JP2990628B2 - 新規植物生長調節物質ａｊｉ−３０２及びその製造法 - Google Patents
新規植物生長調節物質ａｊｉ−３０２及びその製造法Info
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- JP2990628B2 JP2990628B2 JP33507491A JP33507491A JP2990628B2 JP 2990628 B2 JP2990628 B2 JP 2990628B2 JP 33507491 A JP33507491 A JP 33507491A JP 33507491 A JP33507491 A JP 33507491A JP 2990628 B2 JP2990628 B2 JP 2990628B2
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Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、ストレプトミセス属に
属する微生物が生産する新規リポペプチド化合物及びそ
れを有効成分とする植物生長調節剤、さらにはその製造
法に関するものである。
属する微生物が生産する新規リポペプチド化合物及びそ
れを有効成分とする植物生長調節剤、さらにはその製造
法に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】従来、植物に対して生長調節活性を持つ
物質としては、合成的手法により得られるもの、微生物
によって生産されるものなど数多く知られている（農薬
の科学、第６版、文永堂、１９８６年）。しかしなが
ら、これらの化合物には、残留性、毒性などが問題とな
っているものも少なくない。
物質としては、合成的手法により得られるもの、微生物
によって生産されるものなど数多く知られている（農薬
の科学、第６版、文永堂、１９８６年）。しかしなが
ら、これらの化合物には、残留性、毒性などが問題とな
っているものも少なくない。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、従来
の植物生長調節物質に見られるような残留性、毒性など
の欠点がなく、しかも大量生産可能な新規植物生長調節
物質を提供することである。
の植物生長調節物質に見られるような残留性、毒性など
の欠点がなく、しかも大量生産可能な新規植物生長調節
物質を提供することである。
【０００４】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、植物生長
調節作用があり、残留性、毒性の低い化合物を開発する
ために鋭意研究を重ねた結果、ストレプトミセス属に属
する微生物が産生する新規リポペプチド化合物がその目
的に適合しうることを見出し、この知見に基づいて本発
明を完成するに至った。
調節作用があり、残留性、毒性の低い化合物を開発する
ために鋭意研究を重ねた結果、ストレプトミセス属に属
する微生物が産生する新規リポペプチド化合物がその目
的に適合しうることを見出し、この知見に基づいて本発
明を完成するに至った。
【０００５】すなわち、本発明は、下記化２
【化２】 で表される化合物及びこれを有効成分とする植物生長調
節剤、さらにはストレプトミセス属に属し、該化合物を
生産する能力を有する微生物を培養することを特徴とす
る該化合物の製造法を提供するものである。
節剤、さらにはストレプトミセス属に属し、該化合物を
生産する能力を有する微生物を培養することを特徴とす
る該化合物の製造法を提供するものである。
【０００６】本発明の化合物は新規のリポペプチド性物
質であり、以下ＡＪＩ−３０２と記す。なお、ＡＪＩ−
３０２にはナトリウム塩、カリウム塩等のアルカリ金属
塩や酸付加塩などの塩類、及び化２中の２つのアミド基
（−ＣＯＮＨ 2 ）のうちいずれか１つあるいは２つから
アミノ部分を人為的あるいは自然に脱離した遊離のカル
ボン酸構造（−ＣＯＯＨ）を持つ化合物も包有される。
質であり、以下ＡＪＩ−３０２と記す。なお、ＡＪＩ−
３０２にはナトリウム塩、カリウム塩等のアルカリ金属
塩や酸付加塩などの塩類、及び化２中の２つのアミド基
（−ＣＯＮＨ 2 ）のうちいずれか１つあるいは２つから
アミノ部分を人為的あるいは自然に脱離した遊離のカル
ボン酸構造（−ＣＯＯＨ）を持つ化合物も包有される。
【０００７】本発明のＡＪＩ−３０２を生産する微生物
