び／又はアミノ酸が加熱安定剤として添加される。加熱安定剤は好ましくはシュークロース、マルトース、ソルビトール又はマンニトールであり、最も好ましくはソルビトールである。該糖又は糖アルコールは、該免疫グロブリン溶液に、粉末として又は最初に小容量の水に混和されて、その後添加され、最終濃度は約１０−５０Ｗ/Ｖ％であって飽和するまで添加される。このとき、該免疫グロブリン水溶液は、十分な水を含むので、１キログラムのペーストに対して約300グラムのタンパク質を含む典型的な画分II+IIIを出発原料にした場合、この溶液には、約１−６％の総タンパク質が含まれる。加熱安定剤の添加に次いで、混合物は約５０−７０℃で約１０−１００時間、好ましくは約６０℃で約１０−２０時間、熱感受性ウイルスを不活化するために加熱される。該加熱処理工程はウイルスを不活化するだけでなく、そのタンパク質変性作用によりコーン画分II+IIIに通常含有される、プレカリクレイン、プラスミン及びIgAのようないくつかの望ましくないタンパク質の量を優先的に減少させることもできる。加熱処理後、必要限度の冷水が加えられ、そしてタンパク質の濃度は約0.3−2.0％に維持される。溶液は０−２℃に冷却される。次に、PEG分画は加熱処理された溶液について行われる。PEG分画は良く知られた処理法で、該精製技術は、免疫グロブリンについて、所望するIgGモノマー及びダイマーを、IgG凝集体及び出発血漿タンパク質画分から自然に発生するその他の不純物から分離するために行われる。しかしながら、本発明の処理で、該PEG分画は、所望するIgGモノマー及びダイマーと加熱処理により産生された変性タンパク質生成物の分離もまた成し遂げる。これらの変性タンパク質生成物とは、変性したプレカリクレイン、プラスミノーゲン、IgA、IgM及び凝集体である。 PEG分画は、当該先行技術において文書化されているどのようなPEG分画処理法も用いることができる。一般に、２段階のPEG分画が行われる。最初の段階のPEG分画で、PEG濃度及びpHが選択され、所望するIgGモノマー及びダイマーが溶液中にとどまり、凝集体のような所望されないタンパク質は沈澱され、溶液から分離される。遠心分離及び／又はろ過に続いて、所望するIgGモノマー及びダイマーを沈澱させるため、PEG濃度は上げられ、該pHは調整される。例えば、第１段階のPEG分画は、pHを約５.０−７.５で、出発原料として画分II+IIIwペーストを使用した場合には、好ましくはpH約６.５−７.５で、出発原料として画分II+IIIペーストを使用した場合には、好ましくはpH約５.５− ６.０で行われ、PEG濃度は約４−８％の範囲で、出発原料として画分II+IIIwペーストを使用した場合には、好ましくは４−６％、又は出発原料として画分II+IIIペーストを使用した場合には、６−８％で行われる。約０−２℃の冷温を維持している間、第１段階のPEG分画は約１−８時間施されることができ、その後上述したように該沈澱が除去される。該ろ過液は、pHを約８.０−９.０に、好ましくは８ .５−８.９に調整され、追加のPEGは最終濃度が約１０−１５％、好ましくは約１２％となるように加えられる。精製された免疫グロブリンである該沈澱が形成され、ろ過及び／又は遠心分離により分離される。本発明に実際に使用可能なPEG分画手順の更なる詳細は、上述したヒラオらによる米国特許第4,876,088号及びヒラオらによる米国特許第4,845,199号中に見い出される。本発明の最終的に本質的な工程は、溶媒又は溶媒−洗浄剤混合物を使用する第２のウイルス不活化処理を行うことである。以下に述べるように、更なる精製処理、特にイオン交換樹脂の使用を含むものを、該溶媒−洗浄剤処理の前及び／又は後に行うことができる。特に好ましい処理は、陰イオン交換処理を、該溶媒−洗浄剤ウイルス不活化の前に、そして陽イオン交換処理を該溶媒−洗浄剤ウイルス不活化の後で、行うことである。この処理で、ヒト血漿に見い出される一定の所望されない(プレカリクレインアクチベーター、IgA、IgM及びアルブミンのような)タンパク物質が陰イオン交換体の使用により、該IgGから除去され、さらに該溶媒−洗浄剤処理において使用された残存試薬に付随するような物質（プレカリクレインアクチベーター、IgA、IgM、アルブミン及びPEG）もともに陽イオン交換処理を経て除去され得る。もし、該全工程中において、別途成し遂げられていないならば、該溶媒− 洗浄剤処理を受ける該溶液は、変性タンパク質を含むすべての粒子状物質を除去するための処理をすべきである。そのため、溶媒−界面活性剤を添加する前に、溶液を１ミクロン、又はより細かい膜を用いてろ過することが好適である。このことは、大きい粒子内部に存在し、それにより、溶媒−洗浄剤にさらされることを免れる可能性のあるウイルスもまた減少させる。今日、膜付きウイルスを不活化させるのに好ましい溶剤はトリアルキルフォスフェートである。本発明において使用する該トリアルキルフォスフェートは特に限定されないが、トリ(ｎ−ブチル)フォスフェート（以下"ＴＮＢＰ"と記す）が好ましい。他の使用可能なトリアルキルフォスフェートとして、トリ（ter −ブチル）フォスフェート、トリ(ｎ−ヘキシル）フォスフェート、トリ（２− エチルヘキシル）フォスフェートなどがある。異なる２又はそれ以上のトリアルキルフォスフェートの混合物を使用することができる。該トリアルキルフォスフェートは、総計0.01−10(ｗ/ｖ)％、好ましくは約0.1−３（ｗ/ｖ）％の間で使用される。該トリアルキルフォスフェートは洗浄剤（detergent）又は界面活性剤（s urfactant）の存在下又は非存在下で用いることができる。トリアルキルフォスフェートは洗浄剤と組み合わせて用いることが望ましい。該洗浄剤の機能は免疫グロブリン組成物中の該ウイルスのトリアルキルフォスフェートへの接触を増強させることである。該洗浄剤の例として、脂肪酸のポリオキシエチレン誘導体、無水ソルビトールの部分エステルであるポリソルベート８０(商標名：Tween 80，等)；及びポリソルベート２０(商標名：Tween 20，等);非イオン性オイルバス洗浄剤であるオキシエチル化アルキルフェノール（商標名：Triton X100,等）などが挙げられる。例には、双極性イオン化洗浄剤などのような他の界面活性剤や洗浄剤も含む。洗浄剤を使用する場合、臨界的な量を添加するのではなく、例えば比率として約0.001％−約10％の間、好ましくは約0.01％−３％の間で使用することができる。本発明において、該免疫グロブリン含有組成物の該トリアルキルフォスフェート処理は、約２０−３５℃、好ましくは２５−３０℃で、１時間以上、好ましくは約５−８時間、より好ましくは約６−７時間行われる。該トリアルキルフォスフェート処理の間、免疫グロブリンは約３−８％タンパク質水溶液として水媒体に含まれる。もし、該溶媒−洗浄剤処理の前になされなくとも、陰イオン交換処理は該溶媒−洗浄剤処理された免疫グロブリンについて行うことができる。好ましくは、少なくとも陽イオン交換処理は、該溶媒−洗浄剤処理した結果物に施される。イオン交換処理は、免疫グロブリンを水溶媒に溶解させ、通常pHを約５−８にし、所望の低イオン強度で最大のIgGが吸着されるように行われる。該タンパク質濃度は通常、約１−１５ｗ/ｖ％、より好ましくは、約３−１０ｗ/ｖ％である。イオン交換体は同じ水溶媒で平衡化させ、バッチまたは連続システムのどちらでも行うことができる。例えば、陰イオン交換バッチ方式処理は、免疫グロブリン溶液と陰イオン交換体を、前処理した陰イオン交換体（例えば、１グラムのDEAE−セファデックスＡ−50樹脂を0.4％塩化ナトリウム溶液中で湿重量２０グラムに膨張させる）のml当たり、約１０−１００mlの量の免疫グロブリン溶液として混和させ、混和液を約０−５℃で約０．５−５時間撹拌させ、そしてろ過させ、又は6,000 −8,000rpmで１０−３０分遠心分離させ、上清液が回収される。連続処理では、該陰イオン交換体のカラムに、mlの該イオン交換体に対して約１０−１００mlの免疫グロブリン溶液を通し、非吸着画分を回収することにより可能である。該陰イオン交換体は、例えば陰イオン交換基を不溶性担体に結合させたものを含むものが使用される。該イオン交換基では、ジエチルアミノエチル(DEAE) 、４級アミノエチル（QAE）基、その他が含まれ、及び不溶性担体では、アガロース、セルロース、デキストラン、ポリアクリルアミド、その他が含まれる。使用可能な陽イオン交換体は、カルボキシメチルセファデックス(CM−セファデックス)、CM−セルロース、SP−セファデックス、CM−セファロース、及びＳ−セファロースである。１mlの前処理された陽イオン交換体（例えば、１グラムのCM−セファデックスＣ−50樹脂を0.4％塩化ナトリウム溶液で湿重量約３０−３５グラムになるよう膨潤させる）は、0.5ml−5mlの免疫グロブリン溶液と混和させ、０−５℃で１−６時間、撹拌される。懸濁液は遠心分離され、又はろ過され、IgGが吸着された樹脂が回収される。また、連続した処理も採用可能である。上述した状態で該陽イオン交換体を使用したとき、該IgGは吸着され、その後続いて、例えば約1.4Nの塩化ナトリウム溶液でタンパク質を吸着した陽イオン交換樹脂を洗浄すると、IgGが溶出され得る。上記方法の工程に続いて、IgGは清澄化され、限外ろ過され、必要な限度まで濃縮される。もし所望するならば、Ｄ−ソルビトールのような安定剤を添加することができ、水溶液の混合物にIgGがpH５.４で約１００mg／ml、Ｄ−ソルビトールが約５０mg／ml含有されるように調製される。本溶液は、そして滅菌されたバクテリア貯留膜でろ過滅菌され、バイアルに充填される。以下に実施例によって本発明を説明するが、本発明はそれに限定されない。他の免疫グロブリンの精製処理が所望される場合には、ここに述べた方法に組み合わせて当てはめることができる。例えば、カリクレイン及びプレーカリクレインアクチベーターの程度を減少させるのに有効である、ベントナイトによる清澄化工程を、採用することができる。これについては、以下の実施例１で説明する。実施例実施例１：加熱処理及び溶剤−洗浄剤処理されたガンマグロブリン 685グラムの画分（Fr）II+IIIwペーストは、約11.9kgの冷水に懸濁された。酢酸ナトリウム３水和物溶液は、最終濃度が約0.04Mとなるように、IgGを選択的に溶解するために懸濁液に添加された。約15分間混和後、該懸濁液のpHは4.8 に、pH4.0の酢酸塩緩衝液によって調整された。冷アルコール（95％）は、最終濃度が17％となるように添加された。アルコールを添加する間、懸濁液の温度は通常約−６℃に下げられた。酸で洗浄された303グラムのセライト535が、セライトコーポレーションより入手可能であるが、フィルターエイドとして、懸濁液に最終濃度が約2.0％となるように添加された。１時間混和した後、該セライト及び画分IIIペーストには、望ましくないタンパク質として、プラスミン、プラスミノーゲン、IgA及びIgMなどが混入するが、フィルタープレスを利用したろ過により除去された。ろ過液は0.45μｍ及び0.2μｍの膜によって、さらに澄明化された。画分II+IIIwの澄明化液のpHは、4.0に、1.0Ｎの塩酸によって調整され、そして限外ろ過により約3.4リットル（最初の容量の５分の１）に濃縮された。