JPH0748348A - 新規抗生物質ａｂ４０１５−ｂおよびａｂ４０１５−ｌ、ならびにその製造法および用途 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 （修正有） 【目的】 抗細菌活性と植物病原菌の防除活性を有する
新規な抗生物質を提供する。 【構成】 一般式（Ｉ）で表される抗生物質ＡＢ４０１
５−ＢおよびＡＢ４０１５−Ｌ、またはそれらの塩。及
びホーマ属に属する抗生物質ＡＢ４０１５−Ｂ生産菌を
倍地中で培養して抗生物質ＡＢ４０１５−Ｂを、また、
ホーマ属に属してロイシンの存在下でＡＢ４０１５−Ｌ
物質を生産する能力を有する微生物を、ロイシンを含む
倍地中で培養して抗生物質ＡＢ４０１５−Ｌを、それぞ
れ生成・蓄積させ、その培養物からＡＢ４０１５−Ｂあ
るいはＡＢ４０１５−Ｌを採取することによりなる当該
抗生物質の製造方法；およびＡＢ４０１５−Ｂあるいは
ＡＢ４０１５−Ｌを有効成分とする医薬用殺菌剤または
農園芸用殺菌剤。 〔但し、式Ｉにおいて ＡＢ４０１５−Ｂ；Ｒ^１：−ＣＨ（ＣＨ_３）−ＣＨ_２−
ＣＨ_３ Ｒ^２：−Ｃ（ＣＨ_３）＝ＣＨ−ＣＨ
_３ ＡＢ４０１５−Ｌ；Ｒ^１：−ＣＨ（ＣＨ_３）−ＣＨ_２−
ＣＨ_３ Ｒ^２：

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は新規な抗生物質ＡＢ４０
１５−Ｂ及び抗生物質ＡＢ４０１５−Ｌ及びそれらの塩
に関し、またそれらの製造法並びにその生産菌に関する
ものである。

【０００２】更に詳しくは、本発明はホーマ属に属する
抗生物質ＡＢ４０１５−Ｂ生産菌及びロイシン存在下で
抗生物質ＡＢ４０１５−Ｌの生産能を示すＡＢ４０１５
−Ｌ生産菌の培養によって夫々に生産されて抗細菌活性
と抗カビ活性を有する新規抗生物質ＡＢ４０１５−Ｂお
よびＡＢ４０１５−Ｌ物質に関し、またこれら抗生物質
の製造法並びにＡＢ４０１５−Ｂ及びＡＢ４０１５−Ｌ
物質の生産菌として有用な新規微生物に関するものであ
る。本発明のＡＢ４０１５−Ｂ及びＡＢ４０１５−Ｌ物
質は抗細菌活性と抗カビ活性を有し、細菌感染症に対す
る化学療法に有用である医薬用殺菌剤として、また農園
芸用殺菌剤、特に農園芸用抗カビ剤として期待される。

【０００３】

【従来の技術】微生物が生産する医薬用抗菌物質として
は、セファロスポリン、エリスロマイシン等が知られ、
また農園芸用殺菌剤としては、カスガマイシン、バリダ
マイシン等が知られている。また、これまでに本発明の
ＡＢ４０１５−Ｂ及びＡＢ４０１５−Ｌ物質と化学構造
上近似の物質としては、いくつかの物質が医薬または動
物薬として知られている（特開平４−３１６５７８号公
報、特開平４−７４１６３号公報、特開昭６３−１９０
８９４号公報）。

【０００４】しかしながら本発明のＡＢ４０１５−Ｂ及
びＡＢ４０１５−Ｌ物質は、それらの物理化学的性状及
び生物活性の対象、その発明の効果などの諸性質の点で
前記の既知物質と一致しない。

【０００５】

【発明が解決すべき課題】上記の特許出願公開公報に例
示されている物質は、医薬または動物薬としての用途が
あることが開示されているが、農園芸用殺菌剤として有
用であるとする記載はない。本発明の一つの目的は、新
規な化学構造を有し、耐性菌に対しても抗菌活性を有す
る医薬または動物薬として有用な新規抗菌物質を提供す
ることであり、第２の目的は、農園芸用殺菌剤分野にお
いて利用できて植物病原菌、特にカビ菌に対し低濃度で
有効且つ植物に薬害を示さず、しかも哺乳類に低毒性で
ある新規な抗生物質を提供することである。

【０００６】

【課題を解決するための手段】本発明者らは、上記課題
を解決する事を目的として、種々の土壌から分離した微
生物が生産する抗生物質について鋭意研究を重ねた。そ
の結果、自然界から本発明者らにより新たに分離されて
ＡＢ４０１５株の菌株番号を付されたホーマ属に属する
新規な菌株の培養物中に抗細菌活性及び抗カビ活性を示
す複数の物質が生産されていることを発見した。そこ
で、該菌株の培養物からそれらの活性物質を分離精製し
たところ２種の物質が得られて、それらをＡＢ４０１５
−Ａ物質とＡＢ４０１５−Ｂ物質と命名し、それらが上
記の抗細菌活性と抗カビ活性を示すことを見いだし、更
にそれらの物質の化学構造を明らかにした。その結果、
それら２種の物質の内ＡＢ４０１５−Ｂと命名した物質
は新規な抗生物質であって、抗菌活性及び抗カビ活性を
有することを確認した。またＡＢ４０１５−Ａと命名し
た物質は特開平４−３１６５７８号公報に記載の抗生物
質ＰＦ１０５２物質に一致した。

