JPS62135476A - 新規抗生物質パママイシン−６０７ - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明はストレプトミセス属の菌株によって生産さｎて
気菌糸誘導活性、抗菌活性、抗ウィルス活性を有する新
規抗生物質パママイシン−６０７並びにその製造方法に
関する。

また１本発明は抗生物質パママイシン−６０７を有効成
分とする抗菌、抗ウィルス剤に関する。

〔従来の技術〕

ストレプトミセス・アルボニガー（Ｓｔｒｅｏｔｏｍｙ
−ｃｅｓ　ａｌｂｏｎｉｇｅｒＪ（以下％Ｓ、アルボニ
ガーと略す〕の生産する抗生物質としては、構造未決定
であるが分子量６２／ｆ示すパママイシン（Ｐａｍａｍ
ｙ　ｃ　ｉ　ｎ　）がＢ、　Ｍ、　ＰＯＧＢＬ　　らに
より「ジャーナル、オプ、アンティビオティクス」３２
巻６７３頁（／り７７年）及び米国特許第ａ、２ｒ　、
ｉ、３り１号明細書に報告さｎている。また同時に、Ｓ
、アルボニガーで生産さｎる抗生物質として１分子１−
Ａｊ夕、６弘り。

Ａ４Ｊのメチレン付加類縁体の存在がＦＤマススペクト
ルの分子イオンピークがら示唆さｎている。

パママイシンはグラム陽性陰性の細菌類および糸状菌に
対して抗菌活性全示し、その作用機作ｄ　ＩＪン酸およ
び核酸塩基類のトランスポートシステムの阻害にあるこ
とが報告さｎている。

〔発明が解決しようとする問題点〕

以上の如＜Ｓ、アルボニガーハμ種のパフマイシン群（
分子量６２／、ｔＪ！、を弘りお工び６乙３）を生産し
ていることが報告さ１ているが、こｎら本菌生産物質の
解明はまだ充分にさｎてなく、それらのｆヒ学構造も未
決定のままであり、生理活性についても十分に知ら九で
いない。

〔問題点を解決するだめの手段〕

本発明者らは、Ｓ、アルボニガーの生産する各種の抗生
物質の探求？１発酵研究所（大阪市淀用区十三本町２丁
目１７番ｒ！号）に保存されこ＼から分譲さｎたストレ
プトミセス・アルボニガー１１０１２７３１株（タイプ
カルチュアんＴｏｅ／−２弘ＩＪＪ’ｉ用い、同菌の液
体培養液を使って詳細に行った。このことにより、今回
、本発明者は。

明らかに新化せ物であるパフマイシン−６０フｆ見出し
、その化学構造を解明することに成功した。

しかも、この新規な抗生物質パママイシン−６０７は、
下記に示す構造と物理化学的性質を有するものであって
、放線菌に対して気菌糸誘導活性１−。

また細菌及びカビに対して抗菌活性全もち、しかも抗ウ
ィルス活性もあることを知見した。

従って、第１の本発明の要旨とするところは下記の構造
式 ％式％ で示さｎる抗生物質パママイシン−１，０７にある。

本発明のパママイシン−６０７の立体１造の詳細は次式
に示す通りである。

の＝ 、−Ｏ 本Ｒ明によるパママイシンーｇ　ｏ　７ｎ的記の式に示
した如く、側釧に三級のアミン基とテトラヒドロ７ラン
環ケ有する新しいタイプのｌｔ員環マクロジオライド化
甘せであり、以下に示す物理化学的性質および生物学的
性質により特徴づけらｎるものである。

（Ａ）融点：油状物質 （８）溶液を調製した直後に測定した旋光変：〔α］　
Ｄ＝＋　２２Ｊ’　　（ｃ　＝　０．２６．メタノール
ノ（０溶解性： アセトン、メタノール、エタノール、酢酸エチル、クロ
ロホルムに易溶、水に難溶。

（Ｄ）呈色反応： ＴＬＯ上ヨウ素、バニリン硫酸、リンモリブデン酸で検
出できる。

（匂紫外線吸収スペクトル： 極〈弱い吸収；　、２　／　ｊ　ｎｍ　（ε弘７０〕（
９赤外線吸収スペクトル：添付図面の第１図に示す通り
である。

溶液法（０ＨＯ１３ｊによる赤外線吸収スペクトルは下
記の特性極大吸収波長を示す。

７７弘０（７）　、ラクトン ２ｒ♂Ｑ〜２２６０ａｎ　　：メチレン、メチル（Ｇ）
パママイシン−６０７・０Ｆ３ＣＯＯＤ　（ａｏｃｚ３
　）の１Ｈ−ＮＭＲスペクトル：添付図面第２図に示す
。

