JPS6222600A - 体液中の膵臓−アルフア−アミラ−ゼの特異的測定のための方法及び試薬 - Google Patents
体液中の膵臓−アルフア−アミラ−ゼの特異的測定のための方法及び試薬Info
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
産業上の利用分野
本発明は、唾液−アル７アーアミラーゼと共に膵臓−ア
ルファーアミラーゼを特異的に測定る、ための方法に関
る、。
ルファーアミラーゼを特異的に測定る、ための方法に関
る、。
従来の技術
アルファーアミラーゼ（Ｅ、Ｃ，３，２，１，１）は、
１．４−ｄ−配糖体結合した少糖類及び多動類を主に１
，４−アルファー配糖体結合の偶発的な加水分解により
マルトース及びマルト−少糖類に分解る、。この酵素は
工業的な醗酵技術のほかに臨床的分析学及び診断学の分
野で著しくＮ、装である。つｌす、多数の疾病において
は体液、例えば血清、尿又は十二指腸分泌物中のアルフ
ァーアミラーゼ含量は著しく変化る、からである。しか
しながら体中には実際には、２棟類のアルファーアミラ
ーゼ酪累、膵１臓酵累及び睡ｇ酵素が存在る、。診断学
的な′Ｍ装性は膵臓酵素にのみ帰る、ので、この２種類
の（稀に、かつ少鈑でのみ現われるその他のイソ酵素と
共に）アルファーアミラーゼを分析的に区別る、という
課組が生じる。この場合に困難なことはこの２つの多ム
形の物質が類似の構造を有し、かつ免役学的に同一であ
ることにある（ローレンツ（Ｋ、 Ｌｏｎａｎｚｚ ）
、 ラがラトリウムスブレツター（Ｌａｂｏｒａｚ
ｏｒｉｕｍｓｂｌＭｚｔ、ｅｒ ） ３２ ： １１８
（１９８２））。唾液酵素の活性の消失のためには、陰
イオン又換体の吸着、小麦蛋白質による阻害又は電気泳
動法もしくは等ｔＡ電気泳動法を使用る、ことが知られ
ている。しかしながらこれらの方法は、その分離効果に
不満足であるか、又は常用診断には経費がかかりすぎる
。
１．４−ｄ−配糖体結合した少糖類及び多動類を主に１
，４−アルファー配糖体結合の偶発的な加水分解により
マルトース及びマルト−少糖類に分解る、。この酵素は
工業的な醗酵技術のほかに臨床的分析学及び診断学の分
野で著しくＮ、装である。つｌす、多数の疾病において
は体液、例えば血清、尿又は十二指腸分泌物中のアルフ
ァーアミラーゼ含量は著しく変化る、からである。しか
しながら体中には実際には、２棟類のアルファーアミラ
ーゼ酪累、膵１臓酵累及び睡ｇ酵素が存在る、。診断学
的な′Ｍ装性は膵臓酵素にのみ帰る、ので、この２種類
の（稀に、かつ少鈑でのみ現われるその他のイソ酵素と
共に）アルファーアミラーゼを分析的に区別る、という
課組が生じる。この場合に困難なことはこの２つの多ム
形の物質が類似の構造を有し、かつ免役学的に同一であ
ることにある（ローレンツ（Ｋ、 Ｌｏｎａｎｚｚ ）
、 ラがラトリウムスブレツター（Ｌａｂｏｒａｚ
ｏｒｉｕｍｓｂｌＭｚｔ、ｅｒ ） ３２ ： １１８
（１９８２））。唾液酵素の活性の消失のためには、陰
イオン又換体の吸着、小麦蛋白質による阻害又は電気泳
動法もしくは等ｔＡ電気泳動法を使用る、ことが知られ
ている。しかしながらこれらの方法は、その分離効果に
不満足であるか、又は常用診断には経費がかかりすぎる
。
前記の方法では、タリノ・ケム（Ｃ１１ｎ、Ｃｈｅｍ、
）２８／７．１５２５−１５２７（１９８２）に記載
された、小麦胚芽から得られる阻害剤による唾液型の酵
素の阻害法だけが、認めつる時間的消費と結びつくが、
その選択性は不満足である。最適阻害剤濃度においても
、唾液型−酵素の活性の約１３％が残留保持され、一方
膵臓酵素の活性は約８１ｅｓに減らされる。
）２８／７．１５２５−１５２７（１９８２）に記載
された、小麦胚芽から得られる阻害剤による唾液型の酵
素の阻害法だけが、認めつる時間的消費と結びつくが、
その選択性は不満足である。最適阻害剤濃度においても
、唾液型−酵素の活性の約１３％が残留保持され、一方
膵臓酵素の活性は約８１ｅｓに減らされる。
すでに欧州特許出願第８４１１４１７２．４号明細書に
、Ｉ！！液−アルファーアミラーゼと反応し、かつその
際膵臓−アルファーアミラーゼに対して５％又はそれよ
りも少ない交叉反応性を有る、モノクロナール抗体の存
在で作業る、ことによって、唾液−アルファーアミラー
ゼのほかに膵臓−アルファーアミラーゼを測定る、こと
が提案された。このモノクロナール抗体を用いて、沈澱
試薬の添加の際に、浴液から分離る、ことができる唾敷
−アルファーアミラーゼとの不活性の錯体を形成る、こ
ともでき、従って膵臓酵素のみが溶液中に残留し、そこ
で測定る、ことができる。選択的に、不動形のモノクロ
ナール抗体を使用し、かつこの方法で唾液−アミラーゼ
を分離る、ことが可能である しかしながらこの２つの
場合には不活性の相を形成る、こと、かつ活性の相から
分離る、ことが必要である。
、Ｉ！！液−アルファーアミラーゼと反応し、かつその
際膵臓−アルファーアミラーゼに対して５％又はそれよ
りも少ない交叉反応性を有る、モノクロナール抗体の存
在で作業る、ことによって、唾液−アルファーアミラー
ゼのほかに膵臓−アルファーアミラーゼを測定る、こと
が提案された。このモノクロナール抗体を用いて、沈澱
試薬の添加の際に、浴液から分離る、ことができる唾敷
−アルファーアミラーゼとの不活性の錯体を形成る、こ
ともでき、従って膵臓酵素のみが溶液中に残留し、そこ
で測定る、ことができる。選択的に、不動形のモノクロ
ナール抗体を使用し、かつこの方法で唾液−アミラーゼ