冷水は、１度めの限外ろ過で除去された容量と同量が添加され、限外ろ過により再び最初の容量の５分の１量にまで濃縮された。この工程で、該溶液のタンパク質濃度は約２％であった。該溶液は約４％となるように、さらに濃縮され、そして冷水に対してダイアフィルトレーションすることによって、該溶液の伝導度が300μＳ／cmより下となるように調整して、加熱処理の間のタンパク質の凝集及び変性を避けるようにした。該溶液は、さらに約8.8％タンパク質濃度にまで濃縮された。Ｄ−ソルビトールは、最終濃度が約33％となるように該溶液に添加された。30分間混和した後、該ソルビトール含有溶液のpHは5.5に、0 .5Ｎの水酸化ナトリウムによって調整された。該溶液は、次に10時間60℃で加熱処理された。該加熱処理後、該加熱処理した溶液の容量の３倍量に等しい容量の冷水が加えられ、該希釈された溶液は0−2℃に冷却された。該溶液のpHは6.9に、0.25Ｎの水酸化ナトリウムによって調整され、50％ポリエチレングリコール（PEG）3350は、最終PEG濃度が４％となるように添加された。該溶液の塩化ナトリウム濃度は、約８mMに調整され、pH6.9で不純物及び凝集体が沈澱に含まれるようにした。そのようにして形成した沈澱は、ろ過により除去された。ろ過液のpHは4.8に、1.0Ｎの塩酸によって調整され、ベントナイトは、最終濃度が約0.25％となるように添加された。該ベントナイト懸濁液のpH は、約5.2となるよう再調整され、そして該懸濁液は、ベントナイトを除去するためにろ過された。該ろ過液のpHは8.5に、0.25Ｎの水酸化ナトリウムによって調整され、50％PEG 3350は、最終PEG濃度が12％となるよう添加された。形成された該沈澱（精製された免疫グロブリン）は、遠心分離により分離された。上記により得た、約175グラムの精製された免疫グロブリンペーストは、約790ｇの0.3％塩化ナトリウム溶液に懸濁された。該懸濁液のpHは5.5に調整され、そして該懸濁液は２.５時間混和された。62グラムの、予め平衡化されたDEAE−セファデックスＡ−50樹脂（pH5.5、0.3％塩化ナトリウムを用いて調整）は、該溶液に添加され、２時間混和された。該懸濁液は、そしてろ過され、該樹脂が除去された。塩化ナトリウム濃度を0.4％に調整した後、該ろ過液にトリ−ｎ−ブチルフォスフェート（TNBP）及びポリソルベート 80の混合液が添加され、溶液の最終濃度が0.3％TNBP及び1.0％ポリソルベート80 となるようにした。一晩インキュベーションした後、溶液のpHは5.8に調整され、そして860グラムの予め平衡化されたCM−セファデックスＣ−50（pH5.8、0.4 ％塩化ナトリウムを用いて調整）が添加された。２時間混和した後、該懸濁液はろ過された。CM−セファデックス樹脂が0.3％塩化ナトリウムで３回洗浄された後、吸着されたIgGは、1.4Ｎの塩化ナトリウムで溶出された。該溶出液は、清澄化され、ダイアフィルターされ、そして濃縮された。Ｄ−ソルビトールが添加され、そして最終濃度が約100mg／mLのIgG、50mg／mLのＤ−ソルビトールで、pH5. 4の組成の溶液になるように調製した。該溶液は、そして滅菌されたバクテリア貯留膜でろ過滅菌（除菌ろ過）され、バイヤルに充填された。本実施例の中間のベントナイト工程では、存在するカリクレイン及びプレカリクレインアクチベーターのような血圧降下酵素をさらに除去するのに有用である。実施例１より得られた産生物の試験結果ＮＤ＝検出されず実施例２：加熱処理及び溶剤−洗浄剤処理されたガンマグロブリン１kgの画分II+IIIペーストは、4.5kgの0−2℃の冷水に懸濁された。１時間混和した後、該懸濁液のpHは5.0に、１Ｎの塩酸によって調整された。pH5.0で３時間混和した後、該沈澱は遠心分離により除去された。Ｄ−ソルビトールは、最終濃度が33％となるように、該遠心分離物に添加され、１時間混和された。該懸濁液のpHは、5.5に調整され、そして10時間60℃で加熱処理された。加熱処理後、該加熱処理溶液の容量の３倍量に等しい冷水が加えられ、そして希釈された溶液は、０−２℃に冷却された。50％ポリエチレングリコール（PEG）3350溶液が、最終濃度が６％のPEGとなるように添加された。６％PEG懸濁液のpHは、0.5 Ｎの水酸化ナトリウムにより5.7に調整され、該懸濁液は２時間混和された。酸で洗浄されたセライト535が、最終濃度が1.5％となるように添加され、そして該懸濁液は、１時間混和された。セライトとともに該沈澱はろ過により除去された。ろ過液のpHが8.8に、0.5Ｎの水酸化ナトリウムによって調整され、そして50％ PEGの添加によって、PEG濃度は12％に調整された。該12％PEG懸濁液のpHは、8.8 に再調整され、該懸濁液は１時間混和され、ろ過されて精製された免疫グロブリンペーストが集められた。約251gの精製された免疫グロブリンペーストが回収された。上記により得られた251グラムの精製された免疫グロブリンペーストは、約1.4kgの0.3％塩化ナトリウム溶液中に懸濁された。１時間の混和後、懸濁液の pHは6.0に、５％酢酸によって調整された。該ペーストが完全に溶解された後、104グラムの予めpH6.0の0.3％塩化ナトリウムで平衡化されているＤＥＡＥ−セファデックスＡ−50樹脂を、該溶液に加え、そして２時間混和された。該樹脂は、ろ過によって除去された。ろ過液は、0.2μｍの膜によりさらに澄明化された。該澄明化された溶液の塩化ナトリウム濃度は、塩化ナトリウムの添加により0.4％まで上げられた。トリ−ｎ−ブチルフォスフェート（TNBP）及びポリソルベート80の混合液は、最終濃度が、0. 3％TNBP及び1.0％ポリソルベート80となるように該溶液に添加された。該溶液は、27℃で１時間インキュベートされ、４℃の冷却箱で一夜放置された。次の日、該溶液のpHは5.8に調整され、そしてpH5.8の0.4％塩化ナトリウムで予め平衡化されているCM−セファデックスＣ−50樹脂の1.8kgが、添加された。２時間混和した後、該樹脂はろ過により分離された。CM−セファデックス樹脂が0.3％塩化ナトリウムで３回洗浄された後、吸着されたIgGは、1.4Ｎの塩化ナトリウムで溶出された。該溶出液は、清澄化され、ダイアフィルトレーションされ、濃縮された。Ｄ−ソルビトールが添加され、そして最終濃度が約100mg／mLのIgG、50mg／ mLのＤ−ソルビトールの組成の溶液が産生された。該溶液は、パートＡ及びパートＢの２つのパートに分けられた。パートＡのpHは5.4に調整され、パートＢはp H4.3に調整された。該パートＡ及びパートＢの溶液は、そして各々滅菌されたバクテリア貯留膜でろ過滅菌（除菌ろ過）され、バイヤルに充填された。実施例２より得られた産生物の試験結果ＮＤ＝検出されず本発明は、当業者に自明の変更をも包含する。The present invention relates to a method for the production of gamma globulin for intravenous administration and its technical field. The present invention relates to a complete commercial method for the production of immune serum globulin for intravenous administration containing IgG (gamma globulin) as its main component. To a typical multi-step method. Background Art Various methods are known for producing gamma globulin solutions for intravenous administration from starting materials derived from the corn fraction of human plasma. Some of the corn fractions contain higher units of gamma globulin than others. The starting material for the gamma globulin solution is usually corn fraction II or corn fraction II + III. Prior developers have used a variety of separation and sterilization techniques, but the improvement is always to increase the purity of the end product, ensure safety, and increase overall recovery. Many commercial methods employ a solvent-detergent step for virus inactivation or a heat treatment step for virus inactivation. To date, the technology has provided an efficient, high-recovery, multi-step process starting with a corn fraction II paste or a II + III paste involving two different virus inactivation methods during the course of the gamma globulin production process. Had not been. U.S. Pat.No. 5,151,499 by Kameyama et al. Relates to a method for producing a virus inactivated protein composition, which comprises subjecting the protein composition to a solvent-detergent treatment and a membrane-free treatment to inactivate the virus with a membrane. Heat treatment for virus inactivation. The '499 patent teaches that preferably the solvent-detergent step is performed first and in the presence of a protease inhibitor, followed by a heat treatment. If the heat treatment is performed in a liquid state, the protein is adsorbed on an ion exchange column