（Ｉ−１）パママイシン−１，０７・０Ｆ３０００Ｄ（
ＯＤＯ／、３）の１５０−ＮＭＦＬスペクトル：添付図
面第３図に示す。

（Ｉ）ハママイシン−ｔ０７の薄層クロマトグラフィー
：次表に示す。

表−１ １し くＪ）ハママインン−６０７の高速液体クロマトグラフ
ィー： 充’Ａ　剤：ゾルパックスＮＨ２ｔＡφ×２ｊＯ。

溶　　　媒：ｎ−ヘプタン−メタノール−ｎ−ブチルア
ミン（２００：／：／） 流　　　量：／ａｔ／分 検出器：　Ｕ　Ｖ　２３０　ｎｍ 温　　　度：　３７℃ 保持時間＝乙、ｒ分 以上、本発明のバママイシン−６０７は、先にＲ，Ｍ、
　ＰＯＧＥＬらによって発見さｎ我々が構造決定したパ
ママイシン（分子量６２１）に比べて、メチル基が１何
歩ない新規物質であることが明らかにさｎた。

本発明のバママイシン−４０７の生物学的性質は後記の
通りである。

（１）抗菌スペクトル 抗生物質パママイシン−６０７の普通栄養寒天平板上で
の各種細菌および糸状菌に対する最小発育阻止濃度は次
の表−２に示すとおりである。

表−２パママイシン−６０７の最少阻止濃変（２）植物
病害防除効果 抗生物質パママイシンー≦０７（ｆｌ植物病害菌及びウ
ィルスに対して単動を示すが後記の試験例１および２に
その効果の例証を示す。

（３）気菌糸誘導活性 放線菌は適切な条件下で基中菌糸から気茅糸を形成する
。この気菌糸の形成と二次代謝産物生産との間に相関関
係があることは丁でにいくつかの萌で知らｎている。放
線菌の細胞分子ヒと二次代謝の制御機構を化学的に明ら
かにする上で気菌糸誘導物質は有用である。

抗生物質ハママイシン−１，０７のＳ、アルボニガー気
菌糸欠損菌株に対する気菌糸誘導活性は後記の表−３に
示したとおりである。

気菌糸欠損菌株に対する気菌糸誘導活性は次の検定法で
測定した。即ち、Ｓ、アルボニガーの正書法より単胞子
分離により得た本石の気菌糸欠損菌株をヒツキー・トレ
スナー寒天培地のプレート上に白金耳で全面に接種し、
その上にサンプル金倉むペーパーディスク（径ｒ　ｖｍ
　）　ｔ−ａ！いた。このプレートｔ−３０℃で３日間
培養後、ペーパーディスク周辺に誘導さバた白色の気菌
糸誘導円の直径を測り、その気菌糸誘導活性とした。

上記の気菌糸誘導活性検定法によると、パママイシン−
４０７はパママイシン（分子量６２１）に較べて明らか
に強い気菌糸誘導活性を示した。

さらに％第２の本発明の要旨とするところは、ストレプ
トミセス属に属して下記の構造式示さする抗生物質バフ
マイシン−６０フｆ生産る菌を培養し、その培養物から
抗生物質パフマシン−６０フｆ採取することを特徴とす
る。抗−物質パママイシン−６０７の製造方法にある。

