JPH0859612A - 抗生物質ａｂ４０１５−ａ１，ａ２およびａ３とそれらの製造法ならびに農園芸用殺菌剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【目的】 抗カビ活性を有する新規な抗生物質を提供す
る。 【構成】 抗カビ活性を有して下記の一般式（Ｉ）で表
される抗生物質ＡＢ４０１５−Ａ１，−Ａ２および−Ａ
３が得られた。これら物質は農園芸用殺菌剤として有用
である。 一般式（Ｉ）： 式中、ＲはＡＢ４０１５−Ａ１物質では次式 の基であり、３′〜４′位置の間の結合は二重結合であ
り、またＲはＡＢ４０１５−Ａ２物質では次式 の基であり、３′〜４′位置の間の結合は単結合であ
り、またＲはＡＢ４０１５−Ａ３物質では次式 の基であり、３′〜４′位置の間の結合は単結合であ
る。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は抗カビ活性を有する新規
な抗生物質ＡＢ４０１５−Ａ１，Ａ２およびＡ３および
それらの塩に関し、またそれらの製造法に関するもので
ある。本発明はまた抗生物質ＡＢ４０１５−Ａ１，Ａ２
およびＡ３およびこれらの塩の少くとも１つを有効成分
とする農園芸用殺菌剤に関する。

【０００２】

【従来の技術】抗カビ活性を有する抗生物質は種々のも
のが知られている。また、本発明のＡＢ４０１５−Ａ
１，Ａ２およびＡ３物質と化学構造上近似の物質として
は、これまでに、いくつかの物質が医薬または動物薬と
して（特開平４−３１６５７８号公報、特開平４−７４
１６３号公報、特開昭６３−１９０８９４号公報）、ま
た農園芸用殺菌剤として（ＰＣＴ特許公表第９４／００
０１３号公報）それぞれ知られている。

【０００３】しかしながら本発明のＡＢ４０１５−Ａ
１，Ａ２およびＡ３物質は、それらの物理化学的性状お
よびその発明の効果などの諸性質の点で前記の公報に示
された既知物質と一致しない。

【０００４】

【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、農園
芸用殺菌剤分野において利用できて植物病原菌、特にカ
ビ菌に対し低濃度で有効であり且つ植物に薬害を示さ
ず、しかも哺乳類に低毒性である新規な抗生物質を提供
することである。

【０００５】

【課題を解決するための手段】本発明者らは、上記課題
を解決する事を目的として、種々の土壌から分離した微
生物が生産する抗生物質について鋭意研究を重ねた。そ
の結果、自然界から本発明者らにより新たに分離されて
ＡＢ４０１５株の菌株番号を付されたホーマ属に属する
新規な菌株の培養物中に抗カビ活性を示す複数の物質が
生産されていることを発見した。そこで、該菌株の培養
物からそれらの活性物質を分離精製したところ１種の物
質が得られて、それをＡＢ４０１５−Ａ物質と命名し、
それが上記の抗カビ活性を示すことを見いだし、更にそ
の物質の化学構造を明らかにした。このＡＢ４０１５−
Ａと命名した物質は特開平４−３１６５７８号公報に記
載の抗生物質ＰＦ１０５２物質に一致した。

【０００６】そのＡＢ４０１５−Ａ物質は次式（Ａ） で表される化合物である。

【０００７】本発明者らは、上記の式（Ａ）の抗生物質
ＡＢ４０１５−Ａ（抗生物質ＰＦ１０５２）の活性向上
を目的に研究を続け、その結果としてＡＢ４０１５−Ａ
物質を酸加水分解あるいは接触還元もしくはそれらの組
み合わせにより、ＡＢ４０１５−Ａに匹敵するかあるい
はそれ以上の抗カビ活性を有する３化合物を製造するこ
とに成功した。構造解析の結果それらは新規物質であ
り、それぞれ抗生物質ＡＢ４０１５−Ａ１，Ａ２および
Ａ３と命名した。

【０００８】すなわち、第１の本発明においては、下記
の一般式（Ｉ） 〔式中、ＲはＡＢ４０１５−Ａ１物質では次式 の基であり、３′〜４′位置の間の結合は二重結合であ
り、またＲはＡＢ４０１５−Ａ２物質では次式 の基であり、３′〜４′位置の間の結合は単結合であ
り、またＲはＡＢ４０１５−Ａ３物質では次式 の基であり、３′〜４′位置の間の結合は単結合であ
る〕で表わされる新規な抗生物質ＡＢ４０１５−Ａ１，
Ａ２，およびＡ３またはそれらの塩を提供するものであ
る。

