JPS63173597A - 酵素によるエステル交換反応 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は、生理活性を有する光学活性物質の合成に際し
、その合成経路を短縮化させる光学活性合成中間体、い
わゆるキラル・シントンの酵素的合成法に関するもので
ある。

〔従来技術〕

従来、光学活性な医薬品は、微生物を用いた発酵法、純
粋な有機合成法、もしくは上記工法の併用法によって製
造されてきた。その中で、非天然型の医薬品を１１２造
する場合、上記工法の内、有機合成法と併用法によって
製造されている。有機合成法により、天然型と全く構造
の異なった光学活性医薬品が製造され、又、併用法にお
いては、天然型と類似した構造を有する光学活性医薬品
が製造されている。

この中で、有機合成法は全く新しい構造を持った新型医
薬品を１２造することができるという有利性を持ってい
る反面１合成量発原料を天然の糖やアミノ酸等の比較的
高価な光学活性物質に求め、四に合成段階が一般的に長
いという問題点がある。

これに対して近年、有機合成法の合成段階の短縮化を目
的として光学活性合成中間体（キラルシントン）の効率
的合成がさかんになってきた。これらのキラルシントン
の中で既に販売されているものとしては、β−ブロッカ
−合成中間体である（Ｓ）−ツルケタールや光学活性エ
ポキサイド等がある。

（例） グリセリン　　　　　　　　ツルケタール（拳不斉炭素
） しかし、これらは糖やアミノ酸等の光学活性な天然物よ
り誘心しているだけで、これらキラルシントンの新しい
合成法の開発はされなかった。

最近、人内島、訳註らは、不整脈用剤であるβ−ブロッ
カ−のキラルシントンであるグリセリン誘導体を酵素を
用いて効率良く合成することを報告している［Ａｇｒｉ
ｃ、　１３ｊｏ］、　Ｃｈｅｌｌ、、　４６．１１５３
（１９８２）。

Ａｇｒｉｃ、　ｌ１ｊｏ１．　Ｃｈｅｍ、、　５０．１
６２９（１９８６）、）。しかし、これらの実験では、
酵素は水に溶解した系で行なオ）れでおり、酵素の回収
性、再利用性という点で問題がある。一方、クリバッフ
は、ラセミアルコールを出発原料として固体酵素を有機
溶媒中で懸濁させ、一方のアルコールをエステル化し、
光学活性なエステル、もしくはアルコールを１１）てい
る（Ｊ、　Ａｍ、　（二ｈｃｍ、　Ｓａｃ、、　１０７
．７０７２（１９８５））。しかし、ラセミアルコール
としては、二級アルコールを用いられ、−級アルコール
では高い光学純度のものは得られないと報告されており
、その具体的な実験例は示されていない。

〔［１的〕 本発明は、直鎖もしくは分枝鎖脂肪族ラセミアルコール
のエステル（以下５本文中ラセミエステルと略す）を出
発原料とし、酵素を用いたエステル交換反応により光学
対掌体を効率良く光学分割し、尚且つ、酵素の回収性、
再利用性を向上させる事を目的とする。

〔構　　成〕

本発明によれば、直鎖又は分枝鎖脂肪族ラセミアルコー
ルのエステルとアルコールを酵素懸濁有機溶媒中でエス
テル交換反応を行い、次いで光学活性化合物を分離する
事を特徴とする光学活性物質の分離方法が提供される。

本発明は、酵素の回収性、再利用性を向上させる為に反
応溶媒として酵素が溶解しない非水系有機イ容媒を選択
し、光学分割がより効率よく行なわれる反応として、エ
ステル交換反応に於けるラセミエステルの加アルコール
分解反応を選択したことを特徴とする。尚、クリバッフ
の反応は、エステル交換反応に於けろラセミアルコール
のエステル化反応に相当する。