本発明の方法で用いるパフマイシン−６０フ物質生産菌
の一例には、大阪市の醗酵研究所（Ｉｎ５ｔｉｔｕｔｅ
　Ｆｏｒ　Ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ　、　０８ＡＫＡ
）で保存さｎ、こ＼から分譲さｎ得るストレプトミセス
・アルボニガー（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　ａｌｂｏ
ｎｉｇｅｒ）　Ｉ　ＦＯ７２７３１株がある。このＳ、
アルボニガーＩＦＯ１２７３ｒ株は醗酵研究所のＵＬＩ
ＳＴＯＦＣＵＬＴＵＦＬＥＳＪ第７版（／２♂グ年）２
２頁に記載さｎ、その菌学的性質ｉ　ｓ、ワックスマン
著ｒ　Ｔｈｅ　ＡｃｔｉｎｏｍｙｃｅｔｅｓＪ第２巻、
「０Ｉａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ、　ＦｅｎｔｉｆＩｃ
ａｔｒｏｎ　ａｎｄＤｅｓｃｒｉｐｔｉｏｎｓ　ｏｆ　
Ｇｅｎｅｒａ　ａｎｃｌ　５ｐｅｃｉｅｓＪ　／　７　
／頁（１９≦１年）に記載されたタイプ・カルチュアＡ
　Ｔ　ＯＯ／　２．≠６１のものと一致し、またＳ、ア
ルボニガーはへＴｏｏカタログのｆ　Ｃａｔａｌｏｇｕ
ｅ　ｏｆＲａｃｔｅｒｉａ　　ｐｈａｇｅｓ　＆　ＤＮ
Ａ　　ＶｅｃｔｏｒＪ／　　を版（ｔりｒ！）にも記載
さｎてＡＴＯＯから分譲できるものである。

本発明にいうパフマイシン−６０フ生産菌とに。

抗生物質パフマイシン−１，０フｆ生産しうる微生物で
あｎば、その属１種を問わないが、具体的なものとして
は放線菌に属する微生物であって、Ｓ。

アルボニガーの種に属するものがある。

抗生物質パママイシン−６０７ｉｊ：第２の発明の方法
に従って製造することができる。この製造方法を実施す
るに轟っては、抗生物質パフマイシン−６０フ生産菌を
液体の栄養培地に培養し、振Ｓ１培養によＶ得らｎた培
養物から該抗生物質全採取するのが好ましい。この液体
培養による方法はＲ，Ｍ、　ＰＯＧＢＬらによって報告
さｎた寒天培地で生産する方法に比して、火責にしかも
簡単に培養が行なえる点で有利である。

その培養の栄養源としては、放線菌の栄養源として通常
使用さｎるもの、例えば炭化水素、脅素源、無機塩など
の同１化できるものを使用できる。

具体的には、ブドウ糖、グリセリン、麦芽糖、蔗糖、糖
蜜、デキストリン、澱粉などの炭ｒヒ水素や。

大豆油、落花生油などの炭素源、ペグトン、肉エキス、
綿実粉、大豆粉、酵母エキス、カゼイン。

コーン・ステープリカー、ＮＺ−アミン、硫酸アンモニ
ウム、硝酸アンモニウム、ｔＭ（ｔアンモニウムなどの
窒素源、？１４酸二カリウム、燐酸ナトリウム、食塩、
炭酸カルシウム、硫酸マグネシウム、塩化マンガンなど
の無機塩が使用できる。また。

必要により微量金属塩、例えば、コバルト、鉄、ニッケ
ルなどの各種塩類全添加することかできる、上記のごと
き栄養源の配合割合は特に制約さｎるものでなく、広範
囲にわたって変えることが可能であり、使用するバママ
イシンー≦０７生産菌にとっての最適の栄養源の組成お
よび配廿割せは当業者であｎば容易に決定することがで
きる。また。

上記の栄養源からなる栄養培地は培養に先立ち殺菌する
ことが出来、この殺菌の前または後で培地（７）ｐＨｉ
４〜Ｊ′の範囲、特にｐＴ（４，ｔ〜７．５の範囲に調
節するのが有利である。

かかる栄養培地でのパフマイシン−６０フ生産菌の培養
は、一般の放線菌などによる抗生物質の製造において通
常使用さｎている方法に準じて行うことができる。通常
液体培地中で好気的条件下に培養することが好適であＦ
）、通常攪拌しながらおよび捷たけ通気しながら行うこ
とができる。また、培養方法としてに静置培養、振盪培
養１通気攪拌をともなう液内培養のいずγＬも使用可能
であるが、液体培養が抗生物質パママイシン−１，０７
の大量生産に適している。使用しつる培養温度は、抗生
物質パママイシン−６０７の生産菌の生育が実質的に阻
害さｎず、該抗生物質を生産しうる範囲であ１ば、特に
制限さｎるものでになく、使用する生産菌株に応じて適
宜選択できるが、特に好ましいのは２！〜Ｊｊ℃の範囲
内の濡髪を挙げることができる。

