NO167422B - Fremgangsmaate og reagens for spesifikk bestemmelse av alfa-amylase fra bukspyttkjertel i kroppsvaesker inneholdende alfa-amylase fra spytt. - Google Patents
Fremgangsmaate og reagens for spesifikk bestemmelse av alfa-amylase fra bukspyttkjertel i kroppsvaesker inneholdende alfa-amylase fra spytt. Download PDFInfo
- Publication number
- NO167422B NO167422B NO862897A NO862897A NO167422B NO 167422 B NO167422 B NO 167422B NO 862897 A NO862897 A NO 862897A NO 862897 A NO862897 A NO 862897A NO 167422 B NO167422 B NO 167422B
- Authority
- NO
- Norway
- Prior art keywords
- amylase
- monoclonal antibody
- enzyme
- pancreas
- salivary
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 36
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 title claims description 21
- 239000004382 Amylase Substances 0.000 title description 24
- 102000013142 Amylases Human genes 0.000 title description 21
- 108010065511 Amylases Proteins 0.000 title description 21
- 235000019418 amylase Nutrition 0.000 title description 21
- 239000007788 liquid Substances 0.000 title description 2
- 239000007921 spray Substances 0.000 title 1
- 102000004139 alpha-Amylases Human genes 0.000 claims abstract description 57
- 108090000637 alpha-Amylases Proteins 0.000 claims abstract description 57
- 229940024171 alpha-amylase Drugs 0.000 claims abstract description 56
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims abstract description 33
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims abstract description 33
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 claims abstract description 33
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 claims abstract description 10
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 claims abstract description 9
- 239000010839 body fluid Substances 0.000 claims abstract description 9
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims abstract description 6
- 230000002183 duodenal effect Effects 0.000 claims abstract description 6
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 claims abstract description 6
- 235000011389 fruit/vegetable juice Nutrition 0.000 claims abstract description 5
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 claims abstract description 5
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims abstract description 4
- 210000003296 saliva Anatomy 0.000 claims description 22
- 210000000496 pancreas Anatomy 0.000 claims description 17
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 claims description 7
- 239000008107 starch Substances 0.000 claims description 7
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 claims description 7
- 102100024295 Maltase-glucoamylase Human genes 0.000 claims description 6
- 108010028144 alpha-Glucosidases Proteins 0.000 claims description 6
- 125000002791 glucosyl group Chemical group C1([C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O1)CO)* 0.000 claims description 6
- 102100031126 6-phosphogluconolactonase Human genes 0.000 claims description 3
- 108010029731 6-phosphogluconolactonase Proteins 0.000 claims description 3
- 108010018962 Glucosephosphate Dehydrogenase Proteins 0.000 claims description 3
- 108010057899 Maltose phosphorylase Proteins 0.000 claims description 3
- 108010026386 Salivary alpha-Amylases Proteins 0.000 abstract description 5
- 102100033770 Alpha-amylase 1C Human genes 0.000 abstract description 4
- 108010029785 Pancreatic alpha-Amylases Proteins 0.000 abstract description 2
- 102100026367 Pancreatic alpha-amylase Human genes 0.000 abstract description 2
- 231100000743 Maximale Arbeitsplatzkonzentration Toxicity 0.000 description 37
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 25
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 11
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 11
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 10
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 7
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 7
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 6
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 6
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 6
- 101100182914 Caenorhabditis elegans mak-1 gene Proteins 0.000 description 5
- 101100022230 Caenorhabditis elegans mak-2 gene Proteins 0.000 description 5
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 5
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 5
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 4
- 230000001131 transforming effect Effects 0.000 description 4
- 108010044467 Isoenzymes Proteins 0.000 description 3
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 3
- NYTOUQBROMCLBJ-UHFFFAOYSA-N Tetranitromethane Chemical compound [O-][N+](=O)C([N+]([O-])=O)([N+]([O-])=O)[N+]([O-])=O NYTOUQBROMCLBJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 3
- 210000004754 hybrid cell Anatomy 0.000 description 3
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 3
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 241000209140 Triticum Species 0.000 description 2
- 235000021307 Triticum Nutrition 0.000 description 2
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 2
- JDNTWHVOXJZDSN-UHFFFAOYSA-N iodoacetic acid Chemical compound OC(=O)CI JDNTWHVOXJZDSN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 2
- OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 100676-05-9 Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OCC1C(O)C(O)C(O)C(OC2C(OC(O)C(O)C2O)CO)O1 OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BFSVOASYOCHEOV-UHFFFAOYSA-N 2-diethylaminoethanol Chemical compound CCN(CC)CCO BFSVOASYOCHEOV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HVBSAKJJOYLTQU-UHFFFAOYSA-N 4-aminobenzenesulfonic acid Chemical compound NC1=CC=C(S(O)(=O)=O)C=C1 HVBSAKJJOYLTQU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000588832 Bordetella pertussis Species 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 229920001353 Dextrin Polymers 0.000 description 1
- 239000004375 Dextrin Substances 0.000 description 1
- 102000004366 Glucosidases Human genes 0.000 description 1
- 108010056771 Glucosidases Proteins 0.000 description 1
- 101000693011 Homo sapiens Pancreatic alpha-amylase Proteins 0.000 description 1
- 241000701044 Human gammaherpesvirus 4 Species 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N Maltose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)OC(O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N 0.000 description 1