【０００９】本発明の抗生物質ＡＢ４０１５−Ａ１，Ａ
２およびＡ３、並びにそれらの塩の例として、第４級ア
ンモニウム塩などの有機塩基の塩と、各種の金属塩、例
えばアルカリ金属塩、特にナトリウム塩またはカリウム
塩、並びにアルカリ土類金属塩、特にカルシウム塩があ
る。

【００１０】第１の本発明によるＡＢ４０１５−Ａ１物
質は、下記の構造式（Ia）で示され、また下記の物理化
学的性質を有する。

【００１１】 （１）外 観：白色粉末 （２）分子式：Ｃ₂₆Ｈ₄₁ＮＯ₅ （３）分子量：４４７ （４）紫外部吸収スペクトル（メタノール中） λmax、nm(ε) 酸性（0.01N HCl-メタノール中): 228 (6,520) 294(11,750) 中性（メタノール中): 229 (6,580) 294(11,890) アルカリ性(0.01N NaOH-メタノール中): 249(10,520) 289(10,728) （５）赤外部吸収スペクトル（KBr): 添付図面の図１に
示す。

【００１２】（６）溶解性：クロロホルム、酢酸エチ
ル、ジメチルスルホキシドに可溶、水に不溶である。

【００１３】 （７）薄層クロマトグラフィー：Ｒf値＝0.39 吸着剤：メルク社製キーゼルゲル 60Ｆ₂₅₄ 展開溶媒：クロロホルム−メタノール−ギ酸（80：2：
1） （８）呈色反応：バニリン硫酸、塩化第二鉄、ヨウ素反
応に陽性である。

【００１４】（９）塩基性、酸性、中性の区別：酸性物
質。

【００１５】第１の本発明によるＡＢ４０１５−Ａ２物
質は、下記の構造式（Ib）で示され、また下記の物理化
学的性質を有する。

【００１６】 （１）外 観：淡黄色油状物質 （２）分子式：Ｃ₂₆Ｈ₄₁ＮＯ₄ （３）分子量：４３１ （４）紫外部吸収スペクトル（メタノール中） λmax、nm(ε)： 酸性（0.01N HCl-メタノール中): 225 (6,620) 288(10,350) 中性（メタノール中): 225 (6,610) 288(10,440) アルカリ性(0.01N NaOH-メタノール中): 250 (9,140) 290(10,380) （５）赤外部吸収スペクトル（KBr): 添付図面の図２に
示す。

【００１７】（６）溶解性：クロロホルム、酢酸エチ
ル、ジメチルスルホキシドに可溶、水に不溶である。

【００１８】 （７）薄層クロマトグラフィー：Ｒf値＝0.23 吸着剤：メルク社製キーゼルゲル 60Ｆ₂₅₄ 展開溶媒：クロロホルム−メタノール−ギ酸（80：2：
1） （８）呈色反応：バニリン硫酸、塩化第二鉄、ヨウ素反
応に陽性である。

【００１９】（９）塩基性、酸性、中性の区別：酸性物
質。

【００２０】第１の本発明によるＡＢ４０１５−Ａ３物
質は、下記の構造式（Ic）で示され、また下記の物理化
学的性質を有する。

【００２１】 （１）外 観：淡黄色ろう状物質 （２）分子式：Ｃ₂₆Ｈ₄₃ＮＯ₅ （３）分子量：４４９ （４）紫外部吸収スペクトル（メタノール中） λmax、nm(ε)： 酸性（0.01N HCl-メタノール中): 228 (6,520) 294(10,770) 中性（メタノール中): 228 (6,470) 294(10,730) アルカリ性(0.01N NaOH-メタノール中): 250 (9,960) 290(10,320) （５）赤外部吸収スペクトル（KBr): 添付図面の図３に
示す。

【００２２】（６）溶解性：クロロホルム、酢酸エチ
ル、ジメチルスルホキシドに可溶、水に不溶である。

【００２３】 （７）薄層クロマトグラフィー：Ｒf値＝0.46 吸着剤：メルク社製キーゼルゲル 60Ｆ₂₅₄ 展開溶媒：クロロホルム−メタノール−ギ酸（80：2：
1） （８）呈色反応：バニリン硫酸、塩化第二鉄、ヨウ素反
応に陽性である。

