JPS62190097A - （Ｓ）−α−メチルアリ−ル酢酸の製造方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） 本発明はキシルα−メチルアリール酢酸の製造方法に関
する。更に詳しくは、微生物由来の細胞外リパーゼ（Ｅ
Ｃ３，１，１，３）を用いて鏡像特異性加水分解によっ
てラセミ混合物のような（Ｒ）−及び（Ｓ）−α−メチ
ルアリール酢酸エステル混合物から（Ｓ）−α−メチル
アリール酢酸を製造する方法に関する。

（技術背景） 数々のα−メチルアリール酢酸（２−アリールプロピオ
ン酸）は抗炎症薬として知られており、なかでも最も良
く知られているのはイブプロフェン、フルールビプロフ
ェン、ケトプロフェン及びスブロフェン（全て置換され
たα−メチルベンゼン酢酸である）、並びにナプロキセ
ン（置換されたα−メチルナフタレン酢酸）である。良
く知られているように、α−メヂルアリール酢酸分子は
α−炭素原子でキラルであり、そのために２つの立体異
性体、Ｒ−及びＳ−型（該各型は「シーフェンス・ルー
ル」の適用によって名付けられた、ジャーナル・オブ・
オーガニック・ケミストリー（Ｊ。

ｕｒｎａｌ　　ｏｆ　　Ｏｒｇａｎｉｃ　　Ｃｈｅｍｉ
ｓｔｒｙ）、第３５巻、第２８６３〜７頁、１９７０年
）が存在する。該α−メチルアリール酢酸のＳ−鏡像異
性体は通常Ｒ−鏡像異性体よりも大きな抗炎症活性を有
する［「非ステロイド抗炎症薬（ノン・ステロイダル・
アンチインフラマトリ−・ドラッグス）」、ジェイ・ジ
ー・ロンバーブイノ（編集者）、ジョーン・ウィリー・
アンド・サンプ、ニューヨーク、１９８５年、第３０３
頁］。例えば、６−メトキシ−α−メチル−２−ナフタ
レン酢酸のＳ−鏡像異性体はＲ−鏡像異性体よりも２８
倍大きい抗炎症活性を有する［アイ・ティ・ハリノン等
、ジャーナル・オブ・メディシナル・ケミストリー（Ｊ
ｏｕｒｎａｌ　　。

ｒ　　Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ　　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ）、
第１３巻、第２０３頁、１９７０年］。そこで、Ｓ−鏡
像異性体だけを抗炎症薬ナプロキセンとして用いる（Ｕ
ＳＡＮ及び薬品名のｕｓｐ辞書、１９８６年、第２２２
頁）。

６−メトキシ−α−メチル−２−ナフタレン酢酸を化学
合成すると［アイ・ティ・ハリノン等、ジャーナル・オ
ブ・メディシナル・ケミストリー（Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏ
ｆ　Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ　　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ）、第
１３巻、第２０３頁、１９７０年］、Ｒ−及びＳ−鏡像
異性体のラセミ混合物となる。分割方法がラセミ混合物
から分離した鏡像異性体を得るために用いられる。しか
しながら、該分割方法はわずられしく、かつ、高価であ
った。通常、化学的分割方法は、シンコニジン［ベー・
ビルス等、西独特許（公開）第２，３１９，２４５号（
１９７３年）、米国特許第３，７８７，５８０号、第３
，６５１，１０６号、第３，９０６，０３８号］又はデ
ヒドロアビエチルアミンアセテート［英国特許第１，４
２６゜１８６号（１９７６年）］のような高価なアミン
の使用又は回収が困難であるグルカミン［イー・フェル
ジー等、英国特許出願第２０２５９６８Ａ号（１９８０
年）］のような水溶性アミンの使用によってジアステレ
オマー塩の選択的な化学量論的結晶化を必要とする。ナ
プロキセンは高価であまり有効でない（１）−１０−カ
ンフルスルフォン酸を用いて先駆体の化学的再生によっ
ても製造される［一般発行物、ツチハシ、テトラヘドロ
ン・レターズ（Ｔ　ｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ　　Ｌ　ｅｔ
ｔｅｒｓ）、第５４２７頁、１９８２年）］。一方、無
傷の微生物は（±）−６−メトキシ−α−メチル−２−
ナフタレン酢酸メチルエステルの部分再生に用いられる
［ニス・イリウヂジマ及びエイ・ケイユ、アグリカルチ
ュラル・バイオロジカル・ケミストリー（Ａｇｒｉ、　
Ｂｉｏｌ、　Ｃｈｅｍ、　）、第４５巻、第１３８９頁
、１９８１年］。

あいにく、細胞内酵素濃度が低く、乾燥した細胞（１）
ｍｃ４００　ｍｇ）カ（＋）−ニス５−ル基質ノｆｉｔ
（１６０ｖｇ）を上回るので転化速度は非常に遅い（基
質の１６３％か転化する）。したがって、該方法は得よ
うとする目的を達成することができない。

［発明の記載〕 広くは、本発明は微生物起源の細胞外リパーゼ（ＥＣ３
，１，１，３）を用いて鏡像特異性加水分解によってラ
セミ混合物のような（Ｒ）−及び（Ｓ）−α−メチルア
リール酢酸エステル混合物から成る基質から（Ｓ）−α
−メチルアリール酢酸を製造する方法から成る。

［詳細な記載］ 鏡像特異性加水分解の基質であるα−メチルアリール酢
酸エステルは下記一般式で示される。

Ａｒ−〇１ｌ−Ｃ−ＸＲ ＨＩ ここで、 Ａｒは場合により置換されていてもよいアリール基であ
り、 Ｘは０又はＳであり、そして、 Ｒは場合により置換されていてもよいアルキル乱である
。

