JPS6192589A - ラミナリペンタオ−スの製造法 - Google Patents
ラミナリペンタオ−スの製造法Info
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- JPS6192589A JPS6192589A JP59212716A JP21271684A JPS6192589A JP S6192589 A JPS6192589 A JP S6192589A JP 59212716 A JP59212716 A JP 59212716A JP 21271684 A JP21271684 A JP 21271684A JP S6192589 A JPS6192589 A JP S6192589A
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- laminaripentaose
- enzyme
- beta
- streptomyces
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- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
- Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
- Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
- Y02P20/52—Improvements relating to the production of bulk chemicals using catalysts, e.g. selective catalysts
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- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
ぐ産業上の利用分野ン
本発明は、ストレプトマイセス属に属する微生物の生産
するβ−１，３糖分解酵素（β−１，３グルカナーゼ）
を用いてβ−１，３グルコシル糖化合物を分解して得ら
れたラミナリペンタオース（グルコースがβ−１，３の
位置で５個結合したものＧｓ ）を製造する方法に関す
るものである。
するβ−１，３糖分解酵素（β−１，３グルカナーゼ）
を用いてβ−１，３グルコシル糖化合物を分解して得ら
れたラミナリペンタオース（グルコースがβ−１，３の
位置で５個結合したものＧｓ ）を製造する方法に関す
るものである。
最近、デンプンを分解して得られるマルトオリゴｍ（ｃ
ｓ〜Ｇｏ ）の製造技術の開発が要望されておシ、これ
らは食品の甘味料、増量剤、賦形剤、包接剤として食品
、楽品、及び種々の工業製品に広く利用できると考えら
れている。
ｓ〜Ｇｏ ）の製造技術の開発が要望されておシ、これ
らは食品の甘味料、増量剤、賦形剤、包接剤として食品
、楽品、及び種々の工業製品に広く利用できると考えら
れている。
これと同様に新規なラミナリペンタオースはこれらの分
野への新たな用途を提供することができるものである。
野への新たな用途を提供することができるものである。
また近年、抗腫瘍活性、抗細菌感染症作用、免疫系に及
ぼす作用等を持つ担子菌、子のり菌、不完全菌類等が江
生ずる多糖化合物の構造分析が精力的に検討され、活性
多循の基本骨格は３〜５個のβ−（１→３）−Ｄ・−グ
ルカン直鎖にβ−１，６モノグルコシル分岐鎖が結合し
たものであるという報告がなされている。〔水野卓；化
学と生物Ｖｏｌ。
ぼす作用等を持つ担子菌、子のり菌、不完全菌類等が江
生ずる多糖化合物の構造分析が精力的に検討され、活性
多循の基本骨格は３〜５個のβ−（１→３）−Ｄ・−グ
ルカン直鎖にβ−１，６モノグルコシル分岐鎖が結合し
たものであるという報告がなされている。〔水野卓；化
学と生物Ｖｏｌ。
２１、虎７．Ｐ４７３〜（１９８５）、水野卓；農芸化
学大会要旨集Ｐ１３（１９８４）、三崎旭；農芸化学大
会要旨集Ｐｉ ４（１９８４））そしてこれら活性多糖
化合物の化学合成が分岐グルコ四糖から試みられ、また