【００２４】（９）塩基性、酸性、中性の区別：酸性物
質。

【００２５】更に第２の本発明によると、前記の式
（Ａ）の抗生物質ＡＢ４０１５−Ａを酸加水分解して生
成することを特徴とする式（Ia）の抗生物質ＡＢ４０１
５−Ａ１の製造法が提供される。

【００２６】更に第３の本発明によると、前記の式（I
a）の抗生物質ＡＢ４０１５−Ａ１を接触還元して生成
することを特徴とする式（Ib）の抗生物質ＡＢ４０１５
−Ａ２の製造法が提供される。

【００２７】更に第４の本発明によると、前記の式（I
b）の抗生物質ＡＢ４０１５−Ａ２を酸加水分解して生
成することを特徴とする式（Ic）の抗生物質ＡＢ４０１
５−Ａ３の製造法が提供される。

【００２８】次に、本発明によるＡＢ４０１５−Ａ１，
Ａ２およびＡ３の各物質の製造法について説明する。

【００２９】第２の本発明の方法を実施するには、原料
物質ＡＢ４０１５−Ａに対し、適当な溶媒を加えてこれ
に原料物質を溶解し、適当な鉱酸で酸処理により加水分
解することによりＡＢ４０１５−Ａ１物質を製造するこ
とができる。この際使用される鉱酸は、原料物質のエポ
キシド基が加水分解され二価アルコールを形成できうる
ものであるものはどれでもよく、例えば塩酸あるいは硫
酸が好ましい。また鉱酸濃度は、０.５規定〜６規定で
使用される。１規定濃度は好ましい濃度である。この際
使用される溶媒は原料あるいは反応生成物が溶解する溶
剤が使用され、好ましい溶剤としてはメタノール、エタ
ノールなどの低級アルコールが使用される。反応温度
は、室温ないし還流条件下で反応を行わせ、原料物質の
消失または反応生成量の適当なところを反応の終了点の
目安とし、その後適当な後処理、精製工程を経ることに
より、目的物としてＡＢ４０１５−Ａ１物質を得る。

【００３０】第３の本発明の方法を実施するには、原料
物質ＡＢ４０１５−Ａ１に対し、適当な溶媒を加えてこ
れに原料物質を溶解し、水素ガス雰囲気下で適当な還元
触媒で接触還元してＡＢ４０１５−Ａ２物質を製造する
ことができる。この際使用される還元触媒は、原料物質
の３′〜４′位置の二重結合を単結合に還元できるもの
ならどれでもよい。例えば、塩化パラジウムを原料とし
て調製されたパラジウム−炭素あるいはコロイドパラジ
ウムなどが好ましい。この際使用される溶媒は原料ある
いは反応生成物が溶解する溶剤が使用され、好ましい溶
剤としてメタノール、エタノールなどの低級アルコール
が使用される。反応温度は室温で行い、原料物質の消失
または反応生成量の適当なところを反応の終了点の目安
とし、その後適当な溶媒で反応生成物を抽出して目的物
としてＡＢ４０１５−Ａ２物質を得る。

【００３１】第４の本発明の方法を実施するには、原料
物質ＡＢ４０１５−Ａ２を適当な溶媒に溶解し、第２の
本発明の方法と同様に酸で加水分解する反応を行うこと
により、ＡＢ４０１５−Ａ物質からＡＢ４０１５−Ａ１
物質を製造した第２の本発明の方法に準じて製造でき
る。

【００３２】第１の本発明による抗生物質ＡＢ４０１５
−Ａ１，Ａ２およびＡ３は後記の試験例に示すように抗
カビ活性を有する。

【００３３】従って、第５の本発明によると、一般式
（Ｉ）で表される抗生物質ＡＢ４０１５−Ａ１，Ａ２お
よびＡ３あるいはこれらの塩の少くとも１つを有効成分
として含有する農園芸用殺菌剤が提供される。

【００３４】抗生物質ＡＢ４０１５−Ａ１，Ａ２または
Ａ３物質あるいはそれらの塩の少くとも１種を農園芸用
殺菌剤として用いる場合には、その使用目的に応じて単
体でも用いることができるが、生物効果を助長、あるい
は安定化するために、慣用される適当な固体または液体
状の担体および補助剤と混和して組成物の形にし、これ
を直接に使用するか必要に応じて希釈して用いる。