- 229920000881 Modified starch Polymers 0.000 description 1
- 239000004368 Modified starch Substances 0.000 description 1
- PCLIMKBDDGJMGD-UHFFFAOYSA-N N-bromosuccinimide Chemical compound BrN1C(=O)CCC1=O PCLIMKBDDGJMGD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 1
- 241000276498 Pollachius virens Species 0.000 description 1
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 1
- 102000013523 Salivary alpha-Amylases Human genes 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 1
- WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K aluminium hydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[OH-].[Al+3] WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 210000004102 animal cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 238000005349 anion exchange Methods 0.000 description 1
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 1
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 125000002057 carboxymethyl group Chemical group [H]OC(=O)C([H])([H])[*] 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 1
- 230000009260 cross reactivity Effects 0.000 description 1
- 235000019425 dextrin Nutrition 0.000 description 1
- 238000006193 diazotization reaction Methods 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 230000009144 enzymatic modification Effects 0.000 description 1
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 238000009655 industrial fermentation Methods 0.000 description 1
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 1
- 239000007928 intraperitoneal injection Substances 0.000 description 1
- 238000001155 isoelectric focusing Methods 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 238000007069 methylation reaction Methods 0.000 description 1
- 235000019426 modified starch Nutrition 0.000 description 1
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 238000006396 nitration reaction Methods 0.000 description 1
- 229920001542 oligosaccharide Polymers 0.000 description 1
- 150000002482 oligosaccharides Polymers 0.000 description 1
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 1
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000005191 phase separation Methods 0.000 description 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 1
- 230000001376 precipitating effect Effects 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 1
- 210000003079 salivary gland Anatomy 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 229950000244 sulfanilic acid Drugs 0.000 description 1
- 230000002195 synergetic effect Effects 0.000 description 1
- 125000000430 tryptophan group Chemical group [H]N([H])C(C(=O)O*)C([H])([H])C1=C([H])N([H])C2=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C12 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/577—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor involving monoclonal antibodies binding reaction mechanisms characterised by the use of monoclonal antibodies; monoclonal antibodies per se are classified with their corresponding antigens
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/34—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving hydrolase
- C12Q1/40—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving hydrolase involving amylase
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/40—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against enzymes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/81—Packaged device or kit
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Immunology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Hematology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Description
Oppfinnelsen vedrører en fremgangsmåte for spesifikk bestemmelse av a-amylase fra bukspyttkjertel i kroppsvæsker som inneholder a-amylase fra spytt, samt et reagens for anvendelse i fremgangsmåten.
a-amylase (E.C.3.2.1.1) nedbryter 1,4-D-glukosidisk bundne oligo- og polysakkarider overveiende gjennom tilfeldig hydrolyse av 1,4-a-glukosidiske bindinger til maltose og malto-oligosakkarider. Enzymet har ved siden av den industri-elle fermentasjonsteknikk, viktig betydning innenfor rammen av klinisk analyse og diagnostikk. Ved tallrike sykdommer forandrer nemlig a-amylase-innholdet seg betydelig i slike kroppsvæsker som serum, urin eller tolvfingertarmsekret. I kroppen forekommer det imidlertid hovedsakelig to a-amylase-enzymer, bukspyttkjertelenzymet og spyttenzymet. Ettersom bare bukspyttkjertelenzymet har diagnostisk betydning, foreligger oppgaven å differensiere analyttisk mellom disse to (ved siden av ytterligere isoenzymer som opptrer sjelden og bare i små mengder). Vanskeligheten består i at begge har flere former med lignende oppbygning og er immunologisk iden-tiske (K. Lorentz, Laboratoriumsblåtter 32: 118 (1982)). For å fjerne aktiviteten til spyttenzymet, er det kjent å anvende adsorpsjon på anionbytter, hemming ved hjelp av et hvete-protein eller elektroforese henholdsvis elektrofokusering. Disse fremgangsmåter er imidlertid enten utilfredsstillende
i sin separasjonsvirkning, eller altfor tungvint for en rutine-diagnostikk. Blant de nevnte metoder er bare den i Clin. Chem. 28/7, 1525-1527 (1982) beskrevne fremgangsmåte for hemming av enzymet av spyttypen ved hjelp av en inhibitor ut-vunnet fra hvetekim forbundet med et akseptabelt tidsforbruk for rutinediagnoser, selektiviteten er imidlertid utilfredsstillende. Også ved den optimale inhibitor-konsentrasjon beholdes ca. 13% av aktiviteten til enzymet av spyttypen, mens aktiviteten til bukspyttkjertel-enzymet reduseres med ca. 81%.
I EP-patentsøknad nr. 84 114 172.4 er det allerede fore-slått å bestemme a-amylasen fra bukspyttkjertel ved siden av cc-amylasen fra spytt, idet man arbeider i nærvær av et monoklonalt antistoff som reagerer med a-amylase fra spytt og oppviser en kryssreaktivitet på 5% eller mindre overfor a-amylase fra spyttkjertel. Ved dette monoklonale antistoff er det ved tilsetning av et utfellingsmiddel også mulig å danne et uoppløselig kompleks med a-amylasen fra spytt, som man kan skille fra oppløsningen slik at bare bukspyttkjertel-enzymet blir tilbake i oppløsningen og kan bestemmes der. Alternativt er det mulig å anvende det monoklonale antistoff i immobilisert form og på denne måte fraskille spyttamylasen. I begge tilfeller er det imidlertid påkrevet å danne en uoppløselig fase og separere denne fra den oppløselige fase.