and recovered from the solvent-detergent prior to any heat treatment. The heat treatment in the liquid state can be performed in the presence of a stabilizer such as sugar, sugar alcohol, or amino acid. The '499 patent lists a number of protein compositions of interest, including immunoglobulins, of which specific examples are blood coagulation factor IX, thrombin, fibrinogen, and fibronectin. However, removal of denatured protein produced in the heat treatment step throughout the fractionation is not considered. One prior art method for the production of gamma globulin solutions for intravenous injection involves the introduction of a liquid heat treatment in the presence of the heat stabilizer sorbitol in a multi-step purification process starting from a cone fraction II + III paste. Is disclosed. In U.S. Pat. No. 4,845,199 to Hirao et al., Corn fraction II + III was subjected to polyethylene glycol (hereinafter "PEG") fractionation (8% W / V PEG followed by 12% W / V PEG), Next, ion exchange chromatography (DEAE-Sephadex) and a treatment for removing human blood group antibodies are performed before a heat treatment in a liquid state in the presence of sorbitol as a protein stabilizer. On the other hand, in Example 1 of U.S. Pat. No. 4,876,088 to Hirao et al., A gamma globulin liquid preparation for intravenous injection obtained from a corn fraction II + III paste was prepared by suspending the paste in water and adjusting the pH to 5. 5 and centrifuged. The supernatant was subjected to a heat treatment for virus inactivation in the presence of 33% W / V sorbitol, and then PEG (6% / (12%), and was subjected to other purification steps including DEAE-Sephadex ion exchange chromatography. DISCLOSURE OF THE INVENTION It is an object of the present invention to provide a complete commercially available method for producing highly purified gamma globulin solutions from corn fractions. It is another object of the present invention to provide a highly pure intravenously administrable gamma globulin solution which is free of both membrane- and virus-free viruses, including all heat-sensitive viruses. That is. It is a further object of the present invention to provide a commercial method for producing gamma globulin, which allows for the removal of any denatured proteins produced during heat sterilization prior to the second stage virus inactivation treatment. The above and other objectives that will be apparent to those skilled in the art are that the alcoholic corn fraction, which may be partially purified but is rich in gamma globulin, is thermostable in aqueous solution due to virus inactivation. Heat treatment in the presence of the agent, and then first PEG fractionation and then a second virus inactivation to disintegrate the membrane virus in the presence of a solvent, preferably a solvent-detergent. And subsequently separated from the solvent or solvent-detergent mixture. In a preferred embodiment of the present invention, sorbitol is a heat stabilizer and trialkyl phosphate is a solvent. In another preferred embodiment of the invention, the denatured product of the heat-treated virus inactivation is removed by PEG fractionation prior to the second virus inactivation to provide a very pure heat-treated gamma globulin. Is done. In another preferred embodiment of the present invention, any particulates are removed prior to the solvent-detergent treatment. Further, in another preferred embodiment of the present invention, there is provided a heat-sterilized, solvent-detergent-sterilized gamma globulin suitable for intravenous administration. DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION The immunoglobulin-containing fraction is used as a starting material. This fraction is derived from, but is not limited to, human serum and contains immunoglobulins. Specific examples of such immunoglobulin-containing fractions include Fractions II + III and Fraction II obtained by corn ethanol fractionation, and equivalent pastes of immunoglobulin-containing fractions. Other starting materials are fractions I + II + III and fractions II + IIIw. This starting material may be contaminated with human blood group antibodies, plasminogen, plasmin, kallikrein, prekallikrein activator, IgM, IgA, IgG polymer (hereinafter "aggregate"), and other impurities. . The preferred starting material is corn fraction II or corn fraction II + III. If a corn fraction II + III paste is used, it is recommended to first undergo a pre-wash step to form fraction II + IIIw, but fraction II + IIIw is then used in the method of the invention. Is done. "Fraction II + IIIw" is the corn fraction II + III precipitate washed with disodium phosphate solution. Fraction II + IIIw is obtained by suspending the fraction II + III precipitate in cold water for injection and about 20 volumes of water per kilogram of II + III paste. The sodium phosphate