【００３５】

【実施例】次に実施例を挙げて本発明をより具体的に説
明するが、これは単なる一例であって、これによって本
発明が限定されるものではない。また、ここに例示しな
かった多くの変法あるいは修飾手段を用いるようなこと
はいうまでもなく可能なことであり、有効な手段となり
得る。なお実施例中に部とあるのは重量部を示してい
る。

【００３６】実施例１ ＡＢ４０１５−Ａ１物質の製造 後記の参考例１で示した方法で得た抗生物質ＡＢ４０１
５−Ａ ５０mg(0.117ミリモル) を５.５mlのエタノー
ルに溶解し、濃塩酸(12N) ０.５mlを添加後、室温で１
時間３０分撹拌した。反応終了後、１００ml容分液ロー
トに反応溶液、蒸留水４５mlおよび酢酸エチル４５mlを
入れ、激しく振とうし、分液した。酢酸エチル相を分取
し、蒸留水を適当量加え上記の操作を繰り返し、酢酸エ
チル相を水洗した。水洗した酢酸エチル相を分液し、濃
縮乾固して、ＡＢ４０１５−Ａ１物質の白色粉末を４９
mg(0.109ミリモル) 得た。この時の回収率は９３.３％
であった。

【００３７】実施例２ ＡＢ４０１５−Ａ２物質の製造 実施例１で得た抗生物質ＡＢ４０１５−Ａ１ １００mg
(0.233ミリモル)をエタノール５mlに溶解した溶液に、
１０％パラジウム−炭素４mgおよび酢酸０.１mlを加
え、水素ガス雰囲気下激しく撹拌し室温、常圧で５時間
接触還元を行った。反応終了後、反応液を濾紙で濾過
し、濾液および酢酸エチル５０ml、蒸留水５０mlを分液
ロートに入れ激しく振とう後、酢酸エチル相を分液、分
取した。分取した酢酸エチル溶液を濃縮し、淡黄色油状
のＡＢ４０１５−Ａ２物質を９５.３mg(0.221ミリモ
ル）得た。この時の回収率は９４.８％であった。

【００３８】実施例３ ＡＢ４０１５−Ａ３物質の製造 実施例２で得た抗生物質ＡＢ４０１５−Ａ２ ５０mg
(0.116ミリモル) を５.５mlのエタノールに溶解し、濃
塩酸(12N) ０.５mlを添加後、室温で１時間３０分撹拌
した。反応終了後、１００ml容分液ロートに反応溶液、
蒸留水４５mlおよび酢酸エチル４５mlを入れ、激しく振
とうし、分液した。酢酸エチル相を分取し、蒸留水を適
当量加え上記の操作を２回繰り返し、酢酸エチル相を水
洗した。水洗した酢酸エチル相を分液し、濃縮乾固して
淡黄色ろう状のＡＢ４０１５−Ａ３物質を５１mg(0.114
ミリモル) 得た。この時の回収率は９８.３％であっ
た。

【００３９】次に、第５の本発明による殺菌剤の組成物
を例示する実施例４〜６によって第５の本発明を具体的
に説明する。

【００４０】実施例４（水和剤） 抗生物質ＡＢ４０１５−Ａ１またはＡＢ４０１５−Ａ２
またはＡＢ４０１５−Ａ３物質の20部、アルキルベンゼ
ンスルホン酸カリウム３部、ポリオキシエチレンノニル
フェニルエーテル５部、および白土７２部を均一に混合
し、粉砕して、活性成分を２０％含有する水和剤を得
た。

【００４１】実施例５（粉剤） 抗生物質ＡＢ４０１５−Ａ１またはＡＢ４０１５−Ａ２
またはＡＢ４０１５−Ａ３物質の２部、ＰＡＰ（物理性
改良剤）１部およびクレー９７部を均一に混合し、粉砕
して、活性成分を２％含有する粉剤を得た。

【００４２】実施例６（乳剤） 抗生物質ＡＢ４０１５−Ａ１またはＡＢ４０１５−Ａ２
またはＡＢ４０１５−Ａ３物質３０部、メチルエチルケ
トン４０部およびポリオキシエチレンノニルフェニルエ
ーテル３０部を混合し、溶解して、活性成分を３０％含
有する乳剤を得た。