、農薬、抗生物質の生理作用を分子レベルで解明する為
、細胞表層グルカンの化学合成がマンノペンメオースを
出発原料として行なわれている。〔ともに小川智也；化
学と生物Ｖｏ）、２０゜＆１２Ｐ７８９ （１９８２）
）ラミナリペンタオースは、これらの化学合成の出発物
質として有用なものである。
学大会要旨集Ｐ１３（１９８４）、三崎旭；農芸化学大
会要旨集Ｐｉ ４（１９８４））そしてこれら活性多糖
化合物の化学合成が分岐グルコ四糖から試みられ、また
、農薬、抗生物質の生理作用を分子レベルで解明する為
、細胞表層グルカンの化学合成がマンノペンメオースを
出発原料として行なわれている。〔ともに小川智也；化
学と生物Ｖｏ）、２０゜＆１２Ｐ７８９ （１９８２）
）ラミナリペンタオースは、これらの化学合成の出発物
質として有用なものである。
（発明の構成）
本発明者らはβ−１，３グルコシル糖化合物をラミナリ
ペンタオースに分解する値生物金鋭意検索の結果、スト
レプトマイセス域に属する一菌株が生産するβ−１，３
糖分解酵素（β−１，６グルカナーゼ）の一種がβ−１
，３グルコシル糖化合物を分解し、高収率でラミナリペ
ンタオーヌを生成することを見い出し本発明を完成する
に至った。
ペンタオースに分解する値生物金鋭意検索の結果、スト
レプトマイセス域に属する一菌株が生産するβ−１，３
糖分解酵素（β−１，６グルカナーゼ）の一種がβ−１
，３グルコシル糖化合物を分解し、高収率でラミナリペ
ンタオーヌを生成することを見い出し本発明を完成する
に至った。
即ち、本発明はβ−１，３グルコシル糖化合物又はその
部分分解物金うミナリペンタオースに分解する能力を有
するストレプトマイセス域に属する微生物の生産するβ
−１，３糖分解酵素（β−１，６−グルカナーゼと称す
）をβ−１，６グルコシル糖化合物又はその部分分解物
に作用させて得られることを特徴とするラミナリペンタ
オースの製造法を提供するものである。
部分分解物金うミナリペンタオースに分解する能力を有
するストレプトマイセス域に属する微生物の生産するβ
−１，３糖分解酵素（β−１，６−グルカナーゼと称す
）をβ−１，６グルコシル糖化合物又はその部分分解物
に作用させて得られることを特徴とするラミナリペンタ
オースの製造法を提供するものである。
（従来技術）
β−１，３１ｓ分解酵素は、これまで主として酵母細胞
壁の溶解あるいは、ビール工業における麦汁の粘度低下
を目的として利用されているにすぎず、分解生成糖を採
取することを目的とした報告は見あたらない。β−１，
３グルコシル糖化合物類を分解してラミナリペンタオー
スの生成を確認している報告はあるが他の菌株のもので
ある。
壁の溶解あるいは、ビール工業における麦汁の粘度低下
を目的として利用されているにすぎず、分解生成糖を採
取することを目的とした報告は見あたらない。β−１，
３グルコシル糖化合物類を分解してラミナリペンタオー
スの生成を確認している報告はあるが他の菌株のもので
ある。
またストレプトマイセス域の放線菌が生産するβ−１，
３グルカナーゼは主に酵母細胞壁の溶解を目的としたも
のとして知られておシ、例えばストレプトマイセス ア
ルビドフラバス（ｓｔ、 ａｌｂｉｄｏｆｌａｖｕｓ
；醗酵工学会誌第５９巻高１０ ７６６頁〜（１９６
５））、ストレプトマイセス エスピー（Ｓｔｒｅｐｔ
ｏｍｙｃｅｓ ８Ｐ、 ） （Ａｑｒｌｃｕｌ。
３グルカナーゼは主に酵母細胞壁の溶解を目的としたも
のとして知られておシ、例えばストレプトマイセス ア
ルビドフラバス（ｓｔ、 ａｌｂｉｄｏｆｌａｖｕｓ
；醗酵工学会誌第５９巻高１０ ７６６頁〜（１９６
５））、ストレプトマイセス エスピー（Ｓｔｒｅｐｔ
ｏｍｙｃｅｓ ８Ｐ、 ） （Ａｑｒｌｃｕｌ。
Ｂｉｏｌｏｇ＊ Ｂｌｏｃｈｅｍ、第１１１巻、３５８
頁〜３６４頁、（１９６５））、ストレプトマイセス
ムリナス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｅｅｓ ｍｕｒｌｎｕｓ
） （醗酵工学会誌第５９巻ｓ＆６ ５９９頁〜（１
９７Ｂ））等が報告されているが、いずれもラミナリペ
ンタオースを主生成物としたものではなく本願のβ−１
