JPS6229970A - 植物培養細胞 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 らの培養方法に関する。

町股座核術 チトメグザは古来から血止草と呼ばれ、この葉を傷口に
はれば血が１１−よるということで民間で用いられてい
る（牧野５「新１」本植物図鑑」４３３頁（北隆館発行
））。ヂドメクザは、多年生のｉ！；＋木であり、人家
や庭園、野原に自生しているが、費通高さｌ０ｃｍ以下
の小草本で、血液凝固成分を大量に採取できるほどの量
の確保は難しい。先に本発明者の一人（Ｊ、このチドメ
グサの血液凝固成分の１種が下記構造式を有する克−セ
ザミンであることを確認したが、これから明らかなよう
に！−セザミンは構造が複雑であると共に光学活性体で
あるので、化学合成的手段によっても大量生産（」困難
である　。

ΣＩ社外（１７！旨よ一すジニーかよ−−る」Ｍ便意一
本発明者らはざらにチドメグサ属また（Ｊツホクザ属に
属する植物が向神経性痙慴剤としての作用を有すること
を見出し、ざらにこれらの血液凝固作用および向神経性
痙幸を鎮静する作用は、ヂドメク゛ザ属、ツポクザ属に
属する植物の培養組織および培養細胞にも存在すること
を究明１．た。

植物組織培養（Ｊ、年ｊｌｉ位あるい（Ｊ月Ｑｅ、位で
生育オろ天然植物に比べ、（」るかに速い速度でらって
生育することから、短時間に目的とする成分を生産する
ことが可能であり、また天然栽培と（」異なり天候等の
影響を受（りす、採取にも多くの人手を煩わすことなく
、しかも工業的規模で計画的生産が可能であるという利
点を有する。

従来、チドメグサ属またはツポクザ属の植物組織から得
られる植物培養細胞または植物培養組織、これらの培養
方法およびこのような植物培養細胞または植物培養組織
に一１―記のごどき有用性のあることについては全く知
られていない。

罰斌怠奇ｙり友す−ろ太衿−の−ｆ段 ４一 本発明はヂトメグザ属またはツポクザ属に属する植物の
組織または細胞から誘導される植物培養細胞、並びにチ
ドメグサ属また（Ｊツボクサ属に属する植物の組織また
は細胞を培地で培養することを特徴とする培養植物細胞
の培養方法を提供する。

本発明の植物培養細胞（Ｊチドメグサ属圭た（Ｊツボク
サ属に属する植物を原ｌ］と１−で得ることができる。

これら植物の具体例と１．ではチドメグサ（Ｈｙｄｒｏ
ｃｏｔｙｌｅ　５ｉｂｔｈｏｒｐｉｏｉｄｅｓ）、ノチ
ドメ（Ｉ−Ｌｍａｒｉｔｉｍａ）、ミャマチドメグサ（
Ｔ１．ｊａｐｏｎｉｃａ）、オオヂドメ（Ｈ，ｒａｍｉ
ｆｌｏｒａ）　、オオバチドメグサ（Ｔ−１ｎｅｐａｌ
ｅｎｓｉｓ）、ツボクサ（Ｃｅｎｔｅｌｌａ　ａｓｉａ
Ｌｉｃａ）などが挙げられる。

本発明による培養細胞の原料はチトメグザ属またはツボ
クサ属に属する植物の全組織であり、分裂組織および節
組織のいずれであってもよいが、一般的には後者から誘
導される培養細胞また（Ｊ培養組織の増殖速度の方が速
い。

「分裂組織」とは植物体中の組織の中で細胞分裂をして
生長に関与する組織を意味し、好ましくは頂芽または側
芽である。

１面組織」と（１葉が０１着しているもしｌｌ：（”１
着していたところの茎であり、節間組織と対比される組
織を音吐する。

植物培養細胞とは、植物の組織または細胞から誘導され
、人工的な容器内で培養された植物細胞を意味する。植
物培養細胞には、組織培養カルス、分化組織、培養器官
などが含まれろ。組織培養カルス（カルスと略す）は、
植物ホルモンを含む固体培地」−で、または液体培地中
で増殖する無定形の未分化細胞のみから成る植物細胞塊
をいう。分化組織（」、分化した組織、例えば根、芽や
あろい（：ｌｌ茎葉などと未分化細胞からなる植物細胞
塊をいう。