I DE-patentsøknad nr. 35 00 526.2 er det åpenbaret en ytterligere fremgangsmåte av den angitte type hvor det istedet for det bindende monoklonale antistoff ifølge den nevnte eu-ropeiske patentsøknad anvendes et monoklonalt antistoff som spesifikt hemmer spyttisoenzymet. Derved oppnås det nok en ytterligere forbedring av a-amylase-isoenzymbestemmelsen uten at det må foretas en faseseparasjon, imidlertid utgjorde den maksimalt oppnådde hemming av spyttenzymet mindre enn 97%
slik at bestemmelsen fortsatt var beheftet med en uønsket stor unøyaktighet.
Den oppgave som således ligger til grunn for oppfinnelsen, er å fjerne denne ulempe og tilveiebringe en fremgangsmåte og et reagens som muliggjør en hurtigere og enkel, men mer nøyaktig bestemmelse av a-amylasen fra bukspyttkjertel i kroppsvæsker inneholdende a-amylasen fra spytt.
Denne oppgave er ifølge oppfinnelsen løst ved en fremgangsmåte for spesifikk bestemmelse av a-amylase fra bukspyttkjertel i kroppsvæsker inneholdende a-amylase fra spytt, særlig i serum, plasma, tolvfingertarmsaft eller urin, ved omsetning med et system for påvisning av a-amylase i nærvær av et monoklonalt antistoff som inhiberer a-amylasen fra spytt, og som er kjennetegnet ved at det som inhibitor anvendes et første monoklonalt antistoff som spesifikt hemmer spyttenzymet til mer enn 70%, men mindre enn 97%, i kombinasjon med et andre monoklonalt anti-spytt-a-amylase-antistoff som hemmer dette enzymet til mindre enn 10%, og at a-amylase fra bukspytt-kjertelen deretter bestemmes ved anvendelse av kjente metoder.
Som det første monoklonale antistoff egner seg for oppfinnelsen særlig hemmende antistoffer med <93% hemming, og som det andre monoklonale antistoff, bindende antistoffer med <5% hemming av spyttenzymet. For å oppnå en hemming over 97% i kombinasjonen ifølge oppfinnelsen, er altså 70%, fortrinnsvis 80%, nedre grenseverdi for hemming.
Fremgangsmåten ifølge oppfinnelsen beror på den svært overraskende iakttagelse av den inhiberende virkning av et monoklonalt antistoff som ikke hemmer spyttenzymet helt til-fredsstillende, forsterkes synergistisk ved hjelp av et ute-lukkende bindende, men praktisk talt ikke eller fullstendig utilfredsstillende hemmende monoklonalt antistoff, og at det kan oppnås en nesten kvantitativ hemming av spyttenzymet ved 100% bevaring av aktiviteten til bukspyttkjertelenzymet. Dessuten lyktes det å redusere inkubasjonstiden vesentlig.
For fremgangsmåten ifølge oppfinnelsen anvendes som første monoklonale antistoff fortrinnsvis de antistoffer som utvinnes av de cellekulturer som er deponert ved NCACC under nummer (99D12) 84122003 og (89E2) 84122004 (National Collec-tion of Animal Cell Culture, Porton Down, GB). Som det andre monoklonale antistoff anvendes fortrinnsvis de bindende antistoffer som er beskrevet i EP-patentsøknad nr. 84 114 172.4, og som utvinnes av de cellekulturer som er deponert ved NCACC under nr. 84111301 og 84111302,idet NCACC 84111301 er særlig foretrukket.
De nødvendige mengder av første og andre antistoff lar seg lett fastslå gjennom få forforsøk for bestemte antistoff-preparater. Fortrinnsvis anvendes minst 5 ug/ml, helst minst 20 ug pr. ml av det første monoklonale antistoff, og minst 1 ug/ml, helst minst 5 ug/ml, av det andre monoklonale antistoff.
Monoklonale antistoffer som ifølge oppfinnelsen er an-vendbare, lar seg erholde gjennom immunisering av forsøksdyr med naturlige eller modifisert spytt-a-amylase, sammensmelting av B-lymfocytter fra de således erholdte immuniserte dyr med transformerende midler, kloning og dyrking av de derved dannede hybridceller som produserer det monoklonale antistoff,
og isolering av dette. Særlig egnede dyr for fremstillingen av spytt-oc-amylase-antistof f et er rotter og mus. Immuniseringen skjer enten med naturlig a-amylase fra menneskespytt,
eller med modifisert spytt-amylase. Dersom naturlig enzym anvendes, så er de elektroforetisk homogene preparater som finnes i handelen egnet. Kjemisk modifisert a-amylase fra spytt lar seg likeså erholde ved hjelp av kjente metoder for enzym-modifisering, slik de er nærmere beskrevet i f.eks. DE utlegningsskrift nr. 25 43 994. Egnet modifiseringsmiddel er eksempelvis N-bromsuccinimid (NBS) under oksydasjon av trypto-fangrupper i proteinet (BBA 143 (1967), s. 462-472), karboksy-metylering med jodacetat (IAA), som hovedsakelig angriper histidin, henholdsvis nitrering med "tetranitrometan (TNM)
(J. Biol. Chem. 238 (1963), s.3307)", samt diazotering med diazotert sulfanilsyre (Meth. Enzymol. 25 (1972), s. 515-531). Dessuten viser enzymet som er modifisert med TNM ved anvendelse av Balb/c-mus, eller det naturlige enzym ved anvendelse av AJ-mus, seg å være best.