を分離る、ことが可能である しかしながらこの２つの
場合には不活性の相を形成る、こと、かつ活性の相から
分離る、ことが必要である。
史に、西ドイツ国特許公開（ＤＥＡ −１）第３５００
５２６．２号明細書に前記のａｔ類の方法が公開され、
その方法においては、前Ｗｅの欧州特許出願の結合モノ
クロナール抗体の代りに唾液−イソ酵素を特異的に阻害
る、モノクロナール抗体が使用される。この方法によっ
て、その際相分離を行なう必要のない、アルファーアミ
ラーゼ−イソ酵素測定のもう１つの改簀が、達成される
が、最高に達る、唾液酵素の阻害は９７％よりも少なく
、従って依然として不所望ト の大きな不正確性が測定に付随している。
５２６．２号明細書に前記のａｔ類の方法が公開され、
その方法においては、前Ｗｅの欧州特許出願の結合モノ
クロナール抗体の代りに唾液−イソ酵素を特異的に阻害
る、モノクロナール抗体が使用される。この方法によっ
て、その際相分離を行なう必要のない、アルファーアミ
ラーゼ−イソ酵素測定のもう１つの改簀が、達成される
が、最高に達る、唾液酵素の阻害は９７％よりも少なく
、従って依然として不所望ト の大きな不正確性が測定に付随している。
発明が解決しようとる、問題点
従って本発明は、この欠点を除き、かつ体液中の唾液型
のアルファーアミラーゼのほかに膵臓−アルファーアミ
ラーゼの速やかでかつ簡単な、しかじ史により精確な測
定を可能にる、方法及び試薬をつくるという課題を基礎
とる、。
のアルファーアミラーゼのほかに膵臓−アルファーアミ
ラーゼの速やかでかつ簡単な、しかじ史により精確な測
定を可能にる、方法及び試薬をつくるという課題を基礎
とる、。
問題点を解決る、ための手段
この課題は本発明に依り、Ｓａ−アルファーアミラーゼ
を阻害る、モノクロナール抗体の存在でアルファーアミ
ラーゼの検出のための系との反応により、体液、特に血
清、血漿、十二指腸分泌液又は尿中のＩｉ！液−アルフ
ァーアミラーゼのはかに膵臓−アルファーアミラーゼを
特異的に測定る、ための方法により解明され、この方法
は、阻害剤として唾液酵素を９７チよりも少なく特異的
に阻害る、第１モノクロナール抗体を、この酵素を１０
％よりも少なく阻害る、第２モノクロナール抗−唾液−
アルファーアミラーゼー抗体と組合せて使用る、ことを
特徴とる、。
を阻害る、モノクロナール抗体の存在でアルファーアミ
ラーゼの検出のための系との反応により、体液、特に血
清、血漿、十二指腸分泌液又は尿中のＩｉ！液−アルフ
ァーアミラーゼのはかに膵臓−アルファーアミラーゼを
特異的に測定る、ための方法により解明され、この方法
は、阻害剤として唾液酵素を９７チよりも少なく特異的
に阻害る、第１モノクロナール抗体を、この酵素を１０
％よりも少なく阻害る、第２モノクロナール抗−唾液−
アルファーアミラーゼー抗体と組合せて使用る、ことを
特徴とる、。
本発明には、第１モノクロナール抗体として唾液酵素の
阻害く９７％を有る、阻害抗体及び第２モノクロナール
抗体として唾液酵素の阻害く５％を有る、結合抗体が特
に適当である。本発明に依る組合せで９７％以上の阻害
を目指すために、約７０％、殊に８０チが阻害の下限値
と見なされるべきである。
阻害く９７％を有る、阻害抗体及び第２モノクロナール
抗体として唾液酵素の阻害く５％を有る、結合抗体が特
に適当である。本発明に依る組合せで９７％以上の阻害
を目指すために、約７０％、殊に８０チが阻害の下限値
と見なされるべきである。
本発明に依る方法は極めて驚異的な観察に基づいており
、それは、唾液酵素を完全に満足る、程には阻害しない
モノクロナール抗体の阻害作用が、単に結合る、たけで
実際には阻害しないか又は全く不十分に阻害る、モノク
ロナール抗体によって、相乗作用的に強化され、かつ唾
液酵素の殆んど定量的阻害が膵臓酵素の活性の１００％
保持で達成され得ることである。東に培養時間が実際減
ることも可能である。
、それは、唾液酵素を完全に満足る、程には阻害しない
モノクロナール抗体の阻害作用が、単に結合る、たけで
実際には阻害しないか又は全く不十分に阻害る、モノク
ロナール抗体によって、相乗作用的に強化され、かつ唾
液酵素の殆んど定量的阻害が膵臓酵素の活性の１００％
保持で達成され得ることである。東に培養時間が実際減
ることも可能である。
本発明の方法には第１モノクロナール抗体としてＮＣＡ
ＣＣ［：ナショナル コレクション オプアニマル セ
ル カルチャー（ＮａｚｉｏｎａｌＣｏｌｌｅｃｚｉｏ
ｎ ｏｆ Ａｎｉｍａｌ Ｃｅ１ｌ Ｃｕ１ｚｕｒｅ
）、ボートン ダウン（Ｐｏｒｚｏｎ Ｄｏｗｎ ）、
ＧＢ ］ に番号（９９Ｄ１２）８４１２２００３及
び（８９Ｅ２）８４１２２００４として寄託された細胞
培養物から得られる抗体を有利に使用る、。第２モノク
ロナール抗体としては、ＮＣＡＣＣで番号８４１１１３
０１．８４１１１３０２として寄託された細胞培養物の
、欧州公開特許（ＥＵ−ＡＩ）第８４１１４１７２．４
で公開された結合抗体を使用る、； ＮＣＡＣＣ８４１
１１３０１が特に有利である。
ＣＣ［：ナショナル コレクション オプアニマル セ
ル カルチャー（ＮａｚｉｏｎａｌＣｏｌｌｅｃｚｉｏ
ｎ ｏｆ Ａｎｉｍａｌ Ｃｅ１ｌ Ｃｕ１ｚｕｒｅ
）、ボートン ダウン（Ｐｏｒｚｏｎ Ｄｏｗｎ ）、
ＧＢ ］ に番号（９９Ｄ１２）８４１２２００３及
び（８９Ｅ２）８４１２２００４として寄託された細胞
培養物から得られる抗体を有利に使用る、。第２モノク
ロナール抗体としては、ＮＣＡＣＣで番号８４１１１３
０１．８４１１１３０２として寄託された細胞培養物の
、欧州公開特許（ＥＵ−ＡＩ）第８４１１４１７２．４