例えば、不定芽（芽組織と未分化細胞から成る）、不定
根（根組織と未分化細胞から成る）、茎葉培養組織（茎
葉組織と未分化細胞から成る）を挙げることができる。

培養器官（Ｊ、分化した組織のろから成る植物細胞塊で
あり、例えば培養根、培養茎葉などを挙げることができ
る。

以下、ノヂドメを例にとり、その培養細胞を得る方法を
具体的に説明するが、上に例示した他のチドメグサ属ま
たはツボクサ属の植物についても同様に実施することが
出来る。

先ず、ノヂドメの葉柄または頂芽を含む茎を脱イオン水
で充分洗浄した後、７０％エタノールに５〜１０分間、
次いで１０％さらし粉溶液に５〜１０分間浸漬して表面
にイ」いている雑菌を殺菌した後、無菌蒸留水で残存殺
菌剤を洗浄除去する。

次に、殺菌した葉柄を適当な大きさに滅菌メスで切断し
て小片とし、または茎から滅菌メスと滅菌ピンセットを
用いて頂芽部分を切り出し、好ま１、＜はオーキシン作
用物質を含む無機合成培地１−に置床し、培養する。

培養に用いる植物組織または細胞は葉柄や頂芽だはでな
く、側芽、葉、茎、あるい（Ｊ根などの分裂組織および
面組織のいずれでもよく、またこれら組織を処理して得
られた細胞、例えばプロトプラストでもかまイっない。

さらに培養組織また（Ｊ培養細胞自体を原ネ１として用
いてもよい。

植物組織の培養のための培地としては、各種数−７＝ 知の無機合成寒天培地を基本とし、これにＷｉ量有機物
、炭素源、各種天然抽出物などを添加したものにオーキ
シン作用物質および／また（ｊザイトカイニン作用物質
を添加したものが用いられろ。

−１−記無機合成寒天培地の代表例としては、ホワイト
培地、ヒルデブランド培地、リンスマイヤー−スクーグ
培地、ムラシゲ−スクーグ培地等が挙げられる。その池
、これらの培地の組成を適宜に改良したものも使用する
ことができる。

」二記微ｍ有機物としてはヂアミン塩酸塩、ピリドギシ
ン塩酸塩、ニコチン酸等のビタミン、グリシン、アスパ
ラギン等のアミノ酸、イノソット、ソルビット等の６価
アルコールなどを挙げることができるが、」１記微量有
機物を培地に添加しなくても良好な生育を示す場合もあ
る。

」二記炭素卸としては、炭水化物（ショ糖、ブドウ糖、
麦芽糖など）、有機酸（酢酸など）、アルコール類（メ
タノール、グリセロールなど）などが使用可能であるが
、ショ糖、ブドウ糖などの糖類を用いる方が生育も早く
望まし可使用濃度は、１〜１０％ｗ／ｖ、好ましくは３
〜５％ｗ／ｖである。

」−記オーキシン作用物質として（Ｊ、２．４−ジクロ
ルフェノキシ酢酸（２，／Ｉ−Ｄ）、β−インドール酢
酸（ＪＡＡ）、α−ナフタレン酢酸ＣＮＡΔ）等を１０
−’ＭＭ以下好ましくはＩ　Ｏ−’　Ｍ以下、就中１０
−７〜Ｉ　Ｏ−５Ｍの濃度で単独また（Ｊ組合せて用い
る。ザイトカイニン作用物質としてはカイネチン、ベン
ジルアデニン等があり、に記聞様１０−’Ｍ以下、好ま
しくはＩ　Ｏ−’　Ｍ以下、就中１０−７〜１０−５の
濃度でｊｌｔ独または相ゐ合イつせて用いる。