〔本発明の反応式〕

１１　　　　　　　　酵素　　　　　　　　　１１Ｘ−
０−Ｃ−Ｙ＋Ｚ−ＯＩＩ−−＋Ｘ−０１１＋Ｘ−０−Ｃ
−Ｙ＋Ｚ−ＯＨ＋Ｚ−０−Ｃ−Ｙ 〔クリバッフの反応式〕 ○　　　　　　　　　　　　Ｏ ラセミアルコール （Ｒ，Ｓ）　　　　　　　　　　Ｓアルコール　Ｒエス
テル＋Ｚ−ＯＨ＋Ｚ−○−Ｃ−Ｙ 本発明において、用いられるラセミエステルは以ドの一
般弐Ｈ）及び（ｎ）で示される基本骨格を持っており、
このようなラセミエステルとしては、例えば、２．２〜
ジメチル−１，３−ジオキソラン−４−メタノールのエ
ステル、２，３−エポキシ−１−プロパツールのエステ
ル、２，３−ジクロロ−１−プロパツールのエステル等
が挙げられる。

Ｒ’　　　Ｒ４Ｒｈ　　　　　　０ Ｒ３Ｒ’Ｒ′ 又ハ、−級アノニールの０ステル Ｒ’　　Ｔ＜’　　Ｒｓ 〇＝Ｃ−１く’ 二級アルコールのエステル （但し、１（１からＲ７は、水素、炭素、ハロゲン、酸
素５窒素、硫黄、リン等一種類又はそれ以」二（ｒする
官能基を示すが、不斉炭素は０２位にのみ存在し、Ｃ′
、Ｃ゛は不斉炭素ではない。即ち、一般式（［３の場合
；Ｒ１−１１３の内、少くとも２つは同じ官能基であり
、Ｒ６とＲ’は 同じ官能基 一般式［ＩＴ）の場合、　ｎ１〜Ｒ３の内、少くとも２
つは同じ官能基であり　ｎ５〜Ｒ７の 内、少くとも２つは同し官能基） 本発明で用いられるアルコール（Ｚ−０１１）は不斉炭
素を有してないアルコール、又は、不斉炭素を有してい
るラセミアルコール、又は、光学活性アルコールを示す
。

より具体的には、不斉炭素を有しないアルコールとして
は、炭素数１−１０の直鎖、もしくは分枝鎖脂肪族アル
コールであり、その中で、特に、炭素数３〜６の直鎖脂
肪族アルコールが９ノましい。又。

不斉炭素を有しているラセミアルコールとしては、炭素
＠１−１０の直鎖、もしくは、分枝鎖脂肪族アルコール
や芳香環を有するアルコールである。更に、光学活性ア
ルコールとしては炭素数１〜１０の直鎖、もしくは、分
枝鎖脂肪族アルコールや芳香環を有するアルコールを示
す。光学活性アルコールを使用する場合、そのアルコー
ルの化学構造が本発明特許請求範囲中のラセミアルコー
ルのアルコール部分と異なっていなければならない。

本発明におけろ有機溶媒としては、先に示したアルコー
ル、もしくは他の非水系有機溶媒である。

非水系有機溶媒を具体的に例示すると、ｎ−ペンタン、
ローヘキサン、ｎ−へブタン等の直鎖型炭化水素、イソ
ブタン、インペンタン、２−メチルペンタン等の分枝鎖
型炭化水素、シクロペンタン、シクロヘキサン等の脂環
式炭化水素、二塩化メチレン、クロロホルム、四塩化エ
チレン、ジクロロエタン、トリクロロエタン等の含ハロ
ゲン炭化水素、ベンゼン、トルエン、キシレン等の芳香
族炭化水素、ジエチルエーテル、ｎ−ジブチルエーテル
等の脂肪族エーテル、テトラヒドロフラン、テトラヒド
ロピラン等の脂環式エーテル等を示し、その中でｎ−ヘ
キサン、トルエン、ジエチルエーテル、ｎ−ジブチルエ
ーテルがより適当である。