Ａｒは好ましくは単環式、多環式又は縮合多環式芳香族
もしくはヘテロ芳香族基であって、芳香族系に１２まで
の炭素原子を有し、好ましくは６〜１２の炭素原子を有
し、フェニル、ビフェニル、ナフチル、チェニル及びピ
ロリルのようなものである。芳香族基は場合によっては
１つ又はそれ以上のニトロ、ハロ、ヒドロキシ、Ｃｌ−
４アルキル、Ｃ３−ａシクロアルキル、ベンジル、ｃｌ
−４アルコキシ、Ｃ１−４アルキルチオ、Ｃｌ−４ハロ
アルキル、Ｃｌ−４ハロアルコキシ、フェノキシ、テノ
イル及びベンゾイル基で置換されている。

本発明の目的に適しているＡｒとしてのアリール基を例
示すれば、フェニル、４−ベンゾイルフェニル、４−イ
ソブチルフェニル、４−（２−テノイル）フェニル、３
−フルオロビフェニル、６−メトキシ−２−ナフチル、
５−ハロ−６−メトキシ−２−ナフチル、６−ヒドロキ
シ−２−ナフチル及び５−ハロ−６−ヒドロキシ−２−
ナフチルである。

Ｘは好ましくはＯである。

Ｒは好ましくは場合によってはフェニルもしくは１つ又
はそれ以上の電子求引性基で置換されている１−１２の
炭素原子を有する直鎖状、分枝鎖状又は環状のアルキル
基であり、該電子求引性基ハ例工ば、ハロ、ニトロ、シ
アノ、ヒドロキシ、Ｃ１−４アルコキシ、Ｃｌ−４アル
キルチオ又は−Ｃ（Ｏ）　ＲＩであり、ここでＲ１はＣ
１−４アルキル、Ｃ８−８シクロアルキル、ヒドロキシ
、Ｃｌ−４アルコキシ、Ｃ８−。シクロアルコキシ、フ
ェノキシ、ベンジルオキシ、ＮＲ”Ｒ’にこでｎｔ及び
Ｒ３は独立して１１、Ｃ３−４アルキル又はＣ８−８シ
クロアルキルもしくは窒素原子とともに５または６員環
を形成し、該環は場合によってはＯ、ＮＨ又はＮ　　（
ＣＩ−４アルキル）］又はＯＭを含むことができ、ここ
でＭはアルカリ金属である。

電子求引性基が存在する場合、それは基の安定性と相容
性がある限り、好ましくはＩ（基のα−又はβ−位にあ
る。Ｒ基が電子求引性基を含有しているエステルは活性
化エステルと称され、該エステルはＲ基が電子求引性基
で置換されていないエステルよりも早く加水分解する。

Ｒとしてのアルキル基を例示すればメチル、エチル、ブ
チル、ヘキシル、オクチル、ドデシル、ベンジル、２−
クロロエチル、２，２．２−トリクロロエチル、２−フ
ルオロエチル、２，２．２−トリフルオロエチル、２−
ブロモエチル、シアツメデル、２−ニトロプロピル、カ
ルボエトキシメチル、メトキシメチル、２−ヒドロキシ
−１，２−ジメトキシカルボニルエチル、２−ヒドロキ
シ−１，２−ジカルボキシエチル、２−ヒ°ドロキン−
１，２−ジェトキシカルボニルエチル等である。

本発明の製造方法は（Ｒ）−及び（Ｓ）−α−メチルア
リール酢酸エステル混合物から成る基質を細胞外微止物
リパーゼ（ＥＣ３，１，１，３）の加水分解酵素力に委
ね、（Ｓ）−α−メチルアリール酢酸を回収することか
ら成る。

得られた（Ｓ）−α−メチルアリール酢酸がナプロキセ
ンのような薬剤の、例えば（Ｓ）−５−ハロ−６−メト
キン−α−メチル−２−ナフタレン酢酸、（Ｓ）−６−
ヒドロキシ−α−メチル−２−ナフタレン酢酸又は（Ｓ
）−５−ハロ−６−ヒドロキシ−α−メチル−２−ナフ
タレン酢酸の先駆体である場合、該先駆体は欧州特許出
願第９５９０１号明細書（１９８３年）に記載の方法に
よってナプロキセンに転化される。

分割される（Ｒ）−及び（Ｓ）−α−メチルアリール酢
酸のエステルは常用の方法によって製造される（例えば
、アイ・ティー・ハリノン及びニス・ハリノン、「コン
ベンゾイウム・オブ・オーガニック・シンセティック・
メソッズ（有機合成方法概論）」、第８章、ウィリー、
ニューヨーク、１９７１年、第２７！頁、参照）。実際
は、α−メチルアリール酢酸及びそのエステルの公知（
非鏡像特異性）合成法は、典型的にはラセミ又はほぼラ
セミに近いＲ−及びＳ−異性体の混合物を生成するので
、本発明の鏡像特異性加水分解のための基質が容易に得
られる。