，３グルカナーゼとは異なるものである。
頁〜３６４頁、（１９６５））、ストレプトマイセス
ムリナス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｅｅｓ ｍｕｒｌｎｕｓ
） （醗酵工学会誌第５９巻ｓ＆６ ５９９頁〜（１
９７Ｂ））等が報告されているが、いずれもラミナリペ
ンタオースを主生成物としたものではなく本願のβ−１
，３グルカナーゼとは異なるものである。
本発明で使用されるβ−１，６砧分解酵累は、ストレプ
トマイセス域に属する微生物により生産され、β−１，
３グルコシル権化合物又はでの部分分解物に作用し、ラ
ミナリペンタオースを主成分とする分解生成物を生ぜせ
しめる能力を有する０索であればいずれでも良いが、好
ましくはストレプトマイセス マテンシヌ ＤＩＣ−１
０８’！ｒ培ｄして得られるβ−１，３ｍ分解酵素（β
−１，３グルカナーゼＦｉｌと称す）である。
トマイセス域に属する微生物により生産され、β−１，
３グルコシル権化合物又はでの部分分解物に作用し、ラ
ミナリペンタオースを主成分とする分解生成物を生ぜせ
しめる能力を有する０索であればいずれでも良いが、好
ましくはストレプトマイセス マテンシヌ ＤＩＣ−１
０８’！ｒ培ｄして得られるβ−１，３ｍ分解酵素（β
−１，３グルカナーゼＦｉｌと称す）である。
β−１，３−グルカナーゼにより生成するラミナリペン
タオースは、使用するβ−１，３グルコシル糖化合物の
種類や糖化時の反応条件（例えばβ−１，３グルコシル
、枯化合物の譲度、ＰＨｓ １Ｍ１度、酵素濃度）によ
っても異なるが、通常β−１，３グルコシル糖化合物に
対して収率２０〜９０重量％の値の得られるβ−１，３
−グルカナーゼでるるととが望ましい。
タオースは、使用するβ−１，３グルコシル糖化合物の
種類や糖化時の反応条件（例えばβ−１，３グルコシル
、枯化合物の譲度、ＰＨｓ １Ｍ１度、酵素濃度）によ
っても異なるが、通常β−１，３グルコシル糖化合物に
対して収率２０〜９０重量％の値の得られるβ−１，３
−グルカナーゼでるるととが望ましい。
本発明で好ｔＬ＜用いら１しるβ−１，６グルカナーゼ
Ｆｉｌの性質を次に示す。
Ｆｉｌの性質を次に示す。
ｆｉｌ 作用；β−１，３グルコシル糖化合物、例え
ばカードラン、ラミナリン、パキマン、０母細胞壁、又
はその部分分解物などからラミナリペンタオースを主成
分とする楯分解物を生Ｊ反する。
ばカードラン、ラミナリン、パキマン、０母細胞壁、又
はその部分分解物などからラミナリペンタオースを主成
分とする楯分解物を生Ｊ反する。
（２）作用ｐＨ範聞及び最適作用ｐＨ；ｐＨ３〜９の範
囲に作用し、最適ｐＨは、６付近である。（第１図参照
）（３）作用温度範囲及び最適作用温度：約７０℃まで
作用し、最適作用温度は約６０℃である。（第２図参照
）（４）精製方法 本酵素は培養口過液から硫安６５チ飽オロで沈澱物とし
て回収後、 ＤＥＡＥ−８ｅｐｈａｄｅｘ Ａ−２５カ
ラムクロマトグラフイー（０，０１Ｍ Ｔｖｉｇ−Ｈ
ｅｌ緩衝液ｐ Ｈ７，５で平衡化）を行い、その未吸着
区分を集める。次いで、ＣＭ−セファデックスＣ−２５
カラムクロマトグラフイー＜ ｏ、 ｏ ｉ Ｍ酢はバ
ッファーｐＨ６，０で平田化）を行い、Ｎａｃｌの０．
１Ｍ溶液で溶出される区分を集め、硫安５０〜７０％飽
和としてその沈澱物を回収する。その後、 ５ａｐｈａ
ｄｅｘ Ｇ−Ｉ Ｄ。
囲に作用し、最適ｐＨは、６付近である。（第１図参照
）（３）作用温度範囲及び最適作用温度：約７０℃まで
作用し、最適作用温度は約６０℃である。（第２図参照
）（４）精製方法 本酵素は培養口過液から硫安６５チ飽オロで沈澱物とし
て回収後、 ＤＥＡＥ−８ｅｐｈａｄｅｘ Ａ−２５カ
ラムクロマトグラフイー（０，０１Ｍ Ｔｖｉｇ−Ｈ
ｅｌ緩衝液ｐ Ｈ７，５で平衡化）を行い、その未吸着
区分を集める。次いで、ＣＭ−セファデックスＣ−２５
カラムクロマトグラフイー＜ ｏ、 ｏ ｉ Ｍ酢はバ
ッファーｐＨ６，０で平田化）を行い、Ｎａｃｌの０．
１Ｍ溶液で溶出される区分を集め、硫安５０〜７０％飽
和としてその沈澱物を回収する。その後、 ５ａｐｈａ
ｄｅｘ Ｇ−Ｉ Ｄ。