solution is added to a final concentration of about 0.003M sodium phosphate to dissolve lipids, lipid proteins and albumin. Cold ethanol is added to a final concentration of about 20%. During the addition of the alcohol, the temperature is gradually reduced to −5 ± 1 ° C. and the pH is maintained or adjusted to 7.2 ± 0.1 using, for example, an acetate buffer or diluted sodium hydroxide. The fraction II + IIIw precipitate formed is collected by centrifugation and / or filtration while maintaining the temperature at -5 ± 1 ° C. Various preliminary purification and / or aggregate reduction steps can be performed prior to the first virus inactivation step of the present invention. For example, if a Fraction II + IIIw paste was used, typically it would contain about 20% alcohol and more than 70% IgG, but would have 3-10 volumes, preferably 3-5 volumes The suspension can be suspended in cold water at a temperature of about 0-5 ° C., adjusted to pH 4.5-6.0, preferably 5.0-5.5, using acetate buffer or hydrochloric acid at pH 4.0. The mixture is stirred for about 2-15 hours so that all gamma globulin is dissolved in the solution. Thereafter, insoluble proteins such as albumin and alpha globulin can be removed by centrifugation and / or filtration. If a different starting corn fraction is employed, the first step or steps of the method may be suitably carried out in order to obtain a high IgG content fraction to be further processed, a step which is desirable to carry out a preliminary purification. Can be selected. For example, if corn fraction II (containing 95% or more IgG) has been separated from corn fraction III, the first treatment of fraction II to be further processed will involve immunoglobulin aggregates To break down into globulin monomers and dimers, treatment with an acidic pH of 3.2-5.0, preferably 3.8-4.2, as described in U.S. Pat. No. 4,371,520 to Uemura et al. This is because this aggregate is known to have anti-complement activity (ACA). As another alternative, if the corn fraction II + III is used as the starting material, the low pH treatment of the above Uemura et al. Patent follows the first purification step described above, followed by an additional step prior to the virus inactivation heat treatment step. Can be implemented as a strategic step. In the heat sterilization step, when the immunoglobulin protein is dissolved in water, or in a state of an aqueous mixture recovered by filtration from the partially purified fraction II + III described above, it can be used as it is. There, however, sugars, sugar alcohols and / or amino acids are added as heat stabilizers. The heat stabilizer is preferably sucrose, maltose, sorbitol or mannitol, most preferably sorbitol. The sugar or sugar alcohol is added to the immunoglobulin solution as a powder or initially mixed in a small volume of water and then added to a final concentration of about 10-50 W / V% until saturated. . At this time, since the aqueous immunoglobulin solution contains sufficient water, starting from a typical fraction II + III containing about 300 grams of protein per 1 kilogram of paste, this solution contains: About 1-6% of total protein is included. Following the addition of the heat stabilizer, the mixture is heated at about 50-70 ° C for about 10-100 hours, preferably at about 60 ° C for about 10-20 hours to inactivate the heat-sensitive virus. The heat treatment step not only inactivates the virus, but also favors the amount of some undesired proteins, such as prekallikrein, plasmin and IgA, normally contained in corn fractions II + III due to their protein denaturing action. Can also be reduced. After the heat treatment, the required amount of cold water is added and the protein concentration is maintained at about 0.3-2.0%. The solution is cooled to 0-2 <0> C. Next, PEG fractionation is performed on the heat-treated solution. PEG fractionation is a well-known process, and the purification technique is used to separate the desired IgG monomers and dimers from immunoglobulins from IgG aggregates and other naturally occurring impurities from the starting plasma protein fraction. Done. However, in the treatment of the present invention, the PEG fraction also accomplishes the separation of the desired IgG monomer and dimer and the denatured protein product produced by heat treatment. These denatured protein products are denatured prekallikrein, plasminogen, IgA, IgM and aggregates. The PEG fractionation can use any of the PEG fractionation procedures documented in the prior art. Generally, a two-stage PEG fractionation is performed. In the first stage PEG fractionation, the PEG concentration and pH are selected, the desired IgG monomers and dimers remain in solution, and unwanted proteins such as aggregates are precipitated and separated from solution. Following centrifugation and / or filtration, the PEG concentration is increased and