細胞外微生物リパーゼが鏡像特異性加水分解に触媒作用
を及ぼず機能を果たすことかわかった。

特に該細胞外微生物リパーゼはカンジダ属（Ｃａｎｄｉ
ｄａ）、クモノスカビ属（Ｒｈｉｚｏｐｕｓ）、ケカピ
属（Ｍｕｃｏｒ）、アスペルギルス属（Ａｓｐｅｒｇｉ
ｌｌｕｓ）、ペニシリウムＷＡ（Ｐ　ｅｎｉｃｉｌｌｉ
ｕｍ）、プセウドモナス属（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）
、クロモバクテリウム属（Ｃｈｒｏｍｏｂａｃｔｅｒｉ
ｕｍ）及びゲオトリクム属（Ｇ　ｅｏｔ　ｒ　ｉｃｈ　
ｉ　ｕｍ）の６属の微生物から派生される。特に好まし
くはカンジダ・シリンドラセア（Ｃａｎｄｉｄａ　　ｃ
ｙｌｉｎｄｒａｃｅａ）である［エヌ・トミヅカ等、ア
グリカルチユラル・バイオロジカル・ケミストリー（Ａ
ｇｒｉ、　Ｂｉｏ。

Ｃｈｅｎ＋、　）、第３０巻、第５７６頁、１９６６年
］。

細胞外微生物リパーゼはよく知られており、多くは市販
されている［例えば、「リパーゼス（Ｌｉｐａｓｅｓ）
Ｊのエム・イワイ及びワイ・ツジサカ、第４４３頁、及
びエム・スギウラ、第５０５頁、編集者ベー・ボルフス
トレム及びエイチ・エル・ブロックマン、エルセピア、
ニューヨーク、１９８４年］。例えば、これらは脂肪の
エステル交換反応で工業的に用いられており、油性汚染
物質の除去のための洗濯洗剤に混合されている。これら
を無傷の微生物自体と区別する該リパーゼの１つの顕著
な特徴は、該リパーゼは基質及び生成物の高濃度に対し
て耐性があるということである。例えば、基質及び生成
物による顕著な阻害は見られない。それゆえに、該酵素
加水分解反応は非常に高度の鏡像特異性で高濃度（０，
１〜５Ｍ）で実施できる。

更に、記載された反応条件下で非常に安定であるので、
反応媒体から回収され（例えば、膜フィルターでの濾過
又は類似方法によって）、再利用される。

該リパーゼを製造する微生物は常法にしたがって液体栄
養士で成長さ仕得る。微生物を減菌液体培地に植え付け
、２０℃〜４０℃で１〜３日間交互振とう機上で成長さ
せ得る。

好適なリパーゼ濃度は技術的に通常使用されている範囲
であり、主としてリパーゼのコストと比較して望ましい
転化率に基づく実験によって決定される。約ｔ　ｏ　ｏ
、ｏ　ｏ　ｏ分子量を有するカンジダシリンドラセア（
Ｃａｎｄｉｄａ　　ｃｙｌｉｎｄｒａｃｅａ）リパーゼ
に関して、好適な濃度は約１０−５Ｍ−１ｏ−’Ｍであ
り、代表的には約１０−’Ｍ又は純リパーゼ１０ｘｇ／
ｘ（である。

基質から成る（Ｒ）−及び（Ｓ）−α−メチルアリール
酢酸エステル混合物を濃度０．１〜５Ｍ、代表的には１
〜２Ｍの固体又は液体状態でリパーゼから成る液体媒体
に添加し、鏡像特異性加水分解を生じさせる。液体媒体
は水、微生物の同じ培養ブロース又はその抽出物又は濃
縮物もしくは微生物細胞の懸濁液である。一方、リパー
ゼが溶媒で変性しないならば基質を四塩化炭素、シクロ
ヘキサン、二硫化炭素又はヘキサンのような好適な有機
溶媒に溶解する。更に、基質をポリビニルアルコール又
はプロピレングリコールのような乳化剤を用いて乳化す
る。もちろん、基質とリパーゼとの接触の時間、温度及
び圧力の条件は、当業者に自明であるように、相互に依
存する。通常、常圧で温度は約１０°Ｃ〜約４０℃の範
囲であり、好ましくは最大転化率に対応する範囲（例え
ば、２５〜４０℃）か上限である。媒体のｐＩ−１は約
３〜約８、代表的には約４〜約７の範囲であり、好まし
くは、酸又は塩括の添加によって、もしくはリン緩衝液
のような緩衝溶液の使用によって比較的一定に維持され
る。反応時間は代表的には数時間〜数週間、すなわち４
時間〜３週間であり、さらに代表的には約２時間〜７日
間である。該反応時間は反応の温変及び圧力の変化、基
質及びリパーゼの濃度並びに基質及びリパーゼ自体の性
質によって充分に変え得、そして、このような条件の最
も効果的な活用は当業界に知られた技術によって実施す
ることができる。

鏡像異性体加水分解反応に次いで、Ｓ型に富んだα−メ
チルアリール酢酸及びＲ型に富んだ未反応エステルを酢
酸エチル、塩化メチレン、エチルエーテル及びトルエン
等のような水と混合できない有機溶媒を用いて反応混合
物から抽出する。ついで、Ｓ型に富んだ酸及びＲ型に富
んだエステルは抽出又はクロマトグラフィによって分離
され得別法として、Ｓ型に富んたα−メチルアリール酢
酸を水酸化ナトリウム又は水酸化カリウムの水溶液のよ
うなアルカリ水溶液を用いた抽出によって単離すること
ができる。

Ｓ酸及びＲエステルの分離は、反応混合物を遠心分離又
は濾過し、Ｒエステルである固体を単離することによっ
ても実施され得る。上澄み液又は濾液を酸性化し、Ｓ酸
を得る。

前述の本発明の製造方法は種々の方法に変形及び改良す
ることができるのは当業界で周知のことである。

例えば、リパーゼは慣用技術「「固定化酵素」、医学博
士トリーパン、ウィリー、二ノーヨーク、１９８０年、
参照〕によって固定されることができ（例えば、水溶性
又は水不溶性ポリマー、ケイソウ土のような無機物質等
の上に）、費用軽減のために何°回も再利用し、Ｒエス
テルは再生され、ラセミ化され［例えば、ジェイ・ケニ
ョン及びディ・ピー・ヤング、ジャーナル・オブ・沃ミ
ヵル・ソサイアテイ（Ｊｏｕｒｎａｌ　　ｏｒ　　Ｃｈ
ｅｍｃａｌ　　５ｏｃｉｅｔｙ）、第２１６頁、１９４
０年、参照］そして再利用され、また基質は微結晶粉末
としてリパーゼにさらし、より良い分散性を得る。さら
に、エステル基を開裂しないでエステル基のみを反応液
中で連続的にラセミ化するように、基質及びラセミ化剤
を好適な溶媒に溶解することができる。このような場合
、該製造方法は不せい合成に等しい。界面活性剤（例え
ば、肝汁酸、リン脂質）のようなリパーゼの活性剤及び
安定剤又は乳化剤は、低濃度で［例えば、エヌ・トミザ
キ等、アグリカルチエラル・バイオロジカル・ケミスト
リー（Ａｇｒｉ、　Ｂｉｏｌ、　Ｃｈｅｌｌｌ、　）、
第３０巻、第５７６頁、１９６６年、参照］、混合物に
添加することができ、又活性化エステル基質は［ボダン
スキー等、「ペプチド合成」、第２版、ウィリー、ニュ
ーヨーク、１９７６年、第９９頁〜第１０８頁］、転化
率を増加するために用い得る。さらにリパーゼの突然変
異誘発又は化学的変異を支配する活性部位は触媒能、及
び／又は安定性を改良したリパーゼを製造するために用
いらるＶ　ｍａｘ／　Ｋ　ｍ　ＩＪエンツィマティック
・リアクション・メカニズムス（酵素反応機構）」、シ
ー・ウオルシュ、フリーマン、ニューヨーク、１９７９
年、第３５頁］ 以下の実施例は本発明を示すものであり、特許請求の範
囲を限定するものではない。

（実施例） 実施例１ カンジダ・シリンドラセア（Ｃａｎｄｉｄａ　　ｃｙｌ
ｉｎｄｒａｃｅａ）リパーゼ（１００ＪＦ９、シグマ（
ＳｊｇＩＩＩａ）、Ｌ１７５４、タイプ　■、５００ユ
ニツト／＋９、固体）を０．２Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ８
、０）　Ｉ　ｍＱに懸濁した懸濁液に微細粉末状の（±
）−６−メトキシ−α−メチル−２−ナフタレン酢酸メ
チルエステル２４４ｍ９を添加してＩＭラセミエステル
基質懸洞液とし、及びポリビニルアルコール（分子ｍ　
ｌ　４　。

０００）１００ｍＳＪを加えた。反応混合物を２４℃で
６日間磁気撹拌器で撹拌した。次いで、内容物をＨＣＩ
で酸性化し、酢酸エチルで３回徹底的に抽出した。有機
抽出物を合わせて硫酸ナトリウムで乾燥し、次いで濃縮
乾固した。残渣を５％ＮａＨＣＯ３水溶液に懸局し、ヘ
キサンで抽出し、未反応の（ｒ（）−６−メトキシ−α
−メチル−２−ナフタレン酢酸メチルエステル（１２８
ｍｇ、［α］Ｄ２３＝−４１，３５°（ｃ＝５．３４、
ＣＨＣ１３）を得た。水溶液層をＨＣｌでｐｌ−１２，
０まで酸性化し、次いてジクロロメタンで抽出すること
によって、（Ｓ）−６−メトキシ−α−メチル−２−ナ
フタレン酢酸 （［α］Ｄ”−＋６５．０°、ｃ＝１．６４、ＣｌＩＣ
１３）５８所を得た。

（上記［α］Ｉ）は［α］Ｄを示す。以下同様）実施例
２〜７ 下記表に示した（±）−６−メトキシ−α−メチル−２
−ナフタレン酢酸の異なるエステルを基質として用いた
ことを除いて実施例１の方法を繰り返した。各場合にお
いて、表に示された光学活性の（Ｓ）−６−メトキシ−
α−メチル−２−ナフタレン酢酸を収率良く得た。

実施例８ セライトに固定したカンジダ・シリンドラセア（Ｃａｎ
ｄｉｄａ　　ｃｙｌｉｎｄｒａｃｅａ）リパーゼ（ワイ
・キムテ等、ヨーロピアン・ジャーナル・アプリケイジ
ョン・マイクロバイオロジカル・バイオテクノロジー、
第１７巻、第１０７頁、１９８３年に記載されたような
）をリパーゼとして用いた以外は実施例Ｉの方法を繰り
返し、（Ｓ）−６−メトキシ−α−メチル−２−ナフタ
レン酢酸（［α］！３＝＝＋６Ｑ。

１８°、ｃ＝１．Ｉ、ＣＩ　Ｃ１３）を収率良く得た。

実施例９ アクリルビーズに固定したカンジダ・シリンドラセア（
Ｃａｎｄｉｄａ　　ｃｙｌｉｎｄｒａｃｅａ）リパーゼ
（シグマ）Ｕケイ・ローメン等、テトラヘドロン・レタ
ー（Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ　　Ｌ　ｅｔｔｅｒ）、第
４０７頁、１９８５年コをリパーゼとして用いた以外は
実施例１の方法を繰り返し、（Ｓ）−６−メトキシ−α
−メチル−２−ナフタレン酢酸（［α］Ｄ″’＝＋６３
．８°、ｃ＝１．２、ＣｌＣｌ５）を収率良く得た。

実施例１０ クロモバクテリウム・ビスコスム（Ｃｈｒｏｍｏｂａｃ
ｔｅｒｉｕｍ　　ｖｉｓｃｏｓｕｍ）リパーゼ（タイプ
　刈、シグマ）２５００ユニツトをリパーゼとして用い
た以外は実施例！の方法を繰り返し、光学活性６−メト
キシ−α−メチル−２−ナフタレン酢酸を得た。実施例
１１ プセウドモナス（Ｐ　ｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）　　リボ
プロティン　リパイック（Ｌ　１ｐａｉｃ）　８０　（
アマノ（Δｎａｎｏ）、８００ｕ／ｙｘ）１０＊９をリ
パーゼとして用いた以外は実施例１の方法を繰り返し、
光学活性６−メトキシ−α−メチル−２−ナフタレン酢
酸を得た。

実施例１２ ゲオトリクム・カンジドゥム（ＧｅｏＬｉｃｈｉｕｍ　
　ｃａｎｄｉｄｕｍ）（ＡＴＣＣ３４６１４）リパーゼ
「ワイ・ッジサカ等、アグリカルチュラル・バイオロジ
カル・ケミストリー（Ａｇｒ、　Ｂｉｏｌ、　Ｃｈｅｍ
、　）、第３７巻、第１４５７頁、！９７３年］の精製
品１０ｉ９を用いた以外は実施例１の方法を繰り返し、
光学活性６−メトキシ−α−メチル−２−ナフタレン酢
酸を得た。

実施例１３ ペニシリウム・シクロビウム（Ｐ　ｅｎｉｃｉｌｌｉｕ
ｍ　　ｃｙｃｌｏｐｉｕｍＸＡ　Ｔ　ＣＣ３４６１３）
［エム・イワイ等、アグリカルチュラル・バイオロジカ
ル・ケミストリー（Ａｇｒ、　Ｂｉｏｌ、　Ｃｈｅｍ、
　）、第３９巻、第１０６３頁、１９７５年〕の粗リパ
ーゼ２００ｍｇをリパーゼとして用いた以外は実施例１
の方法を繰り返し、光学活性６−メトキシ−α−メチル
−２−ナフタレン酢酸を得た。

実施例！４ ０．２Ｍリン酸緩衝液（ｐｌ■８．０）１Ｍ（！に、カ
ンシタ・シリンドラセア（Ｃａｎｄｉｄａ　　ｃｙｌｉ
ｎｄｒａｃｅａ）リパーゼ（１１００ユニット／ｍ９）
［ティ・トミヅカ等、アグリカルチュラル・バイオロジ
カル・ケミストリー（Ａｇｒ、　Ｂｉｏｌ、　　Ｃｈｅ
ｍ、　）、第３０巻、第５７６頁、１９６６年］の精製
品１ＯＭｇ及び微粉末状の（±）−６−メト・キシ−α
−メチル−２−ナフタレン酢酸メチルエステル２４４所
を添加し、１Ｍ懸濁液を得た。得られたＬ！濁液を２２
℃で５日間磁気撹拌器でゆっくりと撹拌した。次いで、
反応混合物を＋０００Ｘ９で５分間遠心分離した。

沈澱物をただちに０．２Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ８。

０）で洗浄し、再び遠心分離し、未反応の水不溶性の（
Ｒ）−６−メチキシ−α−メチル−２−ナフタレン酢酸
メチルエステル（９４Ｂ、［α］Ｄ２３＝−７２．３９
°、ｃ＝６．９８、ＣＨＣｌ５）を得た。

上澄み液及び洗浄液を共に３ＮのＨＣＩでｐＨ２。

５まで酸性化し、遠心分離によって沈澱物を得、（ｓ）
−ｅ−メトキシ−α−メチル〜２−ナフタレン酢酸（［
α］Ｄ”＝＋６８．８７°、ｃ＝５．２２、Ｃ）−ＩＣ
Ｉｓ）９６ｘ９を得た。

実施例１５ ０．２Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ８，０）１ｘＱに、粗カン
シタ・シリンドラセア（Ｃａｎｄｉｄａ　　ｃｙｌｉｎ
ｄｒａｃｅａ）リパーゼ（シグマ、ＬＩ７５４、タイプ
■、５００ユニット／ｍｆｌ、固体）５０即及び微粉末
状の（±）−６−メトキシ−α−メチル−２−ナフタレ
ン酢酸２−クロロエチルエステル２９２＋ｙを添加して
ＩＭ！！！濁液とし、ｌＸｌ０−’Ｍメルカプトエタノ
ール及びポリビニルアルコール１ＯＭ９を加えた。

得られた懸濁液を２２℃で４２時間磁気撹拌器でゆっく
りと撹拌した。次いで、反応混合物を１０００Ｘ９で５
分間遠心分離し、沈澱物を０．２Ｍリン酸緩衝駅（ｐＨ
８，０）で洗浄し、再び遠心分離し、未反応の水不溶性
の（Ｒ）−６−メトキシ−α−メチル−２−ナフタレン
酢酸２−クロロエチルエステル（１４０友９、［α］Ｄ
″３＝−２０，５°、ｃ−４，９６、ＣＨＣＬ）を得た
。上澄み液及び洗浄液を共に３ＮのＭ　ＣＩでｐｉ４２
．０まで酸性化し、沈澱物を濾過によって得、（Ｓ）−
６−メトキシ−α−メチル−２−ナフタレン酢酸（［α
］　Ｄ１３　＝　＋６４．２°、ｃ＝３．４９、ＣＣｌ
Ｃ１３）９２１を得た。