【０００７】そのＡＢ４０１５−Ａ物質は次式（Ａ） で表される化合物である。

【０００８】ＡＢ４０１５−Ｂ物質は後記の式（Ｉａ）
で表される化合物であり、また下記の式（Ｂ）に示した
テヌアゾン酸〔P.S.Steyn and C.J.Rabie 「Phytochemi
stry」15，1977頁(1979)〕に類似したテトラム酸構造を
部分的に有している。

【０００９】

【００１０】テヌアゾン酸は５位にｓｅｃ−ブチル基が
結合しているが、生合成研究において〔S.Gatenbeck an
d J.Sierankiewicz,「Acta Chem. Scnd.」, Ser. B, 3
1， 505頁(1973)〕、テヌアゾン酸の前駆体の一つがイ
ソロイシンであることが判明している。また、S.Gatenb
eck らは、バリンあるいはロイシンを培地中に添加する
ことによって、それらアミノ酸がテヌアゾン酸生産菌に
よって取りこまれテヌアゾン酸の５位にｓｅｃ−ブチル
基の代わりにイソプロピル基あるいはイソブチル基が結
合したテヌアゾン酸類緑化合物が生合成されることを見
いだした〔S.Gatenbeck and J.Sierankiewicz 「Antimi
crbial Agents and Chemotherapy」３， No.２， 308頁
(1973)〕。

【００１１】これらの知見に基づき、抗生物質ＡＢ４０
１５−Ｂ生産菌であるホーマ・エスピーＡＢ４０１５株
を用いてロイシンのテトラム酸への取り込みの有無を試
験した。その結果、本発明者らはロイシン存在下でＡＢ
４０１５−Ｂ生産菌のホーマ・エスピーＡＢ４０１５株
を培養したところ、新たにＡＢ４０１５−ＡおよびＡＢ
４０１５−Ｂ物質とは異なる抗細菌活性と抗カビ活性を
示す物質がその培養物中に産生されることを見いだし精
製単離した。更にその物質の化学構造を決定したとこ
ろ、新規な抗生物質であった。この新規抗生物質をＡＢ
４０１５−Ｌと称する。

【００１２】すなわち、第１の本発明においては、下記
の一般式（Ｉ） 〔式中、Ｒ¹ およびＲ² はＡＢ４０１５−Ｂ物質ではそ
れぞれ次式 の基であり、ＡＢ４０１５−Ｌ物質では次式 の基である〕で表される新規な抗生物質ＡＢ４０１５−
ＢおよびＡＢ４０１５−Ｌ、またはそれらの塩を提供す
るものである。

【００１３】本発明のＡＢ４０１５−Ｂ物質及びＡＢ４
０１５−Ｌ物質、並びにそれらの塩の例として、第４級
アンモニウム塩などの有機塩基との塩と、各種の金属
塩、例えばアルカリ金属塩、特にナトリウム塩またはカ
リウム塩、並びにアルカリ土類金属塩、特にカルシウム
塩がある。

【００１４】第１の本発明によるＡＢ４０１５−Ｂ物質
は、下記の構造式（Ｉａ）で示され、また下記の物理化
学的性質を有する。

【００１５】

【００１６】（１）外観：淡橙色油状物質 （２）分子式：Ｃ₂₆Ｈ₃₇ＮＯ₄ （３）分子量：４１３ （４）紫外部吸収スペクトル（メタノール中）： λmax 、nm（ε）： 酸性（０．０１Ｎ ＨＣｌ−メタノール中）：２２８
（４，４５０） ２９０（８，５８０） 中性（メタノール中）： ２２８
（４，４５０） ２９０（８，７４０） アルカリ性（０．０１Ｎ ＮａＯＨ−メタノール中）：
２４８（７，３９０） ２９０（９，３７０）

【００１７】（５）赤外部吸収スペクトル（ＫＢｒ
錠）：添付図面の図１に示す。 （６）溶解性：クロロホルム、酢酸エチル、ジメチルス
ルホキシドに可溶、水に不溶である。

【００１８】（７）薄層クロマトグラフィー：Ｒｆ値＝
０．５３ 吸着剤：メルク社製キーゼルゲル ６０Ｆ₂₅₄ 展開溶媒：ヘキサン−酢酸エチル−ギ酸（７０：３０：
１） （８）呈色反応：バニリン硫酸、塩化第二鉄、ヨウ素反
応で陽性である。 （９）塩基性、酸性、中性の区別：酸性物質

【００１９】第１の本発明によるＡＢ４０１５−Ｌ物質
は、下記の構造式（Ｉｂ）で示され、また下記の物理化
学的性質を有する。

【００２０】

【００２１】（１）外観：淡橙色油状物質 （２）分子式：Ｃ₂₆Ｈ₃₉ＮＯ₅ （３）分子量：４２９ （４）比旋光度：［α］_D ²² ＋３７°（ｃ １．０，
ＭｅＯＨ） （５）紫外部吸収スペクトル（メタノール中）： λmax 、nm（ε）： 酸性（０．０１Ｎ ＨＣｌ−メタノール中）：２２２
（６，０８０） ２９１（１２，３００） 中性（メタノール中）： ２２８
（５，２８０） ２９１（１２，７５０） アルカリ性（０．０１Ｎ ＮａＯＨ−メタノール中）：
２４７（１０，０４０） ２８９（１３，０８０）

【００２２】（６）赤外部吸収スペクトル（ＫＢｒ
錠）：添付図面の図２に示す。 （７）溶解性：クロロホルム、酢酸エチル、ジメチルス
ルホキシドに可溶、水に不溶である。

【００２３】（８）薄層クロマトグラフィー：Ｒｆ値＝
０．３９ 吸着剤：メルク社製キーゼルゲル ６０Ｆ₂₅₄ 展開溶媒：クロロホルム−メタノール−ギ酸（８０：
２：１） （９）呈色反応：バニリン硫酸、塩化第二鉄、ヨウ素反
応で陽性である。 （10）塩基性、酸性、中性の区別：酸性物質

