JPS6133384B2 - - Google Patents

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JPS6133384B2
JPS6133384B2 JP54089970A JP8997079A JPS6133384B2 JP S6133384 B2 JPS6133384 B2 JP S6133384B2 JP 54089970 A JP54089970 A JP 54089970A JP 8997079 A JP8997079 A JP 8997079A JP S6133384 B2 JPS6133384 B2 JP S6133384B2
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serum
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fibrin
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Description

【発明の詳細な説明】 この発明は、検査室用標準材料の調製方法、さ
らに詳しくは、マウルカス（Maurukas）による
米国特許第3876375号（以後、マウルスカス特許
と記載する）に開示されている血清の標準組成物
の調製方法に関するものである。
マウルカス特許は診断用分析における対照（ま
たは標準）として使用する生物学的組成物を開示
している。そのマウルカスの組成物は、非生物学
的成分が約60〜80（重量）％の水と約20〜40（重
量）％のアルキレン・ポリオール（炭素の原子数
が２〜５）からなり、残部が主として血清、酵
素、代謝物質、電解質およびホルモンからなる群
から選択した少なくとも１種類の天然の生物学組
成物である。しかしながら、そのような生物学的
組成物を調整するマウルカス特許に開示の方法は
商業的に非実用的である。例えば、マウルカスは
診療所から得た人間の血清を使用した。この人間
の血清源は商業規模での使用は不可能である。マ
ウルカス特許に記載の方法は診療所から得た人間
の血清から始まる。そのような源は、標準組成物
の商的製造に必要な大量の人血清を提供するには
余りにも少なすぎる。事実、人血清よりむしろク
エン酸塩加入血漿が、商的生産に必要な人血液を
充分に得る唯一の可能源である。クエン酸塩加入
血漿は血漿搬出法の供血銀行からくる。クエン酸
塩加入血漿は、血漿搬出法を介して１人の供血者
から１／weekの割合で得られる、そして肝炎
や性病を検査できる点において診療所にプールさ
れる血液よりも優れる。その上、マウルカス特許
に開示されている人血清の処理方法はかなりの量
のタンパク質の損失を伴う。マウルカス法は、所
望体積の濃縮タンパク質を得るためにプールした
血清を冷結し、次にその冷結塊の所定の温度で３
〜７日間かけて徐々に溶解する必要がある。その
結果、マウルカス法では25％以上のタンパク質が
廃棄される冷結マトリツクスに残つてしまう。
この発明は、マウルカスによつて開示された型
の生物学的組成物を調製する商的に可能な方法を
含み、原料源がクエン酸塩加入血漿であり、製造
過程におけるタンパク質の損失が0.1％以下であ
ることを特徴とする。
本発明の方法は、(a)クエン酸塩加入血漿にカル
シウムを添加し良く混合して脱クエン酸塩血漿を
生成し、(b)その脱クエン酸塩血漿にトロンビンを
添加し良く混合してフイブリン・クロツト（線維
素塊）を生成し、(c)そのフイブリン・クロツトに
少なくとも１回の冷結―解凍作業を行なつてフイ
ブリンを収縮させ、(d)そのフイブリンを除去する
ことによつて血清を得、(e)得られた血清の分子洗
浄および限外ろ過によつて濃縮血清を得、そして
(f)その濃縮血清に、２〜５個の炭素原子を有する
アルキレン・ポリオールの少なくとも１種類を、
組成物の非生物学的成分が約40〜85（重量）％の
水と約15〜60（重量）％のアルキレン・ポリオー
ルからなるような量添加することからなる。
本発明は、まずクエン酸塩加入の血漿中に存在
するクエン酸塩に打勝つのに十分なカルシウム塩
を添加する。典型的には、血漿100ml当り少なく
とも10mgのカルシウム塩を添加する。望ましく
は、血漿100ml当り約20mg以上で約40mg以下のカ