the pH adjusted to precipitate the desired IgG monomer and dimer. For example, the first stage PEG fraction has a pH of about 5.0-7.5 and preferably a pH of about 6.5-7.5 when using fraction II + IIIw paste as starting material. When the fraction II + III paste is used as the starting material, the reaction is preferably carried out at a pH of about 5.5-6.0, the PEG concentration is in the range of about 4-8%, and the fraction is used as the starting material. If a II + IIIw paste is used, it is preferably carried out at 4-6% or, if a fraction II + III paste is used as starting material, at 6-8%. While maintaining the cold temperature of about 0-2 ° C, the first stage PEG fractionation can be applied for about 1-8 hours, after which the precipitate is removed as described above. The filtrate is adjusted to a pH of about 8.0-9.0, preferably 8.5-8.9, and the additional PEG will have a final concentration of about 10-15%, preferably about 12%. Added as follows. The precipitate, which is a purified immunoglobulin, is formed and separated by filtration and / or centrifugation. Further details of the PEG fractionation procedure that can actually be used in the present invention can be found in US Pat. No. 4,876,088 to Hirao et al. And US Pat. No. 4,845,199 to Hirao et al. The final essential step of the present invention is to carry out a second virus inactivation treatment using a solvent or a solvent-detergent mixture. As described below, further purification treatments, particularly those involving the use of ion exchange resins, can be performed before and / or after the solvent-detergent treatment. A particularly preferred treatment is to carry out an anion exchange treatment before the solvent-detergent virus inactivation and a cation exchange treatment after the solvent-detergent virus inactivation. In this treatment, certain undesired protein substances (such as prekallikrein activator, IgA, IgM and albumin) found in human plasma are removed from the IgG by use of an anion exchanger, and the solvent-wash Substances (prekallikrein activator, IgA, IgM, albumin and PEG) that may be associated with the residual reagents used in the agent treatment can also be removed via cation exchange treatment. If not separately accomplished during the entire process, the solution undergoing the solvent-detergent treatment should be treated to remove any particulate matter, including denatured proteins. Therefore, it is preferred to filter the solution using a 1 micron or finer membrane before adding the solvent-surfactant. This also reduces viruses that are present inside the large particles and may thus be able to escape exposure to solvent-detergents. Today, the preferred solvent for inactivating membrane-borne viruses is trialkyl phosphate. The trialkyl phosphate used in the present invention is not particularly limited, but tri (n-butyl) phosphate (hereinafter referred to as "TNBP") is preferable. Other usable trialkyl phosphates include tri (ter-butyl) phosphate, tri (n-hexyl) phosphate, tri (2-ethylhexyl) phosphate, and the like. Mixtures of two or more different trialkyl phosphates can be used. The trialkyl phosphate is used in a total of 0.01-10 (w / v)%, preferably between about 0.1-3 (w / v)%. The trialkyl phosphate can be used in the presence or absence of a detergent or a surfactant. The trialkyl phosphate is desirably used in combination with a detergent. The function of the detergent is to enhance the access of the virus to the trialkyl phosphate in the immunoglobulin composition. Examples of the detergent include polyoxyethylene derivatives of fatty acids, polysorbate 80 (trade name: Tween 80, etc.) which is a partial ester of anhydrous sorbitol; and polysorbate 20 (trade name: Tween 20, etc.); nonionic oil Oxyethylated alkylphenol (trade name: Triton X100, etc.) which is a bath detergent is exemplified. Examples also include other surfactants and detergents, such as zwitterionic detergents. If a detergent is used, it can be used, for example, in a ratio between about 0.001% and about 10%, preferably between about 0.01% and 3%, rather than adding a critical amount. In the present invention, the trialkyl phosphate treatment of the immunoglobulin-containing composition is performed at about 20-35 ° C., preferably 25-30 ° C., for 1 hour or more, preferably about 5-8 hours, more preferably about 6-8 hours. Performed for -7 hours. During the trialkyl phosphate treatment, the immunoglobulin is included in the aqueous medium as an approximately 3-8% aqueous protein solution. If not performed prior to the solvent-detergent treatment, anion exchange treatment can be performed on the solvent-detergent-treated immunoglobulin. Preferably, at least the cation exchange treatment is performed on the resulting product after the solvent-detergent treatment. The ion exchange treatment is performed by dissolving immunoglobulin in an