【００４３】更に、第５の本発明による農園芸用殺菌剤
に用いるＡＢ４０１５−Ａ１，Ａ２またはＡ３物質の植
物病原菌に対する防除効果を試験例１〜２に例証する。

【００４４】試験例１（キュウリべと病防除効果） 温室内で直径９cmの大きさの素焼鉢で土耕栽培した第２
葉期のキュウリ苗（品種：相模半白）に、実施例３に準
じて調製した水和剤をスプレーガンを用いて１鉢当り２
０mlを散布した。一方、湿らせた筆でキュウリべと病
（Pseudoperonosp ora cubensis: シュードペロノスポラ
クベンシス）の罹病葉より胞子をかきとり、展着剤
（ポリオキシエチレンアルキルエーテル）の５０ppm水
溶液に懸濁させた後、胞子濃度を５×１０⁶胞子数(個／
ml)に調整し、胞子懸濁液を調製した。

【００４５】このキュウリベと病菌の胞子懸濁液を薬剤
散布１日後のキュウリ苗に噴霧接種した。そして、キュ
ウリ苗を２０℃、湿度１００％の湿室内に２日間静置
し、その後発病室に移し、キュウリべと病を発病させ
た。接種６日後、１葉当たりのキュウリべと病病班面積
歩合（％）を調査し、平均病班面積を求め、下記の計算
式により平均防除価（％）を算出した。その試験結果を
下記の表１に示す。

【００４６】

【００４７】試験例２（コムギ赤さび病防除効果試験） 温室内で直径９cmの大きさの素焼鉢で土耕栽培した第一
本葉期のコムギ幼苗（品種：農林61号）に、実施例３に
準じて調製した水和剤の所定濃度希釈液を３鉢当り２０
mlを散布した。１日後、あらかじめコムギ葉上で形成さ
せたコムギ赤さび病菌（Puccinia recondita: プクシニ
ア レコンジタ）の夏胞子を１５０倍の顕微鏡で１視野
当りの胞子濃度が約５０個になるようにツイーン20〔花
王石鹸（株）製のポリオキシエチレンソルビタンモノラ
ウレートの商品名〕５０ppmを添加した滅菌水に懸濁さ
せた。

【００４８】その胞子懸濁液を処理すべき葉に噴霧接種
した。２０℃、湿度１００％の温室内に１日間静置し、
その後発病室に移しコムギ赤さび病を発病させた。接種
１０日後にとり出し、１葉当りに発病した夏胞子堆数を
調査し、次式により防除価を算出した。本試験は１試験
あたり３鉢制で行い、その平均防除価（％）を求めた。
その結果を表２に示す。

【００４９】

【００５０】第２の本発明による抗生物質ＡＢ４０１５
−Ａ１の製造方法に原料物質として用いられる抗生物質
ＡＢ４０１５−Ａはホーマ属の新規な菌株により生産さ
れる抗生物質であるから、この物質の製造について説明
を加える。このＡＢ４０１５−Ａ物質の生産菌として
は、ＡＢ４０１５−Ａまたはその塩を産生する能力を有
するものであれば、いかなる微生物でもよい。その好ま
しい具体例としては、本発明者らが福島県喜多方市の土
壌より新たに分離したＡＢ４０１５菌株がある。この菌
株はホーマ属に属する菌株であり、ＡＢ４０１５−Ａ生
産菌の一例である。

【００５１】このＡＢ４０１５株の菌学的性質を以下に
記載する。

【００５２】（１）各培地における生育状態 オートミール寒天培地上における生育は速やかで、25
℃、暗黒下の培養では、培養４日目で集落の直径は４３
〜４５mm、７日目で７６〜８０mmに達する。集落はビロ
ード状を呈し、中心部には灰白色の気生菌糸を形成す
る。集落表面および裏面はうす赤紫色を呈する。菌糸は
隔壁を有し、培地上および培地中に伸長する。菌糸は幅
が２.０〜６.０μmで、無色、平滑で分枝する。

【００５３】麦芽エキス寒天培地上における生育は速や
かで、２５℃、暗黒下の培養では、培養４日目で集落の
直径は６３〜６５mm、７日目で８０〜８３mmに達する。
集落は綿毛状で、集落表面は中心部が灰味青緑色を呈
し、周辺部はうす赤紫色を呈する。集落裏面は中心部
が、暗い赤紫色、周辺部がうす黄茶色を呈する。