（フマルマシア社製）ゲルクロマトグラフィー（０，０
１Ｍリン酸バッファー、ｐＨ７０で平衡化）を行うこと
により、クロマト的に単一酵素に精製できる。
１Ｍリン酸バッファー、ｐＨ７０で平衡化）を行うこと
により、クロマト的に単一酵素に精製できる。
（５）分子量； ５ｅｐｈａｄｅｘ Ｇ−１００ゲルク
ロマトグラフィーによる分子量は約３１．０００と推定
できる。
ロマトグラフィーによる分子量は約３１．０００と推定
できる。
本発明の酵素は、上記β−１，３グルカナーゼが好まし
く用いられるが、この酵素はストレプトマイセス属の菌
株、好ましくは、ストレプトマイセス マテンシス Ｄ
Ｉ Ｃ−１０８よシ得られる。
く用いられるが、この酵素はストレプトマイセス属の菌
株、好ましくは、ストレプトマイセス マテンシス Ｄ
Ｉ Ｃ−１０８よシ得られる。
又、こうしたβ−１，３−グルカナーゼは、特異的にラ
ミナリペンタオース全生成させる為、β−１，３グルカ
ンの構造解析用の手段となシうるものである。また他の
好ましいものとしてこれらの菌株を人工的に変異処理即
ち化学的、物理的手段による変異−発処理を行うことに
より得られる人為的突然変異株、あるいは自然変異株も
全て含まれ （２）る。
ミナリペンタオース全生成させる為、β−１，３グルカ
ンの構造解析用の手段となシうるものである。また他の
好ましいものとしてこれらの菌株を人工的に変異処理即
ち化学的、物理的手段による変異−発処理を行うことに
より得られる人為的突然変異株、あるいは自然変異株も
全て含まれ （２）る。
本発明で好ましく使用される前述の菌株の菌学的性質は
特開昭５９−１７９９６号公報にも示されているが次の
とおりである。
特開昭５９−１７９９６号公報にも示されているが次の
とおりである。
〔ストレプトミセス・マテンシス ＤＩＣ−１０８の菌
学的性質〕 （１１形態的特徴 使用した培地（ＩＳＰ培地を含むン上での栄養菌糸の生
育は優れておシ、デンプン無機塩、オートミール寒天、
イースト麦芽寒天培地上で豊富な気菌糸を形成する。
１胞子形成気菌糸は直状又は直状又は直曲状である。
学的性質〕 （１１形態的特徴 使用した培地（ＩＳＰ培地を含むン上での栄養菌糸の生
育は優れておシ、デンプン無機塩、オートミール寒天、
イースト麦芽寒天培地上で豊富な気菌糸を形成する。
１胞子形成気菌糸は直状又は直状又は直曲状である。
胞子は楕円体で大きさは、短径×長径０．７〜０．８μ
ＸｔＯ〜１２μである。走査型電子顧倣鏡による観察で
は胞子の表面構造はイボ状（Ｗａｒｔｙ）である。
ＸｔＯ〜１２μである。走査型電子顧倣鏡による観察で
は胞子の表面構造はイボ状（Ｗａｒｔｙ）である。
各種培地における生育状態
１）シュクロース硝酸塩寒天培地（３７℃）薄茶色の基
生菌糸状に灰色の気菌糸を形成し、ｆ６解性色素はみと
められない。
生菌糸状に灰色の気菌糸を形成し、ｆ６解性色素はみと
められない。
２）グルコース・アスパラギン寒天培地（３７℃）薄黄
白色の生育で気菌糸の形成はみとめられない。
白色の生育で気菌糸の形成はみとめられない。
また溶解性色素はみとめられない。
５）グリセリン・アスパラギン寒天培地（ＩＳＰ培地−
７１＆５３７１℃） 薄黄色の生育で気菌糸の着生はみとめられない。又、溶
解性色素はみとめられない。
７１＆５３７１℃） 薄黄色の生育で気菌糸の着生はみとめられない。又、溶
解性色素はみとめられない。
４）ヌターチ・無機塩寒天培地（ｒｓｐ培地 ３７”Ｃ
）無色の発ａ上に緑灰色の気菌糸全着生し、溶解性色素
はみとめられない。
）無色の発ａ上に緑灰色の気菌糸全着生し、溶解性色素
はみとめられない。
５）チロシン寒天培地（ＩＳＰ培地−７，６７℃）薄茶
色の発Ｈ上に培養７日月では気菌糸は着生せず、１４日
目で白灰色の気菌糸を着生する。溶解性色素はみとめら
れない。
色の発Ｈ上に培養７日月では気菌糸は着生せず、１４日
目で白灰色の気菌糸を着生する。溶解性色素はみとめら
れない。
６）栄誉寒天培地（３７℃９
緑灰黒色の発胃上に薄縁灰色の気菌糸を着生し、溶解性
色素はみとめられない。
色素はみとめられない。
７）イースト麦芽寒天培地（ＩＳＰ培地−２，３７℃）
薄茶色の生育上に薄縁灰色の気菌糸を着生する。水溶性