aqueous solvent, usually adjusting the pH to about 5-8, and adsorbing the maximum IgG at a desired low ionic strength. The protein concentration is usually about 1-15% w / v, more preferably about 3-10% w / v. The ion exchanger is equilibrated with the same aqueous solvent and can be run in either a batch or continuous system. For example, in an anion exchange batch process, an immunoglobulin solution and an anion exchanger are wetted with a pretreated anion exchanger (eg, 1 gram of DEAE-Sephadex A-50 resin in a 0.4% sodium chloride solution). (Inflated to a weight of 20 grams) per ml of the immunoglobulin solution in an amount of about 10-100 ml, allowing the mixture to stir at about 0-5 ° C for about 0.5-5 hours and filtering, or After centrifugation at -8,000 rpm for 10-30 minutes, the supernatant is recovered. In the continuous treatment, it is possible to recover the non-adsorbed fraction by passing about 10-100 ml of an immunoglobulin solution per ml of the ion exchanger through the column of the anion exchanger. As the anion exchanger, those containing, for example, those in which an anion exchange group is bound to an insoluble carrier are used. The ion exchange groups include diethylaminoethyl (DEAE), quaternary aminoethyl (QAE) groups, and others, and the insoluble carriers include agarose, cellulose, dextran, polyacrylamide, and others. Cation exchangers that can be used are carboxymethyl sephadex (CM-Sephadex), CM-cellulose, SP-Sephadex, CM-Sepharose, and S-Sepharose. 1 ml of pretreated cation exchanger (eg, 1 gram of CM-Sephadex C-50 resin is swollen with 0.4% sodium chloride solution to a wet weight of about 30-35 grams) is 0.5 ml Mix with -5 ml of immunoglobulin solution and stir at 0-5 ° C for 1-6 hours. The suspension is centrifuged or filtered, and the resin on which the IgG is adsorbed is recovered. Also, continuous processing can be adopted. When the cation exchanger is used in the above-described state, the IgG is adsorbed, and subsequently, if the cation exchange resin adsorbing the protein is washed with, for example, about 1.4 N sodium chloride solution, the IgG can be eluted. . Following the steps of the above method, the IgG is clarified, ultrafiltered and concentrated to the required limit. If desired, a stabilizer such as D-sorbitol can be added and prepared so that the aqueous mixture contains about 100 mg / ml IgG at pH 5.4 and about 50 mg / ml D-sorbitol. Is done. The solution is then filter sterilized through a sterilized bacterial reservoir and filled into vials. Hereinafter, the present invention will be described with reference to examples, but the present invention is not limited thereto. If other immunoglobulin purification procedures are desired, they can be applied in combination with the methods described herein. For example, a clarification step with bentonite that is effective to reduce the extent of kallikrein and prekallikrein activators can be employed. This will be described in Example 1 below. EXAMPLES Example 1 Heat treated and solvent-detergent treated gamma globulin 685 grams of fraction (Fr) II + IIIw paste was suspended in about 11.9 kg of cold water. Sodium acetate trihydrate solution was added to the suspension to selectively dissolve the IgG to a final concentration of about 0.04M. After mixing for about 15 minutes, the pH of the suspension was adjusted to 4.8 with acetate buffer at pH 4.0. Cold alcohol (95%) was added to a final concentration of 17%. During the addition of the alcohol, the temperature of the suspension was usually reduced to about -6C. Acid washed 303 grams of Celite 535, available from Celite Corporation, was added as a filter aid to the suspension to a final concentration of about 2.0%. After mixing for 1 hour, the Celite and Fraction III pastes were mixed with undesirable proteins, such as plasmin, plasminogen, IgA and IgM, which were removed by filtration using a filter press. The filtrate was further clarified by 0.45 μm and 0.2 μm membranes. The pH of the clarified solution of fractions II + IIIw was adjusted to 4.0 with 1.0 N hydrochloric acid and concentrated by ultrafiltration to about 3.4 liters (1/5 of the original volume). Cold water was added in an amount equal to the volume removed in the first ultrafiltration and concentrated again by ultrafiltration to one fifth of the original volume. In this step, the protein concentration of the solution was about 2%. The solution was further concentrated to about 4% and diafiltered against cold water to adjust the conductivity of the solution to less than 300 μS / cm, Avoided aggregation and denaturation of the protein during. The solution was further concentrated to about 8.8% protein concentration. D-sorbitol was added to the solution to a final concentration of about 33%. After mixing for 30 minutes, the pH of the sorbitol-containing solution was adjusted to 5.5 with 0.5N sodium