JP4261304B2 - 微生物によるα−ホモノジリマイシンの製造方法 - Google Patents

Description

本発明は、α-ホモノジリマイシンの生産能を有する新規微生物および該微生物を用い
るα-ホモノジリマイシンの製造方法に関する。

α-ホモノジリマイシン（2,6-Bis(hydroxymethyl)-3,4,5-piperidinetriol (9CI)(2R,3R,4R,5S,6R)-form）はα-グルコシダーゼ阻害活性を有する糖類似アルカロイドであり、
血糖低下剤などの合成中間体として利用するために物質合成されている。(例えば、特許
文献１、２、３、非特許文献１、２参照) また、α-ホモノジリマイシンの全合成も知られている (例えば、非特許文献３参照) 。 化学合成方法以外では、植物であるトウダイグサ科のＯｍｐｈａｌｅａ ｄｉａｎｄｒａ(例えば、非特許文献４参照)からの抽出によ
って得られる。その後の研究によりα-ホモノジリマイシンは、サトイモ科のＡｇｌａｏ
ｎｅｍａ ｔｒｅｕｂｉｉ(例えば、非特許文献５参照)、ユリ科のＨｙａｃｉｎｔｈｕｓ ｏｒｉｅｎｔａｌｉｓ(例えば、非特許文献６参照)、ツユクサ科のＣｏｍｍｅｌｉｎａ
ｃｏｍｍｕｎｉｓ(例えば、非特許文献７参照)からも単離されている。
米国特許第４６３４７６５明細書 米国特許第４８８０９１７明細書 米国特許第４９０８４３９明細書 「ジャーナル オブ オーガニック・ケミストリー(Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ)」、(米国)、１９８７年、５２巻、 ｐ.４７１７‐４７２１ 「ジャーナル オブ オーガニック・ケミストリー(Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ)」、(米国)、１９８９年、５４巻、 ｐ.２５３９‐２５４２ 「ジャーナル オブ ザ ケミカル ソサイエティー ケミカル コ ミュニケーションズ(Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｔｈｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｓｏｃｉｅ ｔｙ,Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ)」、(英国)、１９９０年 、２０号、ｐ.１４５７‐１４５９ 「テトラヘドロン レターズ(Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔｅ ｒｓ)」、(米国)、１９８８年、２９巻、ｐ.６４８３‐６４８６ 「ジャーナル オブ ナチュラル プロダクツ(Ｊｏｕｒｎａｌ ｏ ｆ Ｎａｔｕｒａｌ Ｐｒｏｄｕｃｔs)」、(米国)、１９９７年、６０巻、ｐ.９８ ‐１０１ 「ジャーナル オブ ナチュラル プロダクツ(Ｊｏｕｒｎａｌ ｏ ｆ Ｎａｔｕｒａｌ Ｐｒｏｄｕｃｔs)」、(米国)、１９９８年、６１巻、ｐ.６２ ５‐６２８ 「プランタ メディカ(Ｐｌａｎｔａ Ｍｅｄｉｃａ)」、(独国) 、１９９９年、６５巻、ｐ.４３７‐４３９

以上のような化学合成方法または植物材料を用いてα-ホモノジリマイシンを生産する
方法は、それ自体がその目的を達成するものであるが、工業的利用の観点からは必ずしも満足し得るものではない。すなわち化学合成方法では工業的規模で製造する方法として操作の煩雑さ、またはコスト面で問題があり、他方植物から調製する方法では、材料の入手に安定性を欠くという問題がある。このためα-ホモノジリマイシンを安定的に効率よく
生産できる微生物を開発創製する必要性は依然として存在する。本発明の目的は、α-ホ
モノジリマイシンの生産能を有する新規微生物の提供ならびに該微生物を用いるα-ホモ
ノジリマイシンの製造方法を提供することにある。

