JPH0446188A

JPH0446188A - 新規抗生物質ｐｆ１０３２ｂ物質ならびにその製造法

Info

Publication number: JPH0446188A
Application number: JP2152862A
Authority: JP
Inventors: Shuichi Gomi; 修一五味; Hiromi Watabe; 渡部　宏臣; Yoshiyo Mito; 味戸　佳代; Chieko Moriyama; 守山　千恵子; Tomoko Yugami; 湯上　朋子; Masao Koyama; 小山　正夫
Original assignee: Meiji Seika Kaisha Ltd
Current assignee: Meiji Seika Kaisha Ltd
Priority date: 1990-06-13
Filing date: 1990-06-13
Publication date: 1992-02-17
Anticipated expiration: 2012-01-16
Also published as: JP2573084B2

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】産業上の利用分野本発明は、新規抗生物質ＰＦ１０３２Ｂ物質またはその
塩、ならびにその製造法に関する。

従来の技術本発明による抗生物質ＰＦ１０３２Ｂ物質は、上記の理
化学的性状からトリテルペン類あるいはステロイド類と
考えられるが、これと類似する化合物として、本発明者
らの発見したＰＦＩ０３２物質（特願平１−２５６９８
０）　、ノルトリテルペンオリゴ配糖体（特開平１−１
０６８９７）　、エリロシドＡ　　（Ｃａｒｍｅｌｙら
、Ｊ、Ｎａｔ、Ｐｒｏｄ、５２．Ｎｏ、ｌ、　　１６７
〜１．７０゜１９８９）等が知られているが、抗生物質
ＰＦ１０３２Ｂ物質はこれらの既知物質とは理化学的性
状が異なり明確に区別される。

発明が解決しようとする課題従来、微生物が生産する種々の抗生物質が知られている
が、毒性の低い抗真菌性抗生物質はそれ程多く見出され
ていないため、新規な抗真菌性抗生物質の出現が常に要
望されている。本発明者らは、ＰＦ１０３２物質生産菌
の培養物から既知のＰＦ１０３２物質の他にＰＦ１０３
２Ｂ物質が存在することを見出し本物質を単離し、本発
明を完成させた。さらに本発明の目的は、新規抗真菌性
抗生物質ＰＦ　１０３２Ｂ物質ならびにその製造法を提
供することにある。

課題を解決するための手段第１の本発明の要旨とするところは、新規抗生物質ＰＦ
１０３２Ｂ物質およびその塩にある。本発明によるＰＦ
１０３２Ｂ物質の理化学的および生物学的性状は、次の
通りである。

１、ＰＦ１０３２Ｂ物質の理化学的性状（１）色および
形状：白色粉末（２）元素分析：Ｃ３５Ｈ５４０８・Ｈ２Ｏとして実測
値Ｃ６７，７８％、Ｈ９，２０％計算値Ｃ６７，７１％、Ｈ９，０９％（３）マススペクトル（ＦＤ−ＭＳ）　：　ｍ／ｚ　６
０２　（Ｍ　）（４）融　　点：１９２〜１９５℃（分
解）（５）比旋光度：〔α）ｇ２＝＋１０６．７°（ｃ
ｌ−０，ＭｅＯＨ）（６）紫外部吸収スペクトルハａｘ　ｎｍ（Ｅ　’％）１ｃｍ［ＭｅＯＨ）　　：　２０６（１２５）、　２２６（ｓ
ｈ　４４）（０，ｌＮ　ＨＣｆｆ−ＭｅＯＨ）　　：　
２０５（１１３）、　２２７（ｓｈ　３９）（０，ｌＮ
　ＮａＯＨ−ＭｅＯＨ）　　：　２１４（１９８）（７
）赤外部吸収スペクトル（ＫＢｒ　ｃｍ　ｌ）　：　３４００．２９２０．２８
７０．１６９０．１６５０゜１４６０、１４５０．１４
４０．１４０５．１３８０゜１２４５、１２００．１１
５５．１１１５．１０６０゜１０４０、　９１０．　８
６０．　７８５．　７２０（８）　　ＨＮＭＲスペクト
ル（４００ＭＨｚ−ＣＤ３０Ｄ）δ（ｐｐｍ）　：　０
．８１（３Ｈ，ｓ）、　０．９１（３８，ｓ）。