hydroxide. The solution was then heat treated at 60 ° C. for 10 hours. After the heat treatment, a volume of cold water equal to three times the volume of the heat-treated solution was added, and the diluted solution was cooled to 0-2 ° C. The pH of the solution was adjusted to 6.9 with 0.25N sodium hydroxide and 50% polyethylene glycol (PEG) 3350 was added to give a final PEG concentration of 4%. The sodium chloride concentration of the solution was adjusted to about 8 mM so that at pH 6.9 impurities and aggregates were included in the precipitate. The precipitate so formed was removed by filtration. The pH of the filtrate was adjusted to 4.8 with 1.0 N hydrochloric acid and bentonite was added to a final concentration of about 0.25%. The pH of the bentonite suspension was readjusted to about 5.2, and the suspension was filtered to remove bentonite. The pH of the filtrate was adjusted to 8.5 with 0.25N sodium hydroxide and 50% PEG 3350 was added to a final PEG concentration of 12%. The precipitate formed (purified immunoglobulin) was separated by centrifugation. About 175 grams of the purified immunoglobulin paste obtained above was suspended in about 790 g of a 0.3% sodium chloride solution. The pH of the suspension was adjusted to 5.5, and the suspension was mixed for 2.5 hours. 62 grams of pre-equilibrated DEAE-Sephadex A-50 resin (pH 5.5, adjusted with 0.3% sodium chloride) was added to the solution and mixed for 2 hours. The suspension was then filtered to remove the resin. After adjusting the sodium chloride concentration to 0.4%, a mixed solution of tri-n-butyl phosphate (TNBP) and polysorbate 80 is added to the filtrate, and the final concentration of the solution becomes 0.3% TNBP and 1.0% polysorbate 80. I did it. After overnight incubation, the pH of the solution was adjusted to 5.8 and 860 grams of pre-equilibrated CM-Sephadex C-50 (pH 5.8, adjusted with 0.4% sodium chloride) was added. After mixing for 2 hours, the suspension was filtered. After the CM-Sephadex resin was washed three times with 0.3% sodium chloride, the adsorbed IgG was eluted with 1.4N sodium chloride. The eluate was clarified, diafiltered and concentrated. D-sorbitol was added, and a final concentration of about 100 mg / mL IgG, 50 mg / mL D-sorbitol was prepared to a solution having a composition of pH 5.4. The solution was then filter sterilized (sterilized filtration) through a sterilized bacterial reservoir and filled into vials. The intermediate bentonite step of this example is useful for further removing existing antihypertensive enzymes such as kallikrein and prekallikrein activator. Test results of the product obtained from Example 1 ND = not detected Example 2: Heat treated and solvent-detergent treated gamma globulin 1 kg of fraction II + III paste was suspended in 4.5 kg of 0-2 ° C cold water. After mixing for 1 hour, the pH of the suspension was adjusted to 5.0 with 1N hydrochloric acid. After mixing for 3 hours at pH 5.0, the precipitate was removed by centrifugation. D-sorbitol was added to the centrifuge to a final concentration of 33% and mixed for 1 hour. The pH of the suspension was adjusted to 5.5 and heat treated at 60 ° C. for 10 hours. After the heat treatment, cold water equal to three times the volume of the heat treatment solution was added, and the diluted solution was cooled to 0-2 ° C. A 50% polyethylene glycol (PEG) 3350 solution was added to a final concentration of 6% PEG. The pH of the 6% PEG suspension was adjusted to 5.7 with 0.5N sodium hydroxide and the suspension was mixed for 2 hours. Acid washed Celite 535 was added to a final concentration of 1.5% and the suspension was mixed for 1 hour. The precipitate along with celite was removed by filtration. The pH of the filtrate was adjusted to 8.8 with 0.5N sodium hydroxide, and the PEG concentration was adjusted to 12% by the addition of 50% PEG. The pH of the 12% PEG suspension was readjusted to 8.8, the suspension was mixed for 1 hour, and the purified immunoglobulin paste was collected by filtration. About 251 g of purified immunoglobulin paste was recovered. 251 grams of the purified immunoglobulin paste obtained above was suspended in about 1.4 kg of a 0.3% sodium chloride solution. After mixing for 1 hour, the pH of the suspension was adjusted to 6.0 with 5% acetic acid. After the paste was completely dissolved, 104 grams of DEAE-Sephadex A-50 resin, previously equilibrated with 0.3% sodium chloride at pH 6.0, was added to the solution and mixed for 2 hours. The resin was removed by filtration. The filtrate was further clarified by a 0.2 μm membrane. The sodium chloride concentration of the clarified solution was raised to 0.4% by the addition of sodium chloride. A mixture of tri-n-butyl phosphate (TNBP) and polysorbate 80 was added to the solution to a final concentration of 0.3% TNBP and 1.0% polysorbate 80. The solution was incubated at 27 ° C