KR930009510B1 - 배양 식물 세포 및 그의 제조방법 - Google Patents

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Description

배양 식물 세포 및 그의 제조방법
본 발명은 히드로코타일(Hydrocotyle) (피막이)속 및 센텔라(Centella) 속에 속하는 식물의 조직 또는 세포로부터 유도된 배양 식물 세포 및 그를 제조하는 방법, 및 그로부터 얻은 혈액 응고 성분과 정신 질환 치료제 및 그를 제조하는 방법에 관한 것이다.
혈액, 특히 혈청을 검사 분석함으로써 건강 및 질병의 상태와 관련된 풍부한 데이타를 얻을 수 있기 때문에 혈액 검사의 수가 증가하고 있다. 혈청을 효과적으로 분리하기 위한 심층 연구가 행해져 왔다. 혈액 응고 촉진제와 더불어 혈청 분리제(혈청과 혈액 고체 물질 사이의 비중을 갖는 분배-형성 중합체 물질)을 이용하여 효과적으로 분리하는 방법이 알려져 있다. 혈액 응고촉진제로는, 실리케이트 입자, 섬유질 물질, 칼슘 화합물 입자등을 예시할 수 있지만, 이들은 충분한 혈액-분리용량을 나타내지 않는다. 따라서 뛰어난 특성을 갖는 혈액 응고 촉진제가 요구된다.
인체의 출혈을 중단시키기 위해 사용되어 왔던 피막이(Water-pennywort, "New picture of Book of the Japaness Flora", Makino. 호꾸류껭사출판, 433페이지)가 혈액 응고 작용을 갖고 있음이 밝혀졌다. 피막이(히드로코타일 속)는 잔디밭이나 들판에 약 10cm미만의 길이로 자생하는 다년생 잡초로서, 다량의 유효성분을 얻는 것이 어렵다.
식물로부터 얻은 성분을 그의 기능에 기초하여, 혈액 응고 작용을 나타내는 혈액 응고 성분 및 정신 질환을 개선하는 정신 질환 성분으로 분류할 수 있다. 본 발명자들중 한 사람이 이미 혈액응고 성분내의 중요한 성분이 일반식으로 나타내지는 1-세사민(1-sesamin)임을 발견한 바 있다 :
Figure kpo00001
1-세사민은 복잡한 화학식을 갖는 광학 활성 물질이기 때문에 화학 합성법으로도 대량 생산하기 어렵다.
본 발명은 최근에 각광받고 있는 식물 조직 배양법을 받아들임으로써 혈액 응고 성분 및 정신질환 치료성분, 특히 향신경성 경축 억제 성분을 대량으로 얻는것을 가능하게 한다.
연 또는 개월 단위로 자라는 식물의 천연 성장과 비교해 볼 때, 식물 조직 배양은 매우 높은 속도로 식물을 자라게 할 수 있다. 따라서 목적 물질을 단기간내에 얻을 수 있다. 식물 조직 배양은 또한 날씨에 영향을 받나 않으며, 적은 양으로 필요한 성분을 모을 수 있기 때문에 산업 규모로 실시할 수 있다.
그러나 히드로코타일 속 및 센텔라 속의 배양 세포 또는 배양 조직은 아직 보고되어 있지 않다. 상술한 식물의 배양세포 또는 배양 조직으로부터 얻은 성분이 혈액 응고 작용을 나타내는 것이 발견되었다.
본 발명의 목적은 히드로코타일 속 또는 센텔라 속에 속하는 식물의 조직 또는 세포로부터 수득한 배양 식물 세포를 제공하는 것이다.
본 발명은 또한 배양 배지내에서 또는 위에서 히드로코타일 속 또는 센텔라 속에 속하는 식물의 조직 또는 세포를 배양함을 특징으로 하는 배양 식물 세포의 배양 방법을 제공하는 것이다.
본 발명은 또한 상술한 배양 식물 세포로부터 유도된 정신질환치료 성분을 함유하는 정신질환 치료제를 제공한다.
본 발명은 상술한 배양식물 세포로부터 수득한 혈액 응고 성분을 제공한다.
본 발명에서 사용된 식물은 히드로코타일 속 또는 센텔라속에 속하는 것이다. 이러한 식물의 예는 히드로코타일 시브토르피오이드(피막이풀), 에취.마리티마(선피막이), 에취.자포니카, 에취.라미플로라, 에취.네팔렌시스, 센텔라 아시아티카(병풀)등이다.
배양되는 부분은 히드로코타일 속 또는 센텔라 속에 속하는 식물의 모든 조직이다. 분열 조직 및 결절조직이 바람직한데, 그로부터 유도된 배양 세포 또는 배양조직의 생장속도가 높기 때문이다. "분열조직"은 식물의 조직에서 세포분열이 발생하여 식물의 성장에 기여하는 조직을 의미한다. 말단싹과 측생싹이 바람직하다. "결절조직"은 잎이 붙어 있거나 붙게될 병(柄)부위를 의미하는 것으로서, 결정 사이의 조직과는 잘 대조된다.
배양 식물 세포는 용기내에서 인위적으로 배양된 식물의 조직 또는 세포에서 유도된 식물 세포이다. 배양 식물 세포로는 유합조직, 분화된 배양조직, 배양된 기관 조직등이 포함된다. 유합 조직은 식물 호르몬을 함유하는 고체 배지 또는 식물 호르몬을 함유하는 액체배지에서 생장시킨 무형의 미분화된 세포만을 포함하는 배양 식물세포의 덩어리이다. 분화된 조직은 분화된 세포(예, 뿌리, 싹 또는 어린가지) 및 미분화된 세포를 갖는 조직으로 구성된 배양 식물 세포덩어리이다. 예를들면, 부정아(不定芽)(싹 조직과 미분화된 세포포함), 부정근(뿌리조직과 미분화된 세포포함) 및 배양 경엽체 조직(어린가지 조직과 미분화된 세포포함)이다. 배양기관은 분화된 조직만으로 구성된 배양 식물 세포 덩어리로서, 배양근, 배양된 어린가지 등이 포함된다.
세포를 배양하기 위하여 히드로코타일 마리티마 등을 사용할 수 있으며, 히드로코타일 속과 센텔라속에 속하는 다른 식물 또는 사용할 수 있다.
히드로코타일 마리티마의 엽병과 말단 싹을 포함하는 병을 이온 제기수로 세척하고, 70%에탄올에 5∼10분간 그리고 10%표백액에 5∼10분간 담그어 놓음으로써 표면의 각종 어린 싹을 제거한 후 멸균 증류수를 이용하여 남아 있는 멸균제를 제거한다. 멸균된 칼을 이용하여 멸균된 열병을 크기로 절단한다. 멸균된 칼과 핀셋을 이용하여 멸균된 병으로부터 말단 싹을 잘라낼 수 있다. 이 절단부위를, 바람직하게는 오옥신을 함유하는 무기 합성 배지에 놓는다.