実施例Ｉ６ ０．２Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ８，０）１ｍ１２に、カン
シタ・シリンドラセア（Ｃａｎｄｉｄａ　　ｃｙｌｉｎ
ｄｒａｃｅａ）リパーゼ（メイト・サンギａ　（Ｍｅｉ
ｔｏ　　Ｓ　ａｎｇｙｏ）リパーゼ０Ｆ−３６０，３６
０，０００ｕ／９）１０ｚ９及び微粉末状の（±）−６
−メトキシ−α−メチル−２−ナフタレン酢酸２−クロ
ロエチルエステル２９２ｍｇを添加して１Ｍ懸濁液とし
、ｌＸｌ０−’Ｍメルカプトエタノール及びポリビニル
アルコールＩＯｘｇを加えた。得られた懸濁液を２２℃
で４８時間磁気撹拌器でゆっくりと撹拌した。次いで、
反応混合物を濾過し、沈澱物を０．２Ｍリン酸緩衝液（
ｐ）１８．０）で洗浄した。固体は未反応の（Ｒ）−６
−メトキシ−α−メチル−２−ナフタレン酢酸２−クロ
ロエチルエステル（１２０１９、［α］Ｄ８５＝−１６
．５１、ｃ＝７．７３、ＣＨＣｌ３）から成っていた。

濾液及び洗浄液を共に３ＮのＨＣｌでｐ）１２．０まで
酸性化し、濾過によって沈澱物を得、（Ｓ）−６−メト
キシ−α−メチル−２−ナフタレン酢酸（［α］Ｄ”＝
＋　６１　、　１８°、ｃ＝３゜３、ＣＨＣｌ５）６６
ｚｖを得た。

実施例１７〜２４ （±）−６−メトキシ−α−メチル−２−ナフタレン酢
酸の異なるエステルを基質として用いた以外は実施例１
６の方法を繰り返し、（ｓ）−ｅ−メトキシ−α−メチ
ル−２−ナフタレン酢酸を得た。

実施例２５ ０．２Ｍリン酸緩衝液（ｐｉ−Ｉ７．０）４好に、粗カ
ンシタ・シリンドラセア（Ｃａｎｄｉｄａ　　ｃｙｌｉ
ｎｄｒａｃｅａ）リパーゼ（シグマ、Ｌ１７５４、タイ
プ■、５００ユニツト１０、固体）■００所及び（±）
−α−メチル−４−（２−チエニルカルボニル）ベンゼ
ン酢酸メチルエステル（スブロフェンメチルエステル）
２００ｍｇを添加した。得られた懸濁液を２２℃で４８
時間磁気撹拌器でゆっくりと撹拌した。

反応混合物をＩＮのＨＣｌでｐＨ１，０まで酸性化し、
酢酸エチルで３回徹底的に抽出した。有機抽出物を合わ
せて硫酸ナトリウムで乾燥し、次いで、濃縮乾固した。

残渣をシリカゲル（ＭＮ　　Ｋｉｅｓｅｌｇｅｌ　　６
０）カラム（０，８Ｘ　Ｉ　５ｃｍ）でクロマトグラフ
ィ処理した。酢酸エチル−ヘキサン（１：５）から成る
溶媒系でカラムを溶離し、未反応の（Ｒ）−α−メチル
−４−（２−チエニルカルボニル）ベンゼン酢酸メチル
エステル（［αＩＤ”＝−５４’　１−４　７’、ｃ＝
３．９、ＣＨＣｌ３、ｅｅ＞０．９０）及び（Ｓ）−α
−メチル−４−（２−チエニルカルボニル）ベンゼン酢
酸（［αコＤ”＝＋４３．５°、ｃ＝２゜１、ＣＨＣ１
３、ｅｅ＞０．９５）を得た。鏡像異性体過剰ＩＩ（ｅ
ｅ）として示される光学的純度は、キラルランタニドシ
フト試薬、Ｅ’ｕ（ｈｆｃ）−の存在下、メチルエステ
ルのプロトン磁性共鳴分光器によって測定した。

実施例２６ （±）−α−メチル−４−（２−メチルプロピル）−ベ
ンゼン酢酸メチルエステル（イブプロフェンメチルエス
テル）２００ｍｇを基質として用いた以外は実施例２５
の方法を繰り返した。未反応の（Ｒ）−α−メチル−４
−（２−メチルプロピル）ベンゼン酢酸メチルエステル
（［αＩＤ、”＝−４５，１”、ｃ＝５．３、Ｃｌ−Ｉ
Ｃｌ５、ｅｅ＝０．７０）及び（Ｓ）はα歩メチルー４
−（２−メチルプロピル）ベンゼン酢酸（［αＩＤ”＝
＋５０　、４４°、ｃ＝２．７、Ｃｌ−ｌＣｌ１−４ｅ
ｅ＝０．９５）を回収した。

実施例２７ （±）−α−メチルベンゼン酢酸メチルエステル２００
ｍｇを基質として用いた以外は実施例２５の方法を繰り
返した。未反応の（Ｒ）−α−メチルベンゼン酢酸メチ
ルエステル（［α］Ｉ）”＝−６７。