−１−記各種天然抽出物として（Ｊ、カゼイン加水分解
物（０’、Ｏ］〜２％ｗ／ｖ）、ココナツツミルク（５
〜２０％ｗ／ｖ）、酵母エキス（０，０１〜２％ｗ／ｖ
）、麦芽エキス（０，０１〜２％ｗ／ｖ）等を単独また
は適当に組合せて用いることが生育を促進するのに好ま
しい。培養は好ましくは光照射下、特に照度１０００ル
ツクス以」二で１日１６時間以上の光照射下でおこなう
。

培養に用いる植物組織の種類やオーギシン作用物質とザ
イトカイニン物質との組み合わせ等により、得られる培
養細胞（Ｊ組織培養カルスであったり、分化組織であっ
たりオろ。通常、カルスが得られる条件が最も広いが、
組織として分裂組織、特に頂芽や側芽などを用いた場合
や、オーキシン作用物質としてイン）・−氷酢酸やナフ
タレン酢酸を用いた場合、光照射は、ＣＩに５０００ル
ックス以上１１６時間以」−で光照射しノこ場合などで
は分化組織、特に茎葉培養組織が得られる。

組織培養カルスからの不定芽の分化誘導は、前述のオー
キシン作用物質と、ザイトカイニン作用物質の配合量や
光照射条件に依存し、特に０〜１０−６Ｍのオーキシン
作用物質（例えば２．４−Ｄ）とＯ〜１０−’Ｍのザイ
トカイニン作用物質（例えばカイネチン）との組み合わ
ｌ−を使用し、５０００ルックス以上の光照射を１６時
間以」二にイつたって行うのが好ましい。

組織培養カルスから不定根の分化誘導は、前述のオーキ
シン作用物質とザイ）・カイニン作用物質のｉ配合量に
依存し、特に、０〜１０−６Ｍのオーキシン作用物質、
好ましくはインドール酪酸やナフタレン酢酸と０〜１０
−６Ｍのザイトカイニン作用物質との組み合わせを使用
して行うのか好ま）７い。

培養根の誘導は、通常前述の不定根を用いて、その成長
点を含む先端部を無菌的にメス剪で切り取り、寒天培地
に置床、あるいは液体培地に投入して培養することによ
り行う。不定根ばかりでなく、無菌的に種子から発根さ
且た根、あろい（Ｊ植物体にアグロバクテリウム・リゾ
ゲネースを接種し、人為的に発根させた根を用いること
もできる３゜培地は前述のオーキシン作用物質とザイト
カイニン作用物質を適宜配合して用いるが、特に０〜１
０−６Ｍのオーキシン作用物質、好ま１．＜はインドー
ル酢酸やナフタレン酢酸と０〜１０−６Ｍのザイトカイ
ニン作用物質との絹み合わせが望ましい。培養は２０〜
３０℃の暗所で、また液体培地を用いる場合は５０〜Ｉ
　５０　ｒｐｍの振盪機上で行うが、必ずしもこの範囲
にとられれない。

培養茎葉の誘導は、通常前述の茎葉培養組織を一１１＝ 無 用いてその茎葉を含む先端部）ｆ　％ｍ的にメス等で切
り取り、寒天培地に置床、あるいは液体培地に投入して
培養することにより行う。培地は前述のオーキシン作用
物質とザイトカイニン作用物質を適宜配合して用いるが
、特に０〜１０−６Ｍのオーキシン作用物質と０〜１０
−”Ｍのザイトカイニン作用物質との組み合わせが望ま
しい。培養は２０〜３０°Ｃの暗所で、また液体培地を
用いる場合、５０〜＋　５０　ｒｐｍの振盪機」二で行
う。光照射は５０００ルツクス以」二、１６時間以上に
わたって行なうのが好ましい。