Immuniseringen skjer gjennom vanlig administrering av det naturlige eller modifiserte enzym, fortrinnsvis i kombinasjon med hjelpestoff. Som hjelpestoff er aluminiumhydroksyd sammen med Bordetella pertussis foretrukket. Dersom det anvendes naturlig a-amylase fra spytt i AJ-mus eller TNM-modifisert a-amylase fra spytt i Balb/c-mus for immuniseringen, så skjer immuniseringen fortrinnsvis i løpet av minst 9 måneder med minst 7 immuniseringer (injeksjoner intraperitonealt).
Etter inntruffet immunisering fusjoneres B-lymfocyttene fra de immuniserte dyr med transformerende midler etter vanlige metoder. Eksempler på transformerende midler som kan brukes innenfor oppfinnelsesrammen, er myelomceller, transformerende virus som f.eks. Epstein-Barr-virus eller de midler som er beskrevet i DE-patentsøknad nr. 32 45 665. Fusjoner-ingen skjer etter den kjente fremgangsmåte til Koehler und Milstein (Nature, 256 (1975), s. 495-497). De derved dannede hybridceller klones på vanlig måte, f.eks. under anvendelse av en cellesort som er tilgjengelig i handelen, og den erholdte klon som danner det ønskede monoklonale antistoff, dyrkes. På grunn av den kreftlignende vekst av hybridcellene, lar disse seg dyrke videre i ubestemt tid og produserer det ønskede monoklonale antistoff i betydelig mengde.
For bestemmelsesfremgangsmåten ifølge oppfinnelsen kan de monoklonale antistoffer anvendes som sådanne eller i form av de fragmenter (Fab-Fragmente) som oppviser de tilsvarende immunologiske egenskaper. Under begrepet "monoklonalt antistoff" er det her også ment fragmentene. Så vel det full-stendige antistoff som også dets fragmenter kan anvendes i immobilisert form.
Bestemmelsen av a-amylasen som sådan skjer etter de tidligere kjente metoder. Ettersom kombinasjonen av monoklonale antistoffer ifølge oppfinnelsen hemmer a-amylasen av spyttype selektivt og de derved tar bort enzym-aktivitets-bestemmelsen uten å virke inn på bukspyttkjertelenzymet, an-gir de verdier som fås ved a-amylase-bestemmelsen i nærvær av det monoklonale antistoff alene den aktivitet som skriver seg fra bukspyttkjertelenzymet.
Fortrinnsvis gjennomføres fremgangsmåten ifølge oppfinnelsen ved et system for påvisning av a-amylase som inneholder en maltopolyose med 4-7 glukoserester i molekylet, maltosefosforylase, |3-fosfoglukomutase, glukose-6-fosfat-dehydrogenase og NAD.
Et ytterligere anvendt system som er foretrukket innenfor rammen av oppfinnelsen for påvisning av a-amylasen, består av nitrofenylmaltopolyose med 4-7 glukoserester i molekylet og a-glukosidase.
Et ytterligere foretrukket påvirkningssystem for a-amylase består av stivelse som er modifisert med bestemte grupper. Begrepet modifisert stivelse omfatter eksempelvis stivelse som er modifisert med grupper som lar seg bestemme, f.eks. det produkt som foreligger i handelen som "Phadebas" samt det produkt som er beskrevet i DE-patentsøknad nr. 28 12 154, samt stivelse som er forandret i oppbygning, eksempelvis karboksymetylstivelse og grensedekstrin. Alle disse systemene er kjent og behøver derfor ingen nærmere be-skrivelse her.
For utførelsen av fremgangsmåten ifølge oppfinnelsen inkuberes prøvevæsken enten først med de antistoffer som anvendes ifølge oppfinnelsen, og tilsettes deretter direkte til den vanlige amylasetest, eller det tilsettes en blanding av antistoffet og amylasepåvisning.sreagenset uten substrat og det startes opp ved substrattilsetning etter inkubasjonen. Varigheten av inkubasjonstiden er avhengig av aktiviteten til de antistoffer som tilsettes og utgjør fortrinnsvis 0,5-10, særlig ca. 5, minutter.
Dersom en fraskillelse av a-amylasen fra spytt synes ønskelig, kan det ene av de monoklonale antistoffer, enten i fullstendig form eller også i form av fragmentene, også fore-ligge fiksert på en fast bærer, eksempelvis på immunosorptivt papir eller på overflaten av små kunststoffrør henholdsvis -slanger, på denne måte bindes a-amylasen av spyttype på bæreren, altså den faste fase.