色素の生成はみとめられない。
薄茶色の生育上に薄縁灰色の気菌糸を着生する。水溶性
色素の生成はみとめられない。
８）オートミール４天培地（ＩＳＰ培地−３，３７℃ン
無色の生育上’に緑茶灰色の気菌糸全着生し、水溶性色
素の生成はみとめられない。
無色の生育上’に緑茶灰色の気菌糸全着生し、水溶性色
素の生成はみとめられない。
（３）生理的性質
１）生育温度範四
酵母エキス・麦芽エキス液体培地による生育試験では、
３０℃〜５０℃で生育するが、至適温度Ｆｉ３７℃〜４
５℃である。
３０℃〜５０℃で生育するが、至適温度Ｆｉ３７℃〜４
５℃である。
２）ゼラチンの液化：陰性
６）脱脂乳の凝固及び
脱脂乳のペプトン化：陰性
４）メラニン色素の生成（ペプトン・イースト・妖寒天
培地、ＩＳＰ培地６）：陰性 ５）デンプンの分解性：陽性（分解ゾーンに白いリング
を形成） ６）炭素源の利用性（プリド・・ム、ゴドリープ外大培
地−９，３７℃） Ｄ−グルコース、Ｌ−アラビノース、Ｄ−キシロース、
Ｄ−フルクトース、イノシトール、Ｌ−ラムノース、
Ｄ −マンニトール、ガラクトースをよく利用して生育
し、シュクロース、ラフィノース、サリシンは利用しな
い。
培地、ＩＳＰ培地６）：陰性 ５）デンプンの分解性：陽性（分解ゾーンに白いリング
を形成） ６）炭素源の利用性（プリド・・ム、ゴドリープ外大培
地−９，３７℃） Ｄ−グルコース、Ｌ−アラビノース、Ｄ−キシロース、
Ｄ−フルクトース、イノシトール、Ｌ−ラムノース、
Ｄ −マンニトール、ガラクトースをよく利用して生育
し、シュクロース、ラフィノース、サリシンは利用しな
い。
７）細胞壁組成
ｌ５ＰＫ記載されている糖組成ＴｙｐｅとしてはＴｙｐ
ｅ ｌに属する。
ｅ ｌに属する。
る。
本発明による酵素生産の為の培養は、通常の固体培地又
は液体培地が使用され、液体培養の為の培地の炭素源と
しては、β−１，３グルコシル糖化合物であれば利用で
きる。
は液体培地が使用され、液体培養の為の培地の炭素源と
しては、β−１，３グルコシル糖化合物であれば利用で
きる。
例えば、カードラン、パキマン、ラミナリン、リケナン
、酵母細胞壁又はその部分分解物、リュウコシン、カロ
ース、パラミロン等が挙げられ、又窒素源としては硫安
、塩安、リン安、硝酸ナトリウム、尿素、ペプトン、カ
ゼイン等、有機窒素、無機窒素、いずれも利用できる。
、酵母細胞壁又はその部分分解物、リュウコシン、カロ
ース、パラミロン等が挙げられ、又窒素源としては硫安
、塩安、リン安、硝酸ナトリウム、尿素、ペプトン、カ
ゼイン等、有機窒素、無機窒素、いずれも利用できる。
天然栄餐諒としては、例えば各種糖蜜、コーンステイー
プリカー、オートミール、味液、魚粉、肉エキス、酵母
、酵母ニーＩＰヌ、ポテトエキス、麦芽エキス等があげ
られる。
プリカー、オートミール、味液、魚粉、肉エキス、酵母
、酵母ニーＩＰヌ、ポテトエキス、麦芽エキス等があげ
られる。
無機物としては、例えばリン酸二カリウム、リンば−ナ
トリウム、’ａＨマグネシウム、＃、量全金属類どが挙
げられる。その他、必要に応じてビタミン類等を添加す
ることもできる。これらの使用濃度としては、０．１〜
４０重量係重量−られる。また醗酵中の発泡を抑制する
ため、ｏ、ｏｏｏｉ−１ｏ憲量膚の消泡剤を添加しても
よい。消泡剤としては、シリコーン、大豆油など通常の
消泡剤を用いる。
トリウム、’ａＨマグネシウム、＃、量全金属類どが挙
げられる。その他、必要に応じてビタミン類等を添加す
ることもできる。これらの使用濃度としては、０．１〜
４０重量係重量−られる。また醗酵中の発泡を抑制する
ため、ｏ、ｏｏｏｉ−１ｏ憲量膚の消泡剤を添加しても
よい。消泡剤としては、シリコーン、大豆油など通常の
消泡剤を用いる。
培養方法は、振とう培養、通気培養などの好気的液体培
寮が適しておシ、ｐ Ｈ５，０〜８．０、培養温度２．
０℃〜５０”Ｃで１〜６日、望ましくはｐＨ６，５〜７
．５．３５〜４０℃で２日前後培養する。
寮が適しておシ、ｐ Ｈ５，０〜８．０、培養温度２．
０℃〜５０”Ｃで１〜６日、望ましくはｐＨ６，５〜７
．５．３５〜４０℃で２日前後培養する。
β−１，６グルカナーゼは、菌体外に生産する酵素であ