なお、より工業的規模で培養細胞を得るには、−Ｉ−記
培養細胞を一般微生物の培養と同じ操作で静置培養法ま
たはｉｆ体培養法を採用して培養増殖させればよい。液
体培養法については、振とう式培養機」二で培養する振
とう培養法、あるいはガラス、金属等の密閉した槽に無
菌空気を通気して培養する方法などを目的に応じて適宜
選択する。

次に、以上のようにして培養増殖した培養細胞または組
織から血液凝固成分および該成分の１種である！−セザ
ミンを分離採取する方法について説明する。この方法は
例示的なものであって限定的に解すべきでない。

先ず、該培養細胞または組織を６０℃で２４時間あるい
は１１０℃で３時間乾燥させ、水分を除去する。次いで
、秤量後、ソックスレー抽出法、温浸法または冷浸法で
アセトン抽出を行う。この場合、アセトン以外の有機溶
媒（例えばメタノール、エタノール）も使用できる。得
られるアセトン抽出液からアセトンを留去させることに
よって血液凝固成分が濃縮された粗製物を得る。

得られた凝縮物中には！−セザミンが含有されることも
あり、あるいは殆んど含有されないこともある。その理
由は明らかでないが、原１：゛１となる個体差によると
ころが多いと思われる。いずれの場合も血液凝固作用を
有している。！−セザミンを工業的に確実に得るために
は！−セザミン生産能のあることの明らかな培養組織ま
たは培養細胞を原料とすればよい。

更に血液凝固成分の１種である！〜セザミンを（Ｑｊろ
に（」該アセトン抽出物を先ず水と酢酸エチルに分配す
る。この場合、酢酸エチル以外の有機溶媒（例えばクロ
ロホルム、二塩化メヂレン、ｎ−ヘキサジ、エチルエー
テル、ベンゼン、酢酸メチル、　ｎ−ペンタン、シクロ
ヘキザン、石／ｌＩＪエーテル）も使用できろ。次いで
、酢酸エチル層と水層とに分ｉ！ＩＩＵ　Ｌ、得られる
酢酸エチル層から酢酸エチルを留去し、酢酸エチル抽出
性を得る。この酢酸エチル抽出性をカラムクロマトグラ
フィーを用いて分離ずれば、［１的とオろ免−セザミン
の粗製物を得ることができる。この場合、カラムクロマ
）・グラフィー以外の精製法、例えば薄層クロマトグラ
フィー等を用いても目的とする！−セサミンを得ろこと
ができる。

このようにして得られる兇−セザミンは、１２２℃而後
の面点を有し、各種溶媒系、例えばクロ「１ホルム／酢
酸エチル−９／１やｎ−ヘギザン／酢酸エヂルー７／３
等により、シリカゲルＧ薄層りロマトグラフィーを行う
と、ノヂドメ原植物よりえた標品！−セザミンのスポッ
トと完全に一致する。また、赤外吸収スペクトルおよび
核磁気共鳴スペクＩ・ルも標品のスペクトルと一致する
。この結果、！−セザミンであると同定できる。

更−亀−準１− 火胤鯉ｔ ノヂドメの頂芽を含む長さ３ｃｍの茎を充分に水洗し、
次いで、７０％エタノールに５分間浸漬し、次に１０％
さらし粉溶液に１０分間浸漬して殺菌処理した後、無菌
蒸留水中に数回浸漬して洗浄し、充分に残存殺菌剤を除
去した。この茎を滅菌メスと滅菌ピンセットを用いて実
体顕微鏡下で長ざ０゜５〜１ｍｍ程度の頂芽を含む小片
とした。このようにして得られたノチドメの無菌小片を
下記組成を有する合成寒天培地に無菌的に置床した。培
地としては、ムラシゲ−スクーグの無機塩培地に、シヨ
糖３％ｖｔ／ｖ、ａ−ナフタレン酢酸１０−０Ｍ、ヂア
ミン塩酸塩０　、１　ｐｐｍ　、ピリドキシン塩酸塩０
゜５ｐｐｍ、＝クチジ酸０．５ｐｐｍ、グリンン２ｐ’
ｒ）ｍ％イノシトール１１００ｐｐを加えてｐｔｒ　６
　、０に調整し、寒天０８％ｗ／ｖを加え、常法通り殺
菌した培地を用いた。