としては、ストレプトミセス・エスピー（Ｓｔｒｅｐｔ
ｏｍｙｃｅｓ ｓｐ．）ＡＪ−９４６５（ＦＥＲＭ Ｐ
−１１８７２）が一例として挙げられる。この菌はＩＳ
Ｐ２培地上で好気的に生育し、気菌糸を形成し、基生菌
糸は形成するが分断しない。顕微鏡下で気菌糸の先端
は、５回転以下のらせん状あるいは開いたらせん状に生
育する。成熟した胞子は連続したいぼ状を示し、連鎖は
１０〜２０個程度である。ＩＳＰ２培地上では、うす黄
茶（ｐａｌｅ ｙｅｌｌｏｗｉｓｈ ｂｒｏｗｎ）の発
育上に、明るい灰味茶（ｌｉｇｈｔ ｇｒｅｙｉｓｈ
ｒｅｄｄｉｓｈ ｂｒｏｗｎ）の気菌糸を着生する。溶
解性色素、メラニン性色素は、いずれも生成しない。細
胞壁中にＬＬ−ジアミノピメリン酸を含有し、特徴的な
糖は存在せず、リン脂質はＰＩＩ型である。以上の菌学
的性質により、本菌株をストレプトミセス属に属するも
のと同定した。
としては、ストレプトミセス・エスピー（Ｓｔｒｅｐｔ
ｏｍｙｃｅｓ ｓｐ．）ＡＪ−９４６５（ＦＥＲＭ Ｐ
−１１８７２）が一例として挙げられる。この菌はＩＳ
Ｐ２培地上で好気的に生育し、気菌糸を形成し、基生菌
糸は形成するが分断しない。顕微鏡下で気菌糸の先端
は、５回転以下のらせん状あるいは開いたらせん状に生
育する。成熟した胞子は連続したいぼ状を示し、連鎖は
１０〜２０個程度である。ＩＳＰ２培地上では、うす黄
茶（ｐａｌｅ ｙｅｌｌｏｗｉｓｈ ｂｒｏｗｎ）の発
育上に、明るい灰味茶（ｌｉｇｈｔ ｇｒｅｙｉｓｈ
ｒｅｄｄｉｓｈ ｂｒｏｗｎ）の気菌糸を着生する。溶
解性色素、メラニン性色素は、いずれも生成しない。細
胞壁中にＬＬ−ジアミノピメリン酸を含有し、特徴的な
糖は存在せず、リン脂質はＰＩＩ型である。以上の菌学
的性質により、本菌株をストレプトミセス属に属するも
のと同定した。
【０００８】本菌株の菌学的性状をさらに詳細に示すと
次のとおりである。
次のとおりである。
【０００９】１．形態的性質 顕微鏡下観察では、基生菌糸は各種栄養寒天培地上で分
岐してよく生育し、よく伸長した気菌糸を形成する。輪
生枝は認められない。胞子鎖の形態は多くのものが螺旋
状を示す。成熟した胞子は、楕円形で１×２ミクロン程
度の大きさを示し、表面はいぼ状であり、胞子の連鎖は
１０〜数１０であり、胞子間の境界は不鮮明である。ま
た、胞子のう、菌核、運動性胞子などは認められない。
岐してよく生育し、よく伸長した気菌糸を形成する。輪
生枝は認められない。胞子鎖の形態は多くのものが螺旋
状を示す。成熟した胞子は、楕円形で１×２ミクロン程
度の大きさを示し、表面はいぼ状であり、胞子の連鎖は
１０〜数１０であり、胞子間の境界は不鮮明である。ま
た、胞子のう、菌核、運動性胞子などは認められない。
【００１０】２．各種培地における生育状態 下記各種培地における色調の表示は日本色彩研究所版、
色の標準を用いた。 （１）シュクロース・硝酸塩寒天培地 非常に良好に生育し、黄味灰色の発育上に気菌糸はほと
んど形成されず、裏面の顕著な色や溶解性色素は認めら
れない。 （２）グルコース・アスパラギン寒天培地 良好に生育、黄味灰色の発育上に中程度に白色の気菌糸
を形成し、裏面の顕著な色や可溶性色素は認められな
い。 （３）グリセリン・アスパラギン寒天培地（ＩＳＰ５培
地） 中程度に生育ないし生育は悪く、ほとんど無色の発育上
にまばらにうっすらと白色〜灰色の気菌糸を形成し、裏
面の顕著な色や可溶性色素は認められない。 （４）スターチ寒天培地（ＩＳＰ４培地） 良好に生育し、ほとんど無色〜黄味灰色の発育上に豊富
に白色〜灰色の気菌糸を形成し、裏面の顕著な色や可溶
性色素は認められない。 （５）チロシン寒天培地（ＩＳＰ７培地） 中程度に生育ないし生育は悪く、ほとんど無色〜黄味灰
色の発育上に中程度に白色の気菌糸を形成し、裏面の顕
著な色や可溶性色素は認められない。 （６）栄養寒天培地 中程度に生育し、ほとんど無色〜黄味灰色の発育上に気
菌糸は形成されず、裏面の顕著な色や可溶性色素は認め
られない。 （７）イースト・麦芽寒天培地（ＩＳＰ２培地） 良好に生育し、うす黄茶色の発育上に良好に白色の気菌
糸を形成し、裏面の顕著な色や可溶性色素は認められな
い。 （８）オートミール寒天培地（ＩＳＰ３培地） 良好に生育し、ほとんど無色〜黄味灰色の発育上に豊富
に白色〜明るい灰色の気菌糸を形成し、裏面の顕著な色
や可溶性色素は認められない。
色の標準を用いた。 （１）シュクロース・硝酸塩寒天培地 非常に良好に生育し、黄味灰色の発育上に気菌糸はほと