【００５４】バレイショ・ブドウ糖寒天培地上における
生育は速やかで、２５℃、暗黒下の培養では、培養４日
目で集落の直径は４６〜４８mm、７日目で６８〜７２mm
に達する。集落は綿毛状で、集落表面は灰味青緑色を示
し、ところどころに、にぶ赤色の菌糸が密に集合してで
きた菌核様構造物が形成される。集落裏面は灰味黄茶色
を呈する。

【００５５】この菌株を上記寒天培地上において、２５
℃、暗黒下で１か月間培養した場合、テレオモルフ（完
全世代の特徴）およびアナモルフ（不完全世代の特徴）
の形成は認められなかった。そこで、上記寒天培地上で
２５℃、暗黒下で４日間培養後、さらに２５℃、ブラッ
ク・ライト・ブルー蛍光灯(20Ｗ)下で培養した結果、培養
２日目に集落周辺部に多数の分生子殻(Pycnidium)の形
成が観察された。

【００５６】オートミール寒天培地上における分生子殻
は、暗いオリーブ緑色〜オリーブ黒色を呈し、寒天培地
上に表在するか、または培地中に埋生する。分生子殻
は、球形〜亜球形、あるいは洋なし形(pyriform)〜アン
プル形(ampulliform) で、網目状の表面を呈し、直径は
１１０〜２５０μｍで、通常１個の孔口、ときに２〜３
個の孔口を有し、孔口より分生子を押し出す。分生子は
単細胞、無色、平滑でだ円形〜卵形を呈し、大きさが
４.５〜６.５×１.５〜２.５μmである。

【００５７】（２）生理的性質 生育温度 麦芽エキス寒天培地およびオートミール寒天培地を用い
て、５℃、１０℃、１５℃、２０℃、２５℃、３０℃お
よび３７℃の各温度で培養した結果、ＡＢ４０１５株は
両培地において、１０℃〜３０℃までのいずれの温度で
も生育したが、５℃および３７℃では生育しなかった。
生育最適温度は２０℃〜２５℃である。

【００５８】生育pＨ pＨを２，３，４，５，６，７，８，９，１０および１
１に調整した麦芽エキス寒天培地を用いて、２５℃で培
養した結果、ＡＢ４０１５株はpＨ３〜１１まで生育し
た。生育最適pＨは、pＨ６〜８である。

【００５９】以上の菌学的性質から、ＡＢ４０１５株の
分類学上の位置をジェイ・エイ・フォン・アークス著
「ザ・ジェネラ・オブ・ファンジャイ・スポルレイティ
ング・イン・ピュア・カルチャー」第３版、ジェイ・ク
レイマー社、バダッツ、1981年、(J. A. von Arx, 「The
Genera of Fungi Sporulating in Pure Culture」 3rde
d., J. Cramer, Vaduz, 1981) およびブライアン・シー
・サットン著、「ザ・シーロマイセテス」コモンウエル
ス・マイコロジカル・インスティテュート、イングラン
ド、1980年（Brian C. Sutton, 「The Coelomycetes」, C
ommonwealth Mycological Institute, England, 1980)
に従って検索した。その結果、本菌株はホーマ属に属す
ることが認められ、本発明者らは、ＡＢ４０１５株をホ
ーマ・エスビー・ＡＢ４０１５（Phoma sp. AB4015) と
称することにした。なお、ＡＢ４０１５株は工業技術院
微生物工業技術研究所（現、工業技術院生命工学工業技
術研究所）に寄託申請され、平成４年10月20日、微工研
菌寄第１３２０６号として受託されている。

【００６０】以上、ＡＢ４０１５−Ａ物質生産菌である
ＡＢ４０１５株について説明したが、一般的には糸状菌
類の菌学的性質は極めて変化しやすく、自然界におい
て、あるいは通常行われている紫外線照射、Ｘ線照射、
変異誘発剤（例えば、Ｎ−メチル−Ｎ−ニトロ−Ｎ−ニ
トロソグアニジンおよび２−アミノプリン等）または遺
伝子組替えを用いる人為的変異手段により変異すること
は周知の事実である。このように自然変異株ならびに人
工変異株も含めてホーマ属に属し、ＡＢ４０１５−Ａ物
質を生産する能力を有する菌株はすべて使用することが
できる。