このような培地に置床したノチドメの小片を培養温度２
５°Ｃ１５０００ルツクスの連続光照射下で培養した。

３週間日頃に小片から茎葉培養組織が生じた。１ケ月後
大きく生長した茎葉培養組織を分割し、誘導の際と同一
の組成を有する培地に無菌的に移植し、培養温度２５℃
で培養を続けた。

同様の操作を２週間毎に繰返Ｉ７、安定した茎葉培養組
織を得た。

斐煮彰」一 実施例Ｉにおいて増殖したノチドメの茎葉培養組織を固
形培地から分離し、６０℃で２４時間乾燥させ、乾燥物
ｌｏｇを得た。乳鉢で磨砕後、ソックスレー抽出器でア
セトンにより８時間の抽出を３回繰返した。得られるア
セトン抽出液を５０ｍ！程度に濃縮し、分液ロー　トに
移し、同容の水と１００Ｊの酢酸エチルを加え、振とう
後、酢酸エチル層を分離した。数回抽出操作を繰返し、
集ぬられた酢酸エチル抽出液を濃縮して酢酸エチルを留
去し、酢酸エチル抽出性を得た。次いで、ンー１６〜 リカゲルカラムクロマトグラフィーに上り分取ｌ２、児
−セザミン１５＋ｎｇを得た。

この結晶の赤外吸収スペクトルおよび核磁気」（鳴スペ
クトルは、標品！−セザミンのスペクトルと一致、また
クロロホルム／酢酸エチル−９／１あるいはｎ−ヘキサ
ジ／酢酸エチル−７／３の展開溶媒によるシリカゲルＧ
薄層りロマトグラフィーのスポットおよび発色が標品！
−セザミンと−・致することがら、この結晶をＬ−セザ
ミンと同定し）こ。

実施例２ ノヂドメに代えてチドメグサを用いる以外は実施例Ｉと
同様に操作して、チドメグサの茎葉培養組織を得、これ
から！−セザミンが採取できた。

′実施例３ ノヂドメに代えてオオバチドメグサを用いる以外は実施
例１と同様に操作して、オオバチドメグサの茎葉培養組
織を得た。この組織から！−セザミンが採取できた。

実施例４ ノチドメに代えてミャマチドメグサを用いろ以外は実施
例Ｉと同様に操作して、ミャマチドメグサの茎葉培養組
織を得た。これから！−セザミンが採取された。

夫廊烈手− ノチドメに代えてオオヂトメを用いろ以外は実施例１と
同様に操作して、オオチトメの茎葉■γつ養組織を得た
。これから！−セザミンが採取できた。

啜ｒｉｎ−（！ａｌ　Ｃ２〜 ノヂドメに代えてツボクサを用いる以外は実施例１と同
様に操作して、ツボクサの茎葉培養組織を得、これから
兇−セザミンが採取できた。

犬輿例−Ｌ ノヂトメの節組織を含む茎切片を充分に水洗し、次いで
７０％エタノールに５分間浸漬し、次に１０％さらし粉
溶液に１０分間浸漬して殺菌処理した後、無菌蒸留水中
に数回浸漬１．て洗浄し、充分に残存殺菌剤を除去Ｉ刃
こ。この茎切片を滅菌メスを用いて長さ０．５〜１ｍｍ
程度の節組織を含む小片とした。このようにして得られ
たノチドメの無菌小片を下記組成を何する合成寒天培地
に）１［〔閉面に置床した。培地として（Ｊ、ムランゲ
ースクーグの無機塩培地に、ンヨ糖３％ｗ／ｖ、カイネ
チン１０−５Ｍ、２．４−ジクロルフエノギシ酢酸Ｉｎ
−’Ｍ、チアミン塩酸塩０　、　Ｉ　ｐｐｍ　、ピリド
ギンン塩酸塩０．５ｐｐｍ、ニコチン酸０．５ｐｐｍ、
グリシン２ｐｐｍ　、イノシトールｌ　ＯＯｐｐｍを加
えてｐｔＴ　６　。