【００２４】さらに、第２の本発明によると、ホーマ属
に属するＡＢ４０１５−Ｂ物質生産菌を培地に培養し、
培養物中に前記の式（Ｉａ）の抗生物質ＡＢ４０１５−
Ｂを生産、蓄積せしめ、次いでその培養物から該抗生物
質を採取することを特徴とする、式（Ｉａ）の抗生物質
ＡＢ４０１５−Ｂの製造法が提供される。

【００２５】さらに、第３の本発明によると、ホーマ属
に属し、ロイシンの存在下で前記式（Ｉｂ）のＡＢ４０
１５−Ｌ物質を生産する能力を有する微生物をロイシン
を含む培地中で培養し、その培養物中に前記の抗生物質
ＡＢ４０１５−Ｌを生成、蓄積せしめ、次いでその培養
物から該抗生物質を採取することを特徴とする、式（Ｉ
ｂ）の抗生物質ＡＢ４０１５−Ｌの製造法が提供され
る。

【００２６】さらに第４の本発明によると、新規な微生
物として、前記の式（Ｉａ）で表わされる抗生物質ＡＢ
４０１５−Ｂおよび培地中にロイシン存在下で式（Ｉ
ｂ）の抗生物質ＡＢ４０１５−Ｌを生産できる特性を持
ち、かつ後記の菌学的な特徴を有する、ホーマ属の菌
株、ホーマ・エスピーＡＢ４０１５株が提供される。

【００２７】次に、本発明によるＡＢ４０１５−Ｂおよ
びＡＢ４０１５−Ｌの各物質の製造法について説明す
る。

【００２８】本発明の方法で用いられるＡＢ４０１５−
Ｂ物質またはＡＢ４０１５−Ｌ物質の生産菌としては、
ＡＢ４０１５−ＢまたはＡＢ４０１５−Ｌ物質またはそ
れらの塩を産生する能力を有するものであれば、いかな
る微生物でもよい。その好ましい具体的な例としては、
本発明者らが福島県喜多方市の土壌より新たに分離した
菌株ＡＢ４０１５がある。この菌株はホーマ属に属する
菌株であり、本発明の方法に最も有効に用いられるＡＢ
４０１５−Ｂ生産菌と、ロイシンの存在下でＡＢ４０１
５−Ｌ物質の生産能を示す菌との一例である。

【００２９】このＡＢ４０１５株の菌学的性質を以下に
記載する。 （１）各培地における生育状態 オートミール寒天培地上における生育は速やかで、２５
℃、暗黒下の培養では、培養４日目で集落の直径は４３
〜４５ｍｍ、７日目で７６〜８０ｍｍに達する。集落は
ビロード状を呈し、中心部には灰白色の気生菌糸を形成
する。集落表面および裏面はうす赤紫色を呈する。菌糸
は隔壁を有し、培地上および培地中に伸長する。菌糸は
幅が２．０〜６．０μｍで、無色、平滑で分枝する。

【００３０】麦芽エキス寒天培地上における生育は速や
かで、２５℃、暗黒下の培養では、培養４日目で集落の
直径は６３〜６５ｍｍ、７日目で８０〜８３ｍｍに達す
る。集落は綿毛状で、集落表面は中心部が灰味青緑色を
示し、周辺部はうす赤紫色を呈する。集落裏面は中心部
が、暗い赤紫色、周辺部がうす黄茶色を呈する。

【００３１】バレイショ・ブドウ糖寒天培地上における
生育は速やかで、２５℃、暗黒下の培養では、培養４日
目で集落の直径は４６〜４８ｍｍ、７日目で６８〜７２
ｍｍに達する。集落は綿毛状で、集落表面は灰味青緑色
を示し、ところどころに、にぶ赤色の菌糸が密に集合し
てできた菌核様構造物が形成される。集落裏面は灰味黄
茶色を呈する。

【００３２】この菌株を上記寒天培地上において、２５
℃、暗黒下で１ヶ月間培養した場合、テレオモルフ（完
全世代の特徴）およびアナモルフ（不完全世代の特徴）
の形成は認められなかった。そこで、上記寒天培地上で
２５℃、暗黒下で４日間培養後、さらに２５℃、ブラッ
ク・ライト・ブルー蛍光灯（２０Ｗ）下で培養した結
果、培養２日目に集落周辺部に多数の分生子殻(Pycnidi
um) の形成が観察された。

【００３３】オートミール寒天培地上における分生子殻
は、暗いオリーブ緑色〜オリーブ黒色を呈し、寒天培地
上に表在するか、または培地中に埋生する。分生子殻
は、球形〜亜球形、あるいは洋なし形(pyriform)〜アン
プル形(ampulliform) で、網目状の表面を呈し、直径は
１１０〜２５０μｍで、通常１個の孔口、ときに２〜３
個の孔口を有し、孔口より分生子を押し出す。分生子は
単細胞、無色、平滑でだ円形〜卵形を呈し、大きさが
４．５〜６．５×１．５〜２．５μｍである。

【００３４】（２）生理的性質 生育温度 麦芽エキス寒天培地およびオートミール寒天培地を用い
て、５℃、１０℃、１５℃、２０℃、２５℃、３０℃お
よび３７℃の各温度で培養した結果、ＡＢ４０１５株は
両培地において、１０℃〜３０℃までのいずれの温度で
も生育したが、５℃および３７℃では生育しなかった。
生育最適温度は２０℃〜２５℃である。

【００３５】生育ｐＨ ｐＨを２，３，４，５，６，７，８，９，１０および１
１に調整した麦芽エキス寒天培地を用いて、２５℃で培
養した結果、ＡＢ４０１５株はｐＨ３〜１１まで生育し
た。生育最適ｐＨは、ｐＨ６〜８である。