で公開された結合抗体を使用る、； ＮＣＡＣＣ８４１
１１３０１が特に有利である。
そのつど８賛な第１及び第２抗体の菫は一定の抗体製剤
について若干の予備実験により容易に確かめられる。殊
に第１モノクロナール抗体少なくとも５μｆｉ／ＩＬｔ
、より有利には少なくとも２０μｉ／ｒｎｉ及び第２モ
ノクロナール抗体少なくとも１μｇ／α、より有利に少
なくとも５μｇ／Ｍを使用る、。
について若干の予備実験により容易に確かめられる。殊
に第１モノクロナール抗体少なくとも５μｆｉ／ＩＬｔ
、より有利には少なくとも２０μｉ／ｒｎｉ及び第２モ
ノクロナール抗体少なくとも１μｇ／α、より有利に少
なくとも５μｇ／Ｍを使用る、。
本発明により使用可能なモノクロナール抗体は、天然又
は変性された唾液−アルファーアミラーゼで実験動物を
免疫し、そして得られる免疫動物のＢ ＋ １７７２球
を形質転換剤と共に融合し、そうして形成した雑種細＠
（これがモノクローナル抗体を産出る、）をクローニン
グ及び培養し、かつモノクロナール抗体を単離す右こと
によって得られる。唾液−アルファーアミラーゼ−抗体
の製造のために特に適当な動物はラット及びマウスであ
る。免疫は天然のヒトの唾液−アルファーアミラーゼで
、又は変性唾液−アミラーゼで行なう。天然の酵素を使
用る、場合には、このために市販されている電気泳動均
質製剤が適当である。化学的に変性された唾液−アルフ
ァーアミラーゼは同様に酵素変性の公知方法、例えば西
ドイツ国特許出願公告（ＤＥ−Ａｓ）第２５４３９９４
号明細書に詳説されている方法により得ることができる
。適当な変性剤は例えば蛋白質のトリブトファン基の酸
化（ＢＢＡ １４３ （１９６７）４６２−４７２ ）
、主にヒスチジンに作用る、ヨードアセテート（ＩＡＡ
）でのカルボキシメチル化もしくはテトラニトロメタン
（ＴＮＭ）でのニトロ化（ジャーナル オプ ビオロジ
カル クミストリイ（Ｊ、 Ｂｉｏｌ、 Ｃｈｅｍ、
） ２３８ （１９６３） ３３０７）並びにジアゾ化
されたスルファニル酸でのジアゾ化〔メンーズイン エ
ンテモロジイ（Ｍｅｔｈ。
は変性された唾液−アルファーアミラーゼで実験動物を
免疫し、そして得られる免疫動物のＢ ＋ １７７２球
を形質転換剤と共に融合し、そうして形成した雑種細＠
（これがモノクローナル抗体を産出る、）をクローニン
グ及び培養し、かつモノクロナール抗体を単離す右こと
によって得られる。唾液−アルファーアミラーゼ−抗体
の製造のために特に適当な動物はラット及びマウスであ
る。免疫は天然のヒトの唾液−アルファーアミラーゼで
、又は変性唾液−アミラーゼで行なう。天然の酵素を使
用る、場合には、このために市販されている電気泳動均
質製剤が適当である。化学的に変性された唾液−アルフ
ァーアミラーゼは同様に酵素変性の公知方法、例えば西
ドイツ国特許出願公告（ＤＥ−Ａｓ）第２５４３９９４
号明細書に詳説されている方法により得ることができる
。適当な変性剤は例えば蛋白質のトリブトファン基の酸
化（ＢＢＡ １４３ （１９６７）４６２−４７２ ）
、主にヒスチジンに作用る、ヨードアセテート（ＩＡＡ
）でのカルボキシメチル化もしくはテトラニトロメタン
（ＴＮＭ）でのニトロ化（ジャーナル オプ ビオロジ
カル クミストリイ（Ｊ、 Ｂｉｏｌ、 Ｃｈｅｍ、
） ２３８ （１９６３） ３３０７）並びにジアゾ化
されたスルファニル酸でのジアゾ化〔メンーズイン エ
ンテモロジイ（Ｍｅｔｈ。
Ｅｎｚｙｍｏｌ、） ２５（１９７２）５１５〜５３
１）下でのＮ−プロムサクシンイミド（！ＪＢＳ）であ
る。この際、Ｂａ１ｂ／ｃ−マウスの使用の際にはＴＮ
Ｍで変性された酵素又はＡＪ−マウスの使用の際には天
然の酵素が最適であることが証明されｌこ 。
１）下でのＮ−プロムサクシンイミド（！ＪＢＳ）であ
る。この際、Ｂａ１ｂ／ｃ−マウスの使用の際にはＴＮ
Ｍで変性された酵素又はＡＪ−マウスの使用の際には天
然の酵素が最適であることが証明されｌこ 。
免疫は天然又は変性酵素の通常の投与により殊にアジュ
バントと組合せて行なわれる。アジュバントとしては百
日咳ｆ１４ （Ｂｏｒｄａｔ、ｅｌｌａｐｅｒｚｕｓｓ
ｉｓ ）と−緒の水酸化アルミニウムが有利である。免
疫のためにＡＪ−マウスにおいては天然の唾取−アルフ
ァーアミラーゼ會、又はＢａ１ｂ／ｃ−マウスにおいて
はＴＮＭ−変性唾液−アルファーアミラーゼを使用る、
場合には、免役は殊に少なくとも９ケ月間にわたって少
なくとも７回の免疫で行なわれる（ １．Ｐ、注射）。
バントと組合せて行なわれる。アジュバントとしては百
日咳ｆ１４ （Ｂｏｒｄａｔ、ｅｌｌａｐｅｒｚｕｓｓ
ｉｓ ）と−緒の水酸化アルミニウムが有利である。免
疫のためにＡＪ−マウスにおいては天然の唾取−アルフ
ァーアミラーゼ會、又はＢａ１ｂ／ｃ−マウスにおいて
はＴＮＭ−変性唾液−アルファーアミラーゼを使用る、
場合には、免役は殊に少なくとも９ケ月間にわたって少
なくとも７回の免疫で行なわれる（ １．Ｐ、注射）。
免疫が行なわれた後に、免疫動物のＢ−リンパ球を常法
により形質転換剤と融合る、。本発明の範囲で使用し得
る形質転換剤の例は骨髄腫細胞、形質転換ウィルス、例
えばＥＢウィルス（Ｅｐｓｚｅｉｎ−Ｂａｒｒ−Ｖｉｒ
ｕｓ ）、又は西ドイツ国特許公開公報第５２４５６Ｓ
５号明細書に記載されている試薬である。融合はクーラ
ー （Ｋｏｅｈｌｅｒ ）及びミルスタイン（Ｍｉｌｓｔ、
ｓｉｎ ）の公知方法（ネイチャー（Ｎａｚｕｒｅ ）
２５６（１９７５）４９５−４９７）により行なわ
れる。この際形成る、雑ａ＃Ｉ胞は常法で、例えば市販