本発明における酵素は加水分解酵素を示し、より具体的
に例示すると、豚すい臓リパーゼ、キヤンディダ属由来
の酵母リパーゼ、アスペルギルス属、ムコール属、シュ
ードモナス属由来の菌体リパーゼ等のリパーゼ類、又は
豚１１７’　Ｕ由来の二ステラーゼ、又はトリプシン、
キモトリプシン、サブチリシン等のタンパク分解酵素が
挙げられる。

本発明におけるエステル交換反応とは、先に示したラセ
ミエステルを先に示したアルコールで先に示した酵素を
用いて分解する反応、即ち、加アルコール分解反応を示
す。反応式を以下に示す。

（１）不斉炭素を持たないＺ　−Ｏｒ−Ｉの場合○　　
　　　　　　　　　　　　　　０■　　　　　　　酵素
　串　　　　　　　　１１Ｘ−０−Ｃ−Ｙ　＋Ｚ−ＯＨ
−−＋Ｘ−０１（＋　Ｘ−０−Ｃ−Ｙ＋　　Ｚ　−ＯＩ
（十　Ｚ　−０−Ｃ−Ｙ（２）Ｚ−ＯＨがラセミアルコ
ールの場合○　　　　　　　　　　　　　　　　０１１
　　　　　　　　酵素　＄１１ Ｘ−０−Ｃ−Ｙ＋Ｚ−ＯＨ□→Ｘ−○Ｈ＋Ｘ−０−Ｃ−
Ｙラセミエステル　　　　傘Ｒエステル　　傘Ｓエステ
ル（＄Ｒ，Ｓ）　　　　　　　　分解物 ＋Ｚ−○Ｈ＋Ｚ−○−Ｃ−Ｙ （３）７．−０）（が光学活性な場合 Ｏ １１酵素　−１１ Ｘ−０−Ｃ−Ｙ＋Ｚ−０１１□→Ｘ　−０１−Ｉ　＋　
Ｘ　−０−Ｃ−Ｙ＋Ｚ−０１１＋Ｚ−０−Ｃ−Ｙ （但し、傘光学活性物質、Ｒ８：　ラセミ体、ｏｆ（Ｈ
絶対配ＩＩ’ｉｌｉの対掌体、＊Ｓ：絶対配ｌｉ’＋：
　Ｓの対掌体）尚、本発明及びクリバッフの方法におい
ても、反応生成混合物中で必要なのは、アルコール（Ｘ
−（川）とエステ／Ｌ／　（ＸＯ−ＯＣＹ）　テある。

次に、本発明において、酵素反応後、反応生成混合物か
ら光学活性物質を分離する。即ち、エステ／Ｌ／　（Ｙ
ＣＯ−ＯＸ）、もしくはアルコール、（Ｘ−０１１）を
反応系からＩＣ１ｉい純度で分離する。具体的な分離方
法としては、例えば水Ｍ溶もしくは水不溶の有機溶媒と
水との二相系による抽出操作、カラムによる分前操作、
蒸留による分離などが挙げられる。

本発明において、反応系の水分含量は極めて低く、反応
は、実質的に非水系で行なう。具体的には、ラセミエス
テル、アルコール、有機溶媒中に含まれる全水分台）改
は２％（Ｗ／Ｖ）以下であり、更に、０．５％（Ｗ／Ｖ
）以下が望ましい。

本発明におけるラセミアルコールの酵素的エステル交換
反応による光学活性物質の分離における作用機構は以下
のように考える。まず、本反応系に酵素を加えない場合
、ラセミエステルはアルコールとエステル交換反応を起
こさず、反応はガスクロマトグラフィー、高速液体クロ
マトグラフィ　。