んど形成されず、裏面の顕著な色や溶解性色素は認めら
れない。 （２）グルコース・アスパラギン寒天培地 良好に生育、黄味灰色の発育上に中程度に白色の気菌糸
を形成し、裏面の顕著な色や可溶性色素は認められな
い。 （３）グリセリン・アスパラギン寒天培地（ＩＳＰ５培
地） 中程度に生育ないし生育は悪く、ほとんど無色の発育上
にまばらにうっすらと白色〜灰色の気菌糸を形成し、裏
面の顕著な色や可溶性色素は認められない。 （４）スターチ寒天培地（ＩＳＰ４培地） 良好に生育し、ほとんど無色〜黄味灰色の発育上に豊富
に白色〜灰色の気菌糸を形成し、裏面の顕著な色や可溶
性色素は認められない。 （５）チロシン寒天培地（ＩＳＰ７培地） 中程度に生育ないし生育は悪く、ほとんど無色〜黄味灰
色の発育上に中程度に白色の気菌糸を形成し、裏面の顕
著な色や可溶性色素は認められない。 （６）栄養寒天培地 中程度に生育し、ほとんど無色〜黄味灰色の発育上に気
菌糸は形成されず、裏面の顕著な色や可溶性色素は認め
られない。 （７）イースト・麦芽寒天培地（ＩＳＰ２培地） 良好に生育し、うす黄茶色の発育上に良好に白色の気菌
糸を形成し、裏面の顕著な色や可溶性色素は認められな
い。 （８）オートミール寒天培地（ＩＳＰ３培地） 良好に生育し、ほとんど無色〜黄味灰色の発育上に豊富
に白色〜明るい灰色の気菌糸を形成し、裏面の顕著な色
や可溶性色素は認められない。
【００１１】３．生理的性質 （１）生育温度範囲 ２０〜３２℃でよく生育し、１０℃、３７℃ではほとん
ど生育しない。 （２）ゼラチンの液化 グルコース・ペプトン・ゼラチン培地で、２７℃で培養
しゼラチンの液化が認められたが、その程度は弱い。 （３）スターチの加水分解 スターチ寒天培地（ＩＳＰ４培地）上で陽性。 （４）脱脂牛乳の凝固・ペプトン化 凝固は陽性であるがその程度は非常に弱く、ペプトン化
はほとんど認められない。 （５）メラニン様色素の生成 チロシン寒天培地（ＩＳＰ７培地）で陰性。４． 炭素源の利用性（プリドハム・ゴトリーブ寒天培
地：ＩＳＰ９培地） Ｄ−グルコース、Ｌ−アラピノース、Ｄ−キシロース、
Ｄ−フルクトース、シュクロース、イノシトール、Ｌ−
ラムノース、ラフィノース、Ｄ−マンニットを利用す
る。
ど生育しない。 （２）ゼラチンの液化 グルコース・ペプトン・ゼラチン培地で、２７℃で培養
しゼラチンの液化が認められたが、その程度は弱い。 （３）スターチの加水分解 スターチ寒天培地（ＩＳＰ４培地）上で陽性。 （４）脱脂牛乳の凝固・ペプトン化 凝固は陽性であるがその程度は非常に弱く、ペプトン化
はほとんど認められない。 （５）メラニン様色素の生成 チロシン寒天培地（ＩＳＰ７培地）で陰性。４． 炭素源の利用性（プリドハム・ゴトリーブ寒天培
地：ＩＳＰ９培地） Ｄ−グルコース、Ｌ−アラピノース、Ｄ−キシロース、
Ｄ−フルクトース、シュクロース、イノシトール、Ｌ−
ラムノース、ラフィノース、Ｄ−マンニットを利用す
る。
【００１２】以上の菌学的性質を、バージェイズ・マニ
ュアル・オブ・ディターミネイティブ・バクテリオロジ
ー第８版（１９７４年）記載の分類基準により検索した
結果、本菌株はストレプトミセス・グラミノファシエン
ス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｇｒａｍｉｎｏｆａｃ
ｉｅｎｓ）と性質が一致した。
ュアル・オブ・ディターミネイティブ・バクテリオロジ
ー第８版（１９７４年）記載の分類基準により検索した
結果、本菌株はストレプトミセス・グラミノファシエン
ス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｇｒａｍｉｎｏｆａｃ
ｉｅｎｓ）と性質が一致した。
【００１３】ＡＪＩ−３０２を製造するには、例えばス
トレプトミセス・エスピー ＡＪ９４６５を適当な培地
に培養することにより、その培養物に同物質を生成蓄積
されるので、これを採取すればよい。
トレプトミセス・エスピー ＡＪ９４６５を適当な培地
に培養することにより、その培養物に同物質を生成蓄積
されるので、これを採取すればよい。
【００１４】培養方法は一般微生物の培養方法に準ずる
が、通常は液体培地による深部培養が有利である。培養
に用いられる培地としては、生産菌が利用できる栄養源
を含有するものであればよい。すなわち、炭素源として
はグルコース、フラクトース、澱粉、デキストリン等が
用いられ、窒素源としては肉エキス、ポリペプトン、カ