Følgende forsøk viser den effekt som oppnås ved oppfinnelsen :
Monoklonale antistoffer (MAK) som spesifikt hemmer h-SA til maksimalt 93%, ble renset ved (NH^)2SO^-felling og DEAE-kromatografi. Likeså ble et MAK, som spesifikt binder h-SA, renset. Det eller de monoklonale antistoffer i opp-løsning ble blandet med human amylase og denne blanding ble inkubert i 5 minutter ved værelsestemperatur. Deretter ble blandingen tilsatt amylase-reagens og amylase-aktiviteten ble målt. Som kontroll tjente amylase som var blitt blandet med buffer uten MAK. Alternativt ble det eller de monoklonale antistoffer i en del av amylasereagenset, a-glukosidase-opp-løsningen, fremlagt. Deretter ble amylase-oppløsningen tilsatt og det ble Inkubert i 5 minutter. Reaksjonen ble startet med substratet, G^PNP (p-nitrofenylmaltoheptaosid). Som kontroll tjente en glukosidaseoppløsning uten MAK. Fig. 1 viser %-restaktiviteten til h-SA henholdsvis h-PA med og uten bindende MAK som funksjon av sluttkonsentrasjonen av hemmende MAK, undersøkt med substratstartmetoden. I tabell 1 er resultatene fra serumstartmetoden (MAK og amylase forhåndsblandet) gjen-gitt.
Av figuren og tabellen fremgår det at kombinasjonen av hemmende, spesifikt MAK, samt spesifikt h-SA-bindende MAK, gir en synergistisk økning av hemmingen. Denne virkningen er uav-hengig av substratet. Den ble til og med funnet ved et høy-molekulært substrat (farvet stivelse) og også ved substrater med kort kjede, f.eksr G^PNP (p-nitrofenylmaltopentaosid). Virkningen ble også iakttatt med substratet eth-G^PNP. Også spyttamylase i humanserum ble hemmet synergistisk ved hjelp av de to MAK-er.
En ytterligere gjenstand ifølge oppfinnelsen er et reagens for spesifikk bestemmelse av a-amylase fra bukspyttkjertel i kroppsvæsker inneholdende a-amylase fra spytt, særlig i serum, tolvfingertarmsaft, plasma eller urin, omfattende et system for påvisning av a-amylase og et monoklonalt antistoff mot a-amylase fra spytt, som er kjennetegnet ved at det inneholder et første monoklonalt antistoff som spesifikt hemmer spyttenzymet til mer enn 70%, men mindre enn 97%, i kombinasjon med et andre monoklonalt anti-spytt-a-amylase-antistoff som hemmer dette enzym til mindre enn 10%, og et reagens for bestemmelse av den fra bukspyttkjertelen uhemmede a-amylase.
Når det gjelder det system som reagenset ifølge oppfinnelsen inneholder for påvisning av a-amylase og de øvrige betingelser, så er utførelsesformen ovenfor passende for ved-kommende fremgangsmåte.
Oppfinnelsen muliggjør en enkel og særlig hurtig og svært nøye bestemmelse av a-amylase fra bukspytt-kjertelen (h-PA) i kroppsvæsker inneholdende a-amylase av spyttypen (h-SA), og forbedrer derved mulighetene ved den kliniske diagnostikk betydelig.
Følgende eksempler forklarer oppfinnelsen ytterligere.
Eksempel 1
Hemming av de humane bukspyttkjertel- og spytt-a-amylaser ved hjelp av 1 MAK (NCACC 84122003) alene og i kombinasjon med 2 MAK (NCACC 84111301), serumstartmetode.
Reagenser: 3_
Buffer: 100 mM P04 , 150 mM NaCl, 6% okseserumalbumin,
PH 7,1
Amylasereagens: G?PNP (Kat. best. nr. 568589, 37°C) MAK-1: 0,63 mg/ml 1. MAK i buffer
MAK-2: 0,63 mg/ml 1. MAK og 0,105 mg/ml 2. MAK i buffer MAK-3: 0,105 mg/ml 2. MAK i buffer
h-SA: ca. 3000 U/l (G?PNP) i buffer
h-PA: ca. 3000 U/l (G?PNP) i buffer
Forsøk: 100 ul h-SA eller h-PA ble blandet med henholdsvis
100 pl buffer eller de ulike MAK-oppløsninger, og inkubert 5 minutter ved værelsestemperatur. Deretter ble 95 ul av hver av disse blandinger tilsatt 1000 ul amylase-reagens som på forhånd var temperert til 37°C, og amylase-aktiviteten bestemt etter anvisning. Restaktiviteten lot seg regne ut etter følgende formel:
Resultat:
De tilsvarende restaktiviteter av h-SA utgjorde med 1. MAK 8,6%, med 2. MAK 96,9% og med begge MAK-er 2,7%. Restaktiviteten av h-PA utgjorde tilsvarende 100,8%, 99,6% og 98,2%.
Eksempel 2
Hemming av a-amylase ved hjelp av 1. MAK (NCACC 84122004) og/eller 2. MAK (NCACC 84111301), serumstartver-s jon.
Reagenser:
Som ifølge eksempel 1, bare MAK-1 og MAK-2 forandret.
MAK-1<1>: 0,525 mg/ml 1. MAK i buffer
MAK-2': 0,525 mg/ml 1. MAK og 0,105 mg/ml
2. MAK i buffer.
Forsøk: som i eksempel 1, likeså når det gjelder beregningen
av %-restaktiviteten.
Resultat:
Restaktiviteten av h-SA utgjorde med 1. MAK 9,1%, med
2. MAK 96,9% og med begge MAK-er 2,5%. Restaktiviteten av h-PA utgjorde tilsvarende 99,9%, 99,6% og 99,7%.
Eksempel 3
Hemming av de humane spytt- og bukspyttkjertel-a-amylase ved hjelp av 1. MAK (NCACC 84122004) med og uten 2. MAK
(NCACC 84111301), substratstartmetode.