【００３６】以上の菌学的性質から、ＡＢ４０１５株の
分類学上の位置をジェイ・エイ・フォン・アークス著
「ザ・ジェネラ・オブ・ファンジャイ・スポルレイティ
ング・イン・ピュア・カルチャー」第３版、ジェイ・ク
レイマー社、バダッツ、１９８１年(J.A.von Arx, 「Th
e Genera of Fungi Sporulating in Pure Culture 」3r
d ed., J.Cramer, Vaduz, 1981）およびブライアン・シ
ー・サットン著、「ザ・シーロマイセテス」コモンウエ
ルス・マイコロジカル・インスティテュート、イングラ
ンド、１９８０年(Brian C.Sutton,「The Coelomycete
s」, Commonwealth Mycological Institute, England,
1980)に従って検索した。その結果、本菌株はホーマ属
に属することが認められ、本発明者らは、ＡＢ４０１５
株をホーマ・エスピー・ＡＢ４０１５（Phoma sp. ＡＢ
４０１５）と称することにした。

【００３７】なお、ＡＢ４０１５株は工業技術院微生物
工業技術研究所（現、工業技術院生命工学工業技術研究
所）に寄託申請され、平成４年１０月２０日、微工研菌
寄第１３２０６号として受託されている。

【００３８】以上、ＡＢ４０１５−Ｂ物質生産菌及びＡ
Ｂ４０１５−Ｌ物質生産菌の一例であるＡＢ４０１５株
について説明したが、一般的には糸状菌類の菌学的性質
は極めて変化しやすく、自然界において、あるいは通常
行われている紫外線照射、Ｘ線照射、変異誘発剤（例え
ば、Ｎ−メチル−Ｎ−ニトロ−Ｎ−ニトロソグアニジン
および２−アミノプリン等）または遺伝子組替えを用い
る人為的変異手段により変異することは周知の事実であ
る。このように自然変異株ならびに人工変異株も含めて
ホーマ属に属し、ＡＢ４０１５−ＢおよびＡＢ４０１５
−Ｌ物質を生産する能力を有する菌株はすべて本発明に
使用することができる。

【００３９】第２あるいは第３の本発明の方法では、ま
ずホーマ属に属するＡＢ４０１５−Ｂ物質生産菌、ある
いはＡＢ４０１５−Ｌ物質生産菌を通常の微生物が利用
しうる栄養物を含有する培地において培養する。該生産
菌の培養においては、微生物の培養に用いられる通常の
培養方法が適用される。栄養源としては、微生物が資化
しうる炭素源、窒素源、無機塩などを程よく含有する培
地であれば天然培地、合成培地のいずれでも利用でき
る。第３の本発明の方法でＡＢ４０１５−Ｌ物質を生産
させる場合、これらの培地成分の他にロイシンを添加す
る必要がある。このロイシンの添加は、使用生産菌を培
地中で培養するに先立ち、培地にロイシンを追加しても
よく、あるいは該生産菌を培養して生育途中にロイシン
を培地に添加後に培養を継続してもよい。

【００４０】資化しうる炭素源としては、グルコース、
シュクロース、ガラクトース、デキストリン、グリセロ
ール、澱粉、水飴、糖蜜、動・植物油等を利用できる。
また、窒素源としては、大豆粉、小麦胚芽、コーンステ
ィープリカー、綿実かす、肉エキス、ペプトン、酵母エ
キス、硫酸アンモニウム、硝酸アンモニウム、硝酸ナト
リウム、尿素などを使用できる。そのほか必要に応じ、
ナトリウム、カリウム、カルシウム、マグネシウム、コ
バルト、塩素、燐酸、硫酸およびその他のイオンを生成
できる無機塩類を添加することは有効である。また、菌
株の発育を助け、ＡＢ４０１５−Ｂ物質あるいはＡＢ４
０１５−Ｌ物質の生産を促進するような無機および有機
物を適当に添加することができる。なお、培地中に金属
塩が存在すると、それに対応する金属カチオンとの塩の
形でＡＢ４０１５−ＢあるいはＡＢ４０１５−Ｌ物質が
得られることがある。

【００４１】培養方法としては好気的条件下での培養
法、特に深部液体培養法が最も適している。培養に適当
な温度は、１５〜３０℃であるが、多くの場合２４〜３
０℃で培養する。ＡＢ４０１５−Ｂ物質あるいはＡＢ４
０１５−Ｌ物質の生産は培地や培養条件によって異なる
が、振とう培養、タンク培養とも３〜１０日の間でその
蓄積が最高に達する。

【００４２】第３の本発明の方法によるＡＢ４０１５−
Ｌ物質の生産の場合、上記培養条件の他に、０．０１％
〜２０％濃度のロイシンを培養前あるいは培養直後ある
いは培養１日から９日の間で添加することができる。好
ましくは、１〜１０％のロイシンを培養直前もしくは培
養直後もしくは培養開始後１〜３日目に添加するのがよ
い。

【００４３】培養物中のＡＢ４０１５−ＢあるいはＡＢ
４０１５−Ｌ物質の蓄積量が最高に達した時点で培養を
停止し、培養物から発酵生産物を採取する一般的な方法
に準じてＡＢ４０１５−ＢあるいはＡＢ４０１５−Ｌ物
質の単離を行うのがよい。前記の培地の組成、培地の液
性、培養温度、攪拌速度および通気量等の培養条件は使
用する菌株の種類および外部条件等に応じて、好ましい
結果が得られるように適宜調節あるいは選択する。液体
培養において発泡がある場合はシリコン油、植物油およ
び界面活性剤等の消泡剤を適宜使用する。