ルシウム塩を添加する。カルシウム塩の添加量が
多過ぎると、最終製品におけるカルシウム濃度が
診断用としては高過ぎることになる。
脱クエン酸塩血漿に添加するトロンビンは牛や
馬のような動物源ならばいずれも可能である。血
清１ml当り少なくとも１、望ましくは少なくとも
3NIH単位のトロンビンを添加することが望まし
い（ここでNIH単位とはアメリカ予防衛生研究所
トロンビン単位であつて、標準フイブリノゲン溶
液１mlを15秒で凝固せしめるトロンビンの量であ
る）。従つて、１mlの血清当り10NIH単位以上の
トロンビンを血漿に添加することは無駄が伴うの
で望ましくない。
トロンビンを添加後、血漿中に固い凝塊（クロ
ツト）を形成させるのに十分な時間、例えば室温
で約５分〜６時間血漿を沈降させる必要がある。
冷結―解凍操作は通常の周知方法で行なうこと
ができる。例えば、冷結は約―５〜＋20℃の温度
で行なう。時間は決定的でないが、冷結工程は８
時間以上かけることが望ましい。冷結材は通常の
方法で解凍する、例えば、、解凍は約15〜35℃の
水溶中で行なうことができる。その解凍は、固体
の凝塊を完全に液化するのに必要な時間で行なう
ことが望ましく、この時間は、普通約２〜５時間
である。本発明に採用する冷結―解凍工程とマウ
ルカス特許に記載の冷結―解凍工程との間には機
能的に本質的な相違があることを注目されたい。
マウルカス特許における冷解工程の目的は、血漿
中の水分を除去し、それによつてタンパク質を濃
縮することである。前述のように、マウルカス法
で捨てられる冷結マトリツクスに25％以上のタン
パク質が失なわれる。
これに対し、本発明における冷解工程の目的
は、血漿を血清に変換するフイブリン・クロツト
を収縮することにある。収縮フイブリンは血清か
ら除去、廃棄される。廃棄フイブリン・クロツト
中に失なわれるタンパク質は0.10％以下である。
フイブリンは周知の方法で材料から除去するこ
とができる。例えば、材料を遠心分離機のような
ろ過装置に入れてフイブリンを分離除去する。
分子洗浄は、周知の方法、例えば蒸留水や脱イ
オン水を血清に添加することによつて行なう。
限外ろ過工程も周知の方法で行なうことができ
る。限外ろ過器は約10000なる公称分子量識別能
を有することが望ましい。約10000の分子量（m.
w.）識別能をもつた限外ろ過器の使用によつ
て、低分子量のもの〔例えば、グルコース
（180m.w.）、塩（58m.w.）、カルシウム（40m.w.
）、水（18m.w.）〕を除去しながら限外ろ過器を
通る血清の速流を得ることができる。しかし、タ
ンパク質は分子量が50000以上（例えば、アルブ
ミンの分子量は約64000）であるので、タンパク
質は血清から除去されない。
内因性酵素作用を全て不活性にすることが望ま
しい場合には、前記工程(d)の後に、先ず血清のPH
を約3.0〜4.5（望ましくは約４）に下げ、次に血
清のPHを約6.0〜9.0（望ましくは約6.5〜8.5）に
上げることにより血清を処理することができる。
血清のPHは適当な酸、例えばHClによつて下げ、
そして適当な塩基、例えばNaOHで上げることが
できる。
さらに、工程(e)の後に濃縮血清を霧状二酸化ケ
イ素と接触させ、混合そして霧状二酸化ケイ素を
混合体から分離することが望ましい。この工程に
よつて血清の外観が良くなりかつ脂質およびトリ
グリセリドが除去される。
次の実施例１は、本発明をさらに説明せんとす
るものであつて発明の範囲の限定を意図するもの
ではない。
実施例 １ タンパク質初濃度が5.6mg／dlの血清を限外ろ
過装置に通すことにより滞留体部とろ液部が得ら
れる。水と低分子量化合物を含むろ液部は血清か
ら除去し捨てた。滞留体部は濃縮血清を含有す
る、それは再循環後に14〜16mg／dlのタンパク質
濃度を有した。
捨てる前にエクストン法でろ液のタンパク質を
検査した所、陰性、即ちいずれのタンパク質も存
在しなかつた。これは、限外ろ過工程時にタンパ
ク質が全く損失しないことを示す。従つて、本発
明法で失なう唯一のタンパク質はフイブリン・ク
ロツトに存在するものである。前述のように、こ
のタンパク質の損失量は0.10％以下である。
以上、本発明の特定の実施態様を説明したが、
本発明の範囲を逸脱することなく、種々の変化お
よび改良がありうることは明白である。