−で確認する限り反応は進行しない。この事から、酵素
が反応を進行させる触媒となっている事は明らかである
。更に、ｐ−ニトロフェニルジエチルフォスフェートに
よって酵素活性を完全に失ったリパーゼを用いた場合、
エステル交換反応が全く進行しなかったというクリバッ
フの報告から、酵素タンパクの求核性で反応が進行して
いるのではない事が推定できる。この事から、反応は酵
素の活性化部位で進行している事が推定できる。

前記反応式に示すように、ラセミエステルのうち、−（
のエステルがより多くアルコール（７，−ｏｎ）と反応
し、その加水分解物（Ｘ−〇旧が生じ、又、弓のエステ
ルがエステル交換されずに反応系にそのまま残っている
事から、本発明における反応の作用機構は、以下の３つ
の推論のいずれかであると考えろ。（［）酵素が基質で
あるラセミエステルと複合体を形成する場合、＊Ｈのエ
ステルは複合体を形成し易く、弓のエステルは形成し難
い。それ故、−ｎのエステルは反応し易く弓のエステル
は反応し難い為に、最終生成物はｍｌのエステルの加水
分解物であるアルコール（Ｘ−０１１）と未反応物の傘
Ｓリッチのエステルになる。

（２）酵素とラセミエステルの複合体の形成し易さは−
１くのエステルも傘Ｓのエステルも同程度である。

しかし、その複合体が反応系中に存在するアルコール（
Ｚ−０１１）とエステル交換反応する場合の反応速度が
酵素とｍＲエステルの複合体の方が弓の複合体よりも格
段に速いばあい、最終生成物はＲエステルの加水分解で
あるアルコールと弓エステルになる。

（３）（１）、（２）の協同効果、つまり、酵素と傘Ｒ
のエステルと弓のエステルの複合体の形成し易さの違い
と、各々の複合体のエステル交換反応の進行のし易さの
総和として、先の結果が得られる。

〔効　　果〕

本発明は医薬品合成中間体の効率的製造法の発明であり
、従来技術である糖やアミノ酸を光学活性原料とした合
成法の合成段階を短縮化するものである。

具体的に述べると、本発明によって得られる光学活性物
質は不整脈用剤や血圧降下剤として用いられているβ−
ブロッカ−の光学活性物の合成中間体である。

従来、β−ブロッカ−の合成に際し、天然の光学活性物
質を原料とする場合、Ｄ−マンニトールを用いる方法が
最も有効であると考えられていた。

しかし、Ｄ−マンニトールを出発原料とすると合成中間
体である光学活性ツルケタールまで３段階を要し、その
上、この段階中、鉛化合物を反応試薬として用いろ為、
最終生成物の安全性から考えて好ましくない。

一方、本発明によれば、出発物質をＤ−マンニトールと
比べ非常に安価なラセミのツルケタールとする１１【が
できる。反応段階はエステル化と酵素的エステル交換反
応と２段階必要であるが、どちらも、重金属のような有
害物質を用いることなく安全性の高い方法で光学活性な
ツルケタールを製造することができる。

また、酵素を用いた従来技術では、リパーゼを用い水溶
液中で炭素数３のラセミの脂肪族アルコールのエステル
の加水分解反応において光学活性化合物を得ている。し
かし、この場合、高価な酵素は水に溶解しているため回
収は実質的に不可能であり、従って、酵素は使い捨てで
あり、再利用する１１ｃはできない。

一方、本発明においては、溶媒は有機溶媒である為、酵
素は溶解すること無く懸濁分散の状態で反応は進行する
。更に、水分含量の非常に低い伏態では、酵素は安定で
あり、酵素を回収し、再利用する事ができる。

更に、最近のクリバノラの報告では、エステル交換反応
に於けるラセミアルコールの酵素的エステル化反応によ
り、光学活性な二級アルコールを得ており、−級アルコ
ールについては、否定的な報告がされているが、本発明
においては、エステル交換反応に於いて、ラセミエステ
ルの酵素的アルコール分解により、光学純度の高い二級
アルコールが得られる。また１本発明により二級アルコ
ールを用いた場合においては、更に光学純度の高いもの
を得ることができる。