【００６１】第２の本発明の方法で原料物質として用い
るＡＢ４０１５−Ａ物質の製造には、まずホーマ属に属
するＡＢ４０１５−Ａ物質生産菌を通常の微生物が利用
しうる栄養物を含有する培地において培養する。該生産
菌の培養においては、微生物の培養に用いられる通常の
培養方法が適用される。栄養源としては、微生物が資化
しうる炭素源、窒素源、無機塩などを程よく含有する培
地であれば天然培地、合成培地のいずれでも利用でき
る。

【００６２】資化しうる炭素源としては、グルコース、
シュクロース、ガラクトース、デキストリン、グリセロ
ール、澱粉、水飴、糖蜜、動・植物油等を利用できる。
また、窒素源としては、大豆粉、小麦胚芽、コーンステ
ィープリカー、綿実かす、肉エキス、ペプトン、酵母エ
キス、硫酸アンモニウム、硝酸アンモニウム、硝酸ナト
リウム、尿素などを使用できる。そのほか必要に応じ、
ナトリウム、カリウム、カルシウム、マグネシウム、コ
バルト、塩素、燐酸、硫酸およびその他のイオンを生成
できる無機塩類を添加することは有効である。また、菌
株の発育を助け、ＡＢ４０１５−Ａ物質の生産を促進す
るような無機および有機物を適当に添加することができ
る。なお、培地中に金属塩が存在すると、それに対応す
る金属カチオンとの塩の形でＡＢ４０１５−Ａ物質が得
られることがある。

【００６３】培養方法としては好気的条件下での培養
法、特に深部液体培養法が最も適している。培養に適当
な温度は、１５〜３０℃であるが、多くの場合２４〜３
０℃で培養する。ＡＢ４０１５−Ａ物質の生産は培地や
培養条件によって異なるが、振とう培養、タンク培養と
も３〜１０日の間でその蓄積が最高に達する。

【００６４】培養物中のＡＢ４０１５−Ａ物質の蓄積量
が最高に達した時点で培養を停止し、培養物から発酵生
産物を採取する一般的な方法に準じてＡＢ４０１５−Ａ
物質の単離を行うのがよい。前記の培地の組成、培地の
液性、培養温度、撹拌速度および通気量等の培養条件は
使用する菌株の種類および外部条件等に応じて、好まし
い結果が得られるように適宜調節あるいは選択する。液
体培養において発泡がある場合はシリコン油、植物油お
よび界面活性剤等の消泡剤を適宜使用する。

【００６５】このようにして得られた培養物中に蓄積さ
れたＡＢ４０１５−Ａ物質は以下の方法により効率的に
分離精製することが好ましい。

【００６６】蓄積したＡＢ４０１５−Ａ物質を培養物中
から単離採取するに際しては、通常の生理活性物質を培
養液中から採取する方法が適用される。すなわち、培養
物から酢酸エチル、クロロホルム等の有機溶剤による抽
出、水または二種類以上の有機溶媒系を用いる交流分
配、イオン交換樹脂、シリカゲル、シラナイズドシリカ
ゲル、アルミナ、セルロース、珪藻土、ゲル濾過剤等を
用いるカラムクロマトグラフィーもしくは薄層クロマト
グラフィーによる活性物質の吸脱着処理あるいは逆層カ
ラムを用いた高速液体クロマトグラフィーなどによって
ＡＢ４０１５−Ａ物質を単離することができる。なお、
抗生物質ＡＢ４０１５−Ａ物質の製造例を後記の参考例
に示す。

【００６７】参考例 抗生物質ＡＢ４０１５−Ａ物質の製造 生産培地として、ブドウ糖１.０％、水溶性デンプン３.
０％、ポリペプトン０.５％、酵母エキス０.２％、マル
トエキス０.５％、炭酸カルシウム０.５％の組成からな
る培地(pＨ ６.５）を用いた。前記の培地１１０mlを分
注した５００ml容量バッフル付き三角フラスコ１８２本
(培地２０Ｌ分)を１２１℃で２０分間滅菌し、これにホ
ーマー・エスピーＡＢ４０１５株（微工研菌寄第１３２
０６号）の斜面寒天培養の１〜２白金耳を植菌した。そ
の後、ロータリーシェーカー（１８０rpm）を用い、２
５℃で５日間、回転振とう培養した。

【００６８】培養終了後、培養液をろ過することによ
り、培養ろ液１８Ｌと菌体を得た。上記の菌体を、メタ
ノール６Ｌで抽出し、ろ過して菌体を除いた菌体抽出液
を得た。得られた菌体抽出物に２Ｌの水および４.５Ｌ
のクロロホルムを加え、十分振とう抽出した後に、クロ
ロホルム層を分液した。このクロロホルム層を無水芒硝
で乾燥した後、減圧下で濃縮し、活性成分を含有する褐
色油状物１０ｇを得た。