０．９４（３Ｈ，ｄ）、　１．０５（ＩＨ，ｍ）。

１．３５−１．５２（５Ｈ，ｍ）。

１．５２−１．７６（５Ｈ，ｍ）。

１．５９（３Ｈ，ｂｒ　ｓ）、　　１．６６（３Ｈ，ｂ
ｒ　ｓ）。

１．８８（２Ｈ，ｍ）、１．９４（ＩＨ，ｂｒ　ｄｄ）
。

１．９７−２．１９（７Ｈ，ｍ）、２．２６（ＩＨ，ｌ
１１）。

２．２９（ＩＨ，ｍ）、　　３．３０（ＩＨ，ｄｄ）。

３、旧（ＩＨ，ｄｄ）、　３．６３（ｌＨ，ｍ）。

３．６５（ＩＨ，ｍ）、３．７３（ＩＨ，ｍ）。

３．７６（ＩＨ，ｄｄ）、Ｃ０９（ＩＨ，ｂｒ　　ｄｄ
）。

４．６６（ＩＨ，ｔ＋ｒ　　ｓ）、５．００（１Ｂ、ｄ
）。

５．０８（ＩＨ，ｂｒ　ｄｄ）、　　５．２６（ＩＨ，
ｂｒ　５）１３ＣＮ　Ｍ　ＲスヘクトＬ　（１００ＭＨ
ｚ　、　ＣＤ３０Ｄ）δ（ｐｐｍ）　：　１７９．８　
ｓ、　１５１−３　ｓ、　１４０．１　ｓ。

１３１．８　ｓ、１２９．１　　ｓ、１２６．１　　ｄ
。

１０４．７　　Ｌ、　　９６．９　ｄ、　　７６．７　
ｄ。

７５．２　ｄ、　　７４．Ｏｄ、　　７３．６　ｄ。

７１．９　ｄ、　　６３．８　ｓ、　　６２．７　　ｔ
。

５２．１　　ｄ、　　４８−１　　ｓ、　　４７．８　
ｄ。

４０．４　ｓ、　　３７．２　　ｔ、　　３７．Ｏｄ。

３６．１　　ｔ、　　３２．７　ｔ、　　３０．２　ｔ
。

２９．４　　ｔ、　　２９．ＯＬ、　　２７．７　　Ｌ
。

２５．９　ｑ、　　、２５．７　　ｔ、　　２４．４　
　ｌ２２、ＯＬ、　　　１９．１　　ｑ、　　　１８．
６　ｑ。

１８．３　　ｑ、　　　１７．７　ｑ（１０）溶解性：メタノール、アセトン、酢酸エチルに
溶け、クロロホルムに溶ケ難く、水に極めて溶け難い。

（１１）塩基性、酸性、中性の区別：弱酸性物質ＰＦ１
０３２Ｂ物質の塩としては、金属塩、特にナトリウム塩
の如きアルカリ金属塩、カルンウム塩の如きアルカリ土
類金属塩かあり、更に後記の如きアミンとの塩等がある
。

２、ＰＦ１０３２Ｂ物質の生物活性本発明によるＰＦ１０３２Ｂ物質の各種真菌および各種
細菌に対する最小発育阻止濃度をそれぞれ第１表および
第２表に示した。

第表第表３、ＰＦＩ０３２Ｂ物質の急性毒性ＰＦ１０３２Ｂ物質のＪｃｌ　：　ＩＣＲマウス（雄、
１９〜２０ｇ、　ｎ−３）を用いた腹控内投与による急
性毒性試験で、１００ｍｇ／ｋｇの投与量で死亡例はな
かった。

ｗｃ２の本発明の要旨とするところは、不整子のう菌に
属する抗生物質ＰＦ１０３２Ｂ物質生産菌を培養し、そ
の培養物から抗生物質ＰＦ１０３２Ｂ物質を採取する抗
生物質ＰＦ１０３２Ｂ物質の製造法にある。

本発明の抗生物質ＰＦ１０３２Ｂ物質を生産するために
使用される微生物の実用的な例としては、ネパールの土
壌より分離したネオサルトリア属に属するＰＦＩ０３２
株が挙げられる。

１、ＰＦ１０３２株の菌学的性状 ■、各培地における生育状態（１）ツアペック寒天培地生育はあまり良くなく２５℃では培養７日間で直径が８
−１０＋ａｍ、　１４日間で２２〜２５ｍｍ、　３７℃
では培養７日間で直径が１８〜２０ｍｍ、　１４日間で
３０〜３５ｍｌ１１である。白色、ビロード状の菌糸が
らなり、子のう果、分生子構造は殆ど形成されない。