ゼイン、グルテン、酵母エキス、大豆粉、コーン・ステ
ィープ・リカー、尿素、硫酸アンモニウム、リン酸アン
モニウム等が用いられる。このほか、例えばリン酸水素
ナトリウム、硫酸マグネシウム、炭酸カルシウム等の無
機塩も必要に応じて用いることができる。培養にあた
り、発泡の激しいときにはシリコン化合物、高級アルコ
ール、植物油等の消泡剤を少量添加すればよい。培養温
度は２０〜３５℃が良く、特に２７℃前後が最も好まし
い。培養時間は１〜１０日間程度が良いが、培養条件に
より適宜変更することができる。
が、通常は液体培地による深部培養が有利である。培養
に用いられる培地としては、生産菌が利用できる栄養源
を含有するものであればよい。すなわち、炭素源として
はグルコース、フラクトース、澱粉、デキストリン等が
用いられ、窒素源としては肉エキス、ポリペプトン、カ
ゼイン、グルテン、酵母エキス、大豆粉、コーン・ステ
ィープ・リカー、尿素、硫酸アンモニウム、リン酸アン
モニウム等が用いられる。このほか、例えばリン酸水素
ナトリウム、硫酸マグネシウム、炭酸カルシウム等の無
機塩も必要に応じて用いることができる。培養にあた
り、発泡の激しいときにはシリコン化合物、高級アルコ
ール、植物油等の消泡剤を少量添加すればよい。培養温
度は２０〜３５℃が良く、特に２７℃前後が最も好まし
い。培養時間は１〜１０日間程度が良いが、培養条件に
より適宜変更することができる。
【００１５】培養により生成したＡＪＩ−３０２は主と
して培養液中に分泌されるので、一般には遠心分離、濾
過等の手段により菌体を除去した上清あるいは濾液から
一般に抗生物質の単離に用いられる手段によって採取さ
れる。例えば、クロロホルム、酢酸エチル、あるいはｎ
−ブタノール等有機溶媒による溶媒抽出法、シリカゲ
ル、活性炭、合成ポリスチレン系樹脂、合成ポリアクリ
ル系樹脂等を使用する吸着カラムクロマトグラフィー、
ゲル濾過法、各種イオン交換クロマトグラフィー、オク
タドデシル化されたシリカゲルを担体とする逆相分配カ
ラムクロマトグラフィー及びＨＰＬＣ、さらには向流分
配法、結晶、再結晶等の精製手段を順次又は適宜組み合
わせて行うことにより単離、精製することができる。
して培養液中に分泌されるので、一般には遠心分離、濾
過等の手段により菌体を除去した上清あるいは濾液から
一般に抗生物質の単離に用いられる手段によって採取さ
れる。例えば、クロロホルム、酢酸エチル、あるいはｎ
−ブタノール等有機溶媒による溶媒抽出法、シリカゲ
ル、活性炭、合成ポリスチレン系樹脂、合成ポリアクリ
ル系樹脂等を使用する吸着カラムクロマトグラフィー、
ゲル濾過法、各種イオン交換クロマトグラフィー、オク
タドデシル化されたシリカゲルを担体とする逆相分配カ
ラムクロマトグラフィー及びＨＰＬＣ、さらには向流分
配法、結晶、再結晶等の精製手段を順次又は適宜組み合
わせて行うことにより単離、精製することができる。
【００１６】上記の様にして得られたＡＪＩ−３０２
は、植物に対して様々な作用を持つ。植物生長調節剤と
して用いるには、ＡＪＩ−３０２単独で、溶液、粉末、
錠剤などとして使用できるが、必要に応じて窒素成分、
カリウム成分、リン成分などの肥料成分や糖類などの栄
養成分、あるいは無機塩類などを含む配合剤としても使
用できる。
は、植物に対して様々な作用を持つ。植物生長調節剤と
して用いるには、ＡＪＩ−３０２単独で、溶液、粉末、
錠剤などとして使用できるが、必要に応じて窒素成分、
カリウム成分、リン成分などの肥料成分や糖類などの栄
養成分、あるいは無機塩類などを含む配合剤としても使
用できる。
【００１７】本剤は畑などの土壌に施用できる他、水耕
液中あるいは寒天培地中に用いることもできる。ＡＪＩ
−３０２の使用濃度は溶液として土壌に用いた場合、１
〜１００００ｐｐｍが有効であるが好ましくは１０〜１
０００ｐｐｍが適当である。また水耕液中、あるいは寒
天培地中に用いる場合には、終濃度が０．１〜１０００
ｐｐｍとなるように本物質を加えることが有効である
が、好ましくは１〜１００ｐｐｍが適当である。
液中あるいは寒天培地中に用いることもできる。ＡＪＩ
−３０２の使用濃度は溶液として土壌に用いた場合、１
〜１００００ｐｐｍが有効であるが好ましくは１０〜１
０００ｐｐｍが適当である。また水耕液中、あるいは寒
天培地中に用いる場合には、終濃度が０．１〜１０００
ｐｐｍとなるように本物質を加えることが有効である
が、好ましくは１〜１００ｐｐｍが適当である。