の細胞選別機の使用下にクローニングされかつ所望のモ
ノクロナール抗体を形成る、得られたクローンを培養る
、。雑種細胞の癌様増殖に基づきこれを更に無期培養し
、所望のモノクロナール抗体を任意の鷲で産出る、。
により形質転換剤と融合る、。本発明の範囲で使用し得
る形質転換剤の例は骨髄腫細胞、形質転換ウィルス、例
えばＥＢウィルス（Ｅｐｓｚｅｉｎ−Ｂａｒｒ−Ｖｉｒ
ｕｓ ）、又は西ドイツ国特許公開公報第５２４５６Ｓ
５号明細書に記載されている試薬である。融合はクーラ
ー （Ｋｏｅｈｌｅｒ ）及びミルスタイン（Ｍｉｌｓｔ、
ｓｉｎ ）の公知方法（ネイチャー（Ｎａｚｕｒｅ ）
２５６（１９７５）４９５−４９７）により行なわ
れる。この際形成る、雑ａ＃Ｉ胞は常法で、例えば市販
の細胞選別機の使用下にクローニングされかつ所望のモ
ノクロナール抗体を形成る、得られたクローンを培養る
、。雑種細胞の癌様増殖に基づきこれを更に無期培養し
、所望のモノクロナール抗体を任意の鷲で産出る、。
本発明による測定方法にはモノクロナール抗体はそのも
のとして、又はその相応る、免疫学的特性を有る、断片
（Ｆａｂ−断片）全使用る、ことができる。従って、“
モノクロナール抗体”という概念はこの際断片とも解さ
れる。完全な抗体並びにその断片は不動態形で使用され
つる。
のとして、又はその相応る、免疫学的特性を有る、断片
（Ｆａｂ−断片）全使用る、ことができる。従って、“
モノクロナール抗体”という概念はこの際断片とも解さ
れる。完全な抗体並びにその断片は不動態形で使用され
つる。
アルファーアミラーゼそのものの測定はこのために公知
の方法により行なわれる。本発明によるモノクロナール
抗体の組合せは、選択的に部数型のアルファーアミラー
ゼを阻害し、すなわちそれを酵素活性測定から膵臓酵素
を害る、ことなく除くので、モノクロナール抗体の存在
でアルファーアミラーゼ−測定の際に得られる（＊は、
膵臓酵素のみに帰属る、活性に相当る、。
の方法により行なわれる。本発明によるモノクロナール
抗体の組合せは、選択的に部数型のアルファーアミラー
ゼを阻害し、すなわちそれを酵素活性測定から膵臓酵素
を害る、ことなく除くので、モノクロナール抗体の存在
でアルファーアミラーゼ−測定の際に得られる（＊は、
膵臓酵素のみに帰属る、活性に相当る、。
本発明に依る方法はアルファーアミラーゼの検出のため
の系を用いて実施る、ことが有利であり、この系は分子
中に４〜７個のグルコース基を有る、マルトポリオース
、マルトースホスホリラーゼ、β−ホスホグルコムター
ゼ、グルコース−６−ホス７エートデヒドロデナーゼ及
びＮＡＤを含有る、。
の系を用いて実施る、ことが有利であり、この系は分子
中に４〜７個のグルコース基を有る、マルトポリオース
、マルトースホスホリラーゼ、β−ホスホグルコムター
ゼ、グルコース−６−ホス７エートデヒドロデナーゼ及
びＮＡＤを含有る、。
アルファーアミ２−ゼの検出のためのもう１つの、本発
明の範囲で有利に使用される系は、分子中に４〜７個の
グルコース基を有る、ニトロフェニルマルトポリオース
及びアルファーグルコシダーゼより成る。
明の範囲で有利に使用される系は、分子中に４〜７個の
グルコース基を有る、ニトロフェニルマルトポリオース
及びアルファーグルコシダーゼより成る。
アルファーアミラーゼのためのもう１つの有利な検出系
は、測定可能な基で変性された澱粉より成る。変性澱粉
という概念は、例えは、測定可能な基で変性されている
、例えは１フアヂバス（Ｐｈａｄｅｂａｓ ）” とし
て市販のファルマツイア社（Ｆｉｒｍａ Ｐｈａｒｍａ
ｚｉａ ） （スウェーデン）の製品並びに西ドイツ国
特許公開公権（Ｄｌ−ｏｓ）第２８１２１５’４号明載
書に記載された製品、並びに分解で変化した澱粉、例え
はカル？キシメチル減粉及び限界デキストリンである澱
粉を包含る、。全てこれらの系は公知であり従ってこの
際詳説しない。
は、測定可能な基で変性された澱粉より成る。変性澱粉
という概念は、例えは、測定可能な基で変性されている
、例えは１フアヂバス（Ｐｈａｄｅｂａｓ ）” とし
て市販のファルマツイア社（Ｆｉｒｍａ Ｐｈａｒｍａ
ｚｉａ ） （スウェーデン）の製品並びに西ドイツ国
特許公開公権（Ｄｌ−ｏｓ）第２８１２１５’４号明載
書に記載された製品、並びに分解で変化した澱粉、例え
はカル？キシメチル減粉及び限界デキストリンである澱
粉を包含る、。全てこれらの系は公知であり従ってこの
際詳説しない。
本発明に依る方法の実施のために試料浴徹を先ず本発明
に依り使用る、抗体と共に培養し、仄いで直接常用のア
ミラーゼ試練に使用る、か、させる。培養の持続期間は
使用した抗体の活性 ゛に依り、殊に０．５〜１
０分間、特に約５分間である。
に依り使用る、抗体と共に培養し、仄いで直接常用のア
ミラーゼ試練に使用る、か、させる。培養の持続期間は
使用した抗体の活性 ゛に依り、殊に０．５〜１
０分間、特に約５分間である。
唾液−アルファーアミラーゼの分離が所望通りに行なわ
れる限りは、モノクロナール抗体の１方は完全な形で、
並びに断片の形でも、固体の担体、例えば免疫吸着紙又
はプラスチック小管もしくはプラスチック管の表面上に
固定して存在る、ことができる。この方法で唾液型のア
ルファーアミラーゼは担体、すなわち固相上に結合され
る。
れる限りは、モノクロナール抗体の１方は完全な形で、
並びに断片の形でも、固体の担体、例えば免疫吸着紙又
はプラスチック小管もしくはプラスチック管の表面上に
固定して存在る、ことができる。この方法で唾液型のア