상기 열병 또는 말단싹이외에도, 측생 싹, 잎, 병 또는 뿌리등의 분열조직 또는 결절 조직을 배양할 수 있다. 상술한 조직 또는 원할구 등의 세포를 처리하여 수득한 세포를 사용할 수도 있다. 이미 배양시킨 조직 또는 세포(이후에는 "배양조직" 또는 "배양세포"로 명명)을 사용한다.
식물 조직 배양용 배지는 미량의 유기물질, 탄소원 각종 천연 추출액과 더불어 오옥신 및/또는 시토키닌이 첨가된 공지의 무기 합성 한천 배지이다. 배지의 전형적인 예는 화이트 배지, 린스마이어-스꼬오그(Linsmaier-skoog), 무라시게-스꼬오그(Murashige-skoog) 배지 등이다. 이들 배지의 조성물을 바꿀 수도 있다.
미량의 유기물질는 티아민 히드로클로라이드, 피리독신 히드로클로라이드, 니코틴산 등의 비타민, 글리신, 아스파라긴 등의 아미노산 및 이노시틀, 소르비틀 등의 헵타히드로 알코올 등이 포함된다. 어떤 경우에는 이들 미량의 유기물질을 가하지 않은 배지에서도 좋은 생사장이 이루어질 수 있다.
탄소원으로는 수크로스, 글루코스, 말토스등의 탄화수소, 아세트산등의 유기산, 메탄올, 글리세롤 등의 알코올이 포함된다. 수크로스 및 글루코스가 식물 세포의 성장 속도를 빠르게 하기 때문에 바람직하다. 탄소원의 농도는 1∼10% w/v, 바람직하게는 3∼5% w/v이다.
오옥신의 예는 2,4-디클로로페녹시아세트산(2,4-D), β-인돌아세트산(IAA), α-나프탈렌아세트산(NAA) 및 이들의 혼합물이다. 오옥신의 양은 10-4M이하이며, 바람직하게는 10-4M이하, 보다 바람직하게는 10-7∼10-5M이다. 시로키닌에는 키넨틴, 벤딜아데닌 및 이들의 혼합물 등이 포함된다. 시로키닌의 양은 10-4M이하이고, 바람직하게는 10-5M이하, 보다 바람직하게는 10-7M∼10-5M이다.
천연 추출물의 예는 카제인 가수분해물(0.01∼2% w/v), 코코널우유(5∼20% w/v), 효모 추출물(0.01∼2% w/v), 맥아 추출물(0.01∼2% w/v) 및 이의 혼합물 등이다. 빛에 노출시킴으로써, 바람직하게는 1일에 16시간 이상, 1,000lx 이상의 빛을 조임으로써 배양시킬 수 있다.
생성된 배양 세포는 배양된 식물조직의 부위 및 오옥신과 시토키닌의 배합에 따라 배양 유합조직 또는 분화된 조직이 될 수 있다. 유합조직은 많은 조건하에서 얻을 수 있다. 조직이 분열조직, 특히 말단 싹 또는 측생 싹이고, 오옥신이 인들아세트산 또는 나프탈렌아세트산이거나, 5,000lx의 빛아래에서 16시간이상 배양을 실시한 경우에는 분화된 조직, 특히 배양 경엽체 조직을 얻을 수 있다.
유합 조직이 부정아로 분화되는 정도는 오옥신과 시토키닌의 양 또는 빛에 노출되는 조건에 따라 결정된다. 바람직한 조건은, 오옥신(예, 2,4-D)의 양이 0∼10-6M, 시토키닌(예, 키네틴)의 양이 0∼10-6이고, 5,000lx의 빛에 16시간 이상 노출시키는 것이다.
부정근은 오옥신과 시토키닌의 양제 따라 유합 조직으로 부터 형성된다. 바람직한 양은, 0∼10-6M의 오옥신(전형적으로 인들 아세트산 또는 나프탈렌아세트산) 및 0∼16-6M의 시토키닌의 배합이다.
배양근은 일반적으로 칼을 이용하여 부정근의 생장점을 포함하는 말단부분을 잘라내어 한천 배지위 또는 액체 배지내에 집어넣어 배양함으로써 얻을 수 있다. 부정근 이외에도, 멸균 상태에서 씨앗으로부터 발육한 뿌리 또는 식물에 아그로박테리움리소게나제(Agrobacterium lisogenase)를 접종시켜 인위적으로 발육시킨 뿌리를 사용할 수 있다. 배지로는, 오옥신, 바람직하게는 인들 아세트산 또는 나프탈렌산올 0∼10-6의 양만큼 가하고, 시토기닌을 0∼10-6의 양만큼 가한 것이 바람직하다. 고체배지의 경우에는 20∼30℃의 암소에서 배양하거나, 액체배지의 경우에는 50∼150rpm의 진탕기내에서 배양한다.
배양된 어린 가지는 일반적으로 배양근과 관련하여 상술한 배양 어린가지 조직으로부터 얻을 수 있다.
배양 세포는 일반적인 미생물을 배양하는 것과 비슷한 방법으로 배양 및 생장시킴으로써 공업적으로 수득할 수 있다. 액체 배양은 진탕기내에서의 진탕 배양법 및 유리, 금속 등으로 만들어진 용기에 멸균된 공기를 유입시키는 버블링(bubbluing)배양법으로 분류된다.
본 발명의 혈액 응고 성분은 추출 또는 가열 같은 공지의 분리법에 의해, 상술한 배양 세포로부터 얻을 수 있다. 추출에 의해 수득한 혈액 응고 성분이 높은 혈액응고 특성때문에 바람직하다. 추출법은 히드로코타일 마리티마의 배양 세포를 이용하여 설명할 수 있다.
상기에서 수득한 배양 세포를 동결 건조시키거나 또는 60℃에서 24시간동안 또는 110℃에서 3시간동안 공기 건조시킴으로써 탈수시킨다. 건조된 배양 세포를 숙슬레기기, 분해법 또는 침연법을 이용하여 아세톤으로 추출한다. 아세톤 대신에 메탄올, 에탄올 등의 다른 유기 용매를 사용할 수 있다. 추출물로부터 아세톤을 제거함으로써 혈액응고 작용 및 지혈 작용을 갖는 농축된 아세톤 추출물을 수득한다. 혈액 응고 성분은 1-세사민을 함유한다. 1-세사민은 생성된 아세톤 추출액으로부터 얻을 수 있다. 1-세사민을 얻기 위하여, 농축된 아세톤 추출물에 물과 에틸 아세테이트를 가하여 수층과 유기층으로 분리되도록 한다. 에틸 아세테이트 대신에, 클로로포름, 메틸렌 클로라이드, n-헥산, 에틸에테르, 벤젠, 메틸아세테이트, n-펜탄, 시클로헥산, 석유에테르 등을 사용할 수 있다. 분리된 유기층을 증류하여 농축시킨다. 농축된 추출물을 컬럼 크로마토그래피하여 조1-세사민을 수득한다. 컬럼 크로마토그래피 이외에도, 박막 크로마토그래피 등의 다른 분리법을 사용할 수 있다.