【００１８】
【実施例】次に、実施例によって本発明をさらに詳細に
説明する。
説明する。
【００１９】実施例１ ＡＪＩ−３０２の製造
【００２０】グルコース１％、ポリペプトン０．２％、
肉エキス０．１％、酵母エキス０．１％から成る液体培
地（ｐＨ７．２）を５００ｍｌ容三角フラスコ６本に、
それぞれ２００ｍｌ分注した。これを１２１℃で１５分
間蒸気滅菌したのち、ストレプトミセス・エスピー Ａ
Ｊ−９４６５の斜面培養菌体を１白金耳接種し、２６．
５℃で２日間振とう培養し、種母液を得た。一方上記組
成の培地を５１三角フラスコ６本にそれぞれ２１ずつ分
注し、１２１℃で１５分間滅菌した。それぞれに２００
ｍｌの種母液を接種し、２６．５℃で４日間振とう培養
した。
肉エキス０．１％、酵母エキス０．１％から成る液体培
地（ｐＨ７．２）を５００ｍｌ容三角フラスコ６本に、
それぞれ２００ｍｌ分注した。これを１２１℃で１５分
間蒸気滅菌したのち、ストレプトミセス・エスピー Ａ
Ｊ−９４６５の斜面培養菌体を１白金耳接種し、２６．
５℃で２日間振とう培養し、種母液を得た。一方上記組
成の培地を５１三角フラスコ６本にそれぞれ２１ずつ分
注し、１２１℃で１５分間滅菌した。それぞれに２００
ｍｌの種母液を接種し、２６．５℃で４日間振とう培養
した。
【００２１】このようにして得られた培養物に、セライ
トを加えた後、ヌッチェを用いて濾過し、培養濾液１２
１を得た。この全量をアンバーライトＸＡＤ−７（ロー
ムアンドハース社製）カラム（５００ｍｌ容量）に吸着
させ、蒸留水１．５１で洗浄したあと、５０％メタノー
ル２１で溶出した。活性は主として５０％メタノール溶
出画分に回収された。この画分を約２００ｍｌに減圧濃
縮したあと、酢酸を加えて液のｐＨを３．５に調整し、
２０ｍＭ酢酸アンモニウム／酢酸（ｐＨ４．０）で平衡
化したＳＰ−セファデックスＣ−２５（ファルマシア社
製）陽イオン交換カラム（８６ｍｌ容量）に吸着させ、
ｐＨ４．０、ｐＨ６．０及びｐＨ８．０に調整した２０
ｍＭ酢酸アンモニウム／酢酸を、それぞれ４００ｍｌず
つ、順次通液した。これより得られる溶出液を１．５ｍ
ｌずつ分画し、活性を測定したところ、活性はｐＨ８．
０の緩衝液溶出画分に回収された。次に、この活性画分
（２４０ｍｌ）を凍結乾燥し、乾燥物を少量の水に溶か
したあと逆相系オクタドデシル化シリカゲル（ＯＤＳ）
カラムＳＳＣ−ＯＤＳ−７４２（センシュー科学社製、
φ１０×２５０ｍｍ）を用いた高速液体クロマトグラフ
ィー（移動相：０．１％トリフルオロ酢酸を含むアセト
ニトリル濃度０〜３０％のグラジェント溶出、流速２．
０ｍｌ／ｍｉｎ）に供した結果、アセトニトリル濃度約
２７％で活性物質が溶出され、これを分取した。上記、
操作を繰り返し、分取物を減圧濃縮後、凍結乾燥したと
ころ、白色粉末の純粋なＡＪＩ−３０２ ５２．９ｍｇ
を得た。この物質の物性は以下の通りであり、これより
化学構造式は下記化３と決定された。
トを加えた後、ヌッチェを用いて濾過し、培養濾液１２
１を得た。この全量をアンバーライトＸＡＤ−７（ロー
ムアンドハース社製）カラム（５００ｍｌ容量）に吸着
させ、蒸留水１．５１で洗浄したあと、５０％メタノー
ル２１で溶出した。活性は主として５０％メタノール溶
出画分に回収された。この画分を約２００ｍｌに減圧濃
縮したあと、酢酸を加えて液のｐＨを３．５に調整し、
２０ｍＭ酢酸アンモニウム／酢酸（ｐＨ４．０）で平衡
化したＳＰ−セファデックスＣ−２５（ファルマシア社
製）陽イオン交換カラム（８６ｍｌ容量）に吸着させ、
ｐＨ４．０、ｐＨ６．０及びｐＨ８．０に調整した２０
ｍＭ酢酸アンモニウム／酢酸を、それぞれ４００ｍｌず
つ、順次通液した。これより得られる溶出液を１．５ｍ
ｌずつ分画し、活性を測定したところ、活性はｐＨ８．
０の緩衝液溶出画分に回収された。次に、この活性画分
（２４０ｍｌ）を凍結乾燥し、乾燥物を少量の水に溶か
したあと逆相系オクタドデシル化シリカゲル（ＯＤＳ）
カラムＳＳＣ−ＯＤＳ−７４２（センシュー科学社製、
φ１０×２５０ｍｍ）を用いた高速液体クロマトグラフ
ィー（移動相：０．１％トリフルオロ酢酸を含むアセト
ニトリル濃度０〜３０％のグラジェント溶出、流速２．
０ｍｌ／ｍｉｎ）に供した結果、アセトニトリル濃度約
２７％で活性物質が溶出され、これを分取した。上記、
操作を繰り返し、分取物を減圧濃縮後、凍結乾燥したと
ころ、白色粉末の純粋なＡＪＩ−３０２ ５２．９ｍｇ