（２）ツアペック酵母エキス寒天培地３７℃で生育が速く、培養７日間で直径が７０〜８０ｍ
ｍに達する。平坦な集落となり、子のう果は層状に密生
し、最初は白色であるが後に淡灰茶色となる。分生子構
造はあまり形成しない。集落裏面は淡黄褐色となる。２
５℃においても３７℃と同様の性状であるが、生育速度
は培養７日間で直径が５５〜６０ｍｍとやや遅く、子の
う果の形成も少し悪くなる。

（３）麦芽エキス寒天培地３７℃で生育が速く、培養７日間で直径が８５ｍｍ以上
に達する。性状はツアペック酵母エキス寒天培地とほぼ
同様であるが、分生子構造をよく形成する。

■、顕微鏡下における形態的特色（１）閉子のう殻表在性、白色〜乳白色、球形〜亜球形、直径は９０〜１
５０μｍ１不稔性菌糸で緩く覆われる。

（２）子のう８胞子、無色、球形〜亜球形、直径は１３〜１６μｍ、
消失性。

（３）子のう胞子無色、レンズ形、大きさは３．６〜４．ＯＸ　５．０〜
６．０μｍ１１１２本の赤道面隆起を生じ、光学顕微鏡
のレベルでは殆ど滑面である。

（４）分生子類ゆるい円筒形、白色。

（５）　フィアライド頂のうの上部１／２より生じ単列。

（６）分生子球形〜亜球形、直径は２．０〜２．４μｍ０本菌の苗字
的性状は以上の通りであるが、閉子のう殻を形成し、分
生子世代はアスペルギルス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ）
属であることがら、不整子のう菌綱コウジカビ科に属す
る。さらに閉子のう殻が白色〜乳白色であり、不稔性菌
糸に緩く覆われ、分生子世代はアスペルギルス・フミガ
タス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ　ｆｕｍｉｇａｔｕｓ）
菌群であることがらネオサルトリア（Ｎｅｏｓａｒｔｏ
ｒｙａ）属に属するものと考えられる。

従って、本菌株を不整子のう菌ＰＦ１０３２株と呼称す
ることにした。尚、本菌株は工業技術院微生物工業技術
研究所に微工研菌寄第１１０３６号（ＦＥＲ＆Ｉ　Ｐ−
１１０３６）として寄託されている。

ＰＦ１０３２株は、他のカビに見られるようにその性状
が変化し易い。例えば、ＰＦ１０３２株に由来する突然
変異株（自然発生または誘発性）、形質接合体また遺伝
子組換え体であっても、ＰＦ１０３２Ｂ物質を生産する
ものは全て本発明に使用できる。

２、ＰＦ１０３２Ｂ物質生産菌の培養法不整子のう菌に
属するＰＦ１０３２Ｂ物質生産菌を通常の微生物が利用
しうる栄養物を含有する培地で培養する。栄養源として
は、従来カビの培養に利用されている公知のものが使用
できる。例えば、炭素源としては、グルコース、シュク
ロース、水飴、デキストリン、澱粉、グリセロール、糖
蜜、動・植物油等を使用しうる。まＩ；、窒素源として
は、大豆粉、小麦胚芽、コーン・ステイープ・リカー、
綿実粕、肉エキス、ペプトン、酵母エキス、硫酸アンモ
ニウム、硝酸ナトリウム、尿素等を使用しうる。その他
必要に応じ、ナトリウム、カリウム、カルシウム、マグ
ネシウム、コバルト、塩素、燐酸、硫酸およびその他の
イオンを生成することができる無機塩類を添加すること
は有効である。また、菌の発育を助け、ＰＦ１０３２Ｂ
物質の生産を促進するような有機および無機物を適当に
添加することができる。

培養法としては、好気的条件での培養法、特に深部培養
法が最も適している。培養に適当な温度は１５〜４０℃
であるが、多くの場合２６℃付近で培養する。ＰＦＩＣ
３２Ｂ物質の生産は培地や培養条件により異なるが、振
盪培養、タンク培養のいずれにおいても通常２〜１０日
間でその蓄積が最高に達する。培養中のＰＦ１０３２Ｂ
物質の蓄積量が最高になった時に培養を停止し、培養液
から目的物質を単離精製する。