るので、培養終了後、口過又は遠心分離して除菌し、上
清液を回収する。そして必要に応じて濃縮し、硫安、硫
酸ナトリウムによるム析、又はアセトン、エタノール、
メタノール、イソプロパツールなどの有機溶剤を加え、
酵素を沈澱物として取得し、乾燥、保存する。
るので、培養終了後、口過又は遠心分離して除菌し、上
清液を回収する。そして必要に応じて濃縮し、硫安、硫
酸ナトリウムによるム析、又はアセトン、エタノール、
メタノール、イソプロパツールなどの有機溶剤を加え、
酵素を沈澱物として取得し、乾燥、保存する。
本発明のラミナリペンタオースはβ−１，３楯分解酵素
を水又は緩衝液に懸濁させた前述のβ−１，３グルコシ
ル錆化合物の１〜１０重量％溶液に対し１４〜１５μ／
ｉＩｇの本酵素を５０〜１０００単位／ｌ加え、ｐＨ４
〜８．５、好ましくは５〜Ｚ５、反応温度３０〜７０、
好ましくは４０〜６０℃の反応条件で３０分〜２４時間
、好ましくは１０〜２０時間反応させることによって得
られる。
を水又は緩衝液に懸濁させた前述のβ−１，３グルコシ
ル錆化合物の１〜１０重量％溶液に対し１４〜１５μ／
ｉＩｇの本酵素を５０〜１０００単位／ｌ加え、ｐＨ４
〜８．５、好ましくは５〜Ｚ５、反応温度３０〜７０、
好ましくは４０〜６０℃の反応条件で３０分〜２４時間
、好ましくは１０〜２０時間反応させることによって得
られる。
本発明のラミナリペンタオースは、賞品の甘味料、増量
剤、賦形剤、包括剤として賞品、医系品等種々の工業製
品に利用可能であシ、又抗腫瘍活性、仇細菌ｔ％染症作
用、免疫系に及ぼす作用等を有する医業品の中間原体と
して有用なものである。
剤、賦形剤、包括剤として賞品、医系品等種々の工業製
品に利用可能であシ、又抗腫瘍活性、仇細菌ｔ％染症作
用、免疫系に及ぼす作用等を有する医業品の中間原体と
して有用なものである。
以下に実施例によシ本発明の詳細な説明するが、文中「
部」及び「チ」は重量基準であるものとする。
部」及び「チ」は重量基準であるものとする。
実施例１
■ β−１，３グルカナーゼＦｉｌの調製５００″ｑ容
の坂ロフラスコ１０本に、ポリペプトン（牛乳カセイン
の酵素分解物、和光純系工業株式会社販売）Ｑ、２９ｊ
、酵母エキス（和光純薬工業株式会社販売）α２凱に、
ＨＰＯ，０，２４１Ｍ＃Ｓ０４・７Ｈ，００，１係から
なる成体培地（ｐ Ｈ７，０） を各々に１００ｄづつ
分注した。常法による殺菌後、ストレプトマイセス・マ
テンシスＤＩＣ−１０８（微工研菌寄第６５９６号ンを
接種し、３５℃で３日間振盪培養した。培女後、ブフナ
ーで口過を行って除菌し、得られた上清液ｔ−６５％の
飽和硫安として沈澱を回収した。これｉｏ、０１Ｍのリ
ン酸緩衝液ｐ Ｈ７，０で溶解して得られた粗酵素中に
は、ラミナリペンタオースを分解するβ−１，３グルカ
ナーゼが存在する為、α０１ Ｍ トＩＪス緩輌液で平
衡化したＤＥＡＥ−セファデックスＡ−２５カラムに吸
着させ、その未吸着部分全回収することにより、β−１
，３グルカナーゼＦｉ ｌｉ得た。得られた活性は１４
．７単位／叩タンパク（５９６，９単位（２７１１９）
）であった。
の坂ロフラスコ１０本に、ポリペプトン（牛乳カセイン
の酵素分解物、和光純系工業株式会社販売）Ｑ、２９ｊ
、酵母エキス（和光純薬工業株式会社販売）α２凱に、
ＨＰＯ，０，２４１Ｍ＃Ｓ０４・７Ｈ，００，１係から
なる成体培地（ｐ Ｈ７，０） を各々に１００ｄづつ
分注した。常法による殺菌後、ストレプトマイセス・マ
テンシスＤＩＣ−１０８（微工研菌寄第６５９６号ンを
接種し、３５℃で３日間振盪培養した。培女後、ブフナ
ーで口過を行って除菌し、得られた上清液ｔ−６５％の
飽和硫安として沈澱を回収した。これｉｏ、０１Ｍのリ
ン酸緩衝液ｐ Ｈ７，０で溶解して得られた粗酵素中に
は、ラミナリペンタオースを分解するβ−１，３グルカ
ナーゼが存在する為、α０１ Ｍ トＩＪス緩輌液で平
衡化したＤＥＡＥ−セファデックスＡ−２５カラムに吸
着させ、その未吸着部分全回収することにより、β−１
，３グルカナーゼＦｉ ｌｉ得た。得られた活性は１４
．７単位／叩タンパク（５９６，９単位（２７１１９）
）であった。
■ 分解反応
カードラン（ｎ＝５５０．和光純薬工業株式会社製品〕