Reagenser:
Buffer (som ifølge eksempel 1)
h-SA (som ifølge eksempel 1)
h-PA (som ifølge eksempel 1)
MAK-1'<1>: 1. MAK i buffer, forskjellige konsentrasjoner MAK-2'<1>: 2. MAK i buffer, 0,513 mg/ml
a-glukosidase: fra amylasereagens (Kat. best. nr. 568589) Substrat: G^PNP fra amylasereagens
Forsøk: Til 880 ul a-glukosidase ble 10 ul av en MAK-1''-opp-løsning samt 10 pl MAK-2''-oppløsning eller 10 pl buffer tilsatt. Til dette ble 25 pl h-PA eller h-SA iblandet. Denne blanding ble inkubert i 5 minutter ved 37°C. Deretter fulgte starten ved hjelp av til-sats av 100 pl substratoppløsning og bestemmelsen av amylase-aktiviteten etter anvisning. Som kontroller tjente en blanding av a-glukosidase med 20 pl buffer samt den tilsvarende amylase. Aktiviteten med MAK(er) dividert med aktiviteten uten MAK-er gav %-restaktiviteten.
Resultat:
Fig.l viser %-restaktiviteten som funksjon av sluttkonsentrasjonen av 1. MAK ved h-SA med og uten 2. MAK, og ved h-PA bare med 2. MAK.
Claims (13)
1. Fremgangsmåte for spesifikk bestemmelse av a-amylase fra bukspyttkjertel i kroppsvæsker inneholdende a-amylase fra spytt, særlig i serum, plasma, tolvfingertarmsaft eller urin, ved omsetning med et system for påvisning av a-amylase i nærvær av et monoklonalt antistoff som inhiberer a-amylasen fra spytt,
karakterisert ved at det som inhibitor anvendes et første monoklonalt antistoff som spesifikt hemmer spyttenzymet til mer enn 70%,men mindre enn 97%, i kombinasjon med et andre monoklonalt anti-spytt-a-amylase-antistoff som hemmer dette enzym til mindre enn 10%, og at a-amylase fra bukspyttkjertelen deretter bestemmes ved anvendelse av kjente metoder.
2. Fremgangsmåte ifølge krav 1, karakterisert ved at det første antistoff hemmer spyttenzymet til mindre enn 93% og det andre antistoff hemmer spyttenzymet til mindre enn 5%.
3. Fremgangsmåte ifølge krav 1 eller 2, karakterisert ved at det som første monoklonale antistoff anvendes NCACC nr. 84122003 eller NCACC 84122004.
4. Fremgangsmåte ifølge krav 1 eller 2, karakterisert ved at det som andre monoklonale antistoff anvendes NCACC nr. 84111301 eller 84111302.
5. Fremgangsmåte ifølge kravene 2 til 4, karakterisert ved at det tilsettes minst 5 pg/ ml av det første monoklonale antistoff og minst 1 pg/ml av det andre monoklonale antistoff.
6. Fremgangsmåte ifølge ett av kravene 1 til 5, karakterisert ved at det tilsettes minst 20 pg/ml av det første monoklonale antistoff og minst 5 pg/ml av det andre monoklonale antistoff.
7. Fremgangsmåte ifølge ett av kravene ovenfor, karakterisert ved at det som system for påvisning av a-amylase fra bukspyttkjertel anvendes en maltopolyose med 4-7 glukoserester, maltosefosforylase, |3-fosfoglukomutase, glukose-6-fosfatdehydrogenase og NAD.
8. Fremgangsmåte ifølge et av kravene 1 til 6, karakterisert ved at det som system for påvisning av a-amylase fra bukspyttkjertel anvendes nitrofenylmaltopolyose med 4-7 glukoseenheter i molekylet sammen med a-glukosidase.
9. Fremgangsmåte ifølge et av kravene 1 til 6, karakterisert ved at det som system for påvisning av a-amylase anvendes stivelse som er blitt modifisert med grupper som lar seg bestemme.
10. Reagens for spesifikk bestemmelse av a-amylase fra bukspyttkjertel i kroppsvæsker inneholdende a-amylase fra spytt, særlig i serum, tolvfingertarmsaft, plasma eller urin, og som inneholder et system for påvisning av a-amylase og et monoklonalt antistoff mot a-amylase fra spytt, karakterisert ved at det inneholder et første monoklonalt antistoff som spesifikt hemmer spyttenzymet til mer enn 70%,men mindre enn 97%, i kombinasjon med et andre monoklonalt anti-spytt-a-amylase-antistoff som hemmer dette enzym til mindre enn 10%» og et reagens for bestemmelse av den fra bukspyttkjertelen uhemmede a-amylase.
11. Reagens ifølge krav 10, karakterisert ved at det som system for påvisning av a-amylase fra bukspyttkjertel inneholder en maltopolyose med 4-7 glukoserester, maltosefosforylase, f3-f osf oglukomutase, glukose-6-fosf atdehydro-genase og NAD.
12. Reagens ifølge krav 10, karakterisert ved at det som system for påvisning av a-amylase fra bukspyttkjertel inneholder en nitro-fenylmaltopolyose med 4-7 glukose-enheter og a-glykosidase.