培養時間は培地の組成や培養温安、使用学童菌株などに
より異なるが１通常／２０．／り２時間の培養で目的の
抗生物質を得ることができる。かくして、培養物中に蓄
積さｎた抗生物質バママイシン−１，０７は、適当な有
機溶媒による溶媒抽出法や、吸着やイオン交換能を利用
したクロマトグラフィーを単独または、組付せて使用す
ることにより単離精製して採取することかできる。

さらに第３の本発明によると、抗生物質パフマイシン−
６０フ全有効成分として含むこと全特徴とする抗菌、抗
ウィルス剤が提供さｎる。

本発明に係るパフマイシン−６０フｆ抗菌、抗ウィルス
剤として使用する場付ハ、バママイシン−６０７を有効
成分としてこｎ’ｉ担体と配付して粉剤、水利剤、乳剤
１粒剤、微粒剤およびその他の一般に信用さｎる形態の
薬剤として製剤することが可能である。配付さｎる担体
ぽ固体または液体のいずｆでもよく、また特定の担体に
限定さｎるものでにない。固体担体としては、たとえば
移々の粘土類、カオリン、クレー、けいそう土、タルク
、シリカなどが挙げらｎ、液体担体としては。

本発明に係る有効成分１ヒ甘物に対して溶媒となるもの
および非溶媒であっても補助剤により有効成分子ヒせ物
を分散または溶解させうるものならば使用できる。たと
えばベンゼン、キシレン、トルエン、ケシロン、メタノ
ール、エタノールの如きアルコール類、アセトンの如き
ケトン類、ジメチルスルホキシド、ジメチルホルムアミ
ドなどが挙げらｎる。こｆｌｖＣＪ当な界面活性剤およ
びその他の補助剤たとえば展着剤、固着剤などを混甘し
、水溶液あるいに乳剤として使用できる。

次の実施例及び試験例にエリ本発明を更に詳細に説明す
る。

〔実施例〕

実施例／　　抗生物質バママイシン−６０７の製造下記
の表−Ｖに記載した液゛体培地２００１をｊ００ｍｌ容
の坂ロフラスコにｌコ！ｄずつ分注し、常法により／２
０℃２０分間滅菌した培地に、寒天斜面培地で培養した
気菌糸形成の良好なＳ、アルボニガーＩＦＯ／２７３１
株（醗酵研から入手した菌株）を接種し３０℃で１６１
時間振盪培養（毎分／２０往復）する。

培養液を濾過助剤全周いて吸引濾過し、１ｚｒｔＯ沖液
を得た。この培養液（ｐＨ７，０）を酢酸エチル１ｏｏ
ｔで３回抽出した。一方菌体はメタノールで抽出後、抽
出液全滅圧下濃縮し水に懸濁させｐＨ７，０で酢酸エチ
ル抽出した。両方の酢酸エチル抽出物″ｆ：会せ濃縮後
、酢酸エチルｒｔに再溶解し、飽和重炭酸す）　ＩＪウ
ム水溶液２ｔで洗浄し酸性物質金除去した残液２　Ｎａ
２ＳＯ４で乾燥後、減圧下濃縮乾固［、た。

乾固物全シリカゲルＢＷ♂２０ＭＨのカラムにかけり０
％酢酸エチル−ｎ−ヘキサン、１ｏｏｓ酢酸エチル、／
１％ジエチルアミンー酢酸エチル、１％ジエチルアミン
−７４メタノール−酢酸エチルおよび／４ジエチルアミ
ンーｓＯ％メタノール−酢酸エチルで順次溶出１．た。

このうち／係ジエチルアミンー酢酸エチル溶出区分を減
圧下で濃縮したのち、再度シリカゲルカラムクロマトグ
ラフィを行った。壕ず／４ジエチルアミンーｎ−ヘキサ
ンで洗浄し、次いでタ憾酢酸エチルーｌ憾ジエチルアミ
ン−〇−ヘキサンで溶出することによりバママイシン複
せ体ｔ−２３２．６■得た。この複せ体かラノバママイ
シン−６０７の単離はＴＩ、Ｏキーゼルゲル（Ｋｉｅｓ
　ｅ１ｇｅｌＪ４０　Ｈ（Ｍｅｒｃｋ、ツカラムクロマ
トを用い、Ｊ４ジイソプロピルアミン−ｎ−ヘキサンに
酢酸エチル含ｉｖｒ〜３０憾の範囲で段階的に上昇させ
た溶媒系で溶出することにより行った。