０に調整し、寒天０８％ｗ／ｖを加え、常法通り殺菌し
た培地を用いた。

このような培地に置床したノチドメの小片を培養温度２
５℃で培養した。１週間日頃に切［］ｋ辺から黄白色の
カルスが生じた。１ケ月後大きく生長したカルスを細か
く分割し、カルス誘導の際と同一の組成を有する培地に
無菌的に移１ｉ［ｉ　Ｌ、培養温度２５°Ｃで培養を続
けた。同様の操作を２〜３週間毎に繰返し、安定したカ
ルスを得た。

得られたカルスの２週間増殖比を以下の表−１に示す。

」１記培養カルスを固形培地から分離し、６０℃で２４
時間乾燥し、得られた乾燥カルスを乳鉢で＝１９− 磨砕後、ソックスレー抽出器でアセトンにより８時間抽
出した。この抽出操作を３回繰返した後アセトンを留去
し、エキス１５ｇを得た。このエキスは血液凝固作用を
有していた。

さらにこのエキス２００ｍｇを溶解したトリオレイン（
５ｍ克）を注入したバナナをアルコール中毒症を示すザ
ル（体重２．Ｎ（ｇ）に７日間食へさＨ−たところ、筋
肉の痙申硬直などのアルコール中毒症状全般に対して改
善効果が認められた。

失施彰−町 ノヂドメに代えてツボクサを用いる以外は実施例１と同
様に操作して、ツボクサのカルスを得た。

得られたカルスの２週間増殖比を以下の表−Ｉに示す。

このカルスのアセトン抽出エキスは血液凝固作用および
アルコール中毒作用の改善効果がみられた。

バー（１− 節組織に代えて部間組織を用いる以外は実施例７と同様
に操作してノチドメの部間組織由来のカルスを得た。

得られたカルスの２週間増殖比を以下の表−１に示す。

実施例１０ 節組織に代えて部間組織を用いる以外は実施例８と同様
に操作してツボクサの部間組織由来のカルスを得た。

得られたカルスの２週間増殖比を以下の表−１に示す。

表−１ 実施例１１ ノチドメの葉柄を充分に水洗し、次いで７０％エタノー
ルに５分間浸漬し、次に１０％さらし粉溶液に１０分間
浸漬して殺菌処理１．た後、無菌箱内で無菌蒸留水中に
数回浸漬して洗浄Ｌ７、充分に残存殺菌剤を除去Ｉ７た
。この葉柄部を滅菌メスを用いて長さ０．５〜Ｉｃｍ程
度の小片に切断ｌ刀こ。

このようにして得られるノヂドメの無菌小片を下記組成
を（ｆする合成寒天培地に無菌的に置床した。

培地としては、ムラノケースタ−りの無機塩培地に、シ
ョ糖３％ｗ／ｖ、カイネチンＩｎ−５Ｍ。

２、．１−−ジクロルフエノニ）−ノ酢酸１０−６Ｍ、
ヂアミン塩酸塩０　、　Ｉ　ｐｌ）ｍ　、ピリドギンン
塩酸塩Ｏ５ｐｐｍ、ニコチン酸０．５ｐｐｍ、グリシン
２ｐｐｍ。

イノ７トール］　００　ｐｐｍを加えてｐｌ−■６　、
０に調整し、寒天０８％ｗ／ｖを加え、常法通り殺菌し
た培地を用いた。

このような培地に置床１刀こノヂドメの小片を培養温度
２５°Ｃで培養した。１週間日頃に切口周辺から黄白色
のカルスが生じた。１ケ月後大きく生長したカルスを細
かく分割し、カルス誘導の際と同一の組成を有する培地
に無菌的に移植し、培養温度２５°Ｃで培養を続＋Ｊた
。同様の操作を４〜６週間毎に繰返し、安定したカルス
を得た。