13. Reagens ifølge krav 10, karakterisert ved at det som system for påvisning av a-amylase fra bukspyttkjertel inneholder en stivelse som er modifisert med grupper som lar seg bestemme.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE19853525926 DE3525926A1 (de) | 1985-07-19 | 1985-07-19 | Verfahren und reagenz zur spezifischen bestimmung von pankreas-alpha-amylase |
Publications (4)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| NO862897D0 NO862897D0 (no) | 1986-07-18 |
| NO862897L NO862897L (no) | 1987-01-20 |
| NO167422B true NO167422B (no) | 1991-07-22 |
| NO167422C NO167422C (no) | 1991-10-30 |
Family
ID=6276259
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| NO862897A NO167422C (no) | 1985-07-19 | 1986-07-18 | Fremgangsmaate og reagens for spesifikk bestemmelse av alfa-amylase fra bukspyttkjertel i kroppsvaesker inneholdende alfa-amylase fra spytt. |
Country Status (16)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5573918A (no) |
| EP (1) | EP0209154B1 (no) |
| JP (1) | JPS6222600A (no) |
| KR (1) | KR910002958B1 (no) |
| AT (1) | ATE49058T1 (no) |
| AU (1) | AU561326B2 (no) |
| CA (1) | CA1276106C (no) |
| CS (1) | CS270437B2 (no) |
| DE (2) | DE3525926A1 (no) |
| DK (1) | DK161169C (no) |
| ES (1) | ES2000691A6 (no) |
| FI (1) | FI86441C (no) |
| IE (1) | IE59301B1 (no) |
| NO (1) | NO167422C (no) |
| SU (1) | SU1637670A3 (no) |
| ZA (1) | ZA865364B (no) |
Families Citing this family (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE3621271A1 (de) * | 1986-06-25 | 1988-01-07 | Boehringer Mannheim Gmbh | Verfahren und reagenz zur bestimmung von alpha-amylase |
| DE3903114A1 (de) * | 1989-02-02 | 1990-08-09 | Boehringer Mannheim Gmbh | Verfahren zur bestimmung eines enzyms aus einem isoenzymgemisch sowie hierfuer geeigneter testtraeger und dessen verwendung |
| DE3929355A1 (de) * | 1989-09-04 | 1991-03-07 | Boehringer Mannheim Gmbh | Verfahren zur spezifischen bestimmung von pankreas-(alpha)-amylase |
| JPH085919B2 (ja) * | 1989-11-10 | 1996-01-24 | 日本商事株式会社 | 唾液―α―アミラーゼ活性阻害モノクローナル抗体およびそれを用いる膵臓―α―アミラーゼの分別定量法 |
| JPH04106694U (ja) * | 1991-02-26 | 1992-09-14 | 尚大 西村 | 浄水装置 |
| JPH11299498A (ja) | 1998-02-19 | 1999-11-02 | Toyobo Co Ltd | アミラ―ゼアイソザイム活性測定用試薬 |
| RU2671580C2 (ru) * | 2016-06-21 | 2018-11-02 | Государственное Бюджетное Образовательное Учреждение Высшего Профессионального Образования "Амурская Государственная Медицинская Академия" Министерства Здравоохранения Российской Федерации | Объективная оценка наличия тревоги и стресса у беременных путём определения изменения концентрации α-амилазы слюны во время операции кесарево сечение |
Family Cites Families (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE2543994C3 (de) | 1975-10-02 | 1979-10-11 | Behringwerke Ag, 3550 Marburg | Proteinmodifizierte Verbindungen des schwangerschaftsspezifischen ß, -Glykoproteins und deren Verwendung als Bestandteil von immunisierenden Mitteln |
| DE2812154C3 (de) | 1978-03-20 | 1980-09-11 | Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim | Verfahren zur Bestimmung von a -Amylase |
| JPS5885899A (ja) * | 1981-11-16 | 1983-05-23 | Fujirebio Inc | アミラ−ゼインヒビタ−およびその製造法 |
| DE3245665A1 (de) | 1982-05-04 | 1983-11-10 | Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim | Verfahren zur herstellung permanenter tierischer und humaner zellinien und deren verwendung |
| US4514505A (en) * | 1982-05-21 | 1985-04-30 | The Trustees Of Columbia University In The City Of New York | Monoclonal antibody mixtures and use thereof for enhanced sensitivity immunoassays |
| DE3323245A1 (de) * | 1983-06-28 | 1985-01-10 | Merck Patent Gmbh, 6100 Darmstadt | Verfahren und reagenz zur bestimmung von (alpha)-amylase |
| DE3342736A1 (de) | 1983-11-25 | 1985-06-05 | Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim | Hybridoma-antikoerper |
| DE3404876A1 (de) * | 1984-02-11 | 1985-09-05 | Gödecke AG, 1000 Berlin | Verfahren zur verbesserung der selektiven aktivitaetshemmung von humaner pankreas- und speichelamylase sowie eine hierfuer geeignete inhibitorzubereitung |
| DE3500526A1 (de) | 1985-01-09 | 1986-07-10 | Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim | Spezifisch hemmender s-amylase-mak |
-
1985