０．２５ｇに、該酵素ン改２．２単位を添加して全量を
５−とし、４５℃で２４時間反応させた。その結果ラミ
ナリペントースは１８８■得られ、収率は７５．２１で
あった。そして得１られたカードラン砧化物中の糖組成
ヲ、高速７ば体クロマトグラフィー（充てん剤；Ｌｉｃ
ｈｒｏｓｏｒｂ ＮＨ２５μ’Ｒ（メルク社製）、溶
出液；アセトニトリル７０ｑｂ１水５０係））で分離定
ｉｔ−行った結果、７７係が水浴性オリゴ循となり、そ
の内１尺はラミナリペンタオース７５．２％で残９１、
８ ％はラミナリトリオース、ラミナリテトラオーヌ、
ラミナリヘキサオース、ラミナリヘプタオース、ラミナ
リオクタオースであった。（第５図参照） 〔酵素力価の決定〕 ０．０１Ｍの酢はバッファー（ｐＨ６，０）に、カード
ラン１係を懸濁させ、それに適量の酵素を加えて、水で
５．０ｄとし、４５℃で反応させる。この条件で１時間
にｉｘ９のグルコースに相当する還元力を生成する酵素
ｆｔｔ−１単位とする。
０．２５ｇに、該酵素ン改２．２単位を添加して全量を
５−とし、４５℃で２４時間反応させた。その結果ラミ
ナリペントースは１８８■得られ、収率は７５．２１で
あった。そして得１られたカードラン砧化物中の糖組成
ヲ、高速７ば体クロマトグラフィー（充てん剤；Ｌｉｃ
ｈｒｏｓｏｒｂ ＮＨ２５μ’Ｒ（メルク社製）、溶
出液；アセトニトリル７０ｑｂ１水５０係））で分離定
ｉｔ−行った結果、７７係が水浴性オリゴ循となり、そ
の内１尺はラミナリペンタオース７５．２％で残９１、
８ ％はラミナリトリオース、ラミナリテトラオーヌ、
ラミナリヘキサオース、ラミナリヘプタオース、ラミナ
リオクタオースであった。（第５図参照） 〔酵素力価の決定〕 ０．０１Ｍの酢はバッファー（ｐＨ６，０）に、カード
ラン１係を懸濁させ、それに適量の酵素を加えて、水で
５．０ｄとし、４５℃で反応させる。この条件で１時間
にｉｘ９のグルコースに相当する還元力を生成する酵素
ｆｔｔ−１単位とする。
実施例２
実施例１で用いたカード２ンの代わシに酵母細胞壁（Ｃ
ａｎｄｉｄａ属）不溶性ラミナリン、パキマン、各々α
２ｙに、実施例１で得られた酵素液２２単位を添加して
全量を５−とし、４５℃で２４時間反応させた。
ａｎｄｉｄａ属）不溶性ラミナリン、パキマン、各々α
２ｙに、実施例１で得られた酵素液２２単位を添加して
全量を５−とし、４５℃で２４時間反応させた。
そして得られた酵母細胞壁ラミナリン、及びパキマンの
糖化液中の砧組成金実施例１と同様の方法にて分離定量
を行った。結果を表−１に示した。
糖化液中の砧組成金実施例１と同様の方法にて分離定量
を行った。結果を表−１に示した。
表 −１
第１図はβ−１，３グルカナーゼＦｉＩのｐＨと活性の
関係を示し、第２図はβ−１，５グルカナーゼＦｉＩの
温度と活性の関係を示し、第３図は、β−１，５グルカ
ナーゼにより分解されたカードランの分解物全高速成体
クロマトグラフィーで分析したチャート１−示し、数字
は、各々１ラミナリトリオース、２ラミナリテトラオー
ス、４ラミナリヘキサオース、５ラミナリヘプタオース
、６ラミナリオクタオースを示すものである。 代理人 弁理士 高 橋 勝 利 第１図 ｐＨ 富２０ 温度 ℃ 第３図
関係を示し、第２図はβ−１，５グルカナーゼＦｉＩの
温度と活性の関係を示し、第３図は、β−１，５グルカ
ナーゼにより分解されたカードランの分解物全高速成体
クロマトグラフィーで分析したチャート１−示し、数字
は、各々１ラミナリトリオース、２ラミナリテトラオー
ス、４ラミナリヘキサオース、５ラミナリヘプタオース
、６ラミナリオクタオースを示すものである。 代理人 弁理士 高 橋 勝 利 第１図 ｐＨ 富２０ 温度 ℃ 第３図
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １、β−１，３グルコシル糖化合物又はその部分分解物
をラミナリペンタオースに分解する能力を有するストレ
プトマイセス属に属する微生物の生産するβ−１，３糖
分解酵素をβ−１，３グルコシル糖化合物又はその部分
分解物に作用させて得られることを特徴とするラミナリ
ペンタオースの製造法。 ２、β−１，３グルコシル糖化合物が、カードラン、パ