８°、ｃ＝２．２、ＣＩＩ　Ｃ１，、ｅｅ＝０．８０）
及び（Ｓ）−α−メチルベンゼン酢酸（［α］Ｄ２５＝
＋２７　、　４　°　　、　　ｃ＝２．０　　、　　Ｃ
ＨＣｌ３、　　ｅｅ＝０．４５）を回収した。

実施例２８ （±）−２−フルオロ−α−メチル−［１，１′　−ヒ
フェニルコー４＝酢酸メチルエステル（フルルビプロフ
ェンメチルエステル）２００Ｂを基質として用い、カン
ジタシリンドラセア（Ｃａｎｄｉｄａ　　ｃｙｌｉｎｄ
ｒａｃｅａ）リパーゼ（メイト・サンギョ、リパーゼＯ
ｒ’−３６０，３６０，０００ｕ／ｇ）Ｉ　Ｏ０ｍ９を
リパーゼとして用いた以外は実施例２５の方法を繰り返
した。未反応の（Ｒ）−２−フルオロ−α−メチル−［
１，１’　−ビフェニル］−４−酢酸メチルエステル（
［ｆｆ］Ｄ”＝−２１，５°、ｃ＝４．８、Ｃｌ−ＩＣ
ｌ３、ｅｅ＝０．４１）及び（Ｓ）−２−フルオロ−α
メチル−［１，１’　−ビフェニルコー４−酢酸（［α
］Ｄ”−＋２９．７°、ｃ＝２．３、ＣＨＣｌ３、ｅｅ
＝０．６５）を回収した。

実施例２９ （±）−３−ベンゾイル−α−メチルベンゼン酢酸メチ
ルエステル（ケトプロフェンメチルエステル）２００ｘ
ｙを基質として用い、カンジタシリンドラセア（Ｃａｎ
ｄｉｄａ　　ｃｙｌｉｎｄｒａｃｅａ）リパーゼ（メイ
ト・サンギョ、リパーゼ　０Ｆ−３６０，３６０゜００
０　ｕ／ｙ）をリパーゼとして用いた以外は実施例２５
の方法を繰り返した。未反応の（Ｒ）−３−ベンゾイル
−α−メチルベンゼン酢酸メチルエステル（［αコＤ”
＝−／１３．８°、ｃ＝１．６、ＣＨＣｌ３、ｅｅ＝Ｏ
８６０）及び（Ｓ）−３−ベンゾイル−α−メチルベン
ゼン酢酸（［α］Ｄ”＝＋３４゜３°、ｃ＝３．５、Ｃ
１（Ｃ１３、ｅｅ＝０．６０）を回収した。