- 1985-07-19 DE DE19853525926 patent/DE3525926A1/de not_active Withdrawn
-
1986
- 1986-07-14 KR KR1019860005664A patent/KR910002958B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1986-07-15 DK DK336586A patent/DK161169C/da not_active IP Right Cessation
- 1986-07-17 CS CS865451A patent/CS270437B2/cs not_active IP Right Cessation
- 1986-07-18 AT AT86109899T patent/ATE49058T1/de not_active IP Right Cessation
- 1986-07-18 NO NO862897A patent/NO167422C/no not_active IP Right Cessation
- 1986-07-18 FI FI862975A patent/FI86441C/fi not_active IP Right Cessation
- 1986-07-18 ES ES8600378A patent/ES2000691A6/es not_active Expired
- 1986-07-18 IE IE192086A patent/IE59301B1/en not_active IP Right Cessation
- 1986-07-18 EP EP86109899A patent/EP0209154B1/de not_active Expired
- 1986-07-18 ZA ZA865364A patent/ZA865364B/xx unknown
- 1986-07-18 CA CA000514128A patent/CA1276106C/en not_active Expired - Lifetime
- 1986-07-18 JP JP61168213A patent/JPS6222600A/ja active Granted
- 1986-07-18 AU AU60312/86A patent/AU561326B2/en not_active Ceased
- 1986-07-18 DE DE8686109899T patent/DE3667858D1/de not_active Expired - Lifetime
- 1986-07-18 SU SU4027915A patent/SU1637670A3/ru active
-
1991
- 1991-09-19 US US07/762,646 patent/US5573918A/en not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| ATE49058T1 (de) | 1990-01-15 |
| AU6031286A (en) | 1987-02-12 |
| EP0209154B1 (de) | 1989-12-27 |
| CS545186A2 (en) | 1989-11-14 |
| ES2000691A6 (es) | 1988-03-16 |
| DK161169B (da) | 1991-06-03 |
| IE59301B1 (en) | 1994-02-09 |
| NO167422C (no) | 1991-10-30 |
| JPS632600B2 (no) | 1988-01-19 |
| IE861920L (en) | 1987-01-19 |
| FI86441C (fi) | 1992-08-25 |
| DK161169C (da) | 1991-11-18 |
| SU1637670A3 (ru) | 1991-03-23 |
| EP0209154A1 (de) | 1987-01-21 |
| DK336586D0 (da) | 1986-07-15 |
| CS270437B2 (en) | 1990-06-13 |
| NO862897L (no) | 1987-01-20 |
| DK336586A (da) | 1987-01-20 |
| KR870001471A (ko) | 1987-03-14 |
| FI862975A0 (fi) | 1986-07-18 |
| DE3525926A1 (de) | 1987-01-29 |
| CA1276106C (en) | 1990-11-13 |
| KR910002958B1 (ko) | 1991-05-11 |
| ZA865364B (en) | 1987-03-25 |
| FI86441B (fi) | 1992-05-15 |
| US5573918A (en) | 1996-11-12 |
| AU561326B2 (en) | 1987-05-07 |
| NO862897D0 (no) | 1986-07-18 |
| FI862975A (fi) | 1987-01-20 |
| DE3667858D1 (de) | 1990-02-01 |
| JPS6222600A (ja) | 1987-01-30 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JPH06113832A (ja) | ジゴキシンに対し高い親和性を有するモノクローナル抗体を産生するハイブリッドセルライン及びその製造法 | |
| US4945043A (en) | Process and reagent for the determination of α-amylase | |
| NO167422B (no) | Fremgangsmaate og reagens for spesifikk bestemmelse av alfa-amylase fra bukspyttkjertel i kroppsvaesker inneholdende alfa-amylase fra spytt. | |
| US4939082A (en) | Process and monoclonal antibody for the specific determination of pancreas alpha-amylase in the presence of saliva alpha-amylase | |
| NO841993L (no) | Immunologiske metoder for paavisning av maligne celler med metastatisk celleaktivitet, samt preparater for utfoerelse av slike metoder | |
| JP2925117B2 (ja) | 体液中の唾液アルファアミラーゼを除く膵液アルファアミラーゼを特異的に定量する方法および試薬 | |
| Xu et al. | Separate site catalysis by pyruvate phosphate dikinase as revealed by deletion mutants | |
| Friedman et al. | Determination of monoclonal antibody-induced alterations in Na+/K+-ATPase conformations using fluorescein-labeled enzyme | |
| JPH0970288A (ja) | 新規なアルカリホスファターゼ | |
| Hughes et al. | Trypsin modifies the activity of adenylate cyclase from normal, malignant and hybrid mammalian cells | |
| JPH11299498A (ja) | アミラ―ゼアイソザイム活性測定用試薬 | |
| JP2516011B2 (ja) | モノクロ−ナル抗体 | |
| BORHAN et al. | Activation of chymotrypsinogen by boar acrosin and its prevention by antiboar acrosin rabbit γ-globulins | |
| JPH07165798A (ja) | ５−ジヒドロテストステロン特異性モノクロナール抗体 | |
| Majumdar et al. | A monoclonal antibody which identifies the autophosphorylation domain of autophosphorylating protein kinase 500 | |
| JPH09159670A (ja) | 試料中のリガンド検出法およびそのための試薬 | |
| JPH09328500A (ja) | 膵型α−アミラーゼアイソザイムの測定法 | |
| JP2003250562A (ja) | 耐熱性α−ガラクトシダーゼ遺伝子 | |
| DD242691A5 (de) | Verfahren zur spezifischen Bestimmung von Pankreas-Alpha-Amylase neben Speichel-Alpha-Amylase |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM1K | Lapsed by not paying the annual fees |
Free format text: LAPSED IN JANUARY 2003 |