を得た。この物質の物性は以下の通りであり、これより
化学構造式は下記化３と決定された。
【化３】
【００２２】（１）外観 白色粉末 （２）ＵＶスペクトル 末端吸収 （３）ＩＲスペクトル 図１に示す通り（ＫＢｒ錠剤
中） （４）分子式 Ｃ35Ｈ63Ｎ11Ｏ13 （５）高分解能ＦＡＢＭＳ 実測値： ８４６．４５９５（Ｍ＋Ｈ）+ 計算値： Ｃ35Ｈ64Ｎ11Ｏ13として８４６．４６８５ （６）プロトンＮＭＲスペクトル 図２に示す通り（重ジメチルスルフォキサイド中）（６
００ＭＨｚ） （７）カーボンＮＭＲスペクトル 図３に示す通り（重水中）（１００ＭＨｚ）
中） （４）分子式 Ｃ35Ｈ63Ｎ11Ｏ13 （５）高分解能ＦＡＢＭＳ 実測値： ８４６．４５９５（Ｍ＋Ｈ）+ 計算値： Ｃ35Ｈ64Ｎ11Ｏ13として８４６．４６８５ （６）プロトンＮＭＲスペクトル 図２に示す通り（重ジメチルスルフォキサイド中）（６
００ＭＨｚ） （７）カーボンＮＭＲスペクトル 図３に示す通り（重水中）（１００ＭＨｚ）
【００２３】実施例２ 発芽レタスに対する下胚軸、及び上胚軸に対する生長阻
害の検定
害の検定
【００２４】濾紙を敷いたφ５．５ｃｍのシャーレー
に、様々な濃度（１／３２〜１２８ｐｐｍ）のＡＪＩ−
３０２を含むＨｏａｇｌａｎｄ水耕液（１１の蒸留水中
に、ＫＮＯ3 ０．５１ｇ、Ｃａ（ＮＯ3 ）2 ・４Ｈ2 Ｏ
１．１８ｇ、ＭｇＳＯ4 ・７Ｈ2 Ｏ０．４９ｇ、ＫＨ2
ＰＯ4 ０．１４ｇを含むもの）を２ｍｌ加え、レタス種
子（クレートレークス５４号）を１０粒置いて、２５
℃、３０００ルクスの螢光灯下で４日間発芽、生長さ
せ、その生育阻害度を観察した。下胚軸の長さを測定し
た結果を表１に示す。
に、様々な濃度（１／３２〜１２８ｐｐｍ）のＡＪＩ−
３０２を含むＨｏａｇｌａｎｄ水耕液（１１の蒸留水中
に、ＫＮＯ3 ０．５１ｇ、Ｃａ（ＮＯ3 ）2 ・４Ｈ2 Ｏ
１．１８ｇ、ＭｇＳＯ4 ・７Ｈ2 Ｏ０．４９ｇ、ＫＨ2
ＰＯ4 ０．１４ｇを含むもの）を２ｍｌ加え、レタス種
子（クレートレークス５４号）を１０粒置いて、２５
℃、３０００ルクスの螢光灯下で４日間発芽、生長さ
せ、その生育阻害度を観察した。下胚軸の長さを測定し
た結果を表１に示す。
【００２５】
【表１】
【００２６】この結果、ＡＪＩ−３０２は低濃度で、特
に下胚軸の生長を阻害し、高濃度でも、根の枯死などは
起こらないことが判明した。
に下胚軸の生長を阻害し、高濃度でも、根の枯死などは
起こらないことが判明した。
【００２７】実施例３ ＡＪＩ−３０２処理した発芽レタスのＡＪＩ−３０２除
去後の生長回復の検定
去後の生長回復の検定
【００２８】実施例２と同様のレタス発芽試験を用い
て、以下の操作を行なった。発芽２日後のレタス種子を
ＡＪＩ−３０２を１０ｐｐｍ含むシャーレーに移植し、
成長を観察した。さらに移植２日後に、ＡＪＩ−３０２
を含まないシャーレーに移植し直し、さらに２日間成長
を観察した。処理区と対称区（ＡＪＩ−３０２無添加の
シャーレーに移植したもの）の根長を測定した結果を表
２に示す。
て、以下の操作を行なった。発芽２日後のレタス種子を
ＡＪＩ−３０２を１０ｐｐｍ含むシャーレーに移植し、
成長を観察した。さらに移植２日後に、ＡＪＩ−３０２
を含まないシャーレーに移植し直し、さらに２日間成長
を観察した。処理区と対称区（ＡＪＩ−３０２無添加の
シャーレーに移植したもの）の根長を測定した結果を表
２に示す。
【００２９】
【表２】
【００３０】ＡＪ−３０２処理中は生長が停止し、除去
後は形態的にも正常な生長が再開した。
後は形態的にも正常な生長が再開した。
【００３１】実施例４ ニコチカ・ルスチカ（Ｎｉｃｏｔｉｃａ ｒｕｓｔｉｃ
ａ）を用いた試験管内実生苗の生長抑制試験
ａ）を用いた試験管内実生苗の生長抑制試験
【００３２】ジュランガム０．２％を含み、糖、植物ホ
ルモン類を含まないムラシゲ・スクッグ植物用培地（日
本製薬社製）を調製、滅菌し、ＡＪＩ−３０２を、最終
濃度が１ｐｐｍ、１０ｐｐｍ、２０ｐｐｍになるように
無菌的に添加し、これをフタ付き平底試験管（φ２．２
×１２ｃｍ）に１０ｍｌずつ分注した。無菌的に発芽さ
せ、６〜７節に成長したニコチカ・ルスチカの茎頂から
３〜４節を切り取った植物体を上記培地に置床し、２５
℃、連続照明（３０００ルクス）の条件で培養し、３０
日後の発根率、草丈、葉数を観察した。その結果を表３
に示す。
ルモン類を含まないムラシゲ・スクッグ植物用培地（日
本製薬社製）を調製、滅菌し、ＡＪＩ−３０２を、最終