for 1 hour and left overnight in a 4 ° C cooling box. The next day, the pH of the solution was adjusted to 5.8 and 1.8 kg of CM-Sephadex C-50 resin, which had been pre-equilibrated with 0.4% sodium chloride at pH 5.8, was added. After mixing for 2 hours, the resin was separated by filtration. After the CM-Sephadex resin was washed three times with 0.3% sodium chloride, the adsorbed IgG was eluted with 1.4N sodium chloride. The eluate was clarified, diafiltered and concentrated. D-sorbitol was added and a final concentration of about 100 mg / mL IgG, a solution of the composition of 50 mg / mL D-sorbitol was produced. The solution was divided into two parts, Part A and Part B. The pH of part A was adjusted to 5.4 and part B was adjusted to pH 4.3. The solutions of Part A and Part B were then filter sterilized (sterilized filtration) through sterile bacterial reservoirs and filled into vials. Test results of the product obtained from Example 2 ND = not detected The present invention encompasses modifications obvious to those skilled in the art.

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ) ，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＤ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＷ (72)発明者武智和男大阪府枚方市招提大谷２丁目25番１号 (72)発明者ゴルゴニオ・カナベラルアメリカ合衆国カリフォルニア 91789 ウォルナット 608 シルバーバリィートレイル────────────────────────────────────────────────── ─── Continuation of front page (81) Designated country EP (AT, BE, CH, CY, DE, DK, ES, FI, FR, GB, GR, IE, I T, LU, MC, NL, PT, SE), OA (BF, BJ , CF, CG, CI, CM, GA, GN, GW, ML, MR, NE, SN, TD, TG), AP (GH, GM, K E, LS, MW, SD, SZ, UG, ZW), EA (AM , AZ, BY, KG, KZ, MD, RU, TJ, TM) , AL, AM, AT, AU, AZ, BA, BB, BG, BR, BY, CA, CH, CN, CU, CZ, DE, D K, EE, ES, FI, GB, GD, GE, GH, GM , HR, HU, ID, IL, IN, IS, JP, KE, KG, KP, KR, KZ, LC, LK, LR, LS, L T, LU, LV, MD, MG, MK, MN, MW, MX , NO, NZ, PL, PT, RO, RU, SD, SE, SG, SI, SK, SL, TJ, TM, TR, TT, U A, UG, UZ, VN, YU, ZW (72) Inventor Kazuo Takechi 2-25-1, Shodai Otani, Hirakata City, Osaka Prefecture (72) Inventor Gorgonio Canaveral United States California 91789 Walnut 608 Silver Barry ー Trail

Claims

[Claims] 1. A method for producing a gamma globulin solution for intravenous administration comprising the following steps: (a) Time and temperature sufficient conditions for inactivation of heat-sensitive virus Heat-treating the crude gamma globulin solution at (b) subjecting the heat-treated gamma globulin solution to polyethylene glycol fractionation To obtain a purified gamma globulin solution; and (c) treating the purified gamma globulin solution with an organic solvent, Inactivating Ruth. 2. The crude gamma globulin solution was composed of corn fraction I + II + III, corn fraction II + II 2. The process according to claim 1, which is I, corn fraction II + IIIw, or corn fraction II. Method. 3. Before the heat treatment step (a), the crude gamma globulin solution is subjected to at least one step. The production method according to claim 1, wherein a purification treatment in the step is performed. 4. The heat treatment step (a) is performed at about 50 to 70 ° C. for about 10 to 100 hours. The manufacturing method according to claim 1. 5. 4. The method according to claim 4, wherein the heat treatment step (a) is performed at about 60 ° C. for about 10 hours. The manufacturing method described in the item. 6. The polyethylene glycol fraction is treated in at least two steps, In the first stage of the glycol fractionation, impurities are removed as precipitates and polyethylene Gamma globulin is recovered as a precipitate in the second stage of glycol fractionation 2. The method according to claim 1, wherein 7. The organic solvent used in step (c) is an alkyl phosphate. 2. The manufacturing method according to claim 1, wherein 8. The organic solvent used in the step (c) is an alkyl phosphate The method according to claim 6, wherein 9. The alkyl phosphate is tri-n-butyl phosphate. 9. The production method according to claim 8, wherein Ten. A process according to claim 1, wherein said organic solvent comprises a detergent. Method. 11． The method according to claim 9, wherein the organic solvent contains a detergent. 12． After step (a), the gamma globulin solution is subjected to cation exchange with an anion exchanger. 2. The production method according to claim 1, wherein the production process is performed by conversion. 13. The anion exchanger treatment is before the step (c), and the cation exchanger treatment is 13. The manufacturing method according to claim 12, which is after step (c). 14. Bentonite clarification after the first polyethylene glycol fractionation step 7. The production method according to claim 6, wherein the method is performed. 15． An intravenous gamma glob produced by the method of claim 1. Phosphorus solution. 16． An intravenous gamma globule produced by the method of claim 13. Brine solution.