【００４４】このようにして得られた培養物中に蓄積さ
れたＡＢ４０１５−Ｂ物質あるいはＡＢ４０１５−Ｌ物
質は、前述した物理化学的性質を有するので、その性質
に従い培養物から分離精製することが可能である。特
に、以下の方法により効率的に分離精製することが好ま
しい。

【００４５】蓄積したＡＢ４０１５−Ｂ物質あるいはＡ
Ｂ４０１５−Ｌ物質を培養物中から単離採取するに際し
ては、通常の生理活性物質を培養液中から採取する方法
が適用される。すなわち、培養物から酢酸エチル、クロ
ロホルム等の有機溶剤による抽出、水または二種類以上
の有機溶媒系を用いる交流分配、イオン交換樹脂、シリ
カゲル、シラナイズドシリカゲル、アルミナ、セルロー
ス、珪藻土、ゲル濾過剤等を用いるカラムクロマトグラ
フィーもしくは薄層クロマトグラフィーによる活性物質
の吸脱着処理あるいは逆層カラムを用いた高速液体クロ
マトグラフィーなどによってＡＢ４０１５−Ｂ物質また
はＡＢ４０１５−Ｌ物質を単離することができる。な
お、本発明のＡＢ４０１５−Ｂ物質およびＡＢ４０１５
−Ｌ物質の製造例を後記の実施例１〜２に示す。

【００４６】更に、本発明によるＡＢ４０１５−Ｂ物質
およびＡＢ４０１５−Ｌ物質は前記のごとく、抗細菌活
性と植物病原菌の生育阻止活性を有する抗生物質であ
る。

【００４７】次に、本発明のＡＢ４０１５−Ｂ物質およ
びＡＢ４０１５−Ｌ物質が抗細菌活性と抗カビ活性を有
して有用であることを後記の試験例によって説明する。

【００４８】試験例１ ＡＢ４０１５−ＢおよびＡＢ４０１５−Ｌ物質の細菌に
対する阻止効果 ＡＢ４０１５−ＢおよびＡＢ４０１５−Ｌ物質の各種細
菌に対する最低生育阻止濃度（ＭＩＣ）（μｇ／ｍｌ）
をミューラー・ヒントン寒天培地（Ｄｉｆｃｏ社製）を
用いて寒天平板希釈法にて測定した。その結果を次の表
１に示した。

【００４９】

【００５０】試験例２ ＡＢ４０１５−ＢおよびＡＢ４０１５−Ｌ物質の植物病
原菌に対する阻止効果 ＡＢ４０１５−ＢおよびＡＢ４０１５−Ｌ物質の各種植
物病原菌に対する最低生育阻止濃度（ＭＩＣ）（μｇ／
ｍｌ）をポテト・スクロース寒天培地を用いて寒天平板
希釈法にて測定した。

【００５１】また、同様にして抗生物質ＡＢ４０１５−
ＡのＭＩＣ（μｇ／ｍｌ）も測定した。その結果を次の
表２に示した。

【００５２】

【００５３】従って、第５の本発明によると、前記の一
般式（Ｉ）で表される抗生物質ＡＢ４０１５−Ｂ物質ま
たはＡＢ４０１５−Ｌ物質、あるいはこれら両者を有効
成分として含有することを特徴とする医薬用殺菌剤また
は農園芸用殺菌剤が提供される。

【００５４】本発明のＡＢ４０１５−ＢおよびＡＢ４０
１５−Ｌ物質を医薬用抗菌剤として使用する場合には、
単独あるいは賦形剤と混合して軟膏剤、注射剤、経口
剤、坐剤等として投与する。賦形剤は薬剤学的に許容さ
れるものであればいずれでもよく、その種類および組成
は投与経路や投与方法によって適宜選択する。その有効
成分の投与量は、年齢、体重等によって異なるが、通常
は成人に対して１−１，０００ｍｇ程度を経口的あるい
は非経口的（例えば静脈に注射）に投与する。

【００５５】ＡＢ４０１５−Ｂ物質またはＡＢ４０１５
−Ｌ物質あるいはそれら両者を農園芸用殺菌剤として用
いる場合には、その使用目的に応じて単体でも用うるこ
とができるが、生物効果を助長、あるいは安定化するた
めに、慣用される適当な固体または液体状の担体および
補助剤と混和して製剤とし、これを直接使用するか必要
に応じて希釈して用いる。また、同様にしてＡＢ４０１
５−Ａ物質も農園芸用殺菌剤として使用できる。

【００５６】なお、本明細書で先に記載したＡＢ４０１
５−Ａ物質は前記の式（Ａ）で表わされる物質であり、
これは特開平４−３１６５７８号公報に示された抗生物
質、ＰＦ１０５２物質と一致する。この特開公報にＰＦ
１０５２物質生産菌として記載されるポーマ(Phoma) 属
のＰＦ１０５２株は、オートミール寒天培地、等で生育
した集落の裏面の色が黄土色〜茶色であり、うす茶色で
羊毛状の気菌糸を着生し且つその分生子殻が孔口を有
し、褐色の亜球形で５０〜１２０μｍの大きさを有す
る。然るに、第４の本発明に係るホーマ・エスピーＡＢ
４０１５株は、オートミール寒天培地で生育した集落の
裏面の色がうす赤紫色であり、灰白色の気菌糸を着生し
且つその分生子殻が暗いオリーブ緑色〜オリーブ黒色の
球形〜亜球形〜洋なし形〜アンプル形で１１０〜２５０
μｍの大きさを有する、等の菌学的性状を示す点で前記
のＰＦ１０５２株と異なる種(species) に含まれるとみ
とめられる。