〔実施例〕

以下、実施例により本発明を更に詳細に説明する。

実施例１ 予め、モレキュラーシーブ３Ａで２昼夜乾燥したｎ−ブ
タノール（ｌｏｇ）にラセミの２，２−ジメチル−１，
３−ジオキソラン−４−メタノールの醋酸エステル（４
ｇ）を加えた。この溶液を２５℃に保ち、五酸化リン存
在ド、２昼夜乾燥したリパーゼ（リバーゼアマノ′Ｐ）
（２ｇ）を加えた。２５℃で１１０時間撹拌し加ブタノ
ール分解率が５８％に達した時点で濾過操作により酵素
を分離した。濾液より未反応の２．２−ジメチル−１，
：ｌ−ジオキソラン−４−メタノールの醋酸エステルを
減圧蒸留によりＱｉｆｉした。このエステルは比旋光度
〔α）Ｄ２８　＝　−０，８７（Ｃ＝　４．５８、エタ
ノール）で光学純ノヲ５９％ｅｅの絶対配置Ｓに富むエ
ステルであった。

分離した酵素を再使用したところ、同様の酵素活性を保
持していた。

実施例２ 予め、モレキュラーシーブ３Ａで２昼夜乾燥したｎ−ブ
タノール（４，５ｇ）に、予め、モレキュラーシーブ３
Ａで２昼夜乾燥したローヘキサン（２０ｍ　Ｑ　）を加
えた溶液にラセミの２，２−ジメチル−１，３−ジオキ
ソラン−４−メタノールの醋酸エステル（４ｇ）を加え
た。この溶液を２５℃に保ち五酸化リン存在下、２昼夜
乾燥したリパーゼ（リバーゼアマノ’Ｐ）（２ｇ）を加
えた。２５℃で１１０時間撹拌し加ブタノール分解率が
６３％に達した時点で濾過操作により酵素を分離した。

濾液より未反応の２，２−ジメチル−１，３−ジオキソ
ラン−４−メタノールの醋酸エステルを減圧蒸留により
屯離した。このエステルは比旋光度〔α）、２８＝−０
，８４（Ｃ＝　４．７５、エタノール）で光学純度５７
％ｅｅの絶対配置Ｓに富むエステルであった。分離した
酵素を再使用したところ、同様の酵素活性を保持してい
た。

実施例３ 予め、モレキュラーシーブ３Ａで２昼夜乾燥したｎ−ブ
タノール（３０ｇ　）にラセミの２．３−エポキシ−１
−プロパツールの醋酸エステル（２，９ｇ　）を加えた
。この溶液を２５℃に保ち、五酸化リン存在下、２昼夜
Ｋｍしたリパーゼ（リパーゼ、“アマノ’　Ｐ）　（０
，３ｇ　）を加えた。２５℃で５４時間撹拌し加ブタノ
ール分解率が５８％に達した時点で濾過操作により酵素
を分離した。濾液より未反応の２，３−エポキシプロパ
ノールの醋酸エステルを減圧蒸留により単離した。

このエステルは比旋光度〔α１Ｄ２８＝１３．８（Ｃ＝
２０．８４゜クロロホルム）で光学純度５１％ｅｅの絶
対配置Ｓに富むエステルであった。分離した酵素を再使
用したところ、同様の酵素活性を保持していた。

実施例４ 【め、モレキュラーシーブ３Ａで２昼夜乾燥したｎ−ブ
タノール（１０ｇ）にラセミの２，３−ジクロロ−１−
プロパツールの醋酸エステル（３，４ｇ）を加えた。こ
の溶液を２５℃に保ち、五酸化リン存在下、２昼夜・ｉ
吃燥した豚すい臓リパーゼ（シグマ社製）（２ｇ）を加
えた。２５℃で２５時間撹拌し加ブタノール分解率が５
９％に達した時点で濾過操作により酵素を分離した。濾
液より未反応の２．３−ジクロロ−１−プロパツールの
醋酸エステルを減圧蒸留により単離した。