特許出願人　ライスコンシン・アルムナイ・リサーチ・
ファウンデインヨン

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 （１）微生物由来の細胞外リパーゼ（ＥＣ３．１．１．
   ３）を用いて（Ｒ）−及び（Ｓ）−α−メチルアリール
   酢酸エステル混合物から成る基質を鏡像特異性加水分解
   し、（Ｓ）−α−メチルアリール酢酸を採取することか
   ら成る、（Ｒ）−及び（Ｓ）−α−メチルアリール酢酸
   エステル混合物から成る基質からの（Ｓ）−α−メチル
   アリール酢酸の製造方法。（２）（Ｒ）−及び（Ｓ）−
   α−メチルアリール酢酸エステルがラセミ混合物である
   特許請求の範囲第１項記載の製造方法。 （３）α−メチルアリール酢酸エステルが下記式で示さ
   れる特許請求の範囲第１項または第２項記載の製造方法
   。 ▲数式、化学式、表等があります▼ ［式中、 Ａｒは芳香族系中に炭素原子数１２までを有し、所望に
   よって１つ又はそれ以上のニトロ、ハロ、ヒドロキシ、
   Ｃ＿１＿−＿４アルキル、Ｃ＿３＿−＿６シクロアルキ
   ル、ベンジル、Ｃ＿１＿−＿４アルコキシ、Ｃ＿１＿−
   ＿４アルキルチオ、Ｃ＿１＿−＿４ハロアルキル、Ｃ＿
   １＿−＿４ハロアルコキシ、フェノキシ、テノイル及び
   ベンゾイルの各基で置換されていてもよい単環式、多環
   式又は縮合多環式芳香族基もしくは複素芳香族基であり
   、 ＸはＯ又はＳであり、 Ｒは所望によってフェニル基又は１つ又はそれ以上の電
   子求引性基で置換されていてもよい炭素原子数１〜１２
   の直鎖状、分枝鎖状又は環状アルキル基である。］ （４）Ａｒがフェニル、４−ベンゾイルフェニル、４−
   イソブチルフェニル、４−（２−テノイル）−フェニル
   、３−フルオロビフェニル、６−メトキシ−２−ナフチ
   ル、５−ハロ−６−メトキシ−２−ナフチル、６−ヒド
   ロキシ−２−ナフチル及び５−ハロ−６−ヒドロキシ−
   ２−ナフチルから選ばれたものである特許請求の範囲第
   ３項記載の製造方法。 （５）Ａｒが６−メトキシ−２−ナフチル、５−ハロ−
   ６−メトキシ−２−ナフチル、６−ヒドロキシ−２−ナ
   フチル及び５−ハロ−６−ヒドロキシ−２−ナフチルか
   ら選ばれたものである特許請求の範囲第４項記載の製造
   方法。 （６）ＸがＯである特許請求の範囲第３項〜第５項のい
   ずれかに記載の製造方法。 （７）電子求引性基がハロ、ニトロ、シアノ、ヒドロキ
   シ、Ｃ＿１＿−＿４アルキルチオ、Ｃ＿１＿−＿４アル
   コキシ又は−Ｃ（Ｏ）Ｒ＾１［ここで、Ｒ＾１はＣ＿１
   ＿−＿４アルキル、Ｃ＿３＿−＿６シクロアルキル、ヒ
   ドロキシ、Ｃ＿１＿−＿４アルコキシ、Ｃ＿３＿−＿６
   シクロアルコキシ、フェノキシ、ベンジルオキシ、ＮＲ
   ＾２Ｒ＾３（ここで、Ｒ＾２及びＲ＾３は独立してＨ、
   Ｃ＿１＿−＿４アルキル又はＣ＿３＿−＿６シクロアル
   キルもしくは窒素原子とともに５又は６員環を形成して
   いてもよく、該環は場合によってはＯ、ＮＨ又はＮ−（
   Ｃ＿１＿−＿４アルキル）又は−ＯＭから選ばれたヘテ
   ロ基を含有しており、ここで、Ｍはアルカリ金属である
   ］であり、そして電子求引性基が好ましくはＲ基のα−
   及びβ−位にある特許請求の範囲第３項〜第６項のいず
   れかに記載の製造方法。 （８）基質が活性エステルである特許請求の範囲第１項
   〜第７項のいずれかに記載の製造方法。 （９）リパーゼの活性剤を存在せしめる特許請求の範囲
   第１項〜第８項のいずれかに記載の製造方法。 （１０）リパーゼが固定されている特許請求の範囲第１
   項〜第９項のいずれかに記載の製造方法。 （１１）リパーゼがカンジダ属（Ｃａｎｄｉｄａ）、ク
   モノスカビ属（Ｒｈｉｚｏｐｕｓ）、ケカビ属（Ｍｕｃ
   ｏｒ）、アスペルギルス属（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ）
   、ペニシリウム属（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ）、プセウ
   ドモナス属（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）、クロモバクテ
   リウム属（Ｃｈｒｏｍｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）及びゲオ
   トリクム属（Ｇｅｏｔｒｉｃｈｉｕｍ）から成る属から
   選ばれた微生物からの派生である特許請求の範囲第１項
   〜第１０項のいずれかに記載の製造方法。 （１２）リパーゼがカンジダ属（Ｃａｎｄｉｄａ）の微
   生物からの派生である特許請求の範囲第１１項記載の製
   造方法。 （１３）リパーゼがカンジダ・シリンドラセア（Ｃａｎ
   ｄｉｄａ　ｃｙｌｉｎｄｒａｃｅａ）から由来するもの
   である特許請求の範囲第１２項記載の製造方法。 （１４）基質が（±）−α−メチル−４−（２−メチル
   プロピル）ベンゼン酢酸メチルエステルである特許請求
   の範囲第１３項記載の製造方法。 （１５）基質が（±）−α−メチル−４−（２−メチル
   プロピル）ベンゼン酢酸２−クロロエチルエステルであ
   る特許請求の範囲第１３項記載の製造方法。 （１６）基質が（±）−２−フルオロ−α−メチル−［
   １，１′−ビフェニル］−４−酢酸メチルエステルであ
   る特許請求の範囲第１３項記載の製造方法。 （１７）基質が（±）−２−フルオロ−α−メチル−［
   １，１′−ビフェニル］−１−酢酸２−クロロエチルエ
   ステルである特許請求の範囲第１３項記載の製造方法。 （１８）基質が（±）−３−ベンゾイル−α−メチルベ
   ンゼン酢酸メチルエステルである特許請求の範囲第１３
   項記載の製造方法。 （１９）基質が（±）−３−ベンゾイル−α−メチルベ
   ンゼン酢酸２−クロロエチルエステルである特許請求の
   範囲第１３項記載の製造方法。 （２０）基質が（±）−α−メチル−４−（２−チエニ
   ルカルボニル）ベンゼン酢酸メチルエステルである特許
   請求の範囲第１３項記載の製造方法。 （２１）基質が（±）−α−メチル−４−（２−チエニ
   ルカルボニル）ベンゼン酢酸２−クロロエチルエステル
   である特許請求の範囲第１３項記載の製造方法。 （２２）（Ｒ）−及び（Ｓ）−６−メトキシ−α−メチ
   ル−２−ナフタレン酢酸エステル混合物から成る基質に
   細胞外微生物リパーゼの加水分解酵素力を作用させ、未
   反応（Ｒ）−６−メトキシ−α−メチル−２−ナフタレ
   ン酢酸エステルを分離し、（Ｓ）−６−メトキシ−α−
   メチル−２−ナフタレン酢酸を採取することから成る（
   Ｓ）−６−メトキシ−α−メチル−２−ナフタレン酢酸
   の製造方法。 （２３）基質が（±）−６−メトキシ−α−メチル−２
   −ナフタレン酢酸メチルエステルである特許請求の範囲
   第２２項記載の製造方法。 （２４）基質が（±）−６−メトキシ−α−メチル−２
   −ナフタレン酢酸２−クロロエチルエステルである特許
   請求の範囲第２２項記載の製造方法。 （２５）リパーゼがカンジダ・シリンドラセア（Ｃａｎ
   ｄｉｄａ　ｃｙｌｉｎｄｒａｃｅａ）から由来である特
   許請求の範囲第２２項〜第２４項記載の製造方法。 （２６）リパーゼがメイトー・サンギョー・リパーゼ（
   Ｍｅｉｔｏ　Ｓａｎｇｙｏ　Ｌｉｐａｓｅ）ＯＦ−３６
   ０である特許請求の範囲第２２項〜第２４項記載の製造
   方法。