ルファーアミラーゼは担体、すなわち固相上に結合され
る。
本発明により達成される効果を次の実験により糺明る、
： ｈ ” ８Ａを特異的に最高９３％阻害る、モノクロナ
ール抗体（ＭＡＫ）を（ＮＨ４）２ Ｓｏ ４−沈澱及
びＤＥＡＥ−クロマトグラフィーにより慣用方法で精製
る、。特異的にｈ −ＳＡを形成る、ＭＡＫを同様に精
製る、。溶液の雪ノクロナール抗体１棟又はそれ以上を
ヒトのアミ２−ゼと前もって混合し、この混合物を室温
で５分間培養る、。次いでこの混合物をアミラーゼ試薬
に加え、アミラーゼ活性を測定る、。対照としては緩衝
液とモノクロナール抗体なしに前もって混合させたアミ
２−ゼ金用いる。選択的にモノクロ、ナール抗体１揮又
はそれ以上を７ミラープ試薬の一部（アルファーグルコ
シダーゼーＭ液の）中に前もって装入る、。次いでアミ
ラーゼａａｔ−添加しこれを５分間培養る、＝ｇ応は基
質（Ｇ？ＰＮ！！（ｐ−ニトロフェニルマルトへシタオ
シド）、 テ開始される。
： ｈ ” ８Ａを特異的に最高９３％阻害る、モノクロナ
ール抗体（ＭＡＫ）を（ＮＨ４）２ Ｓｏ ４−沈澱及
びＤＥＡＥ−クロマトグラフィーにより慣用方法で精製
る、。特異的にｈ −ＳＡを形成る、ＭＡＫを同様に精
製る、。溶液の雪ノクロナール抗体１棟又はそれ以上を
ヒトのアミ２−ゼと前もって混合し、この混合物を室温
で５分間培養る、。次いでこの混合物をアミラーゼ試薬
に加え、アミラーゼ活性を測定る、。対照としては緩衝
液とモノクロナール抗体なしに前もって混合させたアミ
２−ゼ金用いる。選択的にモノクロ、ナール抗体１揮又
はそれ以上を７ミラープ試薬の一部（アルファーグルコ
シダーゼーＭ液の）中に前もって装入る、。次いでアミ
ラーゼａａｔ−添加しこれを５分間培養る、＝ｇ応は基
質（Ｇ？ＰＮ！！（ｐ−ニトロフェニルマルトへシタオ
シド）、 テ開始される。
対照としてはモノクロナール抗体なしのグルコシダ〒ゼ
溶液を用いる。第１図は、基質−始法で立鉦した、阻害
りの最終濃度の関数として、結合匣と共に又はそれなし
のｈ −、ｓＡもしくはｈ −ＰＡのチー残余活性金示
す。表１には血清開始法（ＭＡＫ及びアミラーゼを予め
混合）の結果が記載されて（る、。
溶液を用いる。第１図は、基質−始法で立鉦した、阻害
りの最終濃度の関数として、結合匣と共に又はそれなし
のｈ −、ｓＡもしくはｈ −ＰＡのチー残余活性金示
す。表１には血清開始法（ＭＡＫ及びアミラーゼを予め
混合）の結果が記載されて（る、。
′。
図及び表に依り、特異的な阻ＷＭＡＫ並びに特異的にｈ
−’８Ａを結合る、ＭＡＫの組合せは阻害の相乗作用的
上昇ｔ−’）ながすことを示す。この効果は基質には無
関係である。この効果は高分子基質（着色澱粉）におけ
ると同様に短鎖の基鴬、ｆｌａ ｔ ハＧｓＰＮＰ （
ｐ−ニトロフェニルマルトペンタオシド）でも見出され
る。基５ｔｓｚｈ−Ｇ７ＰＮＰにおいてもこの効果はＩ
ｌ！察された。ヒト血清中の唾液アミ２−ゼも２個のＭ
ＡＫにより相乗的に阻害される。
−’８Ａを結合る、ＭＡＫの組合せは阻害の相乗作用的
上昇ｔ−’）ながすことを示す。この効果は基質には無
関係である。この効果は高分子基質（着色澱粉）におけ
ると同様に短鎖の基鴬、ｆｌａ ｔ ハＧｓＰＮＰ （
ｐ−ニトロフェニルマルトペンタオシド）でも見出され
る。基５ｔｓｚｈ−Ｇ７ＰＮＰにおいてもこの効果はＩ
ｌ！察された。ヒト血清中の唾液アミ２−ゼも２個のＭ
ＡＫにより相乗的に阻害される。
本発明のもう１つの目的は、プルファーアミ２−ゼ及び
ｌ！ｌ！欲−アルファーアミラーゼに対すゐそノクロナ
ール抗体の検出のための系を含有る、、体液、特に血清
、十二指腸分泌本、血漿又は尿中の＠液−フルファーア
ミ２−でと共に存在る、膵臓−アルファーアミラーゼの
特異的測定のための試薬であり、これは、唾液酵素を９
７１よりも少なく特異的に阻害る、第１モノクロナール
抗体を、この酵素を１０％よりも少なく阻害る、第２モ
ノクロナール抗−唾液−アルファーアミラーゼ−抗体と
組合せて含有る、ことを特徴とる、。
ｌ！ｌ！欲−アルファーアミラーゼに対すゐそノクロナ
ール抗体の検出のための系を含有る、、体液、特に血清
、十二指腸分泌本、血漿又は尿中の＠液−フルファーア
ミ２−でと共に存在る、膵臓−アルファーアミラーゼの
特異的測定のための試薬であり、これは、唾液酵素を９
７１よりも少なく特異的に阻害る、第１モノクロナール
抗体を、この酵素を１０％よりも少なく阻害る、第２モ
ノクロナール抗−唾液−アルファーアミラーゼ−抗体と
組合せて含有る、ことを特徴とる、。
本発明による試薬中に含有されるアルファーアミラーゼ
の検出のための系及びその他の条件に関しては方法に関
る、前記の実施態様が相応してあてはまる。
の検出のための系及びその他の条件に関しては方法に関
る、前記の実施態様が相応してあてはまる。
本発明は体液中の唾ｆＬ型のフル７アーアミラーゼ（ｈ
−８Ａ）と共に存在る、膵臓−アルファーアミラーゼ（
ｆｉｌＡ）の簡単な、かつ特に連子かな、かつ極めて正
確な測定を可能とし、従って臨床的診断の可能性・を著
しく牧舎る、。
−８Ａ）と共に存在る、膵臓−アルファーアミラーゼ（
ｆｉｌＡ）の簡単な、かつ特に連子かな、かつ極めて正
確な測定を可能とし、従って臨床的診断の可能性・を著
しく牧舎る、。
本発明を次の実施例につき詳説る、。 −１５□
１例１ 第１ ＭＡＫ （ＮＣＡＣＣ８４１２２００４）単独及
び第２ ＭＡＫ（ＮＣＡＣＣ８４１１１３０１）と組合
せて、血清開始法による、ヒトの膵臓−及び唾液−アル
ファーアミラーゼの阻害 ゛試薬：緩Ｗｌ１１ｅ１