このエステルは比旋光度〔α）Ｄ２８＝−９，１（Ｃ＝
　１．０、メタノール）で光学純度５５％ｅｅの絶対配
ｌＩ￥Ｓに富むエステルであった。分離した酵素を再使
用したところ、同様の酵素活性を保持していた。

実施例５ 【め、モレキュラーシーブ３Ａで２昼夜乾燥したｎ−ブ
タノール（１０ｇ　）にラセミの２．２−ジメチル−１
，３−シオソラン−４−メタノールの醋酸エステル（４
ｇ）を加えた。この溶液を２５°Ｃに保ち、五酸化リン
で減圧乾燥したタリバーゼ（田辺製薬製）（２ｇ）を加
える。２５℃で１００時間撹拌し、６０％のエステルが
加溶媒分解された＋＋、ｙ点で、濾過操作により酵素を
分離した。濾液より未反応の２，２−ジメチル−１，３
−ジオキソラン−４−メタノールの醋酸エステルを蒸留
単離した。このエステルは光学活性で実施例１と同様の
結果を与えた。

実施例６ 予め、モレキュラーシーブ３Ａで２昼夜乾燥したラセミ
の２−ブタノール（１０ｇ　）にラセミの２，２−ジメ
チル−１，３−ジオキソラン−４−メタノールの酪酸エ
ステル（４ｇ）を加えた。この溶液を２５℃に保ち、五
酸化リンで減圧乾燥したリパーゼＭ（人好製薬製）（２
ｇ）を加える。２５℃で１００時間撹拌し、６０％のエ
ステルが加溶媒分解された時点で、濾過操作により酵素
を分離した。濾液より未反応の２，２−ジメチル−１，
３−ジオキソラン−４−メタノールの酪酸エステルを蒸
留’ｌ’−Ｍした。このエステルは光学活性で実ｊＭ　
ｆ＆１５と同様の結果を与えた。

実１ノｈ例７ 【め、モレキュラーシーブ３Ａで２昼夜乾燥したラセミ
の２−ブタノール（１０ｇ　）にラセミの２，２−ジメ
チル−１，３−ジオキンラン−４〜メタノールの酪酸エ
ステル（４ｇ）を加えた。この溶液を２５℃に保ち、五
酸化リンで減圧乾燥したオリバーゼ（大阪細菌研究所製
）（２ｇ）を加える。２５℃で２００時間撹拌し、〔；
０％のエステルが加溶媒分解された時点で、濾過操作に
より酵素を分離した。濾液より未反応の２．２−ジメチ
ル−１，３−ジオキソラン−４−メタノールの醋酸エス
テルを蒸留単離した。このエステルは光学活性で実施例
５と同様の結果を与えた。

実施例８ 予め、モレキュラーシーブ３Ａで２昼夜乾燥したイソプ
ロパツール（１０ｇ　）にラセミの２，２−ジメチル−
１、３−ジオキソラン−４−メタノールの酪酸エステル
（４Ｋ）を加えた。この溶液を２５℃に保ち、五酸化リ
ンで減圧乾燥した豚肝臓エステラーゼ（シグマ社製）（
０，２ｇ）を加える。２５℃で１００時間撹拌し、６０
％のエステルが力旧容媒分解された時点で、濾過操作に
より酵素を分離した。濾液より未反応の２．２−ジメチ
ル−１，３−ジオキソラン−４−メタノールの醋酸エス
テルを蒸留単離した。このエステルは光学活性で実施例
５と同様の結果を与えた。