次に、増殖したノヂドメのカルスを固形培地から分離し
、６０℃で２４時間乾燥させ、乾燥カルス３０ｇを得た
。乳鉢で磨砕後、ソックスレー抽出器でアセトン？こよ
り８時ｍ１の抽出を３回繰返した。得られたアセトン抽
出液を５０ｍ児程度に濃縮し、分液ロートに移し、同容
の水と１００ｍＪｌの酢酸エチルを加え、振とう後、酢
酸エチル層を分離した。数回抽出操作を繰返し、集めら
れた酢酸エチル抽出液を濃縮して酢酸エチルを留去し、
酢酸エチル抽出性を得た。次いで、シリカゲルカラムク
ロマトグラフィーにより分取し、！−セザミン１２ｍｇ
（乾燥カルス重量に対して０．０４％）を得た。

この結晶の赤外吸収スペクトルおよび核磁気共鳴スペク
トルは、標品克＝セザミンのスペクトルと一致、またク
ロロホルム／酢酸エチル−９７１あるいはｎ−ヘギザン
／酢酸エヂルー７／３の展開溶媒によるシリカゲルＧ薄
層クロマトグラフィーのスポットおよび発色が標品！−
セザミンと一致することから、この結晶を！−セザミン
と同定−２３へ し　ノこ。

実施例１２ 実施例Ｉ＋によって得られパノヂドメカルスを１１ラン
ゲースクーグの無機塩培地に、シヨ糖３％Ｗ／Ｖ、カイ
ネチン１０−’Ｍ、α−ナフタレン酢酸１０−’Ｍ、ヂ
アミン塩酸塩０　、１　ｐｐｍ　、ピリドギンン塩酸塩
０．５ｐｐｍ　、　二：Ｉチン酸０．５ｐｐｍ。

グリシン２ｐｐｍ、イノ７トール］００ｐｐｍを加え、
ｐＴ−１６、０に調整し、寒天０．８％ｗ／ｖを加え、
常法通り殺菌した培地に移植した。２５℃、７５００ル
ツクスの連続的光照射下で培養したところ、１週間後に
不定芽が分化１２だ。

得られた不定芽を実施例１１と同様の方法で処理［７，
１１１１１−セザミン（８ｍｇ、乾燥培養物重量に対し
０８０５％）を得た。

宋−ｊ鹿−例上−影ご」Ｊ ノヂドメの代わりにヂトメク゛ザ、オオバチドメグサ、
オオチドメ、ミャマヂドメまたはツボクサを用いる以外
（Ｊ実施例１２と同様に処理を行い不定芽を得た。

２４一 実施例１８ 実施例１１によって得られたノヂドメヵルスと実施例１
２のカイネチン、α−ナフタレン酢酸の代わりにインド
ール酢酸１０−’Ｍを入れた液体培地に移植し、２５°
Ｃで暗所で１２ｏｒｐｍで液体培養したところ、２週間
に不定根を得た。

実施例１９〜２３ ノチドメの代わりにチドメグサ、オオバチドメグサ、オ
オヂドメ、ミャマヂドメま）二（まツボ゛クザを用いる
以外は実施例１８と同様にして処理を行い不定根を得た
。

実施例２４ 実施例１８によって得られた不定根の先端部を無菌的に
切り取り、実施例１８と同様に培養し、伸長、分枝増殖
能を有する培養根を得た。

実施例２５〜２つ ノヂドメ不定根の代わりにチドメクザ、オオバチドメグ
サ、オオヂドメ、ミャマヂドメまたはツボクサの不定根
を用いる以外は実施例２４と同様に１．て処理を行い培
養根を得た。

四旅剋３０一 実施例１によって得られノこ茎葉培養組織の茎葉から成
る先端部を無菌的に切り取り、実施例Ｉと同様の液体培
地に移植し、Ｉ　２　Ｏｒｐｍ、２５°ｃ１５０００ル
ツクスの連続光照射下で培養し、伸長、分枝増殖能を何
する培養茎葉を？７た。