【００５７】従って、第６の本発明によると、ホーマ属
に属するホーマ・エスピーＡＢ４０１５株を培地中で培
養して前記の式（Ａ）の抗生物質ＡＢ４０１５−Ａ物質
を生成、蓄積させ、その培養物からＡＢ４０１５−Ａ物
質を採取することを特徴とする、式（Ａ）の抗生物質Ａ
Ｂ４０１５−Ａ物質の製造法が新規な発明として提供さ
れる。

【００５８】この第６の本発明の方法は、前記した第２
の本発明の方法と同じ要領で実施できる。

【００５９】

【実施例】次に実施例を挙げて本発明をより具体的に説
明するが、これは単なる一例であって、これによって本
発明が限定されるものではない。また、ここに例示しな
かった多くの変法あるいは修飾手段を用いるようなこと
はいうまでもなく可能なことであり、有効な手段となり
得る。なお、実施例中に部とあるのは重量部を示してい
る。

【００６０】実施例１ ＡＢ４０１５−Ｂ物質の製造 生産培地として、ブドウ糖１．０％、水溶性デンプン
３．０％、ポリペプトン０．５％、酵母エキス０．２
％、マルトエキス０．５％、炭酸カルシウム０．５％の
組成からなる培地（ｐＨ６．５）を用いた。

【００６１】前記の培地１１０ｍｌを分注した５００ｍ
ｌ容量バッフル付き三角フラスコ１８２本（培地２０Ｌ
分）を１２１℃で２０分間滅菌し、これにホーマ・エス
ピーＡＢ４０１５株（微工研菌寄第１３２０６号）の斜
面寒天培養の１〜２白金耳を植菌した。その後、ロータ
リーシェーカー（１８０ｒｐｍ）を用い、２５℃で５日
間、回転振とう培養した。

【００６２】培養終了後、培養液をろ過することによ
り、培養ろ液１８Ｌと菌体を得た。上記の菌体を、メタ
ノール６Ｌで抽出し、ろ過して菌体を除いた菌体抽出液
を得た。得られた菌体抽出物に２Ｌの水および４．５Ｌ
のクロロホルムを加え、十分振とう抽出した後に、クロ
ロホルム層を分液した。このクロロホルム層を無水芒硝
で乾燥した後、減圧下で濃縮し、活性成分を含有する褐
色油状物１０ｇを得た。

【００６３】この褐色油状物を、シリカゲル（メルク社
製）を充填させたカラム（内径２８ｍｍ×長さ３２０ｍ
ｍ）に吸着させ、クロロホルム４００ｍｌで洗浄後、ク
ロロホルム−メタノール（５０：１）の組成からなる混
合溶媒で展開溶出するクロマトグラフィーを行った。こ
の時２０ｇづつ分画した。ＡＢ４０１５−Ｂ物質を含む
活性画分Ｎｏ．１４〜１８を集め、減圧下で濃縮乾固
し、活性成分を含有する油状物５５ｍｇを得た。ＡＢ４
０１５−Ａ物質（すなわちＰＦ１０５２物質）は画分１
９番以後に溶出された。ついでこの活性成分を含有する
油状物を、シリカゲル薄層クロマト（メルク社製）に吸
着させ、ヘキサン−酢酸エチル−ギ酸（７０：３０：
１）の組成からなる混合溶媒で展開する薄層クロマトグ
ラフィーを行った。Ｒｆ０．５３付近のＵＶ吸収帯をか
きとり、酢酸エチルで活性成分を溶出させ、減圧下で濃
縮乾固することにより淡橙色油状のＡＢ４０１５−Ｂ物
質を２３ｍｇ得た。

【００６４】さらに、ＡＢ４０１５−Ａ物質は以下に示
す手順で採取した。ＡＢ４０１５−Ａ物質を含む前記シ
リカゲルカラム溶出画分Ｎｏ．１９からＮｏ．２４を集
め減圧下で濃縮乾固させ、０．６ｇの粗精製物を得た。
この粗精製物を再度シリカゲルを充填させたカラム（内
径１８ｍｍ×長さ２４０ｍｍ）に吸着させ、酢酸エチル
−ヘキサン（３：７）の組成からなる混合溶媒で溶出さ
せた（２００滴づつ分画）。画分Ｎｏ．４８以後は酢酸
エチル−ヘキサン（１：１）からなる混合溶媒で更に展
開溶出させた（２００滴づつ分画）。活性画分Ｎｏ．３
４からＮｏ．７０を集め減圧下で濃縮し、メタノールに
可溶、水に不溶な無色油状の物質としてＡＢ４０１５−
Ａ物質を４７０ｍｇ得た。このものはＮＭＲ、ＩＲによ
り分析した結果、ＰＦ１０５２物質と同一物質であると
確認した。

【００６５】実施例２ ＡＢ４０１５−Ｌ物質の製造 生産培地として、ブドウ糖１．０％、水溶性デンプン
３．０％、ポリペプトン０．５％、酵母エキス０．２
％、マルトエキス０．５％、炭酸カルシウム０．５％の
組成からなる培地（ｐＨ６．５）を用いた。

【００６６】前記の培地１１０ｍｌを分注した５００ｍ
ｌ容量バッフル付き三角フラスコ２２本（培地２．２Ｌ
分）を１２１℃で２０分間滅菌し、これにホーマ・エス
ピーＡＢ４０１５株（微工研菌寄第１３２０６号）の斜
面寒天培養の１〜２白金耳を植菌した。その後、ロータ
リーシェーカー（１８０ｒｐｍ）を用い、２５℃で回転
振とう培養し、培養２日目でロイシンを１フラスコにつ
き１ｇ加え、更に３日間振盪培養を継続した。