３、ＰＦ１０３２Ｂ物質の精製法本発明によって得られるＰＦ１０３２Ｂ物質の培養物か
らの採取に当たっては、その性状を利用した通常の分離
手段、例えば、溶剤抽出法、イオン交換樹脂法、吸着ま
たは分配カラムクロマト法、ゲルろ適法、透析法、沈澱
法等を単独でまたは適宜組み合わせて抽出精製すること
ができる。例えば、ＰＦ１０３２Ｂ物質は、培養菌体中
からはアセトン−水、メタノール−水または酢酸エチル
等で抽出される。また、培養液中に蓄積されたＰＦ１０
３２Ｂ物質は、水と混ざらない有機溶剤、例えば、ブタ
ノール、酢酸エチル等で抽出すればＰＦ１０３２Ｂ物質
は有機溶剤層に抽出される。

ＰＦ１０３２Ｂ物質を更に精製するには、シリカゲル（
ワコーゲルＣ−３００、和光紬薬工業社製等）、アルミ
ナ等の吸着剤やセファデックスＬＨ−２０（ファルマシ
ア社製）、トヨパールＨＷ〜４０（株式会社東ソー社製
）等を用いるクロマトグラフィーを行うとよい。

このようにして培養物中に生産されたＰＦＩＯ３２Ｂ物
質は遊離の形、すなわちＰＦ１０３２Ｂ物質それ自体と
して分離することができ、またＰＦＩ０３２Ｆ＋物質を
含有する溶液またはその濃縮液を塩基、すなわち例えば
水酸化ナトリウム、水酸化カリウム等のアルカリ金属化
合物、水酸化力ルンウム、水酸化マグネシウム等のアル
カリ土類金属化合物、アンモニウム塩等のような無機塩
基、エタノールアミン、トリエチルアミン、ジシクロヘ
キシルアミン等の有機塩基により、各工程の操作中例え
ば抽出、分離または精製の各工程の操作中に処理した場
合、ＰＦ１０３２Ｂ物質は対応するその塩類の形に変化
し分離される。また別にこのようにして製造されたＰＦ
１０３２Ｂ物質の塩類は、常法により遊離の形、Ｐ　Ｆ
　Ｉ　Ｏ３２Ｂ物質それ自体に変化させることができる
。更に遊離の形で得られたＰＦ１０３２Ｂ物質を前記塩
基により常法で対応するその塩類に変化させてもよい。

従ってＰＦ１０３２Ｂ物質と同様に前記のようなその塩
類も、この発明の範囲内に包含されるものとする。

実施例以下に本発明の実施例を示すが、ＰＦ１０３２Ｒ＆ｆの
仕ｉｆが太仝Ｕ月Ｉこｒっτ日月ちかＬ二されたので、
それらの性状にもとづきＰＦＩ０３２Ｂ物質の製造法を
種々考案することができる。従って本発明は実施例に限
定されるものではなく、実施例の修飾手段は勿論、本発
明によって明らかにされたＰＦ１０３２Ｂ物質の性状に
もとづいて公知の手段を施してＰＦ１０３２Ｂ物質を生
産、濃縮、抽出、精製する方法をすべて包括する。

種培地として、スターチ２．０％、グルコース１．０％
、ポリペプトン０．５％、小麦胚芽０．６％、酵母エキ
ス０．３％、大豆粕０．２％、炭酸カルシウム０．２％
の組成からなる培地を用いた。また、生産培地として、
水飴２．０％、大豆油０．３％、大豆粕１．２％、小麦
胚芽１．２％、硫酸ナトリウム０．０２％、硫酸鉄（７
水塩）　０．０００５％、塩化コバルト（７水塩）０．
０００５％、炭酸カルシウム０．１％の組成からなる培
地を用いた。なお、殺菌前ｐＨはすべてｐＨ７，０に調
整して使用した。

前記の種培地（２０ｍｆｆ）を分注した１００ｍＱ容三
角フラスコを１２０℃で１５分間殺菌し、これにＮｅｏ
ｓａｒｔｏｒｙａ属ＰＦ１０３２株（ＦＥＲＭ　ｐ−１
１０３６）の斜面寒天培養の１白金耳を接種し、２６℃
で２日間振盪培養して種培養とした。次いで、前記の生
産培地（１００１２）を分注した５００ｍ１２容三角フ
ラスコ（２００本）を１２０℃で１５分間殺菌し、これ
に前記捨培養（各２　＋ｎ１２）を接種し、２６℃で４
日間振盪培養した。培養終了後、濾過助剤として珪藻土
を加えて濾過し、濾液と菌体を得た。

この菌体に５０％アセトン水（１６Ｌ）を加え、１時間
撹拌後菌体を濾別して菌体抽出液を得た。

菌体抽出液は、減圧下でアセトンを留去して４Ｌの濃縮
液とした。この濃縮液と培養濾液（１６Ｌ）の混合液か
ら酢酸エチル（２ＯＬ）で活性成分を抽出し、酢酸エチ
ル層を濃縮すると油状物質（３，８２ｇ）が得られた。

この油状物質をシリカゲルカラム（４００ｇ）の上部に
載せ、クロロホルム−メタノール（１０：１　、８００
ｍ１２）で洗浄後クロロホルム−メタノール（５：１）
を展開溶媒とするクロマトグラフィーを行い、溶出液を
２０ｍＱずつ分画した。

ＰＦ１０３２Ｂ物質を含む画分（フラクション番号８１
〜９０）を濃縮乾固すると淡黄色粉末（３２，３ｍｇ）
が得られた。次いでこの淡黄色粉末を、メタノールを展
開溶媒とするセファデックスＬＨ−２０（１４０ｍ（２
）カラムクロマトグラフィー（１分画。

６．５ｍ＋２）を行って精製し、フラクション番号１５
〜１９を濃縮乾固すると純粋なＰＦ１０３２Ｂ物質が白
色粉末（２５，８ｍｇ）として得られた。同様に、最初
のシリカゲル・カラムクロマトグラフィーに於いてＰＦ
１０３２物質を含む両分（フラクション番号９２〜１３
６）を濃縮乾固すると淡黄色粉末（２１４ｍｇ）が得ら
れた。次いで、この淡黄色粉末をメタノールを展開溶媒
とするセファデックスＬＨ−２０（５６０ｍＱ）カラム
クロマトグラフィー（１分画。

１３ｍＱ）を行って精製し、フラクション番号３４〜４
２を濃縮乾固すると純粋なＰＦ１０３２物質が白色粉末
（１８９ｍｇ）として得られた。

発明の効果本発明のＰＦＩ０３２Ｂ物質は第１表に示した如く抗真
菌活性を有し、また従来の抗真菌性抗生物質に比べて毒
性が低いのが特徴である。これらの性質に基づき本発明
のＰＦ１０３２Ｂ物質を抗真菌剤あるいはそれへの変換
用素材として用いることができる。

【図面の簡単な説明】

第１図：ＰＦ１０３２Ｂ物質のメタノール中（１００μ
ｇ／ｍＱ、実線）、酸性メタノール中（１００μｚ／ｍ
（１、破線）および塩基性メタノール中（１００１１ｇ
／ｍＱ、、−点鎖線）での紫外部吸収スペクトルを示す
。第２図：ＰＦ１０３２Ｂ物質の臭化カリウム錠での渉外
部吸収スペクトルを示す。第３図：ＰＦ１０３２Ｂ物質の重メタノール溶液中での
４００ＭＨｚ　　’ＨＮＭＲスペクトルを示す。第４図：ＰＦ１０３２Ｂ物質の重メタノール溶液中での
１００ＭＨｚ　１３ＣＮＭＲスペクトルを示す。

Claims

【特許請求の範囲】１、下記の特性を有する抗生物質ＰＦ１０３２Ｂ物質お
よびその塩（１）色および形状：白色粉末（２）元素分析：実測値Ｃ６７．７８％、Ｈ９．２０％
（３）マススペクトル（ＦＤ−ＭＳ）：ｍ／ｚ６０２（
４）融点：１９２〜１９５℃（分解）（５）比旋光度：▲数式、化学式、表等があります▼（
ｃ１．０、ＭｅＯＨ）（６）紫外部吸収スペクトル：第
１図に示す。（７）赤外部吸収スペクトル：第２図に示す。（８）＾１ＨＮＭＲスペクトル：第３図に示す。（９）＾１＾３ＣＮＭＲスペクトル：第４図に示す。（１０）溶解性：メタノール、アセトン、酢酸エチルに
溶け、クロロホルムに溶け難く、水に極めて溶け難い。（１１）塩基性、酸性、中性の区別：弱酸性物質２、不
整子のう菌（Ｎｅｏｓａｒｔｏｒｙａ属）に属する、抗
生物質ＰＦ１０３２Ｂ物質生産菌を培養し、その培養物
から抗生物質ＰＦ１０３２Ｂ物質を採取することを特徴
とする抗生物質ＰＦ１０３２Ｂ物質の製造法。