．： １００ ｍＭ、ＰＯａ 、−１，５０ｍＭＮａＣ
ｊ 、 ６ ’４ウシ血清アルブミン、ｐ）１７．１ア
ミラーゼ試薬： Ｃ）、ＰＮＰ （ベーリンが一マンハ
イム（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ Ｍａｎｎｈｅｉｎ ） Ｋａｚ、 Ｂｅ５ｚ。
１例１ 第１ ＭＡＫ （ＮＣＡＣＣ８４１２２００４）単独及
び第２ ＭＡＫ（ＮＣＡＣＣ８４１１１３０１）と組合
せて、血清開始法による、ヒトの膵臓−及び唾液−アル
ファーアミラーゼの阻害 ゛試薬：緩Ｗｌ１１ｅ１
．： １００ ｍＭ、ＰＯａ 、−１，５０ｍＭＮａＣ
ｊ 、 ６ ’４ウシ血清アルブミン、ｐ）１７．１ア
ミラーゼ試薬： Ｃ）、ＰＮＰ （ベーリンが一マンハ
イム（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ Ｍａｎｎｈｅｉｎ ） Ｋａｚ、 Ｂｅ５ｚ。
１’ｋｉ ５６８５８９．６７°Ｃ）
ＭＡＫ−１：緩衛液中第１ ＭＡＫ ０．６３ ｍ９／
ｍ１ＭＡＫ−２：緩衝液中ｍ Ｉ ＭＡＫ ０．６３Ｉ
ｎＱ／ｍｌ 及び第２ ＭＡＫ Ｏ，１０５〜／酩 ＭＡＫ−り ：緩衝液中編２ ＭＡＫ ０．１０５〜／
ｍ１ｈ−８Ａ ：緩［ｒ液中約３０００ Ｕ／ ｌ
（Ｇ、ＰＮＰ）ｈ−ＰＡ ：緩衝液巾約３０００Ｕ／
１（（）７ＰＮＰ）実験： ｈ−８Ａ又はｈ−ＰＡ １
００μｌをそのつど＆ ｈｉ液１００μ！又は種々の１
ｖｉＡＫ−酢液と混合し、室温で５分間培養る、。次い
でそのつどこの混合物２５μ！を６７℃で前もって加温
したアミラーゼ試薬１０００μＥに加え、アミラーゼ活
性を指尋通りに測定る、。残余活性は、次の式に依り算
出される： 結果：相応る、ｈ −８Ａの残余活性は第ｉＭＡＫで８
．６％、第２ＭＡＫで９６．９＋％、かつ両方のＭＡＫ
ＩＪで２．７％である。ｈ−ＰＡ残余活性は相、応に１
００．１チ、９９．６チ及び９９．７％である。
ｍ１ＭＡＫ−２：緩衝液中ｍ Ｉ ＭＡＫ ０．６３Ｉ
ｎＱ／ｍｌ 及び第２ ＭＡＫ Ｏ，１０５〜／酩 ＭＡＫ−り ：緩衝液中編２ ＭＡＫ ０．１０５〜／
ｍ１ｈ−８Ａ ：緩［ｒ液中約３０００ Ｕ／ ｌ
（Ｇ、ＰＮＰ）ｈ−ＰＡ ：緩衝液巾約３０００Ｕ／
１（（）７ＰＮＰ）実験： ｈ−８Ａ又はｈ−ＰＡ １
００μｌをそのつど＆ ｈｉ液１００μ！又は種々の１
ｖｉＡＫ−酢液と混合し、室温で５分間培養る、。次い
でそのつどこの混合物２５μ！を６７℃で前もって加温
したアミラーゼ試薬１０００μＥに加え、アミラーゼ活
性を指尋通りに測定る、。残余活性は、次の式に依り算
出される： 結果：相応る、ｈ −８Ａの残余活性は第ｉＭＡＫで８
．６％、第２ＭＡＫで９６．９＋％、かつ両方のＭＡＫ
ＩＪで２．７％である。ｈ−ＰＡ残余活性は相、応に１
００．１チ、９９．６チ及び９９．７％である。
例２
第Ｉ ＭＡＫ （ＮＣＡＣＣ８４１２２００３）及び／
又は第２ ＭＡＫ （ＮＣＡＣＣ８４１１１３０１）、
血清開始法によるアミラーゼの阻害 試薬： ＭＡＫ−１及びＭＡＫ−’ｌが変化る、たけで
、例１の場合と同様 ＭＡＫ−１’ ：緩衝液中Ｍ Ｉ ＭｐＪＣＯ，５２５
ｗ／ｍｅＭＡＫ−２’ ：緩衝液中編Ｉ ＭＡＫ ０．
５２５■／−及び第２ ＭＡＸ Ｏ，１０５＃／１１１
４実験二例１の場合と同様、−一残余＠性の算出も同様 結果： ｈ−８Ａの残余活性は第ｉＭＡＫで９．１チ、
巣２ＭＡＫで９６．９％、かつ両方の辺ｕ’ｓで２．５
％である。ｈ −ＰＡ残余活性は相応に９９．９ ％
、 ９９．６ ％及び９９．７％である。
又は第２ ＭＡＫ （ＮＣＡＣＣ８４１１１３０１）、
血清開始法によるアミラーゼの阻害 試薬： ＭＡＫ−１及びＭＡＫ−’ｌが変化る、たけで
、例１の場合と同様 ＭＡＫ−１’ ：緩衝液中Ｍ Ｉ ＭｐＪＣＯ，５２５
ｗ／ｍｅＭＡＫ−２’ ：緩衝液中編Ｉ ＭＡＫ ０．
５２５■／−及び第２ ＭＡＸ Ｏ，１０５＃／１１１
４実験二例１の場合と同様、−一残余＠性の算出も同様 結果： ｈ−８Ａの残余活性は第ｉＭＡＫで９．１チ、
巣２ＭＡＫで９６．９％、かつ両方の辺ｕ’ｓで２．５
％である。ｈ −ＰＡ残余活性は相応に９９．９ ％
、 ９９．６ ％及び９９．７％である。
例３
第１ ＭＡＫ （ＮＣＡＣＣ８４１２２００４）と共に
かつ第２ ＭＡＫ （ＮＣＡＣＣ８４１１１３０１）な
しで、基質開始法によるヒトの唾液−及び膵臓−アルフ
ァーアミラーゼの阻害 試薬：緩衝液（例１におけるものと同様）−ｈ−ｓＡＣ
例１におけるものと同様） ｈ−ＰＡ （例１におけるものと同様）ＭＡＫ−１”
：緩衝液中編ｉ ＭＡＫ 、檜々の濃度ＭＡＫ−２”
：緩ｔｊｆｊ＆中第２ ＭＡＫ 、 ０．５１３１９
／ｆｆ１Ｊアルフアーグルコシダーゼ：アミラーゼＥ薬
から（ベーリンが−マンハ イム、Ｋａｚ、 Ｂｅ５ｚ、 Ｎｕ ５６８５８９ ）
基５Ｉ［：アミラーゼ試薬からＧ、ＰＮＰ実験＝フルフ
ァーグルコシダーゼ８８０μ）に又はｈ−８Ａ ２５μ
！を混合る、。この混合物ｔ−６７℃で５分間培養る、
。次いで基質溶液１００μｌの添加により開始し、かつ
説明通りのアミラーゼ活性測定を行な“ う。対照とじ
そアルファーグルコシダーゼと°、緩衝液２０μ！並び
に相応のア之・ラーゼとの混合物を用いる。ＭＡＫ （
ｓ ） での活性ｔｋＭＡＫ’Ｓなしの活性で割って
、チー残余活性が得られる。
かつ第２ ＭＡＫ （ＮＣＡＣＣ８４１１１３０１）な
しで、基質開始法によるヒトの唾液−及び膵臓−アルフ
ァーアミラーゼの阻害 試薬：緩衝液（例１におけるものと同様）−ｈ−ｓＡＣ
例１におけるものと同様） ｈ−ＰＡ （例１におけるものと同様）ＭＡＫ−１”