濃度が１ｐｐｍ、１０ｐｐｍ、２０ｐｐｍになるように
無菌的に添加し、これをフタ付き平底試験管（φ２．２
×１２ｃｍ）に１０ｍｌずつ分注した。無菌的に発芽さ
せ、６〜７節に成長したニコチカ・ルスチカの茎頂から
３〜４節を切り取った植物体を上記培地に置床し、２５
℃、連続照明（３０００ルクス）の条件で培養し、３０
日後の発根率、草丈、葉数を観察した。その結果を表３
に示す。
【００３３】
【表３】
【００３４】ＡＪＩ−３０２は苗の葉数に影響を及ぼす
ことなく、生長を抑制することが確認された。
ことなく、生長を抑制することが確認された。
【００３５】実施例５ ＡＪＩ−３０２のディスク法による抗菌試験
【００３６】ピリキュライア・オリザエ（Ｐｙｒｉｃｕ
ｒａｉａ ｏｒｙｚａｅ）、ボツリティス・シネレ（Ｂ
ｏｔｒｙｔｉｓ ｃｉｎｅｒｅｏ）、フザリウム・オキ
シスポラム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｏｘｙｓｐｏｒｕ
ｍ）、アスペルギルス・オリザエ（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌ
ｕｓ ｏｒｙｚａｅ）、フィトフトラ・キャプシシ（Ｐ
ｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｃａｐｓｉｃｉ）、キャンデ
ィダ・アルビカンス（Ｃａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎ
ｓ）、バチルス・サチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂ
ｔｉｌｉｓ）、スタフィロコッカス・オーレウス（Ｓｔ
ａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ）、エシェリ
ヒア・コリ（Ｅｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）、キサ
ントモナス・オリザエ（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ ｏｒ
ｙｚａｅ）、シュードモナス・グルメ（Ｐｓｅｕｄｏｍ
ｏｎａｓ ｇｌｕｍａｅ）に対しての抗菌力を通常の抗
菌ディスク法を用いて試験したところ、いずれの菌に対
しても１００ｐｐｍ以下では生育阻止作用を示さなかっ
た。
ｒａｉａ ｏｒｙｚａｅ）、ボツリティス・シネレ（Ｂ
ｏｔｒｙｔｉｓ ｃｉｎｅｒｅｏ）、フザリウム・オキ
シスポラム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｏｘｙｓｐｏｒｕ
ｍ）、アスペルギルス・オリザエ（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌ
ｕｓ ｏｒｙｚａｅ）、フィトフトラ・キャプシシ（Ｐ
ｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｃａｐｓｉｃｉ）、キャンデ
ィダ・アルビカンス（Ｃａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎ
ｓ）、バチルス・サチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂ
ｔｉｌｉｓ）、スタフィロコッカス・オーレウス（Ｓｔ
ａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ）、エシェリ
ヒア・コリ（Ｅｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）、キサ
ントモナス・オリザエ（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ ｏｒ
ｙｚａｅ）、シュードモナス・グルメ（Ｐｓｅｕｄｏｍ
ｏｎａｓ ｇｌｕｍａｅ）に対しての抗菌力を通常の抗
菌ディスク法を用いて試験したところ、いずれの菌に対
しても１００ｐｐｍ以下では生育阻止作用を示さなかっ
た。
【００３７】実施例６ ＡＪＩ−３０２の細胞毒性
【００３８】動物由来株化細胞、Ｋ５６２細胞、ＦＭ３
Ａ細胞、ＨＳＧ細胞に対するＡＪＩ−３０２の細胞毒性
を調べた。培養培地としては、Ｋ５６２細胞に対しては
１０％牛胎児血清を含むＲＰＭＩ１６４０培地を、ま