Claims (1)

  1. 【特許請求の範囲】 １ (a) クエン酸塩加入の血漿にカルシウムを添
    加し、十分に混合して脱クエン酸塩化血漿を生
    成する工程と； (b) 前記脱クエン酸塩血漿にトロンビンを添加
    し、十分に混合してフイブリン・クロツトを生
    成する工程と； (c) 前記フイブリン・クロツトに少なくとも１回
    の冷結―解凍操作を与えてフイブリンを収縮さ
    す工程と； (d) 収縮フイブリンを除去することによつて血清
    を得る工程と； (e) 前記血清を分子洗浄および限外ろ過すること
    によつて濃縮血清を得る工程と； (f) 前記濃縮血清に、２〜５個の炭素原子を有す
    る少なくとも１種類以上のアルキレン・ポリオ
    ールを、生物学的組成物中の非生物学的成分が
    約40〜80（重量）％の水と約20〜40（重量）％
    の前記アルキレン・ポリオールからなるような
    量添加することからなる、診断用分析に血清標
    準組成物として使用する生物学的組成の製造方
    法。 ２ 前記(d)工程の後に、まず血清のPHを約3.0〜
    4.5に下げて全ての内因性酵素作用を不活性に
    し、しかる後に前記血清のPHを約6.0〜9.0に上げ
    ることによつて、血清を酸処理するところの特許
    請求の範囲第１項記載の方法。 ３ 前記PHを、まず約４に下げ、しかる後に約
    6.5〜8.5に上げるところの特許請求の範囲第２項
    記載の方法。 ４ 前記フイブリン・クロツトに少なくとも３回
    の冷結―解凍操作を与えるところの特許請求の範
    囲第２項記載の方法。 ５ 前記フイブリン・クロツトに４回の冷結―解
    凍操作を与えるところの特許請求の範囲第４項記
    載の方法。 ６ 前記(e)工程の後に、霧状の二酸化ケイ素を前
    記濃縮血清と接触、混合させ、しかる後に霧状の
    二酸化ケイ素を血清から分離するところの特徴請
    求の範囲第２項記載の方法。 ７ 前記(f)工程の後に、霧状二酸化ケイ素を前記
    アルキレン・ポリマー含有の生物学的組成物と接
    触、混合させ、しかる後に前記組成物から分離す
    るところの特許請求の範囲第２項記載の方法。 ８ 前記(e)工程の後に、霧状二酸化ケイ素を前記
    濃縮血清と接触、混合させ、しかる後に前記血清
    から分離するところの特許請求の範囲第１項記載
    の方法。 ９ 前記(f)工程の後に、霧状二酸化ケイ素を前記
    アルキレン・ポリオール含有の生成物学的組成物
    と接触、混合させ、しかる後に前記組成物から分
    離するところの特許請求の範囲第１項記載の方
    法。 １１ 前記フイブリン・クロツトに少なくとも３
    回の冷結―解凍操作を与えるところの特許請求の
    範囲第１項記載の方法。
JP8997079A 1978-07-17 1979-07-17 Production of biological composition used as serum standard composition for diagnostic analysis Granted JPS5517492A (en)

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JPS5517492A JPS5517492A (en) 1980-02-06
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JP (1) JPS5517492A (ja)
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FR (1) FR2431701A1 (ja)
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