本発明者らは、上記の目的を達成すべく鋭意研究を行った。その結果、本発明者らにより種々の分離源から分離された各種糸状菌のうち、ペニシリウム(Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕ
ｍ)属に属する微生物がα-ホモノジリマイシンを生産することを初めて見出した。この糸状菌の培養液から、α-ホモノジリマイシンを効率よく生産することに成功して本発明を
完成した。

本発明は、α-ホモノジリマイシンの生産能を有するペニシリウム・エスピー(Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｓｐ．)である。そしてこれに属する菌株として、ペニシリウム・エス
ピーＡＢ５５７７(Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｓｐ．ＡＢ５５７７)株が挙げられる。さらに、本発明は、ペニシリウム(Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ)属に属する微生物を培地中に培養し、その培養物からα-ホモノジリマイシンおよび／またはその塩類を採取することを特
徴とするα-ホモノジリマイシンの製造方法である。ここでα-ホモノジリマイシンの塩類とは例えば塩酸、臭化水素酸、硫酸、燐酸等のような無機酸類や、酢酸、プロピオン酸、グリコール酸、乳酸、マロン酸、コハク酸、フマル酸、リンゴ酸、酒石酸、クエン酸等の有機カルボン酸類との塩類である。

なお、本明細書において、α-ホモノジリマイシンの他にその塩を含めてα-ホモノジリマイシンと言及する場合もある。「α−ホモノジリマイシン生産菌」もしくは「α−ホモノジリマイシン生産菌株」とは、α-ホモノジリマイシンを生産する能力を有する微生物
をいう。これには、ペニシリウム(Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ)属に属する微生物またはその変異株などが含まれるが、本発明に係る微生物はこれらに限定されるものではない。

微生物を利用したα-ホモノジリマイシンの製造は、本発明が初めてである。以下、本
発明の概要を示す。

本発明はα-ホモノジリマイシンの生産能を有する微生物を培地で培養し、培養物から
α-ホモノジリマイシンおよび／またはその塩類を採取することを特徴とするα-ホモノジリマイシンの製造方法である。

特にその微生物のうちα-ホモノジリマイシンの生産能を有する糸状菌を用いることを
特徴とするα-ホモノジリマイシンの製造方法である。

さらに本発明は、α-ホモノジリマイシンの生産能を有するペニシリウム(Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ)属に属する微生物を培地で培養し、培養物からα-ホモノジリマイシンおよび／またはその塩類を採取することを特徴とするα-ホモノジリマイシンの製造方法である
。

より好ましくは、上記のα-ホモノジリマイシンの生産能を有するペニシリウム(Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ)属に属する微生物が、ペニシリウム・エスピー ＡＢ５５７７株(Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｓｐ．ＡＢ５５７７) またはその変異株である。

そしてそのα-ホモノジリマイシンの生産能を有するペニシリウム (Ｐｅｎｉｃｉｌｌ
ｉｕｍ)属に属する新規微生物を提供する。

本発明は、微生物の利用によるα-ホモノジリマイシンの製造に端緒を開くものである
。本発明のα-ホモノジリマイシンの製造法は、微生物による生産により安定したα-ホモノジリマイシンの生産・供給を実現するものであり、α-ホモノジリマイシンを効率良く
安価に製造していくことが可能となる。さらに本発明により製造されるα-ホモノジリマ
イシンには、従来の化学合成法による生産の場合のように有害な夾雑物が残存することもない。

本発明の方法で用いられるα−ホモノジリマイシン生産菌としては、α−ホモノジリマイシンおよび/またはその塩を産生する能力を有するものであれば、いかなる微生物でも
よい。これにはα-ホモノジリマイシンの生産能を有する糸状菌が含まれ、なかでもα-ホモノジリマイシンの生産能を有するペニシリウム (Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ)属に属する
微生物が望ましい。その具体的な例としては、本発明者らが神奈川県南足柄市より採取した土壌試料から新たに純粋分離したＡＢ５５７７菌株がある。この菌株はペニシリウム(
Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ)属に属する菌株であり、α−グルコシダーゼ阻害活性物質であ
るα−ホモノジリマイシン生産菌として本発明の方法に最も有効に用いられる菌株の一例である。

α-ホモノジリマイシン生産能が特に高いこのＡＢ５５７７株の菌学的性質を以下に記
載する。
（１）培養的・形態的性質
1)ＡＢ５５７７株をポテト・デキストロース寒天培地を用いて、２５℃で培養したとき、集落の直径は１４日目で３５〜３７ｍｍに達する。集落は綿毛状〜羊毛状を呈し、放射状の溝を持ち、中心部はやや隆起する。集落表面は灰色がかった緑色を呈し、周縁部は淡白色〜淡黄白色を呈する。集落裏面は淡黄褐色〜淡橙褐色を呈し、放射状の溝を持つ。

2)麦芽エキス寒天培地を用いて、２５℃で培養したとき、集落の直径は１４日目で３８〜４０ｍｍに達する。集落は綿毛状〜羊毛状を呈し、中心部はやや隆起する。集落表面は中心部が淡黄褐色〜淡橙褐色を呈し、周囲は淡白色〜淡黄白色を呈する。裏面は中心部が淡黄褐色〜淡橙褐色を呈し、周囲は淡黄白色を呈する。

3)ツアペック寒天培地を用いて、２５℃で培養したとき、集落の直径は１４日目で３４〜３６ｍｍに達する。集落はビロード状〜綿毛状を呈し、集落表面は淡白色〜淡黄白色で、裏面は淡黄白色を呈する。

4)ポテト・デキストロース寒天培地で２５℃、１４日間培養したときのＡＢ５５７７株の光学顕微鏡による観察結果を以下に記載する。

菌糸は隔壁を有し、培地中および培地上に伸長する。菌糸は幅１．０〜３．０μｍで、無色、平滑で分岐する。分生子柄は束状になることはなく、菌糸から単生し、立ち上がる。分生子柄は、平滑で、隔壁を有し、長さは１５０〜２５０μｍである。分生子柄の先端に３〜６本のメトレを形成し、各メトレの先端に多数のフィアライドを形成する。メトレは、無色、平滑で、へら形あるいは長方形を呈し、長さ８．０〜１０．０μｍ、幅２．０〜２．５μｍである。フィアライドは、先端が細くなったペン先状を呈し、無色、平滑で、長さ９．０〜１２．０μｍ、幅は最も広い部位において２．０〜２．５μｍである。分生子はフィアライド先端から多数形成され、単細胞で、無色、平滑、亜球形〜広だ円形を呈し、大きさが２．０〜３．５×２．０〜２．５μｍである。
（２）生理学的性質
1)生育温度
麦芽エキス寒天培地を用いて、５℃、１０℃、１５℃、２０℃、２５℃、３０℃、３７℃および４０℃の各温度で培養した結果、ＡＢ５５７７株は１０℃〜３０℃まで何れの
温度でも生育し、３７℃ではわずかな生育が認められる。５℃および４０℃では生育しない。最適生育温度は２５℃付近である。

2)生育ｐＨ
ｐＨを３、４、５、６、７、８、９および１０に調製した麦芽エキス液体培地を用いて、２５℃で培養した結果、ＡＢ５５７７株はｐＨ３〜１０の範囲で生育が認められる。最適生育ｐＨは、５〜６である。

上記の菌学的性質からＡＢ５５７７株の分類学上の位置をジェイ・エイ・フォン・アークス著、ザ・ジェネラ・オブ・ファンジャイ・スポルレイティング・イン・ピュア・カルチャー、第３版、ジェイ・クレイマー社、バダッツ、１９８１年 （Ｊ. Ａ. ｖｏｎ Ａｒｘ, Ｔｈｅ Ｇｅｎｅｒａ ｏｆ Ｆｕｎｇｉ Ｓｐｏｒｕｌａｔｉｎｇ ｉｎ Ｐｕｒｅ Ｃ
ｕｌｔｕｒｅ, ３ｒｄ ｅｄ., J. Ｃｒａｍｅｒ, Ｖａｄｕｚ, １９８１)に従って検索した。

その結果、本発明者らは本菌株をペニシリウム (Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ)属に属する
微生物と同定した。しかしながら、ペニシリウム属に属する菌株であってα−ホモノジリマイシンの生産能を有するものについては、これまで報告されたことがない。したがって、本発明者らはこれを新菌株とし、ペニシリウム・エスピー ＡＢ５５７７ (Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｓｐ．ＡＢ５５７７)と命名した。なお、この菌株は、独立行政法人産業
技術総合研究所特許生物寄託センターに寄託申請され、平成１５年９月５日、受託番号ＦＥＲＭ P-１９５１５号として受託されている。

以上、α−グルコシダーゼ阻害活性物質であるα−ホモノジリマイシンの生産菌株として好適なＡＢ５５７７株について説明したが、一般的には菌類の菌学上の性状は極めて変化しやすく、一定したものではない。菌類は、自然的あるいは通常行われている紫外線照射、Ｘ線照射、変異誘発剤（例えば、亜硝酸、Ｎ−メチル−Ｎ'−ニトロ−Ｎ−ニトロソ
グアニジン（ＮＴＧ）、ナイトロジェン・マスタード、２−アミノプリン、アザセリンまたはエチルメタンスルホネートなど）または遺伝子組換えを用いる人為的変異手段により変異することは周知の事実である。このような自然変異株ならびに人工変異株も含め、糸状菌、より好ましくはペニシリウム属に属するもので、しかもα−ホモノジリマイシンを生産する能力を有する菌株は、すべて本発明に使用することができる。

本発明の方法により、α−ホモノジリマイシンを製造するには、まずα−ホモノジリマイシン生産菌を栄養源含有培地に接種して好気的に発育させる。これによりα−ホモノジリマイシンを含む培養物が得られるので、該培養物からα−ホモノジリマイシンを採取して単離すればよい。

本発明で使用される培地としては、炭素源、窒素源、無機塩類、生育因子及び使用する微生物が要求する栄養物質を含有する培地であればいずれであってもよい。炭素源としては、グルコース、マルトース、グリセリン、蔗糖、デンプン、デキストリン、水飴、糖蜜、動・植物油等のα-ホモノジリマイシン生産菌が資化可能なものが単独または混合物と
して使用可能である。窒素源としては大豆粉、小麦胚芽、魚粉、コーンスティープリカー、肉エキス、酵母エキス、ペプトンを単独または混合物として使用できる。無機塩類として、硝酸ナトリウム、硝酸アンモニウム、硫酸アンモニウム、塩化ナトリウム、塩化カリウム、硫酸マグネシウム、炭酸カルシウム、または各種リン酸塩などが使用できる。また必要により微量金属塩、例えばコバルト、鉄、ニッケル、マンガン等を添加できる。また、これらのもの以外でも菌の発育を助け、α−ホモノジリマイシンの生産を促進するような無機および有機物を必要に応じて適当に添加することができる。液体培養において発泡がある場合はシリコン油、植物油および界面活性剤等の消泡剤を便宜使用する。

α−ホモノジリマイシン生産菌の培養は、一般の微生物代謝産物の生産方法と同様に行なえばよく、固体培養でも液体培養でもよい。液体培養の場合には好気条件下で、静置培養、振盪培養、攪拌培養等で行う。小規模の培養を行なうには、まず適当量の栄養培地をフラスコ中に入れ、既知の方法で滅菌した後、このフラスコにα−ホモノジリマイシン生産菌を植菌して培養する。液体培養による大規模培養は、攪拌機、通気装置、滅菌装置などを備えた適当な大きさの培養槽中で行なう。培養終了時にバッチ方式で無菌的分離装置を用いて、微生物とα−ホモノジリマイシンを含む培養液を分離し、微生物を培養槽内にリサイクルして再利用する反復回分培養方式、あるいは培養と同時に、培養槽から培養液を連続的あるいは間欠的に一部を抜き出したのち分離装置に通し微生物と培養上清を分離し、微生物を培養槽内に再び戻す操作を行う方法のいずれも採用しうる。

通常培養温度は１５〜３０℃の範囲であるが、多くの場合２４〜３０℃で培養する。培養中のｐＨは３．０〜８．０の範囲で行なうが、特にｐＨ４．０〜７．５が好ましい。培養は、栄養培地を例えば、１００〜２０００ｒｐｍ、好ましくは１５０〜５００ｒｐｍにて撹拌および/または通気しながら約２日ないし１５日間行う。通気は、培養器の大きさ
、撹拌速度などに応じて変える必要があるが、一般的には培地容量の０〜５００％、好ましくは５０〜１５０％の空気を毎分送り込む。発酵日数は３〜１４日間が好ましいが、実際には培養中のα−ホモノジリマイシンの蓄積量が最高に達したときに培養を停止してもよい。得られた培養液から発酵生産物を採取するといった一般的な方法に準じて培養・単離を行うのがよい。α−ホモノジリマイシンの蓄積量は、後述のようにα‐グルコシダーゼ阻害率でチェックすることができる。これらの培地組成、培地の液性、培養温度、撹拌速度および通気量等の培養条件は、使用する菌株の種類および外部条件等に応じて好ましい結果が得られるように便宜調節あるいは選抜する。

本発明の方法によって、製造され採取されたα−ホモノジリマイシンの培養液からの分離、精製は、常法に従って行えばよい。例えば遠心分離またはフィルター等によるろ過、高分子膜ろ過、溶媒抽出法、液体クロマトグラフィーもしくは薄層クロマトグラフィーといった各種クロマトグラフィー技術、ゲルろ過法または結晶化などが挙げられ、これらを適宜組み合わせて行うことによりできる。

培養液からのα−ホモノジリマイシンの採取および分離・精製は、概ね次の操作によることが好ましい。上記のように培養して、α‐グルコシダーゼ阻害率のチェックにより培養中のα−ホモノジリマイシンの蓄積量がほぼ最高に達したときに培養を停止する。培養液を遠心分離により菌体と上清に分ける。次いで分離した菌体をアセトン、エタノールなどの溶媒で複数回抽出する。抽出物を培養液上清と混合した後、陽イオン交換樹脂、陰イオン交換樹脂を用いるカラムクロマトグラフィーによる精製を行なう。得られたα−ホモノジリマイシン画分を減圧濃縮しさらに凍結乾燥を行なう。このようにして得られたα−ホモノジリマイシンの同定および純度の確認は、融点測定、紫外、赤外の吸収スペクトル、ＮＭＲなどの分光学分析、質量分析などを用いる常法による。
［実施例］
本発明を実施例によりさらに詳細に説明するが、本発明はこの具体例に限定されるものではない。なお以下の例において、％は特にことわらない限り重量％である。

α-グルコシダーゼ阻害活性は、既に報告された方法（アナリティカル バイオケミストリー（Analytical Biochemistry）１９６６年、１４巻、ｐ．３７６-３９２）に準じて測定される。具体的には以下の操作方法で測定した。

ラット小腸アセトン粉末（シグマ社製）１ｇに対して０．１Ｍマレイン酸緩衝液（ｐＨ６．５）１００ｍｌを加えて撹拌した後に、５０００ｒｐｍ、１０分間遠心分離を行った
。得られた上清をα−グルコシダーゼ酵素溶液とした。スクロース基質溶液は５６ｍＭとなるように蒸留水でスクロースを溶解した。基質溶液２５０μl、被験溶液５０μl及び０．１Ｍマレイン酸緩衝液（ｐＨ６．５）１５０μlを加えて混合し、酵素溶液５０μlを添加することで酵素反応を開始した。酵素反応を３７℃、６０分間行ない、９９℃で２分間加熱することにより酵素反応を停止した。酵素反応液２０μlを試験管にとり、グルコー
ス定量発色液（グルコーステストキットＣIIテストワコー、和光純薬工業社製）３．０ｍｌを加えて３７℃、５分間発色させ、５０５ｎｍの吸光度Ａｓを測定した。また、被験溶液の代わりに蒸留水を加えた時の吸光度をＡｗ、酵素を加えなかった時の吸光度をＡｂとして同時に測定した。それらの吸光度から次式によりα−グルコシダーゼ阻害率（％）を求めた。
α−グルコシダーゼ阻害率＝〔１−（Ａｓ−Ａｂ）／（Ａｗ−Ａｂ）〕×１００
¹Ｈおよび¹³Ｃ−ＮＭＲは、特に指示がない限り、重水（D₂O）の溶液で、日本電子（株）社製核磁気共鳴装置（モデルJNM-LA300）を使用して測定された。

フラスコ培養：溶性デンプン １．５％、 グルコース ０．５％、麦芽エキス ０．０５％、酵母エキス０．０２％、ポリペプトン０．１％、硝酸カリウム ０．１％、 炭酸カルシウム ０．１％、ｐＨ ６．０の培地１００ｍｌをバッフル付き５００ｍｌ容三角フラスコに入れ、ペニシリウム・エスピー ＡＢ５５７７ (Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｓｐ．ＡＢ５５７７)株をスラントから一白金耳量を接種し、６日間、２７℃で回転数１８０ｒｐ
ｍのロータリーシェーカーで好気培養した。培養液上清のα-グルコシダーゼ阻害活性を
測定した結果、４０％のα-グルコシダーゼ阻害率を有する培養液が得られた。

上記培養フラスコから集めた培養液４.５Ｌを遠心分離により菌体と上清に分けた。分
離した菌体からα-グルコシダーゼ阻害活性成分を４５％アセトンで３回抽出し減圧下濃
縮乾固させた。該抽出物を１Ｌの脱イオン交換水に溶解させて培養液上清と混合した。混合溶液を強酸性陽イオン交換樹脂デュオライト(登録商標) Ｃ‐２０（Ｈ⁺型）７００ｍｌを充填したカラムに通過させ、その後このカラムに ２Ｌの脱イオン交換水を通過させて
洗浄し、２．０％アンモニア水３．５Ｌで溶出した。α-グルコシダーゼ阻害活性成分を
含む溶出液を減圧濃縮して５００ｍｌとし、強塩基性陰イオン交換樹脂デュオライト(登
録商標) Ａ‐１１３（ＯＨ^-型）６００ｍｌを充填したカラムに通過させ、その後このカ
ラムに １．８Ｌの脱イオン交換水を通過させて洗浄した。

上記操作により得た通過液および洗浄液を減圧下濃縮乾固し、これを少量の蒸留水に溶解し、弱酸性陽イオン交換樹脂アンバーライト(登録商標) ＩＲＣ-５０（ＮＨ₄ ⁺型）１５０ｍｌを充填したカラムに供し、蒸留水で溶出して溶出液を分画した。α-グルコシダー
ゼ阻害活性画分を集めて、減圧濃縮後に凍結乾燥し、α-グルコシダーゼ阻害活性物質、
５８．５ｍｇを得た。このようにして得られたα-グルコシダーゼ阻害活性物質のＮＭＲ
分析を行なったところ、その¹Ｈ-ＮＭＲケミカルシフト値及び¹³Ｃ-ＮＭＲケミカルシフ
ト値が、α−ホモノジリマイシンの文献値と一致した。
¹ＨＮＭＲデータ：
σ(ppm):3.91(1H,dd,J=3.0,11.5Hz), 3.81-3.84 (2H,m), 3.76(1H,dd,J=6.1, 10.0Hz), 3.58(1H,dd,J=7.1, 11.5Hz), 3.51(1H,t, J=9.5Hz), 3.30(1H,td, J=5.9, 8.8Hz), 3.22(1H,dd,J=8.0,10.0Hz), 2.87(1H,ddd,J=3.0,7.1,11.0Hz)
¹³ＣＮＭＲデータ：
σ(ppm):77.1, 74.9, 74.4, 64.8, 59.7, 59.1, 56.8