【００６７】培養終了後、培養液をろ過することによ
り、培養ろ液２Ｌと菌体を得た。上記の菌体から活性成
分を、アセトン２Ｌで抽出し、減圧下で濃縮することに
よりアセトンを除去した。得られた懸濁液に蒸留水を加
え３００ｍｌとし、これに酢酸エチル７００ｍｌを加
え、十分振とう抽出した後に、酢酸エチル層を分液し
た。この酢酸エチル層を無水芒硝で乾燥した後、減圧下
で濃縮し、活性成分を含有する褐色油状物４ｇを得た。

【００６８】この褐色油状物を、シリカゲル（メルク社
製）を充填させたカラム（内径１７ｍｍ×長さ３００ｍ
ｍ）に吸着させ、クロロホルム−メタノール（１００：
１）の組成からなる混合溶媒で展開溶出（画分Ｎｏ．１
〜３５）し、次いでクロロホルム−メタノール（５０：
１）の組成からなる混合溶媒で展開溶出（画分Ｎｏ．３
６〜４４）するクロマトグラフィーを行った。この時４
００滴づつ分画した。活性画分Ｎｏ．３１〜４４を集
め、減圧下で濃縮乾固し、活性成分を含有する油状物６
５０ｍｇを得た。ついでこの活性成分を含有する油状物
を、シリカゲル（メルク社製）を充填させたカラム（内
径１７ｍｍ×長さ３００ｍｍ）に吸着させ、酢酸エチル
−ヘキサン（１：１）の組成からなる混合溶媒６００ｍ
ｌでＡＢ４０１５−Ａ物質（ＰＦ１０５２物質）および
ＡＢ４０１５−Ｂ物質を溶出させた。次いでクロロホル
ム−メタノール（５０：１）の組成からなる混合溶媒で
展開溶出するクロマトグラフィーを行った。このとき４
００滴づつ分画した。画分Ｎｏ．５２〜７２を集め、減
圧下で濃縮し淡橙色油状のＡＢ４０１５−Ｌ物質を１６
２ｍｇ得た。

【００６９】次に、第５の本発明による殺菌剤の組成例
を例示する実施例３〜５によって本発明を具体的に説明
する。

【００７０】実施例３（水和剤） ＡＢ４０１５−ＡまたはＡＢ４０１５−ＢまたはＡＢ４
０１５−Ｌ物質 ２０部、アルキルベンゼンスルホン酸
カリウム ３部、ポリオキシエチレンノニルフェニルエ
ーテル ５部、および白土 ７２部を均一に混合し、粉
砕して、活性成分を２０％含有する水和剤を得た。

【００７１】実施例４（粉剤） ＡＢ４０１５−ＡまたはＡＢ４０１５−ＢまたはＡＢ４
０１５−Ｌ物質 ２部、ＰＡＰ（物理性改良剤） １部
およびクレー ９７部を均一に混合し、粉砕して、活性
成分を２％含有する粉剤を得た。

【００７２】実施例５（乳剤） ＡＢ４０１５−ＡまたはＡＢ４０１５−ＢまたはＡＢ４
０１５−Ｌ物質 ３０部、メチルエチルケトン ４０部
およびポリオキシエチレンノニルフェニルエーテル ３
０部を混合し、溶解して、活性成分を３０％含有する乳
剤を得た。

【００７３】更に、第５の本発明による農園芸用殺菌剤
に用いるＡＢ４０１５−ＢおよびＡＢ４０１５−Ｌ物質
の植物病原菌に対する防除効果を試験例１〜３に例証す
る。

【００７４】試験例１（キュウリべと病防除効果） 温室内で直径９ｃｍの大きさの素焼鉢で土耕栽培した第
２葉期のキュウリ苗（品種：相模半白）に、実施例３に
準じて調製した水和剤をスプレーガンを用いて１鉢当り
２０ｍｌを散布した。一方、湿らせた筆でキュウリべと
病菌（Pseudope ronospora cubensis：シュードペロノ
スポラ クベンシス）の罹病葉より胞子をかきとり、展
着剤（ポリオキシエチレンアルキルエーテル）の５０ｐ
ｐｍ水溶液に懸濁させた後、胞子濃度を５×１０⁶ 胞子
数（個／ｍｌ）に調整し、胞子懸濁液を調製した。

【００７５】このキュウリべと病菌の胞子懸濁液を薬剤
散布１日後のキュウリ苗に噴霧接種した。そして、キュ
ウリ苗を２０℃、湿度１００％の湿室内に２日間静置
し、その後発病室に移し、キュウリべと病を発病させ
た。接種６日後、１葉当たりのキュウリべと病病斑面積
歩合（％）を調査し、平均病斑面積を求め、下記の計算
式により平均防除価（％）を算出した。その試験結果を
下記の表３に示す。

【００７６】

【００７７】

【００７８】試験例２（コムギ赤銹病防除効果試験） 温室内で直径９ｃｍの大きさの素焼鉢で土耕栽培した第
一本葉期のコムギ幼苗（品種：農林６１号）に、実施例
３に準じて調製した水和剤の所定濃度希釈液を３鉢当り
２０ｍｌを散布した。１日後、あらかじめコムギ葉上で
形成させたコムギ赤銹病菌（Puccinia recondita ：プ
クシニア レコンジタ）の夏胞子を１５０倍の顕微鏡で
１視野当りの胞子濃度が約５０個になるようにツイーン
２０［花王石鹸（株）製のポリオキシエチレンソルビタ
ンモノラウレートの商品名］５０ｐｐｍを添加した滅菌
水に懸濁させた。