た、ＦＭ３Ａ細胞、ＨＳＧ細胞に対しては１０％牛胎児
血清を含むダルベッコＭＥＭ培地を用いた。培地に５０
％メタノール水溶液に溶解したＡＪＩ−３０２を加えて
適宜その終濃度を調整し、上記３細胞を１×１０5 細胞
／ｍｌとなるように接種し、ＣＯ2 インキュベーター中
で、５％ＣＯ2 、３７℃で４日間培養したところ、いず
れの細胞に対してもＡＪＩ−３０２濃度２００ｐｐｍ以
下では生育の阻害および形態の変化は観察されなかっ
た。
Ａ細胞、ＨＳＧ細胞に対するＡＪＩ−３０２の細胞毒性
を調べた。培養培地としては、Ｋ５６２細胞に対しては
１０％牛胎児血清を含むＲＰＭＩ１６４０培地を、ま
た、ＦＭ３Ａ細胞、ＨＳＧ細胞に対しては１０％牛胎児
血清を含むダルベッコＭＥＭ培地を用いた。培地に５０
％メタノール水溶液に溶解したＡＪＩ−３０２を加えて
適宜その終濃度を調整し、上記３細胞を１×１０5 細胞
／ｍｌとなるように接種し、ＣＯ2 インキュベーター中
で、５％ＣＯ2 、３７℃で４日間培養したところ、いず
れの細胞に対してもＡＪＩ−３０２濃度２００ｐｐｍ以
下では生育の阻害および形態の変化は観察されなかっ
た。
【００３９】
【発明の効果】本発明の化合物は低濃度で植物に対する
生長抑制、節間短縮などの強い活性を持ち、一方抗菌性
ならびに細胞毒性はほとんど有さない。従って、広い範
囲で植物生長調節剤を提供することができる。またこの
化合物は発酵生育されることから容易に大量生産するこ
とが可能である。
生長抑制、節間短縮などの強い活性を持ち、一方抗菌性
ならびに細胞毒性はほとんど有さない。従って、広い範
囲で植物生長調節剤を提供することができる。またこの
化合物は発酵生育されることから容易に大量生産するこ
とが可能である。
【図１】 本発明の化合物のＩＲスペクトルを示した図
である。
である。
【図２】 本発明の化合物のプロトンＮＭＲスペクトル
を示した図である。
を示した図である。
【図３】 本発明の化合物のカーボンＮＭＲスペクトル
を示した図である。
を示した図である。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (58)調査した分野(Int.Cl.6，ＤＢ名) C07K 5/10 A01K 47/28 C21P 21/02 ＢＩＯＳＩＳ（ＤＩＡＬＯＧ) ＣＡ（ＳＴＮ) ＲＥＧＩＳＴＲＹ（ＳＴＮ) ＷＰＩ（ＤＩＡＬＯＧ)
Claims (4)
- 【請求項１】 下記化１ 【化１】 で表される化合物。
- 【請求項２】 請求項１記載の化合物を有効成分とする
植物生長調節剤。 - 【請求項３】 ストレプトミセス属に属し、請求項１記
載の化合物を生産する能力を有する微生物を培養するこ
とを特徴とする請求項１記載の化合物の製造法。 - 【請求項４】 微生物がストレプトミセス・エスピー
ＡＪ−９４６５（ＦＥＲＭ Ｐ−１１８７２）である請
求項３に記載の請求項１記載の化合物の製造法。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP3-70264 | 1991-01-14 | ||
| JP7026491 | 1991-01-14 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH05170793A JPH05170793A (ja) | 1993-07-09 |
| JP2990628B2 true JP2990628B2 (ja) | 1999-12-13 |
Family
ID=13426499
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP33507491A Expired - Lifetime JP2990628B2 (ja) | 1991-01-14 | 1991-12-18 | 新規植物生長調節物質ａｊｉ−３０２及びその製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2990628B2 (ja) |
-
1991
- 1991-12-18 JP JP33507491A patent/JP2990628B2/ja not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH05170793A (ja) | 1993-07-09 |
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