：緩衝液中編ｉ ＭＡＫ 、檜々の濃度ＭＡＫ−２”
：緩ｔｊｆｊ＆中第２ ＭＡＫ 、 ０．５１３１９
／ｆｆ１Ｊアルフアーグルコシダーゼ：アミラーゼＥ薬
から（ベーリンが−マンハ イム、Ｋａｚ、 Ｂｅ５ｚ、 Ｎｕ ５６８５８９ ）
基５Ｉ［：アミラーゼ試薬からＧ、ＰＮＰ実験＝フルフ
ァーグルコシダーゼ８８０μ）に又はｈ−８Ａ ２５μ
！を混合る、。この混合物ｔ−６７℃で５分間培養る、
。次いで基質溶液１００μｌの添加により開始し、かつ
説明通りのアミラーゼ活性測定を行な“ う。対照とじ
そアルファーグルコシダーゼと°、緩衝液２０μ！並び
に相応のア之・ラーゼとの混合物を用いる。ＭＡＫ （
ｓ ） での活性ｔｋＭＡＫ’Ｓなしの活性で割って
、チー残余活性が得られる。
結果：第１図は、ｖＰＪ２ＭＡＫと一緒の、及び第２Ｍ
ＡＫなしの場合のｈ −８Ａの、かつ第２ＭＡＫと一緒
のみの場合のｈ −ＦＡの残余活性（チ）と第１ＭＡＫ
の最終濃度の関係を示すグラフである。
ＡＫなしの場合のｈ −８Ａの、かつ第２ＭＡＫと一緒
のみの場合のｈ −ＦＡの残余活性（チ）と第１ＭＡＫ
の最終濃度の関係を示すグラフである。
添付の第１図は、第２ＭＡＫと一緒の又はそれなしの場
合のｈ −ＳＡの、及びｍ ２ ＭＡＫと一緒の場合の
ｈ −ＰＡの残余活性（％）と第１ＭＡＫの濃度との関
係を示すグラフである。
合のｈ −ＳＡの、及びｍ ２ ＭＡＫと一緒の場合の
ｈ −ＰＡの残余活性（％）と第１ＭＡＫの濃度との関
係を示すグラフである。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １、唾液−アルファーアミラーゼを阻害するモノクロナ
ール抗体の存在で、アルファーアミラーゼの検出のため
の系との反応により、体液中の唾液−アルファーアミラ
ーゼと共に存在する膵臓−アルファーアミラーゼを特異
的に測定するために、阻害剤として、唾液酵素を９７％
よりも少なく特異的に阻害する第１モノクロナール抗体
を、この酵素を１０％よりも少なく阻害する第２モノク
ロナール抗−唾液−アルファーアミラーゼ−抗体と組合
せて使用することを特徴とする体液中の膵臓−アルファ
ーアミラーゼの特異的測定法。 ２、第１抗体は唾液酵素を９３％よりも少なくかつ第２
抗体は５％よりも少なく阻害する、特許請求の範囲第１
項に記載の方法。 ３、ＡＪ−マウスを天然の、又は変性した唾液−アルフ
ァーアミラーゼで免疫し、免疫した動物のＢ−リンパ球
を形質転換剤と共に融合し、そうして形成する雑種細胞
をクローニング及び培養し、かつ後者からモノクロナー
ル抗体を単離することによつて得られるモノクロナール
抗体を使用する、特許請求の範囲第１項または第２項に
記載の方法。 ４、第１のモノクロナール抗体として、ＮＣＡＣＣＮｏ
．８４１２２００３又はＮＣＡＣＣＮｏ．８４１２２０
４を使用する、特許請求の範囲第３項記載の方法。 ５、第２モノクロナール抗体として、ＮＣＡＣＣＮｏ．
８４１１１３０１又は８４１１１３０２を使用する、特
許請求の範囲第２項又は第３項に記載の方法。 ６、少なくとも第１モノクロナール抗体５μｇ／ｍｌ及
び少なくとも第２モノクロナール抗体１μｇ／ｍｌを使
用する、特許請求の範囲第２項から第５項までのいずれ
か１項に記載の方法。 ７、少なくとも第１モノクロナール抗体２０μｇ／ｍｌ
及び少なくとも第２モノクロナール抗体５μｇ／ｍｌを
使用する特許請求の範囲第１項から第６項までのいずれ
か１項に記載の方法。 ８、膵臓−アルファーアミラーゼの検出のための系とし
て４〜７個のグルコース基を有するマルトポリオース、
マルトースホスホリラーゼ、β−ホスホグルコムターゼ
、グルコース−６−ホスフェートデヒドロゲナーゼ及び ＮＡＤを使用する、特許請求の範囲第１項から第７項ま
でのいずれか１項に記載の方法。 ９、膵臓−アルファーアミラーゼの検出のための系とし
て、分子中に４〜７個のグルコース単位を有するニトロ
フェニルマルトポリオースをアルファーグルコシダーゼ
と共に使用する、特許請求の範囲第１項から第７項まで
のいずれか１項に記載の方法。 １０、アルファーアミラーゼの検出のための系として測
定し得る基で変性されている澱粉を使用する特許請求の
範囲第１項から第７項までのいずれか１項に記載の方法
。 １１、アルファーアミラーゼの検出のための系及び唾液
−アルファーアミラーゼに対するモノクロナール抗体を
含有する体液中の唾液−アルファーアミラーゼの他に膵
臓−アルファーアミラーゼの特異的測定のための試薬に
おいて、唾液酵素を９７％よりも少なく特異的に阻害す
る第１モノクロナール抗体を、この酵素を１０％よりも
少なく阻害する第２モノクロナール抗−唾液−アルファ
ーアミラーゼ−抗体と組合せて含有することを特徴とす
る体液中の膵臓−アルファーアミラーゼの特異的測定の
ための試薬。 １２、膵臓−アルファーアミラーゼの検出のための系と
して４〜７個のグルコース基を有するマルトポリオース
、マルトースホスホリラーゼ、β−ホスホグルコムター
ゼ、グルコース−６−ホスフェートデヒドロゲナーゼ及
び ＮＡＤを含有する、特許請求の範囲第１１項に記載の試
薬。 １３、膵臓−アルファーアミラーゼの検出のための系と
して４〜７個のグルコース単位を有するニトロフェニル
マルトポリオース及びアルファーグルコシダーゼを含有
する特許請求の範囲第１１項に記載の試薬。 １４、膵臓−アルファーアミラーゼの検出のための系と
して測定可能な基で変性された澱粉を含有する、特許請