バブマイシン−６０フｆ−ｌ生匠分であるバママイシン
（分子量ｔコ／）より少し遅く１で酢酸エチル含量ｔｒ
ｙ萌後の区分に溶出さｎた。この区分をゾルパックスＮ
Ｈ２に充填剤とする高速液体クロマドグ２フイー〔溶媒
系二〇−ヘプタン−メタノール−〇−ブチルアミン（／
　０，０　：　０．０り：　０．Ｏｊ　Ｊ　）によりｍ
色消状のパママイシン−１，０７の純品の夕ｊ、Ｏｍｑ
ｆ単離した。〔α〕０＋コー、♂’　（ｃ　Ｏ０２Ａ　
。

メタノールフ。

試験例１　キュウリモザイクウィルス病防除効果試験 播種後７ｇ日の鉢植えササゲ苗（品種、黒種三尺）の初
生葉にパママイシン−６０７ｆ２０４アセトン水に懸濁
させた液２２０７／ポットの割で散布した。風乾後、キ
ュウリモザイ・クウィルス（、ＯＭＶＪを常法によりカ
ーボランダムで汁液接種し、５日後に局部病斑を調査し
て、次式により病斑阻止率（５）を算出した。

なお、試験は温室内で／濃ｉ／区！株３述制で行った。

接種源は、ＯＭＶ接種ｌカ月後のタバコ（品種Ｓａｍｓ
ｕｎＪのモザイク鈎徴葉を２ｏ倍景の燐酸緩衝液で磨砕
牙ガーゼで′濾過した汁液（ＯＪ×／　０−５ｆ　／ａ
ｔウィルス量相当、１葉当たり約５０個局部病斑〕全用
いた。

この結果を表−！に示す。

表−！ 試験例コ　ナシ黒斑病防除効果試験 ナシｍ＜品種、二十世紀ノの新展開葉ψ〜５枚を含む新
稍全切り採り、ＪＯＯｄ容量のコルベンに水さしして試
験に供した。パママイシンー１．０７を２０鳴アセトン
水に懸濁させ所定儂変に調製した液２０ｍ１ｋ前記切離
す一シ葉に散布した。病菌接ａ！はアンズ煎汁寒天培地
の平板上で２ｖ℃において７０日間培養して得たナシ黒
斑病菌（八Ｉｔｅｒｎａｒｉａｋｉｋｕｃｈｉａｎａ）
分生胞子全ツイーン２０のｊ　Ｏｐｐｍ溶液に分散させ
、胞子濃度を顕微鏡７５０倍ｌ視野あたり約２０ｇＭに
調整し、スプレーガンで接種した。接種後のナシ新梢（
３００−容フルペンに水さし）は２μ℃の温室にλψ時
１間保ち、その後はλμ〜２６℃および湿変Ｊ’夕〜り
！壬のグロースキャビネットで管理した。病菌接種５日
後に１葉あたりの病斑面積歩せを調査し、次式により防
除側全算出した。なお、試験は１区３枝制で実施し、平
均防除価（４）？求めた。

試験結果を次表に示す。

表−ｔ

【図面の簡単な説明】

、Ｗ／図［パママイシン−６０７の赤外線吸収スペクト
ル図、第２図及び第３図汀夫々に）々ママイ’／　７−
　ｔ　０７−　ＯＦ、ＣＯ（Ｍ）（７’）水素核磁気共
鳴（）（−ＮＭＦＬ）スペクトル図及び炭素核磁気共鳴
（Ｃ−ＮＭ’ＦＬ）スペクトル図である。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、下記の構造式 ▲数式、化学式、表等があります▼ で示される抗生物質パママイシン−６０７。 ２、ストレプトミセス属に属して下記の構造式▲数式、
   化学式、表等があります▼ で示される抗生物質パママイシン−６０７を生産する菌
   を培養し、その培養物から抗生物質パママイシン−６０
   ７を採取することを特徴とする、抗生物質パママイシン
   −６０７の製造方法。 ３、抗生物質パママイシン−６０７生産菌はストレプト
   ミセス・アルボニガ−（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓａｌ
   ｂｏｎｉｇｅｒ）ＩＦＯ１２７３８株である特許請求の
   範囲第１項に記載の方法。 ４、下記の構造式 ▲数式、化学式、表等があります▼ で示される抗生物質パママイシン−６０７を有効成分と
   して含むことを特徴とする、抗菌、抗ウィルス剤。