【００６９】この褐色油状物を、シリカゲル（メルク社
製）を充填させたカラム（内経２８mm×長さ３２０mm)
に吸着させ、クロロホルム４００mlで洗浄後、クロロホ
ルム−メタノール(50:1)の組成からなる混合溶媒で展開
溶出するクロマトグラフィーを行った。この時２０ｇづ
つ分画した。ＡＢ４０１５−Ａ物質を含む前記シリカゲ
ルカラム溶出画分No.１９からNo.２４を集め減圧下で濃
縮乾固させ、０.６gの粗精製物を得た。この粗製精物を
再度シリカゲルを充填させたカラム（内径１８mm×長さ
２４０mm）に吸着させ、酢酸エチル−ヘキサン（３:
７）の組成からなる混合溶媒で溶出させた（２００滴づ
つ分画)。画分No.４８以後は酢酸エチル−ヘキサン
（１:１）からなる混合溶媒で更に展開溶出させた（２
００滴づつ分画）。活性画分No.３４からNo.７０を集め
減圧下で濃縮し、メタノールに可溶、水に不溶な無色油
状の物質としてＡＢ４０１５−Ａ物質を470mg得た。

【００７０】

【発明の効果】本発明の新規な抗生物質ＡＢ４０１５−
Ａ１，Ａ２またはＡ３物質はキュウリべと病、コムギ赤
さび病、イネいもち病、トマトかいよう病などの植物病
原菌に防除活性を有することから、新規な農園芸用殺菌
剤として期待される。

【図面の簡単な説明】

【図１】ＡＢ４０１５−Ａ１物質の臭化カリウム錠剤中
での赤外部吸収スペクトル図である。

【図２】ＡＢ４０１５−Ａ２物質の臭化カリウム錠剤中
での赤外部吸収スペクトル図である。

【図３】ＡＢ４０１５−Ａ３物質の臭化カリウム錠剤中
での赤外部吸収スペクトル図である。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 玉村 健 神奈川県相模原市東林間６丁目２番３号 (72)発明者 手塚 保行 神奈川県厚木市森の里２丁目24番７号 (72)発明者 佐藤 聖 神奈川県秦野市東田原200番地96 (72)発明者 久津間 誠一 神奈川県相模原市相武台３丁目21番13号 ラプラス藤進102号 (72)発明者 有田 一好 神奈川県厚木市戸田2385番地 北興化学寮 (72)発明者 長縄 博 東京都大田区田園調布本町３番17号 (72)発明者 竹内 富雄 東京都品川区東五反田５丁目１番11号 ニ ューフジマンション701

Claims (5)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 下記の一般式（Ｉ） 〔式中、ＲはＡＢ４０１５−Ａ１物質では次式 の基であり、３′〜４′位置の間の結合は二重結合であ
   り、またＲはＡＢ４０１５−Ａ２物質では次式 の基であり、３′〜４′位置の間の結合は単結合であ
   り、またＲはＡＢ４０１５−Ａ３物質では次式 の基であり、３′〜４′位置の間の結合は単結合であ
   る〕で表わされる新規な抗生物質ＡＢ４０１５−Ａ１，
   Ａ２，およびＡ３またはそれらの塩。
2. 【請求項２】 次式（Ａ） で表されるＡＢ４０１５−Ａ物質を酸加水分解して生成
   することを特徴とする、請求項１に記載の抗生物質ＡＢ
   ４０１５−Ａ１の製造法。
3. 【請求項３】 請求項２に記載の抗生物質ＡＢ４０１５
   −Ａ１を還元して生成することを特徴とする、請求項１
   に記載の抗生物質ＡＢ４０１５−Ａ２の製造法。
4. 【請求項４】 請求項３に記載の抗生物質ＡＢ４０１５
   −Ａ２を酸加水分解して生成することを特徴とする、請
   求項１に記載の抗生物質ＡＢ４０１５−Ａ３の製造法。
5. 【請求項５】 請求項１記載の抗生物質ＡＢ４０１５−
   Ａ１，Ａ２およびＡ３あるいはこれらの塩の少くとも１
   つを有効成分とする農園芸用殺菌剤。