求の範囲第１１項に記載の試薬。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE19853525926 DE3525926A1 (de) | 1985-07-19 | 1985-07-19 | Verfahren und reagenz zur spezifischen bestimmung von pankreas-alpha-amylase |
| DE3525926.4 | 1985-07-19 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6222600A true JPS6222600A (ja) | 1987-01-30 |
| JPS632600B2 JPS632600B2 (ja) | 1988-01-19 |
Family
ID=6276259
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP61168213A Granted JPS6222600A (ja) | 1985-07-19 | 1986-07-18 | 体液中の膵臓−アルフア−アミラ−ゼの特異的測定のための方法及び試薬 |
Country Status (16)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5573918A (ja) |
| EP (1) | EP0209154B1 (ja) |
| JP (1) | JPS6222600A (ja) |
| KR (1) | KR910002958B1 (ja) |
| AT (1) | ATE49058T1 (ja) |
| AU (1) | AU561326B2 (ja) |
| CA (1) | CA1276106C (ja) |
| CS (1) | CS270437B2 (ja) |
| DE (2) | DE3525926A1 (ja) |
| DK (1) | DK161169C (ja) |
| ES (1) | ES2000691A6 (ja) |
| FI (1) | FI86441C (ja) |
| IE (1) | IE59301B1 (ja) |
| NO (1) | NO167422C (ja) |
| SU (1) | SU1637670A3 (ja) |
| ZA (1) | ZA865364B (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH03151892A (ja) * | 1989-11-10 | 1991-06-28 | Nippon Shoji Kk | 唾液―α―アミラーゼ活性阻害モノクローナル抗体およびそれを用いる膵臓―α―アミラーゼの分別定量法 |
| JPH04106694U (ja) * | 1991-02-26 | 1992-09-14 | 尚大 西村 | 浄水装置 |
Families Citing this family (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE3621271A1 (de) * | 1986-06-25 | 1988-01-07 | Boehringer Mannheim Gmbh | Verfahren und reagenz zur bestimmung von alpha-amylase |
| DE3903114A1 (de) * | 1989-02-02 | 1990-08-09 | Boehringer Mannheim Gmbh | Verfahren zur bestimmung eines enzyms aus einem isoenzymgemisch sowie hierfuer geeigneter testtraeger und dessen verwendung |
| DE3929355A1 (de) * | 1989-09-04 | 1991-03-07 | Boehringer Mannheim Gmbh | Verfahren zur spezifischen bestimmung von pankreas-(alpha)-amylase |
| JPH11299498A (ja) * | 1998-02-19 | 1999-11-02 | Toyobo Co Ltd | アミラ―ゼアイソザイム活性測定用試薬 |
| RU2671580C2 (ru) * | 2016-06-21 | 2018-11-02 | Государственное Бюджетное Образовательное Учреждение Высшего Профессионального Образования "Амурская Государственная Медицинская Академия" Министерства Здравоохранения Российской Федерации | Объективная оценка наличия тревоги и стресса у беременных путём определения изменения концентрации α-амилазы слюны во время операции кесарево сечение |
Family Cites Families (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
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