수득한 1-세사민은 실리카겔 G막 크로마토그래피, IR 스펙트럼 및 NMR 스펙트럼으로 확인할 수 있다.
혈액 응고 성분은 혈청 검사를 위하여 단기간내에 혈액으로부터 혈청을 분리하고자 할때, 혈액 응고 검사의 결정시간을 단축시키기 위하여, 생체로부터의 출혈을 막기 위하여 사용할 수 있다.
본 발명의 혈액 응고 성분을 분말 또는 수성 현탁액의 형태로 시험대상, 예를들어 혈액에 가하거나 또는 혈청 분리용 용기의 벽에 용액 또는 분산액의 코팅시킬 수 있다. 혈액 응고를 위한 양은 제한되어 있지 않지만, 1ml의 혈액당 0.01∼500mg의 추출물이면 충분히 응고시킬 수 있다. 특히, 본 발명의 혈액 응고 성분으로 코팅된 혈청 분리용 용기는 공지의 것과 비교해볼때 훨씬 빠르게 혈액을 침전시킬 수 있다. 따라서, 이러한 용기는 빠른 혈액 검사에 유용하다.
본 발명의 혈액 응고 성분은 혈액 응고 작용을 증가시키기 위하여 실리카, 고령토, 유리 등의 미세한 분말 및 섬유 물질등의 공지의 혈액응고 촉진제와 함께 사용될 수 있다.
본 발명의 식물 추출액 또는 배양 식물 조직이 정신질환 치료 기능을 갖는다는 것도 알려져 있다. 덧붙여, 식물의 추출액도 동일한 기능을 갖는다. 추출은 혈액 응고 성분의 추출과 동일하게 실시할 수 있다. 수득한 정신질환 치료 성분은 있는 그대로, 또는 건조 분말의 형태로 사용될 수 있다. 정신질환치료 성분은 공지의 첨가제와 혼합할 수 있다. 정신질환 개선제의 제재형태는 제한되어 있어서, 분말, 정제, 액체 등이다.
정신질환 치료제의 복량은 제한되어 있지 않으며, 목적 또는 질환 상태에 따라 다양하다. 상술한 아세톤 추출물의 경우에, 복량은 1∼1000mg/1일/체중 1kg이다.
본 발명의 정신질환 치료제는 정신불안, 우울증, 니토틴 중독증, 알콜중독, 마약중독, 각성제 중독등의 많은 정신질환을 개선한다.
본 발명은 하기의 비제한적인 실시예에 의해 설명된다.
[실시예 1]
말단 싹이 함유된 히드로코타일 마리티마의 병(줄기) 3cm를 물로 세척하고 70% 에탄올내에 5분간 담근후, 10% 표백분말내에 10분간 담가서 멸균시킨다. 줄기를 멸균된 증류수에 여러번 담가서 잔재 멸균제를 제거한다. 입체 현미경하에 멸균된 칼 및 멸균된 핀셋을 사용하여 멸균된 병을 말단싹이 함유된 길이 0.5∼1mm의 조각으로 자른다. 수득된 히드로코타일 마리티마의 멸균된 조각을 하기 조성을 갖는 합성 평면 한천에 놓는다. 배양 배지는 무라시게-스꼬오그(Murashige-skoog)의 무기염 배양 배지에 3% w/v수크로스, 10-6M α-나프탈렌아세트산, 0.1ppm 티아민 히드로클로라이드 0.5ppm 피리독신 히드로클로라이드, 0.5ppm 니코틴산, 2ppm 글리신 및 100ppm 이노시틀을 가해서 pH6.0으로 맞추고, 0.8% w/v의 한천을 가하고, 통상적인 방법으로 멸균시켜 만든다.
배양 배지 위의 조각을 5,000lx 조명하에 25℃에서 배양한다. 3주후, 배양된 어린 가지 조직이 조각에서 발생된다. 1달후, 배양된 어린 가지 조직을 2분획으로 나누어서 동일한 조성물으 갖는 배양배지로 전이시켜 25℃에서 계속 배양한다. 2주 간격으로 동일한 처리를 반복하여 안정한 배양 어린가지 조직을 수득한다.
[참고예 1]
실시예 1에서 제조된 히드로코타일 마리티마의 어린 가지 배양조직을 고체 배양 배지에서 취하이 60℃에서 24시간 동안 건조시켜 건조된 조직 10g을 수득한다. 건조된 조직을 모르타르로 분쇄하고 숙슬레(Soxhlet) 추출기를 사용하여 아세톤으로 화합물을 8시간 동안 3회 추출한다. 아세톤 추출물을 약 50ml로 농축하여 분별 깔때기에충전시키고 50ml의 몰 및 100ml의 에틸 아세테이트를 가한후, 흔들어서 에틸 아세테이트 층을 분리한다. 동일한 조작을 수회 반복하여 수득한 에틸 아세테이트 용액을 농축하고 증류하여 에틸 아세테이트 층을 분리한다. 동일한 조작을 수회 반복하여 수득한 에틸 아세테이트 용액을 농축하고 증류하여 에틸 아세테이트 추출물을 수득한다. 추출물을 실리카겔 컬럼크로마토그래피하여 15mg의 1-세사민을 수득한다.
생성된 혼합물을 IR 및 NMR 스펙트럼으로 분석하여 확인된 1-세사민의 스펙트럼과 동일함을 알았다. 클로로포름/에틸 아세테이트(9/1)의 혼합물 또는 n-헥산/에틸 아세테이트(7/3)의 혼합물을 사용한 실리카 1G 박막 크로마토그래피의 점 및 전개색상이 확인된 1-세사민의 것과 동일하다. 생성물은 1-세사민과 동일하다.
[실시예 2]
히드로코타일 마리티마 대신 히드로코타일 시브토르피오이드(Hydrocotyle sibthorpioides)를 사용한 것을 제외하고는 실시예 1의 방법으로 처리하여 히드로코타일 시브토르피오이드의 어린 가지 배양조직을 수득한다. 이 어린 가지 배양 조직에서 1-세사민을 수득한다.
[실시예 3]
히드로코타일 마리티마 대신 히드로코타일 네팔렌시스(Hydrocotyle nepalens
is)를 사용한 것을 제외하고는 실시예 1의 방법으로 배양하여 히드로코타일 네팔렌시스의 어린 가지 배양 조직을 수득한다. 이 어린 가지 배양 조직에서도 역시 1-세사민을 수득한다.
[실시예 4]
히드로코타일 마리티마 대신 히드로코타일 자포니카(Hydrocotyle japonica)를 사용한 것을 제외하고는 실시예 1의 방법으로 배양하여 히드로코타일 자포니카의 어린 가지 배양조직을 수득한다. 이 어린 가지 배양 조직에서도 역시 1-세사민을 수득한다.
[실시예 5]
히드로코타일 마리티마 대신 히드로코타일 라미플로라(Hydrocotyle ramiflor
a)를 사용한 것을 제외하고는 실시예 1의 방법으로 배양하여 히드로코타일 라미플로라의 어린 가지 배양조직을 수득한다. 경엽체 배양 조직에서 1-세사민을 수득한다.
[실시예 6]
히드로코타일 마리티마 대신 센텔라 아시아카(Centella asiatica)를 사용한 것을 제외하고는 실시예 1의 방법으로 배양하여 센텔라 아시아티카의 어린 가지 배양 조직을 수득한다. 경엽체 배양 조직에서 1-세사민을 수득한다.
[실시예 7]
결절 조직이 함유된 히드로코타일 마리티마의 병을 물로 세척하고 70% 에탄올내에 5분간 담근후, 10% 표백분말내에 10분간 담가서 멸균시킨다. 병을 멸균된 증류수에 여러번 담가서 멸균시킨다. 병을 멸균된 증류수에 여러번 담가서 잔재 멸균제를 제거한다. 멸균된 칼을 사용하여 멸균된 병을 결절 조직이 함유된 길이 0.5∼1mm의 조각으로 자른다. 수득된 히드로코타일 마리티마의 멸균된 조각을 하기 조성을 갖는 합성 평면 한천에 놓는다. 배양배지는 무라시게-스꼬오그의 무기염 배양배지에 3% w/v 수크로스, 10-5M 키네틴, 10-5M, 2,4-디클로로페녹시아세트산, 0.1ppm 티아민 히드로클로라이드, 0.5ppm 피리독신 히드로클라이드, 0.5ppm 니코틴산, 2ppm 글리신 및 100ppm 이노시틀을 가해서 pH6.0으로 맞추고, 0.8% w/v 한천을 가하고, 통상적인 방법으로 멸균시켜 만든다.
배양 배지 위의 조각을 25℃의 배양온도에서 배양한다. 약 1주후, 담황색 유합조직이 절단부분 근처에서 발생된다. 1달후, 성숙된 유합조직을 2분획으로 나누어서 동일한 조성을 갖는 배양 배지로 전이시켜 25℃에서 계속 배양한다. 2주 또는 3주 간격으로 동일한 처리를 반복하여 안정한 유합조직을 수득한다.
2주간의 유합조직의 증식비를 표 1 하단에 기재했다.
고체 배양 배지에서 히드로코타일 마리티마의 유합 조직을 취해서 60℃에서 24시간 동안 건조시켜 건조된 유합조직을 수득한다. 건조된 유합 조직을 모르타르로 분쇄하고 )숙슬레를 추기를 사용하여 아세톤으로 8시간 동안 3회 추출한다. 아세톤을 증류 제거하여 1.5g의 아세톤 추출물을 수득한다. 추출물은 혈액응고 기능을 갖고 있다.
200mg의 추출물이 용해된 5ml의 트리올레인이 함유된 바나나를 알코올 중독에 걸린 원숭이(2.1kg)에 수일동안 먹인다. 근육 경련 및 경직과 같은 알코올 중독 증세가 호전되었다.
[실시예 8]
히드로코타일 마리티마 대신 센텔라 아시아티카(Centella asiatica)를 사용한 것을 제외하고는 실시예 1의 방법으로 배양하여 센텔라 아시아티카의 유합 조직을 수득한다.
2주간의 유합조직의 증식비를 표 1 하단에 기재했다.
유합조직의 아세톤 추출물은 혈액응고 기능을 나타내고 알코올 중독 증세를 개선시킨다.
[실시예 9]
결절조직 대신 결정 사이 조직을 사용한 것을 제외하고는 실시예 1의 방법으로 배양하여 히드로코타일 마리티마의 결절사이 조직에서 유합 조직을 수득한다. 2주간의 유합 조직의 증식비를 표 1 하단에 기재했다.
[실시예 10]
결절조직 대신에 결절사이 조직을 사용한 것을 제외하고는 실시예 8의 방법으로 배양하여 센텔라 아시아티카의 결절 사이조직에서 유합 조직을 수득한다.
2주간의 유합 조직의 증식비를 표 1 하단에 기재한다.
[표 1]
Figure kpo00002
[실시예 11]
히드로코타일 마리티마의 열병을 물로 세척하고 70%에탄올내에 5분간 담근 후, 10% 표백분말내에 10분간 담가서 멸균시킨다. 엽병을 멸균된 증류수에 여러번 담가서 잔재멸균제를 제거한다. 멸균된 칼을 사용하여 멸균된 엽병을 길이 0.5∼1mm의 조각으로 자른다. 수득된 히드로코타일 마리티마의 멸균된 조각을 하기 조성을 갖는 합성 평면 한천에 놓는다. 배양배지는 무라시게-스꼬오그의 무기염 배양 배지에 3% w/v 수크로스, 10-5M 키네틴, 10-6M 2,4-디클로로페녹시아세트산, 0.1ppm 티아민 히드로클로라이드, 0.5ppm 피리독신 히드로클로라이드, 0.5ppm 니코틴산, 2ppm 글리신 및 100ppm 이노시틀을 가해서 pH6.0으로 맞추고, 0.8% w/v 한천을 가하고, 통상적인 방법으로 멸균시켜 만든다.
배양 배지위의 조각을 25℃의 배양온도에서 배양한다. 1주후, 담황색 유합조직이 조각에서 발생된다. 1달후, 성숙된 유합조직을 여러 분획을 나누어서 동일한 조성을 갖는 배양 배지로 전이시켜 25℃에서 계속 배양한다. 4∼6주 간격으로 동일한 처리를 반복하여 안정한 유합 조직을 수득한다.
히드로코타일 마리티마의 유합조직을 고체 배양 배지에서 취하여 60℃에서 24시간동안 건조시켜 건조된 조직 30g을 수득한다. 건조된 조직을 모르타르로 분쇄하고 숙슬레 추출기를 사용하여 아세톤으로 8시간동안 3회 추출한다. 아세톤 추출물을 약 50ml로 농축하여 분별깔때기에 충진시키고 50ml의 물 및 100ml의 에틸아세테이트를 가한후, 흔들어서 에틸아세테이트 층을 수거한다. 동일한 조작을 수회 반복하여 수득한 에틸아세테이트 용액을 농축하고 증류하여 에틸아세테이트 추출물을 수득한다. 추출물을 실리카겔 컬럼 크로마토그래피하여 12mg의 1-세사민(건조된 중량 기초 0.04%)을 수득한다.
생성된 혼합물을 IR 및 NMR 스펙트럼으로 분석하여 확인된 1-세사민의 스펙트럼과 동일함을 알았다. 클로로포름/에틸아세테이트(9/1)의 혼합물 또는 n-헥산, 에틸아세테이트(7/3)의 혼합물을 사용한 실리카 IG 박막 크로마토그래피의 점 및 전게 색상이 확인된 1-세사민의 것과 동일하다. 생성물은 1-세사민과 동일하다.
[실시예 12]
실시예 11에서 수득한 히드로코타일 마리티마의 유합 조직을 하기 조성을 갖는 합성 평면 한천에 전이시킨다. 배양 배지는 무라시게-스꼬오그의 무기염 배양 배지에 3% w/v 수크로스, 10-6M 키네빈, 10-7M α-나프탈렌아세트산 0.1ppm 티아민 히드로클로라이드, 0.5ppm 피리독신 히드로클로라이드 0.5ppm 니코틴산, 2ppm 글리신 및 100ppm 이노시틀을 가해서 pH6.0으로 맞추고, 0.8% w/v 한천을 가하고, 통상적인 방법으로 멸균시켜 만든다.
수득된 부정아를 실시예 1의 방법으로 처리하여 8mg의 조 1-세사민(건조된 배양질 중량의 0.05%)을 수득한다.
[실시예 13∼17]
히드로코타일 마리티마 대신 히드로코타일 시브토르피오이드, 에취.네팔렌시스, 에취.라미플로라, 에취.자포니카 또는 센텔라 아시아티카를 각각 사용한 것을 제외하고는 실시예 12의 방법으로 처리하여 부정근을 수득한다.
[실시예 18]
실시예 11에서 수득한 에취.마리티마의 유합 조직을 키네틴 및 α-나프탈렌아세트산 대신 10-6M 인들 아세트산을 사용한 액체 배양 배지내에서 25℃, 120rpm의 암소에서 배양하여 2주후에 부정근을 수득한다.
[실시예 19∼23]
히드로코타일 마리티마 대신 히드로코타일 시브토르피오이드, 에취.네팔렌시스, 에취.라미플로라, 에취.자포니카 또는 센텔라 아시아티카를 각각 사용한 것을 제외하고는 실시예 18의 방법으로 처리하여 부정근을 수득한다.
[실시예 24]
실시예 18에서 수득한 부정근을 말단을 절단하고 실시예 18의 방법으로 배양하여 연장 또는 분할 증식력을 갖는 배양 뿌리를 수득한다.
[실시예 25∼29]
히드로코타일 마리티마 대신 히드로코타일 시브토르피오이드, 에취.네팔렌시스, 에취.라미플로라, 에취.자포니카 또는 센텔라 아시아티카를 각각 사용한 것을 제외하고는 실시예 24의 방법으로 처리하여 부정근을 수득한다.
[실시예 30]
실시예 1에서 수득한 병의 어린 가지 및 싹 배양 조직으로 된 말단을 절단하여 실시예 1과 유사한 액체 배양 배지에 전이시킨다. 5,000lx 조명하에 120rpm 및 25℃에서 계속 배양하여 연장 및 분지 증식력이 있는 배양 어린 가지를 수득한다.
[실시예 31∼35]
히드로코타일 마리티마 경엽체 배양조직 대신 히드로코타일 시브토르피오이드, 에취.네팔렌시스, 에취.라미플로라, 에취.자포니카 또는 센텔라 아시아티카의 경엽체 배양 조직을 각각 사용한 것을 제외하고는 실시예 30의 방법으로 처리하여 배양 어린 가지를 수득한다.
[실시예 36]
에취.마리티마 대신 에취.시브토르피오이드를 사용한 것을 제외하고는 실시예 11의 방법으로 처리하여 에취.시브토르피오이드의 유합 조직을 수득하고 1-세사민을 추출한다.
[실시예 37]
히드로코타일 마리티마 대신 히드로코타일 네팔렌시스를 사용한 것을 제외하고는 실시예 11의 방법으로 처리하여 히드로코타일 네팔렌시스의 유합 조직을 수득한다. 배양 유합 조직에서 1-세사민을 수득한다.
[실시예 38]
에취.마리티마 대신 에취.자포니카를 사용한 것을 제외하고는 실시예 11의 방법으로 처리하여 에취.자포니카의 유합조직을 수득하고 이 배양 유합 조직에서 1-세사민을 수득한다.
[실시예 39]
히드로코타일 마리티마 대신 히드로코타일 라미플로라를 사용한 것을 제외하고는 실시예 11의 방법으로 처리하여 히드로코타일 라미플로라의 유합 조직을 수득한다. 배양 유합 조직에서 1-세사민을 수득한다.
[실시예 40]
히드로코타일 마리티마 대신 씨.아시아티카를 사용한 것을 제외하고는 실시예 11의 방법으로 처리하여 센텔라 아시아티카의 유합 조직을 수득한다. 이 유합 조직에서 1-세사민을 수득한다.
[실시예 41]
히드로코타일 마리티마의 엽병을 물로 세척하고 70% 에탄올내에 5분간 담근후, 10% 표백 분말내에 10분간 담가서 멸균 시킨다. 엽병 멸균된 증류수에 여러번 담가서 잔재 멸균제를 제거한다. 멸균된 칼을 사용하여 멸균된 엽병을 길이 0.5∼1mm의 조각으로 자른다. 수득된 히드로코타일 마리티마의 멸균된 조각을 하기 조성을 갖는 합성 평면 한천에 놓는다. 배양 배지는 무라시게-스꼬오그의 무기염 배양 배지에 3% w/v 사탕수수, 10-5M 키네틴, 10-6M 2,4-디클로로페녹시아세트산, 0.1ppm 티아민 히드로클로라이드, 0.5ppm 피리독신 히드로클로라이드, 0.5ppm 니코틴산, 2ppm 글리신 및 100ppm 이노시틀을 가해서 pH6.0으로 맞추고, 0.8% w/v 한천을 가하고, 통상적인 방법으로 멸균시켜 만든다.
배양 배지 위의 조각을 25℃에서 배양한다. 1주후, 담황색 유합 조직이 조각에서 발생된다. 1달후, 성숙된 유합조직을 여러 분획으로 나누어서 동일한 조성을 갖는 배양배지로 전이시켜 25℃에서 계속 배양한다. 4∼6주 간격으로 동일한 처리를 반복하여 안정한 유합조직을 수득한다.
히드로코타일 마리티마의 유합조직을 고체 배양 배지에서 취하여 60℃에서 24시간동안 건조시켜 건조된 조직 10g을 수득한다. 건조된 조직을 모르타르로 분쇄하고 숙슬레 추출기를 사용하여 아세톤으로 8시간동안 3회 추출한다. 수득한 추출물을 증류하여 아세톤을 제거하고 1.5g의 진한 아세톤 추출물을 수득한다.
[실시예 42]
실시예 41의 진한 추출물 100g을 10ml의 아세톤내에 용해시켜서 용액을 만든다. 이 용액으로 혈청 분리겔의 가장 윗부분부터 약 30∼35mm의 높이로 혈청 분리겔이 함유된 혈액 시험용 유리용기(a) 및 플라스틱용기(b)(내부직경 13mm 및 용량부피 10ml) 내부를 코팅한다. 활성물질의 코팅된 양은 5∼7mg 범위내이다. 혈액응고 시간은 용기에 6ml의 신선한 인체 혈액을 일정한 실온에서 붓고 용기를 90°각도로 기울여서 혈액의 유동성이 없을때까지의 경과된 시간을 측정하여 결정한다. 혈액을 1,500G로 5분간 원심분리하고 겔위의 분리된 혈청의 양을 측정한다. 응혈 정도를 관찰하여 그 결과를 표 2에 기재했다.
[비교예 1]
본 발명의 혈액 응고 성분으로 코팅하지 않은 혈청 분리겔이 함유된 용기 (a) 및 (b)를 제조한다. 실시예 42의 방법으로 시험을 수행하여 그 결과를 표 2에 기재했다.
[표 2]
Figure kpo00003
1) 피브린이 혈청과 혼합된다.
2) 응혈 현상이 관찰되지 않는다.
3) 약간의 응혈 현상이 관찰된다.
[실시예 43]
실시예 41의 농축된 추출물을 사용하여, 분리된 혈청에 대해서 생화학 및 면역 화합적 시험을 수행한다. 나쁜 영향이 관찰되지 않는다.
[실시예 44]
에취.마리티마 대신 씨.아시아티스를 사용한 것을 제외 하고는 실시예 41의 방법으로 처리하여 1.3g의 센텔라 아시아티카의 농축된 추출물을 수득한다.
[실시예 45]
실시예 41의 농축 추출물 대신 실시예 44의 것을 사용한 것을 제외하고는 실시예 42의 방법으로 측정을 수행하여 그 결과를 표 3에 기재했다.
[표 3]
Figure kpo00004
4) 응혈 형상이 관찰되지 않는다.
[실시예 46]
실시예 41의 엽병 대신 멸균된 에취. 마리티마 조각을 사용한 것을 제외하고는 실시예 11의 방법으로 12mg의 1-세사민을 수득한다.
[실시예 47]
실시예 12의 방법으로 실시예 46의 에취.마리티마의 유합 조직에서 8mg의 조 1-세사민을 수득한다.
[실시예 48]
에취.마리티마 대신 에취.시브토르피오이드를 사용한 것을 제외하고는 실시예 46의 방법으로 처리하여 에취.시브토르피오이드의 유합 조직을 수득하고 1-세사민을 추출한다.
[실시예 49]
히드로코타일 마리티마 대신 히드로코타일 네탈렌시스를 사용한 것을 제외하고는 실시예 46의 방법으로 배양하여 히드로코타일 네팔렌시스의 유합 조직을 수득한다. 유합 조직에서 1-세사민을 수득한다.
[실시예 50]
에취. 마리티마 대신 에취. 자포니카를 사용한 것을 제외하고는 실시예 46의 방법으로 배양하여 에취. 자포니카의 유합 조직을 수득하고 이로부터 1-세사민을 수득한다.
[실시예 51]
히드로코타일 마리티마 대신 히드로코타일 라미플로라를 사용한 것을 제외하고는 실시예 46의 방법으로 배양하여 히드로코타일 라미플로라의 유합 조직을 수득한다. 유합조직에서 1-세사민을 수득한다.
[실시예 52]
에취. 마리티마 대신 센텔라. 아시아티카를 사용한 것을 제외하고는 실시예 46의 방법으로 배양하여 씨. 아시아티카의 유합조직을 수득하고 이로부터 1-세사민을 수득한다.
[실시예 53∼57]
히드로코타일 마리티마 대신 히드로코타일 네팔렌시스, 에취.시브토르피오이드 에취.타미플로라, 에취.자포니카 또는 센텔라 아시아티카를 각각 사용한 것을 제외하고는 실시예 47의 방법으로 처리하여 1-세사민을 수득한다.
[실시예 58∼63]
실시예 47의 에취.마리티마 대신 에취.시브토트리오이드, 에취.네팔렌시스, 에취.라미플로타, 에취.자포니카 또는 센텔라 아시아티카를 각각 사용한 것을 제외하고는 실시예 41의 방법으로 처리하여 부정아를 수득한다. 실시예 41의 방법으로 농축 추출물을 수득한다.
[실시예 64∼69]
실시예 1∼6의 가지 배양 조직에서 농축된 아세톤 추출물을 수득한다.
[실시예 70∼74]
히드로코타일 마리티마 대신 히드로코타일 네팔렌시스, 에취.시브토르피오이드, 에취.네팔렌시스, 에취.라미플로라, 에취.자포니카 또는 센텔라 아시아티카를 각각 사용한 것을 제외하고는 실시예 41의 방법으로 처리하여 농축된 아세톤 추출물을 수득한다. 실시예 58∼63 및 64∼74의 농축 추출물에 대해서 동일한 시험을 수행한다. 그 결과는 실시예 42와 유사하다. 실시예 41에서 수득한 400g이 유합조직을 14ℓ의 항아리 내의 10ℓ의 액체 배양 배지내에 분산시켜서 50rpm이 교반속도, 5ℓ/분의 공기 공급율 및 25℃의 온도에서 10일 동안 배양한다. 사용한 배양배지는 실시예 46의 것과 동일하다. 10일후, 약 4kg의 유합조직이 생성된다. 실시예 41의 방법으로 20g의 농축된 아세톤 추출물을 수득한다.
[실시예 76]
실시예 41에서 수득한 히드로코타일 마리티마의 유합조직을 하기 조성을 갖는 평면 한천으로 전이시킨다. 배양배지는 무라시게-스꼬오그의 무기염 배양배지에 3% w/v 수크로스, 10-6M인들 아세트산, 0.1ppm 티아민 히드로클로라이드, 0.5ppm 피리독신 히드로클로라이드, 0.5ppm 피리독신 히드로클로라이드, 0.5ppm 니코틴산, 2ppm 글리신 및 100ppm 이노시틀을 가해서 pH 6.0으로 맞추고, 0.8% w/v의 한천을 가하고, 통상적인 방법으로 멸균시켜 만든다. 25℃ 및 120rpm으로 배양하여 2주후에 부정근을 수득한다.
분화된 부정근을 실시예 41의 방법으로 처리하여 아세톤 추출물을 수득한다.
[실시예 77∼81]
에취.마리티마 대신 에취.시브토르피오이드, 에취.네팔렌시스, 에취.라미플로라, 에취.자포니카 또는 센텔라 아시아티카를 각각 사용한 것을 제외하고는 실시예 75의 방법으로 처리하여 아세톤 추출물을 수득한다.
[실시예 82]
실시예 76의 방법으로 수득한 부정근의 말단부위를 멸균상태로 절단하고 실시예 76과 동일한 배양 배지로 전이시켜서 연장 및 분할 중식력을 갖는 배양된 뿌리를 수득한다. 배양된 뿌리를 실시예 41의 방법으로 처리하여 아세톤 추출물을 수득한다.
[실시예 83∼87]
히드로코타일 마리티마 대신 히드로코타일 네팔렌시스, 에취.시브토르피오이드, 에취.라미플로라, 에취.자포니카 또는 센텔라 아시아티카를 각각 사용한 것을 제외하고는 실시예 82의 방법으로 처리하여 아세톤 추출물을 수득한다.
[실시예 88]
말단 싹이 함유된 히드로코타일 마리티마의 병 3cm를 물로 세척하고 70% 에탄올 내에 5분간 담근 후, 10% 표백 분말 내에 10분간 담가서 멸균시킨다. 병을 멸균된 증류수에 여러번 담가서 잔재 멸균제를 제거한다. 입체 현미경하에 멸균된 칼 및 멸균된 핀셋을 사용하여 멸균된 병을 말단싹이 함유된 길이 0.5∼1mm의 조각으로 자른다. 수득된 히드로코타일 마리티마의 멸균된 조각을 하기 조성을 갖는 합성 평면 한천에 놓는다. 배양 배지는 무라시게-스꼬오그의 무기염 배양배지에 3% w/v 수크로스, 10-6M α-나프탈렌 아세트산, 0.1ppm 티아민 히드로클로라이드, 0.5ppm 피리독신 히드로클로라이드, 0.5ppm 니코틴산, 2ppm 글리신 및 100ppm 이노시틀을 가해서 pH 6.0으로 맞추고, 0.8% w/v의 한천을 가하고, 통상적인 방법으로 멸균시켜 만든다.
배양 배지 위의 조각을 5,000 lx 조명하에 25℃에서 배양한다. 3주후, 배양된 어린 가지 조직이 조각에서 발생된다. 1달후, 성숙된 가지 배양 조직이 조각에서 발생된다. 1달후, 성숙된 가지 배양 조직을 2분획으로 나누어서 동일한 조성을 갖는 배양배지로 전이시켜 25℃에서 계속 배양한다. 2주 간격으로 동일한 처리를 반복하여 안정한 가지 배양 조직을 수득한다.
가지의 말단 부위를 멸균 상태에서 절단하고 상기와 동일한 조성물을 갖는 액체 배양배지에 전이시킨다. 5,000 lx의 조명하에 120rpm 및 25℃에서 배양을 수행하여 연장 및 분할 증식 능력이 있는 배양 가지를 수득한다.
실시예 41의 방법으로 배양 가지에서 아세톤 추출물을 수득한다.
[실시예 89∼93]
히드로코타일 마리티마 대신 히드로코타일 시브토르피오이드, 에취.네팔렌시스, 에취.라미플로라, 에취.자포니카 또는 센텔라 아시아티카를 각각 사용한 것을 제외하고는 실시예 88의 방법으로 처리하여 아세톤 추출물을 수득한다.
[실시예 94]
실시예 77에서 수득한 부정근을 실시예 46의 방법으로 처리하여 1-세사민을 수득한다.
[실시예 95∼99]
에취.마리티마 대신 에취.시브토르피오이드, 에취.네팔렌시스, 에취.라미플로라, 에취.자포니카 또는 센텔라 아시아티카를 각각 사용한 것을 제외하고는 실시예 94의 방법으로 처리하여 1-세사민을 수득한다.
[실시예 100]
실시예 82에서 수득한 부정근을 실시예 46의 방법으로 처리하여 1-세사민을 수득한다.
[실시예 101∼105]
히드로코타일 마리티마 대신 히드로코타일 시브토르피오이드, 에취.네팔텐시스, 에취.라미플로라, 에취.자포니카 또는 센텔라 아시아티카를 각각 사용한 것을 제외하고는 실시예 100의 방법으로 처리하여 1-세사민을 수득한다.
[실시예 106]
실시예 88에서 수득한 부정근을 실시예 46의 방법으로 처리하여 1-세사민을 수득한다.
[실시예 107∼111]
에취.마리티마 대신 에취.시브토르피오이드, 에취.네팔렌시스, 에취.라미플로라, 에취.자포니카 또는 센텔라 아시아티카를 각각 사용한 것을 제외하고는 실시예 106의 방법으로 처리하여 1-세사민을 수득한다.
[실시예 112]
실시예 77에서 수득한 부정근을 실시예 42의 방법으로 처리하여 유사한 결과를 수득한다.
[실시예 113∼117]
히드로코타일 마리티마 대신 히드로코타일 시브토르피오이드, 에취.네팔렌시스, 에취.라미플로라, 에취.자포니카 또는 센텔라 아시아티카를 각각 사용한 것을 제외하고는 실시예 112의 방법으로 처리하여 유사한 결과를 수득한다.
[실시예 118]
실시예 82에서 수득한 부정근을 실시예 42의 방법으로 처리하여 유사한 결과를 수득한다.
[실시예 119∼123]
히드로코타일 마리티마 대신 히드로코타일 시브토르피오이드, 에취.네팔렌시스, 에취.라미플로라, 에취.자포니카 또는 센텔라 아시아티카를 각각 사용한 것을 제외하고는 실시예 118의 방법으로 처리하여 유사한 결과를 수득한다.
[실시예 124]
실시예 88에서 수득한 부정근을 실시예 42의 방법으로 처리하여 유사한 결과를 수득한다.
[실시예 125∼129]
히드로코타일 마리티마 대신 히드로코타일 시브토르피오이드, 에취.네팔렌시스, 에취.라미플로라, 에취.자포니카 또는 센텔라 아시아티카를 각각 사용한 것을 제외하고는 실시예 123의 방법으로 처리하여 유사한 결과를 수득한다.
[실시예 130]
실시예 41에서 수득한 200mg의 아세톤 추출물이 용해된 5ml의 트리올레인이 함유된 바나나를 알코올 중독에 걸린 원숭이(2kg)에게 7일동안 먹인다. 근육 경련 및 경직과 알코올 중독 증세가 개선되었다.
[실시예 131]
100g의 에취.마리티마 전체를 60℃에서 24시간동안 건조시켜 5.5g의 건조된 식물을 수득한다. 건조된 식물을 모르타트로 분쇄하고 속슬레 추출기를 사용하여 아세톤으로 8시간 동안 3회 추출한다. 아세톤 추출물에서 아세톤을 증류 제거하여 농축된 아세톤 추출물(1.1g)을 수득한다. 수득된 농축된 아세톤 추출물을 사용하여 실시예 130의 방법으로 시험을 수행한다. 그 결과, 알코올 중독 증세가 호전되는 효과를 나타내었다.
[실시예 132]
에취.마리티마의 유합 조직을 식물 조직으로 사용한 것을 제외하고 실시예 41의 방법으로 처리하여 농축된 아세톤 추출물(1.4g)을 수득한다. 건조된 유합 조직은 10g이다. 수득된 농축된 아세톤 추출물을 사용하여 실시예 130의 방법으로 시험을 수행한다. 그 결과, 알코올 중독 증세가 호전되는 효과를 나타내었다.
[실시예 133]
에취.마리티마의 전체를 식물 조직으로 사용한 것을 제외하고는 실시예 131의 방법으로 처리하여 농축된 아세톤 추출물(1.0g)을 수득한다. 건조된 유합 조직은 60g이다. 수득된 농축된 아세톤 추출물을 사용하여 실시예 130의 방법으로 시험을 수행한다. 그 결과, 알코올 중독 증세가 호전되는 효과를 나타내었다.
[실시예 134]
에취.자포니카의 유합 조직이 식물 조직으로 사용된 것을 제외하고 실시예 41의 방법으로 처리하여 농축된 아세톤 추출물(1.5g)을 수득한다. 건조된 유합 조직은 10g이다. 수득된 농축된 아세톤 추출물을 사용하여 실시예 130의 방법으로 시험을 수행한다. 그 결과, 알코올 중독 증세가 호전되는 효과를 나타내었다.
[실시예 135]
에취.자포니카의 전체를 식물 조직으로 사용한 것을 제외하고는 실시예 131의 방법으로 처리하여 농축된 아세톤 추출물(0.8g)을 수득한다. 건조된 유합 조직은 5.1g이다. 수득된 농축된 아세톤 추출물을 사용하여 실시예 130의 방법으로 시험을 수행한다. 그 결과, 알코올 중독 증세가 호전되는 효과를 나타내었다.
[실시예 136]
에취.라미플로라의 유합 조직을 식물 조직으로 사용한 것을 제외하고 실시예 41의 방법으로 처리하여 농축된 아세톤 추출물(1.3g)을 수득한다. 건조된 유합 조직은 10g이다. 수득된 시험을 수행한다. 그 결과, 알코올 중독 증세가 호전되는 효과를 나타내었다.
[실시예 137]
에취.라미플로라의 전체를 식물 조직으로 사용한 것을 제외하고는 실시예 131의 방법으로 처리하여 농축된 아세톤 추출물(0.9g)을 수득한다. 건조된 유합조직은 6.2g이다. 수득된 농축된 아세톤 추출물을 사용하여 실시예 130의 방법으로 시험을 수행한다. 그 결과, 알코올 중독 증세가 호전되는 효과를 나타내었다.
[실시예 138]
에취.네팔렌시스의 유합 조직을 식물 조직으로 사용한 것을 제외하고는 실시예 41의 방법으로 처리하여 농축된 아세톤 추출물(1.5g)을 수득한다. 건조된 유합조직은 10g이다. 수득된 농축된 아세톤 추출물을 사용하여 실시예 130의 방법으로 시험을 수행한다. 그 결과, 알코올 중독 증세가 호전되는 효과를 나타내었다.
[실시예 139]
에취.네팔렌시스의 전체를 식물 조직으로 사용한 것을 제외하고는 실시예 131의 방법으로 처리하여 농축된 아세톤 추출물(0.8g)을 수득한다. 건조된 유합조직은 5.2g이다. 수득된 농축된 아세톤 추출물을 사용하여 실시예 130의 방법으로 시험을 수행한다. 그 결과, 알코올 중독 증세가 호전되는 효과를 나타내었다.
[실시예 140]
센텔라 아시아리카의 유합 조직을 식물 조직으로 사용한 것을 제외하고는 실시예 41의 방법으로 처리하여 농축된 아세톤 추출물(1.4g)을 수득한다. 건조된 유합조직은 10g이다. 수득된 농축된 아세톤 추출물을 사용하여 실시예 130의 방법으로 시험을 수행한다. 그 결과, 알코올 중독 증세가 호전되는 효과를 나타내었다.
[실시예 141]
씨.아시아티카 전체를 식물 조직으로 사용한 것을 제외하고 실시예 131의 방법으로 처리하여 농축된 아세톤 추출물(1.0g)을 수득한다. 건조된 유합 조직은 5.5g이다. 수득된 농축된 아세톤 추출물을 사용하여 실시예 130의 방법으로 시험을 수행한다. 그 결과, 알코올 중독 증세가 호전되는 효과를 나타내었다.

Claims (12)

  1. 히드로코타일 속 또는 센텔라 속에 속하는 식물이 조직 또는 세포를 배지내에서 또는 배지위에서 배양함을 특징으로 하는 배양 식물세포의 제조방법.
  2. 제 1 항에 있어서, 히드로코타일 속 또는 센텔라속에 속하는 식물이 에취.시브토르피오이드, 에취.마리티마, 에취.자포니카, 에취.라미플로라, 에취.네팔렌시스 또는 씨.아시아티카 임을 특징으로 하는 방법.
  3. 제 1 항에 있어서, 식물조직이 말단 싹 또는 측생 싹임을 특징으로 하는 방법.
  4. 제 1 항에 있어서, 식물조직이 결절 조직임을 특징으로 하는 방법.
  5. 제 1 항에 있어서, 배양 식물세포가 유합 조직임을 특징으로 하는 방법.
  6. 제 1 항에 있어서, 배양된 식물세포가 배양된 어린가지 조직임을 특징으로 하는 방법.
  7. 제 1 항에 있어서, 배양 배지가 오옥신 및/또는 시토키닌을 함유함을 특징으로 하는 방법.
  8. 제 7 항에 있어서, 오옥신 또는 시코키닌의 양이 10-5M이하임을 특징으로 하는 방법.
  9. 제 1 항에 있어서, 빛에 노출시킨 상태에서 배양시킴을 특징으로 하는 방법.
  10. 제 9 항에 있어서, 1,000 lx이상의 빛을 이용하여 매일 16시간 이상 빛에 노출시킴을 특징으로 하는 방법.
  11. 히드로코타일 속 또는 센텔라 속에 속하는 식물의 조직 또는 세포로부터 유도된 배양세포를 추출함을 특징으로 하는 정신질환 치료 성분의 제조방법.
  12. 제 11 항에 있어서, 추출을 유기 용매를 이용하여 실시함을 특징으로 하는 방법.
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JP7322085 1985-04-06
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JP42740/86 1986-02-26
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JP42729 1986-02-26
JP42740 1986-02-26
JP61042739A JPS6230723A (ja) 1985-04-06 1986-02-26 血液凝固成分
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