火檄鯉−亀」〜３５ ノチドメ茎葉培養組織の代わりにチドメグサ、オオバチ
ドメグサ、オオチドメ、ミャマヂドメまたはツボクサの
茎葉培養組織を用いる以外は実施例３０と同様にして処
理を行い培養茎葉を得た。

実施例３６ ノヂトメに代えてチドメグサを用いる以外は実施例１１
と同様に操作して、チドメグサの組織培養カルスを得、
これからρ−セザミンを採取した。

ｕ−１川 ノヂドメに代えてオオバチドメグサを用いる以外は実施
例１１と同様に操作して、オオバチドメグサの組織培養
カルスを得、これからρ−セザミンを採取した。

〜２７− ザミンの原木：１として極めて有用である。

火檄鰺影６− フチ１ζメに代えてミヤマチドメグサを用いる以外は実
施例１１と同様に操作して、ミャマチドメグサの組織培
養カルスを得、これからターセザミンを採取した。

実施例３９ ノチドメに代えてオオヂドメを用いる以外は実施例１１
と同様に操作して、オオヂドメの組織培養カルスを得、
これからＱ−セザミンを採取した。

実嵐桝±悲 ノヂドメに代えてツボクサを用いる以外は実施例１１と
同様に操作して、ツボクサの組織培養カルスを得、これ
からρ−セザミンを採取した。

発明の効果 本発明で得られる植物培養細胞はそれ自体血液凝固作用
や向神経性痙牽剤としての作用を有し、あるい（Ｊこれ
を適当な手段を用いて抽出することにより、血液凝固剤
や向神経性痙牽剤を得ることができる。また、天然の植
物体に比べ組織培養技術により人里かつ安定に供給でき
るため、！−セ＝２８−

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、チドメグサ属またはツボクサ属に属する植物の組織
   または細胞から誘導される植物培養細胞。 ２、チドメグサ属またはツボクサ属に属する植物がチド
   メグサ、ノチドメ、ミヤマチドメグサ、オオチドメ、オ
   オバチドメグサまたはツボクサである第１項記載の植物
   培養細胞。 ３、植物組織が頂芽または側芽である第１項記載の植物
   培養細胞。 ４、植物組織が節組織である第１項記載の植物培養細胞
   。 ５、培養細胞が組織培養カルスである第１項記載の植物
   培養細胞。 ６、培養細胞が分化組織である第１項記載の植物培養細
   胞。 ７、分化組織が不定芽である第６項記載の植物培養細胞
   。 ８、分化組織が不定根である第６項記載の植物培養細胞
   。 ９、分化組織が茎葉培養組織である第６項記載の植物培
   養細胞。 １０、培養細胞が培養器官である第１項記載の植物培養
   細胞。 １１、培養器官が培養根である第１０項記載の植物培養
   細胞。 １２、培養器官が培養茎葉である第１０項記載の植物培
   養細胞。 １３、チドメグサ属またはツボクサ属に属する植物の組
   織または細胞を培地で培養することを特徴とする植物培
   養細胞の培養方法。 １４、チドメグサ属またはツボクサ属に属する植物がチ
   ドメグサ、ノチドメ、ミヤマチドメグサ、オオチドメ、
   オオバチドメグサまたはツボクサである第１３項記載の
   培養方法。 １５、植物組織が頂芽または側芽である第１３項記載の
   培養方法。 １６、植物組織が節組織である第１３項記載の培養方法
   。 １７、培養細胞がカルスである第１３項記載の培養方法
   。 １８、培養細胞が茎葉培養組織である第１３項記載の培
   養方法。 １９、培地がオーキシン作用物質および／またはサイト
   カイニン作用物質を含有する培地である第１３項記載の
   培養方法。 ２０、オーキシン作用物質またはサイトカイニン作用物
   質の濃度が１０＾−＾５Ｍ以下である第１９項記載の培
   養方法。 ２１、培養を光照射下でおこなう第１３項記載の培養方
   法。 ２２、１０００ルックス以上の光を１日当１６時間以上
   照射する第２１項記載の培養方法。