実施例９ 予め、モレキュラーシーブ３Ａで２昼夜乾燥したｎ−プ
ロパノール（１０ｇ）にラセミの２−エチル−２，３−
エポキシ−１−プロパツールの酪酸エステル（３，４ｇ
　）を加えた。この溶液を２５℃に保ち、五酸化リンで
減圧乾燥したリパーゼ（リパーゼ′アマノ’Ｐ）（２ｇ
）を加える。２５℃で５０時間撹拌し、６０％のエステ
ルが加溶媒分解された時点で、濾過操作により酵素を分
離した。濾液より未反応の２−エチル−２，３−エポキ
シ−１−プロパツールの酪酸エステルを蒸留単離した。

このエステルは光学活性で実施例３と同様の結果を与え
た。

手続補正書 昭和６３年４月１４日 特許庁長官　　小　川　邦　夫　　殿　　　　　　　　
燻１、事件の表示 昭和６２年特許願第６７５０号 ２、発明の名称 酵素によるエステル交換反応 ３、補正をする者 事件との関係　　特許出願人 住　所　　東京都墨田区本所−丁目３番７号名　称　　
（６７６）　　ライオン株式会社代表者　　小　林　　
敦 ４、代理人〒１５１ ５、補正命令の日付　　自発 ６、補正によって増加する発明の数　　０７、補正の対
象 明細書の「発明の詳細な説明」の欄 ８、補正の内容 本願明細書中において、以下のとおり補正を行ないます
。

（１）第２頁下から第２行の「（Ｓ）−ツルケタール」
を、「（Ｒ）−ツルケタール」に訂正します。

（２）第３頁第２行乃至下から第１４行の例示反応式及
び化合物名を以下のように訂正します。

ｒ　　　　　　　　　　　ｏＩ３＼ Ｃ：ｎ ルが」に訂正します。

（４）第８頁第３行の「ラセミアルコール」を、「ラセ
ミアルコールエステル」に訂正します。

（５）第８頁第１２行の「四塩化エチレン」を、「四塩
化炭素」に訂正します。

（６）第８頁下から第２行の「チルエーテルが」を、「
チルエーテル、四塩化炭素、ジクロロエタンが」に訂正
します。

（７）第１０頁第３行乃至下から第１２行のｒ　（３）
Ｚ−０）１が光学活性な場合」の例示反応式を以下のよ
うに訂正します。

ミニステル」に訂正します。

（９）第１１頁第６行の「・・・が望ましい。」の後に
、以下の文を追加します。

「又、固相である酵素の水分含斌は０．１〜ＩＯ％（Ｗ
／Ｗ）であり、０．５〜５％（Ｖ／Ｗ）が望ましい。Ｊ （１０）第１３頁末行の「光学活性ツルケタールまで３
段階」を、「光学活性（Ｒ）−ツルケタールまで９段階
」に訂正します。

（１１）第１６頁第８行の「絶対配置」を、［立体配置
」に訂正します。

（１２）第１７頁第６行の「絶対配置」を、「立体配置
」に訂正します。

（１３）第１７頁末行の「比旋光度〔α）、２ｇ、１３
．８Ｊを、「比旋光度〔α１，２＆＝−１３，８Ｊに訂
正します。

（１４）第１８頁第１行の「絶対配置Ｓ」を、「立体配
置Ｒ」に訂正します。

（１５）第１８頁下から第５行の「絶対配置」を、「立
体配置」に訂正します。

（１６）第１９頁第５行乃至第６行、第１９頁下から第
３行、第２０頁第１Ｏ行、第２１頁第２行及び第２１頁
第１４行の「加溶媒分解」を。

「加アルコール分解」に訂正します。

（１７）第２１頁第９行の「２−エチル−」を削除しま
す。

（１８）第２１頁末行の「の結果を与えた。」の後に、
以下の実施例１０を追加します。

「実施例１０

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. （１）直鎖又は分枝鎖脂肪族ラセミアルコールのエステ
   ルとアルコールを酵素懸濁有機溶媒中でエステル交換反
   応を行い、次いで光学活性化合物を分離する事を特徴と
   する光学活性物質の分離方法。