【００７９】その胞子懸濁液を処理すべき葉に噴霧接種
した。２０℃、湿度１００％の温室内に１日間静置し、
その後発病室に移しコムギ赤銹病を発病させた。接種１
０日後にとり出し、１葉当りに発病した夏胞子堆数を調
査し、次式により防除価を算出した。本試験は１試験あ
たり３鉢制で行い、その平均防除価（％）を求めた。そ
の結果を表４に示す。

【００８０】

【００８１】

【００８２】試験例３（ナシ黒斑病防除効果試験） ナシ樹（品種：二十世紀）の新展開葉４〜５枚を含む新
梢を切り採り、３００ｍｌ容量のコルベンに水さしして
試験に供した。実施例２に準じて調製した水和剤の所定
濃度希釈液２０ｍｌを前記新梢に散布した。接種用ナシ
黒斑病菌（Alte rnaria kikuchiana：アルタナリア キ
クチアナ）はアンズ煎汁寒天培地の平板上で２４℃にお
いて１０日間培養して得た。平板に形成された分生胞子
をかきとり、ツイーン２０［花王石鹸（株）製］の５０
ｐｐｍ溶液に分散させた。胞子濃度を顕微鏡（１５０
倍）一視野あたり約２０個に調整し、スプレーガンを用
いて薬剤散布後１日に接種した。

【００８３】接種後のナシ新梢（３００ｍｌ容コルベン
に水さし）は２４℃の湿室に２４時間保ち、その後は２
４〜２６℃および湿度８５〜９５％のグロースキャビネ
ット内で管理した。病菌接種５日後に１葉あたりの病斑
面積歩合を調査し、次式により防除価（％）を算出し
た。なお、試験は１区３枝制で実施し、平均防除価
（％）を求めた。その結果を表５に示す。

【００８４】

【００８５】

【００８６】

【発明の効果】本発明の新規な抗生物質ＡＢ４０１５−
ＢおよびＡＢ４０１５−Ｌ物質は以上に述べたように、
抗細菌活性と植物病原菌に防除活性を有することから、
新規な医薬用抗菌剤および農園芸用殺菌剤として期待さ
れる。またＡＢ４０１５−Ａ物質も植物病原菌に防除活
性を有することから農園芸用殺菌剤として期待される。

【図面の簡単な説明】

【図１】ＡＢ４０１５−Ｂ物質の臭化カリウム錠剤中で
の赤外部吸収スペクトル図である。

【図２】ＡＢ４０１５−Ｌ物質の臭化カリウム錠剤中で
の赤外部吸収スペクトル図である。

─────────────────────────────────────────────────────

【手続補正書】

【提出日】平成６年２月１０日

【手続補正１】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】００１６

【補正方法】変更

【補正内容】

【００１６】

【手続補正２】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】００２１

【補正方法】変更

【補正内容】

【００２１】

【手続補正３】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】００７７

【補正方法】変更

【補正内容】

【００７７】

【手続補正４】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】００８１

【補正方法】変更

【補正内容】

【００８１】

【手続補正５】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】００８５

【補正方法】変更

【補正内容】

【００８５】

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｃ１２Ｐ 17/10 7432−4Ｂ 17/16 7432−4Ｂ //(Ｃ０７Ｄ 405/08 207:00 303:00） (Ｃ１２Ｐ 17/10 Ｃ１２Ｒ 1:645） (Ｃ１２Ｐ 17/16 Ｃ１２Ｒ 1:645） (72)発明者 玉村 健 神奈川県相模原市東林間６丁目２番３号 (72)発明者 手塚 保行 神奈川県厚木市森の里２丁目24番７号 (72)発明者 佐藤 聖 神奈川県秦野市東田原200番地96 (72)発明者 久津間 誠一 神奈川県相模原市相武台３丁目21番13号 ラプラス藤進102号 (72)発明者 長縄 博 東京都大田区田園調布本町３番17号 (72)発明者 竹内 富雄 東京都品川区東五反田５丁目１番11号 ニ ューフジマンション701

Claims (5)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 下記の一般式（Ｉ） 〔式中、Ｒ¹ およびＲ² はＡＢ４０１５−Ｂ物質ではそ
   れぞれ次式 の基であり、ＡＢ４０１５−Ｌ物質では次式 の基である〕で表される新規な抗生物質ＡＢ４０１５−
   ＢおよびＡＢ４０１５−Ｌ、またはそれらの塩。
2. 【請求項２】 ホーマ属に属する抗生物質ＡＢ４０１５
   −Ｂ生産菌を培地中で培養し、その培養物中にＡＢ４０
   １５−Ｂ物質を生成、蓄積せしめ、ついで培養物から該
   抗生物質を採取することを特徴とする、請求項１に記載
   の抗生物質ＡＢ４０１５−Ｂの製造法。
3. 【請求項３】 ホーマ属に属してロイシンの存在下でＡ
   Ｂ４０１５−Ｌ物質を生産する能力を有する微生物を、
   ロイシンを含む培地中で培養し、その培養物中に抗生物
   質ＡＢ４０１５−Ｌを生成、蓄積せしめ、その培養物か
   らＡＢ４０１５−Ｌ物質を採取することを特徴とする、
   請求項１に記載の抗生物質ＡＢ４０１５−Ｌの製造法。
4. 【請求項４】 請求項１記載の抗生物質ＡＢ４０１５−
   Ｂを生産できる特性とロイシン存在下で抗生物質ＡＢ４
   ０１５−Ｌを生産できる特性を持ち且つ後記の菌学的特
   徴を有するホーマ・エスピーＡＢ４０１５株。
5. 【請求項５】 請求項１記載の抗生物質ＡＢ４０１５−
   ＢまたはＡＢ４０１５−Ｌ、あるいはこれら両者を有効
   成分とする医薬用殺菌剤または農園芸用殺菌剤。