ジャーファーメンター培養：溶性デンプン １．０％、 グルコース ５．０％、麦芽エ
キス ０．０５％、酵母エキス０．０１％、ポリペプトン１．５％、硝酸カリウム ０．２
％、 炭酸カルシウム ０．１％、ｐＨ ６．０の培地２．０Ｌを４Ｌ容ジャーファーメン
ターに入れ滅菌後、あらかじめ前培養したペニシリウム・エスピー ＡＢ５５７７ (Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｓｐ． ＡＢ５５７７)株を接種し、培養温度２７℃、撹拌回転数
４５０ｒｐｍ、通気量２Ｌ/ｍｉｎで５日間培養を行った。

培養液上清のα-グルコシダーゼ阻害活性を測定した結果、８５％のα-グルコシダーゼ阻害率を有する培養液が得られた。その培養液２．０Ｌを遠心分離により菌体と上清に分けた。分離した菌体からα-グルコシダーゼ阻害活性成分を４５％アセトンで３回抽出し
、減圧下濃縮乾固させた。該抽出物を１Ｌの脱イオン交換水に溶解させて上記培養液上清と混合した。

混合溶液を強酸性陽イオン交換樹脂デュオライト(登録商標) Ｃ-２０（Ｈ⁺型）６００
ｍｌを充填したカラムに通過させ、その後このカラムに １．８Ｌの脱イオン交換水を通
過させて洗浄し、２．０％アンモニア水３．０Ｌで溶出した。α-グルコシダーゼ阻害活
性成分を含む溶出液を減圧濃縮して５００ｍｌとし、強塩基性陰イオン交換樹脂デュオライト(登録商標) Ａ‐１１３（ＯＨ―型）４５０ｍｌを充填したカラムに通過させ、その
後このカラムに １．５Ｌの脱イオン交換水を通過させて洗浄した。

上記により得た通過液および洗浄液を減圧下濃縮乾固し、これを少量の蒸留水に溶解し、弱酸性陽イオン交換樹脂アンバーライト(登録商標) ＩＲＣ-５０（ＮＨ₄ ⁺型）３００ｍｌを充填したカラムに供し、蒸留水で溶出して溶出液を分画した。α-グルコシダーゼ阻
害活性画分を集めて、濃縮後に凍結乾燥し、α-グルコシダーゼ阻害活性物質 １５８．３ｍｇを得た。このようにして得られたα-グルコシダーゼ阻害活性物質のＮＭＲ分析を行
なったところ、その¹Ｈ-ＮＭＲケミカルシフト値及び¹³Ｃ-ＮＭＲケミカルシフト値が、
α−ホモノジリマイシンの文献値と一致した。

Claims (2)

1. α-ホモノジリマイシンの生産能を有するペニシリウム・エスピー ＡＢ５５７７株(Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｓｐ．ＡＢ５５７７) またはα-ホモノジリマイシンの生産能を
   有するその変異株を培地で培養し、培養物からα-ホモノジリマイシンおよび/またはその塩類を採取することを特徴とするα-ホモノジリマイシンの製造方法。
2. 独立行政法人産業技術総合研究所特許生物寄託センターにＦＥＲＭ P-１９５１５号の受託番号で寄託されたペニシリウム・エスピー ＡＢ５５７７株(Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕ
   ｍ ｓｐ．ＡＢ５５７７)またはα-ホモノジリマイシンの生産能を有するその変異株。