キマン、ラミナリンであることを特徴とする特許請求の
範囲第１項記載のラミナリペンタオースの製造法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP59212716A JPS6192589A (ja) | 1984-10-12 | 1984-10-12 | ラミナリペンタオ−スの製造法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP59212716A JPS6192589A (ja) | 1984-10-12 | 1984-10-12 | ラミナリペンタオ−スの製造法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6192589A true JPS6192589A (ja) | 1986-05-10 |
| JPH0437719B2 JPH0437719B2 (ja) | 1992-06-22 |
Family
ID=16627243
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP59212716A Granted JPS6192589A (ja) | 1984-10-12 | 1984-10-12 | ラミナリペンタオ−スの製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS6192589A (ja) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2009240275A (ja) * | 2008-03-31 | 2009-10-22 | Naris Cosmetics Co Ltd | イグチ科ヌメリイグチ属担子菌の液体培地 |
| WO2013065732A1 (ja) * | 2011-10-31 | 2013-05-10 | 興人ライフサイエンス株式会社 | 酵母及び酵母エキス残渣の有効利用 |
| JP2013116101A (ja) * | 2011-10-31 | 2013-06-13 | Kohjin Life Sciences Co Ltd | 食物繊維含量の高い酵母細胞壁画分 |
-
1984
- 1984-10-12 JP JP59212716A patent/JPS6192589A/ja active Granted
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2009240275A (ja) * | 2008-03-31 | 2009-10-22 | Naris Cosmetics Co Ltd | イグチ科ヌメリイグチ属担子菌の液体培地 |
| WO2013065732A1 (ja) * | 2011-10-31 | 2013-05-10 | 興人ライフサイエンス株式会社 | 酵母及び酵母エキス残渣の有効利用 |
| JP2013116101A (ja) * | 2011-10-31 | 2013-06-13 | Kohjin Life Sciences Co Ltd | 食物繊維含量の高い酵母細胞壁画分 |
| US10196430B2 (en) | 2011-10-31 | 2019-02-05 | KOHJIN Life Sciences Co., Ltd. | Effective use of yeast and yeast extract residue |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0437719B2 (ja) | 1992-06-22 |
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Legal Events
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|---|---|---|---|
| LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |